Αφηρημένο

παγκρέατος αστεροειδή κύτταρα (ΚΕΕ) διαδραματίζουν καθοριστικό ρόλο στην επιθετική συμπεριφορά του καρκίνου του παγκρέατος. Παρά το γεγονός ότι έχει εντοπιστεί ετερογένεια των ΚΕΕ, οι λειτουργικές διαφορές παραμένουν ασαφείς. Εμείς χαρακτηρίζεται CD271

+ ΚΕΕ στον ανθρώπινο καρκίνο του παγκρέατος. Ανοσοϊστοχημεία για CD271 διεξήχθη για 31 κανονική παγκρεατική ιστούς και 105 παγκρεατικού πόρου αδενοκαρκινώματα (PDACs). Πραγματοποιήσαμε κυτταρομετρίας ροής και ποσοτική RT-PCR, και να αξιολογηθούν έκφραση CD271 σε ΚΕΕ που απομονώνεται από παγκρεατικά ιστούς και οι αλλαγές στην έκφραση CD271 σε ΚΕΕ συν-καλλιεργήθηκαν με τα καρκινικά κύτταρα. Διερευνήσαμε επίσης το πρότυπο της έκφρασης CD271 σε SCID μοντέλο ξενομοσχεύματος ποντικού. Σε αναλύσεις ανοσοϊστοχημική, οι CD271-υψηλά ποσοστά χρώση σε παγκρεατικά στρώμα σε φυσιολογικούς ιστούς του παγκρέατος και PDACs ήταν 2/31 (6,5%) και 29/105 (27,6%), αντίστοιχα (p = 0,0069). Σε PDACs, CD271

+ στρωματικά κύτταρα παρατηρήθηκαν συχνά στην άκρη και όχι στο κέντρο των όγκων. Στρωματικά CD271 υψηλή έκφραση συσχετίστηκε με καλή πρόγνωση (p = 0,0040). αναλύσεις κυτταρομετρίας ροής απέδειξε CD271-θετικούς ρυθμούς στο ΚΕΕ ήταν μηδέν έως 2,1%. αναλύσεις Ποσοτική RT-PCR αποκάλυψε ότι η έκφραση CD271 mRNA αυξήθηκε σε ΚΕΕ μετά συγκαλλιέργεια με παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα. Ωστόσο, το επίπεδο της έκφρασης CD271 mRNA, στη συνέχεια μειώθηκαν μετά την πρόσκαιρη αύξηση. Επιπλέον, η έκφραση CD271 mRNA μειώθηκε στο ΚΕΕ μεταναστεύουν προς καρκινικά κύτταρα του παγκρέατος μέσω Matrigel. Στο μοντέλο ξενομοσχεύματος, CD271

+ ΚΕΕ ήταν παρούσα σε καρκινικά περιθώρια /περιφέρεια και απουσίαζαν στον πυρήνα του όγκου. Εν κατακλείδι, CD271 εκφράστηκε σε ΚΕΕ γύρω παγκρεατικών όγκων, αλλά όχι στο κέντρο των όγκων, και η έκφραση μειώθηκε μετά από μακρά συγκαλλιέργεια με παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα ή μετά την κίνηση προς καρκινικά κύτταρα του παγκρέατος. Τα ευρήματα αυτά υποδηλώνουν ότι CD271

+ ΚΕΕ εμφανιστεί στο αρχικό στάδιο του παγκρέατος καρκινογένεσης και ότι η έκφραση CD271 είναι συσχετίστηκε σημαντικά με καλύτερη πρόγνωση σε ασθενείς με PDAC

Παράθεση:. Fujiwara K, Ohuchida K, Mizumoto K , Shindo Κ, Eguchi D, Kozono S, et al. (2012) CD271

+ υποπληθυσμό του παγκρέατος αστεροειδή κύτταρα συσχετίζεται με την πρόγνωση του καρκίνου του παγκρέατος και ρυθμίζεται από την αλληλεπίδραση με τα καρκινικά κύτταρα. PLoS ONE 7 (12): e52682. doi: 10.1371 /journal.pone.0052682

Επιμέλεια: Hidayatullah Γ Munshi, του Πανεπιστημίου Northwestern, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 19, Ιούλη, 2012? Αποδεκτές: 19 Νοέμβρη 2012? Δημοσιεύθηκε: 27, Δεκ 2012

Copyright: © 2012 Fujiwara et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε από τους αριθμούς επιχορήγηση JSPs KAKENHI 24 με 1237, 23390327, 24659613, 23659654, 24390319, 22591524, 23-11109, 23659655, 24390318. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία της το χειρόγραφο

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

ο καρκίνος του παγκρέατος είναι μια από τις πιο θανατηφόρες μορφές καρκίνου, και 5 ετών της ποσοστό επιβίωσης είναι μόνο το 4% [1]. Χαρακτηρίζεται από υπερβολική desmoplasia, η οποία διαδραματίζει έναν κρίσιμο ρόλο στην επιθετική συμπεριφορά του [2], [3]. Πρόσφατα, η έρευνα για τη βιολογία του καρκίνου έχει επικεντρωθεί στις αλληλεπιδράσεις του καρκίνου-στρώμα. Οι αλληλεπιδράσεις μεταξύ των καρκινικών κυττάρων και ιστών στρωματικά είναι απαραίτητα για την ανάπτυξη και την εξέλιξη των όγκων [4]. Θεραπείες που στοχεύουν αλληλεπιδράσεις καρκίνο-στρώμα μπορεί να αντιπροσωπεύει μια νέα προσέγγιση για τον έλεγχο του καρκίνου του παγκρέατος.

παγκρέατος αστεροειδή κύτταρα (ΚΕΕ) έχουν αναγνωριστεί ως η κύρια πηγή του υπερβολικού εξωκυττάριας ουσίας που παρατηρείται στη χρόνια παγκρεατίτιδα και αδενοκαρκίνωμα του παγκρέατος [ ,,,0],5], [6]. Παρόμοια με ηπατικά αστεροειδή κύτταρα, ένας σημαντικός τύπος κυττάρων για παραγωγή εξωκυττάριας μήτρας σε ηπατική ίνωση, ΚΕΕ αποθηκεύει λίπος σταγονίδια που περιέχουν βιταμίνη Α εντός κυτταρόπλασμα τους [7]. ΚΕΕ ενεργοποιούνται κατά τη διέγερση από διάφορους αυτοκρινή ή παρακρινή παράγοντες. Εκφράζουν α-λείου μυός ακτίνη (α-SMA) και την παραγωγή διαφόρων πρωτεϊνών εξωκυτταρικής μήτρας [8], [9]. Διαλυτό παράγοντες που εκκρίνονται από ενεργοποιημένα ΚΕΕ προάγουν τον πολλαπλασιασμό, τη μετανάστευση, εισβολή, και επιβίωση των καρκινικών κυττάρων του παγκρέατος κατά θεραπεία γεμσιταβίνης [10]. Έτσι, ΚΕΕ παίζουν ένα σημαντικό ρόλο στις αλληλεπιδράσεις με τον καρκίνο στρώμα σε καρκίνο του παγκρέατος.

Αρκετές αναφορές δείχνουν ότι στρωματικά κύτταρα, όπως μυοϊνοβλάστες και μεσεγχυματικών κυττάρων, που απομονώνονται από διάφορους ανθρώπινους ιστούς εμφανίζουν διαφορετικούς φαινοτύπους [11], [12 ]. Αναφέραμε προηγουμένως ότι CD10

+ ΚΕΕ ενισχύσει την εξέλιξη του καρκίνου του παγκρέατος κυττάρων [13]. Αυτές οι παρατηρήσεις δείχνουν ότι τα ΚΕΕ έχουν λειτουργική ετερογένεια και την περαιτέρω δείχνουν ότι τα ΚΕΕ μπορεί να περιέχει διάφορα άλλα υποπληθυσμούς κυττάρων που μεμονωμένα ή συνεργατικά επηρεάσουν την εξέλιξη του καρκίνου του παγκρέατος. Λεπτομερής χαρακτηρισμός των ΚΕΕ στον καρκίνο του παγκρέατος θα βοηθήσει να αποσαφηνιστεί ο μηχανισμός που διέπει τις αλληλεπιδράσεις μεταξύ των καρκινικών κυττάρων και στρωματικά κύτταρα, και μπορεί να παρέχει νέους στόχους για το στρώμα-σκηνοθεσία θεραπειών.

CD271 (επίσης γνωστή ως υποδοχέας νευρικού αυξητικού παράγοντα , NGFR ή p75NTR) είναι ένας υποδοχέας νευροτροφίνη που έχει εμπλακεί στην ρύθμιση παρακρινή ανάπτυξη ενός αριθμού των νευρωνικών και μη νευρωνικών τύπων όγκου [14], [15]. Πρόσφατες μελέτες έχουν επικεντρωθεί στην CD271, επειδή αναγνωρίστηκε ως δείκτης ανθρώπινων μεσεγχυματικών βλαστικών κυττάρων [16] και έχει αξιολογηθεί ως ένα σημαντικό δείκτη του καρκίνου των βλαστικών κυττάρων σε μελάνωμα [17]. CD271 μπορεί να είναι ένας δείκτης ενός συγκεκριμένου λειτουργικού υποπληθυσμό, όπως βλαστική ικανότητα. Στο πάγκρεας, έκφραση CD271 σε ΚΕΕ έχει ανιχνευθεί [18]. Ωστόσο, η έκφραση CD271 μειώθηκε ταχέως μετά την απομόνωση κυττάρων από τα παγκρεατικά ιστούς [19]. Ως εκ τούτου, ο ρόλος της έκφρασης CD271 στο ΚΕΕ παραμένει ασαφής.

Ο στόχος αυτής της μελέτης ήταν να προσδιοριστούν τα συγκεκριμένα ΚΕΕ που επηρεάζουν την εξέλιξη των καρκινικών κυττάρων εστιάζοντας στην έκφραση CD271. Εκτιμήσαμε περαιτέρω τη σημασία της έκφρασης CD271 στο ΚΕΕ.

Υλικά και Μέθοδοι

Δήλωση Ηθικής

Η μελέτη εγκρίθηκε από την Επιτροπή Δεοντολογίας του Πανεπιστημίου Kyushu (αριθμός έγκρισης, 23 -64) και διεξάγονται σύμφωνα με τις Ηθικές οδηγίες για Ανθρώπινου Γονιδιώματος /Gene Έρευνας ψηφίστηκε από την ιαπωνική κυβέρνηση και η Διακήρυξη του Ελσίνκι. Όλοι οι ασθενείς με την προϋπόθεση υπέγραψε συγκατάθεση για την έγκριση της χρήσης των ιστών τους για ερευνητικούς σκοπούς απροσδιόριστη. Για όλα τα πειράματα που αφορούν τα ποντίκια, τα ζώα στεγάζονται σε γραφεία στρωτής ροής κάτω από ειδικές συνθήκες άνευ παθογόνου σε εγκαταστάσεις εγκεκριμένες από το Πανεπιστήμιο Kyushu (αριθμός έγκρισης, A24-112-0).

Ασθενείς και του παγκρέατος ιστούς

παγκρέατος καρκινικούς ιστούς ελήφθησαν από 105 ασθενείς που υποβλήθηκαν σε εκτομή του παγκρέατος για τον καρκίνο του παγκρέατος σε ίδρυμα μας. Τα κλινικοπαθολογικοί χαρακτηριστικά των ασθενών που περιγράφονται στον Πίνακα S1. Η επιβίωση μετρήθηκε από τη στιγμή της παγκρεατικής εκτομής μέχρι το θάνατο. Πρόγνωση καθορίστηκε τον Σεπτέμβριο του 2011. Η διάμεση συνολική χρόνος επιβίωσης ήταν 23,5 μήνες (εύρος, 1-114 μήνες). Εξήντα δύο ασθενείς έχασαν τη ζωή τους κατά τη διάρκεια της παρακολούθησης. Όλοι οι ιστοί που γειτνιάζουν με τα υποδείγματα που αξιολογήθηκαν ιστολογικά σύμφωνα με τα κριτήρια της Παγκόσμιας Οργάνωσης Υγείας. Το στάδιο του όγκου αξιολογήθηκε σύμφωνα με την Ένωση για τη Διεθνή Έλεγχο του Καρκίνου (UICC). Λάβαμε επίσης 31 κανονικές πάγκρεας (NP) δείγματα από ακέραια ιστούς του παγκρέατος εκτομή για καρκίνο του χοληδόχου πόρου, καλοήθεις στερεάς pseudopapillary όγκου ή νευροενδοκρινικού όγκου για χρήση ως ιστοί ελέγχου. Συλλέξαμε 10 επιπλέον παγκρέατος ενδοεπιθηλιακή νεοπλασία (PanIN) και 39 ενδοπορικού θηλώδες νεόπλασμα βλεννώδες (IPMN) δείγματα.

Ανοσοϊστοχημική διαδικασίες και

αξιολόγησης

Η ανοσοϊστοχημική χρώση πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας μια Histofine SAB-PO Kit (Nichirei , Tokyo, Japan). Οι ιστοί τεμαχίσθηκαν σε πάχος 4 μm και επωάστηκαν με μονοκλωνικό αντίσωμα ποντικού αντι-CD271 αντίσωμα (1:100? Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA) ή ποντικού μονοκλωνικό αντι-α-SMA αντίσωμα (1:50? Dako, Glostrup , Δανία) επί μία νύκτα στους 4 ° C. Τα κύτταρα θεωρούνται ότι ανοσοχρώση θετικά όταν η μεμβράνη ή κυτταρόπλασμα χρωματίστηκε. Εντοπίσαμε ενεργοποιηθεί ΚΕΕ με βάση την κυτταρική μορφολογία (ατρακτοειδή κύτταρα) και τις ταυτότητές τους επιβεβαιώθηκαν με χρώση α-SMA. Μετρήσαμε τον αριθμό των κυττάρων σε τουλάχιστον 10 πεδία ανά τμήμα στα 200 × μεγέθυνση. Για να ληφθεί υπόψη η ετερογένεια στην έκφραση CD271, η κατανομή των CD271 ανοσοχρώση αξιολογήθηκε ως ποσοστά των βαμμένων κυττάρων και βαθμολογήθηκαν ως ακολούθως: 0, 0%? 1, & lt? 25%? 2, 26-50%? 3, 51-75%? ή 4, 76-100%. Παρομοίως, η ένταση χρώσης βαθμολογήθηκε ως εξής: 0, καμία χρώση? 1, ασθενής χρώση? 2, μέτρια χρώση? ή 3, ισχυρή χρώση. Τέλος, υπολογίζεται το σκορ χρώση πολλαπλασιάζοντας το ποσοστό βαθμολογίας από το σκορ ένταση. Στα καρκινικά κύτταρα του παγκρέατος, χωρίσαμε τα δείγματα σε υψηλή χρώση & gt? 3 και χαμηλή χρώση & lt? 2 ομάδες. Όλα τα πλακίδια αξιολογήθηκαν ανεξάρτητα από δύο ερευνητές, χωρίς καμία γνώση των κλινικών χαρακτηριστικών της κάθε περίπτωσης.

Κύτταρα και συνθήκες καλλιέργειας

Ανθρώπινο ΚΕΕ απομονώθηκαν από φρέσκα παγκρέατος χειρουργικά δείγματα με τη μέθοδο της απόφυση σε μας εργαστήριο [5], [20]. Η ΕΠΑ τύπο κυττάρου επιβεβαιώθηκε με μορφολογία (αστεροειδής που μοιάζουν ή ατρακτοειδή κύτταρα) και με χρώση ανοσοφθορισμού για α-SMA και βιμεντίνης [10], [13], [20]. PSC1 και PSC3-9 απομονώθηκαν από καρκίνο του παγκρέατος. PSC2 και PSC10 απομονώθηκαν από καλοήθεις παγκρέατος κύστη. PSC11 και PSC12 απομονώθηκαν από φυσιολογικό παγκρεατικό περιοχή των παγκρεατικών καρκινικών ιστών. Επιπλέον, αξιολογήσαμε δύο παγκρεατικού καρκίνου κυτταρικές γραμμές, κοστούμι-2 (Health Science Research Τράπεζα Πόρων, Osaka, Japan) και Capan-2 (American Type Culture Collection, Manassas, VA). SK-N-MC, μια ανθρώπινη κυτταρική γραμμή neuroepithelioma (American Type Culture Collection), αγοράστηκε ως θετικός έλεγχος για έκφραση CD271. Τα κύτταρα σε περάσματα 3 έως 8 χρησιμοποιήθηκαν για δοκιμασίες. Τα κύτταρα διατηρήθηκαν όπως περιγράφηκε προηγουμένως [21].

χρώση ανοσοφθορισμού και λέιζερ σάρωσης ομοεστιακό μικροσκόπιο

ΚΕΕ (1 × 10

5) απλώθηκαν σε γυάλινο πυθμένα πιάτα (Matsunami , Osaka, Japan) και επωάστηκαν για 24 ώρες. Στις καλλιέργειες με υπερκείμενο, τα κύτταρα επωάστηκαν σε 10% ορό εμβρύου μόσχου (FBS) /DMEM με υπερκείμενο που προέρχονται από παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα για 72 ώρες. Τα κύτταρα στη συνέχεια σταθεροποιήθηκαν με μεθανόλη, αποκλείστηκαν με 3% αλβουμίνη βόειου ορού σε ρυθμισμένο με φωσφορικό αλατούχο διάλυμα (PBS), και επωάστηκαν με αντι-α-SMA μονοκλωνικό αντίσωμα ποντικού (1:50? Dako), ένα μονοκλωνικό κουνέλι αντι- αντίσωμα βιμεντίνη (1:50? Cell Signaling Technology, Beverly, ΜΑ) και ένα αντι-CD271 μονοκλωνικό αντίσωμα ποντικού (1:50? Santa Cruz Biotechnology) ολονυκτίως στους 4 ° C. Στη συνέχεια, τα κύτταρα επωάστηκαν με Alexa 488-συζευγμένο IgG αντι-ποντικού ή 546-συζευγμένο IgG αντι-κουνελιού (Molecular Probes, Eugene, OR) για 1 ώρα. Πυρηνική ΟΝΑ αντίθετα με 4 ‘, 6-διαμιδινο-2-φαινυλινδόλη (0.05 μg /mL). Ένα λέιζερ σάρωσης ομοεστιακό μικροσκόπιο φθορισμού. (A1R? Νίκωνος, Tokyo, Japan) χρησιμοποιήθηκε, και εικόνες με χρήση του λογισμικού ΝΑΚ-Στοιχεία (Nikon)

κυτταρομετρία ροής

καλλιεργημένα κύτταρα λαμβάνεται από ταπήτιο μονοστρωματικές καλλιέργειες και επωάστηκαν με ισοθειοκυανική φλουορεσκεΐνη (FITC), συζευγμένης αντι-CD271 αντίσωμα (Miltenyi Biotec, Auburn, CA). Mouse IgG1 Κ ισότυπου ελέγχου FITC (Miltenyi Biotec) χρησιμοποιήθηκε ως αρνητικός έλεγχος. Τα επισημασμένα κύτταρα αναλύθηκαν με κυτταρομετρία ροής χρησιμοποιώντας ένα FACS Calibur (Becton Dickson and Company, Franklin Lakes, NJ).

πραγματικού χρόνου ποσοτική RT-PCR (qRT-PCR)

Ολικό RNA εκχυλίζεται από καλλιεργημένα κύτταρα χρησιμοποιώντας υψηλής καθαρότητας Κιτ απομόνωσης RNA (Roche Diagnostics, Mannheim, Germany) και ϋΝάση Ι (Roche Diagnostics). Σε πραγματικό χρόνο qRT-PCR εκτελέστηκε χρησιμοποιώντας QuantiTect SYBR Green Reverse Transcription-PCR Kit (Qiagen, Tokyo, Japan) και ένα Chromo4 σύστημα πραγματικού χρόνου PCR Ανίχνευση (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA). Εκκινητές για CD271 και β-ακτίνης αγοράστηκαν από την Takara Bio Inc. (Tokyo, Japan). Οι αλληλουχίες των ολιγονουκλεοτιδικών εκκινητών που χρησιμοποιούνται σε αυτή τη μελέτη ήταν ως ακολούθως: CD271, 5′-TCAGTGGCATGGCTCCAGTC-3 ‘(προς τα εμπρός) και 5′-GCAGTATCCAGTCTCAGCCCAAG-3′ (αντίστροφο)? β-ακτίνη, 5’-TGGCACCCAGCACAATGAA-3 ‘(προς τα εμπρός) και 5′-CTAAGTCATAGTCCGCCTAGAAGCA-3’ (αντίστροφο). Κάθε μίγμα αντίδρασης αρχικά επωάζεται στους 50 ° C για 30 λεπτά για να επιτρέψει αντίστροφη μεταγραφή. PCR ενίσχυση κατόπιν ξεκίνησε με επώαση στους 95 ° C για 15 λεπτά για να ενεργοποιηθεί η πολυμεράση, που ακολουθείται από 40 κύκλους των 95 ° C για 5 s, 60 ° C για 20 s, και 72 ° C για 30 s. Τα επίπεδα έκφρασης των γονιδίων υπολογίστηκαν χρησιμοποιώντας μια πρότυπη καμπύλη κατασκευάστηκε χρησιμοποιώντας ολικό RNA από κύτταρα SK-N-MC. Τα επίπεδα έκφρασης κανονικοποιήθηκαν με τα επίπεδα έκφρασης β-ακτίνης ως ένας εσωτερικός έλεγχος, και εκφράζεται ως η αναλογία της έκφρασης του γονιδίου στόχου με εκείνη του β-ακτίνης. Όλα τα δείγματα αναλύθηκαν εις τριπλούν. Κανένα ανιχνεύσιμο PCR προϊόντα ενισχύθηκαν χωρίς προηγούμενη αντίστροφης μεταγραφής. Η ακρίβεια και η ακεραιότητα των προϊόντων της PCR επιβεβαιώθηκαν χρησιμοποιώντας Agilent 2100 Bioanalyzer (Agilent Technologies Inc., Palo Alto, CA).

In vitro συγκαλλιέργεια σύστημα

In vitro

συγκαλλιέργειες διεξήχθησαν χρησιμοποιώντας κυτταρική καλλιέργεια 6 φρεατίων ένθετο πλάκες σύντροφος και ένθετα κυτταρικής καλλιέργειας 3.0-μm (Becton Dickinson Labware, Franklin Lakes, NJ) όπως περιγράφηκε προηγουμένως [22]. SUIT-2 και Capan-2 κύτταρα (5 × 10

5) σπάρθηκαν ξεχωριστά στα άνω θαλάμους στις 24 ώρες μετά τη σπορά των δύο τύπων ΚΕΕ (5 × 10

5) στην κάτω θαλάμους.

καλλιέργειας με ένα υπερκείμενο που προέρχεται από κύτταρα καρκίνου του

SUIT-2 και Capan-2 κύτταρα καλλιεργήθηκαν υπό FBS χωρίς όρους για 48 ώρες. Στη συνέχεια, συλλέξαμε τα υπερκείμενα από τα καρκινικά κύτταρα και να τα ρυθμίστηκε σε 10% FBS. Τα υπερκείμενα του καρκίνου που προέρχεται από κύτταρα προστέθηκαν στη συνέχεια προηγουμένως σπάρθηκαν ΚΕΕ για μετέπειτα καλλιέργεια.

Ο λειτουργικός διαχωρισμός από Matrigel

δοκιμασία εισβολής

Έξι φρεατίων καλλιέργειας κυττάρων ένθετες πλάκες σύντροφος και 8,0-μm ένθετα κυτταρικής καλλιέργειας (Becton Dickinson Labware) επικαλύπτονται με Matrigel (150 μg /φρεάτιο? BD Biosciences, Bedford, μΑ). ΚΕΕ (5 × 10

5 κύτταρα /2 ml) σπάρθηκαν εντός των άνω θαλάμους. Προηγουμένως, τα καρκινικά κύτταρα (5 × 10

5) σπάρθηκαν εντός των κάτω θαλάμους. Στη συνέχεια, τα κύτταρα καλλιεργήθηκαν για 72 ώρες. Στη συνέχεια, αφαιρέσαμε τα κύτταρα και από τις δύο πλευρές των άνω θαλάμων χρησιμοποιώντας θρυψίνη. Μετά από δύο φυγοκεντρήσεις, εξάγαμε mRNA από τα κύτταρα. Κάθε πείραμα διεξήχθη σε φρεάτια εις τριπλούν, και ανεξάρτητα πειράματα επαναλήφθηκαν τρεις φορές.

In vivo πειράματα

κοστούμι-2 παγκρεατικού καρκίνου κύτταρα και των δύο τύπων ΚΕΕ χρησιμοποιήθηκαν για

σε vivo

πειράματα. Τα κύτταρα διαιρούνται σε τρεις ομάδες, που περιλαμβάνει SUIT-2 κύτταρα μόνο, κοστούμι-2 κυττάρων με κύτταρα PSC1, και το χρώμα-2 κυττάρων με κύτταρα PSC2. SUIT-2 κύτταρα (5 × 10

5) και ΚΕΕ (5 × 10

5) αιωρούνται σε 100 μL PBS είχαν cotransplanted στον παγκρεατικό ουρά των 6 εβδομάδων θηλυκά ποντίκια SCID (FOX CHASE SCID® , CB-17 /LCR-scid /scidJcl? Clea Japan Inc., Tokyo, Japan). Έξι ποντικοί χρησιμοποιήθηκαν σε κάθε ομάδα. Οι όγκοι αποκόπηκαν τις ημέρες 8, 15, και 22 μετά την εμφύτευση. Οι ιστοί σταθεροποιήθηκαν σε 10% ουδέτερη ρυθμισμένου φορμαλίνη και εγκλείστηκαν σε παραφίνη. Τέσσερις μm τομές ιστών χρωματίστηκαν με αντι-α-SMA μονοκλωνικού αντισώματος ποντικού (Dako) και ένα μονοκλωνικό αντι-CD271 αντίσωμα (Millipore, Billerica, ΜΑ).

Στατιστική ανάλυση

Τιμές εκφράζονται ως μέσοι όροι ± SD. Συγκρίσεις μεταξύ δύο ομάδων έγιναν με τη χρήση του Student

t-test

. Η στατιστική σημαντικότητα ορίσθηκε ως τιμές των ρ & lt? 0.05. Μια χ

2 τεστ που χρησιμοποιούνται για την ανάλυση των συσχετισμών ανάμεσα στην έκφραση CD271 και των κλινικοπαθολογική χαρακτηριστικά που παρατηρούνται σε αναλύσεις ανοσοϊστοχημική. αναλύσεις επιβίωσης έγιναν χρησιμοποιώντας τη μέθοδο Kaplan-Meier, και οι καμπύλες συγκρίθηκαν χρησιμοποιώντας τη δοκιμασία log-rank. Για την αξιολόγηση ανεξάρτητοι προγνωστικοί παράγοντες που σχετίζονται με την επιβίωση, χρησιμοποιήθηκε μια πολυπαραγοντική ανάλυση παλινδρόμησης αναλογικού κινδύνου του Cox-με την έκφραση CD271, κατηγορία pt, λεμφικό μετάσταση στους λεμφαδένες, το στάδιο UICC, perilymphatic εισβολή, περιαγγειακή εισβολή, και παθολογικές περιθώριο ως συμπαράγοντες. Όλες οι στατιστικές αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν με τη χρήση JMP 8,0 λογισμικό (SAS Institute, Cary, NC).

Αποτελέσματα

στρωματικά κύτταρα εκφράζουν CD271 σε αδενοκαρκίνωμα παγκρεατικού πόρου (PDAC)

Για την αξιολόγηση έκφραση CD271 σε παγκρεατικά ιστούς, εκτελέσαμε ανοσοϊστοχημεία για CD271. Συνεπής με μια προηγούμενη αναφορά [23], παρατηρήσαμε ισχυρή χρώση των νεύρων ως θετικός έλεγχος. Τα επιθηλιακά κύτταρα των φυσιολογικών παγκρεατικών αγωγών δεν έδειξαν έκφραση του CD271, και τα κύτταρα PDAC ήταν μη χρωματισμένα. Σε κανονική παγκρέατος (ΝΡ), στρωματικά κύτταρα γύρω από τον παγκρεατικό πόρο σπανίως χρωματίστηκαν (Σχήμα 1Α-α). Ωστόσο, παρατηρήθηκε ότι τα στρωματικά κύτταρα χρωματίστηκαν έντονα γύρω παγκρεατικής ενδοεπιθηλιακής νεοπλασίας (PanIN) (Σχήμα 1 Α-Β) και ενδοπορικού θηλώδη βλεννώδες νεόπλασμα (IPMN) (Σχήμα 1Α-C). Σε PDAC όγκους, στρωματικά κύτταρα γύρω από παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα εν μέρει χρωματισμένο. Ωστόσο, CD271

+ στρωματικά κύτταρα δεν ήσαν γειτονικά καρκινικά κύτταρα σε PDAC, και ήταν έντονα χρωματισμένο στην άκρη και όχι στο κέντρο των όγκων (Σχήμα 1Α-d). CD271 υψηλής χρώση σε στρωματικά κύτταρα ήταν παρούσα στο 6,5% (2/31) του Ν.Π., 30,0% (3/10) των PanIN, 27,6% (29/105) των PDAC και 84,6% (33/39) των IPMN. Τα υψηλά ποσοστά χρώση CD271 ήταν σημαντικά υψηλότερα σε στρωματικά κύτταρα του IPMN (ρ & lt? 0,0001). Και PDAC (p = 0,0069) από εκείνες σε στρωματικά κύτταρα του ΝΡ (Πίνακας 1)

(Α) Ανοσοϊστοχημική χρώση για CD271 σε παγκρεατικά ιστούς. (Α-Α) Σε κανονική παγκρέατος (ΝΡ), στρωματικά κύτταρα σπάνια χρωματίζονται θετικά για CD271. (Α-Β, C) Στρωματικά κύτταρα είναι έντονα χρωματισμένο γύρω παγκρεατικής ενδοεπιθηλιακής νεοπλασίας (PanIN) (β) και ενδοπορικού θηλώδη βλεννώδες νεόπλασμα (IPMN) (γ). (Α-δ) Σε παγκρεατικού πόρου αδενοκαρκινώματα (PDAC), στρωματικά κύτταρα εν μέρει χρωματισμένο, και CD271

+ στρωματικά κύτταρα δεν είναι παρακείμενα σε παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα. Μαύρο αιχμές βελών και τα βέλη δείχνουν CD271

+ κύτταρα και νεύρα ως θετικό έλεγχο στις διαδοχικές τομές. (Α-Ε) α-λείου μυός ακτίνη (SMA) εκφράζεται πλέον στρωματικά κύτταρα γύρω από τα καρκινικά κύτταρα και νεοπλαστικά σωληναρίων. Λευκή αιχμές βελών δείχνουν α-SMA κυττάρων στα σειριακά τμήματα. Αρχική μεγέθυνση: 200 ×, ένθετα: 600 ×. (Β) ανάλυση επιβίωσης Kaplan-Meier για CD271 υψηλή έκφραση στο στρώμα του PDAC. Στρωματικά CD271 υψηλή έκφραση σχετίζεται με καλή πρόγνωση (p = 0.0040).

Η

έκφρασης στρωματικών CD271 ανεξάρτητα συσχετίστηκε με καλή πρόγνωση

Εμείς αξιολογούνται οι συσχετισμοί μεταξύ της έκφρασης στρωματικών CD271 και οι κλινικοπαθολογικοί παράγοντες της PDAC. Αν και οι διαφορές δεν ήταν στατιστικά σημαντική, ρΤ1 /pT2, δεν λεμφαδένα μετάσταση, UICC στάδιο Ι, δεν perilymphatic εισβολή, δεν περιαγγειακή εισβολή, και παθολογικές περιθώριο /αρνητική παρατηρήθηκαν πιο συχνά στην στρωματικά ομάδα χρώση CD271high σε σχέση με την στρωματική CD271 χαμηλής ομάδα χρώσης (Πίνακας 2). Είναι ενδιαφέρον ότι, η έκφραση στρωματικά CD271 συσχετίστηκε με καλή πρόγνωση σε καρκίνο του παγκρέατος (p = 0.0040) (Σχήμα 1Β). Οι μέσοι χρόνοι επιβίωσης για CD271 υψηλή χρώση και CD271 ασθενείς χαμηλού χρώση ήταν 62 και 18,5 μήνες αντίστοιχα. Στη συνέχεια, πραγματοποιήσαμε μια πολυπαραγοντική ανάλυση επιβίωσης με βάση το μοντέλο αναλογικών κινδύνων Cox για όλες τις παραμέτρους διαπιστώθηκε ότι ήταν σημαντική από μονοδιάστατες αναλύσεις, συμπεριλαμβανομένης της έκφρασης στρωματικών CD271, κατηγορία pt, λεμφικό μετάσταση στους λεμφαδένες, το στάδιο UICC, perilymphatic εισβολή, περιαγγειακή εισβολή, και παθολογικές περιθώριο θετικότητα (Πίνακας S2). έκφραση στρωματικά CD271 βρέθηκε να είναι ένας ανεξάρτητος προγνωστικός δείκτης σε ασθενείς με καρκίνο του παγκρέατος, και ο σχετικός κίνδυνος της έκφρασης στρωματικών CD271 ήταν 0,495 (Πίνακας 3).

Η

CD271 στρωματικά κύτταρα είναι ένας υποπληθυσμός ενεργοποιείται ΚΕΕ

για να χαρακτηρίζουν το CD271

+ στρωματικά κύτταρα, πραγματοποιήσαμε ανοσοϊστοχημεία για την α-SMA, ενός δείκτη για ενεργοποιημένα ΙΕΑ, σε διαδοχικές τομές PDAC. Βρήκαμε ότι α-SMA εκφράστηκε στα περισσότερα στρωματικά κύτταρα γύρω καρκινικά κύτταρα και νεοπλαστικά σωληναρίων (Σχήμα 1Α-e). CD271

+ στρωματικά κύτταρα περιορίζονται σε περιοχές με ισχυρή έκφραση α-SMA. Τα ευρήματα αυτά δείχνουν ότι CD271

+ στρωματικά κύτταρα είναι ένας υποπληθυσμός των ενεργοποιημένων ΚΕΕ.

έκφραση CD271 σε ανθρώπινο ΚΕΕ

Εμείς απομονωθεί πέντε πρωτογενείς καλλιέργειες των ΚΕΕ από φρέσκο ​​ανθρώπινο παγκρεατικό ιστούς, και τους ταυτότητα επιβεβαιώθηκε με χρώση ανοσοφθορισμού. ΚΕΕ ήταν αστεροειδής που μοιάζουν ή ατρακτοειδής και εξέφρασαν α-SMA και βιμεντίνης (Σχήμα 2Α). Σε αναλύσεις αυτές ανοσοφθορισμού, δεν είχαμε εντοπίσει CD271 έκφραση στο ΚΕΕ (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Στη συνέχεια, αξιολογήθηκε έκφραση CD271 σε 12 πρωτογενείς καλλιέργειες ανθρώπινων ΚΕΕ χρησιμοποιώντας κυτταρομετρία ροής, και βρήκε CD271-θετικούς ρυθμούς 0,0 έως 2,1% σε ΚΕΕ (Σχήμα 2Β).

(Α) Αντιπροσωπευτική μικροφωτογραφία χρώση ανοσοφθορισμού για α-ακτίνη των λείων μυών (SMA) (πράσινο) και βιμεντίνης (κόκκινο) στο ΚΕΕ. Οι πυρήνες βάφτηκαν αντίθετα με 4 ‘, 6-διαμιδινο-2-φαινυλινδόλη (μπλε). ΙΕΑ δείχνουν ένα αστεροειδή μοιάζει ή ατρακτοειδή μορφολογία και εκφράζουν α-SMA. Αρχική μεγέθυνση: 200 ×. (Β) Οι θετικούς ρυθμούς έκφρασης CD271 στο ΚΕΕ είναι 0,0 – 2,1% από κυτταρομετρίας ροής αναλύσεις. Εκπρόσωπος εικόνες κυτταρομετρίας ροής του CD271 σε ενεργοποιημένα ΚΕΕ παρουσιάζονται επίσης (δεξιά).

Η

CD271

+ Τα ΚΕΕ αυξηθεί μέσω αλληλεπιδράσεων με τον καρκίνο στρώμα

Εμείς ερεύνησε τις επιπτώσεις του ΚΕΕ στον φαινότυπο των καρκινικών κυττάρων χρησιμοποιώντας ένα σύστημα συγκαλλιέργειας. Χρησιμοποιήσαμε δύο παγκρεατικού καρκίνου κυτταρικές γραμμές, κοστούμι-2 και Capan-2, και δύο πρωτογενείς καλλιέργειες ανθρώπινων ΚΕΕ που απομονώνονται από PDAC και καλοήθεις κύστεις του παγκρέατος. Μετά μονοκαλλιέργεια ή συγκαλλιέργεια με παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα για 72 ώρες, αξιολογήσαμε την έκφραση CD271 στο ΚΕΕ χρησιμοποιώντας κυτταρομετρία ροής και σε πραγματικό χρόνο qRT-PCR. Με ροής αναλύσεις κυτταρομετρίας, παρατηρήσαμε το ποσοστό του CD271

+ κυττάρων ήταν υψηλότερη σε συγκαλλιέργεια ό, τι σε μονοκαλλιέργεια (0,7% έναντι 0,1%) (Σχήμα 3Α). Με αναλύσεις πραγματικού χρόνου qRT-PCR, το επίπεδο της έκφρασης CD271 mRNA σε δύο καλλιέργειες ΚΕΕ ήταν σημαντικά υψηλότερη σε συγκαλλιέργεια με παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα σε σχέση με την μονοκαλλιέργεια (ρ & lt? 0.001) (Σχήμα 3Β). Στη συνέχεια, θα συλλέγονται υπερκείμενο από καρκίνο SUIT-2 παγκρεατικά κύτταρα, και πρόσθεσε ότι σε δύο πρωτογενείς καλλιέργειες των ΚΕΕ. Συγκρίναμε τα επίπεδα έκφρασης CD271 mRNA μεταξύ μονοκαλλιέργειες, καλλιέργειες με το υπερκείμενο κυττάρων καρκίνου που προέρχεται, και συγκαλλιέργειες με παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα για 72 ώρες. Το επίπεδο της έκφρασης CD271 mRNA ήταν υψηλότερη σε συνκαλλιέργειες με παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα. Επιπλέον, το επίπεδο της έκφρασης CD271 mRNA ήταν υψηλότερη σε καλλιέργειες με το υπερκείμενο κυττάρων καρκίνου που προέρχεται από ό, τι σε μονοκαλλιέργειες (p = 0.0053) (Σχήμα 3C). Με αναλύσεις ανοσοφθορισμού, ανιχνεύσαμε έκφραση CD271 σε ΚΕΕ αυξήθηκε ελαφρά στην καλλιέργεια με το υπερκείμενο από κύτταρα που προέρχονται καρκίνο σε αντίθεση με μονοκαλλιέργειες (Σχήμα 3D).

(Α) Σε κυτταρομετρία ροής αναλύει, το ποσοστό των CD271

+ κυττάρων είναι υψηλότερο σε σχέση με συγκαλλιέργεια μονοκαλλιέργεια (0,7-0,8% έναντι 0,1%). (Β) Τα επίπεδα έκφρασης CD271 mRNA σε δύο καλλιέργειες ΚΕΕ είναι σημαντικά υψηλότερα σε συνκαλλιέργειες με παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα από ό, τι σε μονοκαλλιέργειες (ρ & lt? 0.001). (Γ) Το επίπεδο της έκφρασης CD271 mRNA είναι υψηλότερη σε καλλιέργειες με ένα υπερκείμενο που προέρχεται από κύτταρα καρκίνου του ό, τι σε μονοκαλλιέργειες (p = 0,0053). (Δ) Εκπρόσωπος μικροφωτογραφία χρώση ανοσοφθορισμού για CD271 (πράσινο) και α-ακτίνη των λείων μυών (SMA) (κόκκινο) στο ΚΕΕ. Οι πυρήνες βάφτηκαν αντίθετα με 4 ‘, 6-διαμιδινο-2-φαινυλινδόλη (μπλε). CD271 σε ΚΕΕ ήταν ελαφρώς εκφράζονται σε καλλιέργειες με υπερκείμενο κυττάρων καρκίνου που προέρχεται, αν και ήταν δύσκολο να ανιχνευθεί έκφραση CD271 σε μονοκαλλιέργειες. Αρχική μεγέθυνση: 200 ×. * P & lt? 0,01? ** Ρ & lt?. 0.001

Η

έκφραση CD271 μειώνεται μετά την παροδική αύξηση στην έκφραση όταν συν-καλλιεργήθηκαν με παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα

Χρησιμοποιήσαμε ένα σύστημα που αποτελείται από συγκαλλιέργεια δύο παγκρεατικού καρκίνου κυτταρικές γραμμές, κοστούμι -2 και Capan-2, και δύο πρωτογενείς καλλιέργειες ανθρώπινων ΚΕΕ για την αξιολόγηση των χρονο-εξαρτώμενες μεταβολές στην έκφραση CD271 mRNA. Μετά μονοκαλλιέργεια ή συγκαλλιέργεια των ΚΕΕ με παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα για 1 έως 5 ημέρες, αξιολογήσαμε το επίπεδο της έκφρασης CD271 mRNA σε ΚΕΕ. Σε μονοκαλλιέργειες, η έκφραση του CD271 mRNA σε ΚΕΕ δεν άλλαξε. Ωστόσο, σε συνκαλλιέργειες με παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα, το επίπεδο της έκφρασης CD271 mRNA αυξήθηκε την ημέρα 3 (p = 0,0249) και κορυφώθηκε την ημέρα 4 (ρ & lt? 0,0001). Είναι ενδιαφέρον ότι, τα επίπεδα έκφρασης CD271 mRNA ελάττωσε την ημέρα μετά κορυφή έκφρασης (ρ & lt? 0.0001) (Σχήμα 4Α). Στη συνέχεια, συλλέγονται υπερκείμενο από Capan-2 παγκρεατικού καρκίνου κύτταρα, πρόσθεσε ότι σε δύο πρωτογενείς καλλιέργειες των ΚΕΕ και αξιολόγησε τις χρονο-εξαρτώμενες μεταβολές στην έκφραση CD271 mRNA. Στις καλλιέργειες με υπερκείμενο, το επίπεδο της έκφρασης CD271 mRNA αυξήθηκε την ημέρα 2 (ρ & lt? 0,0001) και στη συνέχεια μειώθηκε κατά την ημέρα 4 (ρ & lt? 0.0001) (Σχήμα 4Β). Παρόμοια με συνκαλλιέργεια με παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα, η έκφραση CD271 μειώθηκαν μετά την παροδική αύξηση στην έκφραση όταν συν-καλλιεργήθηκαν με υπερκείμενο.

(Α) αναλύει σε πραγματικό χρόνο qRT-PCR έδειξε ότι τα επίπεδα έκφρασης CD271 mRNA σε ΚΕΕ σε συγκαλλιέργεια με παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα αρχίζουν να αυξάνουν την ημέρα 3 (p = 0,0249), είναι υψηλότερη κατά την ημέρα 4 (ρ & lt? 0,0001), και στη συνέχεια μειώνονται την επόμενη μέρα μετά την έκφραση κορυφή (ρ & lt? 0,0001). (Β) σε καλλιέργειες με προσθήκη των καρκινικών κυττάρων που προέρχονται από το υπερκείμενο, το επίπεδο της έκφρασης CD271 mRNA άρχισε να αυξάνεται κατά την ημέρα 2 (ρ & lt? 0,0001) και στη συνέχεια μειώθηκε κατά την ημέρα 4 (ρ & lt? 0,0001). (Γ) Αξιολόγηση των διαφορών στην έκφραση CD271 ανάλογα με τη λειτουργία των ΚΕΕ με πραγματικού χρόνου qRT-PCR. Το επίπεδο έκφρασης mRNA CD271 στην κορυφαία πλευρά προερχόμενα ΚΕΕ, η οποία δεν κινούνται προς τα καρκινικά κύτταρα μέσω Matrigel και παρέμεινε στο ανώτερο θαλάμους, είναι χαμηλότερη από ότι στην κάτω πλευρά προερχόμενα ΚΕΕ, η οποία είχε κινηθεί προς καρκινικά κύτταρα του παγκρέατος μέσω Matrigel (ρ & lt ? 0,01). * P & lt? 0,05? ** P & lt? 0,01? *** P & lt? 0.001? NS, δεν είναι σημαντική.

Η

έκφραση CD271 μειώνεται στο ΚΕΕ μεταναστεύουν μέσω Matrigel προς καρκινικά κύτταρα του παγκρέατος

Στη συνέχεια, θα αξιολογηθεί η έκφραση CD271 στο ΚΕΕ μετά λειτουργικού διαχωρισμού χρησιμοποιώντας δοκιμασία εισβολής Matrigel. Σε αυτό το σύστημα καλλιέργειας που περιλαμβάνει άνω θαλάμους επικαλυμμένα με Matrigel, αξιολογήσαμε SUIT-2 καρκινικά κύτταρα του παγκρέατος και δύο πρωτογενείς καλλιέργειες ανθρώπινων ΚΕΕ. ΚΕΕ στους άνω θαλάμους επωάστηκαν για 72 ώρες σε καλλιέργεια με παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα στα κατώτερα τμήματα, είτε ως μάρτυρες χωρίς παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα στους κατώτερους θαλάμους. ΚΕΕ συλλέχθηκαν από την άνω και κάτω πλευρές των άνω θαλάμων χωριστά. Οι άνω πλευρά προερχόμενα ΚΕΕ ήταν κύτταρα που δεν μεταναστεύουν προς τα καρκινικά κύτταρα μέσω του Matrigel και παρέμεινε στους άνω θαλάμους. Η κάτω πλευρά προερχόμενα ΚΕΕ ήταν κυττάρων που μετανάστευσαν προς τα καρκινικά κύτταρα του παγκρέατος μέσω Matrigel και συλλέγεται στην κάτω πλευρά του άνω θαλάμων. Στη συνέχεια αναλύονται τα επίπεδα έκφρασης CD271 mRNA στα άνω ή κάτω πλευρά προερχόμενο ΚΕΕ για την αξιολόγηση των λειτουργικών διαφορών μεταξύ CD271

+ και CD271

– ΚΕΕ. Το επίπεδο της έκφρασης CD271 mRNA ήταν υψηλότερη στην άνω πλευρά προερχόμενα ΚΕΕ μετά από καλλιέργεια με παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα (ρ & lt? 0.001). Είναι ενδιαφέρον ότι, το επίπεδο της έκφρασης mRNA CD271 εις την κάτω πλευρά που προέρχεται ΚΕΕ μεταναστεύουν προς τα καρκινικά κύτταρα του παγκρέατος ήταν χαμηλότερη από ότι στα επάνω πλευρά προερχόμενα ΚΕΕ που δεν κινούνται προς τα καρκινικά κύτταρα (ρ & lt? 0,01). Σε ελέγχους, δεν υπήρχαν διαφορές στα επίπεδα έκφρασης CD271 mRNA μεταξύ άνω και κάτω πλευρά προερχόμενο ΚΕΕ, και αυτά τα επίπεδα ήταν χαμηλά σε σύγκριση με τα επίπεδα έκφρασης CD271 mRNA σε καλλιέργειες με παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα (Σχήμα 4C).

CD271

+ ΚΕΕ υπάρχουν στον όγκο των περιθωρίων /περιφέρεια και απουσιάζουν στον πυρήνα του όγκου

Για να αξιολογεί τον εντοπισμό του CD271

+ ΚΕΕ

in vivo

, θα μεταμοσχευθούν SUIT -2 παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα εντός του παγκρεατικού ουρά των ποντικών SCID, ή τους cotransplanted με δύο πρωτογενείς καλλιέργειες ανθρώπινων ΚΕΕ. Εμείς ευθανασία των ποντικών τις ημέρες 8, 15, ή 22, και αξιολόγησε την εντόπιση του CD271

+ ΚΕΕ στους όγκους ξενομοσχεύματος. έκφραση στρωματικά CD271 ανιχνεύθηκε σε όλες τις ημέρες μετά τη μεταμόσχευση, ανεξάρτητα από μεταμόσχευση ή cotransplantation. Στρωματικά CD271 υψηλά ποσοστά χρώση ήταν 50% (3/6), 60% (3/5), και το 67% (4/6) τις ημέρες 8, 15, και 22, αντίστοιχα. Σε κάθε περίπτωση, ανιχνεύσαμε CD271 έκφρασης στο δέσμες νεύρων ως θετικός έλεγχος, και βρήκαν ότι τα καρκινικά κύτταρα του παγκρέατος ποτέ εκφράζονται CD271. Εμείς επιβεβαίωσε την παρουσία ενεργοποιημένων ΙΕΑ από έναν άξονα σχήματος μορφολογία και με χρώση α-SMA. Ενεργοποιημένος ΚΕΕ υπήρχαν στους όγκους ξενομοσχεύματος και φυσιολογική παγκρεατική περιοχές γύρω από τους όγκους (Σχήμα 5Α). Ωστόσο, CD271

+ ΚΕΕ υπήρχε μόνο στην κανονική του παγκρέατος περιοχές γύρω από τους όγκους ξενομοσχεύματος, και απουσίαζαν στον πυρήνα του όγκου (Σχήμα 5Β).

(Α) α-SMA

+ στρωματικά κύτταρα , όπως ενεργοποιημένα ΚΕΕ, υπάρχουν στον όγκο ξενομοσχεύματος και φυσιολογικό πάγκρεας (NP) περιοχές (αριστερή πλευρά) γύρω από τον όγκο (δεξιά πλευρά). (Β) Λίγες CD271

+ στρωματικά κύτταρα ήταν παρόντα στην περιοχή NP (αριστερή πλευρά) γύρω από τον όγκο ξενομοσχεύματος, και απουσίαζαν στον πυρήνα του όγκου (δεξιά πλευρά). Αρχική μεγέθυνση:. 200 ×

Η

Συζήτηση

Προηγουμένως, Περικοπή et al, [18] ανέφερε ότι CD271 εκφράστηκε στο ΚΕΕ.. Haas et al., [19] ανέφεραν επίσης ότι CD271 ήταν ελαφρώς εκφράζεται σε ΚΕΕ και ότι το επίπεδο της έκφρασης CD271 mRNA μειώθηκε γρήγορα σε πρωτογενείς ΚΕΕ αρουραίο κατά τη διάρκεια της καλλιέργειας. Βρήκαμε ότι CD271

+ ΚΕΕ υπήρχε στην χειρουργική του παγκρέατος ιστούς χρησιμοποιώντας ανοσοϊστοχημεία. Ωστόσο, qRT-PCR και κυτταρομετρία ροής αναλύσεις αποκάλυψαν ότι η έκφραση CD271 σε ΚΕΕ που απομονώνεται από παγκρεατικά ιστούς ήταν πολύ αδύναμη. Τα ευρήματα αυτά υποδηλώνουν ότι η έκφραση CD271 σε πρωτογενή ανθρώπινα ΚΕΕ, επίσης, μειώθηκε γρήγορα κατά τη διάρκεια της καλλιέργειας.

Βρήκαμε ότι η έκφραση CD271 mRNA ήταν παροδικά αυξημένη στα ΚΕΕ καλλιεργήθηκαν με παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα, γεγονός που υποδηλώνει ότι καρκινικά κύτταρα του παγκρέατος ενίσχυση της έκφρασης CD271 στο ΚΕΕ. Ωστόσο, οι παρούσες ανοσοϊστοχημικές αναλύσεις αποκάλυψαν ότι CD271

+ ΚΕΕ υπήρξε, επίσης, γύρω από PanIN και IPMN, προκαρκινικές αλλοιώσεις. Επιπλέον, Περικοπή et al., [18] ανέφερε ότι CD271

+ ΚΕΕ βρέθηκαν σε ιστούς από ασθενείς με χρόνια παγκρεατίτιδα. Οι παρατηρήσεις αυτές υποδηλώνουν την εμφάνιση του CD271

+ ΚΕΕ δεν είναι ειδικά για κακοήθεις νόσους, και σχετίζεται με την desmoplasia.