Αφηρημένο

Ιστορικό

Ένα θεμελιώδες πρόβλημα στην έρευνα για τον καρκίνο είναι που προσδιορίζουν τον τύπο των κυττάρων που είναι σε θέση να διατηρεί νεοπλασματικής ανάπτυξης και την καταγωγή του από τα φυσιολογικά κύτταρα των ιστών. Πρόσφατες έρευνες από μια ποικιλία τύπων όγκου έχουν δείξει ότι φαινοτυπικά αναγνωρίσιμες και απομονώσιμα υποκλάσματα των κυττάρων διαθέτουν την ικανότητα του όγκου σχηματισμού. Στην παρούσα εργασία, χρησιμοποιώντας δύο γενεαλογία που σχετίζονται με ανθρώπινες κυτταρικές σειρές μελανώματος, κύρια γραμμή μελανώματος IGR39 και μεταστατικό παράγωγο γραμμή IGR37, οι δύο κύριες παρατηρήσεις που αναφέρθηκαν. Η πρώτη είναι η πρώτη φαινοτυπική στοιχεία που να υποστηρίζουν την προέλευση του καρκίνου του μελανώματος βλαστικά κύτταρα (ΚΕΠ) από μεταλλαγμένα βλαστικά κύτταρα ιστού-ειδικών? και το δεύτερο είναι ο προσδιορισμός μιας πιο επιθετικής υποπληθυσμό των ΚΕΠ σε μελάνωμα που είναι CXCR6 +.

Μέθοδοι /Ευρήματα

Εμείς ορίζεται CXCR6 ως νέο βιοδείκτη για την ασύμμετρη αυτο ιστο-ειδικών βλαστικών κυττάρων -ανανέωση. Έτσι, η σχέση μεταξύ του σχηματισμού μελανώματος και ABCG2 και έκφραση CXCR6 διερευνήθηκε. Συνεπής με μη μεταστατικό χαρακτήρα τους, μη ταξινομημένα κύτταρα IGR39 σχηματίζονται σημαντικά μικρότερους όγκους από μη ταξινομημένα κύτταρα IGR37. Επιπλέον, ABCG2 + κύτταρα παρήγαγαν όγκους που είχε ένα 2-φορές μεγαλύτερη μάζα από τους όγκους που παράγονται από μη ταξινομημένα κύτταρα ή ABCG2- κύτταρα. CXCR6 + κύτταρα που παράγονται περισσότερο επιθετικούς όγκους. CXCR6 προσδιορίζει μια περισσότερο διακριτή υποπληθυσμό καλλιεργημένα ανθρώπινα κύτταρα μελανώματος με μια πιο επιθετική φαινότυπο MCSC από κύτταρα επιλέγονται με βάση την ABCG2 + φαινότυπο μόνο. ​​

Συμπεράσματα /σημαντικότητα

Η σύνδεση ενός πιο επιθετική φαινότυπο όγκου με ασύμμετρο φαινότυπο αυτο-ανανέωση αποκαλύπτει μία προηγουμένως μη αναγνωρισμένη πτυχή της φυσιολογίας των κυττάρων του όγκου. Δηλαδή, η διατήρηση κάποιων ιδιοτήτων των ιστών ειδικά βλαστικά κύτταρα, όπως τη δυνατότητα να ασύμμετρα αυτο-ανανέωση, οι επιπτώσεις της φυσικής ιστορίας της ανάπτυξης του ανθρώπινου όγκου. Η γνώση της νέας αυτής πτυχής της ανάπτυξης και της εξέλιξης μπορεί να παρέχει νέους στόχους για την πρόληψη και τη θεραπεία του καρκίνου του όγκου

Παράθεση:. Taghizadeh R, Noh Μ, Huh YH, Ciusani Ε, Sigalotti L, Maio M, et al. (2010) CXCR6, ένα νέο καθορισμένο βιοδεικτών της ιστο-ειδική Βλαστικών Κυττάρων Ασύμμετρη αυτο-ανανέωση, Χαρακτηρίζει την πιο επιθετική Βλαστικά κύτταρα ανθρώπινου μελανώματος Καρκίνου. PLoS ONE 5 (12): e15183. doi: 10.1371 /journal.pone.0015183

Επιμέλεια: Syed A. Αζίζ, Health Canada, Καναδάς

Ελήφθη: 5 του Αυγούστου 2010? Αποδεκτές: 28 Οκτ 2010? Δημοσιεύθηκε: 22η Δεκεμβρίου 2010

Copyright: © 2010 Taghizadeh et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε εν μέρει από τις Εθνικές Institues του διευθυντή Υγείας βραβείο Pioneer # 5DP1OD000805 και από την Εθνική ιταλική COFIN επιχορήγηση 2008. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου.

Αντικρουόμενα συμφέροντα:. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Ο καρκίνος χημειοθεραπεία αποτελεσματικότητα συχνά εμποδίζεται από την αντίσταση είτε εγγενής ή επίκτητη αντοχή του όγκου, ένα φαινόμενο που ονομάζεται πολυ-φάρμακο (MDR) [1]. MDR μπορεί να προκληθεί από διάφορους διακριτούς μηχανισμούς, συμπεριλαμβανομένης της μείωσης συσσώρευση του φαρμάκου σε καρκινικά κύτταρα [1]. Ο μηχανισμός που συναντώνται συνηθέστερα στο εργαστήριο είναι η αυξημένη εκροή μιας ευρείας κατηγορίας υδρόφοβων κυτταροτοξικών φαρμάκων που προκαλείται από ένα από μια οικογένεια της ενέργειας που εξαρτώνται από μεταφορείς (οικογένεια ABC) [2]. Παρά το γεγονός ότι πολλά μέλη της υπερ-οικογένειας έχουν αφιερώσει συγκεκριμένες λειτουργίες που αφορούν τη μεταφορά των συγκεκριμένων υποστρωμάτων, γίνεται ολοένα και πιο φανερό ότι η σύνθετη φυσιολογική δίκτυο ABC μεταφορέων έχει κεντρικό ρόλο στην αποτοξίνωση του ξενιστή και την προστασία του οργανισμού κατά των ξενοβιοτικών ουσιών. Μεταξύ των ανθρωπίνων υπεροικογένεια ABC, μόνο ABCB1, ABCC1 (MDR1) και ABCG2 έχουν μέχρι σήμερα δειχθεί ότι μεσολαβεί MDR, το καθένα με διακριτά επικαλυπτόμενες ειδικότητες υποστρώματος εκροής και πρότυπα κατανομής ιστού [3]. Εκπληρώνουν τον ρόλο τους στην αποτοξίνωση, αρκετές μεταφορείς ABC βρέθηκε να υπερεκφράζεται σε καρκινικές κυτταρικές σειρές καλλιεργήθηκαν υπό επιλεκτική πίεση. Ειδικότερα, ABCB5 υπερεκφράζεται σε μελάνωμα, και ABCG2 εκφράζεται από ένα υποκυτταρικό CD133-θετικά κύτταρα μελανώματος [4], [5].

Στην έκθεση αυτή, ερευνήσαμε ένα νέο υποψήφιο για μια βλαστικών κυττάρων του καρκίνου του μελανώματος (MCSC) δείκτη, η κυτοκίνη συν-υποδοχέα CXCR6, σε σχέση με τις ιδιότητες των MCSCs ABCG2 εκφράζουν. Ένα σημαντικό άλυτο ζήτημα στον τομέα του καρκίνου των βλαστικών κυττάρων (CSC) έρευνα είναι αν υπάρχει μια άμεση σχέση μεταξύ της γενεαλογίας ΚΕΠ και τα βλαστικά κύτταρα των ιστών ειδικά (TSSCs) βρέθηκε στους φυσιολογικούς ιστούς από τις οποίες προκύπτουν καρκίνους. Αξίζει να προσδιοριστούν δείκτες που διακρίνουν μεταξύ ογκογόνο από μη ογκογόνων κυττάρων [6]. CD133 εκφράζεται από τα περισσότερα των κυτταρικών γραμμών μελανώματος [4], και δεν φαίνεται σε θέση να διακρίνουν ογκογόνα από μη -tumorigenic κυττάρων [6]. Επιπλέον πρόσφατα, ομάδα Weissman επιβεβαίωσε την παρουσία ενός πιο επιθετική υποπληθυσμό CD217 + σε ανθρώπινο μελάνωμα [8]. Ξεκινήσαμε να ρίξει πειραματικό φως σε αυτό το θέμα από την έρευνα που περιγράφηκε προηγουμένως ΚΕΠ μελανώματος σχετίζεται με τις καθιερωμένες κυτταρικές σειρές μελανώματος [4], [6] για την απόδειξη της ασύμμετρης αυτο-ανανέωση, μια ειδική ιδιότητα του TSSCs [7], [9]. Για την αξιολόγηση αυτή, χρησιμοποιήσαμε ένα νέο βιοδείκτη που δείχνουμε εδώ ότι συνδέονται με ασύμμετρη αυτο-ανανέωση, τον υποδοχέα χημειοκίνης CXCR6. Σε προηγούμενες μελέτες, CXCR6 ταυτοποιήθηκε ως συν-υποδοχέας για μόλυνση από ιό ανθρώπινης ανοσοανεπάρκειας των λεμφοκυττάρων [10]. Χαμηλά επίπεδα έκφρασης CXCR6 έχουν επίσης ανιχνευθεί ειδικά στην μνήμη /δραστικά κύτταρα Th1 στο περιφερικό αίμα [11]. Πιο πρόσφατα, η έκφραση του CXCR6 συσχετίστηκε με ανθρώπινους όγκους, συμπεριλαμβανομένου του μελανώματος [12] – [14]. Στο παρόν, έχουμε δείξει, με βάση τις μελέτες με κυτταρικές σειρές ποντικού γενετικά για να υποβληθούν σε ασύμμετρη αυτο-ανανέωση, όπως TSSCs, ότι τόσο το σχήμα και το επίπεδο της έκφρασης CXCR6 είναι ειδικά σχετίζεται με ασύμμετρη κατανομή αυτο-ανανέωση.

Κοιτάξαμε για συν-ένωση της έκφρασης CXCR6 και της έκφρασης ABCG2 με δραστηριότητα MCSC και τα αποδεικτικά στοιχεία για την κάθοδο των ΚΕΠ μελανώματος από TSSCs. Στην πραγματικότητα, διαπιστώνουμε ότι ένα μεγάλο ποσοστό των κυττάρων μελανώματος ABCG2 θετικά με γνωστές ιδιότητες CSC, εκφράζουν επίσης CXCR6. Επιπλέον, όπως κύτταρα μελανώματος ABCG2 εκφράζουν, CXCR6 εκφράζουν κύτταρα είναι ένα μικρό κλάσμα των κυττάρων σε καλλιέργειες πρωτογενών, μεταστατικού μελανώματος κυτταρικές γραμμές και δείγματα ανθρώπινου βιοψίας μελανώματος.

In vivo

CXCR6 + κύτταρα μελανώματος που παράγεται ενός όγκου σε λιγότερο χρόνο από ό, τι ABCG2 + κύτταρα και, πιο ενδιαφέροντα τρόπο, η αρνητική υποπληθυσμός δεν δίνουν όγκο. Αυτό φαινοτυπικά συν-ένωση CXCR6, ένας βιοδείκτης για ασύμμετρη αυτο-ανανέωση σε μη καρκινικά κύτταρα, με δραστικότητα CSC σε κύτταρα όγκου προερχόμενα αποτελεί απόδειξη για μια άμεση σχέση γενεαλογία μεταξύ TSSCs και ΚΕΠ στην περίπτωση της μελανοκυτταρικής κυττάρων και μελανώματος, αντίστοιχα .

Τέλος, έχουμε χαρακτηρίζεται η υποπληθυσμό ABCG2 + /ABCG2- και CXCR6 + /CXCR6- μελανώματος για την έκφραση των αντιγόνων που συνδέονται με μελάνωμα (ΜΑΑ) ενόψει της πιθανής ανοσοθεραπευτική προσέγγιση έναντι πιο επιθετική υποπληθυσμών που εκφράζουν ABCG2 και /ή CXCR6.

Αποτελέσματα

Αναγνώριση CXCR6 ως βιοδείκτη για την ασύμμετρη αυτο-ανανέωση διαίρεση

στο παρελθόν, έχουμε αναφερθεί μελέτες με γενετική μηχανική μοντέλο καλλιεργημένο κύτταρο που παρέχει πειραματικά ελεγχόμενη ασύμμετρα τμήματα αυτο-ανανέωση παρόμοιες με εκείνες του TSSCs [15], [16], [17]. Τα κύτταρα περιέχουν μια Ζη-ρυθμιζόμενο γονίδιο cDNA ρ53 άγριου τύπου. Σε Zn-ελεύθερο μέσο, ​​αυτά τα κύτταρα διαιρούνται με κινητική συμμετρική κυττάρων, που παράγουν δύο κύτταρα ποδηλασίας από κάθε διαίρεση. Αυτά τα τμήματα διασπάσεις μοντέλο συμμετρική ΕΡΔΚΠ στην οποία δύο βλαστικά κύτταρα που παράγονται. Σε ΖηΟ

2-συμπληρωμένο μέσο καλλιέργειας, συνεπεία φυσιολογικά επίπεδα έκφρασης p53 επάγει ασύμμετρων διαιρέσεων αυτο-ανανέωσης που χαρακτηρίζονται από τμήματα που παράγουν μια αδελφή ποδηλασία και μια αδελφή που συλλήψεις σε G1 /S. . Αυτές οι διαιρέσεις μοντέλο ασύμμετρες διαιρέσεις ΕΡΔΚΠ που παράγουν ένα βλαστικό κύτταρο και ένα κύτταρο που είτε διαφοροποιείται ή χρησιμεύει ως προγονικά για τη διαφοροποίηση των κυττάρων γενεαλογία

Στη γονιδιακή μικρο-array αναλύσεις (βάση δεδομένων NCBI-GEO, http: //www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/query/acc.cgi?token=dlmlzmuowumsqxy acc=GSE25334),

Cxcr6

αναγνωρίστηκε ως ένα γονίδιο του οποίου η έκφραση ήταν ανιχνεύσιμη σε συμμετρικά αυτο-ανανέωση των συγγενών κύτταρα ελέγχου ρ53-ηυΙΙ αναπτύχθηκαν σε ΖηΟ

2-συμπληρωμένο μέσο. Ωστόσο, προκλήθηκε σε ρ53-επαγώγιμο κύτταρα που υφίστανται ασύμμετρα αυτο-ανανέωση, υπό τις ίδιες συνθήκες καλλιέργειας. αναλύσεις ποσοτικής RT-PCR αποκάλυψε ότι συμμετρικά αυτο-ανανέωση των κυττάρων έκανε ρητή

Cxcr6

mRNA σε ένα ανιχνεύσιμο επίπεδο? αλλά η έκφραση της αυξήθηκε 8,6 ± 4,4 φορές (n = 6 αναλύει? p = 0,002). στα κύτταρα διεγείρονται για να στραφούν σε ασύμμετρη αυτο-ανανέωση

Η αρχική μικρο-συστοιχία αναλύσεις έδειξαν επίσης ότι η ασύμμετρη αυτο-ανανέωση ήταν υποχρεωτική για την αύξηση του

Cxcr6

έκφραση? και ως εκ τούτου έδειξε ότι η αυξημένη έκφραση δεν οφειλόταν στην έκφραση ρ53 μόνη της.

Cxcr6

έκφραση ήταν επίσης μη ανιχνεύσιμο σε συγγενή p53-διεγέρσιμο κύτταρα γενετικά τροποποιημένα με εξαναγκασμένη έκφραση του τύπου II μονοφωσφορικής ινοσίνης αφυδρογονάσης γονίδιο (ΙΜΡϋΗ II), ακόμη και όταν η έκφραση p53 προκλήθηκε. Έκφραση των ΙΜΡϋΗ II, το ένζυμο περιορισμού του ρυθμού για την βιοσύνθεση ριβονουκλεοτιδίου κυτταρική γουανίνη, αποτρέπει ρ53 προκαλούμενη ασύμμετρη αυτο-ανανέωση, αφήνοντας άθικτο γονιδιακής ρύθμισης ρ53-εξαρτώμενη [16], [18], [19]. Με αυτό το κριτήριο,

Cxcr6

ορίστηκε ως ειδική «ασύμμετρη αυτο-ανανέωσης που σχετίζονται (ASRA)» γονίδιο.

Για να διερευνήσουν τις ιδιότητες ASRA βιοδείκτη της CXCR6 πρωτεΐνης, εξετάσαμε μοτίβο της έκφρασης καθορίζεται από την έμμεση

in situ

ανοσοφθορισμού (ISIF) ανίχνευσης σε δύο σχετικές αναλύσεις μοτίβο αυτο-ανανέωση μονοκύτταροι. Στην πρώτη, η δοκιμασία ζεύγος αδελφή (SP? [19]), τα κύτταρα επιστρώνονται σε μία επαρκώς χαμηλή πυκνότητα για να επιτρέψει οριοθέτηση της αδελφής κυττάρων από σχετικά προσέγγισε τους μετά διαίρεση. Στη δεύτερη περίπτωση, τα κύτταρα αναλύθηκαν μετά από διαίρεση υπό την παρουσία κυτοχαλασίνης D (CD? [20]). CD αποτρέπει την κυτταροκίνηση, αλλά δεν εμποδίζει την πυρηνική διάσπαση. Τα διπύρηνα κύτταρα με αυτόν τον τρόπο παράγεται παρέχουν μια πιο σίγουρη σύγκριση της αδελφής πυρήνων

Σε προηγούμενες εφαρμογές της SP (που ονομαζόταν παλαιότερα. «Ζευγάρι κόρη?» [19] και οι δοκιμασίες CD, βρωμοδεοξυουριδίνη (BrdU) ενσωμάτωση χρησιμοποιήθηκε ως δείκτης για κύτταρα φάσης ποδηλασία S. για τις παρούσες μελέτες, χρησιμοποιήσαμε τον κυτταρικό κύκλο φάσης-ειδική πρωτεΐνη κυκλίνης α ως δείκτης των κυττάρων ποδηλασίας. η κυκλίνη α είναι μια καλά-περιγράφονται δείκτης των κυττάρων ποδηλασίας που αυξάνει προοδευτικά σε επίπεδο από τα τέλη G1 φάση σε G2 φάση του κυτταρικού κύκλου [21]. Οι μικρογραφίες επιφθορισμού στο Σχ. 1 δείχνουν πώς μπορούν να χρησιμοποιηθούν έμμεσες ISIF σε δοκιμασίες SP και CD να διακρίνει ασύμμετρα αυτο-ανανέωση των κυττάρων (ASYM) από συμμετρικά ανανέωση αυτά (SYM). Υπό τις συνθήκες που προωθούν συμμετρική αυτο-ανανέωση, ζευγάρια αδελφή κυττάρων και CD-συνελήφθησαν διπύρηνα κύτταρα εμφανίζουν υψηλή συχνότητα των συμμετρικών κυκλίνης Α ανίχνευσης. Σε αντίθεση, υπό τις προϋποθέσεις που προωθούν ασύμμετρη αυτο-ανανέωση, ένα ασύμμετρο μοτίβο της κυκλίνης μια έκφραση είναι πολύ πιο συχνές.

Ορατή είναι παραδείγματα επιφθορισμού και αντίθεσης φάσης μικρογραφίες από παράλληλες SP και αναλύσεις CD, όπως περιγράφεται στο κείμενο. SYM, συμμετρική αυτο-ανανέωσης (συγγενή p53-null μηχανικής κυτταρικών σειρών που καλλιεργούνται σε ΖηΟ

2-συμπληρωμένο μέσο). ASYM, ασύμμετρη αυτο-ανανέωση (Zn-εξαρτώμενη, ρ53-διεγέρσιμο τροποποιημένα κύτταρα αναπτύχθηκαν σε ΖηΟ

2-συμπληρωμένο μέσο). DNA, DAPI φθορισμού πυρηνικό DNA. CyA, έμμεση ISIF με ειδικά αντισώματα για κυκλίνη Α CXCR6, έμμεσες ISIF με ειδικά αντισώματα για CXCR6. Σημειώστε ότι στην κατάσταση ASYM, CXCR6 είναι up-ρυθμίζεται στο κελί ποδηλασία, ποια μοντέλα ασύμμετρα αυτο-ανανέωση TSSCs. Φάση, μικρογραφία αντίθεσης φάσης. Μπάρα κλίμακας = 50 μm.

Η

Όπως φαίνεται στο Σχ. 1, CXCR6 πρωτεΐνη ανιχνεύεται τόσο στο κυτταρόπλασμα και τον πυρήνα των γενετικά τροποποιημένων κυττάρων που χρησιμοποιούνται για τον προσδιορισμό CXCR6 ως βιοδείκτη ASRA. Το επίπεδο της πυρηνική έκφραση είναι υψηλότερη στα κύτταρα υπό συνθήκες ασύμμετρης αυτο-ανανέωση, σύμφωνα με τα δεδομένα της έκφρασης mRNA, το οποίο περιγράφηκε προηγουμένως. Σε αμφότερα SP και CD αναλύσεις, κάτω από συνθήκες συμμετρικών αυτο-ανανέωση, CXCR6 πρωτεΐνη ανιχνεύεται στα δύο πυρήνες της αδελφής κυττάρων. Αντίθετα, κάτω από συνθήκες που προάγουν ασύμμετρη αυτο-ανανέωση, κύτταρα εμφανίζουν υψηλότερη συχνότητα του ασύμμετρου πρότυπο έκφρασης που είναι επίσης συσχετίζεται άμεσα με την ασύμμετρη μορφή της κυκλίνης Α Σε ποσοτικούς CD αναλύσεις, κάτω από συνθήκες για συμμετρική αυτο-ανανέωση, μόνο 6 % των διπύρηνα κύτταρα έδειξαν συντονίζει ασύμμετρη έκφραση της κυκλίνης Α και CXCR6? ενώ το 27% παρουσίασε το συγκεκριμένο μοτίβο υπό συνθήκες για ασύμμετρη αυτο-ανανέωσης (p = 0,001). Τα ευρήματα αυτά προσδιορίζουν CXCR6 ως ένα πρώτο-περιγράφεται up-ρυθμίζονται βιοδείκτη των κυττάρων που υποβάλλονται σε ασύμμετρη αυτο-ανανέωση, όπως TSSCs.

ABCG2 και μελάνωμα σχηματισμό

Σε ένα πρόσφατο έγγραφο, η ομάδα μας δημοσίευσε ότι ABCG2 είναι εκφράζεται από ένα υποπληθυσμό των ανθρώπινων κυττάρων μελανώματος (κυτταρική σειρά WM115) που εκφράζουν υψηλά επίπεδα CD133 [4]. Έχουμε επεκταθεί αυτή την ανάλυση του ABCG2 δύο επιπλέον κυτταρικές σειρές μελανώματος που προέρχονται από τον ίδιο ασθενή με μελάνωμα:. Πρωτογενή κυτταρική γραμμή μελανώματος IGR39 και το σχετικό μεταστατική γραμμή IGR37

Αρχικά, όπως φαίνεται στον Πίνακα 1, αναλύσαμε τρεις πολυμορφισμούς C /Α (421 C & gt? Α), C /T (S248T) και C /T (F208S) στις αδιαχώριστα πληθυσμούς και στο ABCG2 + και ABCG2- ταξινομημένο υποπληθυσμών αποκαλύπτοντας μια ετερόζυγη κατάσταση του ABCG2 για όλες τις τρεις πολυμορφισμούς. Αυτά τα αποτελέσματα είναι σύμφωνα με την προέλευση των κυτταρικών γραμμών από τον ίδιο ασθενή. Εμείς επικεντρώθηκε σε αυτούς τους πολυμορφισμούς αφού SNP 421 c & gt? Α είναι πιο κοινή μεταξύ των διαφόρων εθνικών ομάδων [22] και έχει συσχετιστεί με μειωμένη έκφραση της πρωτεΐνης ABCG2 [23]. Επιπλέον, F208S και S248P πολυμορφισμοί που σχετίζονται με ελαττωματική ενεργό μεταφορά της μεθοτρεξάτης και αιματοπορφυρίνης [24]? και, ιδίως, F208S πρωτεΐνες παραλλαγή (δύο-γλυκοζυλιωμένη και ανώριμων μορφών) αναγνωρίζονται ως misfolded πρωτεΐνες από υποθετικούς συστήματα «σημείο ελέγχου» και άμεσα να υποβληθούν πλήρη διάδοση και την υποβάθμιση των πρωτεϊνών σε πρωτεασώματα [25].

Η

αντίστοιχα, ~ 11% και ~ 40% των κυττάρων σε ενεργά αναπτυσσόμενες καλλιέργειες του IGR37 και IGR39 είχε ανιχνεύσιμη έκφραση για ABCG2 (Εικ. 2). IGR37 και IGR39 κύτταρα ταξινομήθηκαν σε ABCG2 + και ABCG2- υποπληθυσμών και μεταμοσχεύθηκαν σε NOD-SCID ποντίκια (η = 3 για κάθε υποπληθυσμό αξιολογείται). Αξεδιάλεχτα κύτταρα επίσης εγχέεται NOD-SCID ποντίκια (η = 3) για σύγκριση. Μετά από δύο μήνες, τα ποντίκια θυσιάστηκαν από όλες τις ομάδες. μάζες όγκου αποκόπηκαν, απεικονίζεται, ζυγίστηκαν, και υπέστη πέψη για την απομόνωση εναιωρήματα μονών κυττάρων για περαιτέρω ανάλυση. Όπως φαίνεται στον Πίνακα 2 και το Σχ. 3, η μεταμόσχευση των κυττάρων ABCG2 IGR37 + κατέληξε σε όγκους με 2-φορές μεγαλύτερη μάζα κατά μέσο όρο σε σύγκριση με τους όγκους που προέκυψαν από ABCG2- κύτταρα (ρ & lt? 0,01). Είναι ενδιαφέρον ότι, η έγχυση μη ταξινομημένα κύτταρα IGR37 οδηγήσει επίσης σε μικρότερους όγκους από ABCG2 + κύτταρα που ήταν στατιστικά παρόμοια σε μεγέθη σε όγκους από ABCG2- κύτταρα (Σχήμα 3?. Πίνακας 2). Μη ταξινομημένα κύτταρα IGR39 οδήγησε σε μικρότερα μάζες όγκου, σε σύγκριση με μη ταξινομημένα κύτταρα IGR37 (0,13 γραμμάρια έναντι 1,4 γραμμάρια, αντίστοιχα? Ρ & lt? 0,01) 2 μήνες έπειτα από την ένεση των κυττάρων (Πίνακας 1). ABCG2- ταξινομημένο IGR39 κύτταρα δεν εμφανίζουν καμία μακροσκοπική μάζες σε αυτό το χρονικό σημείο (Πίνακας 2), ενώ ABCG2 + IGR39 κύτταρα παρήγαγαν όγκους με ένα 3.6-φορές αύξηση της μάζας σε σύγκριση με μη ταξινομημένα κύτταρα IGR39 (Πίνακας 2? P & lt? 0,01).

πρωτογενές μελάνωμα IGR39 κύτταρα και μεταστατικά κύτταρα μελανώματος IGR37 επωάστηκαν με τις υποδεικνυόμενες φθορίζοντα συζυγή αντισώματα FITC και αναλύθηκαν με κυτταρομετρία ροής, όπως περιγράφεται στο

Υλικά και Μέθοδοι

. Υ-άξονες, πλάγιας σκέδασης? Χ-άξονες, σχετική ένταση φθορισμού. Αριστερό πάνελ, αναλύει με ισοτόπου (IgG) αντισώματα ελέγχου? μεσαίο πάνελ, αναλύσεις με αντι-ABCG2 FITC-συζευγμένα αντισώματα. Μετά την απομόνωση FACS με βάση την αναφερόμενη πύλη (μπλε περίγραμμα), ABCG2 + ταξινομημένα κύτταρα αναλύονται πάλι να επιβεβαιώσει εμπλουτισμού (δεξιά πάνελ). Αριθμοί, τοις εκατό των συνολικών αξιολογούνται κυττάρων.

Η

5 × 10

5 αδιαχώριστα, ABCG2 + ή ABCG2- ταξινομημένα κύτταρα εγχέονται υποδορίως σε πέντε εβδομάδων NOD-SCID ποντίκια (3 ποντίκια για κάθε πειραματική κατάσταση). Μετά από 60 ημέρες, η μάζα του όγκου αποκόπηκε ζυγίζεται και φωτογραφήθηκαν.

Η

Ενιαία εναιωρήματα κυττάρων ελήφθησαν από όλα τα ξενομοσχεύματα όγκων και αναλύθηκαν μετά ένα έως δύο πέρασμα μέσω κυτταρομετρίας ροής για την ανίχνευση ABCG2- εκφράζοντα κύτταρα. Σε συμφωνία με προηγούμενες παρατηρήσεις με WM115 ανθρώπινα κύτταρα μελανώματος και βιοψίες μελανώματος [4], η έκφραση ABCG2 ήταν μη ανιχνεύσιμη σε όλες τις προετοιμασίες ξενομοσχεύματος όγκου των κυττάρων (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται).

CXCR6 και μελάνωμα σχηματισμός

IGR37 και IGR39 κυτταρικών πληθυσμών παρουσίασαν 10,6% και 9,6% συχνότητες έκφρασης για CXCR6, αντίστοιχα (Εικ. 4). CXCR6 + και CXCR6- υποπληθυσμών IGR37 και IGR39 κύτταρα ταξινομήθηκαν και εγχύθηκε σε NOD-SCID ποντίκια (η = 3 ποντικοί ανά ομάδα), όπως έγινε για κύτταρα ταξινομούνται επί τη βάσει της έκφρασης ABCG2. Απροσδόκητα, όπως φαίνεται στο Σχ. 5 και στον Πίνακα 2, μετά από μόλις 21 ημέρες από την ένεση + IGR37 κυττάρων CXCR6, σημαντικά όγκοι φάνηκε ότι ήταν κατά μέσο όρο 1,8 φορές μεγαλύτερη μάζα από τους όγκους που προέκυψαν από μη ταξινομημένα κύτταρα IGR37 (p & lt? 0,01). Επιπλέον, δεν παρατηρήθηκαν όγκοι ανιχνεύθηκαν από CXCR6- εγχυθεί κύτταρα (Πίνακας 2 και Εικόνα 6) αφού ακόμη και 2 μήνες. Περαιτέρω, τα κύτταρα CXCR6- δεν δείχνουν οποιαδήποτε μάζα ακόμη και μετά από 4 μήνες. Παρόμοια αποτελέσματα ελήφθησαν για IGR39 κύτταρα. CXCR6 + κύτταρα παρήγαγαν όγκους με 2,5 φορές μεγαλύτερη μάζα σε σύγκριση με μη ταξινομημένα κύτταρα? και καμία μάζα δεν ανιχνεύθηκε για τα CXCR6- κύτταρα (Πίνακας 2). Όσο για ABCG2, κύτταρα CXCR6 + ήταν επίσης μη ανιχνεύσιμο σε ξενομοσχεύματα όγκου με κυτταρομετρία ροής (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται).

αναλύει CXCR6 Single δείκτη. Πρωτογενή μελανώματος IGR39 κύτταρα και μεταστατικό μελάνωμα IGR37 κύτταρα επωάστηκαν με τις υποδεικνυόμενες φθορίζοντα APC-συζευγμένα αντισώματα και αναλύθηκαν με κυτταρομετρία ροής, όπως περιγράφεται στο

Υλικά και Μέθοδοι

. Υ-άξονες, πλάγιας σκέδασης? Χ-άξονες, σχετική ένταση φθορισμού. Αριστερό πάνελ, αναλύει με ισοτόπου (IgG) αντισώματα ελέγχου? μεσαίο πάνελ, αναλύσεις με αντι-CXCR6 APC-συζευγμένα αντισώματα. Μετά την απομόνωση FACS με βάση την αναφερόμενη πύλη (μπλε περίγραμμα), CXCR6 + ταξινομημένα κύτταρα αναλύονται πάλι να επιβεβαιώσει εμπλουτισμού (δεξιά πάνελ).

Η

5 × 10

5 CXCR6 + ταξινομημένα κύτταρα εγχέονται υποδορίως σε πέντε -Εβδομάδα-old NOD-SCID ποντίκια (3 ποντίκια για κάθε πειραματική συνθήκη). Μετά από 21 ημέρες, η μάζα του όγκου αποκόπηκε ζυγίζεται και φωτογραφήθηκαν.

Η

5 × 10

5 CXCR6- ταξινομημένα κύτταρα εγχύθηκαν υποδορίως σε πέντε εβδομάδων NOD-SCID ποντίκια (3 ποντίκια για κάθε πειραματική συνθήκη). CXCR6- κύτταρα δεν αποδώσει όγκους.

Η

Τέλος, αναλύσαμε το ποσοστό των CXCR6 + /+ ABCG2 διπλά θετικά κύτταρα και για τις δύο κυτταρικές σειρές. Όπως φαίνεται στο Σχ. 7, 6,7% και 3,1% των IGR37 και IGR39 κύτταρα, αντίστοιχα, ήταν διπλά θετικά για ABCG2 και CXCR6. Όταν ενίεται διπλών θετικών κυττάρων IGR39 ABCG2 + /+ CXCR6 σε NOD-SCID ποντίκια, οι όγκοι προέκυψαν που είχαν κατά μέσο όρο 4 φορές μεγαλύτερη μάζα σε σύγκριση με τους όγκους που αναπτύχθηκε από μη ταξινομημένα κύτταρα (ρ & lt? 0,01? Πίνακας 2). Όπως IGR39 κύτταρα ταξινομημένο με βάση την έκφραση CXCR6 μόνο, όγκους από IGR39 ABCG2 + /CXCR6 + κύτταρα απαιτούνται μόνο 21 ημέρες για την ανίχνευση του όγκου (Πίνακας 2).

αναλύσεις Διπλή δείκτης για CXCR6 και ABCG2. Πρωτογενή μελανώματος IGR39 κύτταρα και μεταστατικό μελάνωμα IGR37 κύτταρα επωάστηκαν με τις υποδεικνυόμενες φθορίζοντα APC-συζευγμένα αντισώματα και αναλύθηκαν με κυτταρομετρία ροής, όπως περιγράφεται στο

Υλικά και Μέθοδοι

. Αριστερά πάνελ, διμεταβλητή ένταση φθορισμού αναλύσεις με τους αντίστοιχους APC και την FITC-συζευγμένο ισότυπου (IgG) αντισώματα ελέγχου? μεσαίο πάνελ, διμεταβλητή ένταση φθορισμού αναλύσεις με τους αντίστοιχους APC και την FITC-συζευγμένο CXCR6-ειδικά και ABCG2-ειδικά αντισώματα. Αριθμοί, τοις εκατό των συνολικών αξιολογούνται κυττάρων.

Η

Μελάνωμα φαινότυπος των ξενομοσχευμάτων όγκου

Η πολυπαραμετρική ανοσοϊστοχημική ανάλυση ABCG2 + IGR37 κύτταρα ξενομοσχεύματα (Πίνακας 3 και Σχήμα 8) έδειξε ότι ο όγκος που προέρχεται από Αυτά τα κύτταρα εμφάνισαν μια ομοιογενή έκφραση των αντιγόνων διαφοροποίησης HBM45, ΗΜΝ-ΜΑΑ, και του υποδοχέα ενδοθηλίνης Β, και μία ετερογενής έκφραση της Melan-A αντιγόνου. Δεν υπάρχει συγκεκριμένη χρώση για το πεπτίδιο ΕΤ-1 θα μπορούσε να τεκμηριωθεί. Όλα τα αντιγόνα εξέλιξη που σχετίζεται κυττάρων αξιολογήθηκαν ήταν ομοιογενώς εκφράζεται. Η εξωκυτταρική μήτρα τενασκίνη μακρομόριο ανιχνεύθηκε στο μόσχευμα του όγκου ως ένα εκτεταμένο δίκτυο διάμεσου παγίδευση κυττάρων φωλιές μεταβλητού μεγέθους. Μεταξύ των εμβρυϊκά αντιγόνα που αναλύθηκαν, δεν ανιχνεύσιμα επίπεδα NY-ESO αποτελέσματα ενώ παρατηρήθηκε μία ασθενής έκφραση αντιγόνων MAGE. Παρόμοια αποτελέσματα έχουν ληφθεί για ABCG2 IGR39 κύτταρα + (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται).

Ο πληθυσμός των κυττάρων του όγκου εκφράζει ομοιογενώς Melan-A (Α) και τα αντιγόνα διαφοροποίησης ΗΜΝ-ΜΑΑ (Β). Η ίδια κατανομή χαρακτηρίζει την πρόοδον των όγκων αντιγόνα HER-3 (C) και τον εξωκυτταρικό τενασκίνης μακρομόριο (D). Ο τελευταίος χαρακτηριστικά οριοθετεί περιοχές όγκων μεταβλητού μεγέθους. (160 × μεγέθυνση).

Η

Η CXCR6 + /ABCG2 + φαινοτύπου σε ανθρώπινο βιοψίες μελανώματος

Αν και οι αξιολογούνται κυτταρικές σειρές μελανώματος που προέρχονται από ανθρώπινους ιστούς όγκων, η πρόσφατα περιγράφεται CXCR6 + /φαινότυπος κυττάρου ABCG2 + θα μπορούσε να περιοριστεί σε καλλιεργημένα κύτταρα όγκου. Συνεπώς, ερευνήσαμε 4 αμόρφωτος μελάνωμα θετικό λέμφος δείγματα ανθρώπινου βιοψίας κόμβος για την παρουσία κυττάρων με το CXCR6 + /ABCG2 + φαινότυπο. Όλες οι τέσσερις βιοψία δοκίμια περιείχε ένα μικρό υποπληθυσμό των κυττάρων ABCG2 + (12,2%, 8,4%, 2,65%, & gt? 0,1%). Ένα από αυτά τα τρία περιείχε επίσης ένα μικρό πληθυσμό CXCR6 + (0,25%) και ένας μικρός πληθυσμός διπλή θετική ABCG2 + /CXCR6 + (0,3%). Σύκο. 9 δείχνει τα αποτελέσματα της ανάλυση κυτταρομετρίας ροής της CXCR6 + /+ ABCG2 θετικά δείγματα.

Η ανάλυση κυτταρομετρίας ροής ενός ανθρώπινου δείγματος βιοψίας μελανώματος για CXCR6 + /+ ABCG2 υποκλάσμα. Ένα δείγμα βιοψίας μεταστατικό μελάνωμα υποβλήθηκε σε επεξεργασία όπως περιγράφεται στο

Υλικά και Μέθοδοι

και αναλύθηκαν αμέσως με κυτταρομετρία ροής. Αριστερό πλαίσιο, διμεταβλητή ένταση φθορισμού αναλύσεις με τους αντίστοιχους APC και την αντισώματα ελέγχου FITC-συζευγμένο ισότυπου (IgG). Δεξιός πίνακας, διμεταβλητή ένταση φθορισμού αναλύσεις με τους αντίστοιχους APC και την FITC-συζευγμένο CXCR6-ειδικά και ABCG2-ειδικά αντισώματα. Αριθμοί, τοις εκατό των συνολικών αξιολογούνται κυττάρων.

Η

επίπεδα λειτουργίας CXCR6 και CXCL16 σε κυτταρικές σειρές μελανώματος

Σε ένα πρόσφατο έγγραφο, δέσμευση του CXCR6 από το διασπασμένο διαλυτό κλάσμα της μεμβράνης-δεσμευμένο πρόσδεμα CXCL16 ( «sCXCL16») δείχθηκε να ενισχύσει τον πολλαπλασιασμό των κυτταρικών γραμμών καρκινώματος [11]. Ερευνήσαμε τις επιπτώσεις της ελεύθερης ρίζας συνδέσεως sCXCL16 επί της ανάπτυξης IGR37 και IGR39 κύτταρα.

Τα επίπεδα του CXCL16 στο μέσο από μη ταξινομημένα κύτταρα και των δύο κυτταρικές σειρές και σε αντίστοιχα κύτταρα CXCR6 + προσδιορίστηκαν χρησιμοποιώντας ELISA (Σχ. 10 ). Το επίπεδο των CXCL16 ανιχνεύθηκε ήταν εξαιρετικά χαμηλό (0,06 μονάδες OD ± 0,03, η = 8). Καμία σημαντική διαφορά δεν παρατηρήθηκε μεταξύ της αδιαχώριστα κυττάρου και CXCR6 + ταξινομημένα κύτταρα μετά από 3 ημέρες καλλιέργειας (Εικ. 8).

50000 κύτταρα /φρεάτιο σε 24 πλακίδια πολλαπλών φρεατίων. Όταν τα κύτταρα έφθασαν -90% συρροή (-3-4 ημέρες), το μέσο συλλέγεται και εν συντομία φυγοκεντρούνται. Ένα δείγμα 50 μΐ του μέσου που χρησιμοποιείται για την ανίχνευση CXCL16 χρησιμοποιώντας την Quantikine Human CXCL16 Immunoassay (R &? D Systems, Minneapolis, ΜΝ). Bars αντιπροσωπεύει το μέσο ± S.D. τριών ανεξάρτητων πειραμάτων κάθε διεξάγονται quintuplicate.

Η

Σύμφωνα με τις περιγραφόμενες μεθόδους, και οι δύο κυτταρικές σειρές επωάστηκαν με sCXCL16 για 4 ή 7 ημέρας. Στο τέλος της επώασης, τα κύτταρα θρυψινοποιήθηκαν και μετρήθηκαν. Όπως φαίνεται στο Σχ. 11, με την ημέρα 7, και οι δύο κυτταρικές σειρές παρουσίασαν σημαντική αύξηση (ρ & lt? 0,01). Που κατά μέσο όρο 1,4 φορές στον αριθμό των κυττάρων σε απόκριση προς προσθήκη sCXCL16

Είκοσι χιλιάδες κύτταρα σπάρθηκαν όλη τη νύκτα σε ατομικά φρεάτια 12 multi -Καλά πλάκες σε πλήρες θρεπτικό μέσο όρο ανάπτυξης. Η ανασυνδυασμένη sCXCL16 (100 ng /ml) προστέθηκε την επόμενη ημέρα και να αντικατασταθεί κάθε 48 ώρες. Την 4η και 7η ημέρα της καλλιέργειας, τα κύτταρα θρυψινοποιήθηκαν και προσδιορίζεται αριθμοί των βιώσιμων κυττάρων. Το ραβδόγραμμα αντιπροσωπεύει το μέσο ± S.D. τριών ανεξάρτητων πειραμάτων κάθε διεξάγονται εις τριπλούν. *, P & lt? 0,01

vs

. μη επεξεργασμένα κύτταρα (μαύρες μπάρες)? **, P & lt? 0.001

vs

. μη επεξεργασμένα κύτταρα (μαύρες μπάρες).

Η

Το μελάνωμα σχετίζεται αντιγόνο (ΜΑΑ) έκφρασης και ABCG2 έναντι έκφραση CXCR6

Το προφίλ έκφρασης του ΜΑΑ που ανήκουν στις Καρκίνος Όρχεων αντιγόνα (CTA) της οικογένειας ( MAGE-Α1, -Α2, -Α3, -Α6, GAGE ​​1-2, GAGE ​​1-6, SSX-2, SSX 1-5, και ΝΥ-ΕδΟ-1) και του ΗΜΝ-ΜΑΑ πραγματοποιήθηκε με RT-PCR . Όπως φαίνεται στον Πίνακα 4, παρόμοια πρότυπα ανίχνευσης για ABCG2 + και ABCG2- υποπληθυσμών παρατηρήθηκαν και για τις δύο κυτταρικές σειρές. Επιπλέον, η θεραπεία με το DNA μέσο υπομεθυλίωσης 5-αζα-2′-δεοξυκυτιδίνης ήταν σε θέση να επάγει μια

de novo

έκφραση του ΜΑΟΕ-Α3, MAGE-Α4, GAGE ​​1-2, 1-6 GAGE και SSX 1-5 και στις δύο ABCG2

+ και ABCG2

-. IGR37 κύτταρα μελανώματος (Πίνακας 5)

Η

Όσον αφορά την υποπληθυσμούς κυττάρων CXCR6 + και CXCR6- στην IGR37 και κυτταρικούς πληθυσμούς IGR39, καθώς και το διπλό θετικό ABCG2 + /+ CXCR6 IGR37 κύτταρα, υπήρχε μια επικάλυψη της οικογένειας CTA και του ΗΜΝ-ΜΑΑ (Πίνακας 6). Επιπλέον, στο ξενομόσχευμα όγκου CXCR6 + IGR37, όλες οι πρωτεΐνες της οικογένειας ΜΑΑ επικαλύπτονται με την εξαίρεση των CXCR6 + IGR37 κύτταρα για τυροσινάσης, Mart-1, και gp100 (Πίνακας 6).

Η

Συζήτηση

Ένα θεμελιώδες πρόβλημα στην έρευνα για τον καρκίνο είναι που προσδιορίζει τον τύπο κυττάρου που είναι σε θέση να διατηρεί νεοπλαστικής ανάπτυξης. Υπάρχουν ενδείξεις ότι η πλειονότητα των καρκινικών κυττάρων είναι κλώνοι και ότι τα καρκινικά κύτταρα αντιπροσωπεύουν τον απόγονο ενός μόνο κυττάρου (που επισκοπείται στο [6]). Ωστόσο, είναι σαφές ποια κύτταρα έχουν την κυτταρική λειτουργία ογκογενή, διατηρώντας την ανάπτυξη του όγκου. Η ιδέα της θεωρίας του καρκίνου των βλαστικών κυττάρων είναι ότι ειδικά κύτταρα (

δηλ.,

Καρκινικά βλαστικά κύτταρα, ΚΕΠ) διαθέτουν τις απαιτούμενες αναγεννητικές ιδιότητες που οδηγούν στον σχηματισμό του όγκου [6]. Ένα άλλο σημαντικό σημείο, μέχρι τώρα ασαφές, είναι η προέλευση των υποτιθέμενων ΚΕΠ [6]. Ένας σημαντικός τρόπος για να αποδείξει ότι ένα συγκεκριμένο υποπληθυσμό μπορούν να συντηρήσουν την ανάπτυξη του όγκου είναι η χρήση μοντέλα ξενομοσχεύματος για ανθρώπινα κύτταρα ή συγγενή μοντέλα για κύτταρα ποντικού. Ωστόσο, ένα σημαντικό κριτική για, μεταξύ άλλων, το μοντέλο ξενομοσχεύματος είναι ότι είναι ένα τεχνητό μοντέλο, που, για παράδειγμα, κατά το ότι ετερόλογη περιβαλλοντικοί παράγοντες δεν θεωρούνται [6]. Από την άλλη πλευρά, ένα άλλο κρίσιμο σημείο είναι να προσδιοριστούν οι δείκτες που είναι σε θέση να ορίσει ένα καρκίνου /την έναρξη των βλαστικών κυττάρων υποπληθυσμό.

Στην παρούσα εργασία, έχουμε εντοπίσει ένα νέο βιοδείκτη που σχετίζεται με ασύμμετρη αυτο- την ανανέωση, το μόριο συν-υποδοχέα CXCR6. Επιπλέον, με το ρόλο του CXCR6 στην ανοσολογική απόκριση [10], [12], πιο πρόσφατα, η έκφραση CXCR6 έχει αναφερθεί σε μερικούς ανθρώπινους όγκους, συμπεριλαμβανομένου του μελανώματος [12]. Συγκρίνοντας δύο γονικές κυτταρικές σειρές ανθρώπου μελάνωμα, IGR39 (πρωτογενής) και IGR37 (μεταστατικό), η τελευταία ήταν πιο επιθετική για το σχηματισμό ξενομοσχεύματος όγκου σε σύγκριση με πρωτογενές μελάνωμα IGR39 κύτταρα. Αυτή η διαφορά στην ογκογόνο δυναμικό αντικατοπτρίζεται στις CXCR6-ταξινομημένο υποπληθυσμών. Στην πραγματικότητα, CXCR6 + κύτταρα κατέληξε σε μεγαλύτερη μάζα του όγκου σε ένα signficantly μικρότερη χρονική περίοδο, σε σύγκριση με μη ταξινομημένα κύτταρα. Περαιτέρω, τα κύτταρα CXCR6- δεν οδήγησε σε καμία σημαντική, παρατηρήσιμη μάζα του όγκου. Δεδομένου ότι η έκφραση CXCR6 βρέθηκε να συνδέεται με την ασύμμετρη αυτο-ανανέωση, που είναι χαρακτηριστικό της TSSCs, MCSCs φαίνεται να είναι παράγωγο του μελανοκυττάρων βλαστικά κύτταρα ιστού-ειδική. Αν και, είναι δεδομένο ότι ασύμμετρη αυτο-ανανέωση με TSSCs πρέπει να αφαιρεθεί για να καταστούν πρόδρομοι του όγκου [9], [15], όπως μεταλλαγμένα κύτταρα μπορεί να εξακολουθούν να διατηρούν δείκτες που σχετίζονται με την προηγούμενη ικανότητά τους για ασύμμετρη αυτο-ανανέωση, ακόμη και μετά από αυτό λειτουργία TSSCs μεταβάλλεται με μεταλλάξεις.

Αρκετές μεταφορείς ABC έχουν βρεθεί να είναι υπερ-εκφράζεται σε καρκινικές κυτταρικές σειρές καλλιεργήθηκαν υπό επιλεκτική πίεση [6]. Ειδικότερα, σε σχέση με το μελάνωμα, ABCB5 υπερεκφράζεται σε μελάνωμα και ABCG2 εκφράζεται από ένα υπο-κλάσμα του πληθυσμού CD133-θετικών κυττάρων μελανώματος [4], [5]. Εδώ, δείχνουμε για πρώτη φορά, μια σχέση μεταξύ ABCG2 και ασύμμετρη αυτο-ανανέωση. Στην πραγματικότητα, ABCG2 + κύτταρα έδωσε μια μεγαλύτερη μάζα όγκου από ό, τι ABCG2- κύτταρα σε ανοσοανεπαρκείς ποντικούς. Ωστόσο, τα κύτταρα CXCR6 εκφράζουν ήταν πιο επιθετική για σχηματισμό όγκου από κύτταρα ABCG2 εκφράζουν, υποδηλώνοντας ότι ο υποπληθυσμός CXCR6 + /ABCG2 + κύτταρα μπορεί να είναι οι πλέον ισχυροί MCSCs.

Από την άλλη πλευρά, ένα ενδιαφέρον ερώτημα είναι γιατί ούτε ABCG2 + ούτε CXCR6 + κύτταρα ανιχνεύθηκαν σε ξενομοσχεύματα όγκου. Θα μπορούσε να είναι πολύ σπάνια, ή μπορεί και να μην λαμβάνουν την απαιτούμενη περιβαλλοντική είσοδο για έκφραση σε ποντίκια με ανοσοανεπάρκεια. Στην πραγματικότητα, αν καλλιεργήσαμε όγκους που προέρχονται από ABCG2 + ή CXCR6 + κυττάρων έκφραση τους επέστρεψαν σε καλλιέργεια μετά από μία έως δύο διόδους [4] (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Σε αυτό το πλαίσιο, είναι σημαντικό να τονίσουμε ότι η ανάλυσή μας για την ανθρώπινη βιοψίες μελανώματος επιβεβαίωσε την παρουσία ενός ABCG2 + /CXCR6 + υποκλάσμα σε ανθρώπινους ιστούς. Αυτό το εύρημα είναι σημαντικό για να αποκλειστεί το ενδεχόμενο ότι υπάρχει η ABCG2 φαινοτύπου των κυττάρων + /CXCR6 + μόνο σε καλλιέργεια κυττάρων. Έτσι, του φαίνεται πιο πιθανό ότι η έκφραση των πρωτεϊνών παρεμποδίζεται από κάποιο άγνωστο μηχανισμό σε ανοσοανεπαρκείς ποντικούς, ή άλλα είδη σε γενικές γραμμές.

Στόχευση του MCSCs μπορεί να παρουσιάσει μία νέα και πιο αποτελεσματική κλινική προσέγγιση για θεραπεία ανθρώπινου μελανώματος. Ωστόσο, το συγκεκριμένο προφίλ αντιγόνο τους μπορεί να εμποδίσει την κλινική έκβαση των ανοσοθεραπευτικών στρατηγικών για αυτούς τους ασθενείς. Σε αυτό το πλαίσιο, ερευνήσαμε την έκταση προφίλ MCSCs για συγκεκριμένα αντιγόνα που σχετίζονται με όγκο (ΤΑΑ) χρησιμοποιούνται σήμερα ως θεραπευτικοί στόχοι στο κλινικό περιβάλλον. Στην πραγματικότητα, η έλλειψη των κατάλληλων θεραπευτικών στόχων για MCSCs μπορούσε στην πραγματικότητα να οδηγήσει σε μακροπρόθεσμη αντίσταση στη θεραπεία, που υπέστη η απόφυση των ΤΑΑ-αρνητικών κλώνων κυττάρων μελανώματος. Στο πλαίσιο αυτό, η εμφάνιση του ΤΑΑ-αρνητικά κύτταρα είναι σε θέση να αποφύγει το ανοσοποιητικό έλεγχο έχει αναφερθεί σε ασθενείς με μελάνωμα που υποβάλλονται σε ανοσολογική θεραπεία [26]. Τα καρκινικά αντιγόνα όρχεις (CTA) περιλαμβάνει μεγάλες οικογένειες μεθυλίωσης ρυθμιζόμενα και αυστηρά συναφή ΤΑΑ, που προσδιορίζονται πρώτα σε ανθρώπινα μελανώματα [27], αντιπροσωπεύουν τις πιο υποσχόμενες θεραπευτικοί στόχοι χρησιμοποιούνται σήμερα σε ασθενείς με μελάνωμα. [15].