Αφηρημένο

ρετινοβλάστωμα 6 (RBBP6) διαδραματίζει σημαντικό ρόλο στην συνοδός μεσολάβηση ουβικιτίνωσης και αλληλεπιδρά με TP53 στην καρκινογένεση. Ωστόσο, η κλινικοπαθολογική σημασία της έκφρασης RBBP6 στον καρκίνο του παχέος εντέρου είναι άγνωστη? Ειδικότερα, η προγνωστική αξία της RBBP6 συνδυάζεται με έκφραση ΤΡ53 δεν έχει διερευνηθεί. Ως εκ τούτου, η ποσοτική PCR πραγματικού χρόνου και αναλύσεις κηλίδος western πραγματοποιήθηκαν για την ανίχνευση της έκφρασης RBBP6 σε ιστούς καρκίνου του παχέος εντέρου. RBBP6 και έκφραση ΤΡ53 αξιολογήθηκαν με ανοσοϊστοχημεία σε μορφή μικροσυστοιχίας ιστού, στην οποία ο πρωτογενούς ιστού καρκίνου του παχέος εντέρου ζευγαρώθηκε με noncancerous ιστό. δείγματα ιστού ελήφθησαν από 203 ασθενείς. Βρήκαμε ότι RBBP6 ήταν υπερεκφράζεται στο παχύ έντερο ογκογόνους ιστούς και συνδέθηκε σημαντικά με το κλινικό στάδιο, το βάθος της εισβολής όγκου, λεμφαδένα μετάσταση (LNM), μακρινή μετάσταση, και ιστολογική βαθμό. Περαιτέρω μελέτες αποκάλυψαν ότι η αντίστοιχη συσχέτιση μεταξύ RBBP6 υπερέκφραση και μετάλλαξη TP53 ήταν εμφανής στον καρκίνο του παχέος εντέρου (r = 0,450?

P

& lt? 0.001). RBBP6 έκφραση ήταν ένας ανεξάρτητος προγνωστικός παράγοντας για τη συνολική επιβίωση (OS) και απαλλαγμένα από ασθένειες επιβίωση (DFS). Είναι ενδιαφέρον ότι, οι ασθενείς με όγκους που είχαν τόσο RBBP6 υπερέκφραση και η συσσώρευση πρωτεϊνών μεταλλαγμένων TP53 υποτροπή και πέθανε μέσα σε ένα πολύ σύντομο χρονικό διάστημα μετά την επέμβαση (

P

& lt? 0.001). Η πολυπαραγοντική ανάλυση έδειξε ότι οι ασθενείς με LNM και ασθενείς τόσο με RBBP6- και TP53-θετικούς όγκους είχε εξαιρετικά κακή OS (HR 6,75? 95% CI 2,63 έως 17,35?

P

& lt? 0.001) και DFS (HR 8,08? 95% CI 2,80 έως 23,30?

P

& lt? 0.001). Αυτά τα κλινικά ευρήματα δείχνουν ότι η εκτίμηση των δύο RBBP6 και μεταλλαγμένα έκφραση TP53 θα είναι χρήσιμη στην πρόβλεψη πρόγνωση του καρκίνου του παχέος εντέρου

Παράθεση:. Chen J, Tang Η, Wu Ζ, Zhou C, Jiang Τ, Xue Y, et al. (2013) Η υπερέκφραση του RBBP6, μόνο ή σε συνδυασμό με Mutant TP53, είναι προβλεπτική κακή πρόγνωση στον καρκίνο του παχέος εντέρου. PLoS ONE 8 (6): e66524. doi: 10.1371 /journal.pone.0066524

Επιμέλεια: Yves St-Pierre, INRS, Καναδάς

Ελήφθη: 21, Φεβρουαρίου, 2013? Αποδεκτές: 6 του Μάη, 2013? Δημοσιεύθηκε: 17, Ιουνίου 2013

Copyright: © 2013 Chen et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε από τα ταμεία: Εθνικό Ίδρυμα Φυσικών Επιστημών της Κίνας (81072008, 81172328), Ιατρικό Πρόγραμμα Προσανατολισμού της Σαγκάης Επιστήμης και Τεχνολογίας της Επιτροπής (114119a4600, 124119a1700), Ίδρυμα Φυσικών Επιστημών του Δήμου Σαγκάης (11ZR1429200). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Ως ένας από τους συχνότερους καρκίνους παγκοσμίως, καρκίνος του παχέος εντέρου είναι μια σημαντική αιτία θνησιμότητας. Η χειρουργική εκτομή είναι η θεραπεία στήριγμα για καρκίνωμα του παχέος εντέρου. Tumor επανάληψη είναι ο κύριος παράγοντας για την αποτυχία της θεραπείας του καρκίνου του παχέος εντέρου μετά από χειρουργική επέμβαση. [1] κόμβο μετάσταση όγκου (TNM) στάσης χρησιμοποιείται κυρίως για την εκτίμηση του κινδύνου υποτροπής του καρκίνου του παχέος εντέρου. [2] Ωστόσο, οι ασθενείς στο ίδιο στάδιο του όγκου θα μπορούσε να έχει μεταβλητό κλινικά αποτελέσματα. [3] Ως εκ τούτου, είναι αναγκαία η ανακάλυψη νέων δεικτών για την καλύτερη πρόβλεψη της μετά τη χειρουργική επέμβαση επανεμφάνιση του όγκου.

Αθροιστική κλινικά στοιχεία έδειξαν ότι οι αλλαγές στο κελί του κύκλου ρυθμιστή ουβικιτίνωσης συνδέεται με πολλές ανθρώπινες κακοήθειες. [4] Η υψηλή αποδοτικότητα και εξαίσια επιλεκτικότητα των αντιδράσεων ουβικιτινίωση διαμεσολαβούνται από ένζυμα γνωστά ως λιγάσες ουβικιτίνης-πρωτεΐνης ή Ε3. [5] Η πρωτεΐνη που κωδικοποιείται από την πρόσδεση ρετινοβλαστώματος πρωτεΐνη 6 (

RBBP6

) γονίδιο, που βρίσκεται στο χρωμόσωμα 16p11.2-ρ12, προτάθηκε να κατέχει Ε3 δραστικότητα παρόμοια. [6] RBBP6 εντοπίζεται έντονα να χρωμοσωμάτων κατά τη διάρκεια της μίτωσης και την πυρηνική στίγματα, των οποίων η υπερέκφραση μπορεί να οδηγήσει σε διακοπή του κυτταρικού κύκλου, ένα κοινό χαρακτηριστικό της ογκογένεσης. [7] Up-ρύθμιση του

RBBP6

έντονα συσχετίζεται με την εξέλιξη του όγκου σε τραχήλου της μήτρας και του οισοφάγου καρκίνων, γεγονός που υποδηλώνει ότι

RBBP6

διαδραματίζει κρίσιμο ρόλο στη κακοήθη φαινότυπο ανθρώπινων καρκίνων. [8], [9] Ωστόσο, λίγα είναι γνωστά για την κλινική και παθολογική σημασία και προγνωστική αξία της

RBBP6

έκφρασης σε καρκίνο του παχέος εντέρου.

RBBP6 είναι μία από τις λίγες πρωτεΐνες που ταυτοποιούνται που έχει έχει αποδειχθεί ότι αλληλεπιδρά με ΤΡ53. [10] Μέσω ΔΑΧΤΥΛΙΔΙ δάχτυλο-όπως τομέα του, RBBP6 ubiquitinates TP53 από Mdm2, μια Ε3 λιγκάσης της ουμπικουϊτίνης. [11] Στις περισσότερες ανθρώπινους καρκίνους, το ογκοκατασταλτικό ΤΡ53 μεταλλάσσεται, οδηγώντας σε ΤΡ53 δυσλειτουργία και απέκτησε ογκογόνο δραστηριότητες. [12], [13] Μεταλλάξεις του ΤΡ53, τα οποία θεωρούνται ότι είναι σε θέση να φέρουν ουβικιτινίωση, πιστεύεται ότι εμπλέκονται στην παθογένεση της όσο το 60% των καρκίνων του παχέος εντέρου [14] – [16]. Δεδομένου ότι η ημιπερίοδος ζωή της πρωτεΐνης ΤΡ53 άγριου τύπου είναι σημαντικά μικρή (5 ± 20 min) και είναι σύμφωνη με την ταχεία κύκλο εργασιών της, είναι συνήθως μη ανιχνεύσιμη με πρότυπο ανοσοϊστοχημεία. Ως εκ τούτου, η ανιχνευόμενη πρωτεΐνη ΤΡ53 θεωρήθηκε ότι είναι η μεταλλαγμένη πρωτεΐνη ΤΡ53. [11] Μεταλλαγμένα γονίδια είναι ιδανικοί στόχοι για τη θεραπεία, όπως φαίνεται σε μια πρόσφατη μελέτη, η οποία ανέφερε ότι η τακτική κατανάλωση ασπιρίνης από ασθενείς που διαγνώστηκαν με καρκίνο του παχέος εντέρου σχετίζεται με μεγαλύτερη επιβίωση μεταξύ των ασθενών με μεταλλαγμένο-PIK3CA ορθοκολικού καρκίνου αλλά όχι μεταξύ των ασθενών με άγριου πληκτρολογήστε τον καρκίνο PIK3CA. [17] Μέχρι σήμερα, τα στοιχεία για την σύνδεση των TP53 μεταλλάξεων με την πρόγνωση του καρκίνου του παχέος εντέρου ήταν ετερογενείς. [18] Επιπλέον, ο συσχετισμός μεταξύ μεταλλάξεων ΤΡ53 και RBBP6, ειδικά η προγνωστική αξία των συνδυασμένων πρότυπο έκφρασης τους, δεν έχει αναλυθεί σε καρκίνο του παχέος εντέρου.

Σε αυτή τη μελέτη, αξιολογήσαμε την έκφραση RBBP6 και μεταλλαγμένων ΤΡ53 σε ανθρώπινους ιστούς καρκίνου του παχέος εντέρου, και η συσχέτιση τους με κλινικοπαθολογική χαρακτηριστικά και την επιβίωση των ασθενών. Εξετάσαμε επίσης το κατά πόσον η συνδυασμένη έκφραση RBBP6 και μεταλλαγμένα TP53 θα μπορούσαν να χρησιμεύσουν ως προγνωστικοί δείκτες για την πρόγνωση των ασθενών.

Υλικά και Μέθοδοι

Ανθρώπινα δείγματα ιστών και Πληροφορίες ασθενούς

δείγματα ιστών ελήφθησαν από 203 ασθενείς με καρκίνο του παχέος εντέρου επιτρέπεται λειτουργίας από το Τμήμα Γενικής Χειρουργικής του Νοσοκομείου της Σαγκάης Jiao Tong University Affiliated Πρώτη Λαϊκής μεταξύ Ιανουαρίου 2001 και Δεκεμβρίου 2003. Λεπτομερείς πληροφορίες σχετικά με την περιγραφή του ασθενούς παρέχεται στην προηγούμενη έκθεση. [19] Υπήρχαν 86 άνδρες και 117 γυναίκες ασθενείς, με μέση ηλικία τα 68 έτη (εύρος, 22-95 ετών) κατά το χρόνο λειτουργίας. Οι διαγνώσεις επιβεβαιώθηκαν με τουλάχιστον 2 παθολόγους και στάσης προσδιορίστηκε σύμφωνα με την αμερικανική μεικτής επιτροπής για τον Καρκίνο (AJCC). επιβίωση των ασθενών ελεύθερη νόσου (DFS) και τη συνολική επιβίωση (OS) διάρκειες ορίστηκαν ως το χρονικό διάστημα από την αρχική χειρουργική επέμβαση για να κλινικά αποδεδειγμένη μετάσταση ή επανάληψης και του θανάτου, αντίστοιχα. Ο διάμεσος χρόνος παρακολούθησης των ασθενών ήταν 61 μήνες μετά την επέμβαση (εύρος 9-89 μήνες). Η μελέτη εγκρίθηκε από την Institutional Review Boards της Σαγκάης Jiaotong Πανεπιστήμιο και το Νοσοκομείο συνδεδεμένες Ιατρικό Κέντρο της Σαγκάης Πρώτη Λαϊκής. Γραπτή και εν επιγνώσει συναίνεση λήφθηκε από κάθε ασθενή πριν από την εγγραφή στη μελέτη.

Εξαγωγή RNA και ποσοτική πραγματικού χρόνου PCR (qPCR)

Σαράντα ζεύγη δειγμάτων των κατεψυγμένων ιστών χρησιμοποιήθηκαν για την ανάλυση qPCR. Σύνολο κυτίο εκχύλισης RNA (Qiagen, Germany) και κιτ σύνθεσης cDNA (Promega, USA) χρησιμοποιήθηκαν σύμφωνα με τις οδηγίες των κατασκευαστών.

RBBP6

γονίδιο ενισχύθηκε χρησιμοποιώντας πρόσθιο εκκινητή 5′-ctccccatacacttcctctcc-3 ‘, και αντιπληροφοριακό εκκινητή 5′-ttcttttagtcgtcgctgctc-3’. qPCR διεξήχθη σε ΕΡ Mastercycler Realplex (Eppendorf) χρησιμοποιώντας το IQTM SYBR Green Supermix Kit (Bio-Rad) σύμφωνα με το πρωτόκολλο του κατασκευαστή. Οι συνθήκες κύκλων ήταν ως ακολούθως: αρχική μετουσίωση (1 λεπτό στους 95 ° C) που ακολουθείται από 25 κύκλους αποδιάταξης για 1 λεπτό στους 94 ° C, ανασύνδεση για 1 λεπτό στους 94 ° C, και επιμήκυνση για 45 δευτερόλεπτα στους 72 ° C, με μια τελική επέκταση επί 5 λεπτά στους 72 ° C. Αφυδρογονάση 3-φωσφορικής αφυδρογονάσης (GAPDH) χρησιμοποιήθηκε ως εσωτερικός έλεγχος. Η πολλαπλή μεταβολή 2-ΔΔCt του

RBBP6

έκφραση υπολογίζεται χρησιμοποιώντας τον τύπο: RBBP6ΔCt = Avg.RBBP6_Ct – Μέση. GAPDH_Ct και RBBPΔΔCt = RBBP6ΔCt_tumor – RBBP6ΔCt_non-όγκου

Η μονοπαραγοντική ανάλυση έδειξε ότι τόσο αυξημένη μετεγχειρητική υποτροπή και μειωμένη OS σχετίστηκαν με το στάδιο Pt, στάδιο PN, Μ στάδιο, AJCC στάδιο, αγγειακή εισβολή, η διαφοροποίηση του όγκου, και RBBP6. έκφραση. RBBP6 υπερέκφραση συνδυάζεται με συσσώρευση μεταλλαγμένη πρωτεΐνη ΤΡ53 συνδέεται με σημαντικά φτωχότερη OS (

P

& lt? 0.001) και DFS (

P

& lt? 0,001? Πίνακας 3).

Ανάλυση Western Blot

πρωτεΐνη ο ιστός που εξάγεται από ιστούς όγκων του παχέος εντέρου και των παρακείμενων φυσιολογικών ιστών από τους 4 ασθενείς με τη χρήση του ραδιοφώνου ανοσοκατακρήμνισης ρυθμιστικό λύσης δοκιμασίας (50 mM Tris ρΗ 7,4, 150 mM NaCl, 1% ΝΡ-40, 0,5 % δεοξυχολικό νάτριο και 0.1% δωδεκυλοθειικό νάτριο), και η συγκέντρωση πρωτεΐνης προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας το κιτ δοκιμασίας πρωτεΐνης BCA (Beyotime Biotechnology, Jiangsu, Κίνα). Ισοδύναμες ποσότητες πρωτεΐνης διαχωρίστηκαν σε 12% δωδεκυλ νάτριο πηκτώματα θειικού-πολυακρυλαμιδίου και στη συνέχεια μεταφέρθηκαν πάνω σε μεμβράνες διφθοριούχου πολυβινυλιδενίου. Οι μεμβράνες μπλοκαρίστηκαν σε 5% άπαχο γάλα με 0,1% Tween 20 για 1 ώρα σε θερμοκρασία δωματίου, που ακολουθείται από επώαση με πρωτογενές αντίσωμα (αραίωση 1:200 για RBBP, 1:500 για ΤΡ53, 1:1000 για GAPDH? Όλα αγοράζονται από Abcam, UK) και δευτερογενή αντισώματα συζευγμένα με υπεροξειδάση αρμορακίας. Οι πρωτεΐνες ανιχνεύθηκαν με ενισχυμένη χημειοφωταύγεια (Pierce Biotechnology, Rockford, IL, USA) ακολουθώντας τις οδηγίες του κατασκευαστή.

Tissue Microarray (TMA) Κατασκευή και ανοσοϊστοχημεία

slides ΤΜΑ δομήθηκαν όπως περιγράφηκε προηγουμένως. [1] Η ανοσοχρώση πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας το πρωτογενές αντίσωμα έναντι RBBP6 και ΤΡ53 (κάθε 1:100? Abcam, UK), και στη συνέχεια επωάστηκαν με το δευτερογενές αντίσωμα (Genetech, Σαγκάη, Κίνα). Τομές ιστού βάφτηκαν αντίθετα με αιματοξυλίνη Mayer του. Δύο ερευνητές οι οποίοι δεν γνώριζαν την πρόγνωση των ασθενών αξιολόγησε τις διαφάνειες ανεξάρτητα. Η ένταση χρώσης για RBBP6 βαθμολογήθηκε ως 0 (καμία χρώση), 1 (ήπια χρώση), 2 (μέτρια χρώση), και 3 (έντονη χρώση). Χρώση περιοχή βαθμολογήθηκε ως 0 (0%), 1 (1% -25%), 2 (26% -50%), 3 (51% -75%), και 4 (76% -100%) επί τη βάσει του ποσοστού των θετικά χρωματισμένων κυττάρων. [20] Το τελικό αποτέλεσμα χρώσης, η οποία είναι το άθροισμα των βαθμολογιών έντασης και επέκταση, χωρίστηκε σε 3 ομάδες ως εξής: 0-2, αρνητική έκφραση? 3-4, ασθενής έκφραση? και 5-6, ισχυρή έκφραση. Ο δείκτης ΤΡ53 διαιρέθηκε σε 2 ομάδες: αρνητική (λιγότερο από 10% των κυττάρων με θετικούς πυρήνες) και θετικά (άνω του 10% των κυττάρων με θετικούς πυρήνες). [21].

Στατιστική Ανάλυση

Ο δίπλευρη χ

δοκιμή 2 και ακριβές τεστ Fisher χρησιμοποιήθηκαν για τον προσδιορισμό της στατιστικής σημαντικότητας των διαφορών μεταξύ των πειραματικών ομάδων. Η συσχέτιση μεταξύ RBBP6 και η έκφραση της πρωτεΐνης ΤΡ53 υπολογίστηκε χρησιμοποιώντας δοκιμασία Spearman του. Τα ποσοστά επιβίωσης υπολογίστηκαν χρησιμοποιώντας τη μέθοδο Kaplan-Meier. Μια δοκιμασία log-rank χρησιμοποιήθηκε για τη σύγκριση των καμπυλών επιβίωσης. Ένα Cox μοντέλο αναλογικών κινδύνων χρησιμοποιούνται για τον υπολογισμό μονοπαραγοντική και πολυπαραγοντική αναλογίες κινδύνου για τις μεταβλητές. Ένα

P

-τιμή μικρότερη από 0.05 θεωρήθηκε στατιστικά σημαντική. Όλες οι στατιστικές αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν με τη χρήση του SPSS 19.0 στατιστικό πακέτο λογισμικού (SPSS Inc., Chicago, IL).

Αποτελέσματα

Η υπερέκφραση του RBBP6 σε Colon καρκινικούς ιστούς

Μεταξύ τα 40 ζεύγη δειγμάτων που υπόκεινται σε ανάλυση qPCR, 24 (60%) καρκίνων του παχέος εντέρου έδειξε τουλάχιστον μία 2-πλάσια αύξηση στα επίπεδα mRNA RBBP6 σε σύγκριση με εκείνη των γειτονικών μη-καρκινικούς ιστούς (Σχήμα 1Α). Η RBBP6 μέση σχετική ποσοτικοποίηση του παχέος εντέρου ομάδα καρκινικό ιστό (4,88 ± 0,76? 1,40 έως 5,73) ήταν σημαντικά υψηλότερο από ότι στην κανονική ομάδα ιστό (3,49 ± 0,43? 2,61 – 6,90?

P

& lt? 0.001) . Από τα δείγματα καρκίνου του παχέος εντέρου 40, 4 έδειξε ισχυρή αυξητική ρύθμιση της έκφρασης mRNA RBBP6 που προσδιορίστηκε με qPCR, και την έκφραση της πρωτεΐνης RBBP6 στα 4 δείγματα εκτιμήθηκε με ανάλυση στυπώματος Western. Όλα τα 4 δείγματα εμφάνισαν υψηλότερα επίπεδα πρωτεΐνης RBBP6 από εκείνη της γειτονικής noncancerous ιστό (Εικόνα 1Β), προτείνοντας ότι η έκφραση RBBP6 ανυψώθηκε τόσο σε μεταγραφικό και μετα-μεταγραφικό επίπεδο.

A. Σχετική έκφραση του

RBBP6

γονίδιο σε μια σειρά από 40 συμφωνημένα κόλου καρκινικό δειγμάτων ιστού σε σύγκριση με εκείνη σε δείγματα φυσιολογικού βλεννογόνου. Μια λογαριθμική κλίμακα 2-

ΔΔCT χρησιμοποιήθηκε για να αντιπροσωπεύσει την πτυχή αλλαγή στην ποσοτική ανίχνευση σε πραγματικό χρόνο PCR. λέκιασμα ανάλυση Β Western της πρωτεϊνικής έκφρασης RBBP6 σε αντιπροσωπευτικές 4 ζεύγη ιστούς όγκων του παχέος εντέρου. GAPDH χρησιμοποιήθηκε ως έλεγχος φόρτωσης.

Η

Σύλλογος RBBP6 και Mutant TP53 έκφρασης με κλινικοπαθολογοανατομικές παραμέτρους

Από τα 203 δείγματα για την αντιστοιχισμένη TMA, 185 (91,1%) παρουσίασαν RBBP6 αρνητικό χρώση σε φυσιολογικό βλεννογόνο. Σε αντίθεση, RBBP6 ήταν εμφανώς εκφράζεται σε κόλον δείγματα καρκινικού ιστού, με ισχυρή χρώση σε 56 (27,6%) δείγματα, η ασθενής χρώση σε 86 (42,4%) δείγματα, και αρνητική χρώση σε 61 δείγματα (30,0%) (Πίνακας 1). Από τα 66 δείγματα των διαθέσιμων μετάστασης λεμφαδένα (LNM) δείγματα, 58 δείγματα (87,9%) έδειξε RBBP6 υπερέκφραση (Πίνακας 1). Θετική χρώση παρατηρήθηκε κυρίως στους πυρήνες των καρκινικών κυττάρων (Σχήμα 2). Οι ενώσεις της έκφρασης RBBP6 και κλινικοπαθολογική παράγοντες συνοψίζονται στον Πίνακα 2. Αυξημένη έκφραση RBBP6 συσχετίστηκε σημαντικά με το βάθος της εισβολής του όγκου (στάδιο Pt,

P =

0.005), LNM (στάδιο PN,

P

= 0.002), μακρινή μετάσταση (στάδιο Μ,

P

& lt? 0.001), η προηγμένη AJCC (P & lt? 0.001) και η διαφοροποίηση (

P

= 0,007) (Πίνακας 2). RBBP6 εκφράζεται υψηλότερη στο κομβικό μετάσταση από εκείνες στον πρωτογενή όγκο και φυσιολογικό ιστό (Εικόνα 2). Επιπλέον, RBBP6 ήταν πιο συχνά ανιχνεύθηκε σε δείγματα που χρωματίζονται θετικά για μεταλλαγμένο ΤΡ53 (Σχήμα 3), και μια στατιστική συσχέτιση μεταξύ RBBP6 και ΤΡ53 (r = 0.450,

P

& lt? Πίνακας 2? 0,001) παρατηρήθηκε. TP53 παρουσίασε θετική συσχέτιση με το στάδιο Pt (

P

= 0.005), το στάδιο ΡΝ (

P

& lt? 0.001), Μ φάση (

P

= 0,006), η προηγμένη στάδιο AJCC (

P

& lt? 0.001). και η διαφοροποίηση του όγκου (

P

= 0,009) (Πίνακας 2)

(α) αρνητική έκφραση RBBP6 σε κανονικό επιθήλιο του κόλου και (Β) καλά διαφοροποιημένο όγκου. (Γ) Ασθενής χρώση RBBP6 σε ένα καλά διαφοροποιημένο όγκου κόλου. (D) Διαχέεται, έντονη χρώση RBBP6 σε μετρίου και (Ε) φτωχά διαφοροποιημένα καρκινώματα του παχέος εντέρου. (F) ισχυρή χρώση RBBP6 σε ένα δείγμα κόμβο μετάσταση καρκίνου του παχέος εντέρου λέμφου. Αρχική μεγέθυνση × 200 (× 400 για τις εικόνες ένθετο).

Η

TP53. Αντιπροσωπευτικές φωτογραφίες της έκφρασης RBBP6 και TP53 στην κανονική του παχέος εντέρου, του όγκου του παχέος εντέρου, και κομβικά δείγματα μετάσταση. έκφραση RBBP6 ήταν πιο συχνά ανιχνεύθηκε σε δείγματα που βάφονται θετικά για μετάλλαξη TP53. Αρχική μεγέθυνση × 400 (× 50 για εικόνες ένθετο).

Η

Η

Η υπερέκφραση μόνο του είτε σε συνδυασμό με Mutant TP53 Προβλέπει RBBP6 κακή πρόγνωση

Από τους 195 ασθενείς, 78 (40%) των ασθενών που υποβλήθηκαν σε θεραπευτική επιχειρήσεις παρουσίασαν υποτροπή της νόσου. Ασθενείς με RBBP6-θετικούς όγκους έδειξε αμέσως μεταστάσεις ή τοπικής υποτροπής από εκείνες με RBBP6-αρνητικούς όγκους (αδύναμη: 40/46, 46,5%? Ισχυρή: 33/48, 68,8%? Αρνητικά: 5/61, 8,2%?

P

& lt? 0.001)

Το οικόπεδο Kaplan-Meier έδειξε ότι οι ασθενείς που δείχνει RBBP6 υπερέκφραση είχε μια κακή OS και DFS από τους ασθενείς με RBBP6-αρνητικούς όγκους (log rank,

P

. & lt? 0,001? Σχήμα 4Α). Από την άλλη πλευρά, μεταλλαγμένο ΤΡ53 δεν είχε καμία σχέση με το OS αλλά συσχετίστηκε σημαντικά με DFS (

P

& lt? 0,001? Σχήμα 4Β). Επιπλέον, όσον αφορά την ταυτόχρονη έκφραση των RBBP6 και μεταλλαγμένες πρωτεΐνες TP53, χωρίσαμε τα δείγματα σε 3 ομάδες: ομάδα 1, οι όγκοι που δεν εμφανίζει την έκφραση της RBBP6 και μεταλλαγμένα TP53 (RBBP6- /TP53-, 48 δείγματα)? ομάδα 2, όγκοι με μη φυσιολογική έκφραση μόνο 1 πρωτεΐνης (RBBP6 + /TP53-, ή RBBP6- /TP53 +, 62 δείγματα)? και την ομάδα 3, οι όγκοι με ανώμαλη έκφραση και των δύο πρωτεϊνών (RBBP6 + /+ ΤΡ53, 49 δείγματα). Αξίζει να σημειωθεί, υπήρξε μια τάση προς ένα καλύτερο λειτουργικό σύστημα και DFS στην ομάδα των ασθενών με RBBP6- και TP53-αρνητικούς όγκους από ότι στην ομάδα των ασθενών με RBBP6- και TP53-θετικούς όγκους (

P

& lt? 0.001) . Είναι ενδιαφέρον ότι, οι καμπύλες DFS και OS για τους ασθενείς με μόνο RBBP6- ή ΤΡ53-θετικών όγκων ήταν σχετικά κοντά σε εκείνες με όγκους τα οποία ήταν αρνητικά τόσο για RBBP6 και ΤΡ53, αλλά ήταν δραματικά αποκλίνοντος από εκείνες της RBBP6- και ΤΡ53-θετική ομάδα ( Εικόνα 4C).

Α. Ελεύθερη νόσου επιβίωση (DFS) και τη συνολική επιβίωση (OS) των ασθενών σε σχέση με τα επίπεδα έκφρασης RBBP6 που προσδιορίστηκαν με ανοσοϊστοχημική χρώση. Β DFS ήταν σημαντικά καλύτερη σε ασθενείς με TP53-αρνητικούς όγκους σε σχέση με εκείνους με TP53-θετικούς όγκους (

P =

0.036). Γ DFS και OS ήταν σημαντικά χαμηλότερα σε ασθενείς με RBBP6- και TP53-θετικούς όγκους σε σχέση με εκείνους με RBBP6- και TP53-αρνητικούς όγκους (

P

& lt? 0.001 και για τα δύο).

Η

ανάλυση

η πολυπαραγοντική έγινε με τη χρήση του μοντέλου Cox αναλογικών κινδύνων για όλες τις σημαντικές μεταβλητές στην μονοπαραγοντική ανάλυση. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι θετική έκφραση RBBP6 όγκου ήταν ένα σημαντικό ανεξάρτητο προγνωστικό παράγοντα για την αύξηση της υποτροπής της νόσου και μειωμένη επιβίωση (Πίνακας 3). Επιπλέον, αν και μεταλλαγμένο ΤΡ53 από μόνη της δεν ήταν ένας προγνωστικός δείκτης, έκφραση τόσο RBBP6 και μεταλλαγμένων ΤΡ53 βρέθηκε να είναι ένας σημαντικός ανεξάρτητος προγνωστικός παράγοντας για το OS (HR 6,75? 95% CI, 2,63 έως 17,35?

P

& lt ? 0.001) και DFS (HR 8,08? 95% CI, 2,80 έως 23,30?

P

& lt? 0.001)

Συζήτηση

Για το καλύτερο της γνώσης μας, αυτό. είναι η πρώτη μελέτη που αναφέρουν ότι οι δύο μεταγραφικές και μεταγραφικούς επίπεδα RBBP6 αυξημένα σε καρκίνο του παχέος εντέρου. Βρήκαμε ότι η έκφραση RBBP6 συσχετίστηκε σημαντικά με την προηγμένη βιολογία του καρκίνου, η οποία υποδεικνύεται από το βάθος εισβολή, LNM, και μακρινή μετάσταση. Αυτές οι ισχυρές ενώσεις προτείνουν ότι υπερέκφραση RBBP6 προάγει εισβολή και μετάσταση όγκου και ότι RBBP6 θα μπορούσε ενδεχομένως να χρησιμοποιηθεί ως βιολογικός δείκτης για ένα πιο επιθετικό φαινότυπο του καρκίνου του παχέος εντέρου.

Είναι τώρα προφανές ότι η απορρύθμιση των ουβικιτίνης οδών αποτελέσματα σε πολλούς τύποι όγκων. [22] RBBP6 έχει ταυτοποιηθεί ως μία πιθανή Ε3 λιγκάσης της ουμπικουϊτίνης, εξαιτίας της παρουσίας ενός τομέα RING δάχτυλο. [8] Αρκετοί σημαντικοί τύποι ενζύμων Ε3 (οικογένειες RING /U-box) έχουν συνδεθεί με την ανάπτυξη του καρκίνου. [23] Το ανθρώπινο RBBP6 περιέχει πεδία που είναι γνωστό ότι αλληλεπιδρούν με ΤΡ53 και τη λειτουργία του ως ουβικιτίνης θα μπορούσε να προκαλέσει την απελευθέρωση των ΤΡ53, η οποία στη συνέχεια θα οδηγήσει σε καρκινογένεση. [6] Ωστόσο, ο συσχετισμός μεταξύ RBBP6 και μεταλλαγμένων ΤΡ53 δεν έχει αναλυθεί σε ανθρώπινο καρκίνο του παχέος εντέρου.

ΤΡ53

είναι ένα σημαντικό γονίδιο που εμπλέκεται στον προσδιορισμό του πολλαπλασιασμού ή διακοπής της ανάπτυξης σε κυτταρικό επίπεδο. [24], [25] Μεταλλαγμένα

TP53

συμβαίνει σε σχεδόν το ήμισυ του συνόλου των περιπτώσεων καρκίνου και μπορεί να είναι ένα πολλά υποσχόμενο στόχο για φαρμακολογική επανενεργοποίηση. [26], [27] Μεταλλαγμένα

TP53

συμβάλλει στην ανάπτυξη του καρκίνου, όχι μόνο μέσω της απώλειας της δραστηριότητας, αλλά και μέσα από το κέρδος συγκεκριμένων «μεταλλαγμένων λειτουργίες.» [28] Επιπλέον, σε αντίθεση με άγριου τύπου TP53, το οποίο, δυνάμει κανονικές συνθήκες έχει μια σύντομη ημιζωή όταν στοχεύεται από Mdm2 για αποικοδόμηση, μεταλλαγμένες πρωτεΐνες ΤΡ53 είναι εκτός αυτής της αρνητικής ανάδρασης βρόχου και έχουν αυξημένο χρόνο ημίσειας ζωής, με αποτέλεσμα την εμφάνιση κέρδους-φαινοτύπων λειτουργίας. [29], [30] Με ένα παρατεταμένο χρόνο ημιζωής, η μεταλλαγμένη πρωτεΐνη ΤΡ53 μπορεί επομένως να ανιχνευθεί μέσω ανοσοϊστοχημεία. [31] Σε αυτή τη μελέτη, RBBP6 και μεταλλαγμένη πρωτεΐνη ΤΡ53 είχαν υπερεκφράζεται σε ιστούς καρκίνου του παχέος εντέρου και βρέθηκε ότι συσχετίζεται θετικά. Οι μηχανισμοί για τη σύνδεση των RBBP6 πάνω ρύθμιση με μεταλλαγμένο TP53 είναι ελάχιστα κατανοητή. Το εύρημά μας δίνει κάποια εικόνα σε αυτή την προφανή σύγκρουση. Βρήκαμε ότι RBBP6 υπερέκφραση προκαλεί ογκογένεση μέσω ουβικιτινίωση TP53 από Mdm2? Ωστόσο, ΤΡ53 είναι η πιο συχνά μεταλλαγμένο γονίδιο γνωστό στον καρκίνο του ανθρώπου. [32] Θεωρήθηκε ότι μεταλλαγμένη ΤΡ53 είναι πιο σταθερό, ίσως επειδή αλλαγμένη διαμόρφωση της καθιστά την πρωτεΐνη λιγότερο ευαίσθητα στην αποικοδόμηση. [33] Έτσι, είναι πιθανό ότι τα άνω ρύθμιση του RBBP6 αποτυγχάνει να ουβικιτίνη μεταλλαγμένα γονίδια ΤΡ53. Μεταλλαγμένα TP53 μπορούσε επίσης να ενεργοποιήσετε την

RBBP6

γονίδιο και να προωθήσει ογκογένεση του παχέος εντέρου λόγω της απώλειας των αντι-καρκινώματος του. Ωστόσο, απαιτούνται περαιτέρω μελέτες για τη διαλεύκανση των μοριακών μηχανισμών της

RBBP6

και

TP53

γονιδίων στην εξέλιξη του καρκίνου του παχέος εντέρου.

Αν και η κατανόηση της μεταστατικής διαδικασίας έχει εξελιχθεί σε μεγάλο βαθμό , μηχανισμοί που εμπλέκονται στην μετάσταση καρκίνου του παχέος εντέρου δεν είναι πλήρως κατανοητοί. Τα αποτελέσματα της παρούσας μελέτης έδειξαν ότι θετική χρώση RBBP6 ήταν σημαντικά υψηλότερη σε μεταστατικό καρκίνο του παχέος εντέρου κύτταρα εντός των λεμφαδένων από τα ζεύγη πρωτογενείς όγκους. RBBP6 έκφραση συσχετίστηκε με αυξημένο κίνδυνο μετάστασης /τοπικής υποτροπής και συνδέεται στενά με πτωχές εκβάσεις επιβίωση. Αυτά τα δεδομένα υποδεικνύουν ότι η αυξημένη έκφραση RBBP6 συσχετίζεται με διηθητική συμπεριφορά και μεταστατικό διεργασίες του καρκίνου του παχέος εντέρου. Η πολυπαραγοντική ανάλυση δείχνει ότι η έκφραση RBBP6 μόνο του ή σε συνδυασμό με μεταλλαγμένο έκφραση TP53 φάνηκε να είναι ένας ανεξάρτητος προγνωστικός παράγοντας για το OS και DFS στον καρκίνο του παχέος εντέρου. Καθώς οι ασθενείς με όγκους που είχαν τόσο μετάλλαξη PIK3CA και έκφραση PTGS2 εμφανίζεται το ισχυρότερο θεραπευτικό αποτέλεσμα της ασπιρίνης [17], προτείναμε ότι τα στοιχεία για RBBP6 και μεταλλαγμένα έκφραση ΤΡ53 σε όγκους θα μπορούσε να χρησιμοποιηθεί για το σχεδιασμό της βέλτιστης, εξατομικευμένης θεραπείας και να βοηθήσει στον εντοπισμό ασθενών που μπορεί ή δεν μπορεί να επωφεληθεί από τη στενή παρακολούθηση μετά την επέμβαση. Πρόσθετες έρευνα θα πρέπει να επιβεβαιώσουν τα ευρήματά μας. Λόγω της ανομοιογένειας του πληθυσμού των ασθενών, η AJCC σκηνή αποκλείστηκε από την Cox μοντέλο αναλογικών κινδύνων τελική πολυπαραγοντική. Παρά το γεγονός ότι οι περιορισμοί περιλαμβάνουν τον μικρό αριθμό ασθενών με σχετικά σύντομο χρονικό διάστημα παρακολούθησης, τα αποτελέσματα μας παρέχουν την πρώτη απόδειξη ότι RBBP6 θα μπορούσαν να χρησιμοποιηθούν ως νέο βιοδείκτη για βελτιωμένη έκβαση μετά κολεκτομή σε ασθενείς με καρκίνο του παχέος εντέρου. Πάνω απ ‘όλα, το μεταλλαγμένο

ΤΡ53

, ένα γονίδιο συσχετίστηκε σημαντικά με καρκίνο του παχέος εντέρου, αν και δεν είναι προβλεπτική της πρόγνωσης του καρκίνου από μόνη της, θα μπορούσε να είναι ισχυρή προγνωστική αξία όταν αξιολογήθηκε με την έκφραση RBBP6.

συνοπτικά, αυτή η μελέτη παρείχε κρίσιμη διορατικότητα το ρόλο του

RBBP6

γονίδιο στην εξέλιξη του καρκίνου του παχέος εντέρου. Η συχνή πάνω ρύθμιση της έκφρασης RBBP6 στον ανθρώπινο καρκίνο του παχέος εντέρου τονίζει το δυναμικό της ως νέο θεραπευτικό στόχο για τον καρκίνο αυτό. Τα ευρήματα που αναφέρονται εδώ δείχνουν επίσης ότι RBBP6 υπερέκφραση σε συνδυασμό με μεταλλαγμένο συσσώρευση της πρωτεΐνης ΤΡ53 συνδέθηκε με υποτροπιάζοντα καρκίνο και ένα φτωχό ποσοστό επιβίωσης. Τα ευρήματα αυτά θα μπορούσαν να είναι χρήσιμες για το σχεδιασμό μελλοντικές μελέτες να κατανοήσουν τη μοριακή ανάπτυξη του καρκίνου του παχέος εντέρου. Η πιθανή κλινική αξία του RBBP6 μόνη της ή σε συνδυασμό με μεταλλαγμένη ΤΡ53 ως νέου βιοδείκτη σε καρκίνο του παχέος εντέρου θα πρέπει να διερευνηθεί με τη χρήση τυχαιοποιημένες ελεγχόμενες μελέτες.