Αφηρημένο

Σκοπός

καρκίνο του στομάχου παραμένει μία από τις κύριες αιτίες θανάτου από καρκίνο σε όλο τον κόσμο. Οι ασθενείς συνήθως παρόντες αργά με τις τοπικές εισβολή ή μετάσταση, για την οποία δεν υπάρχουν διαθέσιμες αποτελεσματικές θεραπείες. Μετά προηγούμενες μελέτες που εντοπίστηκαν το μόριο προσκόλλησης της καντερίνης-17 (CDH17) ως πιθανό δείκτη για γαστρικό καρκίνωμα, πραγματοποιήσαμε μελέτες απόδειξη της αρχής για την ανάπτυξη ορθολογικής θεραπευτικές προσεγγίσεις που στοχεύουν CDH17 για τη θεραπεία αυτής της ασθένειας.

Μέθοδοι

η ανοσοϊστοχημεία χρησιμοποιήθηκε για να μελετηθεί η έκφραση του CDH17 σε 156 γαστρικά καρκινώματα, και η σχέση μεταξύ της επιβίωσης και της έκφρασης CDH17 μελετήθηκε με πολυμεταβλητή ανάλυση. Η επίδραση της παρεμβολής RNA με μεσολάβηση knockdown του CDH17 επί του πολλαπλασιασμού των κυτταρικών γραμμών γαστρικού καρκινώματος εξετάσθηκε in vitro και in vivo, όπως επίσης και οι επιπτώσεις στην κατάντη σηματοδότησης από ανοσοκηλίδωση.

Αποτελέσματα

CDH17 ήταν σταθερά επάνω ρυθμισμένη σε ανθρώπινο γαστρικό καρκίνους, και τη συνολική επιβίωση σε ασθενείς με CDH17 προς τα πάνω ρύθμιση ήταν φτωχότερες σε σχέση με εκείνους χωρίς έκφραση αυτού του γονιδίου (5 yrs συνολικό ποσοστό επιβίωσης 29,0% έναντι 45,0%, Ρ & lt? 0,01). Λειτουργικοί προσδιορισμοί έδειξαν ότι CDH17 knockdown ανέστειλε τον κυτταρικό πολλαπλασιασμό, προσκόλληση, μετανάστευση, εισβολή, κλωνογονικότητας και επάγουν G0 /G1 σύλληψης. Στα ποντίκια, shRNA μεσολάβηση CDH17 knockdown αναστέλλει σημαντικά την ανάπτυξη του όγκου? ενδοογκική ένεση CDH17 Τα siRNAs οδηγεί σε σημαντικές επιδράσεις κατά του όγκου επί μεταμοσχευμένων μοντέλα όγκου. Οι μηχανισμοί των όγκων που διέπουν την αναστολή CDH17 συνεπάγεται απενεργοποίηση των σηματοδότηση Wnt /β-κατενίνης.

Συμπέρασμα

Τα αποτελέσματά μας εντοπισμό CDH17 ως βιοδείκτη του γαστρικού καρκινώματος και ελκυστικό θεραπευτικό στόχο για αυτή την επιθετική κακοήθεια.

Παράθεση: Qiu Hb, Zhang Ly, Ren C, Zeng Zl, Wu Wj, Luo Hy, et al. (2013) Στόχευση CDH17 Καταστέλλει την εξέλιξη του όγκου σε γαστρικό καρκίνο με προς τα κάτω ρύθμιση Wnt /β-κατενίνης σηματοδότησης. PLoS ONE 8 (3): e56959. doi: 10.1371 /journal.pone.0056959

Επιμέλεια: Cara Gottardi, Northwestern University Feinberg School of Medicine, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 22 Οκτωβρίου του 2012? Αποδεκτές: 16 του Ιανουαρίου, 2013? Δημοσιεύθηκε: 15 Μαρτίου, 2013

Copyright: © 2013 Qiu et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε από το Εθνικό Ίδρυμα Φυσικών Επιστημών (30672408 έως RHX). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

γαστρικός καρκίνος είναι η τέταρτη πιο κοινή αιτία θανάτου από καρκίνο στον κόσμο. Αν και η συχνότητα εμφάνισης του καρκίνου του στομάχου έχει μειωθεί δραματικά σε ορισμένες ανεπτυγμένες χώρες κατά την τελευταία δεκαετία, συνολικά ένα εκατομμύριο νέες περιπτώσεις υπολογίζεται ότι διαγιγνώσκονται κάθε χρόνο [1]. Οι ασθενείς με αυτή τη νόσο έχουν συνήθως μια κακή προοπτική, αντιπροσωπεύοντας το 10% του συνόλου των θανάτων από καρκίνο [2]. Ακόμα και μετά από ριζική χειρουργική επέμβαση, περισσότερο από το ήμισυ των ασθενών επαναληφθεί. συμμετοχή των λεμφαδένων, το βάθος της εισβολής του όγκου και τη θέση του όγκου έχουν προσδιοριστεί ως οι πιο σημαντικές κλινικοπαθολογική προγνωστικούς παράγοντες [3], [4].

Τοπική εισβολή και μακρινή μετάσταση συμβαίνουν συνήθως σε προχωρημένο γαστρικό καρκίνωμα. Η διαδικασία της εισβολής και της μετάστασης είναι πολύπλοκη και απαιτεί την απορύθμιση μιας ποικιλίας κυτταρικών στοιχείων συμπεριλαμβανομένων των κρίσιμων μορίων προσκόλλησης. Καδερίνης ανήκει σε μία από τις οικογένειες μορίου προσκόλλησης και παίζει κρίσιμο ρόλο στην εδραίωση κυττάρου-κυττάρου αλληλεπίδραση [5]. Καντερίνης-17 (CDH17), η οποία καλείται επίσης το ήπαρ-εντέρου (LI) καντερίνη ή ανθρώπινο μεταφορέα πεπτιδίου-1 (ΗΡΤ-1), είναι μια δομικώς μοναδικό μέλος του συμπλέγματος καδερίνης υπεροικογένειας [6], [7]. Ενώ οι λεγόμενες κλασικές καντερίνες, όπως Ε-, Ν- και Ρ-cadherin, έχουν πέντε επαναλήψεις καντερίνης εντός της εξωκυττάριας περιοχής, CDH17 αποτελείται από επτά επαναλήψεις καντερίνης. Επιπλέον, CDH17 έχει μόνο 20 αμινοξέα στην κυτταροπλασματική περιοχή, ενώ το κλασικό καντερίνες έχουν εξαιρετικά συντηρημένη κυτταροπλασματική περιοχή που αποτελείται από 150-160 αμινοξέα. CDH17 εκφράζεται σε ποντίκια και ανθρώπους σχεδόν αποκλειστικά στα επιθηλιακά κύτταρα των δύο εμβρυϊκών και ενήλικων λεπτού και παχέος εντέρου, χωρίς ανιχνεύσιμη έκφραση στο στομάχι και το συκώτι [8].

Χρησιμοποιώντας ενοποιητική γονιδιωματική και πρωτεομική προσεγγίσεων, οι ερευνητές έχουν αρχίσει να πιστοποιηθούν νέα ογκογονίδια και κατασταλτικά όγκων σε καρκίνο του στομάχου. Προηγούμενες μελέτες της κλινικής κοόρτεις προσδιορίζονται CDH17 ως πιθανό δείκτη ασθένειας για γαστρικό καρκίνωμα [9], [10]. Παρά τις σημαντικές κλινικά ευρήματα, οι μοριακές λειτουργίες των CDH17 παραμένουν άγνωστες, και ογκογόνο ρόλο της στη γαστρικού καρκινώματος δεν έχει ακόμη επιβεβαιωθεί. Εδώ, έχουμε ως στόχο να τεμαχίσει τα ογκογόνο μηχανισμών σηματοδότησης της CDH17 στο πλαίσιο του γαστρικού καρκινώματος και αξιολογούνται τα αποτελέσματα της στόχευσης CDH17 ως πιθανή θεραπευτική προσέγγιση για τον καρκίνο του στομάχου.

Μέθοδοι

Ασθενείς

Ο πληθυσμός της μελέτης αποτελείτο από 156 συνεχόμενους ασθενείς (106 άνδρες και 50 γυναίκες) έχει προγραμματιστεί για τη χειρουργική επέμβαση, από την 1η Ιανουαρίου 2002 έως 31η Δεκεμβρίου 2006 Sun Yat-Sen University Cancer Center, Guangzhou, Κίνα. Όλοι οι ασθενείς που συμμετείχαν σε αυτή τη μελέτη είχαν ιστολογικά επιβεβαιωμένη διάγνωση της πρωτογενούς γαστρικού καρκινώματος που αναλύθηκε περαιτέρω παθολογικά μετά την επέμβαση. Χειρουργική αποτελούνταν από υφολική ή ολική γαστρεκτομή σε όλους τους ασθενείς? μια τυποποιημένη τεχνική χρησιμοποιήθηκε για τη χειρουργική εκτομή και λεμφαδενεκτομή, όπως περιγράφεται αλλού [3]. Οι ασθενείς που υποβλήθηκαν σε μη χειρουργική εκτομή, και εκείνοι με τον τύπο Siewert Ι Καρδία αδενοκαρκίνωμα αποκλείστηκαν από τη μελέτη. Δείγματος και των όγκων μεγέθη καταγράφηκαν από τους παθολόγους. Επελέγησαν αντιπροσωπευτικές περιοχές του όγκου και snap-κατεψυγμένα. pTNM ταξινόμηση ακολούθησε τα κριτήρια της 6η έκδοση του UICC [11] Η διάμεση ηλικία των ασθενών ήταν 57,2 έτη (εύρος: 27-78 έτη) ηλικία, το φύλο, το είδος της χειρουργικής επέμβασης, τη θέση του όγκου, το στάδιο TNM, χημειοθεραπεία, δείγμα μήκος, το μέγεθος του όγκου, και ιστολογική διαφοροποίηση, καταγράφηκαν για κάθε ασθενή σε μια βάση δεδομένων. Όλοι οι ασθενείς που υποβλήθηκαν σε οποιοδήποτε είδος της χημειοθεραπείας ήταν στο 5-FU, πλατίνα ή ταξόλη αγωγές που βασίζονται. Όλοι οι ασθενείς, μετά το εξιτήριο από το νοσοκομείο, άρχισε ένα πρόγραμμα παρακολούθησης σύμφωνα με το πρότυπο πρωτόκολλο [12]. Η παρακολούθηση έκλεισε τον Απρίλιο του 2010. Η μελέτη εγκρίθηκε από την επιτροπή δεοντολογίας στο Sun Yat-sen University Κέντρο Καρκίνου, όλοι οι συμμετέχοντες παρέχεται έγγραφη συγκατάθεση τους να συμμετάσχουν σε αυτή τη μελέτη.

Γραμμές κυττάρων και CDH17 αντισώματος

η γαστρική κυτταρικές σειρές καρκινώματος, AGS, ΜΚΝ-45, HGC-27, MGC-803 BGC-823 και SGC-7901 λήφθηκαν από την American Type Culture Collection (Manassas, VA), ιαπωνικά Cancer Research Πόρων Τράπεζα (Τόκιο, Ιαπωνία) και το Πεκίνο Ιατρικό Πανεπιστήμιο (Πεκίνο, Κίνα). Τα κύτταρα καλλιεργήθηκαν σε μέσο RPMI 1640 (Sigma), συμπληρωμένο με 10% ορό εμβρύου μόσχου (Invitrogen) και 1% πενικιλλίνη-στρεπτομυκίνη (Invitrogen). Ένα μονοκλωνικό αντίσωμα ποντικού προς CDH17 (ab54511) ήταν από Abcam (Cambridge, ΜΑ).

CDH17 μικρή φουρκέτα RNA (shRNA)

Ο pLKO.1 puro (7 kb) λεντοϊού κατασκεύασμα περιέχει ένα U6 προαγωγό και σήμα συσκευασίας του RNA του HIV-1 με pruomycin- και ampicillin- στοιχεία αντίστασης κλωνοποιημένο 3 ‘του υποκινητή της ανθρώπινης φωσφογλυκερικής κινάσης (hPGK). Ένα cpptCTE εισήχθη 5 ‘του υποκινητή hPGK. Ανθρώπινα κατασκευάσματα CDH17 shRNA παρήχθησαν με απολίνωση των ακόλουθων ανόπτηση ολιγομερή στις μοναδικές θέσεις Agel και EcoRI του pLKO.1 Puro: CDH17 shRNA προς τα εμπρός (5’-CCG GCC ACT TTC ΑΤΑ TCC GCT GGA ACT CGA Γ.Ο.Σ. CCA GCG GAT ATG ΑΑΑ ΟΤΟ Γ.Ο.Σ. ΤΤΤ G-3 ‘) και αντίστροφη (5′-ΑΑΤ TCA ΑΑΑ ACC ACT TTC ΑΤΑ TCC GCT GGA ACT CGA Γ.Ο.Σ. CCA GCG GAT ATG ΑΑΑ ΟΤΟ G-3’). Λεντοϊών παρασκευάσματα παρήχθησαν με συν-επιμόλυνση pLKO.1 puro κενό φορέα με CDH17 shRNA, και βοηθητικό ιό πλασμίδια συσκευασία pCMVΔR8.9 και pMG.G (σε αναλογία 10:10:01) σε κύτταρα 293Τ. Η επιμόλυνση πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας λιποφεκταμίνη και αντιδραστηρίου PLUS (Invitrogen). Λεντιϊοί συλλέχθηκαν στις 24, 36, 48 και 60 ώρες μετά την επιμόλυνση. Δύο έλεγχοι που έχει συσταθεί, στην οποία τα γαστρικά καρκινικά κύτταρα είτε δεν έλαβαν καμία θεραπεία, ή επιμολύνονται με ομελέτα φορέα μη στοχευμένες RNAi (Mock). Η μόλυνση πραγματοποιήθηκε με την παρουσία 8 μg /ml πολυβρενίου. Μετά τη μόλυνση, AGS και ΜΚΝ-45 κύτταρα επελέγησαν για σταθερή έκφραση των Τα siRNAs χρησιμοποιώντας 2 μg /mL πουρομυκίνη. Τα κύτταρα λύθηκαν για ανάλυση στυπώματος western 10 ημέρες μετά τη μόλυνση.

Ανοσοκηλίδωση και υποκυτταρικής κλασμάτωσης

προϊόντα λύσης πρωτεΐνης παρασκευάστηκαν από μονοστιβάδες κυτταρική σειρά χρησιμοποιώντας ρυθμιστικό διάλυμα λύσης (1% ΝΡ-40,50 mM Tris -ΗΟΙ, ρΗ 8.0, 100 mM φθοριούχο νάτριο, 30 mM πυροφωσφορικό νάτριο, 2 mM μολυβδικό νάτριο, 5 mM EDTA, 2 mM ορθοβαναδικό νάτριο) που περιέχει αναστολείς πρωτεάσης (10 mg /ml απροτινίνη, 10 mg /ml λευπεπτίνη, 1 mM φθοριούχο φαινυλμεθυλσουλφονύλιο ). Οι πρωτεϊνικές συγκεντρώσεις προσδιορίστηκαν χρησιμοποιώντας τη δοκιμασία πρωτεΐνης Bio-Rad (Bio-Rad Laboratories Hercules, CA, USA). Κυτταρολύματα υποβλήθηκαν σε ηλεκτροφόρηση σε πήκτωμα δωδεκυλικού νατρίου-πολυακρυλαμιδίου sulfacte (SDS-PAGE), και οι διαχωρισμένες πρωτεΐνες μεταφέρθηκαν ηλεκτροφορητικώς σε μεμβράνες Immobilon-Ρ (Millipore). Μετά τον αποκλεισμό από γάλα χωρίς λιπαρά, οι μεμβράνες επωάστηκαν ανεξάρτητα στην πρωτοβάθμια Ρ53 αντισώματα (Cell Signaling # 9282), MDM2 (Zymed # 33-7100), Ρ21 (Zymed # 33 με 7000), η κυκλίνη D1 (Santa Cruz SC-753 ), Rb (Cell Signaling # 9309), β-κατενίνης (Zymed, 13-8400), η ΟδΚ3β (Santa Cruz, SZ-7291) και ρ-ΟδΚ3β (Ser9) (Cell Signaling # 9336). Η μεμβράνη εκπλύθηκε αρκετές φορές σε PBS με 0,1% Tween20 και σαρώνεται σε υπέρυθρο δύο χρωμάτων σύστημα εικονοληψίας ανίχνευσης LI-COR Odyssey (LI-COR Bioscience) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή.

Υποκυτταρική κλασματοποιήσεις εκτελέσθηκαν χρησιμοποιώντας ειδικά ρυθμιστικά κυτταρική λύση και επανέλαβε τα βήματα φυγοκέντρησης (κιτ Πυρηνική απόσπασμα από το Active κίνητρο, Carlsbad, CA) σύμφωνα με τις προδιαγραφές του κατασκευαστή. κυτταρικά κλάσματα διαλύθηκαν σε ρυθμιστικό διάλυμα RIPA, και η συγκέντρωση πρωτεΐνης μετρήθηκε χρησιμοποιώντας δοκιμασία BCA πρωτεΐνης ποσοτικοποίηση. Εκχυλίσματα πρωτεΐνης (20 μg) έχουν περαιτέρω διαλύθηκαν σε 1 ρυθμιστικό × Laemmli, υποβλήθηκαν σε ηλεκτροφόρηση σε 10% SDS-PAGE και μεταφέρθηκαν σε μεμβράνες νιτροκυτταρίνης όπως περιγράφεται παραπάνω. Ανάλυση κηλίδας Western των πολυ-ΑϋΡ-ριβόζη πολυμεράση (PARP, από την Cell Signaling Technology Inc, Beverly, ΜΑ) και υπεροξειδική δισμουτάση 2 (SOD2, από ABFrontier, Σεούλ, Κορέα) διεξήχθησαν για να επιβεβαιωθεί κατάλληλο διαχωρισμό των πυρηνικών και κυτταροπλασματικών πρωτεϊνών.

Ποσοτική αντίστροφη μεταγραφή-ΡΟΚ (qPT-PCR)

Ολικό RNA εκχυλίσθηκε από κυτταρικές σειρές και κατεψυγμένα γαστρικό αδενοκαρκίνωμα ιστούς από το αντιδραστήριο ΤΚΙζοΙ (Invitrogen). Η αντίστροφη μεταγραφή του συνολικού RNA (2 Ag) έγινε χρησιμοποιώντας ένα πλεονέκτημα RT για κιτ PCR (Clontech), και το cDNA υπεβλήθη σε PCR για 28 κύκλους ενίσχυσης με τους ακόλουθους εκκινητές: CDH17 Fw, 5′-ACAATCGACCCACGTTTCTC και CHD17 Rv, 5 «-ATATTGTGCACCGGGATCAT. β-ακτίνη χρησιμοποιήθηκε ως έλεγχος.

ανοσοϊστοχημεία (IHC)

Ένα σύνολο 156 μονιμοποιηθεί με φορμαλίνη και επιλέχθηκαν δείγματα ιστών γαστρικό καρκίνο εγκλεισμένα σε παραφίνη για μελέτη IHC. χρώση IHC διεξήχθη σε τομές ιστών 5-μm επανυδατώθηκαν μέσω διαβαθμισμένης αλκοόλες. Η ενδογενής δραστικότητα υπεροξειδάσης αποκλείστηκε με υπεροξείδιο του υδρογόνου 0,3% για 15 λεπτά. Τα πλακίδια μικροκυμάτων σε επεξεργασία σε 10 mM κιτρικό ρυθμιστικό (ρΗ 6.0) για 10 λεπτά. Η μη ειδική δέσμευση παρεμποδίστηκε με 10% φυσιολογικό ορό κουνελιού για 20 λεπτά. Οι πλάκες ιστού επωάστηκαν με αντι-CDH17 (1:50 αραίωση) για 60 λεπτά στους 37 ° C σε ένα υγρό θάλαμο. Τα πλακίδια επωάστηκαν με ανοσοσφαιρίνη αντι-ποντικού βιοτινυλιωμένο κουνελιού σε μία συγκέντρωση από 1:100 για 30 λεπτά στους 37 ° C στη συνέχεια αντιδρά με ένα συζυγές στρεπταβιδίνης-υπεροξειδάσης για 30 λεπτά στους 37 ° C και τελικά επωάζονται με διαμινοβενζιδίνη 3-3 »ως ένα υπόστρωμα χρωμογόνου. Για να αποκλειστεί μια ψευδή θετικό σήμα, αρνητικοί έλεγχοι περιλήφθηκαν σε κάθε δοκιμασία με την αντικατάσταση του πρωτογενούς αντισώματος με κλείδωμα ορό. Δύο ανεξάρτητοι παρατηρητές τυφλωμένοι στο κλινικοπαθολογική πληροφορίες σκόραρε τις διαφάνειες. Ο ορισμός της χρώσης ήταν η ακόλουθη: αρνητική, με 0% έως λιγότερο από 5% των κυττάρων του όγκου που δείχνει ανοσοαντιδραστικότητα? αδύναμη, 5-40% των κυττάρων του όγκου που δείχνει ανοσοαντιδραστικότητα? θετική, περισσότερο από το 40% των κυττάρων του όγκου που δείχνει ανοσοαντιδραστικότητα. Οι θετικές περιπτώσεις μακρύτερα υπο-ταξινομούνται σε CDH17 + (ανοσολογική: 40-60%), CDH17 2+ (ανοσολογική: 60-80%) και CDH17 3+ (ανοσολογική: 80-100%).

Σε vitro δοκιμασίες για την αξιολόγηση του φαινοτύπου του όγκου

Οι πειραματικές διαδικασίες για την κυτταρική ανάπτυξη, τον σχηματισμό εστιών, μαλακό άγαρ, κυτταρική μετανάστευση, την επούλωση των πληγών και δοκιμασίες κυτταρικού κύκλου που περιγράφεται στην Υποστήριξη Methods S1.

πειράματα διάσωσης

Η διάσωση της CDH17 στην shCDH17 AGS και κυτταρικές σειρές ΜΚΝ-45 περιγράφονται στην Υποστήριξη Μέθοδοι S1.

In vivo μοντέλα ποντικών του γαστρικού καρκίνου

Αυτή η μελέτη διεξήχθη από αυστηρά σύμφωνα με τις συστάσεις στον οδηγό για τη Φροντίδα και Χρήση των ζώων Εργαστηρίου των Εθνικών Ινστιτούτων Υγείας. Το πρωτόκολλο εγκρίθηκε από την Επιτροπή Δεοντολογίας των πειραμάτων σε ζώα της Sun Yat-sen University Κέντρο Καρκίνου (Αριθμός Άδειας: 09-0238). Όλες οι χειρουργικές επεμβάσεις πραγματοποιήθηκε υπό αναισθησία πεντοβαρβιτάλης νατρίου, και όλες οι προσπάθειες έγιναν για να ελαχιστοποιήσουν την ταλαιπωρία. Μετά αναισθησία, Γυμνοί ποντικοί θυσιάστηκαν με αυχενική εξάρθρωση.

σχηματισμό όγκων σε γυμνούς ποντικούς.

In vivo ογκογένεση διερευνήθηκε με πειράματα ξενομοσχεύματος όγκου. Περίπου 2 × 10

6 κύτταρα AGS μολυνθεί με CDH17 shRNA, τον έλεγχο AGS κύτταρα μολυσμένα με κοροϊδεύει τον φορέα RNAi και τη γονική AGS κύτταρα εγχέονται υποδόρια στο δεξί και το αριστερό πίσω πόδια του 4 εβδομάδων γυμνά ποντίκια (30 ποντίκια, 10 ανά συνθήκη). σχηματισμός όγκου σε γυμνούς ποντικούς παρακολουθήθηκε για μια περίοδο 8 εβδομάδων. Ο όγκος του όγκου υπολογίστηκε από τον τύπο V = 0,5 χ L χ W

2. [13]

που φέρουν όγκο μοντέλο ποντικού.

Υποδόρια όγκοι επήχθησαν σε άτριχα ποντίκια χρησιμοποιώντας AGS κύτταρα όπως αναφέρθηκε ανωτέρω. Μία εβδομάδα μετά τον εμβολιασμό, τα ποντίκια υποβλήθηκαν σε αγωγή με αντι-CDH17 shRNA. Κάθε ποντικός έλαβε 100 μι ενδοογκική injectionscontaining 1 × 10

9 αντίγραφα του CDH17 ή ψευδο φακοϊό, δύο φορές την εβδομάδα για 2 εβδομάδες. Πέντε ποντικοί χρησιμοποιήθηκαν σε κάθε ομάδα. Η ανάπτυξη του όγκου παρακολουθούνταν καθημερινά.

Στατιστικά

Οι στατιστικές αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν με τη χρήση SPSS 13.0. Οι διαφορές μεταξύ των μεταβλητών αξιολογήθηκαν με χ2 ανάλυση ή t τεστ 2-tailed Student. Τα δεδομένα παρουσιάζονται ως μέσος όρος ± SD εκτός αν αναφέρεται διαφορετικά. Η συνολική επιβίωση (OS) και την ελεύθερη νόσου επιβίωση (DFS) καμπύλες υπολογίστηκαν με τη μέθοδο Kaplan-Meier, και οι διαφορές μεταξύ των δύο ομάδων συγκρίθηκαν με δοκιμασία log-rank. Μία τιμή ρ μικρότερη από 0,05 θεωρήθηκε στατιστικά σημαντική.

Αποτελέσματα

CDH17 εκφράζεται έντονα στα κύτταρα του γαστρικού καρκινώματος και σχετίζεται με κακή κλινική έκβαση

Πρώτα απ ‘όλα, εξετάσαμε το επίπεδο έκφρασης των CDH17 σε 156 δείγματα γαστρικού καρκινώματος από την IHC: 69 (44,3%) των 156 περιπτώσεις ήταν θετικές, ενώ οι υπόλοιπες 87 περιπτώσεις (55,7%) ήταν αρνητικά ή ασθενή για την έκφραση CDH17 (Εικ. 1). Το επίπεδο έκφρασης ήταν +, 2+ και 3+ σε 21 (13,5%), 20 (12.8%) και 28 (17.9%) περιπτώσεις, αντίστοιχα. Αυτά τα ευρήματα υποδεικνύουν ότι CDH17 μπορεί να παίζει ένα σημαντικό ρόλο στην ογκογένεση γαστρικό καρκίνο. Στη συνέχεια συνέκριναν τα κλινικά και παθολογικά χαρακτηριστικά των ασθενών με και χωρίς έκφραση CDH17. Δεν υπάρχουν στατιστικά σημαντικές διαφορές παρατηρήθηκαν μεταξύ των δύο ομάδων σε σχέση με το φύλο, την ηλικία, το μέγεθος του όγκου, η περιοχή του όγκου, το βάθος της εισβολής των όγκων, λεμφαδένες μετάσταση στους λεμφαδένες, μακρινή μετάσταση και το στάδιο ΤΝΜ (πίνακας 1).

χρώση IHC σε ιστό γαστρικό καρκίνωμα (αρχική μεγέθυνση χ 200). Α: Αρνητικό, Β: Αδύναμος, C: Θετικό (+), D: Θετική (2+), Ε:. Θετική (3+)

Η

Στη συνέχεια, ερευνήσαμε την πιθανή επίπτωση της κατάστασης έκφρασης CDH17 για τη μακροπρόθεσμη επιβίωση των ασθενών με μονοπαραγοντική και πολυπαραγοντική ανάλυση. Η μέση παρακολούθηση ήταν 24,3 μήνες, στο τέλος της παρακολούθησης, 68 ασθενείς ήταν ακόμα ζωντανοί, 87 ασθενείς είχαν πεθάνει από όγκου, και 1 ασθενής είχε πεθάνει από άλλη αιτία? το ποσοστό επιβίωσης 5 ετών σχετικά με τον καρκίνο σε όλη τη σειρά ήταν 37,8%. Η μονοπαραγοντική ανάλυση έδειξε μια συσχέτιση μεταξύ της συνολικής επιβίωσης και θέση του όγκου, η ιστολογική διαφοροποίηση, το στάδιο TNM και έκφραση CDH17 (Πίνακας S1). Σε αναλύσεις πολλαπλών μεταβλητών, η περιοχή του όγκου (p = 0.02) ιστολογική διαφοροποίηση (p = 0.02), το στάδιο TNM (p & lt? 0.001) και την έκφραση CDH17 (p & lt? 0,01) ήταν ανεξάρτητοι προγνωστικοί παράγοντες για την συνολική επιβίωση. Σύκο. 2Α δείχνει τη διαφορά στη συνολική επιβίωση μεταξύ των ασθενών με και χωρίς την έκφραση CDH17. Η διάμεση συνολική επιβίωση ήταν 15,9 μήνες σε ασθενείς με έκφραση CDH17 σύγκριση με 26,6 μήνες σε εκείνα CDH17 αρνητικά ή ασθενή έκφραση (Ρ & lt? 0,01), που αντιστοιχεί σε μείωση 16% της θνησιμότητας. Επιπλέον, ελεύθερη νόσου επιβίωση ανάλυση (DFS) διεξήχθη σε 131 ασθενείς που υποβλήθηκαν σε R0 εκτομή. Στο τέλος της παρακολούθησης, 69 (52,7%) ασθενείς ήταν ακόμα ζωντανός και 62 (47,3%) ασθενείς είχαν πεθάνει από υποτροπή του όγκου ή μακρινή μετάσταση, πολυπαραγοντική ανάλυση έδειξε τα παρόμοια αποτελέσματα, ιστολογική διαφοροποίηση, η περιοχή του όγκου, το βάθος της εισβολής των όγκων (στάδιο ρΤ), λεμφαδένες μετάσταση (στάδιο pN) ήταν ανεξάρτητοι προγνωστικοί παράγοντες για την επιβίωση ελεύθερη νόσου (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Έχουμε, επίσης, διαπίστωσε ότι οι ασθενείς χωρίς έκφραση CDH17 έχουν καλύτερη πρόγνωση από εκείνους που με την έκφραση CDH17 στον ιστό του όγκου (Σχήμα 2Β.) (P & lt? 0,01). Η συνολική επιβίωση ήταν μειωμένη σε ασθενείς με υψηλή έκφραση του CDH17 (IHC 2+, 3+) από ό, τι σε ασθενείς με CDH17 + έκφρασης (Εικ. 2C). Η διάμεση συνολική επιβίωση των ασθενών των οποίων οι όγκοι είχαν υψηλότερη έκφραση CDH17 ήταν 10,9 μήνες για τους CDH17 3+, 21,1 μήνες για CDH17 2+, και 25,7 μήνες σε αυτές που έχουν ανατεθεί να CDH17 + έκφραση (p & lt? 0,01).

Kaplan ανάλυση επιβίωσης -Meier με διαφορετική έκφραση CDH17. A. Η συνολική επιβίωση σε 156 ασθενείς με γαστρικό καρκίνωμα (p & lt? 0.01) B. ελεύθερη νόσου επιβίωση σε 131 ασθενείς με γαστρικό καρκίνωμα που υποβλήθηκαν σε R0 εκτομή (p & lt? 0,01). Γ συνολική επιβίωση σε 156 ασθενείς με γαστρικό καρκίνωμα, σύμφωνα με CDH17 κατάσταση (IHC 1+, 2+ και 3 +) (p & lt? 0,01).

Η

CDH17 εκφράζεται σε ανθρώπινο γαστρικό κυτταρικές σειρές

θα αξιολογηθεί κατά πόσο ανθρώπινες κυτταρικές σειρές γαστρικού καρκινώματος εκφράζουν CDH17 και ως εκ τούτου θα μπορούσαν να χρησιμοποιηθούν για την περαιτέρω αξιολόγηση του δυναμικού της λειτουργίας αυτής της πρωτεΐνης. Έχουμε επιλέξει μια ομάδα 6 γαστρικού κυτταρικές γραμμές καρκινώματος με διαφορετικές μεταστατικό δυναμικό: AGS, ΜΚΝ-45, HGC-27, MGC-803 BGC-823 και SGC-7901. επίπεδο CDH17 mRNA μετρήθηκε με ανάλυση qRT-PCR. Ισχυρή έκφραση παρατηρήθηκε σε πρωτογενή και μεταστατικό κυτταρική γραμμή γαστρικού καρκινώματος (AGS και ΜΚΝ-45) (Σχ. S1 Α). ανάλυση Western blots επιβεβαίωσε υψηλή έκφραση πρωτεΐνης CDH17 σε AGS (ιδρύθηκε από πρωτοπαθή όγκο) και ΜΚΝ-45 (μεταστατικό) (Σχ. S1B).

Λαμβανόμενα μαζί, αυτά τα αποτελέσματα υποδηλώνουν ότι CDH17 είναι σημαντική για την έναρξη και τη μετάσταση του καρκίνου του στομάχου? τουλάχιστον ένα υποσύνολο καλά διαπιστευτήρια γαστρικού κυτταρικές γραμμές καρκινώματος διατηρεί την έκφραση των CDH17 επιτρέποντας την περαιτέρω λειτουργικός χαρακτηρισμός.

CDH17 νοκ ντάουν επάγει αντινεοπλασματική δράση in vitro

Στη συνέχεια, γκρέμισε CDH17 στην κυτταρικές σειρές-AGS γαστρικού καρκινώματος και ΜΚΝ-45 χρησιμοποιώντας CDH17 ειδικό Τα siRNAs. Η knockdown απέδωσε & gt? Μείωση κατά 75% και στις δύο mRNA και τα επίπεδα της πρωτεΐνης (Σχήμα 3Α).. Στη συνέχεια αξιολόγησε τις ογκογόνο και μεταστατικό ιδιότητες (πολλαπλασιασμό, σχηματισμό αποικιών, την πρόσφυση, την εισβολή και του κυτταρικού κύκλου) των ανεπαρκή γαστρικού καρκίνου κύτταρα CDH17 (κύτταρα shCDH17) σε σύγκριση με τα mock κύτταρα ελέγχου φορέα-μολυσμένα.

Η έκφραση της CDH17 κατεστάλη από λεντοϊού μεσολάβηση CDH17 shRNA (shCDH17)? κύτταρα μολυσμένα με μη-στοχευμένες φορέα (Mock) και γονική AGS ή ΜΚΝ-45 κύτταρα χρησιμοποιήθηκαν ως μάρτυρες. (Α) qRT-PCR (αριστερά) και στύπωμα Western (Μέση) δείχνουν το mRNA και το επίπεδο της πρωτεΐνης των CDH17 σε διαφορετικές πειραματικές ομάδες μετά από επιλογή πουρομυκίνης. β-ακτίνης χρησιμοποιήθηκε ως aloading ελέγχου. (Α) (Δεξιά) Καμπύλες ανάπτυξης των κυττάρων shCDH17 συγκρίθηκαν με Mock, AGS κύτταρα με ΧΤΤ δοκιμασία. (Σημεία, σημαίνει τουλάχιστον τρία ανεξάρτητα πειράματα? Μπαρ, SD). (Β) Εκπρόσωπος αναστολή των εστιών σχηματισμού σε μονοστρωματική καλλιέργεια (αριστερά) και ο σχηματισμός αποικίας σε μαλακό άγαρ πολιτισμό (δεξιά) από CDH17 νοκ ντάουν. γράφημα στηλών παρουσιάζει ποσοτικές αναλύσεις των εστιών ή αποικίες αριθμούς (στήλες, μέση τιμή τουλάχιστον τριών ανεξάρτητων πειραμάτων? μπαρ, SD). (C) (Αριστερά) Μια πληγή που δημιουργήθηκε σε μια κουλτούρα υποσυμβάλλουσες γονικής AGS, Mock κύτταρα και κύτταρα shCDH17, και το ποσοστό του κλεισίματος του τραύματος παρακολουθείται σε 0, 24 και 48 ώρες. Μια αντιπροσωπευτική φωτογραφία από τρία ανεξάρτητα πειράματα. Αρχική μεγέθυνση, × 200. (C) (Δεξιά) Εκπρόσωπος εικόνες δείχνουν την shCDH17, Mock και AGS κύτταρα που εισέβαλαν μέσω του matrigel. Ο αριθμός των κυττάρων όγκου που εισβάλλουν ποσοτικοποιήθηκε. Στήλες, σημαίνει πειραμάτων εις τριπλούν? μπαρ, SD. Αρχική μεγέθυνση, × 200. ανάλυση του κύκλου (Δ) κυττάρων μέσω κυτταρομετρίας ροής. Νοκ ντάουν CDH17 απομειωθεί σημαντικά τις ογκογόνο και επεμβατική ιδιότητες του AGS κύτταρα, ενώ η επαγωγή του κυτταρικού κύκλου G0 /G1 σύλληψη. (* P & lt? 0,05? ** P & lt? 0,01? ***, Ρ & lt? 0.001)

Η

CDH17 shRNA μεσολάβηση νοκ ντάουν οδήγησε σε σημαντικά μειωμένη κυτταρική ανάπτυξη κυτταρικών σειρών γαστρικού καρκινώματος (P & lt?. 0.001 ) (Εικ. 3Α, δεξιά). σχηματισμός εστιών επίσης ανέστειλε σημαντικά (Ρ & lt? 0.001) σε κύτταρα shCDH17 σύγκριση με Mock κύτταρα (Σχ 3Β, Αριστερά.), ένα παρόμοιο αποτέλεσμα ελήφθη σε μαλακό άγαρ, κατά την οποία ο σχηματισμός αποικιών ήταν σημαντικά μειωμένη στα κύτταρα shCDH17 (Ρ & lt? 0.001 ? Σχ. 3Β, δεξιά). Ο ρόλος των CDH17 στη μετάσταση μελετήθηκε με την επούλωση πληγών και transwell δοκιμασίες. CDH17 knockdown ήταν σε θέση να μειώσουν την κινητικότητα των κυττάρων (Σχ. 3C, Αριστερά), όπως προσδιορίζεται με τη δοκιμασία του τραύματος. δοκιμασίας Transwell αποκάλυψε ότι η μειωμένη έκφραση των CDH17 μειώνει σημαντικά την κυτταρική προσκόλληση (Ρ & lt? 0.001) (Εικ. 3C, δεξιά). Για να διερευνηθεί ο μηχανισμός υποκείμενων αναστολή της ανάπτυξης από CDH17 knockdown, οι κατανομές κυτταρικού κύκλου των κυττάρων με CDH17 shRNA φουρκέτα και Mock προσδιορίστηκαν με κυτταρομετρία ροής: κύτταρα shCDH17 συνελήφθησαν στην G0 /G1 φάση, με λιγότερα κύτταρα σε G2 /M φάσης (Σχ . 3D). Η αντικαρκινική δράση του CDH17 knockdown παρατηρήθηκε επίσης στο μεταστατικό κυτταρική γραμμή γαστρικού καρκινώματος ΜΚΝ-45 (Σχ. S2A-Ε). Σύμφωνα με τα αποδεκτά πρότυπα που θα ασφαλίσουν την ποιότητα και την ακρίβεια της RNAi πειράματα [14], πραγματοποιήσαμε πειράματα διάσωσης εκ νέου εκφράζουν CDH17 στο AGS και ΜΚΝ-45 shCDH17 κύτταρα (Εικ. S3A-Β). Αποκατάσταση της έκφρασης CDH17 στο AGS και ΜΚΝ-45 κύτταρα επιστρέφονται τα κύτταρα με το πατρικό φαινότυπο, επιβεβαιώνοντας ότι τα αποτελέσματα κατά των όγκων των CDH17 νοκ ντάουν δεν οφείλονταν σε off επιπτώσεις στόχο. Τα πειράματα διάσωσης αποκάλυψαν ότι μετά την αποκατάσταση της έκφρασης CDH17 στις δύο αυτές κυτταρικές γραμμές, η ογκογονικότητα και μεταστατικό δυναμικό αυξήθηκε σε παρόμοια επίπεδα της γονικής AGS και ΜΚΝ-45 κύτταρα (Σχ. S3C-F). Αυτά τα αποτελέσματα παρέχουν ισχυρές ενδείξεις των ογκογόνων ρόλους των CDH17 στα κύτταρα γαστρικού καρκινώματος.

CDH17 ως In Vivo στόχος για γαστρικός καρκίνος Θεραπεία

Εμείς εξέτασε κατά πόσον CDH17 απαιτείται για το σχηματισμό του όγκου και εισβολής στην γαστρικό κύτταρα καρκινώματος σε ένα γυμνό μοντέλο ποντικών. Εμείς υποδόρια ένεση shCDH17, Mock και γονικών κυττάρων AGS σε γυμνά ποντίκια. Οι όγκοι είναι συνήθως ορατά μακροσκοπικά στο ραχιαίο πλευρίζει εντός περιόδου 6 έως 8 εβδομάδων από την ένεση κυττάρων. 1 ποντίκι τόσο από τις γονικές AGS και Mock ομάδες έχασαν τη ζωή τους κατά τη διάρκεια της τρίτης εβδομάδας μετά (χρησιμοποιήθηκαν τελικά σημεία ευθανασίας) ένεση. Τα ποντίκια θανατώθηκαν 8 εβδομάδες μετά την ένεση των κυττάρων του όγκου. Στην ομάδα των ποντικών που ενέθηκαν με κύτταρα shCDH17, 2 ποντίκια δεν εμφάνισαν οζιδίου όγκου, και 8 ποντίκια έδειξαν σημαντική μειωμένο σχηματισμό όγκου σε σύγκριση με ποντίκια που ενέθηκαν με mock κύτταρα. το μέγεθος και το βάρος του όγκου ήταν σημαντικά μειωμένη σε ποντικούς που έχουν εγχυθεί με κύτταρα shCDH17 σύγκριση με ποντίκια που ενέθηκαν με mock κύτταρα (Σχ. 4Α). Αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν ότι η μείωση της έκφρασης CDH17 μπορεί να καταστείλει σημαντικά ογκογενετικότητας in vivo.

Α. Αντιπροσωπευτικά παραδείγματα όγκων που σχηματίζονται σε γυμνούς ποντικούς μετά από ένεση των κυττάρων shCDH17 στα αριστερά ραχιαία πλευρές. AGS και Mock κύτταρα εγχύθηκαν εντός του δεξιού, αντίστοιχα. γράφημα γραμμής δείχνει ότι οι μεταβολές του όγκου των υποδόριων όγκων, shRNA έναντι Mock, * ρ & lt? 0,05. B. Επίδραση της καταστολής CDH17 shRNA για την ανάπτυξη υποδόριων όγκων σε γυμνούς ποντικούς. Υποδόρια όγκοι επάγονται σε γυμνούς ποντικούς με έγχυση κυττάρων AGS? θεραπεία προϋπέθετε ενδοογκική ένεση Mock αντιδραστήρια (μη στοχευμένα φορέα RNAi) ή αγωγή shCDH17 σε δόση των 10

9 ιικού σωματιδίου /ένεση στην θέση του όγκου των ζώων (η = 3). Οι φωτογραφίες απεικονίζουν την υποδόριο όγκο που παράγεται από Mock και shCDH17 σε γυμνούς ποντικούς. Ο όγκος του όγκου που επάγεται σε γυμνούς ποντικούς μετρήθηκε μεταξύ των τριών πειραματικών ομάδων μετά από 35 ημέρες. IHC εικόνες αποδεικνύουν ότι η έκφραση CDH17 μειώθηκε σε ποντίκια shRNA θεραπεία. Αρχική μεγέθυνση, × 400. γράφημα γραμμής δείχνει ότι οι μεταβολές του όγκου των υποδόριων όγκων. shRNA έναντι Mock, *** p & lt?. 0.001

Η

Για την περαιτέρω αξιολόγηση της επίδρασης της CDH17 νοκ ντάουν στην πρωτογενή ανάπτυξη του όγκου, μπορούμε στη συνέχεια διερευνήθηκε κατά πόσον in vivo παράδοση CDH17 shRNA θα μπορούσε να εμποδίσει την ανάπτυξη ενός εγκατεστημένος ξενομοσχεύματος όγκου από τη γονική AGS κύτταρα σε γυμνούς ποντικούς. Μία εβδομάδα μετά τον εμβολιασμό του όγκου, όταν ο όγκος έφθασε περίπου 100 mm

3, πραγματοποιήσαμε μια ένεση εντός του όγκου CDH17 shRNA ή ψευδο φορέα σε μια δόση των 10

9 ιικού σωματιδίου /ένεση στη θέση του όγκου. Η ένεση χορηγήθηκε δύο φορές την εβδομάδα, επί 2 εβδομάδες. Στα ζώα εγχύθηκαν με το Mock φορέα, οι όγκοι αναπτύχθηκαν προοδευτικά κατά την διάρκεια του πειράματος. Αντιθέτως, ενδοογκική ένεση CDH17 shRNA είχε ως αποτέλεσμα σημαντικά μικρότερους όγκους σε κάθε χρονικό σημείο, συμπεριλαμβανομένης της τελικής μέτρησης του όγκου (Σχ. 4Β). Η εξέταση των κυττάρων του όγκου με CDH17 IHC επέδειξε αξιοσημείωτη κάτω ρύθμιση προορίζεται στόχου CDH17 στα shCDH17 κατεργασμένα κύτταρα (Ρ & lt? 0,05? Εικ. 4Β). Αυτά τα αποτελέσματα καταδεικνύουν ότι in vivo μειορύθμιση των CDH17 σε κύτταρα γαστρικού καρκινώματος μειώνει το σχηματισμό όγκων σε ποντίκια, υποδηλώνοντας ότι CDH17 είναι ένας θεραπευτικός στόχος για τον καρκίνο του στομάχου.

κάτω ρύθμιση του σηματοδότηση Wnt /β-κατενίνης με CDH17 knockdown

ανακρίθηκε πολλές οδούς, προκειμένου να ανακαλύψουν τον μοριακό μηχανισμό της CDH17 νοκ ντάουν μεσολάβηση αναστολή της γαστρικής ανάπτυξη του καρκίνου, τον πολλαπλασιασμό και τη μετάσταση. Βρήκαμε πολλά μέλη του μονοπατιού /β-κατενίνης Wnt να εκφράζονται διαφορικά μεταξύ shCDH17 και γονικά κύτταρα. β-κατενίνης έκφραση, φωσφορυλίωση GSK-3β, και έκφραση Κυκλίνη D1 μειώθηκε? και Rb έκφραση αυξήθηκε και στις δύο AGS και τα κύτταρα ΜΚΝ-45 shCDH17. Επιπλέον, η έκφραση του Ρ53, MDM2 και το κλειδί p21 ρυθμιστή του κυτταρικού κύκλου αυξάνεται σε CDH17-knockdown κυττάρων. (Εικ. 5Α). Σε μία δοκιμασία λουσιφεράσης ανταποκριτή TOPFlash /FOPFlash (Εικ. 5Β), την αποκατάσταση των CDH17 και στις δύο AGS και ΜΝΚ-45 κυττάρων αυξήθηκε σημαντικά την ισχύ των σημάτων TCF /LEF σύγκριση με τους ελέγχους shCDH17. Επιπλέον, όπως φαίνεται μέσω της ανάλυσης ανοσοστύπωσης, ανιχνεύσαμε μια αύξηση τόσο της συνολικής και της πυρηνικής πρωτεΐνης β-κατενίνης μετά την αποκατάσταση του CDH17 σε AGS και ΜΚΝ-45, σε σύγκριση με την shCDH17 (Εικ. 5C) .Together, αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν ότι CDH17 νοκ ντάουν αποτελέσματα στην αρνητική ρύθμιση του /της β-κατενίνης μονοπατιού Wnt στα γαστρικά καρκινικά κύτταρα. Αυτό, με τη σειρά του, δείχνει ότι CDH17 διατηρεί την πολλαπλασιαστικού δυναμικού μέσω μονοπάτι σηματοδότησης Wnt /β-κατενίνης.

A. Έκφραση της β-κατενίνης, η GSK-3β, ρ- GSK-3β, Rb, Κυκλίνη D1were σύγκριση μεταξύ shCDH17 και Mock τόσο στο AGS και ΜΚΝ-45 κύτταρα με ανάλυση κηλίδας Western. MDM2, ρ53 και ρ21 επίσης αξιολογήθηκαν. β-ακτίνης χρησιμοποιήθηκε ως έλεγχος φόρτωσης. δοκιμασία ρεπόρτερ Β TOPflash /FOPflash δείχνει ότι η σηματοδότηση Wnt επανενεργοποιήθηκε μετά CDH17 αποκατάστασης AGS και ΜΚΝ-45. (* P & lt? 0,05). Γ Αύξηση τόσο της ολικής και της πυρηνικής πρωτεΐνης β-κατενίνης μετά την αποκατάσταση της CDH17 στο AGS και ΜΚΝ-45, σε σύγκριση με το shCDH17.

Η

Συζήτηση

CDH17 είναι ένα μυθιστόρημα cadherin, η δομή του είναι διαφορετικά από εκείνα των κλασικών καντερίνες στο ότι το Ν-τερματικό πεδίο και την κυτταροπλασματική τμήμα εμφανίζει σημαντική ομολογία με την κλασική καντερίνες [6]. Η βιολογική λειτουργία του CDH17 είναι ακόμα άγνωστη. Πολυάριθμες μελέτες έχουν αναφέρει υψηλά επίπεδα CDH17 σε διάφορους ανθρώπινους καρκίνους, συνδέοντας έκφραση αυτής της πρωτεΐνης προς την πρόγνωση και τον κίνδυνο Εκτίμηση [10], [15]. CDH17 υπερέκφραση έχει αναφερθεί σε γαστρικό αδενοκαρκίνωμα [9], ηπατοκυτταρικό καρκίνωμα [16] και ορθοκολικού καρκινώματος [17]. Αυτό δείχνει ότι CDH17 μπορεί να είναι ζωτικής σημασίας για την ογκογένεση του στομάχου και του ήπατος καρκίνο.

Στους ανθρώπους, CDH17 συνήθως εκφράζεται αποκλειστικά στη βασεοπλευρική επιφάνεια των ηπατοκυττάρων και εντεροκυττάρων. Μετά την πρώτη έκθεση της CDH17 ως εντερική δείκτη metapasia από Grotzinger et [9] al, αρκετές έρευνες έχουν αξιολογηθεί έκφραση CDH17 σε καρκίνο του στομάχου. CDH17 εκφράστηκε σε 50-78% των γαστρικών καρκινικών ιστών με εντερική τύπου επικράτηση [18], [19]. Στην παρούσα μελέτη, δείχνουμε ότι CDH17 είναι ένα ογκογονίδιο και ένας ελκυστικός θεραπευτικός στόχος σε γαστρικό καρκίνο: CDH17 εκφράζεται έντονα σε ιστούς όγκων, με σχεδόν το ήμισυ των γαστρικών καρκίνων είναι CDH17 θετικά με IHC. Πάρκο και οι συνεργάτες του αξιολόγησαν την έκφραση CDH17 σε περισσότερα από 200 δείγματα γαστρικού ιστού καρκινώματος, και ανέφερε ότι ήταν ιδιαίτερα εκφράζεται σε προγενέστερα στάδια TNM [20], Επιπλέον, διαπίστωσαν ότι η μειωμένη έκφραση της CDH17 έχει αποδειχθεί ότι συνδέεται στενά με την επιθετικότητα του όγκου και λεμφαδένα μετάστασης του ανθρώπινου γαστρικού καρκινώματος [20]. Ωστόσο, άλλοι ανέφεραν ότι η έκφραση της ήταν πολύ υψηλότερη σε προχωρημένο λεμφαδένα μετάσταση [18], [21]. Στη μελέτη μας, δεν υπήρχε σχέση ανάμεσα στην έκφραση CDH17 και άλλα κλινικοπαθολογοανατομικές χαρακτηριστικά.

Ως προγνωστικό παράγοντα, έκφραση CDH17 έδειξε μια τάση προς μια ένδειξη για δυσμενή επιβίωσης σε πολλές ομάδες ασθενών, ακόμα και μετά τον έλεγχο για το στάδιο του όγκου. Στο πλαίσιο αυτό, η διάμεση συνολική επιβίωση 15,9 μήνες στην ομάδα με θετική έκφραση CDH17, έναντι 26,6 μηνών σε ασθενείς με όγκους αρνητικούς IHC αντιπροσωπεύει μια κλινικά σημαντική σχέση. Επιπλέον, μια διερευνητική ανάλυση έδειξε φτωχή συνολική επιβίωση σε ασθενείς με υψηλή έκφραση του CDH17 πρωτεΐνης (IHC 2+ και 3+) σε σύγκριση με τους ασθενείς με χαμηλή έκφραση του CDH17 πρωτεΐνης (IHC +). Αυτά τα ευρήματα είναι αξιοσημείωτο δεδομένης της κακής πρόγνωσης σε αυτόν τον πληθυσμό. μπαρ, SD. μπαρ, SD. μπαρ, SD. μπαρ, SD. μπαρ, SD. μπαρ, SD. μπαρ, SD.