Abstract

Ιστορικό

καρκίνο του προστάτη, γονίδια που κωδικοποιούν ανδρογόνο-ρυθμιζόμενη, Υ-χρωμόσωμα-κωδικοποιημένα, και ιστο-ειδικά αντιγόνα μπορεί όλα να υπερεκφράζεται. Στο ενήλικο αρσενικό ξενιστή, ωστόσο, οι περισσότεροι υψηλής συγγένειας Τ κύτταρα που στοχεύουν αυτές πιθανά αντιγόνα απόρριψης όγκου θα πρέπει να αφαιρεθεί κατά τη διάρκεια της αρνητικής επιλογής. Σε αντίθεση, το θηλυκό ώριμο ρεπερτόριο Τ-κυττάρων πρέπει να περιέχουν άφθονη προδρόμους ικανό να αναγνωρίζει αυτές τις κατηγορίες αντιγόνων καρκίνου του προστάτη και διαμεσολάβηση αποτελεσματική κατά του όγκου ανοσοαποκρίσεων.

Μεθοδολογία /Principal Εκτίμηση

Βρίσκουμε ότι τα συγγενικά TRAMP-C2 προστατικά κύτταρα αδενοκαρκινώματος αυθόρμητα απορριφθεί στο γυναικείο οικοδεσπότες. Θετή μεταφορά των αφελείς θηλυκό λεμφοκυττάρων σε ακτινοβολημένα αρσενικό οικοδεσπότες που φέρει προ-εμφυτευθεί καρκινικά κύτταρα TRAMP-C2 επιβραδύνει την ανάπτυξη του όγκου και μεσολαβεί απόρριψη του όγκου σε κάποια ζώα. Η επιτυχία αυτής της υιοθετούμενη μεταφορά εξαρτιόταν από την μεταβίβαση της γυναικείας CD4 κυττάρων Τ και ανεξάρτητη από την παρουσία του CD25-εκφράζουν ρυθμιστικά Τ κύτταρα τα μεταφερόμενα λεμφοκύτταρα. Εντοπίζουμε σε θηλυκά CD4 Τ κύτταρα που διεγείρονται με TRAMP-C2 κυρίαρχο MHC ΙΙ-περιορισμένη απάντηση στο DBY αντιγόνο Υ-χρωμόσωμα. Επιπλέον, οι αποκρίσεις CD8 Τ κυττάρων σε θηλυκά λεμφοκυττάρων στα ανοσοκυρίαρχο MHC Ι-περιορισμένο αντιγόνο SPAS-1 σημαντικά αυξημένη σε σύγκριση με αρσενικά ποντίκια. Τέλος, θα βρούμε καμία επιδείνωση του μοσχεύματος έναντι του ξενιστή είτε σε συγγενικά ή ήσσονος σημασίας-αντιγόνου αταίριαστα αλλογενών λεμφοκυττάρων θετή μοντέλα μεταφορά με τη χρήση θηλυκό σε αρσενικό σε σχέση με αρσενικό σε αρσενικό κύτταρα.

Συμπεράσματα /Σημασία

Αυτή η μελέτη δείχνει ότι επίκτητα μεταφερθεί θηλυκό λεμφοκυττάρων, ιδιαίτερα CD4 Τ κύτταρα, μπορεί να ελέγξει την απόφυση του προ-εμφυτευμένων κυττάρων του προστάτη αδενοκαρκινώματος. Αυτή η προσέγγιση δεν επιδεινώνει σημαντικά μοσχεύματος έναντι ξενιστή αποκρίσεις που υποδηλώνει ότι μπορεί να είναι βιώσιμος στην κλινική. Περαιτέρω, ενισχύοντας τη διαθέσιμη ανοσοποιητικού ρεπερτορίου με θηλυκό προερχόμενα κύτταρα Τ μπορεί να παρέχει μια εξαιρετική πισίνα του καρκίνου του προστάτη αντιδραστικών Τ-λεμφοκυττάρων για περαιτέρω αύξηση με συνδυασμό είτε με εμβολιασμό ή άνοσο ρυθμιστικών στρατηγικών αποκλεισμός

Παράθεση:. Jenq RR, Curran ΜΑ, Goldberg GL, Liu C, Allison JP, van den Brink MRM (2012) Ρεπερτόριο Ενίσχυση με θετή μεταφορά Γυναίκα λεμφοκύτταρα Ελέγχει την ανάπτυξη της προ-εμφυτεύεται ποντικού καρκίνου του προστάτη. PLoS ONE 7 (4): e35222. doi: 10.1371 /journal.pone.0035222

Επιμέλεια: Τζόναθαν Πάουελ, Johns Hopkins University School of Medicine, Ηνωμένες Πολιτείες Αμερικής

Ελήφθη: 10η του Ιανουαρίου 2012? Αποδεκτές: 13 Μάρ 2012? Δημοσιεύθηκε: 6 του Απρίλη, 2012

Copyright: © 2012 Jenq et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτή η έρευνα υποστηρίχθηκε από Εθνικά Ινστιτούτα αριθμούς βραβείο Υγείας R01-HL069929 (MvdB), R01-CA107096 (MvdB), R01-AI080455 (MvdB). Το περιεχόμενο είναι αποκλειστική ευθύνη των συγγραφέων και δεν αντιπροσωπεύουν απαραίτητα τις επίσημες απόψεις των Εθνικών Ινστιτούτων Υγείας. Υποστήριξη έγινε επίσης δεκτός από το Υπουργείο Άμυνας των Ηνωμένων Πολιτειών: USAMRAA Βραβείο W81XWH-09-1-0294 (MvdB), το Ίδρυμα Ακτινοβολία Επιδράσεις Ερευνών (ΕΚΦΤ-NIAID) (MvdB), το Experimental Therapeutics Κέντρο Memorial Sloan-Kettering Cancer Center χρηματοδοτείται από τον κ William H. Goodwin και η κα Αλίκη Goodwin, το Ίδρυμα λέμφωμα, Lemonade Stand Άλεξ, Ο Τζέφρυ Μπιν Cancer Research Center στο Memorial Sloan-Kettering,, Πέτρου Ταμείο Σολομώντα, Έρευνας και το Πρόγραμμα Θεραπευτικής στον καρκίνο του προστάτη. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Παρά τις βελτιώσεις στην ανίχνευση και τη θεραπεία, ο καρκίνος του προστάτη (ΚΑΠ) παραμένει η δεύτερη κύρια αιτία θανάτου από καρκίνο στους άνδρες στις Ηνωμένες Πολιτείες και η δεύτερη πιο κοινή μορφή καρκίνου στους άνδρες σε όλο τον κόσμο. Όταν εντοπισμένη, καπάκι είναι συχνά ιάσιμη μέσω της πρώτης θεραπείες γραμμής, όπως προστατεκτομή. υπάρχουν λίγες θεραπευτικές θεραπείες, ωστόσο, για υποτροπιάζοντα ή μεταστατικό καπάκι. Πρόσφατα, sipuleucel-Τ, ένα εμβόλιο σχεδιασμένο για να εκμαιεύσει ανοσοαπόκριση εναντίον όξινη προστατική φωσφατάση, έδειξε να βελτιώσει μέση επιβίωση των ασθενών με μεταστατικό ευνουχισμό-πώμα [1]. Ο αποκλεισμός του ανοσοποιητικού ρυθμιστικό μόριο CTLA-4 έχει επίσης δείξει κλινική υπόσχεση για τον καρκίνο του προστάτη [2], [3]. Ανάπτυξη ανοσοθεραπευτικών παρεμβάσεις που στοχεύουν πολλαπλές πτυχές του ανοσοποιητικού συστήματος σε Cap μπορεί να προσφέρει μεγαλύτερη κλινικό όφελος και πιο ανθεκτικά απαντήσεις. Ανάπτυξη ανοσοθεραπευτικών παρεμβάσεις που στοχεύουν πολλαπλά αντιγόνα σε Cap μπορεί να προσφέρει μεγαλύτερη κλινικό όφελος και πιο ανθεκτικά απαντήσεις.

καρκίνους του προστάτη πιθανόν εκφράζουν ένα αστερισμό των δυνητικών αντιγόνων όγκου συμπεριλαμβανομένων μεταλλαγμένων αυτο-πρωτεϊνών [4], υπερεκφράζεται αποκρίνονται στο ανδρογόνο και ανδρογόνο ρυθμιζόμενες πρωτεΐνες [5], [6], και διαφορικά εκφρασμένων πρωτεϊνών ιστού-ειδικών και αρσενικό Υ-συνδεδεμένη [7]. Τα Τ κύτταρα αναπτύσσονται σε αρσενικά τα οποία αναγνωρίζουν οποιοδήποτε από αυτά τα ανδρογόνα που σχετίζονται ή Υ-χρωμόσωμα αντιγόνα με υψηλή συγγένεια πιθανό διαγράφεται κατά την διάρκεια αρνητική επιλογή στον θύμο. Χαμηλή Τ συγγένειας κύτταρα που διαφεύγουν κεντρική διαγραφή με τη σειρά τους συνήθως ανενεργά μέσω περιφερικών μηχανισμών ανοχής κατά την επακόλουθη συνάντηση αντιγόνο. Σε αντίθεση, η ώριμη θηλυκό ρεπερτόριο Τ-κυττάρων θα πρέπει να περιέχει μια άφθονη συχνότητα των προδρόμων των Τ-κυττάρων ικανό να αναγνωρίζει όλες τις ανωτέρω κατηγορίες αντιγόνων καρκίνου του προστάτη.

Η αλλογενής μεταμόσχευση αιμοποιητικών βλαστικών κυττάρων (αλλο-HSCT) είναι ένα μέσο για τροποποίηση του ανοσοποιητικού ρεπερτορίου ενός ασθενούς και την υπέρβαση του ανοσοποιητικού ρυθμιστικών μηχανισμών. Αυστηρές χημειοθεραπευτικό ή /και ακτινοβολία προγραμμάτων κλιματισμού εκτομή αιμοποιητικό σύστημα του ξενιστή, το οποίο στη συνέχεια ανασυσταθεί με μυελό των οστών ή κινητοποιείται βλαστικά κύτταρα από έναν κατάλληλο δότη. Αυτά τα κύτταρα δότη επεκταθεί στον ασθενή δημιουργώντας ένα νέο ανοσοποιητικό σύστημα το οποίο μπορεί να αναγνωρίσει τα κακοήθη κύτταρα στον ασθενή ως ξένο σε μια διαδικασία που ονομάζεται το αποτέλεσμα μοσχεύματος έναντι νεοπλασίας (GVT) [8], [9]. GVT μπορεί να οδηγήσει σε πλήρη και διαρκή ύφεση σε ασθενείς με καρκίνους που δεν μπορεί αλλιώς να θεραπευτεί με τη χημειοθεραπεία ή ακτινοβολία. Για το λόγο αυτό, αλλο-HSCT χρησιμοποιείται ευρέως για τη θεραπεία μιας ποικιλίας αιματολογικών κακοηθειών.

Εκτός από διαμεσολάβηση επιθυμητά αποτελέσματα GVT, δότης κύτταρα του ανοσοποιητικού συστήματος μπορεί επίσης να επιτεθεί φυσιολογικούς ιστούς ξενιστή με αποτέλεσμα μοσχεύματος έναντι ξενιστή (GVHD). GVHD τόσο στις οξείες και χρόνιες μορφές είναι μια σημαντική πηγή νοσηρότητας και θνησιμότητας σε αποδέκτες αλλο-HSCT. Επιλογή των αλλογενή δότη είναι γνωστό ότι δυνητικά επίδραση στον κίνδυνο ανάπτυξης νόσου μοσχεύματος έναντι ξενιστή? αρσενικό αποδέκτες των γυναικών μοσχευμάτων, για παράδειγμα, έχουν αυξημένο κίνδυνο οξείας και χρόνιας GVHD, ιδιαίτερα εκείνους με γυναίκες δότες που έχουν υποβληθεί σε πολλαπλές κυήσεις [10] – [12].

Η θετή μεταφορά αυτόλογων

ex vivo

επεκταθεί διηθούν όγκο ή μηχανικής όγκου-ειδικά Τ κύτταρα έχει δείξει θεραπευτικές δυνατότητες τόσο μεταστατικό μελάνωμα και χρόνια λεμφοειδή λευχαιμία [13]. Αυτές οι προσεγγίσεις, ωστόσο, απαιτεί σημαντική εμπειρία και συχνά εβδομάδες καλλιέργειας για την επέκταση Τ κύτταρα. Με υιοθεσίας μεταφέροντας συγγενικά αφελείς θηλυκό λεμφοκυττάρων σε αρσενικά ποντίκια προ-εμφυτευμένων με όγκους του προστάτη, επιδιώξαμε να δοκιμάσει τις δυνατότητες του θηλυκού Τ-κυττάρων ρεπερτόριο να αναγνωρίσει και να επιτεθεί καπάκι. Για τη βελτίωση της επέκτασης των θετή μεταφορά κυττάρων, καθώς και τη μείωση του κινδύνου για GVHD και ενδεχομένως να αυξήσει επιπτώσεις GVT, θα αντιμετωπίζονται ποντίκια παραλήπτη με nonmyeloablative δόσεις ακτινοβολίας, που έχουν εκδοθεί πριν τις εκθέσεις ότι μια μικτή χιμαιρική κατάσταση μπορεί να προωθήσει τις απαντήσεις GVT, ελαχιστοποιώντας ταυτόχρονα GVHD [14] , [15].

Αποτελέσματα

Γυναίκα Ποντίκια ανοσολογικά Απόρριψη TRAMP-C2 προστατικού αδενοκαρκινώματος κύτταρα

στο διαγονιδιακό αδενοκαρκίνωμα του προστάτη μοντέλο ποντικού (TRAMP), οι όγκοι που αναπτύσσονται είναι αρχικά ανδρογόνο-εξαρτώμενοι αλλά αργότερα έγινε ανεξάρτητος από ανδρογόνο, ανακεφαλαιώνοντας την κανονική εξέλιξη του καρκίνου του προστάτη σε ανθρώπους [16]. Για τις μελέτες μας, χρησιμοποιήσαμε την κυτταρική γραμμή TRAMP-C2 που προέρχονται από αυτά τα ποντίκια. Αυτά τα μεταμοσχεύσιμα κύτταρα CaP σχηματίζουν όγκους όταν εμφυτευθούν σε ποντικούς C57BL6, είναι μερικώς ευαίσθητο σε ανδρογόνο

in vitro

, και εκφράζουν μια μεταλλαγμένη εκδοχή της πρωτεΐνης SPAS-1 η οποία είναι ο στόχος της απόκρισης κυρίαρχο CD8 Τ-κυττάρων [ ,,,0],17].

προκλήθηκαν θηλυκά ποντίκια, νεαρά αρσενικά ποντίκια, και ώριμα αρσενικά ποντίκια με κύτταρα TRAMP-C2 και μέτρησαν την ανάπτυξη των όγκων πάροδο του χρόνου (Σχήμα 1Α). Οι όγκοι αυξήθηκαν σθεναρά σε ενήλικα αρσενικά ποντίκια, αλλά μεγάλωσε πιο αργά σε νεαρά αρσενικά ποντίκια ίσως να οφείλεται είτε σε χαμηλότερα επίπεδα ανδρογόνων ή έλλειψη ανοσολογικής ανοχής σε γονίδια ανδρογόνων-ρυθμίζονται. Σε θηλυκούς ποντικούς, ωστόσο, TRAMP-C2 όγκοι αναπτύχθηκαν αρχικά και στη συνέχεια αυθόρμητα εξασθενήσει. Η ικανότητα αυτών των όγκων να αναπτύσσονται αρχικά πρότεινε ότι η εξαφάνισή τους οφείλεται σε ανοσολογική απόρριψη και όχι μια εξάρτηση σε υψηλά επίπεδα ανδρογόνων για τη βιώσιμη ανάπτυξη. Για να επιβεβαιωθεί αυτή η υπόθεση, επαναλάβαμε την πρόκληση του όγκου σε χίμαιρες μυελό των οστών στην οποία μεταμοσχεύονται θηλυκά και αρσενικά Τ-κυττάρων του μυελού των οστών εξαντλούνται σε θηλυκά ξενιστές. TRAMP-C2 όγκοι εντελώς απορρίφθηκαν σε χίμαιρες θηλυκό σε-θηλυκού, ενώ σε αρσενικά-σε-θηλυκό όγκους χίμαιρες TRAMP-C2 αυξήθηκε προοδευτικά (Εικόνα 1Β). Είναι ενδιαφέρον, θηλυκά ποντίκια μεταμοσχεύονται με ένα μίγμα θηλυκών και αρσενικών μυελού των οστών ήταν επίσης σε θέση να μεσολαβούν απόρριψη του όγκου. Αυτό το πείραμα καταδεικνύει ότι αυτά τα κύτταρα καρκίνου του προστάτη δεν απαιτούν αρσενικό επίπεδα ανδρογόνων για σταθερή ανάπτυξη

in vivo

, και ότι η απόρριψη τους σε θηλυκά ποντίκια προκαλείται από το σύστημα αιματολεμφοειδών. Περαιτέρω, η παρουσία των αρσενικών αιμοποιητικών κυττάρων φαίνεται να έχει ένα κυρίαρχο κατασταλτική επίδραση στην ικανότητα των γυναικών αιμοποιητικών κυττάρων για την απόρριψη TRAMP-C2 όγκων, ίσως λόγω θυμική αρνητική επιλογή που προκαλούνται από έκφραση των αρσενικών αντιγόνων σε θυμικά δενδριτικά κύτταρα που προέρχονται από μυελό των οστών.

κύτταρα Α) TRAMP-C2 όγκου αυξάνονται προοδευτικά σε ενήλικα αρσενικά ποντίκια, με μια πιο αργή κινητική αλλά πλήρη διεισδυτικότητα σε προ-εφηβικά αρσενικά ποντίκια, και να αναπτυχθούν για λίγο, αλλά στη συνέχεια απορρίπτονται σε ενήλικα θηλυκά ποντίκια. n = 5 ποντικοί /ομάδα, ένα από τα 2 πειράματα με παρόμοια αποτελέσματα. Β) ενήλικα θηλυκά ποντίκια μεταμοσχεύθηκαν με γυναίκα, άνδρας, ή ένα μείγμα 1:01 των θηλυκών και αρσενικών Τ-κυττάρων μυελού των οστών και 10 εβδομάδες μετά τη μεταμόσχευση προκλήθηκαν με όγκους TRAMP-C2. n = 5 ποντικοί /ομάδα, τα αποτελέσματα από ένα μόνο πείραμα. Γ) Πρόληψη έναρξη της εφηβείας στα αρσενικά ποντίκια μπορούν να μεσολαβήσουν καθυστερημένη ανάπτυξη των όγκων TRAMP-C2. Ενήλικες αρσενικοί ποντικοί χειρουργικά ευνουχισμένα πριν την έναρξη της εφηβείας (4 εβδομάδες) δείχνουν καθυστερημένη ανάπτυξη των TRAMP-C2, ενώ ο ευνουχισμός 1 εβδομάδα πριν από την πρόκληση όγκου (7 εβδομάδες) δεν είχε επίδραση στην ανάπτυξη του όγκου. n = 10 ποντίκια /ομάδα, καμπύλη ανάπτυξης όγκου και η περιοχή κάτω από την καμπύλη κανονικοποιείται στη διάμεση τιμή για την ομάδα 3 από κάθε πείραμα. Συνδυασμένα αποτελέσματα των πειραμάτων 2.

Η

Τα αποτελέσματα από τους ποντικούς χίμαιρα αρσενικό-θηλυκό σε-επίσης να εννοηθεί ότι η εξασθενημένη ανάπτυξη των κυττάρων TRAMP-C2 σε προ-εφηβικά 5 εβδομάδων ποντίκια ήταν πιθανό να οφείλεται στην ατελής ανοσολογικής ανοχής σε καρκίνο του προστάτη ενήλικων αρσενικών και όχι η έλλειψη επαρκών επιπέδων ανδρογόνων. Για να αξιολογηθεί πιο άμεσα για τον πιθανό αντίκτυπο των επιπέδων ανδρογόνων όπως επίσης και άλλες διαφορές ηλικία επαγόμενη, εμείς προκλήθηκαν ενήλικα αρσενικά ποντίκια της ίδιας ηλικίας (8 εβδομάδων) που είχαν χειρουργικά ευνουχισμένα είτε νωρίς (στις 4 εβδομάδες της ηλικίας πριν την έναρξη της εφηβείας ), ή αργά (μία εβδομάδα πριν από την πρόκληση όγκου). Βρήκαμε ότι ενήλικα αρσενικά ποντίκια που δεν είχαν υποστεί λόγω της εφηβείας μέχρι τις αρχές του ευνουχισμού εμφανίζεται καθυστέρησε σημαντικά την ανάπτυξη των TRAMP-C2 όγκους (Σχήμα 1C). Ενώ τα κύτταρα TRAMP-C2 συνήθως καλλιεργούνται παρουσία διυδροτεστοστερόνη [16], τα αποτελέσματά μας δείχνουν ότι TRAMP-C2 μπορούν να αναπτύξουν όγκους προοδευτική

in vivo

απουσία ανδρογόνων στους όρχεις που προέρχεται, πιθανώς λόγω της παρουσίας ανδρογόνων που προέρχονται από άλλα ενδοκρινή όργανα όπως ανδροστενοδιόνης παράγεται από τα επινεφρίδια. Πράγματι, το TRAMP μοντέλο ποντικού, από το οποίο TRAMP-C2 προέρχεται, είναι γνωστό ότι παράγει αδενοκαρκινώματα του προστάτη που μπορεί να προχωρήσει παρά τον ευνουχισμό [18]. Τα στοιχεία μας δείχνουν, επίσης, ότι ενώ υπάρχει κάποια πιθανότητα για ανοσολογική αναγνώριση των ώριμων αντιγόνων του προστάτη στους άντρες σε νεαρή ηλικία, η ανοχή έναντι αυτών των αντιγόνων του προστάτη αναπτύσσεται μετά την εφηβεία και οδηγεί σε επιτάχυνση της ανάπτυξης του όγκου.

θετή μεταφορά των Γυναίκα λεμφοκύτταρα σε Αρσενικά ποντίκια προ-εμφυτευμένων με TRAMP-C2 Cells Επιβραδύνει ανάπτυξη όγκου και Περιστασιακά μεσολαβεί απόρριψη Ογκου

Έχοντας παρατηρήσει ότι η απόρριψη των κυττάρων CaP σε θηλυκά ποντίκια διαμεσολαβείται από το αιμοποιητικό σύστημα, ζητήσαμε αν μεταφέροντας ένα θηλυκό αιμοποιητικό σύστημα σε αρσενικά ποντίκια θα τα καθιστούσε ανθεκτικά σε πρόκληση όγκου TRAMP-C2. Δημιουργήσαμε χίμαιρες του μυελού των οστών στην οποία αρσενικά ξενιστές μεταμοσχεύθηκαν με θηλυκό Τ-κυττάρων του μυελού των οστών εξαντλούνται. Παρά το γεγονός ότι ένα αιμοποιητικό σύστημα του θηλυκού προέλευσης, TRAMP-C2 όγκοι αναπτύχθηκαν εύκολα σε αυτά τα χιμαιρικά ποντίκια (Σχήμα 2Α). Αυτό υποδηλώνει ότι τα θηλυκά προερχόμενα κύτταρα Τ ανεκτικά σε αντιγόνα προστάτη όταν αναπτύσσουν σε ένα αρσενικό ξενιστή. Ανοχή αυτών των κυττάρων μπορεί να είναι τόσο λόγω θυμική «εκπαίδευσης» που προκαλείται από αρσενικό ραδιοανθεκτικά θυμικά επιθηλιακά κύτταρα, και από μηχανισμούς περιφερική ανοχή ασχολούνται όταν αυτά τα θηλυκά Τ κύτταρα συναντήσουν τον προστάτη και άλλους αρσενικούς ιστούς.

α) αρσενικά Ενηλίκων ποντικοί myeloablated μέσω ακτινοβολίας και μεταμοσχεύονται με θηλυκά Τ-κυττάρων του μυελού των οστών εξαντλούνται ακολουθούμενη από πρόκληση με TRAMP-C2 όγκους 10 εβδομάδες μετά τη μεταμόσχευση. n = 5 ποντικοί /ομάδα, τα αποτελέσματα από ένα μόνο πείραμα. Β) Ενήλικα αρσενικά ποντίκια υποθανατηφόρως ακτινοβοληθεί με 6 Gy και αμφισβήτησε ενδοδερμικά με 1 × 10

6 TRAMP-C2. Την επόμενη ημέρα, οι ποντικοί έλαβαν μια έγχυση λεμφοκυττάρων δότη (ΤΕΕ) του 3 × 10

7 σπλήνας

ε.φ.

. n = 10 ποντίκια /ομάδα, ένα από τα 3 πειράματα με παρόμοια αποτελέσματα. C) υιοθεσίας μεταφερόμενης CD25 + ρυθμιστικά Τ κύτταρα δεν μεσολαβούν αυξημένη ανάπτυξη του όγκου παρατηρήθηκε μετά αρσενικό ΤΕΕ. Τα ποντίκια ακτινοβολήθηκαν και όγκο προκλήθηκαν όπως στα Β, και έλαβε σπληνοκύτταρα που ήταν CD25-εξαντλημένο χρήση μαγνητικών σφαιριδίων, όπου ενδείκνυται. n = 10 ποντίκια /ομάδα, τα αποτελέσματα από ένα μόνο πείραμα. Δ) Θήλυ CD4 Τ κύτταρα διαμεσολαβούν καθυστερημένη ανάπτυξη των όγκων TRAMP-C2. Τα ποντίκια είχαν ακτινοβοληθεί και όγκου-αμφισβήτησε όπως στο Β, και στη συνέχεια να λάβει 1,5 × 10

7 σπλήνας που ήταν

in vivo

CD4-εξαντλημένο, αναμιγνύεται με 1.5 × 10

7 σπλήνας που ήταν CD8- εξαντληθεί, είτε αρσενικό ή θηλυκό προέλευσης. n = 10 ποντίκια /ομάδα, ένα από τα 2 πειράματα με παρόμοια αποτελέσματα.

Η

Για να παρακάμψετε την κεντρική μηχανισμούς ανοχής, αξιολογήσαμε την επόμενη το δυναμικό του ώριμου θηλυκό λεμφοκυττάρων να μεταφέρουν αντι-Cap ασυλία. Αυτά τα κύτταρα έχουν υποστεί θυμικό επιλογή στο θηλυκό δότη πριν από τη μεταβίβαση, και, ως εκ τούτου, θα πρέπει να περιέχει Τ κύτταρα ικανά να αναγνωρίζουν το Υ χρωμόσωμα, ανδρογόνο-ρυθμιζόμενη, προστάτη ιστού-ειδικούς, και μεταλλάξεων αντιγόνα. Εμείς χορηγούνται σε αρσενικά ποντίκια μια nonmyeloablative δόση ακτινοβολίας να επάγει λεμφοπενία και να δημιουργήσει χώρο για τα μεταφερόμενα κύτταρα μας. Αργότερα την ίδια ημέρα, οι ποντικοί προκλήθηκαν με κύτταρα όγκου TRAMP-C2. Μία ημέρα αργότερα, είτε αρσενικό ή θηλυκό σπληνοκύτταρα εγχύθηκαν σε αυτά τα ποντίκια με όγκο αμφισβητηθεί. Βρήκαμε ότι, ενώ η έγχυση αρσενικών σπληνοκυττάρων δεν είχε καμία επίδραση στην ανάπτυξη του όγκου, θηλυκό σπληνοκύτταρα μεσολάβηση σημαντική καθυστέρηση στην ανάπτυξη του όγκου και βελτιωμένη επιβίωση χωρίς-όγκο, σε ορισμένες περιπτώσεις, με αποτέλεσμα την πλήρη απόρριψη όγκου (Σχήμα 2Β).

Με τη μεταφορά σύνολο σπληνοκύτταρα, είμαστε μεταφορά CD4 + CD25 + FoxP3 + ρυθμιστικά Τ κύτταρα (Treg) εκτός από τα ενεργά Τ κύτταρα που είναι υπεύθυνα για τις επιδράσεις GVT. Είναι δυνατόν, ιδιαίτερα με τη χρήση αρσενικών ποντικών δότη, ότι αυτά τα κύτταρα Treg μπορούν να εμποδίσουν την αποτελεσματικότητα των μεταφερομένων τελεστές. Για να διασφαλιστεί ότι οι παρατηρήσεις μας δεν είχαν επηρεαστεί από την παρουσία των κυττάρων Treg, χρησιμοποιήσαμε μαγνητικά σφαιρίδια να καταστρέφουν Tregs από τα επίκτητα μεταφερθεί λεμφοκύτταρα αφήνοντας FoxP3 + κυττάρων λιγότερο από 1% παραμένει στο μόσχευμα (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Η εξάντληση των κυττάρων Treg δεν βελτίωσε την αποτελεσματικότητα των θηλυκών και αρσενικών θετώς μεταφέρονται λεμφοκυττάρων (Σχήμα 2C). Αυτό υποδηλώνει ότι ο κύριος καθοριστικός παράγοντας της αποτελεσματικότητας GVT είναι η αντιγονική ειδικότητα των μεταφερόμενων δραστικών κυττάρων, και ότι τα κύτταρα του δότη Treg δεν έχουν σημαντικές επιπτώσεις στην GVT.

Για να αποσαφηνίσει τις σχετικές συνεισφορές των CD4 και CD8 Τ κύτταρα στην μεσολάβηση έλεγχο της ανάπτυξης του όγκου από γυναίκες σπληνοκύτταρα, πραγματοποιήσαμε ένα πείραμα μίγμα-και-match χρησιμοποιώντας αρσενικούς και θηλυκούς δότες που είχαν εξαντληθεί

in vivo

με αντισώματα εναντίον είτε CD4 ή CD8. Είναι ενδιαφέρον, βρήκαμε ότι η μεταβίβαση της γυναικείας CD4 Τ κυττάρων που προκαλείται παρόμοιο έλεγχο του όγκου όταν μεταφέρονται με CD8 κύτταρα Τ είτε αρσενικό ή θηλυκό προέλευσης, ενώ αρσενικό CD4 Τ κύτταρα δεν ήταν σε θέση να διαμεσολαβούν έλεγχο του όγκου ακόμη και όταν εγχύεται ταυτόχρονα με θηλυκά κύτταρα CD8 Τ (Σχήμα 2D). Συνολικά, αυτά τα αποτελέσματα προτείνουν ότι αφελείς CD4 Τ κύτταρα από θηλυκούς ποντικούς είναι απαραίτητα για τον έλεγχο της ανάπτυξης των TRAMP-C2 όγκων σε αρσενικούς ποντικούς, ενώ θηλυκά κύτταρα CD8 Τ δεν απαιτούνται.

Γυναίκα DBY-ειδικά κύτταρα Τ CD4 Ενισχύουν η απόκριση CD8 Τ-κυττάρων έναντι TRAMP-C2 Tumor Antigens

για να επιβεβαιωθεί ότι τα CD4 Τ κύτταρα παίζουν κεντρικό ρόλο στο να κατευθύνει θηλυκό ανοσοαποκρίσεις έναντι του καρκίνου του προστάτη, πραγματοποιήσαμε πειράματα για τον εντοπισμό Τ κυτταρικές αποκρίσεις εναντίον ειδικών επιτόπων αντιγόνων εκφράζεται από TRAMP-C2. Προηγουμένως, εντοπίσαμε SPAS-1, ένα αντιγόνο στο χρωμόσωμα 2 εκφράζεται από TRAMP-C2 με ένα ανοσοκυρίαρχο επίτοπο τάξης Ι που προκύπτουν από μία αυθόρμητη μετάλλαξη σημείου [17]. Με RT-PCR, προσδιορίσαμε επίσης την έκφραση των γνωστών κατηγορίας Ι-περιορισμένων αντιγόνων χρωμόσωμα Υ συμπεριλαμβανομένων SMCY, Α.Φ.Χ., και EIAFIAY, καθώς και την έκφραση της κατηγορίας ΙΙ-περιορισμένων αντιγόνων Υ χρωμόσωμα DBY (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Έχει αναφερθεί αντιγόνα Υ είναι συχνά επιλεκτικά υπερεκφράζονται σε ανθρώπινα CaP κυτταρικές σειρές και όγκους [7]. Ομοίως, βρήκαμε ότι τα γονίδια για

SMCY

,

Α.Φ.Χ.

, και

DBY

φάνηκε να υπερεκφράζεται επιλεκτικώς στην κυτταρική σειρά TRAMP-C2 και σε αυθόρμητα προκύπτουν όγκου προστάτη από ποντίκια TRAMP σε σύγκριση με φυσιολογικούς Β6 προστάτη (Σχήμα S1).

για να συγκρίνουμε ανοσοαποκρίσεις προς αντιγόνα TRAMP-C2 που προκύπτουν σε αρσενικά και θηλυκά ποντίκια, χρησιμοποιήσαμε ένα κυτταρικό εμβόλιο που αποτελείται από ακτινοβολημένων GM-CSF που υπερεκφράζουν TRAMP- κύτταρα C2 (TRAMP-GM-CSF) που είχαμε προηγουμένως δημιουργηθεί και χαρακτηριστεί [19]. Εμείς προσδιορίστηκαν εμβολιασμένα αρσενικά και θηλυκά ποντίκια για CD4 και CD8 Τ κύτταρα αποκρίσεις έναντι γνωστών και προβλεπομένων επιτόπων πεπτιδίων που προέρχονται από αυτά τα αντιγόνα. Μετά την εκ νέου διέγερση με δενδριτικά κύτταρα παλμικά πεπτίδιο, αξιολογήσαμε την παραγωγή Τ-κυττάρων του IFN-γ. Βρήκαμε ότι ο εμβολιασμός των θηλυκών ποντικών με αποτελέσματα TRAMP-GM-CSF σε ισχυρές αποκρίσεις CD4 Τ κυττάρων έναντι DBY, ενώ αρσενικά ποντίκια δεν αναπτύσσουν μετρήσιμες αποκρίσεις έναντι DBY, αν και θηλυκά και αρσενικά Τ CD4 κυττάρων είχαν παρόμοιες αποκρίσεις σε διέγερση με αντι-CD3ε /σφαιρίδια αντι-CD28, ή με οξική μυριστική φορβόλη (ΡΜΑ) και ιονομυκίνη (Σχήμα 3Α). Πιθανή αυτό οφείλεται στην έλλειψη κεντρικής ανοχής έναντι DBY σε γυναίκες συγκριτικά αρσενικά ποντίκια και την υψηλή έκφραση του DBY από κύτταρα TRAMP-C2. Βρήκαμε ότι τα αρσενικά ποντίκια κάνει mount αποκρίσεις CD8 Τ κυττάρων ενάντια στα μεταλλαγμένα αντιγόνου SPAS-1 μετά τον εμβολιασμό κυττάρων TRAMP-C2. Θηλυκά CD8 Τ κύτταρα, ωστόσο, εμφανίζουν ισχυρότερες αποκρίσεις προς SPAS-1 από τα αρσενικά (Σχήμα 3Α), ένα μη αναμενόμενο εύρημα, δεδομένου ότι η έκφραση του SPAS-1 δεν είναι ούτε το φύλο περιορίζεται ούτε ορμόνη-ρυθμιζόμενη. Οι αντιδράσεις στην SPAS-1 ήταν κυρίαρχη πάνω αποκρίσεις σε άλλα αντιγόνα, συμπεριλαμβανομένων αντιγόνων Υ-χρωμόσωμα SMCY, Α.Φ.Χ., και EIAFIY, καθώς και οι αντιδράσεις στο αντιγόνο επιθηλιακής έξι διαμεμβράνης του προστάτη (STEAP), η οποία είχε αναφερθεί αναμένεται να είναι ανοσογονική στα αρσενικά ποντίκια και επιλεκτικά υπερεκφράζεται σε όγκους του προστάτη [20]. Συνολικά, αυτά τα αποτελέσματα προτείνουν ότι οι γυναίκες DBY-ειδικά CD4 Τ κύτταρα είναι ικανά να ενισχύσουν αποκρίσεις CD8 Τ κυττάρων ενάντια σε ένα ανοσοκυρίαρχο αντιγόνο του όγκου που προκύπτουν από μία αυθόρμητης μετάλλαξης.

Α) Ανοσοποίηση των θηλυκών με κύτταρα TRAMP-GMCSF παράγει επαυξημένης CD4 αντιδράσεις εναντίον DBY και CD8 αποκρίσεις έναντι SPAS-1. Αρσενικά και θηλυκά ποντίκια Β6 ενέθηκαν ενδοδερμικά με 1 × 10

6 ακτινοβολημένα TRAMP-GMCSF στις ημέρες -9, -6 και -3 πριν την θυσία. σπληνοκύτταρα CD4 + και CD8 + καθαρίστηκαν με μαγνητικά σφαιρίδια και επαναδιεγέρθηκαν με CD11c + θηλυκό σπληνός DCs πάλλονται με την υποδεικνυόμενη πεπτίδιο, ή εναλλακτικά διεγέρθηκαν με σφαιρίδια αντι-CD28 αντι-CD3ε /ή με οξική μυριστική φορβόλη (ΡΜΑ) και ιονομυκίνη. Υπερκείμενο συγκεντρώσεις ΙΡΝ-γ και άλλων κυτοκινών προσδιορίστηκαν με BD συστοιχία κυτταρομετρίας χάντρα. Αποτελέσματα ένα μόνο πείραμα. Β) εμβολιασμός DNA με SPAS-1 παράγει ανοσολογικές αποκρίσεις στα αρσενικά ποντίκια θετώς μεταφέρονται με θηλυκό λεμφοκύτταρα. Αρσενικά ποντίκια Β6 χορηγήθηκαν 6 Gy ακτινοβόληση ακολουθούμενη από αρσενικό ή θηλυκό υιοθετούμενη μεταφορά λεμφοκυττάρων. Τα ποντίκια εμβολιάστηκαν με εκτοξευτήρα γονιδίων με SPAS-1-πλασμιδίων που εκφράζουν DNA κατά τις ημέρες 1, 7, και 13 παρακάτω υιοθετούμενη μεταφορά. Την ημέρα 19, σπληνοκύτταρα επωάστηκαν με ή χωρίς τις SPAS-1 και DBY πεπτίδια, και την παραγωγή της IFN-γ από κύτταρα CD4 και CD8 Τ αξιολογήθηκε με ενδοκυτταρική κυτταρομετρία ροής. Τα αποτελέσματα ενός και μόνο πειράματος.

Η

Για να προσδιοριστεί εάν ένα παρόμοιο φαινόμενο της DBY-ειδικά CD4 Τ κυττάρων «βοήθεια» ήταν που συμβαίνουν στο περιβάλλον των θετών κυτταρικής θεραπείας, θα μεταφερθεί είτε αρσενικό ή θηλυκό σπλήνας σε αρσενικό οικοδεσπότες και στη συνέχεια εμβολιάστηκαν με DNA πλασμιδίου που εκφράζει μεταλλαγμένο SPAS-1. Βρήκαμε ότι αρσενικά ποντίκια που έλαβαν θηλυκό σπληνοκύτταρα αναπτύχθηκαν αυθόρμητα CD4 αποκρίσεις Τ-κυττάρων έναντι DBY, αποδεικνύεται από την ενδοκυτταρική παραγωγή της IFN-γ. Αξίζει να σημειωθεί ότι, τα αρσενικά που έλαβαν θηλυκό σπλήνας αναπτυχθεί ισχυρές αποκρίσεις Τ-κυττάρων CD8 στις ΖΕΠ 1-εμβολιασμού, ενώ τα αρσενικά που έλαβαν αρσενικό σπλήνας δεν είχε σημαντική ανταπόκριση στις ΖΕΠ-1 εμβολιασμού (Εικόνα 3Β). Τα αποτελέσματα αυτών των θετών πειράματα μεταφοράς δείχνουν ότι οι πιθανοί μηχανισμοί για τη βελτίωση του ελέγχου της ανάπτυξης του όγκου σε αρσενικούς λήπτες της γυναικείας λεμφοκυττάρων περιλαμβάνουν τόσο CD4 και CD8 αναγνώριση των Τ-κυττάρων των αντιγόνων που εκφράζονται από TRAMP-C2.

θετή μεταφορά Θηλυκό λεμφοκύτταρα σε Lymphopenic Άντρας οικοδεσπότες δεν οδηγούν σε σημαντική GVHD

σε μοντέλα ανοσοποιητικό μεταμόσχευση θηλυκό-σε-αρσενικό μας, έχουμε παρακολουθούνται ενεργά για τα κλινικά συμπτώματα της νόσου μοσχεύματος έναντι ξενιστή, η οποία μπορεί να περιλαμβάνουν απώλεια βάρους, καθώς και αλλαγές στη δραστηριότητα, τη στάση του σώματος , δέρμα και γούνα. Έχουμε δει κανένα στοιχείο για GVHD σε αυτά τα πειράματα. Στη ρύθμιση μεταμόσχευση μυελού των οστών, ωστόσο, επιλέγοντας ένα θηλυκό δότη μπορεί να οδηγήσει σε αυξημένο κίνδυνο της GVHD [10] – [12]. Προκειμένου να διερευνήσει περαιτέρω την ασφάλεια των θετών θηλυκό κυτταρικής θεραπείας για ασθενείς με καρκίνο του προστάτη, θα αξιολογούνται ιστολογικά για υποκλινική απόδειξη της GVHD σε δύο μοντέλα, Β6 σε Β6 (συγγενή) και LP σε Β6 (MHC-συμφωνημένα, ήσσονος σημασίας αλλογενή αντιγόνο-αταίριαστο ), κοιτάζοντας όργανα στόχους GVHD συμπεριλαμβανομένων ήπαρ, λεπτό έντερο, και το παχύ έντερο. Βρήκαμε ότι στο συγγενικό περιβάλλον, σε δύο διαφορετικά χρονικά σημεία (ημέρα 21 και 42 μετά τη μεταφορά) θηλυκά λεμφοκύτταρα δεν παρήγαγαν σημαντικά περισσότερο από τους άνδρες GVHD λεμφοκυττάρων (Σχήμα 4). Στην πιο κλινικά σχετική ρύθμιση ενός MHC-συμφωνημένα, δευτερεύων-αντιγόνου ακατάλληλα μοντέλο, βρήκαμε ένα παρόμοιο βαθμό GVHD χρησιμοποιώντας γυναίκες και άνδρες δότες τόσο νωρίς και αργά χρονικά σημεία. Συνολικά, GVHD παθολογικές βαθμολογίες που παρατηρήθηκαν σε αυτές τις υποθανατηφόρες μοντέλα μεταφορά ακτινοβολία λεμφοκυττάρων ήταν ήπιας σε σύγκριση με το MHC-εσφαλμένης σύμπτωσης μεταμόσχευση μυελού των οστών με αλλογενή ρύθμιση των Τ κυττάρων (Σχήμα 4), επιβεβαιώνοντας τις παρατηρήσεις μας ότι GVHD είναι ήπιο σε αυτά τα μοντέλα, και ότι η χρήση της γυναικείας λεμφοκύτταρα δεν φαίνεται να αυξάνει τη συχνότητα εμφάνισης ή τη σοβαρότητα της νόσου μοσχεύματος έναντι ξενιστή.

Άντρας Β6 ποντίκια δόθηκαν 6 Gy ακτινοβολίας που ακολουθείται από ένα

iv

έγχυση των 3 × 10

7 σπλήνας, είτε αρσενικό ή θηλυκό, από συγγενικά Β6 ή αλλογενών δοτών LP. Για σύγκριση, θηλυκά ποντίκια Β6 ήσαν θανάσιμα ακτινοβολημένα (11 Gy) και μεταμοσχεύονται με 5 × 10

6 κυττάρων Τ εξαντλημένα κύτταρα μυελού των οστών και 2 × 10

6 καθαρισμένα σπληνικά Τ κύτταρα από MHC-κακοταιριασμένα ποντικών B10.BR (H2k σε H2b). Οι ποντικοί αξιολογήθηκαν την ημέρα που αναφέρεται για την ιστολογική απόδειξη της GVHD στο ήπαρ, το λεπτό έντερο, και το παχύ έντερο. Τα αποτελέσματα ενός και μόνο πειράματος.

Η

Συζήτηση

Εδώ αναφέρουμε ότι επίκτητα μεταφερθεί αφελείς θηλυκό λεμφοκύτταρα επιβραδύνει την ανάπτυξη του και, σε ορισμένες περιπτώσεις, να απορρίψει προ-εμφυτευμένων TRAMP-C2 αδενοκαρκίνωμα του προστάτη κύτταρα σε ακτινοβοληθεί με υποθανάτια δόση αρσενικά ποντίκια. Ένα παρόμοιο εύρημα έχει επίσης αναφερθεί πρόσφατα από Yi et. al, οι οποίοι χρησιμοποιούνται επίσης κύτταρα TRAMP-C2 [21]. Αυτοί προσδιορίζονται Τ κύτταρα ως μεσολαβητές του καρκίνου του προστάτη αντι-ανοσοαποκρίσεις σε θηλυκά ποντίκια και διαπίστωσαν ότι η υιοθετούμενη μεταφορά των εμβολιασμένων θηλυκών λεμφοκυττάρων μπορεί να οδηγήσει σε έλεγχο της ανάπτυξης των TRAMP-C2 όγκων σε αρσενικούς ξενιστές. Η μελέτη μας υποστηρίζει την αρχική τους συμπεράσματα και να διευρύνει τους σημαντικά με τον εντοπισμό των μηχανισμών με τους οποίους το γυναικείο ανοσοποιητικό σύστημα τοποθετεί ανώτερη απαντήσεις στον καρκίνο του προστάτη. Έχουμε αποδείξει ότι οι γυναίκες CD4 Τ κύτταρα είναι απαραίτητα μεσολαβητές αυτού του αποτελέσματος, ιδίως εκείνα που είναι ειδικά για το ανοσοκυρίαρχο επίτοπο από το αρσενικό DBY αντιγόνο. Ενώ Yi et. al βρήκαν ότι θηλυκά ποντίκια που ανοσοποιήθηκαν με TRAMP-C2 αναπτύξει ορισμένες Τ-κυττάρων αποκρίσεις έναντι φυσιολογικό ιστό του προστάτη, καθώς και το STEAP αντιγόνο προστάτη, τα στοιχεία μας δείχνουν ότι απαντήσεις σε STEAP είναι σχετικά μικρές σε σύγκριση με τις απαντήσεις στο αυθόρμητα προκύπτουν αντιγόνο ανοσοεπικρατή όγκου μεταλλαγμένο SPAS-1, το οποίο δεν αναλύθηκε στην προηγούμενη μελέτη. Τα αποτελέσματά μας δείχνουν ότι CD4 Τ κυττάρου αποκρίσεις έναντι DBY, τα οποία είναι μοναδικά σε θηλυκά ανοσοποιητικό ρεπερτόρια, μπορούν να αυξήσουν σημαντικά αποκρίσεις CD8 Τ κυττάρων ενάντια σε ένα αυθόρμητα προκύπτουν μεταλλαγμένο αντιγόνο όγκου όπως SPAS-1. αποκρίσεις των κυττάρων CD4 Τ να DBY φαίνεται να είναι ιδιαίτερα ισχυρή στη ρύθμιση του περιορισμού Ι-Ab MHC II? Τ κύτταρα που προέρχονται από ποντίκια που φέρουν ένα διαγονιδιακό υποδοχέα Τ-κυττάρου ειδικού για τον ίδιο επίτοπο DBY έχουν προηγουμένως δείξει ικανή αποκρίσεις τοποθέτησης εναντίον όγκων TRAMP-C2 σε ποντίκια knockout RAG [22]. Βρήκαμε ότι οι γυναίκες λεμφοκυττάρων σε ένα αρσενικό υποδοχής ήταν επίσης σε θέση να εξαπολύσουν ανώτερη απαντήσεις σε εμβολιασμό κατά της SPAS-1, κατά τον καθορισμό των ταυτόχρονα την ανάπτυξη αυθόρμητες απαντήσεις σε DBY.

Είναι πιθανό ότι τα CD4 Τ κύτταρα ειδικά για DBY μπορεί να παρέχει βοήθεια για CD8 κύτταρα Τ τα οποία μεσολαβούν GVHD, καθώς και GVT. Ωστόσο, με τη χρησιμοποίηση ενός μοντέλου με υποθανατηφόρες ακτινοβολία ακολουθούμενη από μεταφορά λεμφοκυττάρων χωρίς συν-μεταφορά των αιμοποιητικών βλαστικών κυττάρων, ήμασταν σε θέση να ελαχιστοποιήσει σημαντικά μοσχεύματος έναντι ξενιστή επιδράσεις της νόσου. Αρσενικά ποντίκια που έλαβαν θεραπεία με μεγάλες δόσεις της γυναικείας λεμφοκυττάρων είχε καμία κλινική απόδειξη για νόσο μοσχεύματος έναντι ξενιστή και μόνο πολύ ήπια παθολογικές ενδείξεις. Την ίδια στιγμή, ωστόσο, αυτή η προσέγγιση μπορεί να επέτρεψε τη δημιουργία ανοχής σε αρσενικά και του προστάτη αντιγόνα που αναγνωρίζονται από μεταφέρθηκαν θηλυκό προερχόμενα κύτταρα Τ, δυνητικά περιορίζουν την αποτελεσματικότητα αυτής της στρατηγικής και καταλήγοντας σε λιγότερο ποντικούς απορρίπτοντας πλήρως οι όγκοι τους.

Πολλές από τις πρόσφατες προόδους στην ανοσοθεραπεία όγκου έχουν εστιάσει σε είτε τις στρατηγικές εμβολιασμού ή αποκλεισμό της ανοσολογικής ρυθμιστικών μηχανισμών. Δύο πρόσφατες ανοσοποιητικό στρατηγικές που ελήφθη έγκριση FDA περιλαμβάνουν τον εμβολιασμό κατά sipuleucel-T για μεταστατικό CaP [1], και διαμεσολαβούμενη από αντίσωμα αποκλεισμός του Τ-κυττάρου αρνητικός υποδοχέα συν-διεγερτικών CTLA-4 για τη θεραπεία του μεταστατικού μελανώματος [23]. Ο στόχος των στρατηγικών εμβολιασμού είναι να δημιουργήσει νέες αντιδράσεις κατά του όγκου των κυττάρων Τ, ενώ το ανοσοποιητικό στρατηγικές ρυθμιστικών αποκλεισμός επιδιώξει να απελευθερώσει ενδογενείς ανοσοαποκρίσεις κατά των όγκων που παράγονται αυθόρμητα αλλά συγκρατούνται και αναποτελεσματική [24]. Ενώ και οι δύο προσεγγίσεις παρουσιάζουν υπόσχεση, κλινικά δεδομένα δείχνουν ότι οι περισσότεροι ασθενείς τελικά ακόμα υποκύψει στην εξέλιξη του καρκίνου τους. Οι συνδυασμοί του ανοσοποιητικού προσεγγίσεις μπορεί να είναι η πιο πολλά υποσχόμενη. Σε αυτή τη μελέτη, έχουμε προσδιορίσει μια τρίτη προσέγγιση, δηλαδή την ενίσχυση του ανοσοποιητικού ρεπερτορίου με υιοθεσίας μεταφέροντας το φύλο αντιστοιχία στη λεμφοκυττάρων με βελτιωμένη ικανότητα να αναγνωρίζει αντιγόνα όγκου. ενίσχυση ρεπερτόριο έχει τη δυνατότητα να συνεργήσει δυναμικά τόσο με τον εμβολιασμό του όγκου και του ανοσοποιητικού ρυθμιστικές στρατηγικές αποκλεισμού.

Για μεταστατικό ευνουχισμό ανθεκτικό καρκίνο του προστάτη, μια ασθένεια η οποία εξακολουθεί να έχει κακή πρόγνωση, δείχνουμε ότι η γυναικεία λεμφοκυττάρων, ιδιαίτερα CD4 Τ κύτταρα, θετώς μεταφέρονται σε καρκίνο του προστάτη προκλήθηκαν αρσενικά ποντίκια μπορούν να μεσολαβήσουν σημαντικές επιπτώσεις κατά του όγκου. Όσον αφορά την ασφάλεια, η προσέγγιση αυτή φαίνεται κλινικά βιώσιμη όπως παρατηρήσαμε καμία ουσιαστική GVHD είτε σε συγγενικά ή MHC-συμφωνημένα, ήσσονος σημασίας ακατάλληλα αλλογενή θηλυκό σε αρσενικό μεταφορές λεμφοκυττάρων. Τα στοιχεία που παρουσιάζονται εδώ υποστηρίζει περαιτέρω αξιολόγηση αυτής της προσέγγισης για την ανοσοθεραπεία του καρκίνου του προστάτη και τη δυνατότητά της να συνεργήσει με άλλα υποστηρικτικά ανοσοθεραπευτικές προσεγγίσεις.

Υλικά και Μέθοδοι

Ποντίκια

Όλες οι διαδικασίες του ποντικιού πραγματοποιήθηκαν σύμφωνα με τις κατευθυντήριες οδηγίες του πρωτοκόλλου στο Memorial Sloan-Kettering Cancr Center (MSKCC). Τα ποντίκια διατηρήθηκαν σύμφωνα με τις οδηγίες ΝΙΗ φροντίδα των ζώων, σύμφωνα με τα πρωτόκολλα που εγκρίθηκε από την Επιτροπή Θεσμικών Φροντίδα Ζώων MSKCC περιγράφουν πειράματα ειδικά για αυτή τη μελέτη. C57BL /6 και LP ποντικοί ελήφθησαν από το Jackson Laboratory.

Αντισώματα

CD4 (GK1.5) και CD8 (2,43) ανάλωση αντισώματα αγοράστηκαν από τη Bio-Xcell. Η κυτταρομετρία ροής πραγματοποιήθηκε με τη χρήση αντισωμάτων που αναγνωρίζουν CD45 (30-F11), CD4 (RM4-5), CD8α (53-6.7), ΙΡΝ-γ (XMG 1.2) αγοράστηκε από την BD Biosciences.

Πεπτίδια

Όλα τα πεπτίδια που χρησιμοποιήθηκαν αγοράστηκαν από την Βιοσύνθεση, Inc. και χρησιμοποιήθηκε σε μία τελική συγκέντρωση 10 μm. CD8 πεπτίδια που περιλαμβάνονται SPAS-1 (244-252), SMCY (738-746), Α.Φ.Χ. (246 – 254), EIAFIY (63-71) και STEAP (262-270, 327-335). CD4 πεπτίδια που περιλαμβάνονται DBY (608-622) και ως έλεγχος, Pep25, την κυρίαρχη MHC τάξης ΙΙ-παρουσιάζονται επιτόπου του Μ

φυματίωση

Αα85Β [25].

τηλέφωνα Γραμμές

κύτταρα όγκου TRAMP-C2 παρασχέθηκαν από τον Dr. Norman Greenberg [26] και καλλιεργήθηκαν όπως περιγράφηκε προηγουμένως [16]. κύτταρα TRAMP-GM-CSF έχουν επίσης περιγραφεί στο παρελθόν [19].

BMT

Όλα τα πρωτόκολλα μεταμόσχευσης εξετάστηκαν και εγκρίθηκαν από το Memorial Sloan-Kettering Cancer Center IACUC. Οι πρωτόκολλα Transplantation έχουν περιγραφεί προηγουμένως [27].

χειρουργικό ευνουχισμό

Ποντικοί αναισθητοποιήθηκαν και μία μικρή τομή που γίνεται οσχέου για να αποκαλύψει τους όρχεις. Αυτά συρραφεί και να απομακρύνονται μαζί με τις γύρω λιπώδη ιστό.