Αφηρημένο

Ιστορικό

Η έλλειψη αξιόπιστων βιοδεικτών πρόβλεψης είναι ένα εμπόδιο στην αντιμετώπιση του καρκίνου του προστάτη (ΚΓΠ). Προστατικό ειδικό αντιγόνο (PSA) που χρησιμοποιούνται ευρέως σε κλινικές έχει αρκετές επιφυλάξεις ως βιοδείκτη καπάκι. ασθενείς Αφροαμερικανός ΚΓΠ κακή πρόγνωση από Καυκάσιους, και κυρίως ο ορός-PSA δεν αποδίδουν καλά σε αυτή την ομάδα. Επιπλέον, ορισμένοι άνδρες με χαμηλή ορού PSA παραμείνει απαρατήρητη για καπάκι μέχρι να αναπτύξουν τη νόσο. Έτσι, υπάρχει η ανάγκη να προσδιορίσει μια αξιόπιστη διαγνωστική και προγνωστική βιοδεικτών του πώματος. Εδώ, δείχνουμε ότι η πρωτεΐνη BMI1 βλαστικών κυττάρων είναι εκκριτική και θα μπορούσαν να διερευνηθούν για χρήση βιοδεικτών σε ασθενείς Κεφ.

Μεθοδολογία /Κύρια Ευρήματα

Ημι-ποσοτική ανάλυση των BMI1 πραγματοποιήθηκε σε προστάτη ιστούς της TRAMP (αυτόχθονων διαγονιδιακό μοντέλο ποντικού), οι ασθενείς ανθρώπινη καπάκι, και σε μοντέλα που βασίζονται σε κύτταρα που αντιπροσωπεύουν την κανονική και διαφορετικών φαινοτύπων CaP σε Αφρο-Αμερικανός και του Καυκάσου άνδρες, χρησιμοποιώντας ανοσοϊστοχημεία, ανοσοαποτύπωση και Slot-κηλίδωση. Ποσοτική ανάλυση του BMI1 και PSA διεξήχθησαν σε αίμα και καλλιέργεια-media του siRNA επιμολυσμένα και μη επιμολυσμένα κύτταρα με τη χρήση ELISA. BMI1 πρωτεΐνη είναι (i) εκκρίνεται από τα κύτταρα καπάκι, (ii) αυξήθηκε στην κορυφαία περιοχή των επιθηλιακών κυττάρων και στρωματικών περιοχή σε προστατικούς όγκους, και (iii) ανιχνεύεται στο ανθρώπινο αίμα. BMI1 είναι ανιχνεύσιμη στο αίμα των ασθενών CaP σε ένα σειρά αυξανόμενης στάδιο του όγκου, παρουσιάζουν μια θετική συσχέτιση με ορό-PSA και σημαντικότερο είναι ανιχνεύσιμο σε ασθενείς που εμφανίζουν χαμηλή ορού PSA. Η κλινική σημασία των BMI1 ως βιοδείκτη θα μπορούσε να διαπιστωθεί από την παρατήρηση ότι Cap κύτταρα εκκρίνουν αυτήν την πρωτεΐνη σε υψηλότερα επίπεδα από ό, τι τα κύτταρα εκπρόσωπος της καλοήθους υπερπλασίας του προστάτη (BPH).

Συμπεράσματα /Σημασία

BMI1 μπορούσε να αναπτυχθεί ως διπλή βιο-δείκτη (ορού και βιοψία) για τη διάγνωση και την πρόγνωση του καλύμματος σε Καυκάσιους και Αφρικής και της Αμερικής άνδρες. Αν και αναγκάζοντας τα στοιχεία αυτά δικαιολογούν την περαιτέρω έρευνα σε μια ομάδα της Αφρικής και της Αμερικής ασθενείς

Παράθεση:. Siddique HR, Parray Α, Zhong W, Karnes RJ, Bergstralh EJ, Koochekpour S, et al. (2013) BMI1, παράγοντα βλαστοκυττάρων Ενεργώντας ως Novel ορού βιοδείκτη για Καυκάσου και της Αφρικής και της Αμερικής τον καρκίνο του προστάτη. PLoS ONE 8 (1): e52993. doi: 10.1371 /journal.pone.0052993

Επιμέλεια: Νατάσα Κυπριανού, Πανεπιστήμιο του Κεντάκι College of Medicine, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 23, Οκτώβρη, 2012? Αποδεκτές: 27 του Νοεμβρίου του 2012? Δημοσιεύθηκε: 7 Ιανουαρίου 2013

Copyright: © 2013 Siddique et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο ήταν εν μέρει υποστηρίζεται από το Υπουργείο άμυνας CDMRP χορηγούν W81XWH-08-1-0605 με την αντίστοιχη συγγραφέα. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Σύμφωνα με την αμερικανική Αντικαρκινική Εταιρεία, 241.740 θα διαγνωστεί με καρκίνο του προστάτη (ΚΓΠ) και 28.170 ασθενείς ΚΓΠ προβλέπεται να πεθάνουν κατά το έτος 2012 στις ΗΠΑ και μόνο [1]. Η μη ικανοποιητική έκβαση της συνολικής διαχείρισης (στρατηγικές θεραπείας και παρακολούθησης πρόγνωση) της νόσου ΚΓΠ μπορούν να σχετίζεται με την έλλειψη ενός αξιόπιστου προγνωστικού ορό βιοδείκτη. Αν και χρησιμοποιείται ευρέως, έχουν αρκετές σημαντικές επιφυλάξεις έχουν αναφερθεί σε ορό PSA ως προγνωστικός βιοδείκτη [2]. Για παράδειγμα, σε ορισμένες περιπτώσεις CaP, ορό PSA είναι (α) ανιχνεύεται ελάχιστη ή και καμία, (β) στερείται επαρκή ευαισθησία, και (γ) παραλείπει να διακρίνει δυνητικά σημαντική καρκίνους από ασήμαντες αυτά [2] – [4]. PSA δεν αντικατοπτρίζει τη βιολογία του καρκίνου και υψηλό κίνδυνο λάθος αποτελέσματα [5] – [6]. Περαιτέρω, οι διαφορές στην PSA ως διαγνωστικού δείκτη μεταξύ των διαφορετικών φυλετικών ομάδων, όπως τους Καυκάσιους και τους Αφρο-Αμερικανός έχουν κατατροπώσει τη διαχείριση αυτού του καρκίνου [6] – [7]. Ως εκ τούτου, μια μεγάλη ανάγκη επιμένει για την ανάπτυξη βελτιωμένων βιοδεικτών ορολογικές στην ΚΓΠ, η οποία είναι αξιόπιστη για την πρόγνωση και διάγνωση σε Καυκάσιους και τους ασθενείς Αφρικής και της Αμερικής.

Υπάρχουν αυξανόμενες ενδείξεις ότι Polycomb ομάδα πρωτεϊνών (PCG) διαδραματίζουν καθοριστικό ρόλο στην ανάπτυξη και την ασθένεια του καρκίνου επανάληψη [8]. Β-κυττάρου-ειδική θέση ολοκλήρωσης ιού λευχαιμίας ποντικού Moloney 1 (BMI1) είναι ένα πολύ γνωστό δείκτη που χρησιμοποιείται σε βλαστικά κυτταρική βιολογία [8] – [9]. BMI1 η οποία έχει ένα πανταχού παρόν σχήμα έκφρασης σε σχεδόν όλους τους ιστούς συχνά ρυθμίζεται αυξητικά σε διάφορους τύπους ανθρώπινων καρκίνων [8] – [10]. Ελέγξαμε πρόσφατα τη σημασία της BMI1 στην εμφάνιση χημειοαντίσταση σε διάφορους τύπους καρκίνων, περιλαμβανομένου του πώματος [8]. Η παρούσα μελέτη είναι η πρώτη κλινικά στοιχεία δείχνουν ότι BMI1 είναι μια εκκριτική πρωτεΐνη η οποία έχει τεράστιες δυνατότητες να αναπτυχθεί ως ένα ορό βιοδείκτη για την ΚΓΠ και την πρόγνωση της, τόσο του Καυκάσου και της Αφρικής και της Αμερικής πληθυσμού. Προτείνουμε ορό BMI1 ως βιοδείκτη θα έχουν καλύτερες επιδόσεις από PSA. Περαιτέρω, BMI1 θα μπορούσε να χρησιμοποιηθεί ως διπλή βιοδείκτη σε ορό καθώς και βιοψία.

Υλικά και Μέθοδοι

ιστούς του προστάτη και δείγματα ορού από ασθενείς ανθρώπινο CaP

προστατικούς ιστούς χειρουργικά συλλέγονται από τους ασθενείς του ανθρώπου ΚΓΠ και ταιριάζουν μπλοκ παραφίνης είχαν αγοραστεί από την Cooperative Human Tissue Network Division Midwestern, The Ohio State University (Columbus, OH). δείγματα ορού των ασθενών ανθρώπινης ΚΓΠ που προμηθεύονται από την τράπεζα ορού (Bioserve, Beltsville, MD). Πρόσθετες ενσωματωμένες σε παραφίνη τομές των ανθρώπινων ιστών προστάτη των 70 ασθενών με φυσιολογική και αδενοκαρκίνωμα ελήφθησαν από την ISU Abxis Co. Ltd., (Σεούλ, Νότια Κορέα).

τηλέφωνα Γραμμές

Οι κυτταρικές σειρές προήλθε τόσο από Καυκάσου και αφροαμερικάνων επανδρώνει χρησιμοποιήθηκαν στη μελέτη μας. Κανονική και αθανατοποιημένες προστάτη επιθηλιακή κυτταρική γραμμή (RWPE1), κυτταρικές σειρές CaP (LNCaP, C42b, PC3, Du145, VCAP και PCA-2b), του προστάτη μυοϊνοβλάστες στρωματικό (WPMY1), του παχέος εντέρου φυσιολογικά επιθηλιακά κύτταρα (FHC) και του καρκίνου του παχέος εντέρου κυτταρικές γραμμές ( ανθρώπινες κυτταρικές σειρές καρκινώματος του παγκρέατος PANC1 και AsPC1 SW480, HCT116 και ΗΤ29) και ελήφθησαν από την ATCC (Manassas, VA). Κανονική κύτταρα παγκρεατικού πόρου επιθήλια, προκαρκινικές κακοήθη Kras μεταλλαγμένα κύτταρα E6E7-Kras-st Kras μεταλλαγμένο E6E7-Ras και ελήφθησαν από D. Paul M. Campbell (H. Lee Moffitt Κέντρο Καρκίνου, Tampa, FL) [11]. ΒΡΗ-1 κύτταρα προέρχονται από τον Δρ Simon Hayward (Πανεπιστήμιο Vanderbilt, Nashville, TN), οι οποίοι τους ανέπτυξαν όπως περιγράφεται [12]. Καθιέρωση και χαρακτηρισμός RC77N /Ε, RC77T /Ε και E006 κύτταρα περιγράφηκε προηγουμένως [13] – [14]. Τα κύτταρα αναπτύχθηκαν σε κατάλληλο μέσο συμπληρωμένο με 10% FBS (ATCC, Manassas, VA) και 1% Πενικιλλίνη-Στρεπτομυκίνη (Invitrogen, Carlsbad, CA) κάτω από πρότυπες συνθήκες καλλιέργειας κυττάρων 5% CO

2 σε έναν επωαστήρα στους 37 ° Γ

Επιλογή τηλέφωνα

(α) Καυκάσιος κύτταρα: RWPE1 (κανονικό), ΒΡΗ-1 (μη κακοήθη υπερπλασία) και, LNCaP, C4-2B, PC-3, Du145 και vcap εκπροσωπούν Καυκάσου καρκίνο του προστάτη. WPMYI1 ινοβλάστες στρωματικά χρησιμοποιήθηκαν επίσης. (Β) αφροαμερικάνων Cells:. RC77N /E (κανονικό), και RC77T /E, PCA-2Β, E006 εκπροσωπούν αφροαμερικάνων καρκίνο του προστάτη

αντισωμάτων, πλασμίδια και siRNA

Τα μονοκλωνικά αντι- BMI1 αντίσωμα που προμηθεύονται από την Millipore (Temecula, CA). ρΒΑΒΕ-BMI1 πλασμίδιο (BMI1 υπερεκφράζουν) ήταν ένα είδος δώρο από τον Δρ Τσι V. Dang (The Hopkins University John, Βαλτιμόρη, MD). . BMI1-siRNAs ήταν εμπορικώς αγοράστηκαν από Dharmacon (Lafayette, CO)

Ανοσοϊστοχημεία

Η ανοσοϊστοχημική χρώση πραγματοποιήθηκε όπως περιγράφηκε προηγουμένως [15] – [16]. Εν συντομία, τομές παραφίνης (που θα αξιολογηθούν για BMI1) υποβλήθηκαν σε προεπεξεργασία με διάλυμα κιτρικού οξέος (ρΗ 6) για 10 λεπτά σε ένα φούρνο μικροκυμάτων για ανάκτηση αντιγόνου. Οι τομές επωάστηκαν με πρωτογενές αντίσωμα (αντι-BMI1) σε αραίωση 1:50 για 12 ώρες σε 4 ° C. Τα πλακίδια στη συνέχεια επωάστηκαν για 2 ώρες σε θερμοκρασία δωματίου με κατάλληλο δευτερογενές αντίσωμα συζευγμένο με HRP. Τα σλάϊντς αναπτύχθηκαν σε 3, 3′-διαμινοβενζιδένιο (κιτ DAB, Invitrogen, Carlsbad, CA) και μετρητής χρώση με αιματοξυλίνη. Τα χρωματισμένα πλακίδια αφυδατώνονται και τοποθετούνται σε Permount διάλυμα υπό καλυπτρίδες

Western ανάλυση κηλίδος

ανάλυση ανοσοστυπώματα πραγματοποιήθηκε όπως περιγράφηκε προηγουμένως [16] – [17].. Εν συντομία, κυτταρολύματα παρασκευάστηκαν σε κρύο ρυθμιστικό διάλυμα λύσης [(0,05 mmol /L Tris-HCI, 0,15 mmol /L NaCl, 1 mole /L EGTA, 1 mol /L EDTA, 20 mmol /L NaF, 100 mmol /L Na

3VO4, 0,5% ΝΡ-40, 1% Triton Χ-100, 1 mol /L φαινυλ μεθυλσουλφονυλ φθοριούχο (ρΗ 7.4)] με κοκτέιλ αναστολέα πρωτεάσης (Roche, Indianapolis, ΙΝ). Το κυτταρόλυμα συλλέχθηκε και αποθηκεύτηκε στους -80 ° C. Η περιεκτικότητα σε πρωτεΐνη στα προϊόντα λύσης μετρήθηκε με προσδιορισμό πρωτεΐνης BCA (Pierce, Rockford, IL), σύμφωνα με το πρωτόκολλο του προμηθευτή. Για ανάλυση κηλίδος Western, 40 μg πρωτεΐνη επιλύθηκε σε 10% πηκτώματα SDS-PAGE, μεταφέρθηκαν επί PVDF μεμβράνες (Millipore, Bedford, ΜΑ) και στη συνέχεια επωάστηκαν σε ρυθμιστικό αποκλεισμού (5% άπαχο ξηρό γάλα /1% Tween 20? σε 20 mmol /L TBS, ρΗ 7.6). για 2 ώρες Οι κηλίδες επωάστηκαν με BMI1 πρωτογενές αντίσωμα, πλύθηκαν και επωάστηκαν με συζευγμένο με HRP δευτερογενές αντίσωμα (Sigma, Αγ Louise, ΜΟ). τα στυπώματα ανιχνεύθηκαν με χημειοφωταύγεια (ECL kit, Amersham Biosciences, Piscataway, NJ). Ίση φόρτωση πρωτεΐνης επιβεβαιώθηκε με απογύμνωση των κηλίδων και επανα-ανίχνευση με β-ακτίνης (Sigma, St. Louis, ΜΟ). μετρήσεις πυκνομετρία των σαρωμένων συγκροτήματα διεξήχθησαν όπως περιγράφηκε προηγουμένως [16].

ανίχνευση πρωτεΐνης σε κυτταρική καλλιέργεια ΜΜΕ

Τα κύτταρα αφέθηκαν να αναπτυχθούν έως και 80% συρροή σε πλήρες μέσο. Στα 80% συρρέοντα επίπεδο, μέσο απορρίφθηκε και τα κύτταρα πλύθηκαν με PBS δύο φορές. Μετά το πλύσιμο, τα κύτταρα προστέθηκαν με μέσο χωρίς ορό. Τα κύτταρα καλλιεργήθηκαν εντός μέσου χωρίς ορό επί 24 ώρες. Μετά από 24 ώρες, τα μέσα συλλέχθηκαν και αναλύθηκαν για εκκριτική πρωτεΐνη BMI1 χρησιμοποιώντας δοκιμασία ανοσο-Slot-blot. Η δοκιμασία Slot-κηλίδος διεξήχθη σύμφωνα με το πρωτόκολλο των κατασκευαστών (Whatman, Florham Park, NJ). Εν συντομία, η συσκευή Slot-blot συναρμολογήθηκε χρησιμοποιώντας διηθητικό χαρτί Whatman και ένα προ-υγρανθεί μεμβράνη νιτροκυτταρίνης. Στη συνέχεια, η συσκευή συνδέθηκε με μία αντλία κενού. Slots γέμισαν με δείγματα (media /ορού) και, στη συνέχεια, συντάσσεται με κενό (μη χρησιμοποιούμενες υποδοχές γέμισαν με PBS). Οι μεμβράνες κατόπιν αποκλείστηκαν για 2 ώρες σε ρυθμιστικό διάλυμα αποκλεισμού (5% άπαχο ξηρό γάλα). Τα στυπώματα επωάστηκαν με πρωτογενές αντίσωμα BMI1, πλύθηκαν και επωάστηκαν με συζευγμένο με HRP δευτερογενές αντίσωμα (Sigma, Αγ Louise, ΜΟ). Τα στυπώματα ανιχνεύθηκαν με χημειοφωταύγεια (ECL kit, Amersham Biosciences).

Η απομάκρυνση του λευκωματίνης από δείγματα ορού

Η αλβουμίνη απομακρύνθηκε από δείγματα ανθρώπινου ορού με τη χρησιμοποίηση Αλβουμίνη Σετ αφαίρεσης (Pierce, Rockford, IL ) σύμφωνα με το πρωτόκολλο του πωλητή. Δείγματα που περιέχουν 1000 μg της συνολικής πρωτεΐνης φορτώθηκαν σε ένα δίσκο αφαίρεσης, όπου κάθε δίσκος έχει αναφερθεί ότι έχει μια ικανότητα σύνδεσης του & gt?. 2 mg λευκωματίνης

εκτίμηση των επιπέδων πρωτεΐνης PSA με ELISA

Αυτή διεξήχθη χρησιμοποιώντας ανθρώπινα PSA-ειδική ELISA (Anogen, Ontario, Canada) σύμφωνα με το πρωτόκολλο του πωλητή.

η ποσοτικοποίηση της εκκριτική πρωτεΐνη BMI1 σε καλλιέργεια μέσα ενημέρωσης

Αυτή διεξήχθη με τη χρήση ενός BMI1-ειδική ELISA (Αντισώματα-online Inc., Atlanta, GA). Ανασυνδυασμένη πρωτεΐνη BMI1 χρησιμοποιήθηκε για να χρησιμεύσει ως πρότυπο για την δοκιμασία αυτή.

BMI1-siRNA και ρΒΑΒΕ-BMI1 (BMI1 εκφράζει πλασμίδιο) επιμόλυνση να επικυρωθεί ότι BMI1 πράγματι εκκρίνεται από τα κύτταρα CaP

Οι επιμολύνσεις διεξήχθησαν με τη χρήση λιποφεκταμίνης (Invitrogen, Carlsbad, CA) σύμφωνα με το πρωτόκολλο του πωλητή. Για το λόγο αυτό, το πρώτο ενδοκυτταρική BMI1 από Καυκάσου ΚΓΠ (LNCaP και Du145) και αφροαμερικάνων ΚΓΠ (E006) επιθηλιακών κυττάρων προσδιορίστηκε.

Υπό 1

ου προσέγγιση.

BMI1 χτυπήθηκε κάτω από shRNA σε Καυκάσιους και αφροαμερικάνων κύτταρα. 12 ώρες μετά την επιμόλυνση, τα κύτταρα αναπτύχθηκαν σε πλήρες μέσο για 12 ώρες. Μετά από 24 ώρες μετά την επιμόλυνση, μέσο απορρίφθηκε και τα κύτταρα αναπτύχθηκαν σε μέσα χωρίς ορό για 24 ώρες. Μετά από 24 ώρες, μέσα χωρίς ορό από BMI1-νοκ ντάουν κύτταρα συλλέχθηκαν και εκκρίνεται-BMI1 επίπεδα μετρήθηκαν με ELISA.

Κάτω από 2

ου προσέγγιση.

καρκινικά κύτταρα του προστάτη που εκπροσωπούν Καυκάσου και αφροαμερικάνων νόσο επιμολύνονται με BMI1-υπερεκφράζουν πλασμίδιο. 12 ώρες μετά την επιμόλυνση, τα κύτταρα αναπτύχθηκαν σε πλήρες μέσο για 12 ώρες. Μετά από 24 ώρες μετά την επιμόλυνση, μέσο απορρίφθηκε και τα κύτταρα αναπτύχθηκαν σε μέσα χωρίς ορό για 24 ώρες. Μετά από 24 ώρες, μέσα άνευ ορού από BMI1-κύτταρα που υπερεκφράζουν συλλέχθηκε και εκκρίνεται-BMI1 επίπεδα μετρήθηκαν με ELISA.

θεραπεία ανδρογόνων κυττάρων

Για το λόγο αυτό, του Καυκάσου και αφροαμερικάνων προστάτη επιθηλιακά κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με την αναλογική ανδρογόνων (R1881) επί 12 ώρες. Μετά από 12 ώρες, μέσο απορρίφθηκε και τα κύτταρα αναπτύχθηκαν σε περαιτέρω 12 ώρες. Μετά από 24 ώρες, τα κύτταρα συλλέχθηκαν για να αξιολογηθούν για την ενδοκυτταρική έκφραση BMI1 με ανάλυση Western blot.

Στατιστικές αναλύσεις

Γραφική περιλήψεις της κατανομής της έντασης χρώσης έγιναν χρησιμοποιώντας διαγράμματα διασποράς και οικόπεδα κουτί. Απλή γραμμική μεθόδους egression και η συσχέτιση ήταν χρήσιμη για την αξιολόγηση των ενώσεων μεταξύ BMI1, PSA και το καπάκι βαθμό (1 = φυσιολογικό, 2 = Φάση ΙΙ, 3 = Φάση ΙΙΙ, 4 = Stage IV). Για να διορθωθεί η ασυμμετρία, BMI1 και PSA αναλύθηκαν σε ένα ημερολόγιο (base2) κλίμακα. Μια τιμή ρ & lt? 0,05 θεωρήθηκε στατιστικά σημαντική

Αποτελέσματα

επιπέδων της πρωτεΐνης Bmi1 στον προστάτη ιστούς αυξάνεται με την προοδευτική στάδια της νόσου σε διαγονιδιακά μοντέλα TRAMP ποντίκι

Glinsky et al. [18] έδειξε ότι προηγουμένως Bmi1 πρωτεΐνη είναι αυξημένη στους ιστούς του προστάτη ποντικών TRAMP του, την αυτόχθονα μοντέλο ποντικού ανάπτυξη CaP, ερευνήσαμε αν μπορούσε να ανιχνευθεί μία προοδευτική αύξηση των επιπέδων Bmi1 σε προστάτη ιστούς κατά τη διάρκεια προοδευτική ηλικία του πώματος. Για το σκοπό αυτό χρησιμοποιήσαμε δείγματα προστατικού ιστού συλλέχθηκαν σε διαφορετικές ηλικίες της TRAMP διαγονιδιακών ποντικών. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 1Α? Bmi1 πρωτεΐνη παρατηρήθηκε να είναι ανιχνεύσιμα σε όλες τις ηλικίες των ποντικών TRAMP. Σε γενικές γραμμές, η χρώση ήταν ισχυρότερη σε επιθηλιακά κύτταρα του προστάτη από τα μεγαλύτερα ποντίκια από ό, τι τα επιθηλιακά κύτταρα του προστάτη από τους νεότερους ποντίκια. Τα λεία μυϊκά κύτταρα έχουν πολύ ισχυρότερη χρώση από ινοβλάστες. Το πρότυπο χρώσης των Bmi1 πρωτεΐνης συγκρίθηκε σε ηλικία 17 εβδομάδων έως 45 εβδομάδες προστάτη δείγματα (Εικ. 1Α). Αυτά τα δεδομένα έδειξαν αυξημένα επίπεδα έκφρασης Bmi1 πρωτεΐνης σε προστάτη των ηλικιωμένων ηλικιωμένων ποντικών (Σχ. 1Α). Υπήρχε μια έντονη χρώση σε ακραία περιοχή των επιθηλιακών κυττάρων. Στρωματικά περιοχές παρατηρήθηκαν να έχουν μια θετική χρώση (Εικ. 1Α).

(Α) φωτομικρογραφίες αντιπροσωπεύουν ανοσοχρώση BMI1 σε προστατικούς ιστούς διαγονιδιακών ποντικών TRAMP. Τα βέλη δείχνουν χρώση για BMI1. Μεγέθυνση × 40. (Bi) μικροφωτογραφίες δεικνύουν BMI1 θετικών νεοπλασματικών και μη νεοπλασματικών περιοχών του προστάτη δειγμάτων των ασθενών CaP όπως αξιολογείται με ανοσοχρώση. Τα βέλη δείχνουν χρώση για BMI1. Μεγέθυνση × 40. (BII) οικόπεδα ασφαλείας για BMI1 πρωτεΐνη με βάση την βαθμολογία αφορούν ανοσοχρώση μοτίβο σε κανονική και το καπάκι δείγματα στην περιοχή στρωματικά *, P & lt?. 0,05? μαύρη γραμμή στο κουτί, διάμεσες τιμές.

Η

έκφραση της πρωτεΐνης BMI1 στον προστάτη δείγματα ιστών του Cap ασθενείς

Αξίζει να σημειωθεί ότι, κάποια επιθηλιακά κύτταρα των επιθηλιακών κυττάρων διαγονιδιακών προστάτη ποντίκια έδειξε πυκνή κορυφαία χρώση γεγονός που υποδηλώνει ότι Bmi1 θα μπορούσε να είναι μία εκκριτική πρωτεΐνη. Είμαστε δίπλα προσδιοριστεί η έκφραση της BMI1 σε δείγματα ανθρώπινου ΚΓΠ, με ανοσοϊστοχημική ανάλυση και προσδιορίζονται τα επίπεδα έκφρασης του σε στρωματικά περιοχές των 70 ζεύγη ταιριάζουν δείγματα της κανονικής και της ΚΑΠ που εκπροσωπούν όλα τα στάδια όγκου. Η ένταση της χρώσης ανοσοϋπεροξειδάσης για BMI1 βαθμολογήθηκε ως 0 (αρνητική), 1 (ασθενής), 2 (μέτρια) και 3 (ισχυρή). Immunostains έδειξαν χρώση τόσο μη νεοπλασματικών και νεοπλασματικών στρώμα. Σε γενικές γραμμές, η χρώση ήταν ισχυρότερη σε νεοπλασματικά στρώμα από ό, τι σε μη νεοπλασματικά στρώμα. Τα επιθηλιακά κύτταρα επίσης έδειξαν θετική χρώση για το αντίσωμα (Σχ. 1Bi). Τα λεία μυϊκά κύτταρα έχουν πολύ ισχυρότερη χρώση (3) από τα κύτταρα ινοβλαστών (0-1 +). Το πρότυπο χρώσης των BMI1 πρωτεΐνης σε σύγκριση με το στάδιο ΙΙ-IV δείγματα ΚΓΠ (Εικ. 1Bi). Αυτά τα δεδομένα έδειξαν αυξημένα επίπεδα έκφρασης BMI1 πρωτεΐνης σε υψηλής ποιότητας όγκου σε ανθρώπινο κάλυμμα (Σχ. 1Bi). Τα οικόπεδα κουτί των δεδομένων για την έκφραση της πρωτεΐνης BMI1 σε στρώμα επέδειξε μία ευρεία διακύμανση μεταξύ δείγμα σε δείγματα καρκίνου, σε σύγκριση με φυσιολογικούς ιστούς και αποκάλυψε μια σημαντική διαφορά στο επίπεδο της πρωτεΐνης μεταξύ των κανονικών και CaP ιστούς (ρ & lt?. 0.05, Σχ 1ΒΙΙ ). Η μέση βαθμολογία για την ένταση χρώσης των BMI1 σε στρώμα των φυσιολογικών ιστών ήταν 0,81 ± 0,07 (η = 70), και ήταν σημαντικά χαμηλότερη από υψηλής ποιότητας στάδιο II (1,8 ± 0,08? N = 36), το στάδιο III (2,26 ± 0,10 n = 28) και το στάδιο IV (2,8 ± 0,11? n = 6) δείγματα καρκίνου (Εικ 1ΒΙΙ? ρ. & lt? 0,05). Παρατηρήθηκε Ένα παρόμοιο πρότυπο χρώσης σε δείγματα CaP ζεύγος ταιριαστό στην επιθηλιακή των προστατικών δειγμάτων. Λαμβανόμενα μαζί, αυτά τα δεδομένα δείχνουν ότι η έκφραση του BMI1 αυξάνεται με την αύξηση του σταδίου Κεφ.

BMI1 έκφραση σε φυσιολογικά και νεοπλαστικά κύτταρα του προστάτη που αντιπροσωπεύει ασθένεια CaP σε Καυκάσιους άνδρες

Σαν μία προσπάθεια για τον εντοπισμό της έκφρασης της BMI1 στην εξέλιξη της ΚΑΠ, πρέπει πρώτα μέτρησαν τα επίπεδα έκφρασης της πρωτεΐνης με ανάλυση ανοσοστύπωσης σε διάφορα ανθρώπινα Καυκάσου CaP κυτταρικές σειρές, LNCaP, Du145 και PC3 και σε σύγκριση με αυτούς να NHPE (κανονική πρωτοβάθμια προστάτη επιθηλιακών κυττάρων) και RWPE1 (που αντιπροσωπεύουν την κανονική απαθανάτισε επιθηλιακά κύτταρα του προστάτη) , αντίστοιχα. Μεταξύ της ΚΓΠ κυτταρικές σειρές που χρησιμοποιούνται, LNCaP είναι ανδρογόνο-εξαρτώμενη, ενώ Du145 και PC3 είναι ανδρογόνο-ανεξάρτητες. Η επιλογή αυτών των κυττάρων με βάση το γεγονός ότι το 80% των ασθενών CaP παρόν με εξαρτώμενη από ανδρογόνο νόσο κατά το χρόνο της διάγνωσης που μετατρέπει αργότερα σε πιο επιθετική, ανδρογόνο-ανεξάρτητες ασθένεια [19]. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 2 (Αϊ-ΙΙ), όλα CaP κυτταρικές σειρές παρουσίασαν μία υψηλότερη έκφραση της πρωτεΐνης BMI1 από ότι στα φυσιολογικά επιθηλιακά κύτταρα του προστάτη. Όταν η πρωτεΐνη έκφραση του BMI1 συγκρίθηκε, με βάση την πυκνομετρική ανάλυση των ανοσοστυπωμάτων, εξαιρετικά επιθετική κύτταρα PC3 και Du145 επέδειξαν υψηλότερη έκφραση σε σχέση με LNCaP κύτταρα (Σχ. 2Aii). Είναι ενδιαφέρον, ανιχνεύσαμε επίσης έκφραση BMI1 στα στρωματικά κύτταρα προστάτη (WPMY1) (Σχ. 2Ai-ΙΙ). Είναι ενδιαφέρον ότι, η έκφραση BMI1 βρέθηκε να είναι πολύ χαμηλή σε επιθηλιακά κύτταρα του προστάτη που αντιπροσωπεύει καλοήθη προστατική υπερπλασία (ΒΡΗ) κατάσταση (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται).

(Ai) Σχήμα αντιπροσωπεύει το επίπεδο της BMI1 πρωτεΐνης σε φυσιολογικά και CaP κύτταρα του Καυκάσιος προέλευσης, όπως αξιολογείται με ανάλυση ανοσοστυπώματος. Ίση φόρτωση πρωτεΐνης επιβεβαιώθηκε με ανοσοστύπωμα της ανιχνεύσεως για β-ακτίνη. Η κηλίδα που παρουσιάζονται εδώ είναι αντιπροσωπευτικά τριών δειγμάτων. (ΑΙΙ) Ιστόγραμμα που δείχνει την ανάλυση πυκνομετρίας των ανοσοκηλίδων του BMI1. *, P & lt? 0,05? μαύρη γραμμή στο γκρι πλαίσιο, διάμεσες τιμές. (Bi) Σχήμα αντιπροσωπεύει το επίπεδο της BMI1 πρωτεΐνης σε φυσιολογικά και CaP κύτταρα της αφρικανικής αμερικανικής προέλευσης όπως εκτιμήθηκε με ανάλυση ανοσοστυπώματος. Ίση φόρτωση πρωτεΐνης επιβεβαιώθηκε με ανοσοστύπωμα της ανιχνεύσεως για β-ακτίνη. Οι κηλίδες που εμφανίζονται εδώ είναι αντιπροσωπευτικά τριών δειγμάτων. (ΒΙΙ) Ιστόγραμμα που δείχνει την ανάλυση πυκνομετρίας των ανοσοκηλίδων του BMI1. *, P & lt? 0,05? μαύρη γραμμή στο γκρι πλαίσιο, διάμεσες τιμές. (C) Σχήμα παριστά την ανίχνευση των BMI1 σε όρους μέσου καλλιέργειας διαφορετικών κυττάρων όπως εκτιμήθηκε με ανάλυση Slot-κηλίδος. Τα δεδομένα κηλίδες που εμφανίζονται εδώ είναι αντιπροσωπευτικά τριών δειγμάτων. (Δ) Ανίχνευση της εκκρινόμενης πρωτεΐνης BMI1 σε ρυθμισμένο μέσο καλλιέργειας των κυττάρων. Κάθε μπάρα στο ιστόγραμμα αντιπροσωπεύει μέση τιμή ± SE από 3 ανεξάρτητα πειράματα, * αντιπροσωπεύει P & lt?. 0.05

Η

έκφραση BMI1 σε φυσιολογικά και νεοπλασματικά κύτταρα του προστάτη που εκπροσωπεί τη νόσο CaP σε Αφρική-Αμερικανούς άνδρες

Ηλικία-διορθωμένα στοιχεία από SEER μελέτη έδειξε ότι οι Αφρο-Αμερικανός άνδρες έχουν 60% μεγαλύτερη συχνότητα και 125% υψηλότερα ποσοστά θνησιμότητας από το Cap από την καυκάσια άνδρες [1], [13]. Φυλή και το οικογενειακό ιστορικό είναι οι δύο πιο ευρέως αποδεκτή παράγοντες κινδύνου για την ασθένεια αυτή [1]. Η κατανόηση των βασικών βιολογικών μηχανισμών που ευθύνονται για την εξέλιξη της ΚΓΠ θα οδηγήσει τελικά στην ανάπτυξη πιο αποτελεσματικών θεραπευτικών στρατηγικών. Έχουμε καθορίσει τα επίπεδα έκφρασης BMI1 σε ένα κύτταρο-based in vitro μοντέλο που εκπροσωπούν διαφορετικούς φαινοτύπους της νόσου CaP σε Αφρο-Αμερικανούς άνδρες. Αυτές περιλαμβάνουν RC77N /E (που αντιπροσωπεύουν την κανονική επιθηλιακά κύτταρα του προστάτη σε Αφρο-Αμερικανός άνδρες), RC77T /Ε (που αντιπροσωπεύουν ογκογόνα επιθηλιακά κύτταρα του προστάτη εξαρτώμενων από ανδρογόνα), E006 (που εκπροσωπούν μη ογκογονικά επιθηλιακά κύτταρα του προστάτη εξαρτώμενων από ανδρογόνα) και PCA-2b ( εκπροσωπούν CRPC φαινότυπο? ωστόσο διατηρούν ανδρογόνων αποκρισιμότητα) [13] – [14]. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 2 (Bi-ΙΙ), όλα CaP κυτταρικές σειρές RC77T /E, PCa2b και E006 εμφάνισαν υψηλότερη έκφραση του BMI1 πρωτεΐνης σε σχέση με τα φυσιολογικά κύτταρα RC77N /E. Αυτά τα δεδομένα (Σχ. 2Α-Β) υποδηλώνουν μια πιθανότητα ότι η έκφραση της ενδοκυτταρικής πρωτεΐνης BMI1 μπορεί να συσχετίζεται με τα επίπεδα εκκρίσεως BMI1 σε ανθρώπινους ιστούς και μπορεί να παίζει ένα ρόλο στην επιθετικότητα του ανθρώπινου Κεφ.

BMI1 είναι ένα εκκριτικό πρωτεΐνη: Ανίχνευση σε μέσα άνευ ορού από κυτταρικές καλλιέργειες CaP

Η παρουσία του BMI1 στην κορυφαία περιοχή του προστάτη και επιθηλιακά κύτταρα περιοχή στρωματικά μας ώθησε να υποθέσει ότι θα μπορούσε να είναι μία εκκριτική πρωτεΐνη στη φύση. Για να ελέγξετε την υπόθεσή μας ρωτήσαμε αν BMI1 εκκρίνεται από τα καρκινικά κύτταρα κάτω από συνθήκες καλλιέργειας. Για να ανιχνευθούν BMI1 πρωτεΐνη σε μέσα καλλιέργειας κυττάρων Cap, χρησιμοποιήσαμε την τεχνική Slot-κηλίδος. Τα κύτταρα σε ένα επίπεδο συρροή 80% αφέθηκαν να αναπτυχθούν σε φρέσκο ​​μέσο χωρίς ορό για 24 ώρες. Όπως είναι εμφανές από το Σχ. 2C, τα ελεύθερα μέσα ενημέρωσης ορού (που συλλέγονται από το Cap καλλιέργεια κυττάρων) ήταν θετικοί για BMI1 πρωτεΐνη. Αξίζει να σημειωθεί ότι, τα μέσα που συλλέγονται από καλλιέργειες επιθηλιακών κυττάρων εκπρόσωπος της κανονικής και της καλοήθους υπερπλασίας του προστάτη όρο παρουσίασαν πολύ χαμηλή πρωτεΐνη BMI1 (Σχ. 2C).

Η ποσοτικοποίηση της εκκριτικής BMI1 σε μέσα καλλιέργειας των κυττάρων που εκπροσωπούν το CaP σε Καυκάσιους και Αφρικής και της Αμερικής άνδρες

με απασχολεί ένα ανθρώπινο συγκεκριμένη τεχνική BMI1-ELISA, ήμασταν σε θέση να ανιχνεύσει και να ποσοτικοποιήσει BMI1 πρωτεΐνη που εκκρίνεται από τα κύτταρα που εκπροσωπούν το CaP σε Καυκάσιους και Αφρο-Αμερικανός άνδρες (Σχ. 2D). Προσδιορίσαμε εκκρινόμενα επίπεδα BMI1protein (α) στο μέσο καλλιέργειας των κανονικών, BPH1, και (β) στο μέσο καλλιέργειας των κυττάρων του όγκου που αντιπροσωπεύουν διάφορους τύπους καρκίνου. BMI1 ανιχνεύθηκε στα μέσα καλλιέργειας των κανονικών κυττάρων προστάτη (RWPE1? 0,45 ng /ml μέσου) και έχει ενδιαφέρον τα επίπεδα BMI1 δεν ήταν αυξημένα σε κύτταρα BPH1 (Σχήμα 2D).. Σε σύγκριση με τα φυσιολογικά κύτταρα RWPE1, κύτταρα CaP παρουσίασαν αυξημένη εκκριτική επίπεδα πρωτεΐνης BMI1 σε μέσα (Εικ. 2D). LNCaP, C42b, PC3 και τα κύτταρα Du145 παρατηρήθηκαν να εκκρίνουν BMI1 πρωτεΐνης σε ένα εύρος 1.3 με 3.4 ng /ml μέσου (Σχ. 2D). Είναι αξιοσημείωτο ότι BMI1 εκκρινόμενη πρωτεΐνη παρατηρήθηκε στα μέσα καλλιέργειας χωρίς ορό όλων των τύπων κυτταρικών σειρών CaP που αντιπροσωπεύουν από την κανονική RWPE1 σε μικρότερο επιθετικό LNCaP σε καρκίνο του προστάτη (CRPC) κύτταρα ευνουχισμός ανθεκτικά C42b μέσω εξαιρετικά επιθετική κύτταρα Du145 και PC3. Το εύρημα αυτό επιβεβαιώνει με τα δεδομένα που ελήφθησαν ασθενείς CaP που εκπροσωπούν προοδευτική στάδια της νόσου που αναλύθηκαν για τα επίπεδα της πρωτεΐνης ορού BMI1. Αξίζει να σημειωθεί ότι, τα μέσα ενημέρωσης που συλλέχθηκαν από τις καλλιέργειες επιθηλιακών κυττάρων E006 (που προέρχεται από την αφρικανική αμερικανική CaP ασθενών) εμφάνισαν σημαντικά υψηλή σε πρωτεΐνες BMI1 (Σχ. 2D). Αντίθετα, το μέσο καλλιέργειας των στρωματικών κυττάρων του προστάτη (WPMY1), φυσιολογικά επιθηλιακά κύτταρα κόλου (FHC) και κανονική παγκρεατικού πόρου επιθηλιακά κύτταρα (PDE) δεν εμφανίζουν κανένα εκκρινόμενα επίπεδα BMI1 (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Είναι ενδιαφέρον, που εκκρίνεται επίπεδα BMI1 δεν ήταν να παρατηρηθεί σε όλα τα είδη των παγκρεατικών (Kras-μεταλλαγμένο PDE, E6E7-Ras και E6E7-Ras-st) και κυτταρικές γραμμές καρκινώματος κόλου (SW480, HCT116), αλλά μόνο σε πολύ επιθετική παγκρεατικών κυτταρικών σειρών AsPC1 (σε πολύ χαμηλά επίπεδα? δεν παρουσιάζονται τα δεδομένα) και κύτταρα ΗΤ29 κόλου (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Τα δεδομένα ELISA της εκκριτικής BMI1 συμμορφώνεται με τις παρατηρήσεις μας στην immunhistochemical ανάλυση των δειγμάτων ιστού CaP όπου παρατηρείται αυξημένη χρώση στρωματικών για BMI1 πρωτεΐνη. Αυτή θα είναι η πρώτη έκθεση που δείχνει BMI1 ως εκκριτική πρωτεΐνη από τα καρκινικά κύτταρα.

Εκκρίνεται BMI1 στα μέσα καλλιέργειας είναι άμεσα συνδεδεμένη με ενδοκυτταρική BMI1 των καρκινικών κυττάρων

Επειδή παρατηρήθηκε BMI1 να εκκρίνει το το μέσο καλλιέργειας, επιδιώξαμε να διαπιστωθεί αν πρόκειται για έκκριση σχετίζεται με ενδοκυτταρική BMI1. Χρησιμοποιήσαμε μια αμφίδρομη προσέγγιση όπου BMI1 ήταν είτε νοκ-κάτω ή υπερεκφράζεται σε κύτταρα ΚΓΠ. Μετά από 24 ώρες μετά την επιμόλυνση, BMI1-κατέστειλε και BMI1-υπερεκφράζεται κύτταρα καλλιεργήθηκαν στα μέσα χωρίς ορό για περαιτέρω 24 ώρες. Στη συνέχεια, άνευ ορού μέσο από επιμολυσμένα κυτταρικές καλλιέργειες συλλέχθηκαν και αναλύθηκαν για ΒΜΙ πρωτεΐνη με την χρησιμοποίηση ELISA. επίπεδα πρωτεΐνης BMI1 παρατηρήθηκαν να είναι ιδιαίτερα μειωμένη σε κύτταρα BMI1-νοκ-κάτω και αυξημένη σε BMI1-υπερεκφράζεται κύτταρα (σχήμα 3Α-F? ρ. & lt? 0,05). Αυτά τα δεδομένα δείχνουν ότι BMI1-αθόρυβη καρκινικά κύτταρα εκκρίνουν σημαντικά χαμηλά επίπεδα της πρωτεΐνης BMI1 και BMI1-υπερεκφράζεται κύτταρα CaP εκκρίνεται σημαντικά υψηλά επίπεδα BMI1 πρωτεΐνης στο μέσο καλλιέργειας, τα στοιχεία δείχνουν ότι η ενδοκυτταρική BMI1 συσχετίζεται άμεσα με τις εκκριτική επίπεδα πρωτεΐνης BMI1 ( σχήμα 3Α-F? ρ. & lt? 0,05). Υποθέτουμε ότι αύξηση των ενδοκυτταρικών επιπέδων BMI1 σε κύτταρα CaP ανέρχεται σε επακόλουθη απελευθέρωση του από τα επιθηλιακά κύτταρα στον εξωκυττάριο χώρο και προκαλεί μια ακίδα στα εκκριτικά επίπεδα πρωτεΐνης BMI1.

(Α-Ρ) Σχήμα αντιπροσωπεύει το αποτέλεσμα (Α-Γ) BMI1-σίγηση και (D-F) BM11-υπερέκφραση στο επίπεδο της εκκρινόμενης πρωτεΐνης BMI1 σε όρους μέσων διαφορετικών κυττάρων όπως αξιολογείται με δοκιμασία ELISA. Ίση φόρτωση πρωτεΐνης επιβεβαιώθηκε με της ανιχνεύσεως ανοσοστυπώματα για β-ακτίνη. Κάθε μπάρα στο ιστόγραμμα αντιπροσωπεύει μέση τιμή ± SE από 3 ανεξάρτητα πειράματα, * αντιπροσωπεύει P & lt? 0,05. (Gi) Σχήμα αντιπροσωπεύει το επίπεδο της πρωτεΐνης στο BMI1 ανδρογόνων (R1881) κατεργασμένα και μη-κατεργασμένα κύτταρα CaP όπως εκτιμήθηκε με ανάλυση ανοσοστυπώματος. Ίση φόρτωση πρωτεΐνης επιβεβαιώθηκε με ανοσοστύπωμα της ανιχνεύσεως για β-ακτίνη. (GII) Ιστόγραμμα που δείχνει την ανάλυση πυκνομετρίας των ανοσοκηλίδων του BMI1. *, P & lt? 0,05? μαύρη γραμμή στο γκρι πλαίσιο, διάμεσες τιμές.

Η

BMI1 έκφραση στα κύτταρα που εκπροσωπούν το CaP σε Καυκάσιους και Αφρο-Αμερικανός άνδρες είναι ανεξάρτητη από την επιρροή των ανδρογόνων

Οι διαφορές μεταξύ των φυλών στις συγκεντρώσεις ανδρογόνων και η ευαισθησία θεωρούνται σημαντικοί παράγοντες για τις φυλετικές ανισότητες στο Cap [20]. Ωστόσο, ανδρογόνων συγκεντρώσεις δεν συσχετίζονται πάντα με το PSA σε ασθενείς με καρκίνο και μερικές φορές παραπλανούν το αποτέλεσμα [21]. Είμαστε δίπλα ρώτησε αν τα επίπεδα BMI1 στους ανθρώπους Cap ασθένεια έχει σχέση με την παρουσία ή την απουσία των ανδρογόνων. Για το σκοπό αυτό επιλέξαμε vcap (που αντιπροσωπεύουν ανδρογόνο-ανεξάρτητες CRPC φαινότυπο σε Καυκάσιο πληθυσμό), E006 (που αντιπροσωπεύουν ανδρογονοεξαρτώμενων μη ογκογόνων επιθηλιακά κύτταρα του προστάτη από την αφρικανική-αμερικανική πληθυσμού) και PCA-2b (ανδρογόνων ανταπόκριση CRPC κύτταρα από την αφρικανική-αμερικανική πληθυσμού ). Ανδρογόνο θεραπεία (R1881? 1 ηΜ) vcap, E006, και PCA-2b κύτταρα δεν προκάλεσε σημαντική αλλαγή στα επίπεδα των BMI1 πρωτεΐνης (Εικ 3Gi-II?. P & lt? 0,05) γεγονός που υποδηλώνει ότι η έκφραση BMI1 είναι ανεξάρτητη από την κατάσταση των ανδρογόνων . Αυτά τα δεδομένα είναι σημαντική γιατί επιθετική ΚΓΠ τόσο του Καυκάσου και της Αφρικής και της Αμερικής είναι συχνά ανδρογόνων ανεξάρτητη [6], [19].

Ανίχνευση BMI1 πρωτεΐνης στο αίμα των ασθενών ανθρώπινης CaP

Δεδομένου ότι, BMI1 πρωτεΐνη παρατηρήθηκε να εκκρίνεται από τα ανθρώπινα επιθηλιακά κύτταρα του προστάτη in vitro. Είμαστε δίπλα ρώτησε αν BMI1 μπορούσε να ανιχνευθεί στον ορό των ασθενών με καπάκι. Με απασχολεί η ανάλυση Slot-κηλίδα, προσδιορίσαμε τα επίπεδα των BMI1 πρωτεΐνης σε λευκωματίνη χωρίς εκκαθαριστεί ορούς, που παρασκευάζονται από ανθρώπινο αίμα (επιλέγονται τυχαία από την κανονική και ασθενείς ΚΓΠ). Όπως είναι εμφανές από το Σχ. 4Α, BMI1 πρωτεΐνη ανιχνεύθηκε στον ορό των ασθενών Κεφ.

(Α) Σχήμα παριστά την ανίχνευση των BMI1 σε ανθρώπινο ορό, όπως εκτιμάται από αναλύσεις Slot-κηλίδος. Τα δεδομένα στυπώματος που παρουσιάζονται εδώ είναι αντιπροσωπευτικά τριών δειγμάτων. (Β) Οικόπεδο BMI1 (ng /ml, log-2) έναντι Rank Group ΚΓΠ (n = 58). Οριζόντια γραμμή είναι η μέση ομάδα. (C) Οικόπεδο PSA (ng /ml, log-2) έναντι Rank Group ΚΓΠ (n = 58). Οριζόντια γραμμή είναι η μέση ομάδα. Κάθε ομάδα (Σχήμα F & amp?. G) αντιπροσωπεύεται ως 1 = Κανονικό, 2 = Φάση ΙΙ, 3 = Φάση ΙΙΙ, και 4 = Stage IV καπάκι. (Δ) Το σχήμα αναπαριστά τη συσχέτιση μεταξύ ορού PSA (ng /ml, log-2) και ορό BMI1 (ng /ml, log-2) (Spearman r = 0,58, p & lt? 0.001) σε 58 άνδρες. Γραμμή είναι από την απλή γραμμική παλινδρόμηση.

Η

επίπεδα πρωτεΐνης ορού BMI1 αυξάνει προοδευτικά με την ανάπτυξη CaP σε ανθρώπους ασθενείς

επόμενο ρώτησε αν τα επίπεδα της πρωτεΐνης ορού BMI1 φέρουν μεταφραστικό ενδιαφέρον ως πιθανή βιοδείκτη για τη σταδιοποίηση και την ανάπτυξη της νόσου CaP σε ανθρώπους. Για το σκοπό αυτό ερευνήσαμε αν τα επίπεδα πρωτεΐνης ορού BMI1 εμφανίζουν μια σημαντική διαφορά σε σχέση με διαφορετικά στάδια του πώματος. Προσδιορίσαμε τα επίπεδα ορού BMI1 σε μία ομάδα από 58 ανθρώπινα υποκείμενα που αντιπροσωπεύουν την κανονική ασθένεια ελεύθερη κατάσταση, και τα διάφορα στάδια καπάκι, δηλ., Η κανονική (n = 10), Στάδιο II CaP (n = 16), το στάδιο III CaP (n = 15 ), και Stage IV ΚΓΠ (n = 17). Τα μέσα επίπεδα πρωτεΐνης ορού BMI1 σε φυσιολογικά ανθρώπινα υποκείμενα (n = 10), υπολογίζεται ότι είναι περίπου 1,72 ± 0,30 ng /ml στον ορό (Πίνακας 1). Ο ορός επίπεδο BMI1 για κάθε ασθενή παρέχεται στον Πίνακα 2. Τα επίπεδα ορού-BMI1 ήταν χαμηλότερες σε φυσιολογικά ανθρώπινα υποκείμενα σε σχέση με ασθενείς καπάκι. τα επίπεδα της πρωτεΐνης BMI1 σε ασθενείς ανθρώπινο ΚΓΠ 3,91 ± 0,60 ng /ml σε στάδιο CaP ΙΙ, 8,55 ± 1,95 ng /ml στο Cap στάδιο ΙΙΙ και 10,84 ± 2,44 ng /ml σε στάδιο IV ΚΓΠ (Πίνακας 1). Αυτά τα δεδομένα έδειξαν ότι η μέση επίπεδα πρωτεΐνης ορού BMI1 προοδευτικά αυξάνεται με την αύξηση στάδιο της νόσου CaP σε ανθρώπους (r = 0,72, ρ & lt? 0.001, Εικόνα 4Β).. Αυτά τα δεδομένα υποδεικνύουν ότι τα επίπεδα της πρωτεΐνης ορού BMI1 διαθέτουν ένα μεταφραστικό δυναμικό που πρέπει να αναπτυχθεί ως ένα νέο ορό βιοδείκτη για τη νόσο CaP όμως περαιτέρω μελέτες σε μια μεγάλη σειρά ασθενών είναι δικαιολογημένη.

Η

Ορός επίπεδα -BMI1protein συσχετίστηκαν με τα επίπεδα του PSA στον ορό

στη συνέχεια ερευνήσαμε εάν η αύξηση BMI1 κατά τη διάρκεια εξελίξεις καπάκι έχει μια συσχέτιση με τα επίπεδα του PSA σε αυτούς τους ασθενείς (n = 58). Σε αυτή την ομάδα ασθενών καπάκι, ένωση του PSA με την εξέλιξη του Cap παρατηρήθηκε επίσης (r = 0,57, p & lt? 0.001, Σχήμα 4C.). Το επίπεδο του PSA στον ορό για κάθε ασθενή παρέχεται στον Πίνακα 2. BMI1 παρουσιάστηκε ελάχιστα συσχετίζεται με PSA (r = 0,58, ρ & lt? 0,001, σχ 4D.). BMI1 παρέμεινε σημαντικά (p & lt? 0.001). Κατά την προσαρμογή για το PSA σε ένα μοντέλο παλινδρόμησης πρόβλεψη της ομάδας στάδιο καρκίνου

Συζήτηση

Ένα προγνωστικό βιοδείκτη παρέχει αποδεικτικά στοιχεία σχετικά με την ενδεχόμενη έκβαση ενός ασθενούς από μια ασθένεια ανεξάρτητα από το δεδομένη θεραπεία, ενώ μια έξυπνη-βιοδείκτη υπολογίζει την πιθανότητα απόκρισης /οφέλους σε μια συγκεκριμένη θεραπεία σε ένα συγκεκριμένο πλαίσιο [22].