Αφηρημένο

Προ-κλινικά μοντέλα πόνου από καρκίνο των οστών που μιμείται την ανθρώπινη κατάσταση είναι υποχρεωμένοι να απαντήσουν με την κλινική πραγματικότητα. Καρκίνο του μαστού ή του προστάτη ασθενείς να αντιμετωπίσουν με οστικές μεταστάσεις βιώνουν δυσεπίλυτα πόνο, η οποία επηρεάζει την ποιότητα ζωής τους. Προηγμένη παρακολούθηση έτσι ώστε να αποσαφηνιστούν οι μηχανισμοί του πόνου από καρκίνο των οστών και να τελειοποιήσουν τις θεραπείες. Στο μοντέλο μας καρκινώματος μαστικού μηριαίου εμφύτευση κυττάρων MRMT-1 αρουραίου, η έναρξη του πόνου και η ανάπτυξη του όγκου παρακολουθήθηκαν για 21 ημέρες. Η χειρουργική επέμβαση χωρίς αρθροτομή επέτρεψε την καταγραφή των τυχαίων πόνου σε δωρεάν μετακίνηση αρουραίους. Μαζί με τη σταδιακή ανάπτυξη της μηχανικής αλλοδύνης και υπεραλγησίας, συμπεριφορικές ενδείξεις περιπατητική πόνο ανιχνεύθηκαν κατά την ημέρα 14, χρησιμοποιώντας μια δυναμική συσκευή με βάρη. Οστεοπενία αποκαλύφθηκε από την ημέρα 14 ταυτόχρονα με αποδιοργάνωση της αρχιτεκτονικής δοκιδωτού (μCT). οστικές μεταστάσεις έγιναν ορατές ήδη από την ημέρα 8 με μαγνητική τομογραφία (Τ

1-Gd-DTPA) πριν από την ανίχνευση του πόνου. PET (Na

18F) συν-καταγραφή αποκάλυψε ενδοοτικού δραστηριότητα, όπως καθορίζεται από την ανατομική υπέρθεση πάνω από μαγνητική τομογραφία, σύμφωνα με οστεοκλάστες υπερκινητικότητα (χρώση TRAP). Ο πόνος και η καταστροφή των οστών επιδεινώθηκαν με το χρόνο. Οστικής ανακατασκευής συνοδεύτηκε από c-Fos (νωτιαίο) και ATF3 (DRG) νευρωνική ενεργοποίηση, υπέστη αστροκυττάρων (GFAP) και μικρογλοία (Iba1) αντιδραστικότητα στην οσφυϊκή μοίρα της σπονδυλικής στήλης. ζωικό μοντέλο μας δείχνει τη σημασία της ταυτόχρονης καταγραφής πόνο και την εξέλιξη του όγκου και θα μας επιτρέψει να χαρακτηρίζουν καλύτερα θεραπευτικές στρατηγικές για το μέλλον

Παράθεση:. Doré-Savard L, Otis V, Belleville Κ, Lemire Μ, Archambault Μ , Tremblay L, et al. (2010) Behavioral, Ιατρικής Απεικόνισης και ιστοπαθολογικά χαρακτηριστικά του ένα νέο μοντέλο αρουραίων του Bone Cancer πόνος. PLoS ONE 5 (10): e13774. doi: 10.1371 /journal.pone.0013774

Επιμέλεια: Pedro R. Lowenstein, Cedars-Sinai Medical Center και το Πανεπιστήμιο της Καλιφόρνια στο Λος Άντζελες, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 5 Φλεβάρη του 2010 ? Αποδεκτές: 11 Οκτ, 2010? Δημοσιεύθηκε: 29 Οκτωβρίου, 2010

Copyright: © 2010 Doré-Savard et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίζεται από επιχορηγήσεις από το Cancer Research Society (PS) και από την CIHR /Rx & amp? D συνεργατικό ερευνητικό πρόγραμμα σε συνεργασία με την καναδική Εταιρεία Πόνου, η AstraZeneca Inc., CIHR Ινστιτούτο Γήρανσης, CIHR Ινστιτούτο του μυοσκελετικού συστήματος Υγείας και Αρθρίτιδα, CIHR Ινστιτούτο των Νευροεπιστημών, Ψυχικής Υγείας και Τοξικομανίας (PS) και το Δίκτυο Bio-Imaging Κεμπέκ. L.D.-S. κατέχει CIHR Frederick Banting και Charles Best, FRSQ, καναδική Αρθρίτιδα Δικτύων και υποτροφίες RSBO. Υ.Γ. είναι μια CIHR νέο ερευνητή. Ε.Ο. είναι μια FRSQ Τζούνιορ 1- νέο ερευνητή. P.S., M.L., L.G. και R.L. είναι μέλη της FRSQ που χρηματοδοτούνται από το Centre de Recherche Clinique Etienne-Le Bel. Υ.Γ. και L.G είναι μέλη του Δικτύου Κεμπέκ Pain Research, Μ.Ι. και R.L. είναι μέλη του Δικτύου Bio-Imaging Κεμπέκ. Μ.Ι. είναι ο Καναδάς Ερευνών πρόεδρος στην Μαγνητική Τομογραφία. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:. Astra-Zeneca Inc. παρέχεται κεφαλαίων μέσω ενός προγράμματος Καναδική Εταιρεία Πόνου. Τα πειράματα δεν περιλαμβάνει οποιοδήποτε προϊόν Astra-Zeneca ή ένωση ούτε Astra-Zeneca παίζουν ρόλο στην επιλογή των τελικών δικαιούχων. Κανένας από τους συγγραφείς είναι εργαζόμενοι ή οι ιδιοκτήτες της Astra-Zeneca. Κατά συνέπεια, αυτή η εμπορική χρηματοδότη δεν μεταβάλλει την τήρηση των συγγραφέων σε όλους PLoS ONE πολιτικές για την ανταλλαγή δεδομένων και υλικών, όπως περιγράφεται σε απευθείας σύνδεση από τον οδηγό για τους συγγραφείς.

Εισαγωγή

Μεταξύ των καρκίνων με κακή πρόγνωση , εκείνες που προέρχονται από το στήθος, πνεύμονα και του προστάτη συνήθως μετάσταση στον σκελετό [1], [2]. Ενώ οι πρωτογενείς καρκίνοι των οστών είναι σπάνια, πάνω από το 70% των ανθρώπων που αντιμετωπίζουν με προχωρημένο καρκίνο προστάτη ή μαστού θα αναπτύξει οστικές μεταστάσεις [3]. Ο κύριος παράγοντας υπεύθυνος για την μείωση της ποιότητας ζωής στις οστικές μεταστάσεις που φέρουν οι ασθενείς είναι ο πόνος [4].

πόνο του καρκίνου των οστών προέρχεται από τη συμπίεση των νεύρων, την ισχαιμία και την απελευθέρωση προφλεγμονωδών ουσιών από τον όγκο και τα κύτταρα από το περιβάλλον των οστών [5]. Έτσι, τα καρκινικά κύτταρα λυτική επηρεάζουν ομοιόσταση των οστών μέσω της απελευθέρωσης των κυτοκινών προώθηση παθολογικών επαναρρόφησης από τους οστεοκλάστες [6], [7]. Εκτός από την καταστροφή των οστών [8], υπερκινητικότητα οστεοκλαστών δημιουργεί ένα όξινο περιβάλλον υπεύθυνο για την στέγαση του πόνου [9]. Ανταποδοτικά και άναρχο σχηματισμό των οστών από οστεοβλάστες συμπιέζει τερματικό απολήξεις ελεύθερες νευρικές διάσπαρτα στο μυελό των οστών, της μήτρας και περιόστεο [10], που οδηγούν στη γένεση και τη διατήρηση του πόνου. Η συσχέτιση αυτών των φαινομένων παράγει μια μοναδική μηχανική και νευροχημικές εμφάνιση που πηγαίνει πέρα ​​από το συνδυασμό του νευροπαθητικού και φλεγμονώδους άλγους [11].

μοναδικά χαρακτηριστικά του πόνου από καρκίνο των οστών καθιστούν θεραπευτικά δυσεπίλυτο [11]. Πράγματι, τυπικό προσεγγίσεις συμπεριλαμβανομένων των αντι-φλεγμονώδη φάρμακα και οπιούχα έχουν περιορισμένη αποτελεσματικότητα ανακούφιση [12]. Λόγω της προοδευτικής φύσης του, οι αυξανόμενες δόσεις που απαιτούνται για την ανακούφιση του πόνου επαρκώς από καρκίνο των οστών [13], που οδηγεί σε παρενέργειες και τελικά να άκαρπες συμμόρφωσης [4], [14]. Επιπλέον, η μορφίνη αποδείχθηκε πρόσφατα για την επιτάχυνση του καρκίνου που προκαλείται από απώλεια οστού σε οστεολυτικές καρκίνους [15], [16]. Ομοίως, πολλά υποσχόμενη κατά της απορρόφησης των διφωσφονικών θεραπείες [17], [18], [19], [20], [21], φαίνεται να επιβραδύνει την εξέλιξη του καρκίνου και έμμεσα να ανακουφίσουν τον πόνο, είχαν σκιάζεται από συννοσηρές οστεονέκρωση [22]. Οστών καρκινικού πόνου, συνεπώς, παραμένει μια ανησυχία, τονίζοντας την ανάγκη να τονίσουν την κατανόησή μας για νευροβιολογικές μηχανισμούς της, προκειμένου να αναπτύξουν πιο αποτελεσματικές στρατηγικές.

Τα ζωικά μοντέλα έχουν εκπονηθεί για να μιμηθεί την ανθρώπινη κατάσταση σε μια προσπάθεια να καταλάβουν τον πόνο του καρκίνου των οστών . μοντέλα ποντικών πτέρνας και βραχιονίου του καρκίνου [23], ή μοντέλα αρουραίων του καρκίνου του μαστού με κνήμης MRMT-1 [24], 4T.1 [25] και Walker 256 [26], ή προστατικής ΑΤ-3.1 [27] κύτταρα αναπτύχθηκαν για να χαρακτηρίσει τις τοπικές αλλαγές ή νευρική πλαστικότητα της σπονδυλικής δομές που προεξέχουν προς το οστό. Από κλινική άποψη, το μηριαίο οστό, ωστόσο, αντιπροσωπεύει την πιο συχνά επηρεάζεται μακρών οστών [28]. Οι Mouse μηριαία μοντέλα που περιλαμβάνουν ενδομυελική εμφύτευση καρκινικών κυτταρικών σειρών ινοβλαστών για να προκληθεί πόνος που αναφέρθηκαν (π.χ. ινοσάρκωμα [29], [30]). Ωστόσο, τα εν λόγω μοντέλα που βασίζονται σε μιμούνται πρωτογενείς καρκίνους των οστών. Η πλειοψηφία των δευτερογενών καρκίνων των οστών προέρχονται από το στήθος ή του προστάτη, γνωστό για τις ιδιότητες των οστών-μεταστάσεις τους [31]. Ωστόσο, για τα μοντέλα που περιλαμβάνουν αυτούς τους τύπους των κυττάρων, επαγωγή είναι είτε ενδοφλέβια (που οδηγεί σε πολλαπλές μεταστάσεις χώρο [32], [33]) ή ακολουθεί μια χειρουργική διαδικασία στην οποία ένα επιγονατιδικό arthrotomia και μερική τροποποίηση της άρθρωσης του γονάτου είναι επιρρεπή σε μειωμένη μετακίνηση , η οποία με τη σειρά της ωθεί την αξιολόγηση της συμπεριφοράς του πόνου που σχετίζονται με. Πράγματι, η εισβολή και χειρουργικές διαδικασίες πρέπει να παραμείνει ελάχιστη προκειμένου να αξιολογηθεί παροξυσμικό πόνο χωρίς παρεμβολές. Αυτό το τελευταίο πόνο εκδήλωση είναι η πιο πυρίμαχα προϋπόθεση για να ξεπεραστεί για τα άτομα να αντιμετωπίσουν με χρόνιο πόνο του καρκίνου και μεταξύ των πιο σκληρά για να αξιολογηθεί σε ζωικά μοντέλα.

Εκτός από την αξιολόγηση του πόνου, τα μέσα για την ανίχνευση και την παρακολούθηση παθολογικών καταστάσεων των οστών έχουν εξελιχθεί να ενσωματώσει X-ray μικρο-υπολογιστική αξονική τομογραφία (μCT) και σπινθηρογράφημα οστών [34]. Παρ ‘όλα αυτά, η προληπτική προσδιορισμό της ωοτοκίας και εξέλιξης του όγκου έχει τη δυνατότητα να βελτιώσει αναλγητικό δοσολογιών και να περιορίσει την ανάπλαση του οστού. Προηγμένη μη επεμβατική και χαμηλή ακτινοβολία ιατρικής απεικόνισης, όπως η τομογραφία εκπομπής ποζιτρονίων (ΡΕΤ) και η μαγνητική τομογραφία (MRI) ή ο συνδυασμός και των δύο, θα ήταν επιθυμητό να παρέχεται αποτελεσματική και επαναλαμβανόμενη εξετάσεις για την ακριβή και αυστηρό προσαρμογές αναλγητική θεραπεία [35] .

Ο αρουραίος παραμένει το πιο μελετημένο είδος σε παραδείγματα πόνο [36]. Ως εκ τούτου, επιλέγεται μια κυτταρική γραμμή καρκινώματος του μαστού αρουραίου για αυθόρμητα μεταστάσεις και μεταφυτεύσιμων ιδιότητές του. Η ικανότητα του MRMT-1 προς μετάσταση σε απομακρυσμένα όργανα είναι εγγενής σε αυτές τις συγγενικά κύτταρα [37]. Στην παρούσα μελέτη, περιγράφουμε μια παρέμβαση στο μηριαίο οστό του αρουραίου Sprague-Dawley την εμφύτευση κυττάρων όγκου του μαστού χρησιμοποιώντας μία ελαφριά χειρουργική διαδικασία σε μία προσπάθεια να μιμηθεί την κλινική πόνου. Χρησιμοποιήσαμε έναν συνδυασμό καινοτόμων συμπεριφορικές προσεγγίσεις και την ιατρική απεικόνιση, υποστηριζόμενες από ανοσοϊστοχημική και παθολογικές παρατηρήσεις, για το χαρακτηρισμό της μοντέλο. Η μελέτη αποσκοπεί στη βελτίωση της κλινικής σημασίας σε σχέση με το μοντέλο και τα εργαλεία που χρησιμοποιήθηκαν για τη διαλογή νέων ενώσεων μολύβδου, προκειμένου να χαρακτηρίσει την εξέλιξη του όγκου των οστών, καθώς και για τη διαλεύκανση των μηχανισμών που διέπουν τη γένεση και τη διατήρηση του πόνου από καρκίνο των οστών.

Μέθοδοι

καλλιέργειας κυττάρων

όγκου μαστού μετάσταση του αρουραίου (MRMT-1) κύτταρα (καρκίνωμα) ήταν ευγενική προσφορά από το τηλέφωνο Resource Center Ιατροβιολογικών Ερευνών Ινστιτούτο Ανάπτυξης, γήρανση και ο καρκίνος (Tohoku University 4-1, Seiryo, Aoba-ku, Σεντάι, Ιαπωνία) και συλλέχθηκαν σε μέσο RPMI 1640 (Gibco, Montreal, Quebec, Canada) συμπληρωμένο με 10% εμβρυϊκό βόειο ορό (απενεργοποιημένο με θέρμανση) και 2% πενικιλίνη /στρεπταβιδίνη (Gibco, Montreal, QC, Καναδάς). Τα κύτταρα αποκολλήθηκαν με σύντομη έκθεση σε 0.25% β /ο τρυψίνη-ΕϋΤΑ (Gibco, Montreal, QC, Canada) και προετοιμάστηκαν για ενέσιμα. Εν συντομία, τα κύτταρα σφαιροποιήθηκαν με φυγοκέντρηση, ξεπλύθηκε με 1 ml ισορροπημένο διάλυμα άλατος Hank απαλλάσσεται του ασβεστίου, μαγνησίου ή φαινόλη (HBSS? Gibco, Montreal, QC, Canada) (3 λεπτά στους 200 χ g.) Και περαιτέρω φυγοκεντρήθηκε με τον ίδιο συνθήκες. Το σφαιρίδιο επαναιωρήθηκε σε 1 ml HBSS, και τα κύτταρα μετρήθηκαν με αιμοκυτταρόμετρο. Τα κύτταρα αραιώθηκαν για να επιτευχθεί μια τελική συγκέντρωση για έγχυση 30,000 κυττάρων σε 20 μΐ και διατηρούνται επί πάγου πριν από την επέμβαση

Ζώα

Ενήλικες αρσενικοί αρουραίοι Sprague-Dawley (200-225 g?. Charles River Laboratories, St.-Constant, Κεμπέκ, Καναδάς) διατηρήθηκαν σε ένα κύκλο φωτός /σκότους 12 ωρών φωτός με την πρόσβαση σε τροφή και νερό

κατά βούληση

. διαδικασίες που αφορούν τα ζώα εγκρίθηκαν από την Επιτροπή Δεοντολογίας για την φροντίδα των ζώων και πειραματισμός του Université de Sherbrooke και διεξάγονται σύμφωνα με τους κανονισμούς του Καναδικού Συμβουλίου Φροντίδας Ζώων (CCAC). Οι αρουραίοι εγκλιματίστηκαν για 4 ημέρες στην εγκατάσταση των ζώων και για 2 ημέρες για να χειρισμούς και τις συσκευές πριν από μελέτες συμπεριφοράς. Σημειώστε ότι τα ζώα ελέγχονται για τον πόνο και να χρησιμοποιηθούν για ανοσοϊστοχημικές αναλύσεις ήταν διαφορετικές από αυτές που απεικονίστηκαν με MRI ή μαγνητική τομογραφία, PET, δεδομένου ότι η παρατεταμένη αναισθησία μπορεί να επηρεάσει τις αποκρίσεις συμπεριφοράς.

Χειρουργική

Μετά την πλήρη αναισθησία με 5 % ισοφλουράνιο (Abbott Laboratories, Montreal, QC, Canada), οι αρουραίοι τοποθετούνται σε ύπτια θέση και δεξιά πόδια τους ξυρίστηκαν και απολυμάνθηκαν με 70% ν /ν αιθανόλη. Η αναισθησία διατηρήθηκε με 2,5% ισοφλουράνιο και τα μάτια αρουραίων προστατεύτηκαν με ένα οφθαλμικό υγρό τζελ (Tear-gel, Novartis, Mississauga, ΟΝ). Μια ελάχιστη τομή δέρματος (8-10 mm) εκτίθενται τα

μηριαίο τετρακέφαλο

. Η

πλατύ πλάγιο

έγινε τομή (5-8 mm σε μήκος) για να εκθέσει το μηριαίο επικόνδυλο, ενώ η επιγονατιδικού συνδέσμου παρέμεινε άθικτη και ελάχιστη ζημία που προκλήθηκε στους γύρω μυς και τα αιμοφόρα αγγεία. Χρησιμοποιώντας ένα 0,8 στερεοταξικό τρυπάνι (Foredom, Bethel, CT, USA) συνδέεται με ένα 1,75 mm καρβίδιο χάλυβα αγριάδα (Stoelting Co., WoodDale, IL, USA), ένα μικρό και επιφανειακή κοιλότητα απαλλάσσονται από γρέζια μεταξύ του έσω επικόνδυλο και της φυματίωσης προσαγωγό (περίπου 1 mm σε βάθος). Σε αυτή την κοιλότητα, μια βελόνα διαμετρήματος 25 εισήχθη σε μια γωνία 45 °, επιτρέποντάς της να φθάσει στο κανάλι ενδομυελική του μηριαίου οστού. Η βελόνα υποκαταστάθηκε με ένα αμβλύ άκρο βελόνα διαμετρήματος 25 συνδεδεμένης με μία σύριγγα 50 μΐ Hamilton περιείχε 20 μΙ του κυτταρικού εναιωρήματος (ομάδα καρκίνος) ή του HBSS (ομάδα sham). Η σύριγγα αφέθηκε στη θέση του για 1 λεπτό για να επιτρέψει κύτταρο διασπορά στο μυελό των οστών. Η βελόνα στη συνέχεια απομακρύνθηκε και η κοιλότητα σφραγίστηκε με οδοντιατρικό αμάλγαμα (Prodigy Α3, Kerr, Orange, CA) και πολυμερίζεται με ένα ελαφρύ σκλήρυνσης (QHL75, Dentsply, Milford, DE). Η περιοχή πλύθηκε εξαντλητικά με στείρο απιονισμένο νερό. Ο μυς και το συνδετικό ιστό έκλεισαν με ασυνεχές ράμμα γίνονται με τη συνθετική απορροφήσιμα ράμματα (Monocryl, Ethicon, Sommerville, NJ), και το δέρμα κλείστηκε με ένα συνεχές ράμμα από μη απορροφήσιμο χειρουργικό ράμμα (Prolene, Ethicon, Sommerville, NJ ). Η πληγή τελικά πλένεται με 3% ν /ν υπεροξειδίου και ψεκάζονται με μια πικρή λύση (υγεία Aventix των ζώων, Flamborough, ON).

Behavioral μελέτες

Μηχανική αλλοδυνία

εκτιμήθηκε χρησιμοποιώντας ένα δυναμικό esthesiometer πέλμα (Ugo Basile, Stoelting, IL, USA), ένα αυτοματοποιημένο εκδοχή της τρίχας νοη Frey. Τα ζώα τοποθετήθηκαν σε περιβλήματα σε υπερυψωμένο συρματόπλεγμα και αποκρίσεις σε στικτή μηχανική διέγερση αξιολογήθηκαν χρησιμοποιώντας το esthesiometer. Μια ευθεία μεταλλικό νήμα (διάμετρος 0,5 mm) προσανατολισμένο κάτω από το μαξιλάρι, μέχρι να αγγίξει την επιφάνεια του πέλματος του πίσω ποδιού και άρχισε να ασκήσει μία ανοδική δύναμη. Η δύναμη που απαιτείται για να αποσπάσει μια απόκριση απόσυρσης μετρήθηκε σε γραμμάρια και καταχωρούνται αυτόματα όταν το πόδι αποσύρθηκε ή η προκαθορισμένη αποκοπής επιτεύχθηκε (50 g). Πέντε τιμές ελήφθησαν εναλλάξ στις δύο σύστοιχη (λειτουργεί πλευρά) και ετερόπλευρα πίσω πόδια σε διαστήματα των 15 s.

Μηχανική αλγαισθητική απαντήσεις απόσυρση

μετρήθηκαν χρησιμοποιώντας ένα analgesiameter (Ugo Basile, Stoelting, IL , USA) που εφαρμόζει μία γραμμικά αυξανόμενη πίεση (16 g /s) μέσω ενός ακρυλικού γραφίδα. Η γραφίδα τοποθετήθηκε πάνω από το μεσαίο ράχη του πίσω ποδιού, μεταξύ του 1ου και 2ου αρθρώσεις ταρσομετατάρσιων και ο μέσος όρος των τεσσάρων διαδοχικών μέτρων που αρχίζει με το αριστερό ή δεξί πίσω πόδι, εναλλάξ, καταγράφηκε ως όριο απόσυρσης σε γραμμάρια. Η αποκοπή ρυθμίστηκε στα 200 g. Σύγκρισης για κάθε ημέρα δοκιμών πραγματοποιήθηκε αφαιρώντας από το σύστοιχο βάρος (g) από το ετερόπλευρο τιμή βάρους (g) για τον καθορισμό του κατωφλίου απόσυρσης πέλματος (PWT) διαφορά.

Στατική το βάρος που φέρουν

ήταν μετράται με τη χρήση του μετρητή Incapacitance (ΔΣΙΣ Life Science, Woodland Hills, CA, USA). Το ζώο τοποθετείται με τα οπίσθια άκρα σε ανάπαυση στις δύο μαξιλάρια πλατφόρμα βάρους-μέσου όρου. Η μονάδα κατέγραψε το μέσο βάρος βάλει σε κάθε μαξιλάρι πάνω περίοδο ενός 2 s. Η μέτρηση επαναλαμβάνεται 3 φορές. Τα αποτελέσματα που ελήφθησαν με τον μετρητή incapacitance χρησιμοποιήθηκαν ως έλεγχος για μια δεύτερη δοκιμή με βάρη, η δοκιμή Bearing Δυναμικό Βάρος (Bioseb, Boulogne, Γαλλία). Η συσκευή αποτελείται από ένα απύθμενο περίβλημα Plexiglas (25 × 25 × 24 εκ

3) και έναν αισθητήρα (1936 και μόνο τους απαγωγείς). Ο αισθητήρας τοποθετήθηκε στο δάπεδο του θαλάμου, καλύπτοντας ολόκληρη την επιφάνειά του. Ο αρουραίος επιτρέπεται να κυκλοφορούν ελεύθερα στο εσωτερικό της συσκευής για 5 λεπτά και οι πληροφορίες φέρουν το βάρος μεταδόθηκε ζωντανά σε ένα φορητό υπολογιστή μέσω μιας θύρας USB. Τα ακατέργαστα δεδομένα αναλύθηκαν με DWB 1.1.0.6 λογισμικού (Bioseb). Ένα πόδι εντοπίστηκε όταν ένας απαγωγέα κατέγραψε βάρος τουλάχιστον 4 g και τουλάχιστον 2 συνεχόμενα απαγωγείς κατέγραψε βάρος τουλάχιστον 1 g. Το πόδι έπρεπε να είναι σταθερή για τουλάχιστον 0,5 s για να συμπεριληφθούν. Χρησιμοποιώντας μια συγχρονισμένη βίντεο-καταγραφή της δοκιμής και την κλίμακα του χάρτη των ανιχνεύθηκαν ζώνες, καθεμία τεκμαίρεται ποδιού επικυρωμένη από παρατηρητή και ταυτοποιήθηκε ως ένα αριστερά ή δεξιά και εμπρός ή πίσω πόδι. Άλλες ζώνες ανιχνευθεί, που αντιπροσωπεύει την ουρά ή άλλο μέρος του σώματος, συμπεριλήφθηκαν επίσης στην ανάλυση.

Η επίδραση της υποδόριας μορφίνη

αξιολογήθηκε τις ημέρες 11, 14, 18 και 21 στο μοντέλο μας . Μορφίνη-θειικού διαλύματος (50 mg /ml) αραιώθηκε σε αποστειρωμένο αλατούχο για να επιτευχθεί συγκέντρωση ένεση (3 mg /ml). Οι αρουραίοι ενέθηκαν s.c. από με 3 mg /kg (1 μl /g) και επέστρεψαν στο κλουβί τους. Behavioral δοκιμές πραγματοποιήθηκαν 30 λεπτά μετά την ένεση όπως περιγράφηκε προηγουμένως.

Ανοσοϊστοχημεία

Οι αρουραίοι αναισθητοποιήθηκαν βαθιά με 5% ισοφλουράνη και διακαρδιακά διαποτίστηκαν με 4% παραφορμαλδεΰδη (PFA) σε ρυθμιστικό φωσφορικού (0.1 Μ , ρΗ 7.4). Ο νωτιαίος μυελός και ρίζας γάγγλια ραχιαίας (DRG) ήσαν μονιμοποιήθηκαν για 30 λεπτά σε 4% παραφορμαλδεΰδη και κατόπιν μεταφέρθηκαν σε 30% σακχαρόζη (48 ώρες) για κρυοπροστασία. Serial κατεψυγμένες τομές του νωτιαίου μυελού, πάχους 35 μm, κόπηκαν χρησιμοποιώντας μικροτόμο μια συρόμενη, συλλέγονται σε PBS και υποβάλλονται σε επεξεργασία ως ελεύθερης διακύμανσης τμήματα. Κατεψυγμένα DRG εγκλείστηκαν σε OCT Tissue Tek-, κομμένα σε κρυοστάτη σε πάχος 12 μm, συλλέγονται και υποβάλλονται σε επεξεργασία σε διαφάνειες.

τομές ιστών επωάστηκαν για 60 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου σε ένα διάλυμα μπλοκάρισμα των 5% φυσιολογικό ορό κατσίκας σε PBS με 0.5% Triton Χ-100 και 2% αλβουμίνη και στη συνέχεια επωάζονται για 30 λεπτά σε διάλυμα 0,1 Μ γλυκίνη για να μειωθεί αυτοφθορισμό. Οι τομές στη συνέχεια επωάστηκαν με το πρωτογενές αντιορό όλη τη νύκτα στους 4 ° C. τομές του νωτιαίου μυελού ανοσοχρώστηκαν με αντισώματα έναντι δεικτών μικρονευρογλοία, δέσμευσης ιονισμένου ασβεστίου μόριο προσαρμογέας 1 (Iba1, πολυκλωνικό αντίσωμα κουνελιού αντι-Iba1, 1:1000, Wako, Richmond, VA, USA), αστροκύτταρα, γλοιακή ινιδική όξινη πρωτεΐνη (GFAP, μονοκλωνικό κλώνος ΟΑ5 ποντικού αντι-GFAP, 1:500, Sigma, Oakville, Ontario, Canada) και c-Fos πρωτεΐνη (c-Fos, πολύκλωνα αντι-Fos, 1:20 000, Santa Cruz Biotechnology Inc., Santa Cruz, CA, USA) και σε DRG κατά την ενεργοποίηση του παράγοντα μεταγραφής 3 (ATF-3 (C-19), πολυκλωνικά κουνελιού αντι-ATF-3, 1:500, Santa Cruz Biotechnology Inc., Santa Cruz, CA, USA). Μετά την επώαση, οι τομές του ιστού πλύθηκαν δύο φορές για 10 λεπτά σε PBS και επωάστηκαν σε διάλυμα δευτερογενούς αντισώματος για 2 ώρες σε θερμοκρασία δωματίου. Δευτερεύουσα αντισώματα συζευγμένα με φθορίζοντες δείκτες Alexa Fluor® 488 και Alexa Fluor 647® χρησιμοποιήθηκαν σε 1:500 (Invitrogen Molecular Probes, Eugene, OR, USA). Οι τομές στη συνέχεια τοποθετείται με Aquamount. Η απουσία διασταυρούμενης αντιδραστικότητας μεταξύ των δευτερογενών αντισωμάτων επαληθεύθηκε με παραλείποντας πρωτογενές αντίσωμα κατά τη διάρκεια της ολονύκτια επώαση.

Fos πρωτεΐνης και παράγοντας ATF-3 ανιχνεύθηκαν επίσης με ανοσοϊστοχημεία, με χρήση της μεθόδου αβιδίνης-βιοτίνης-υπεροξειδάσης. Τα πλακίδια DRG και τα τμήματα του νωτιαίου μυελού υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με υπεροξείδιο του υδρογόνου 0,5% για 30 λεπτά για την αναστολή της ενδογενούς ενεργότητας υπεροξειδάσης και επωάζεται για 30 λεπτά σε ένα διάλυμα αποκλεισμού από 5% φυσιολογικό ορό κατσίκας, 2% λευκωματίνη, και 0.5% Triton Χ-100 σε PBS. Οι τομές στη συνέχεια επωάστηκαν όλη τη νύκτα στους 4 ° C στην πρωτογενή c-Fos (νωτιαίος μυελός) και ATF-3 (DRG) αντισώματα, τα οποία αραιώθηκαν σε 1% NGS με 0,1% Triton Χ-100. Μετά την επώαση, οι τομές ξεπλύθηκαν και αποκλείστηκαν με 3% NGS για 15 λεπτά και επωάστηκαν για 2 ώρες στο δεύτερο αντίσωμα, βιοτινυλιωμένο IgG αντι-κουνελιού κατσίκας (κατσίκας αντι-κουνελιού H + L, 1:500, Vector Laboratories, Burlingame, CA, USA), που ακολουθείται από στρεπταβιδίνη-υπεροξειδάση αρμορακίας με την μέθοδο αβιδίνης-βιοτίνης για 1 h (υπεροξειδάση χρένου στρεπταβιδίνη, ΡΚ-6100, Vector Laboratories, Burlingame, CA, USA) σε θερμοκρασία δωματίου. Οι τομές στη συνέχεια επωάστηκαν για 3 λεπτά με 0,02% διαμινοβενζιδίνη με 0,01% υπεροξείδιο του υδρογόνου, στη συνέχεια αφυδατώθηκαν και καλύφθηκαν με Permount® Τοποθέτηση Media (SP15-500, Fisher Scientific, ΝΥ, USA).

Ποσοτικοποίηση

Χρησιμοποιώντας ένα μικροσκόπιο της Olympus ομοεστιακή απεικόνισης και λογισμικό Olympus Fluoview FV1000, τμήματα από την οσφυϊκή μοίρα της σπονδυλικής στήλης ελήφθησαν οι ίδιες παράμετροι απόκτησης (κέρδος, χρόνος έκθεσης) και αναλύθηκαν με συνεστιακή μικροσκοπία για να χαρακτηρίσει ανοσοφθορισμού (IF). Επιφθορισμού και φωτεινού πεδίου εικόνες ελήφθησαν με ένα μικροσκόπιο Leica DM4000 είναι εξοπλισμένα με Leica DFC350FX και μια φωτογραφική μηχανή InfinityX για ανοσοφθορισμό.

Fos-ανοσοαντιδραστικές πυρήνες μετρήθηκαν όταν έχουν μικρά, στρογγυλεμένα ή ωοειδή, σκούρα χρώση, σε σύγκριση ελέγχω. Φυλλοειδή στρώματα οριοθέτηση διεξήχθη με έναν αρουραίο νωτιαίο μυελό πρότυπο ιστο-αρχιτεκτονική [38], σύμφωνα με οσφυϊκή τμήμα L1 /L2 /L3 του τμήματος. Στην παρούσα μελέτη, c-Fos-ανοσοαντιδραστικά κύτταρα μετρήθηκαν ως συνδυάστηκαν ελάσματα Ι-ΙΙ, ΙΙΙ-IV, V-VI, και VII-VIII, αντίστοιχα. Οκτώ 35 μm τομές νωτιαίου μυελού πάνω από το L1 /L2 /L3 τμήμα του κάθε ζώου (η = 3) επιλέγονται τυχαία ανά ζώο ανά συνθήκη για τον προσδιορισμό συνολικού αριθμού c-Fos.

Η ποσοτικοποίηση των ATF-3 θετικών νευρώνων σε DRG 12 μm πάχους τομές διεξήχθη με μέτρηση του αριθμού των νευρώνων με ATF-3 ανοσοαντιδραστικό πυρήνες σε μεγέθυνση 20x, χρησιμοποιώντας ένα μικροσκόπιο Leica DFC350FX. DRGs που αντιστοιχούν στα επίπεδα οσφυϊκού νωτιαίου μυελού επιλέχθηκαν L1 /L2 /L3 ως τους κύριους χώρους προβολής των πρωτογενών προσαγωγών ινών που νευρώνουν το μηριαίο οστό [39], [40]. Μετρώντας από ATF-3 θετικά κύτταρα διεξήχθη μία φορά σε τρεις σειρές, κάθε 36 μm. Αυτό καταμέτρηση εκφράστηκε ως μέσος αριθμός των ATF-3 ανοσοαντιδραστικό κύτταρα ανά τμήμα (n = 24). Sham και τον καρκίνο ζώα από 3 ανεξάρτητα πειράματα χρησιμοποιήθηκαν για ATF-3 προσδιορισμού.

νευρογλοιακών χρώση για την GFAP και Iba-1 στο νωτιαίο μυελό L1 /L2 /L3 αναλύθηκε ποσοτικά με οπτική πυκνότητα με την έκδοση του λογισμικού Image J 1.6. Εικόνα J για πρώτη φορά βαθμονομηθεί με μια εικόνα από ένα ζώο ελέγχου χρησιμοποιώντας τη λειτουργία διόρθωση. Οι ρυθμίσεις στη συνέχεια διατηρηθούν για όλες τις επόμενες αναλύσεις. Τρία τυχαία επιλεγμένα τμήματα του νωτιαίου μυελού L1-L3 σε κάθε ζώο (η = 3) αναλύθηκαν. Οι οπτικές πυκνότητες των εννέα τμήματα (τρία τμήματα /ζώο) υπολογίστηκαν κατά μέσο όρο για να παρέχει ένα μέσο αριθμό για κάθε κατάσταση.

ραδιολογικής ανάλυση

Ακτινογραφίες διεξήχθησαν επί ανατομή οστά χρησιμοποιώντας ένα Faxitron MX-20 ( ΡθχϊΙγοπ, Lincolnshire, IL). Εικόνες ελήφθησαν σε 26 kV, χρόνος έκθεσης: 10 s? μεγέθυνση: 2X. Μικρο-αξονική τομογραφία αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν σε αποκόπηκαν τα άκρα των ελεγχθέντων αρουραίων με ένα σύστημα 1072 MicroCT (SKYSCAN, Kontich, Βέλγιο). Οι παράμετροι ήταν: πηγή: 80 kV, 124 μΑ? ζουμ: 20X? Μέγεθος pixel: 14.06 μm? χρόνος έκθεσης: 3.0 s? περιστροφή: 0.9 °. Bone Τόμος /Συνολικός όγκος (BV /TV) τον προσδιορισμό: του φλοιού + όγκο δοκιδωτού οστού (BV) διαιρούμενο με οποιοδήποτε τύπο ιστού (TV) στην περιοχή των 5.626 χιλιοστών που αντιστοιχεί σε 201 διατομές (όγκος των τόκων? VOI), ξεκινώντας από η πλάκα ανάπτυξη του περιφερικού μηριαίου. Δοκιδωτού BV /TV ορίζεται από το όγκο δοκιδωτού οστού διαιρείται με την τηλεόραση από το VOI. Οι αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν με CT αναλυτή 1.10.0.1 (SKYSCAN, Kontich, Βέλγιο).

Μαγνητική Τομογραφία και η Τομογραφία Εκπομπής Ποζιτρονίων

μελέτες MRI διεξήχθησαν στο

Κέντρο d’imagerie Moleculaire de Sherbrooke

με 210 χιλιοστά μικρό ζώο 7Τ σαρωτή (Varian Inc., Palo Alto, CA, USA) και 63 χιλιοστά πηνίο όγκο RF. αρουραίοι Sprague-Dawley τοποθετήθηκαν σε ύπτια θέση σε μια MRI συμβατή λίκνο εξοπλισμένο με ένα υποστήριγμα Homebuilt πέλματος σχεδιασμένα για να τοποθετούν τις δύο άκρα σταθερά και επαναλήψιμα. Τα ζώα αναισθητοποιήθηκαν με 3% (επαγωγή) και 1,5% (σταθεροποίηση) ισοφλουράνιο σε οξυγόνο. Ένα ζώο σύστημα θέρμανσης θερμού αέρα ανάδραση ελεγχόμενη χρησιμοποιήθηκε για να κρατήσει τη θερμοκρασία του σώματος του ζώου σε φυσιολογικά επίπεδα και ο ρυθμός αναπνοής ήταν υπό συνεχή παρακολούθηση (SA Instruments Inc., Stony Brook, ΝΥ, USA). Το πρωτόκολλο MRI περιελάμβανε την εξαγορά της αξονικής (οβελιαίο) προ-αντίθεση και 10 λεπτά μετά την αντίθεση

T

1-σταθμισμένες εικόνες, χρησιμοποιώντας μια ακολουθία ηχούς κλίσης με TR: 210 ms, ΤΕ: 3.35 ms , άλλη γωνία: 30 °, μήτρα: 256 × 256, FOV: 60 × 60 mm

2, NA: πάχους 8 (30 οβελιαία φέτες), 1,5 mm. Ένας βώλος 600 μΙ παράγοντα αντίθεσης (Gd-ϋΡΤΑ, Magnevist, Berlex) εγχύθηκε μέσω της φλέβας της ουράς. Τα ζώα απεικονίστηκαν πριν και 6, 8, 10, 13, 15 και 18 ημέρες μετά την εμφύτευση. Για να αξιολογηθεί η εισβολή όγκου, μία περιοχή ενδιαφέροντος (ROI), συμπεριλαμβανομένης ολόκληρης της φλοιού των οστών και νωτιαίο κανάλι του μηριαίου οστού, ορίστηκε. Αυτό ROI απέδωσε ένα ιστόγραμμα έντασης voxel και για τα δύο πίσω πόδια. Οι ετερόπλευρο μέγιστες εντάσεις voxel χρησιμοποιήθηκαν για να καθορίσουν την παθολογική όριο. Κάθε ομόπλευρη voxel παραμένοντος χρωματισμένα ανάλογα με την ένταση του με ένα κίτρινο-κόκκινο κλίμακα. Mathlab Έκδοση 7.1 (Mathworks Inc., Natick, Massachusetts, USA) χρησιμοποιήθηκε για την ανάλυση των δεδομένων και την εκτέλεση των υπολογισμών.

τομογραφία εκπομπής ποζιτρονίων έγινε με τη χρήση του LabPET4 Sherbrooke με τον έλεγχο της κεντρικής θερμοκρασίας. διάμετρος του δακτυλίου: 162 χιλιοστά? FOV: 37,5 χιλιοστά? Κρύσταλλοι: 3072? Χωρική ανάλυση: 1,35 χιλιοστά FWHM FOV? Θόρυβος ισοδύναμου μετράει: 37 KCps σε 245 MBq (250-650 keV). Αμέσως μετά MRI σαρώσεις, τα ζώα παρέμειναν υπό αναισθησία στην ίδια θέση και το λίκνο μεταφέρθηκε στο σαρωτή ΡΕΤ. Η διόπτρας ευθυγραμμίστηκε προς τα πίσω αρθρώσεις του γόνατος? 9.25 MBq του Na

18F εγχύθηκε ενδοφλεβίως (200 μΐ σε 500 μΐ /λεπτό). Η κατανομή του ραδιοιχνηθέτη παρακολουθήθηκε επί 30 λεπτά και δειγματοληψία διπλού όγκου διεξήχθη επί 30 λεπτά. θερμοκρασία αναπνοή και το σώμα του ζώου παρακολουθήθηκαν συνεχώς καθ ‘όλη τη διαδικασία.

Η ιστολογική ανάλυση και μέτρηση της δραστικότητας των οστεοκλαστών

Είκοσι μία ημέρες μετά την ένεση του όγκου, οι αρουραίοι υποβλήθηκαν σε ευθανασία και αφαιρέθηκαν μηριαία . Τα μηριαία οστά σταθεροποιήθηκαν σε 4% παραφορμαλδεΰδη για 72 ώρες, απασβεστωμένες σε 10% ΕϋΤΑ (ρΗ 7.4) για 2-3 εβδομάδες, και τελικά ενσωματώθηκαν σε παραφίνη. μπλοκ παραφίνης κόπηκαν σε 3- ή 5 μm πάχους τομές με μικροτόμο εφοδιασμένο με μια λεπίδα καρβιδίου και φέτες βάφτηκαν με αιματοξυλίνη και εοσίνη Harris »για να καθοριστεί διείσδυση των κυττάρων του καρκίνου και την καταστροφή των οστών. Για τον εντοπισμό ενεργοποιηθεί οστεοκλάστες, φωσφορικό οξύ (TRAP) βαφή ανθεκτική σε τρυγικό εκτελέστηκε. Χρησιμοποιώντας το λευκοκυττάρων (TRAP) Kit (Sigma-Aldrich, St. Louis, Missouri, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής), οι φέτες εκτέθηκαν στο υπόστρωμα για 1 ώρα και χρώση έγινε ορατή με ένα Leica DM4000B (Leica, Toronto, ΟΝ, Canada). Συνολικά, 3,5 πεδία μετρήθηκαν σε μεγέθυνση 250X για μια συνολική επιφάνεια 1 mm

2. Επισημαίνονται οστεοκλάστες μετρήθηκαν κατά μήκος του οστό του όγκου ή τις διασυνδέσεις του μυελού των οστών, των οστών και 4-7 φέτες αναλύθηκαν για κάθε ζώο, από τις ομάδες των 4 ζώων.

Στατιστικές αναλύσεις

Von Frey και τα δεδομένα DWB αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας μια αμφίδρομη ANOVA ακολουθούμενο από το τεστ post-hoc Bonferroni και Randall-Sellitto αναλύθηκε με έναν μαθητή του

t-test

για τη σύγκριση των αντενδείξεις και σύστοιχο πίσω πόδια για κάθε ημέρα. C-Fos, ATF-3 και Iba1 /GFAP μετράνε διαφορές προσδιορίστηκαν με μια επαναλαμβανόμενη ANOVA μέτρο που ακολουθείται από ένα τεστ πολλαπλής σύγκρισης Bonferroni. Ομαλότητα αξιολογήθηκε με τεστ Kolmogorov-Smirnov και Shapiro-Wilks. γραφήματα BV /TV αναλύθηκαν με μονόδρομη ANOVA και μετράει TRAP με t-test του Student. P ≤ 0,05 θεωρήθηκε ως το επίπεδο στατιστικής σημαντικότητας.

Αποτελέσματα

Η εμφύτευση των κυττάρων του καρκίνου του μαστού στο μηριαίο οστό προκαλεί προκαλείται από επαφή και περιπατητικό πόνο

Στην προσπάθεια να μιμούνται κλινικές πόνου από καρκίνο των οστών, πραγματοποιήσαμε μια τοπική ένεση των κυττάρων κατευθείαν στο μηριαίο οστό μεταξύ του έσω επικόνδυλο και της φυματίωσης προσαγωγό. Η επίδραση της χειρουργικής επέμβασης ελαχιστοποιήθηκε από την εμφύτευση σε αυτή την ανατομική περιοχή, η οποία μειώνει τις πιθανότητες επιγονατιδικού συνδέσμου ή βλάβη της άρθρωσης. Κατά συνέπεια, όπως αξιολογείται με νοη Frey και δυναμική φέρουν βάρος (DWB), ψευδο ζώα δεν έδειξαν σημάδια μηχανικής αλλοδύνης ή δυσλειτουργία μετακίνησης καθ ‘όλη τη συμπεριφορική δοκιμή (Σχ. 1Α, C), ακόμη και στις πρώτες ημέρες μετά την χειρουργική διαδικασία (όχι δεδομένα απεικονίζεται). Καρκίνο φέρουν αρσενικούς αρουραίους που εμβολιάσθηκαν με 30.000 κύτταρα MRMT-1 εμφανίζεται μειωμένο όριο απόσυρσης στη δυναμική δοκιμή von Frey από την ημέρα 14 (36,7 ± 2,0 g? P & lt? 0,05? Εικ. 1Α). Μετά από αυτό, αλλοδυνία προχώρησε ταχύτατα μέχρι την ημέρα 21, όταν αυτό ήταν μέγιστη (23,3 ± 1,5 g, ρ & lt? 0.001). Τα καρκινικά κύτταρα εμβολιάστηκαν στο δεξί οπίσθιο πέλμα δεν απεκάλυψε μηχανική αλλοδυνία στην αντίθετη πλευρά (Σχ. 1Α). Ταυτοχρόνως να αλλοδυνία, υπεραλγησία αναπτύχθηκε μηχανική προοδευτικά σε αρουραίους που φέρουν όγκο. Όπως μετράται με τη δοκιμή Randall-Selitto, μία σημαντική διαφορά παρατηρήθηκε μεταξύ σύστοιχο και αντίπλευρο κατώφλια απόσυρσης του ποδιού από την ημέρα 18 (30.9 ± 10.8 g, ρ & lt? 0.001) έως την ημέρα 21 (25.7 ± 7.6 g, σ & lt? 0,01? Εικόνα 1Β. ). Αυτά τα αποτελέσματα αποδεικνύουν ότι η μετρήσιμη που προκαλείται από επαφή συμπεριφορές πόνου αναπτυχθεί μετά την ένεση των κυττάρων καρκινώματος στο μηριαίο οστό, όπως αποδείχθηκε προηγουμένως με MRMT-1 εμφύτευση κυττάρων στην κνήμη [24]. Μετά την ανίχνευση του πόνου κατά την ημέρα 14, η υποδόρια χορήγηση μορφίνης (3 mg /kg) δεν ανέστρεψε μηχανική αλλοδυνία που επάγεται από την εξέλιξη του όγκου στον καρκίνο που φέρουν αρουραίους (Σχήμα S1).

(Α) αλλοδυνία προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας το νοη Frey δοκιμή μετά την εμφύτευση του όγκου. Το ανώτατο όριο απόσυρσης μειώνεται προοδευτικά από την ημέρα 11 σε απόκριση προς στέγαση αλγαισθησία σε ζώα του καρκίνου που φέρουν (n = 10). Το αντίπλευρο πόδι παραμένει ανεπηρέαστη, όπως και η ψευδοκατεργασμένη ομόπλευρου σκέλους (n = 10). (Β) Αξιολόγηση της υπεραλγησίας διεξήχθη χρησιμοποιώντας το τεστ Randall-Sellitto. Τα αποτελέσματα εκφράζονται ως η διαφορά κατωφλίου απόσυρσης πέλματος (PWT) μεταξύ των ipsi- και αντίπλευρη πατούσες πίσω. Σημαντική υπεραλγησία παρατηρήθηκε στις ημέρες 18 και 21 (n = 10). (Γ) Ποσοτικοποίηση της δυναμικής με βάρη στα εμφυτευμένα ζώα, που εκφράζεται ως ποσοστό του βάρους του ζώου. Μια σημαντική διαφορά στην κατανομή του βάρους σε κάθε πόδι είναι παρατηρήσιμη από την ημέρα 15. (D) Δυναμική ανάλυση της επιφάνειας επαφής μεταξύ του πίσω ποδιού και του αισθητήρα παρουσιάζει παρόμοια αποτελέσματα κατά την ημέρα 15, 18 και 21, όταν οι ipsi- και αντίπλευρα πόδια είναι σύγκριση σε ομάδες καρκίνου (n = 7 σε κάθε ομάδα). Τα δεδομένα είναι μέση τιμή ± S.E.M, *: p ≤ 0,05? **: P≤0.01 ***:. P≤0.001

Η

δυσφορία των άκρων για πρώτη φορά αξιολογήθηκε με στατικό βάρος που φέρει. Από την ημέρα 15, το μισό του ομόπλευρου βάρους ανακατανέμονται στο αντίπλευρο πόδι (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Προκειμένου να αξιολογήσει ένα αντιπροσωπευτικό ανακατανομή του βάρους σε ολόκληρο το σώμα του ζώου, χωρίς αυτοσυγκράτηση, πραγματοποιήσαμε εκτιμήσεις DWB. Η κινητική της μεταφοράς των οπισθίων ποδών ήσαν παρόμοιες με εκείνες που παρατηρήθηκαν σε στατική έδρανο, που αρχίζει γύρω ημέρα 12 και την αύξηση μέχρι την ημέρα 21 (εικ. 1 C). Ωστόσο, αξίζει να σημειωθεί ότι η αντιστάθμιση του βάρους έγινε κυρίως από τα μέρη του σώματος εκτός από το ετερόπλευρο πίσω ποδιού, όπως η ουρά, κάτω κοιλιακή χώρα ή forepaws. Πράγματι, κατά την ημέρα 21, περίπου το 50% του βάρους επιβεβαιώθηκε αλλού από τα πίσω πόδια, σε σύγκριση με 33% πριν από την έναρξη του πόνου (δεν παρουσιάζονται τα δεδομένα). Κατά συνέπεια, η επιφάνεια του πέλματος σε επαφή με το δάπεδο ήταν επίσης επηρεάστηκε σημαντικά από την ημέρα 15, σε σύγκριση με τον αντίπλευρο πόδι (Εικ. 1ϋ). Αυτές οι συμπεριφορές πόνου αντικατοπτρίζουν την κλινική παρατήρηση του παροξυσμικού πόνου, που βιώνεται μετά την κίνηση των άκρων που φέρουν όγκο σε ασθενείς με καρκίνο των οστών.

νευρωνικών και νευρογλοιακών πλαστικότητα στα ζώα του καρκίνου που φέρουν

πολλαπλασιασμός Μετάσταση στο μηριαίο οστό του αρουραίου προκαλεί νευρωνική ενεργοποίηση και νευρογλοιακά αλλαγές σε όλο προσαγωγών ινών που προεξέχουν προς L1-L3 σπονδυλικής οσφυϊκής τμήματα.