Αφηρημένο

Ιστορικό

Ο επιπολασμός των οζιδίων του θυρεοειδούς αυξάνει με την ηλικία, κατά μέσο όρο 4-7% του ενήλικου πληθυσμού των ΗΠΑ, αλλά είναι πολύ υψηλότερο (19 – 67%), όταν υπο οι -Κλινική οζίδια θεωρείται. Περίπου το 90% αυτών των βλαβών είναι καλοήθεις και είναι αναγκαία μια αξιόπιστη προσέγγιση για την προεγχειρητική χαρακτηρισμό τους. Δυστυχώς, τα συμβατικά θυρεοειδούς σπινθηρογράφημα δεν επιτρέπει τη διάκριση μεταξύ καλοήθων και κακοήθων πολλαπλασιασμοί του θυρεοειδούς, αλλά παρέχει μόνο λειτουργικές πληροφορίες (

κρύο ή ζεστό οζίδια

).

Η έκφραση του αντι-αποπτωτικό μόριο galectin- 3 περιορίζεται σε καρκινικά κύτταρα και αυτό το χαρακτηριστικό έχει πιθανές διαγνωστικές και θεραπευτικές συνέπειες. Δείχνουμε εδώ τη δυνατότητα να ζητήσει την απεικόνιση του καρκίνου του θυρεοειδούς

in vivo

στοχεύοντας γκαλεκτίνη-3.

Μέθοδοι

Η γκαλεκτίνη-3 βασίζεται θυρεοειδούς ανοσο-σπινθηρογράφημα χρησιμοποιεί ως ραδιενεργό ιχνηθέτη μια ειδικές

99mTc-ραδιοσημασμένο mAb. Μια υψηλής ανάλυσης κάμερα mini-γάμμα θέση ευαίσθητη χρησιμοποιήθηκε ως διάταξη σύλληψης απεικόνισης. Ανθρώπινη γαλεκτίνη-3 θετικά ξενομοσχεύματα καρκίνου του θυρεοειδούς (ARO) και γαλεκτίνη-3 όγκοι knockout χρησιμοποιήθηκαν ως στόχοι σε διάφορα πειράματα

in vivo

. 38 ποντίκια με μάζα του όγκου του περίπου 1 gm ενέθηκαν στην φλέβα ουράς με 100 μθί

99mTc-επισημασμένο mAb προς γαλεκτίνης-3 (30 μg πρωτεΐνης /100 μΙ σε αλατούχο διάλυμα). εικόνες όγκου αποκτήθηκαν σε 1 ώρα, 3 ώρες, 6 ώρες, 9 ώρες και 24 ώρες μετά την ένεση, χρησιμοποιώντας την κάμερα μίνι-γάμα.

Ευρήματα

Τα αποτελέσματα από διάφορες διαδοχικές πειράματα δείχνουν μια βέλτιστη οπτικοποίηση του καρκίνου του θυρεοειδούς ξενομοσχεύματα μεταξύ 6 και 9 ώρες από την ένεση του ραδιοιχνηθέτη. Γαλεκτίνη-3 αρνητικούς όγκους δεν ανιχνεύθηκαν καθόλου. Σε 6 ώρες μετά την ένεση γκαλεκτίνη-3 που εκφράζουν όγκοι σωστά ορατά, ενώ η δραστηριότητα σε ολόκληρο το σώμα είχε καθαρίσει ουσιαστικά.

Συμπεράσματα

Αυτά τα αποτελέσματα καταδεικνύουν τη δυνατότητα να διακρίνει προεγχειρητικά καλοήθη από κακοήθη θυρεοειδούς οζίδια, χρησιμοποιώντας ένα ειδικό γκαλεκτίνη-3 ραδιο-immunotargeting.

In vivo

απεικόνιση του καρκίνου του θυρεοειδούς μπορεί να επιτρέψει μια καλύτερη επιλογή των ασθενών που αναφέρονται σε χειρουργική επέμβαση. Η δυνατότητα να εφαρμόσει αυτή τη μέθοδο για την απεικόνιση και τη θεραπεία των άλλων όγκων που εκφράζουν γκαλεκτίνη-3 συζητείται επίσης

Παράθεση:. Bartolazzi Α, D’Alessandria C, Parisella MG, Σινιόρε Α, Del Prete F, Λαύρας L, et al. (2008) καρκίνο του θυρεοειδούς απεικόνισης

In Vivo

με στόχευση την αντι-αποπτωτική Μόριο γκαλεκτίνη-3. PLoS ONE 3 (11): e3768. doi: 10.1371 /journal.pone.0003768

Συντάκτης: Andrew Boswell, Genentech, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 23 Ιούν 2008? Αποδεκτές: 2 του Νοέμβρη 2008? Δημοσιεύθηκε: 20, Νοεμβρίου του 2008

Copyright: © 2008 Bartolazzi et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Υποστηρίζεται από AIRC (Ιταλική Ένωση για την Έρευνα του Καρκίνου). Κανένα άλλο χορηγούς έπαιξε ρόλο σε αυτό το έγγραφο

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Ο υψηλός επιπολασμός των καλοήθων όζων του θυρεοειδούς σε ενήλικου πληθυσμού καθιστά την προεγχειρητική διάγνωση του καρκίνου του θυρεοειδούς συγκρίσιμη με «ψάχνει για μια βελόνα στα άχυρα». Ο επιπολασμός των οζιδίων του θυρεοειδούς αυξάνει με την ηλικία, κατά μέσο όρο 4-7% για τον ενήλικο πληθυσμό ΗΠΑ [1], αλλά είναι πολύ υψηλότερη (19-67%), όταν υπο-κλινική οζίδια θεωρούνται επίσης [2]. Ευτυχώς, περίπου το 90% αυτών των βλαβών είναι καλοήθεις και για το λόγο αυτό είναι απαραίτητο [1], [3].

Η έκφραση του ιωδιούχου νατρίου συμμεταφορέα (ΝΑΚ) μια αξιόπιστη και συστηματική προσέγγιση για την προεγχειρητική χαρακτηρισμό τους για την μεμβράνη των κυττάρων του θυρεοειδούς επιτρέπει στον θυρεοειδή αδένα να συγκεντρωθεί ιωδιούχο από τον ορό. NIS-μεσολάβηση ιωδιούχο πρόσληψη απαιτείται για τα επόμενα οργανοποίηση και οξείδωσης βήματα, τα οποία είναι σημαντικά γεγονότα για την παραγωγή των ορμονών του θυρεοειδούς. Αυτή η περίεργη ιδιότητα του αδένα υποστηρίζει συμβατικά σπινθηρογράφημα του θυρεοειδούς, η οποία χρησιμοποιεί ραδιενεργό ιώδιο στον καθορισμό του θυρεοειδούς αδένα και στις δύο φυσιολογικές και παθολογικές καταστάσεις [4]. Ωστόσο, αυτή η τεχνική που χρησιμοποιείται ευρέως δεν επιτρέπει τη διάκριση μεταξύ των καλοήθων και κακοήθων πολλαπλασιασμούς θυρεοειδούς. Στην πραγματικότητα, αν ο καρκίνος είναι ασυνήθιστο σε θυρεοειδούς οζίδια με την αποτελεσματική πρόσληψη ιωδίου (διατυπωμένο

ζεστό οζίδια

), η μεγάλη πλειοψηφία των πολλαπλασιασμών του θυρεοειδούς που αποτυγχάνουν να επικεντρωθεί ιωδιούχο (

κρύο οζίδια

) είναι βιολογικά καλοήθης [ ,,,0],4].

Κανονικά τα κύτταρα του θυρεοειδούς δεν εκφράζουν γκαλεκτίνη-3. Μια αναγκαστική έκφραση γκαλεκτίνη-3

μέσω

συγκεκριμένες επιμόλυνση του cDNA δημιουργεί ένα μετασχηματισμένο φαινότυπο, μπλοκάρουν το αποπτωτικό πρόγραμμα, ένα χαρακτηριστικό που ευνοεί την ανάπτυξη του καρκίνου [5] – [9]. Είναι ενδιαφέρον ότι, όπως αναφέρθηκε προηγουμένως σε μια μεγάλη πολυκεντρική αναδρομική μελέτη σε ιστολογικές υλικό, καλά διαφοροποιημένο καρκίνωμα του θυρεοειδούς σχεδόν αμετάβλητα εκφράζουν γαλεκτίνη-3 (& gt? 94% όλων των τύπων καρκίνου του θυρεοειδούς, με αποκλεισμό της μυελοειδές καρκίνωμα), ενώ καλοήθη πολλαπλασιασμοί θυρεοειδούς κάνει όχι (μόνο το 2% των καλοήθων όζων, ως επί το πλείστον εκπροσωπείται από αδενώματα, ήταν γκαλεκτίνη-3 θετικό) [10]. Η διαπίστωση αυτή επιβεβαιώθηκε από διάφορες μελέτες που αναφέρονται στη βιβλιογραφία [11] – [14] και γκαλεκτίνη-3 ανοσοχρώση έχει ήδη χρησιμοποιηθεί στην κλινική πράξη, σε ανοσο-κυτταρολογική επίπεδο, για την καλύτερη επιλογή των ασθενών που αναφέρεται θυρεοειδεκτομή [10], [15] – [17]. Σε αυτή τη μελέτη, χρησιμοποιώντας

in vivo

και

ex vivo

πειραματικά μοντέλα καρκίνου του θυρεοειδούς δείχνουμε τη δυνατότητα να αποκτήσουν μια απεικόνιση του καρκίνου του θυρεοειδούς αξιόπιστη

in vivo

με στόχευση το γαλεκτίνη-3 μόριο λεκτίνης. Αυτή η διαγνωστική προσέγγιση μπορεί επίσης να χρησιμοποιηθεί για την απεικόνιση διαφορετικούς όγκους γαλεκτίνης-3 που εκφράζουν

in vivo

.

Υλικά και Μέθοδοι

Οι κυτταρικές σειρές και γαλεκτίνη-3 mRNA παρεμβολή

καρκινικών κυττάρων του θυρεοειδούς γραμμές ARO, παραχωρήθηκε ευγενικά από τον Dr. Silvia Soddu (National Cancer Institute Regina Elena Ρώμη, Ιταλία) περιγράφηκε προηγουμένως [18] – [19]. Παρόλο που έχει πρόσφατα αμφισβητηθεί ο θυρεοειδής προέλευση των κυττάρων ARO [20], αυτή η γαλεκτίνη-3 θετική κυτταρική σειρά αναπτύσσεται πολύ αποτελεσματικά

in vivo

και παρέχει ένα χρήσιμο μοντέλο για τη ρύθμιση των πειραμάτων γαλεκτίνης-3 immunotargeting με και χωρίς γαλεκτίνη -3 παρεμβολές mRNA. Τα κύτταρα καλλιεργήθηκαν σε πρότυπες συνθήκες σε

2 ατμόσφαιρα σε RPMI-1640 συμπληρωμένο με 2 mM γλουταμίνη, 10% FCS, πενικιλίνη και στρεπτομυκίνη (GIBCO BRL, Gaithersburg, MD) 37 ° C και 5% CO.

Για γαλεκτίνης-3 παρεμβολή mRNA τρεις διαφορετικές ακολουθίες ταυτοποιήθηκαν και δοκιμάστηκαν όπως αναφέρεται προηγουμένως [21]. Οι ακόλουθες δύο αλληλουχίες, οι οποίες σε μεγάλο βαθμό και ομοίως κάτω ρυθμίζονται γαλεκτίνης-3 έκφραση σε κύτταρα ARO ήταν υπο-κλωνοποιήθηκε στον φορέα pSUPER και χρησιμοποιούνται εναλλακτικά (τα συντηρημένα μοτίβα υπογραμμισμένα): 5′-GATCCCCCAACAGGAGAGTCATTGTTTTCAAGAGAAACAATGACTCTCCTGTTGTTTTTGGAAA-3 ‘(Gal3-551, αίσθηση)? 5’-AGCTTTTCCAAAAA CAACAGGAGAGT-CATTGTTTCTCTTGAAAACAATGACTCTCCTGTTGGGG-3 ‘(Gal3-551, αντιπληροφοριακά)? GATCCCCACCTTACATGTGTAAAGGTTTCAAGAGAACCTTTACACATGTAA-GGTTTTTTGGAAA-3 ‘(Gal3-845, έννοια)? και 5’-AGCTTTTCCAAAAAACCTTAC-ATGTG TAAAGGTTCTCTTGAAACCTTTACACATGTAAGGTGGG-3 ‘(gal3-845, αντιπληροφοριακό).

Στο πείραμα που δείχνεται στο Σχήμα 1 (πίνακας Β) κύτταρα ARO διαμολύνθηκαν σταθερά με pSUPER-Gal3-551 (ΑγΟ- Gal-3θ) φορέα και εικονικές επιμολυσμένα με φορέα pSUPER ως έλεγχος (ARO-CTR). Η επιλογή των σταθερώς επιμολυσμένων κυττάρων έγινε με επεξεργασία με πουρομυκίνη 2 μg /ml (Sigma) 72 ώρες μετά την επιμόλυνση.

Α) Εικόνα αποκτώνται με υψηλής ανάλυσης κάμερα μίνι γάμμα σε ένα ποντίκι που φέρει ARO (Gal3 +) ξενομοσχεύματος μετά από 6 ώρες από iv ένεση 100 μθί

99mTc-επισημασμένο mAb προς γαλεκτίνης-3. Το βέλος δείχνει τη μάζα του όγκου αποκάλυψε στο αριστερό πόδι. Μια συνεπής συσσώρευση του ραδιοφωνικού ιχνηθέτη παρατηρείται στο ήπαρ ανάλογα με τη κάθαρση του εξωγενούς mAb (πίνακας 1Α)? Μορφολογικά και ανοσοϊστοχημική αξιολόγηση των αποκόπηκε ξενομοσχεύματος όγκου παρουσιάζουν ένα πτωχά διαφοροποιημένο καρκίνο του θυρεοειδούς με μεταβλητή έκφραση της γαλεκτίνης-3, όπως αποκαλύπτεται από ένα γαλεκτίνης-3 ειδικό mAb και άμεση ανοσοπεροξειδάσης μέθοδο χρώσης (πίνακας 2Α)? Ο πίνακας δείχνει την κινητική του όγκου κανονικής αναλογίας /μυ του ράδιο ιχνηθέτη σε διαφορετικά χρονικά σημεία (πίνακας 3Α). Β) Η εικόνα που αποκτήθηκαν με υψηλής ανάλυσης κάμερα μίνι γάμμα σε ένα ποντίκι που φέρει γκαλεκτίνη-3 παρενέβαινε ARO ξενομόσχευμα (Gal3-) μετά από 6 ώρες από την ενδοφλέβια ένεση 100 μθί

99mTc-επισημασμένο mAb προς γαλεκτίνης-3 (πίνακας 1Β)? Ανοσοϊστοχημική αξιολόγηση του αποκομμένου όγκου δείχνει μια συνεπής προς τα κάτω ρύθμιση του γαλεκτίνης-3 έκφρασης (πίνακας 2Β)? Η αποτελεσματικότητα του σταθερού γαλεκτίνης-3 παρεμβολή RNA στο κάτω ρύθμιση γαλεκτίνης-3 έκφραση καταδεικνύεται στο ανοσοστύπωμα. κύτταρα ARO ψευδο-επιμολυσμένα με φορέα pSUPER χρησιμοποιήθηκαν ως έλεγχος (CTR)? γκαλεκτίνη-3 παρενέβαινε κύτταρα ARO ήταν σταθερά επιμολυσμένα με φορέα pSUPER-Gal3-551 (Gal3i)? α-τουμπουλίνης χρησιμοποιήθηκε ως έλεγχος φόρτωσης. Η ανάλυση πυκνομετρίας των μοριακών ειδών οπτικοποιούνται στην πηκτή παρουσιάζεται επίσης (πίνακας 3Β). Τα αποτελέσματα εκφράζονται ως σχετικές μονάδες πυκνομετρίας (RDU), μετρούμενη ομαλοποίηση σήματος Gal-3 με την αντίστοιχο α-τουμπουλίνης ένταση ζώνης.

Η

τα κάτω ρύθμιση του γαλεκτίνης-3 έκφραση ελέγχθηκε σε ανάλυση κηλίδας Western σε διάφορα χρονικά σημεία (12-72 ώρες μετά την ένεση επιμόλυνση και καρκινικών κυττάρων σε ποντικούς).

Τα μονοκλωνικά αντισώματα και ανοσοϊστοχημεία

Α καθαρίστηκε ραφανιδική υπεροξειδάση συζευγμένο (HRP-συζευγμένο) μονοκλωνικό αντίσωμα αρουραίου για γαλεκτίνη -3 (SPACE SRL, Μιλάνο, Ιταλία) χρησιμοποιήθηκε σε immunohisto-κυτταροχημείας σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή, όπως έχουν αναφερθεί στο παρελθόν [13]. Εν συντομία, το αντιγόνο ανάκτηση θεραπεία μικροκύματα ιστών διαφανειών σε 0,01 mol /L ρυθμιστικό κιτρικών ρΗ 6,0 εφαρμόσθηκε για τρεις κύκλους 3 λεπτά το καθένα σε 750 W. Καθαρισμένο αρουραίου mAb κατευθύνεται σε γαλεκτίνης-3 χρησιμοποιήθηκε σε μία κλίμακα συγκέντρωσης 5-10 μg /ml. Η ενζυματική δραστηριότητα οπτικοποιήθηκε με 3, 3′-διαμινο-βενζιδίνη (Dako, Glostrup, Δανία).

ανάλυση Western Blot

Συνολικά εκχυλίσματα κυττάρων (TCEs) ελήφθησαν χρησιμοποιώντας ένα ρυθμιστικό διάλυμα λύσης που αποτελείται από: Tris HCl 50 mM, NaCl 150 mM, Tween 20 1%, PMSF 1 mM και 1 δισκίο πλήρους κοκτέιλ αναστολέα πρωτεΐνης (Roche). Ένα κλάσμα του TCE (30-70 μg) διαχωρίστηκε σε 10% SDS-PAGE, τότε κηλιδώθηκαν επί μεμβράνης νιτροκυτταρίνης (Bio-Rad). Τα ακόλουθα αντισώματα χρησιμοποιήθηκαν σε ανοσοκηλίδωση: ένα καθαρισμένο mAb αρουραίου να γαλεκτίνης-3 (Mabtech ΑΒ, Nacka Strand, Σουηδία), ένα mAb ποντικού αντι-α-τουμπουλίνης (TU-02, Santa Cruz Biotechnology) και HRP-συζευγμένο αντι-ποντικού IgG και IgG αντι-αρουραίου ειδικούς αντιορούς (Sigma). Η ανοσοαντιδραστικότητα ανιχνεύτηκε με τη χρήση ανάλυσης χημειο-φωταύγεια (ECL kit, Amersham Corporation). Τα μοριακά είδη επιλυθεί κηλίδωση Western τελικά αναλύθηκαν με πυκνομετρία, χρησιμοποιώντας ένα λογισμικό αφιερώσει (ΝΙΗ ImageJ, έκδοση 1.32j).

Τα αποτελέσματα εκφράζονται ως μονάδα σε σχέση πυκνομετρία (RDU) μετά από κανονικοποίηση με τιμές πυκνομετρία της ζώνης που λαμβάνονται για την α-τουμπουλίνης.

ποντικών μοντέλα ξενομοσχευμάτων καρκίνου του θυρεοειδούς

παθογόνων-free 4-5 εβδομάδων nude

(ηυ /ηυ)

ποντίκια (Charles River , USA) χρησιμοποιήθηκαν για τον καθορισμό ξενομοσχεύματα καρκίνου του θυρεοειδούς

in vivo

. Τα ποντίκια διατηρούνται σε κλωβούς των 4 ζώων η καθεμία με το νερό και τα τρόφιμα

κατά βούληση

. Γκαλεκτίνη-3 που εκφράζουν και άκρως ογκογόνο κακώς διαφοροποιημένο θυρεοειδή θυλακιώδη κυτταρική γραμμή καρκινώματος (ARO) και τα κύτταρα που προέρχονται ARO γκαλεκτίνη-3 νοκ-άουτ (ARO-Gal3 αρνητικά) εξετάστηκαν για αυτά τα πειράματα.

Άγρια τύπου και παρενέβαινε ARO κύτταρα διατηρήθηκαν σε πρότυπες συνθήκες καλλιέργειας όπως προαναφέρθηκε, ανεξάρτητο από πλάκες ιστοκαλλιέργειας με τρυψίνη-ΕϋΤΑ 0,05% 0,02% (Gibco), πλύθηκαν σε στείρο PBS και ενέθηκαν υποδορίως σε γυμνούς ποντικούς σε συγκέντρωση που κυμαίνεται από 7 × 10

6 έως 10

7 κύτταρα /0.2 ml αλατούχο διάλυμα, ανάλογα με το πείραμα. Ένεση των κυττάρων πραγματοποιήθηκε με τη χρήση τυποποιημένου βελόνα ινσουλίνης.

αριθ αναισθησία ήταν απαραίτητη. Πενήντα ζώα χρησιμοποιήθηκαν σε τρία διαφορετικά σύνολα πειραμάτων για την ίδρυση xenografs όγκου. Οι ποντικοί εξετάστηκαν τρεις φορές την εβδομάδα για ενδείξεις μετρήσιμων ανάπτυξης του όγκου.

επιλέχθηκαν ποντίκια για

in vivo πειράματα

απεικόνισης όταν το βάρος του όγκου ήταν περίπου 0,5-1 gm. Για να προσδιοριστεί η

in vivo

έκφραση γαλεκτίνης-3 σε ξενομοσχεύματα όγκου, μερικοί από τους όγκους χειρουργικά αποκόπηκαν και χρησιμοποιήθηκαν για γαλεκτίνη-3 ανάλυση έκφρασης όπως αναφέρθηκε παραπάνω. Το έργο αυτό πραγματοποιήθηκε σύμφωνα με τις ειδικές κατευθυντήριες γραμμές που παρέχονται από το Υπουργείο Δημόσιας Υγείας της Ιταλίας για το ζώο πειραματισμό. Αυτή η μελέτη έχει εγκριθεί από την Επιτροπή Δεοντολογίας Θεσμικών για τα πειράματα σε ζώα στο National Cancer Institute Regina Elena της Ρώμης. Η εγκατάσταση των ζώων κατά την NCI της Ρώμης είναι πιστοποιημένο από το Υπουργείο Δημόσιας Υγείας της Ιταλίας.

επισήμανση Ραδιόφωνο του μονοκλωνικού αντισώματος σε γκαλεκτίνη-3

Affinity καθαρισμένο και υψηλό βαθμό συγκέντρωσης (5 mg /ml) μονοκλωνικό αντίσωμα σε ανθρώπινη γαλεκτίνης-3 (Mabtech, Nacka, Sweden) ράδιο επισημασμένο με χρήση της μεθόδου που έχουν αναφερθεί προηγουμένως [22]. Εν συντομία, αντίσωμα δισουλφιδικές γέφυρες μειώθηκαν χρησιμοποιώντας μια μοριακή περίσσεια 2-μερκαπτοαιθανόλης (Sigma-Aldrich) για 30 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου ακολουθούμενη από καθαρισμό με μία στήλη Sephadex G-25 (Amersham Biosciences GmbH, UK) και ψυχρό ρυθμιστικό φωσφορικού διαβιβάζεται άζωτο ρΗ 7.4 σαν διαλύτη έκλουσης. Η μειωμένη αντίσωμα αποθηκεύθηκε στους -80 ° C μέχρι τη χρήση. Ενεργοποιημένος γαλεκτίνη-3 mAb (400 μg /200 μΙ όγκο) σημάνθηκε με την προσθήκη 7 μΐ ενός μεθυλεν-diposphonate (MDP) οστού κιτ σάρωσης (Medrotec®, Amersham Health, UK) όπως αναφέρθηκε προηγουμένως [22] και 10 mCi (370 MBq) του

99mTcO

4

– προσφάτως εκλούεται από (

γεννήτρια 99Mo /

99mTc) γεννήτρια (GE-Healthcare, UK). αποτελεσματικότητα επισήμανσης (LE) εκτιμήθηκε με τη χρήση Άμεση χρωματογραφία λεπτής στιβάδας (ITLC-SG, VWR, Ιταλία) με 0,9% NaCl ως κινητή φάση.

Οι ταινίες αναλύθηκαν από ένα μηχανογραφικό μίνι-ραδιόφωνο σαρωτή (Bioscan Σύστημα , Ιταλία). LE, ήταν & gt?. 95% με τελική ειδική δραστικότητα 70 μΟί /μα (Εικ. S1 σε απευθείας σύνδεση)

Προκειμένου να βελτιστοποιηθεί η αποτελεσματικότητα της επισήμανσης αντισώματος διάφορα πειράματα διεξήχθησαν μεταβάλλοντας την μοριακή αναλογία 2-μερκαπτοαιθανόλη /mAb (εύρος: 1.000:1 να 4.000:1) και ο λόγος mAb /

99mTc για την επισήμανση (εύρος 250.000:1 να 4.500.000:1)

η μείωση των γεφυρών δισουλφιδίου σε ένα. μοριακή αναλογία 2145:1 (2-μερκαπτοαιθανόλης /mAb) και μια μοριακή αναλογία 1,500,000:1 για Ab /

99mTc έδωσε την υψηλότερη LE του

99mTc-αντι-γαλεκτίνης-3 και χρησιμοποιήθηκαν για όλα τα περαιτέρω πειράματα (Εικ. S1 σε απευθείας σύνδεση).

Ειδικές μελέτες σταθερότητας διεξήχθησαν επωάζοντας φρέσκο ​​ράδιο επισημασμένου αντισώματος σε φυσιολογικό ορό ή ανθρώπινο πλάσμα στους 37 ° C για 24 ώρες και την αξιολόγηση της ραδιοφαρμακευτικό καθαρότητα με ITLC-SG σε διαφορετικά χρονικά σημεία (1 hr, 3 ώρες, 6 ώρες και 24 ώρες). Η σταθερότητα σε φυσιολογικό ορό και το πλάσμα ήταν υψηλή κατά τη διάρκεια των πρώτων 6 ωρών (& gt? 90% και & gt? 80% για φυσιολογικό ορό και το πλάσμα, αντίστοιχα) με μια ελαφρά μείωση στις 24 ώρες (Εικ. S1 σε απευθείας σύνδεση)

. υψηλή Ανάλυση γάμμα κάμερα

Η υψηλής ανάλυσης κάμερα γάμμα (HRC) (Li-tech Srl, Ιταλία), που παρουσιάζεται στο σχήμα S2 σε απευθείας σύνδεση αποτελείται από μια κρυσταλλική δομή-κατευθυντήρα σε συνδυασμό με ένα Hamamatsu H8500 (Hamamatsu, Ιαπωνία) θέση Ευαίσθητα Φωτογραφία πολλαπλασιαστής Tube (PSPMT), χρεώνουν ηλεκτρονικών ανάγνωσης και ένα σύστημα απόκτησης δεδομένων

Η πατενταρισμένη παράλληλα διόπτρας τρύπα, που έχουν ήδη περιγραφεί [24] – [25]. είναι κατασκευασμένο από καθαρό βολφράμιο με 200 μm πάχους διαφράγματα. Αποτελείται από ένα κατευθυντήρα 24 mm τοποθετημένα πάνω από μια συμπληρωματική δομή διοπτήρα 6 mm στην οποία κρύσταλλοι ενσωματώνονται στις τρύπες. Η δομή σπινθηρισμών αποτελείται από 20 × 20 ΟδΙ (ΤΙ) κρύσταλλοι array (Spectra Physics-Hilger, UK) με ένα οπτικό πεδίο (FOV) των 49,0 × 49,0 mm

2. Τα κρυστάλλινα διαστάσεις είναι 2,05 Χ 2,05 Χ 5,0 χιλιοστά

3 και κάθε κρύσταλλος καλύπτεται by100 μm λευκό αντανακλαστικό εποξική σε πέντε τυφλοί επιφάνειες του. Η κρυσταλλική δομή-κατευθυντήρα είναι συνδεδεμένο με το PSPMT μέσω οπτικών γράσο.

Ο H8500 PSPMT έχει εξωτερική μέγεθος του 52,0 × 52,0 × 18,0 mm

3 με μια ενεργή περιοχή 49,0 × 49,0 mm

2. Η φωτοκαθόδου είναι bi-αλκαλίων και το σύστημα πολλαπλασιασμού, που αποτελείται από δυνόδων κανάλι 12 μέταλλο, παρέχει ένα κέρδος 3 × 10

6 @ -1000 Β

Η πολλαπλασιάζεται χρέωση συλλέγονται από μια σειρά από 8 × 8 ανόδους.

Η ανάγνωση είναι μια μικρογραφία (52,0 × 52,0 × 5,0 χιλιοστά

3) front-end ηλεκτρονικών ειδών, και τα σήματα του δείγματος με ένα ειδικό συμβούλιο ADC compact USB. Το σύστημα απόκτησης παρέχει 4 κανάλια σε 20 Μ δείγματα /sec. απόκτησης και επεξεργασίας δεδομένων γίνεται σε ένα ενσωματωμένο σύστημα Linux εξοπλισμένο με ARM επεξεργαστή PXA255 με οθόνη αφής 10 «. Ο έλεγχος του συστήματος και το λογισμικό επεξεργασίας των δεδομένων είναι ιδιόκτητα εφαρμογές που έχουν αναπτυχθεί σε C ++ γλώσσα. Το σύστημα επιτρέπει την εκτέλεση μιας εξαγοράς σε πραγματικό χρόνο με το χρόνο ανανέωσης των 0,5 sec. Το σύστημα έχει σχεδιαστεί για να είναι μια μπαταρία λειτουργεί φορητή συσκευή? ως συνέπεια οι ανιχνευτή βάρη κεφάλι περίπου 2 κιλά, ενώ το συνολικό βάρος είναι περίπου 4,5 kg.

Το ψήφισμα ενέργειας HRC είναι περίπου 20% FWHM @ 140 keV (

99mTc) σε όλο το FOV. Η ευαισθησία είναι 210 cps /MBq και η ομοιομορφία είναι ± 5% ενώ παρέχει 2,2 χιλιοστά εγγενή χωρική ανάλυση κατάλληλο για πειράματα απεικόνισης μας

in vivo

με όγκο ξενομοσχεύτηκε ποντίκια, και

ex-vivo

με χειρουργικά δείγματα που προέρχονται από ασθενείς ανθρώπους.

ex-vivo απεικόνιση του ανθρώπινου καρκίνου του θυρεοειδούς

Ως απόδειξη της έννοιας για την απεικόνιση διαφοροποιημένο καρκίνο του θυρεοειδούς σε άνθρωπο, πραγματοποιήσαμε

ex-vivo

μελέτες πρόσδεσης χρησιμοποιώντας σαν στόχο μια νέα μεταστατικό αυχενικό λεμφαδένα αποκόπηκε από έναν ασθενή που φέρει ένα θηλώδους καρκινώματος του θυρεοειδούς. Αμέσως μετά την χειρουργική αφαίρεση του λεμφαδένα κόπηκε στη μέση κατά μήκος μέσω της βλάβης του καρκίνου και τα δύο τμήματα ιστού επωάστηκαν στους 37 ° C για 3 ώρες σε ένα διάλυμα 50 ml που περιέχει 2 μθί

99mTc-αντι-Gal-3 ( 0,1 μg πρωτεΐνης) σε αλατούχο διάλυμα με 1% HSA σε παρουσία ή απουσία 100 μg μη σημασμένου Gal-αντι-3 αντίσωμα

Αποτελέσματα

προκειμένου να αξιολογηθεί η εξειδίκευση δέσμευσης των α

99mTc-επισημασμένο mAb να γκαλεκτίνη-3

in vivo

, έξι ζώα που φέρουν γκαλεκτίνη 3-θετικών ξενομοσχευμάτων καρκινώματος (ARO-Gal-3

+) θεωρήθηκαν σε ένα προκαταρκτικό πείραμα.

Ποντίκια με μάζα όγκου περίπου 1 gm ενέθηκαν στην ουραία φλέβα (ίν) με 100 μθί

99mTc-επισημασμένο mAb προς γαλεκτίνης-3 (30 μg πρωτεΐνης /100 μΙ σε αλατούχο διάλυμα). Οι εικόνες ελήφθησαν σε 1 ώρα, 3 ώρες, 6 ώρες, 9 ώρες και 24 ώρες μετά την ένεση, χρησιμοποιώντας την κάμερα mini-γάμμα. Γκαλεκτίνη-3 immunotargeting των όγκων ARO ήταν ιδιαίτερα αποτελεσματική στην ξενομοσχεύτηκε ποντίκια. Μια κεντρική περιοχή της νέκρωσης των όγκων (ιστολογικά επιβεβαιωμένη) με μειωμένη δέσμευση του ραδιενεργού ορθώς απεικονίζεται σε μία από τις περιπτώσεις (εικ. S2 σε απευθείας σύνδεση). Προκαταρκτικά πειράματα με διαφορετικές γαλεκτίνης-3 θετικών όγκων, συμπεριλαμβανομένων των μελανωμάτων, του λεμφώματος και καρκινώματα του μαστού εξετάστηκαν επίσης για το σκοπό αυτό με επικαλυπτόμενες αποτελέσματα (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Όπως ήταν αναμενόμενο, η πλειοψηφία των γαλεκτίνης-3 επισημασμένου αντισώματος ράδιο συμπυκνώθηκε στο ήπαρ ανάλογα με τη κάθαρση του εξωγενούς mAbs από το αίμα [26] (εικ. S2 σε απευθείας σύνδεση). Προκειμένου να βελτιστοποιηθεί η σύλληψη απεικόνισης και για να αποδειχθεί η ειδικότητα πρόσδεσης του γαλεκτίνης-3 mAb ένα μεγαλύτερο

in vivo

πείραμα (επαναλήφθηκε εις τριπλούν) θεωρήθηκε.

Το πείραμα περιελάμβανε 12 ξενομοσχεύτηκε ποντίκια , δύο ομάδες από έξι ζώα η κάθε μια. Η πρώτη ομάδα μεταμοσχεύθηκε με γαλεκτίνης 3-θετικών κυττάρων ARO σε συγκέντρωση 5-8 χ 10

6 κύτταρα /0,2 ml αλατούχου διαλύματος /ποντικό? η δεύτερη ομάδα των ποντικών που μεταμοσχεύονται με γκαλεκτίνη-3 νοκ-άουτ κύτταρα ARO (ARO-Gal3 αρνητική), που λαμβάνεται με τη χρήση ενός ειδικού γκαλεκτίνη-3 παρεμβολή RNA (iRNA) [20].

αρνητικά κύτταρα ARO-Gal3 ήταν με υποδόρια ένεση σε συγκέντρωση 10

7cells /0,2 ml αλατούχου διαλύματος /ποντίκι, προκειμένου να προωθηθεί η ταχεία ανάπτυξη του όγκου

in vivo

σε περίπου 4 ημέρες.

Αυτό που απαιτείται για τη διατήρηση της ένα αποτελεσματικό κάτω ρύθμιση γαλεκτίνης-3 έκφραση σε σταθερό παρενέβαινε κύτταρα ARO, αυξανόμενη

in vivo

απουσία Πουρομυκίνης ως επιλεκτικά αντιβιοτικά. Γκαλεκτίνη-3 κάτω ρύθμιση σε σταθερή παρενέβαινε κύτταρα ARO ελέγχθηκε στη δυτική κηλίδα σε διαφορετικά χρονικά σημεία (12-72 ώρες). Μετά από 4 ημέρες από την ένεση των κυττάρων όλα τα ποντίκια ανέπτυξαν ένα ορατό υποδόριο όγκο με μέσο μέγεθος διαμέτρου 0,5 cm. Τα ζώα στη συνέχεια με ένεση στη φλέβα της ουράς με 100 μθί

99mTc-επισημασμένο mAb προς γαλεκτίνης-3 (30 μg πρωτεΐνης) και οι εικόνες ολόκληρο το σώμα αποκτήθηκαν σε 1 ώρα, 3 ώρες, 6 ώρες, 9 ώρες και 24 ώρες χρησιμοποιώντας την κάμερα υψηλής ανάλυσης γάμμα.

Εικόνες αναλύθηκαν αντλώντας τις περιοχές ενδιαφέροντος (ROI) πάνω από την εμφυτευμένη όγκου και πάνω από τον πάγκο πλευρική μυών που λαμβάνονται ως φόντο. Όπως αναμενόταν η βέλτιστη απεικόνιση των ARO-Gal-3

+ ξενομοσχεύματα λήφθηκε μεταξύ 6 και 9 ώρες από την ένεση του ραδιοιχνηθέτη, ενώ γαλεκτίνη-3 αρνητικούς όγκους δεν ανιχνεύθηκαν καθόλου (Σχ. 1 πίνακες Α και Β) . Οι όγκοι τελικά εκφυτευτεί για ιστολογική εκτίμηση και ανοσο-φαινοτυπικά ανάλυση όπως φαίνεται στο σχήμα 1.

Σε μία διαφορετική ομάδα πειραμάτων, 20 ARO ξενομοσχεύτηκε ποντίκια ενέθηκαν με 100 μθί

99mTc-επισημασμένο mAb προς γαλεκτίνη -3 (πρωτεΐνη 30 μg) και 5 ομάδες των 4 ζώων κάθε θυσιάστηκαν σε 3 ώρες, 6 ώρες, 9 ώρες, 12 ώρες και 24 ώρες μετά την ένεση, αντίστοιχα.

δείγματα ιστών από το αίμα, το ήπαρ, σπλήνα, νεφρό, λεπτό έντερο, παχύ έντερο, των μυών και ARO όγκου ξενομοσχεύματα αφαιρέθηκαν, σταθμισμένο και μετρήθηκαν για την παρουσία της ραδιενέργειας. Όλα τα ζώα απεικονίστηκαν πριν από τη θανάτωση με επαναλήψιμα αποτελέσματα (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Η

in vivo

βιο-διανομή του ράδιο επισημασμένου γαλεκτίνης-3 mAb εκφράζονται ως ποσοστό της ενέσιμης δόσης ανά γραμμάριο ιστού (% ID /g), έδειξε μια ταχεία κάθαρση του αίματος του ραδιοφαρμάκου εντός 3 ωρών από την ένεση. Το μεγαλύτερο μέρος της ραδιενέργειας ανιχνεύθηκε στο ήπαρ και τα νεφρά υποδεικνύοντας μία άμεση κάθαρση του ιχνηθέτη

μέσω

του ήπατος και του ουροποιητικού συστήματος (πίνακας 1).

Η

Όπως ήταν αναμενόμενο η πρόσληψη του όγκου των η γαλεκτίνη-3 ειδικές

99mTc-επισημασμένο mAb αυξήθηκε από 3 σε 9 ώρες μετά την ένεση. Σε 6 ώρες μετά την ένεση οι όγκοι-στόχοι ήταν σαφώς ορατά, ενώ η δραστηριότητα σε ολόκληρο το σώμα είχε καθαρίσει ουσιαστικά (πίνακας 1 και εικ. S2 σε απευθείας σύνδεση).

Αν και η μετάφραση αυτών των ευρημάτων στην κλινική θα απαιτήσει τη χρήση εξανθρωπισμένου mAbs συνδέονται με διαφορετικά ραδιονουκλίδια και πιο εκτεταμένη προκλινικές μελέτες, επιχειρήσαμε να προσομοιώσει μια γαλεκτίνης-3 που βασίζεται σε απεικόνιση του ανθρώπινου καρκίνου του θυρεοειδούς

ex-vivo

. Για το σκοπό αυτό ένα φρέσκο ​​αυχενικό λεμφαδένα χειρουργικά αποκόπηκε από έναν ασθενή που φέρει ένα μετάσταση θηλώδες καρκίνωμα του θυρεοειδούς (ιστολογικά επιβεβαιωμένο), χρησιμοποιήθηκε ως στόχος για τη μελέτη της δέσμευσης αποτελεσματικότητα της Gal-3 ειδικό ραδιο-ιχνηθέτη.

Αμέσως μετά τη χειρουργική απομάκρυνσης ο λεμφαδένας κόπηκε στη μέση μέσω της βλάβης του καρκίνου και επωάστηκε στους 37 ° C για 3 ώρες σε 50 ml αλατούχου διαλύματος που περιέχει 2 μCi του

99mTc-mAb προς γαλεκτίνης-3 (0,1 μg πρωτεΐνης) και 1% ανθρώπινης λευκωματίνη ορού, σε παρουσία ή απουσία 100 μg μη επισημασμένης (κρύο) αντι-γαλεκτίνης-3 mAb (δοκιμασία μετατόπισης).

Μετά από εκτεταμένη πλύση σε αλατούχο διάλυμα συγκριτική απεικόνιση των δύο παρασκευάσματα ιστού διεξήχθη. Τα αποτελέσματα αυτού του πειράματος φαίνονται στο σχήμα 2.

Το σχήμα δείχνει το δείγμα λεμφαδένων κόβεται στο μισό κατά μήκος και απεικονίζεται με τη χρήση του μίνι κάμερα γάμμα μετά 1 ώρα και 2 ώρες επώασης με 2 μθί

99mTc-επισημασμένο mAb προς γαλεκτίνης-3 (0,1 μg πρωτεΐνης) σε αλατούχο διάλυμα, σε παρουσία (πίνακας Β) ή όχι (πίνακας Α) μίας περίσσειας (100 μg) μη επισημασμένου γαλεκτίνης-3 ειδικό mAb. Το πάνελ Α δείχνει ανίχνευση του όγκου μέσω ραδιο-ιχνηθέτη μετά από 1 ώρα και 2 ώρες επώασης. Πάνελ Β δείχνει μια συνεπή χαμηλότερη πρόσληψη του ραδιο-ιχνηθέτη σε παρουσία περίσσειας μη επισημασμένου αντι-gal3- mAb, λόγω της ειδικής αποτέλεσμα μετατόπισης.

Η

Η κάμερα mini-γάμα ανιχνεύθηκε αμέσως η μετάσταση του καρκίνου του θυρεοειδούς (πάνελ α), ενώ ένας λιγοστά πρόσληψη όγκου του ραδιοιχνηθέτη ήταν ορατή στον έλεγχο, λόγω της επίδρασης μετατόπιση του κρύου mAb σε περίσσεια (πίνακας Β).

Συζήτηση

Συνολικά αυτά αποτελέσματα δείχνουν τη δυνατότητα να ανιχνεύσει τον καρκίνο του θυρεοειδούς και άλλες γκαλεκτίνη-3 που εκφράζει όγκους

in vivo

χρησιμοποιώντας ένα γκαλεκτίνη-3 ειδικό ραδιο-ανοσοσπινθηρογράφησης. Η χρήση της γαλεκτίνης-3 ραδιο-ιχνηθέτη για την ανίχνευση του καρκίνου του θυρεοειδούς

in vivo

υποστηρίζεται από ένα στερεό μοριακό λογική [5], [7] – [10]. Επιπλέον αποδείξαμε πρόσφατα ότι γκαλεκτίνη-3 immunotargeting αποτελεί ένα χρήσιμο διαγνωστικό εργαλείο για τον εντοπισμό προεγχειρητικά κακοήθεις υπερπλασίες του θυρεοειδούς σε ανοσο-κυτταρολογική βάσεις, αν και ορισμένα καρκινώματα του θυρεοειδούς (περίπου 10-15%, ανάλογα με τις μελέτες) δεν εκφράζουν γκαλεκτίνη-3 [10] – [14], [17]. Η γκαλεκτίνη-3 βασίζεται ραδιο-ανοσοσπινθηρογράφησης που προτείνεται εδώ, παρέχει βιολογικές πληροφορίες σχετικά με όζους του θυρεοειδούς και αποτελεί ένα χρήσιμο οδηγό για να προσδιορίσει σωστά αυτά τα πολλαπλασιασμοί του θυρεοειδούς που πρέπει να αξιολογηθούν κυτταρολογικά και /ή αποκοπεί αμέσως.

Συνδυάζοντας γκαλεκτίνη-3 απεικόνισης με θυρεοειδή FNA-κυτταρολογική εξέταση, στην πραγματικότητα, μπορεί να επιτρέψει να διακρίνουν προεγχειρητικά καλοηθών από κακοήθεις πολλαπλασιασμούς θυρεοειδούς με υψηλή απόδοση. Κατά συνέπεια θα μπορούσε να αποφευχθεί πολλά περιττά thyroidectomies και την κλινική χρήση συμβατικών θυρεοειδούς σπινθηρογραφήματος με ραδιόφωνο ιωδιούχο, η οποία παρέχει μόνο λειτουργική πληροφορίες σχετικά με συγκεκριμένες συνθήκες του θυρεοειδούς, θα μπορούσε να περιορίζεται σε περισσότερες επιλεγμένες κλινικές ερωτήσεις. Περαιτέρω μελέτες που χρησιμοποιούν ανθρωποποιημένα γκαλεκτίνη-3 ειδικά μονοκλωνικά αντισώματα συζευγμένα σε διαφορετικά ραδιονουκλίδια θα είναι απαραίτητη για την επιβεβαίωση και την επικύρωση αυτών των ευρημάτων. Αν η προτεινόμενη διαγνωστική προσέγγιση θα αποδειχθεί επιτυχημένη μια στοχευμένη ράδιο-κατάλυση της γκαλεκτίνη 3-εκφράζοντας όγκους μπορεί επίσης να διερευνηθεί με τη χρήση γκαλεκτίνη-3 ειδικά μονοκλωνικά αντισώματα συζευγμένα με διαφορετικούς ραδιοφωνικούς ενώσεων (δηλαδή

186Re,

177Lu ή

90Y,

64Cu,

67Cu). Ένα γαλεκτίνη-3 ‘ακτινοβολίας στοχευμένη θεραπεία »παραδίδει ο δόση ακτινοβολίας ειδικά στην γαλεκτίνης-3 θετικά όγκου με περιορισμένη έκθεση των φυσιολογικών ιστών. Διείσδυση του βητα- ακτίνες στο ζωντανούς ιστούς είναι αρκετά χιλιοστά και το θεραπευτικό αποτέλεσμα μπορεί να ληφθεί επίσης σε καρκινικά κύτταρα που δεν καταλαμβάνουν άμεσα το ραδιοφάρμακο (φαινόμενο cross-φωτιά). Αυτή η προσέγγιση θα μπορούσε να είναι χρήσιμη τόσο για τον εντοπισμό και τη θεραπεία των πολύ μικρών θηλώδες καρκίνωμα του θυρεοειδούς (βλάβες μικρότερες από 1 cm, συνήθως έχει «

απόκρυφη PTC

»), η οποία είναι προς το παρόν μη ανιχνεύσιμα προεγχειρητικά.

Επιπλέον, η δυνατότητα για τη θεραπεία της πρωτοβάθμιας και μεταστατικές κακοήθειες του θυρεοειδούς που είναι γκαλεκτίνη-3 θετικό, αλλά μη-ιωδίου άπληστος και για το λόγο αυτό δεν ανταποκρίνονται στη συμβατική ραδιο-μεταβολική θεραπεία με

131Iodine, αντιπροσωπεύει ένα σημαντικό επίτευγμα στην ογκολογία, που θα είναι διερευνήθηκε περαιτέρω.

τα προκαταρκτικά στοιχεία του

in vivo

απεικόνιση γκαλεκτίνη-3 θετικά μελανώματα, τα λεμφώματα και τα καρκινώματα του μαστού έχουν επίσης ληφθεί άνοιγμα ενδιαφέρουσες δυνατότητες για το μέλλον να χρησιμοποιούν το ραδιόφωνο επισημαίνονται mAbs να galectin- 3 για

in vivo

απεικόνιση και θεραπεία των διαφόρων τύπων ανθρώπινων κακοηθειών [27] – [31]

Υποστήριξη Πληροφορίες

Σχήμα S1..

σταθερότητα και την αποτελεσματικότητα της επισήμανσης της γκαλεκτίνη-3 ραδιο-ιχνηθέτη. Η σταθερότητα του ραδιοιχνηθέτη εκτιμήθηκε με επώαση ενός δείγματος του ράδιο επισημασμένου mAb σε φυσιολογικό ορό και ορό για 24 ώρες στους 37 ° C. Το ποσοστό των τεχνήτιο δεσμεύεται στο mAb αξιολογήθηκε με Instant λεπτής στιβάδας χρω- ματογραφία Silica Gel με βάση (ITLC-SG) λωρίδες σε διαφορετικά χρονικά σημεία. Η γραφική παράσταση δείχνει συγκράτηση του τεχνητίου που κυμαίνεται μεταξύ 100% και 85% κατά τη διάρκεια των πρώτων έξι ωρών (περίπου 360 λεπτά) με μια ελαφρά μείωση από 6 έως 24 ώρες (άνω πάνελ). Η δραστηριότητα για ραδιοσήμανση mAb αντι γαλεκτίνη-3 έχει αξιολογηθεί σε ένα πείραμα τιτλοδότησης. Η καλύτερη αναλογία mAb /Tc έχει υπολογιστεί με τη μεταβολή της δραστηριότητας του 99mTc προστίθενται σε ένα σταθερό όγκο των μειωμένων αντισώματος. Η αποτελεσματικότητα επισήμανσης (LE) αξιολογήθηκε με ITLC-SG. Η βέλτιστη αναλογία mAb /Tc διαπιστώθηκε ήταν 1.200.000 /1 που αντιστοιχεί σε 30-40 mCi δραστηριότητας και αποτελεσματικότητα επισήμανσης έως και 95%. Μια δραστηριότητα που υπερβαίνει την τιμή αυτή δεν αυξάνει το LE (κάτω πάνελ Β)

doi:. 10.1371 /journal.pone.0003768.s001

(8,52 MB DOC)

Εικόνα S2.

όγκου απεικόνισης in vivo με τη χρήση 99mTc-επισημασμένο mAb να γκαλεκτίνη-3 και ένα υψηλής ανάλυσης φορητή μίνι κάμερα γάμμα. Α) Η υψηλής ανάλυσης φορητή κάμερα mini γάμα που χρησιμοποιούνται σε αυτή τη μελέτη. Β) Εικόνα συλλαμβάνονται από την κάμερα γάμμα υψηλής ανάλυσης σε ένα ποντίκι που φέρει το γκαλεκτίνη-3 θετικό ξενομοσχεύματος καρκινώματος του θυρεοειδούς ARO, μετά από 6 ώρες από την ενδοφλέβια ένεση 100 μθί 99mTc-επισημασμένο mAb προς γαλεκτίνης-3. Ο όγκος επιβεβαίωσε σε ιστολογία ήταν 1,2 εκατοστά σε διάμετρο και έδειξε ένα μεγάλο κεντρικό νεκρωτική περιοχή που αντιστοιχεί στο κενό που απέτυχε να διορθώσετε το ραδιενεργό ιχνηθέτη (βέλος)

doi:. 10.1371 /journal.pone.0003768.s002

(10,39 MB DOC)

Ευχαριστίες

Σας ευχαριστούμε Μάρκο Πάολο Martegani για την τεχνική βοήθεια για την προετοιμασία του χειρογράφου.