Αφηρημένο

Ταυτόχρονη chemoradiation με 5-φθοριοουρακίλη (5-FU) είναι ευρέως αποδεκτή για τη θεραπεία του καρκίνου. Ωστόσο, οι αλληλεπιδράσεις μεταξύ της ακτινοβολίας και 5-FU παραμένουν ασαφείς. Εδώ, αξιολογήσαμε την επίδραση της τοπικής ακτινοβολίας στη φαρμακοκινητική του 5-FU σε αρουραίους. Η ακτινοβολία μονής κλάσμα παραδόθηκε το σύνολο της πυέλου τομείς των αρουραίων Sprague-Dawley μετά μηχανογραφημένη τομογραφία σχεδιασμού που βασίζεται. 5-FU 100 mg /kg συνταγογραφήθηκε 24 ώρες μετά την ακτινοβολία. Ένα σύστημα υγρής χρωματογραφίας υψηλής απόδοσης χρησιμοποιήθηκε για να μετρηθεί 5-FU στο αίμα. Μεταλλοπρωτεϊνάσης-8 (ΜΜΡ-8) Inhibitor I χορηγήθηκε για να εξετάσει κατά πόσον ή όχι RT διαμόρφωση των φαρμακοκινητικών παραμέτρων 5-FU μπορεί να αποκλειστεί. Σε σύγκριση με ψευδο-ακτινοβολημένα ελέγχους, ολόκληρο πυέλου ακτινοβολία μείωσε την περιοχή κάτω από την καμπύλη συγκέντρωσης έναντι χρόνου (AUC) της 5-FU στο πλάσμα και, αντίθετα, αυξήθηκε σε χολή με ακτινοβολία δοσο-εξαρτώμενο τρόπο. Με βάση την ανάλυση της σειράς πρωτεΐνης, την ποσότητα του πλάσματος της ΜΜΡ-8 αυξήθηκε κατά ολόκληρο πυελική ακτινοβολία (2.8-φορές με 0,5 Gy και 5.3 φορές από 2 Gy) σε σύγκριση με τους μάρτυρες. Προεπεξεργασία με ΜΜΡ-8 αναστολέα αντέστρεψε την επίδραση της ακτινοβολίας στο AUC της 5-FU στο πλάσμα. Τα ευρήματά μας δείχνουν κατ ‘αρχάς ότι οι τοπικές ακτινοβολία ρυθμίζουν τα συστηματική φαρμακοκινητική του 5-FU μέσω διεγείροντας την απελευθέρωση της ΜΜΡ-8. Η φαρμακοκινητική του 5-FU κατά τη διάρκεια ταυτόχρονης θεραπείας chemoradiaiton θα πρέπει να επανελέγχεται και θα πρέπει να επαναξιολογηθεί η βέλτιστη 5-FU δόση, και προσαρμόζονται, αν είναι απαραίτητο, κατά τη διάρκεια CCRT

Παράθεση:. Hsieh CH, Liu CY, Hsieh YJ, Tai HC, Wang LY, Tsai Θ, et al. (2011) μεταλλοπρωτεϊνάσης-8 Μεσολαβεί η δυσμενής συστημικός αντίκτυπος των Τοπικών ακτινοβολία στη φαρμακοκινητική της Anti-Cancer Drug 5-φθοριοουρακίλη. PLoS ONE 6 (6): e21000. doi: 10.1371 /journal.pone.0021000

Επιμέλεια: Hana Algul, Τεχνικό Πανεπιστήμιο του Μονάχου, Γερμανία

Ελήφθη: 26 Δεκέμβρη του 2010? Αποδεκτές: 18η Μαΐου του 2011? Δημοσιεύθηκε: 9 Ιουνίου, 2011

Copyright: © 2011 Hsieh et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Οι συγγραφείς δεν έχουν καμία υποστήριξη ή χρηματοδότηση για να αναφέρετε

Αντικρουόμενα συμφέροντα:. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

η ακτινοθεραπεία (RT) χρησιμοποιείται ως ένα αποτελεσματικό. τοπική μέθοδος θεραπείας για την αναστολή του πολλαπλασιασμού των κυττάρων, επάγουν κυτταρικό θάνατο και την καταστολή της ανάπτυξης των όγκων [1]. Να βελτιώσει τα αποτελέσματα της θεραπείας, όσον αφορά τόσο τοποπεριοχική έλεγχο και την επιβίωση, η ταυτόχρονη χρήση της χημειοθεραπείας κατά τη διάρκεια της θεραπείας με ακτινοβολία (CCRT) είναι πλέον η καθιερωμένη θεραπεία για διάφορες κακοήθειες, ιδιαίτερα τοπικά προχωρημένους καρκίνους. Μεταξύ των φαρμάκων που χρησιμοποιούνται για την ενίσχυση της RT δράση, 5-φθοριοουρακίλη (5-FU) είναι μία από τις πιο συχνά χρησιμοποιούμενες χημειοθεραπευτικούς παράγοντες του CCRT [2], [3], [4], [5].

στο παρελθόν, η RT χρησιμοποιήθηκε αποκλειστικά ως τοπική θεραπεία και την επίδρασή του εκτιμήθηκε από τις τοπικές μοντέλο επίδραση [6]. Ωστόσο, όλο και περισσότερα στοιχεία δείχνουν ότι η ακτινοβολία έχει άμεσες βλάβες στο DNA που εξαρτάται από αποτελέσματα, καθώς και την αποστολή σημάτων σε γειτονικά κύτταρα. Οι αντιδράσεις των μη ακτινοβολημένα κύτταρα ανταποκρίνονται σε σήματα που παράγονται από τις γειτονικές ακτινοβολημένα κύτταρα αποκαλείται φαινόμενο γειτνιάσεως [7], [8]. Επιπλέον, οι επιπτώσεις μεγαλύτερου βεληνεκούς που σημειώνεται εντός ή μεταξύ των ιστών αναφέρονται επίσης και ονομάζονται abscopal, out-of-πεδίου ή μακρινό αντιδράσεις των παρευρισκομένων [9]. Αρκετά μόρια παίζουν ρόλους στη σηματοδότηση των παρευρισκομένων που περιλαμβάνουν αντιδράσεις στρες και σηματοδότηση κυττάρου-κυττάρου, ωστόσο, καμία από αυτές είναι ειδικά για έκθεση σε ακτινοβολία. Αρκετές μελέτες δείχνουν τις μεταβολές των επιπέδων ουσίας στο πλάσμα να ανταποκρίνεται σε ακτινοβολία, όπως η ιντερλευκίνη 6 (IL-6) [10], IL-8 [11], ο αυξητικός παράγοντας μετασχηματισμού-βήτα 1 (TGF-β1) [12], νέκρωσης όγκου παράγοντας α (ΤΝΡ-α) [13], αντιδραστικά είδη οξυγόνου [14] και αντιδρώντα είδη αζώτου [15]. Ωστόσο, δεν ισχυρές αποδείξεις για αιτιώδεις σχέσεις αυτών των μορίων παρέχεται. Πρόσφατα, αναφέρθηκε ότι η κοιλιακή ακτινοβολία μπορεί να ρυθμίζει σημαντικά τις συστημικές φαρμακοκινητική του 5-FU σε 0,5 Gy, εκτός στόχου έκταση στην κλινική πρακτική, και σε 2 Gy, η ημερήσια δόση θεραπείας για θεραπεία-στόχο σε ένα πειραματικό μοντέλο αρουραίου [16]. Επιπλέον, τα αποτελέσματα από μια κλινική έρευνα έδειξε ότι οι ασθενείς με καρκίνο του παχέος εντέρου χαμηλότερη AUC της 5-FU κατά τη διάρκεια επικουρική χημειοθεραπεία είχαν χαμηλότερη ελεύθερη νόσου επιβίωση [17]. Στο σύνολό τους, αυτές οι γραμμές αποδείξεων υποστηρίζουν την σημασία και την ανάγκη να ψάξει για τους διαμεσολαβητές υπεύθυνος για την απροσδόκητη επίδραση της τοπικής RT για συστηματική φαρμακοκινητική των χημειοθεραπευτικών παραγόντων, όπως η 5-FU. Στην παρούσα μελέτη, διερευνήθηκε το δυνατόν διαλυτών μεσολαβητών που εμπλέκονται στη δράση του εντοπίζεται ολόκληρο το πυελικό RT, με το συκώτι φειδωλοί, στη φαρμακοκινητική του 5-FU σε αρουραίους.

Αποτελέσματα

φαρμακοκινητικές παράμετροι του πλάσματος 5-FU και ολόκληρη την ακτινοβόληση της πυέλου

Για να βεβαιωθείτε ότι οι τοπικές RT διαμορφώνονται τα συστηματική φαρμακοκινητική του 5-FU, ιδρύσαμε ένα πειραματικό μοντέλο χρησιμοποιώντας CT-based σχεδιασμό και την πυελική ακτινοβολία σε αρουραίους, και την ενσωμάτωσε σε μια φαρμακοκινητική δοκιμή του συστήματος. Περιέργως, βρήκαμε ότι πυελική ακτινοβολία μείωσε σημαντικά την AUC του 5-FU σε αρουραίους κατά 17,6% στα 0,5 Gy (

P

= 0,019) και 21,5% σε 2 Gy (

P

= 0,008 ) (Σχ. 1Α). Ιδιαίτερο ενδιαφέρον, η ακτινοβολία σε 2 Gy σε ολόκληρη τη λεκάνη του αρουραίου προσομοιώνεται την ημερήσια δόση θεραπείας σε έναν άνθρωπο, ενώ η ακτινοβολία χαμηλής δόσης (0.5 Gy) προσομοίωση της δόσης κατατεθεί στη γενναιόδωρη, εκτός στόχου περιοχή στην κλινική πρακτική. Όπως φαίνεται στον Πίνακα 1, πυελική ακτινοβολία μείωσε σημαντικά ο μέσος χρόνος παραμονής (MRT) και αντίθετα, αύξησε την τιμή κάθαρσης της 5-FU σε σύγκριση με μη-ακτινοβολημένα δείγματα αναφοράς. Δεν υπήρχε σημαντική διαφορά στις τιμές της ημίσειας ζωής (Τ

1/2), η μέγιστη συγκέντρωση στο πλάσμα (Cmax) ή όγκος κατανομής σε σταθερή κατάσταση (Vss) εντός των δοκιμάστηκαν ομάδες.

το εγκάρσιο άξονα απεικονίζει τον χρόνο σε λεπτά και ο κατακόρυφος άξονας αναπαριστά τη συγκέντρωση του 5-FU. (Α) πλάσμα. (Β) χολή. δεδομένα κάθε ομάδας συλλέχθηκε από έξι αρουραίους.

Η

Η χολή φαρμακοκινητικές παράμετροι της 5-FU και ολόκληρη την ακτινοβόληση της πυέλου

Βρήκαμε ότι ακτινοβόληση της πυέλου σημαντικά αύξησε την AUC της 5- FU σε χολή των αρουραίων κατά 25,1% στα 0,5 Gy και 30.6% στα 2 Gy (Εικ. 1Β). Πυελική ακτινοβόληση μειώθηκαν σημαντικά Cmax και τιμή κάθαρσης, και σε αντίθεση, αυξημένη MRT και Vss του 5-FU, όταν συγκρίνεται με μη-ακτινοβολημένα δείγματα αναφοράς. Ενδιαφέροντος, 2-Gy ακτινοβολίας μειώθηκε Cmax, και σε αντίθεση, αυξημένη MRT (

P

= 0,008) και Vss (

P

= 0,015) της 5-FU σε βαθμό μεγαλύτερο από εκείνο της ομάδας 0,5-Gy. Δεν υπήρχε στατιστικά σημαντική διαφορά μεταξύ των 0,5-Gy και τον έλεγχο των ομάδων για τη Cmax και Vss. Επιπλέον, δεν υπάρχει σημαντική διαφορά στην Τ

1/2 παρατηρήθηκε μεταξύ των τριών ομάδων (Πίνακας 2).

Η

Η ηπατική λειτουργία μετά από RT ή 5-FU θεραπεία

Ο ορός οι συγκεντρώσεις του αμινοτρανσφεράση της αλανίνης (ALT) τα επίπεδα ήταν καμία σημαντική διαφορά μεταξύ του 5-FU-αγωγή, 2Gy επεξεργασμένο, 0.5 Gy ακολουθούμενη από 5-FU-θεραπεία και 2 Gy ακολουθούμενη από 5-FU-αγωγή και των ομάδων ελέγχου (Σχ. 2 ).

Οι συγκεντρώσεις της αμινοτρανσφεράσης της αλανίνης του ορού (ALT) τα επίπεδα δεν ήταν σημαντικά διαφορετική μεταξύ όλων των δοκιμαστεί ομάδες. Ν = 5 για κάθε ομάδα.

Η

Οι κυτοκίνες ανταποκρίνονται σε RT ή 5-FU στην

πλάσμα

Σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου, δεν υπήρχαν σημαντικές διαφορές μεταξύ του RT 2Gy μόνη της , 5-FU μόνη της, RT 0.5 Gy ακολουθούμενη από 5-FU και RT 2 Gy ακολουθούμενη από 5-FU ομάδα στα επίπεδα του μετασχηματιστικού αυξητικού παράγοντα-βήτα 1 (TGF-β1) και παράγοντα νέκρωσης όγκου α (ΤΝΡ-α) ( Σχ. 3Α και 3Β).

(Α) Το επίπεδο της αυξητικού παράγοντα μεταμόρφωσης βήτα 1 (TGF-β1) στο πλάσμα. (Β) Το επίπεδο του παράγοντα νέκρωσης όγκων άλφα (TNF-α) στο πλάσμα. δεδομένα κάθε ομάδας συλλέχθηκαν από πέντε αρουραίους.

Η

Τροποποίηση των διαλυτών παραγόντων στο πλάσμα που προκαλείται από όλη την πυελική ακτινοβολία

Για την αξιολόγηση των μεταβολών στο προφίλ διαλυτών παραγόντων που εμπλέκονται με όλη την ακτινοβολία της πυέλου, δείγματα πλάσματος αρουραίου συλλέχθηκαν και υποβλήθηκαν σε μια δοκιμασία συστοιχία αντισωμάτων κυτοκίνης (Σχ. 4). Σε σύγκριση με το μάρτυρα (χωρίς θεραπεία) ομάδας (Σχ. 4Α) και μόνη ομάδα 5-FU (Σχ. 4C), οι παρατηρήσιμες δοσοεξαρτώμενη αλλαγές στα επίπεδα των διαλυτών παραγόντων στο πλάσμα που περιλαμβάνονται μεταλλοπρωτεϊνάσης-8 μήτρας (ΜΜΡ-8), μονοκυττάρων χημειοελκτική πρωτεΐνη 1 (MCP-1), κυτοκίνη επαγόμενη από χημειοελκτικό των ουδετερόφιλων -1 (CINC-1) και ο αναστολέας ιστού μεταλλοπρωτεϊνάσης-1 (ΤΙΜΡ-1). Μεταξύ αυτών των παραγόντων, μόνο η αύξηση του MMP-8 επίπεδο ήταν συνεπής σε πειράματα τριπλούν. Σε σύγκριση με τις ομάδες ελέγχου, RT 2Gy μόνη της θα μπορούσε να αυξήσει την έκφραση της ΜΜΡ-8 από παράγοντες του 3,8 (Σχ. 4Β). Σε σύγκριση με μόνη ομάδα 5-FU, τα επίπεδα των ΜΜΡ-8 αυξήθηκε τόσο στο Gy RT 0,5 ακολουθούμενη από 5-FU (Εικ. 4D) και RT 2 Gy ακολουθούμενη από 5-FU ομάδες (Εικ. 4Ε) σε ένα πλάσμα δοσο-εξαρτώμενο τρόπο από παράγοντες του 2.8 και 5.3, αντίστοιχα.

Η ποσότητα της μεταλλοπρωτεϊνάσης-8 (ΜΜΡ-8) αυξήθηκε σε 0,5-Gy και 2-Gy ακτινοβολημένα ομάδες σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου. Ένας χάρτης των θέσεων των αντισωμάτων κυτοκίνης στίγματα επάνω στο τσιπ πρωτεΐνη εμφανίζεται στην επάνω πλευρά του σχήματος. Διακεκομμένη τετράγωνα υποδεικνύουν τη θέση των MMP-8. Κάθε κυτοκίνη αντιπροσωπεύεται από διπλές κηλίδες στα σημεία που υποδεικνύονται. Cytokine συστοιχίες αντισωμάτων δοκιμασίας (Α) χωρίς θεραπεία ομάδα ελέγχου, (Β) ολόκληρο πυελική ακτινοβόληση (RT) με 2 Gy μόνο, (Γ) 5-φθοριοουρακίλη (5-FU) μόνη της, (Δ) RT με 0,5 Gy ακολουθούμενη από 5- FU και (Ε) RT με 2 Gy ακολουθούμενη από 5-FU. Η συστοιχία κυτοκίνη εικόνα αντιπροσωπεύει αποτελέσματα μίας από τρία ανεξάρτητα πειράματα, τα οποία δείχνουν παρόμοια πρότυπα έκφρασης.

Η

ενδοκυτταρικά επίπεδα 5-FU, με ή χωρίς ανασυνδυασμένη ΜΜΡ-8 με υγρή χρωματογραφία υψηλής απόδοσης

Εξετάσαμε το ρόλο της ανασυνδυασμένης ΜΜΡ-8 σε ενδοκυτταρική συγκέντρωση του 5-FU σε HepG2 (κύτταρα που προέρχονται από όγκους ανθρώπινου ήπατος που διαθέτουν βιοχημική προφίλ χαρακτηριστικό των φυσιολογικών ηπατοκυττάρων) χωρίς να λάβει ακτινοβολία. Δεν υπήρχαν σημαντικές επίδραση στις τιμές AUC του 5-FU μεταξύ της ανασυνδυασμένης ΜΜΡ-8 συν 5-FU και 5-FU μόνη ομάδων (Εικ. 5). Βρήκαμε ότι η ανασυνδυασμένη ΜΜΡ-8, που δεν προκαλείται από την ακτινοβολία, δεν θα επηρεάσει ενδοκυτταρική συγκέντρωση του 5-FU σε κύτταρα του ήπατος, μιμούμενο μία φαρμακοκινητικές μεταβολές στο κυτταρικό επίπεδο.

Η

Διαφοροποίηση των 5-FU φαρμακοκινητικές με ακτινοβόληση αντιστράφηκε με ΜΜΡ-8 αναστολέας

Εξετάσαμε επόμενο το ρόλο των ΜΜΡ-8 για την επίδραση της RT στη φαρμακοκινητική 5-FU χρησιμοποιώντας έναν αναστολέα ΜΜΡ-8. Ούτε ο αναστολέας ΜΜΡ-8 μόνο ούτε όχημα του είχε σημαντική επίδραση στην AUC του 5-FU σε σύγκριση με τους μάρτυρες (Εικ. 6). Βρήκαμε ότι η προθεραπεία με ΜΜΡ-8 αναστολέα εξασθενημένα σημαντικά την πτώση της AUC του 5-FU που προκαλείται από ακτινοβόληση της πυέλου (AUC

ακτινοβολία έναντι AUC

ΜΜΡ-8 αναστολέας + ακτινοβολίας ήταν 3305 έναντι 3963 min μg /mL,

P

& lt? 0,05). Επιπλέον, η μειωμένη MRT και αυξημένη τιμή κάθαρσης που προκαλείται από ακτινοβολία πλήρως αναστραφεί με τη χρήση του αναστολέα ΜΜΡ-8 (Πίνακας 3).

Η περιοχή κάτω από την καμπύλη συγκέντρωσης πλάσματος έναντι χρόνου (AUC) της 5-FU 100 mg /kg χορηγήθηκε σε αρουραίους στην ομάδα ελέγχου χωρίς διαλύτη, η ομάδα ελέγχου με διαλύτη, ολόκληρο πυέλου ακτινοβολία 2 Gy-με ​​διαλύτη, και ολόκληρο πυέλου ακτινοβολία 2 Gy-με ​​διαλύτη και ΜΜΡ-8 αναστολέα. Το εγκάρσιο άξονα απεικονίζει τον χρόνο σε λεπτά και ο κατακόρυφος άξονας αναπαριστά τη συγκέντρωση του 5-FU στο πλάσμα. δεδομένα κάθε ομάδας συλλέχθηκε από τέσσερις αρουραίους.

Η

Συζήτηση

Μετά την απόδειξη της έννοιας ότι οι τοπικές RT επηρεάζεται συστηματική φαρμακοκινητική των χημειοθεραπευτικών χρησιμοποιώντας 5-FU ως πρότυπο, εμείς επόμενη διαλογή για πιθανές διαλυτές παράγοντες που ευθύνονται για αυτό το αποτέλεσμα, το οποίο ταυτοποιήθηκε ως ΜΜΡ-8. ΜΜΡ-8, επίσης γνωστή ως κολλαγενάση-2 ή ουδετερόφιλη κολλαγενάση, είναι ένα μέλος της εξαρτώμενη από ψευδάργυρο διάμεση κολλαγενάση υποομάδα της οικογένειας ΜΜΡ ουδέτερων πρωτεϊνασών [18]. Δείξαμε ότι η ΜΜΡ-8 κατείχε απροσδόκητη βιοδραστικότητα στη ρύθμιση την φαρμακοκινητική της 5-FU.

πολυμορφοπύρηνα ουδετερόφιλα (ΡΜΝ) είναι η κύρια πηγή της ΜΜΡ-8 σε ανθρώπους και ποντίκια [19], [20]. ΜΜΡ-8 αποθηκεύεται στους κόκκους του ΡΜΝ και απελευθερώνεται κατά την αποκοκκίωση [21]. Fisher

et al

. [22] ανέφεραν ότι τα επίπεδα ΜΜΡ-8 πρωτεΐνης σε ανθρώπινο δέρμα αυξήθηκαν περίπου κατά 4 φορές μέσα σε 8 ώρες και παρέμεινε αυξημένη για 24 ώρες μετά την υπεριώδη ακτινοβολία. θεραπεία Ακτινοβολίας σε θέσεις που φέρουν όγκου επάγει φλεγμονή στο ακτινοβολημένα πεδίου και στρατολογεί Τ λεμφοκύτταρα, ουδετερόφιλα, λεμφοκύτταρα, μακροφάγα, κύτταρα πλάσματος και τα δενδριτικά κύτταρα [18], [23], [24]. Επιπλέον, η ακτινοβόληση επάγει αυξητική ρύθμιση των γονιδίων των κύριων προφλεγμονωδών χημειοκινών [25]. Στην παρούσα μελέτη, το σύνολο ακτινοβολείται λεκάνη των αρουραίων, η οποία θα μπορούσε να έχει παραδοθεί μία δόση ακτινοβολίας να κυκλοφορούντων ουδετερόφιλων, ιστών και μυελού των οστών μακροφάγα και εντός της πυέλου. Συλλογικά, αυτό εγείρει την πιθανότητα ότι η ακτινοβόληση της πυέλου μπορεί να διεγείρει ουδετερόφιλα ή /και τα άλλα φλεγμονώδη οντογένεση των κυττάρων, επάγουν φλεγμονώδη στρες, και να ενισχύσει την έκκριση των ΜΜΡ-8 (Σχ. 4), καθώς και διάφορες άλλες προφλεγμονώδεις μεσολαβητές. Επιπλέον, διάφορες μελέτες δείχνουν οι μεταβολές των επιπέδων ουσίας στο πλάσμα να ανταποκρίνεται σε ακτινοβολία, όπως ΤΟΡ-β1 [12] και ΤΝΡ-α [13]. Επιπλέον, ΤΟΡ-β θα μπορούσε να είναι ένας στόχος για 5-FU μέσω c-Jun ενεργοποίηση ΝΗ2-τελική κινάση /ενεργοποιητή πρωτεΐνης-1 σε ανθρώπινους ινοβλάστες [26]. Επιπλέον, ο ΤΝΡ-α εμπλέκει στη ρύθμιση των ενζύμων φθοριοπυριμιδίνη ενεργοποίησης, ουριδίνη φωσφορυλάση (UPase), η οποία επάγει την έκφραση του γονιδίου UPase με επακόλουθη βελτίωση της αντιπολλαπλασιαστικής δραστικότητας 5-FU [27]. Ωστόσο, στην παρούσα μελέτη, τα επίπεδα του ΤΟΡ-β1 και ΤΝΡ-α δεν αυξήθηκαν στην RT μόνον, 5-FU μόνη της ή RT ακολουθούμενη από 5-FU ομάδες σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου (Σχ. 3Α και 3Β). Αυτά τα δεδομένα υποδηλώνουν ότι η ΜΜΡ-8 φαίνεται να παίζει σημαντικό ρόλο στην τοπική RT-επαγόμενη διαφοροποίηση των συστημικών φαρμακοκινητική 5-FU, αλλά όχι μέσω αυτών των κυτοκινών.

Harty MW et al. [28] ανέφεραν ότι πολυμορφοπύρηνα που προέρχεται από κύτταρα ΜΜΡ8 παίζει σημαντικό ρόλο για την επισκευή του ήπατος σε αναστρέψιμη χοληφόρων μοντέλο απόφραξης τους. Η παρούσα μελέτη δείχνει ότι η εφαρμογή του πυελικού RT ή 5-FU, δεν θα προκαλούν τις βλάβες της ηπατικής λειτουργίας. Έτσι, η απόκριση της ΜΜΡ-8 που προκαλείται από RT σε RT-PK φαινόμενα δεν θα είναι η διαδικασία της διήθησης φλεγμονωδών στο συκώτι όπως σοβαρή βλάβη που προκαλείται από απόφραξη των χοληφόρων. Εκτός αυτού, δεν υπάρχουν διαφορές της βιωσιμότητας (τα δεδομένα δεν δείχνουν) και τα επίπεδα ενδοκυτταρικού 5-FU (Εικ. 5) για 5-FU κατεργασία HepG2 με ή χωρίς ανασυνδυασμένη ΜΜΡ-8. κύτταρα HepG2 διατηρούν πολλά από τα μορφολογικά και βιοχημικά χαρακτηριστικά των φυσιολογικών ηπατοκυττάρων, όπως η έκκριση των περισσότερων πρωτεϊνών του πλάσματος που αναμένονται από τα κύτταρα του ήπατος, συμπεριλαμβανομένης της απολιποπρωτεΐνης Β [29]. Το αποτέλεσμα αυτό υποδεικνύει ότι η ανασυνδυασμένη ΜΜΡ-8, που δεν προκαλείται από την ακτινοβολία, δεν θα επηρεάσει τις PKs του 5-FU σε κύτταρα του ήπατος και δεν έχει σημαντική τοξικότητα σε ανθρώπινη κυτταρική σειρά που προέρχεται από ηπατοβλάστωμα, HepG2. Στο σύνολό τους, MMP-8 μπορεί να μην ρυθμίζουν τη λειτουργία του ήπατος.

Ένα άλλο σημαντικό ζήτημα είναι η παρόμοιο, αλλά μικρότερο, επίδραση της χαμηλής δόσης RT για 5-FU φαρμακοκινητική (Εικ. 1). κατανομή του σωματικού χαμηλής δόσης RT (0,5 Gy, για παράδειγμα) στην κλινική πράξη γίνεται πολύ γενναιόδωρη με προηγμένες τεχνικές ακτινοθεραπείας και λεπτομέρειες, όπως η διαμορφούμενης έντασης ακτινοθεραπεία, ελικοειδή tomotherapy, ταχεία ακτινοθεραπεία τόξου, ογκομετρική διαμορφωμένο θεραπεία τόξου και άλλοι, σε σύγκριση με τη συμβατική RT. Ενώ αποδέχεται τα οφέλη της στόχευσης των όγκων και φειδωλός τα κρίσιμα όργανα, χρησιμοποιώντας αυτές τις προηγμένες τεχνικές [30], [31], ότι το ένα παραμένει επιφυλακτική η γενναιόδωρη, ακτινοβολία χαμηλής δόσης θα μπορούσε να παράγει απρόσμενες ή ανεπιθύμητα βιολογικά αποτελέσματα. Κλινικά, έχουμε προηγουμένως παρατηρηθεί ότι η χαμηλή δόση, εκτός στόχου ακτινοβολία που παραδίδονται από εξαιρετικά σύμμορφη tomotherapy θα μπορούσε να προκαλέσει σοβαρή τοξικότητα στα κρίσιμα όργανα γύρω από τους στόχους, όπως τους πνεύμονες, και να προκαλέσει πνευμονίτιδα από ακτινοβολία [32]. Ωστόσο, η ιατρική κοινότητα δεν έχει πλήρη κατανόηση σχετικά με τις βιολογικές επιδράσεις των γενναιόδωρη, χαμηλή δόση RT. Ελπίζουμε ότι η μελέτη αυτή θα αυξήσει τις γνώσεις μας για αυτές τις επιδράσεις και να παρέχει ένα πειραματικό μοντέλο για να κατανοήσουμε τις βιολογικές επιδράσεις των γενναιόδωρη, χαμηλής δόσης RT στην εποχή της υψηλής σύμμορφη RT.

Περίπου το 80% του 5-FU είναι catabolyzed από το ήπαρ μέσω της οδού της διυδροπυριμιδίνης αφυδρογονάση (DPD) για να παράγει τοξικά 5-φθορο-5,6-διϋδρο-ουρακίλη, ενώ το αναβολικό μονοπάτι, μέσω οροτικό φωσφοροριβοσυλ-τρανσφεράσης, παράγει ενεργούς μεταβολίτες, συμπεριλαμβανομένων των 5-φθοροουριδίνης-5′-μονοφωσφορική, 5-φθοροουριδίνης και 5-φθορο-2′-δεοξυουριδίνη [33], [34]. Η συνολική τοξικότητα ήταν διπλάσια σε ασθενείς με βαθιές ελλείψεις DPD (& lt? 45% του μέσου όρου δραστηριότητα DPD ενός πληθυσμού ελέγχου) σε σύγκριση με ασθενείς με μέτρια ελλείψεις DPD (μεταξύ 45% και 70% του μέσου όρου δραστηριότητα DPD ενός πληθυσμό ελέγχου), όπως αναφέρθηκε από Μιλάνο και τις οι συνεργάτες [35]. Επειδή το 10% έως 20% της 5-FU απεκκρίνεται αμετάβλητο στα ούρα [36], για ασθενείς με νεφρική δυσλειτουργία, η συγκέντρωση στο πλάσμα του 5-FU τις ημέρες nondialysis είναι σημαντικά υψηλότερη από τις ημέρες της διύλισης, και αυτό μπορεί να οφείλεται σε η αφαίρεση κάποιων παραγόντων από το πλάσμα με αιμοκάθαρση, οι οποίες αναστέλλουν τη δραστηριότητα DPD [37]. Επιπλέον, η 5-FU έχει ένα σχετικά στενό θεραπευτικό δείκτη, ένας ισχυρός συσχετισμός περιγράφεται μεταξύ της έκθεσης σε 5-FU και τόσο αιματολογική και γαστρεντερική τοξικότητα [38]. Έτσι, αν το ήπαρ ή τα νεφρά πέσουν σε ακτινοβολημένα όγκου [16], DPD, ένας περιοριστικός ρυθμός βήμα στον καταβολισμό της 5-FU [39], μπορεί να επηρεαστεί από τραυματισμό ακτινοβολίας σε ήπαρ ή τους νεφρούς. Ωστόσο, στην παρούσα μελέτη, το ήπαρ και τα νεφρά εξαιρούνται από το σύνολο της πυέλου πεδίο ακτινοβολίας (Εικ. 7). Επιπλέον, τα επίπεδα της ALT δεν ήταν σημαντικά διαφορετική μεταξύ του ελέγχου, 5-FU-αγωγή, ή πυελικό ομάδες RT με ή χωρίς 5-FU. (Εικ. 2) Ως εκ τούτου, η επίδραση του RT στην AUC του 5-FU σημειώνεται στη μελέτη αυτή δεν μπορεί να προκληθεί από την άμεση ρύθμιση της λειτουργίας του ήπατος με RT ή 5-FU.

Η κρανιακή περιθώριο ορίστηκε σε η κορυφή των διμερών λαγόνιο ακρολοφία για ολόκληρο το πεδίο της πυέλου. Συμβατική ραδιοθεραπεία χρησιμοποιήθηκε για να παραδώσει την δόση της ακτινοβολίας μέσω του πρόσθια-οπίσθια (ΑΡ) και πύλες PA.

Η

Σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου, ολόκληρο πυέλου ακτινοβολία μείωσε την AUC του 5-FU στο πλάσμα σε μια στατιστικά σημαντικό επίπεδο (Σχ. 1Α). Αντίθετα, η ακτινοβολία αύξησε την AUC του 5-FU στη χολή σημαντικά (Εικ. 1Β). Ήταν συνοδεύεται από μια μείωση στην MRT και αύξηση στην τιμή κάθαρσης στο πλάσμα, αλλά σε αύξηση της MRT και τη μείωση της αξίας κάθαρσης στη χολή. Όσον αφορά την φαρμακοκινητική, το γεγονός αυτό δείχνει ότι η ακτινοβόληση της πυέλου θα μπορούσε να διευκολύνει την έκκριση του 5-FU.

Δεδομένου ότι η ταυτόχρονη χρήση των χημειοθεραπευτικών σε συνδυασμό με εντοπισμένες σύμμορφη RT βελτιώνει τα αποτελέσματα κλινικής θεραπείας για έναν αυξανόμενο αριθμό των κακοηθειών [2 ], [3], [4], [5], τα αποτελέσματά μας δείχνουν ότι τόσο εντοπισμένο στόχο-in και γενναιόδωρη ακτινοβολία στόχο-off θα μπορούσαν να επηρεάσουν 5-FU φαρμακοκινητική, και παρέχει ένα λόγο για την εξέταση της προσαρμογής των χημειοθεραπευτικών διοίκησης κατά τη διάρκεια της RT πορεία. Η επίδραση των εντοπισμένων RT για συστηματική φαρμακοκινητική των χημειοθεραπευτικών παραγόντων ή τα άλλα φάρμακα που σαφώς χρειάζεται περαιτέρω κλινική αξιολόγηση.

Υλικά και Μέθοδοι

Υλικά και αντιδραστήρια

Η 5-FU και υγρή χρωματογραφία υψηλής απόδοσης (HPLC) -grade μεθανόλη αγοράστηκαν από τη Sigma Chemicals (St. Louis, ΜΟ, USA) και Tedia Company, Inc. (Fairfield, ΟΗ, USA), αντίστοιχα. Milli-Q βαθμού νερό (Millipore, Bedford, ΜΑ, USA) χρησιμοποιήθηκε για την παρασκευή διαλυμάτων και κινητών φάσεων.

Ζώα και παρασκευή δείγματος

Ενήλικες, αρσενικοί αρουραίοι Sprague-Dawley (300 ± 20 g βάρους σώματος) δόθηκαν από το Κέντρο Εργαστήριο ζώων στο Εθνικό Πανεπιστήμιο Yang Ming-(Ταϊπέι, Ταϊβάν). Αυτοί στεγάστηκαν σε ένα συγκεκριμένο παθογόνο περιβάλλον ελεύθερο και είχαν ελεύθερη πρόσβαση σε τροφή (Laboratory Rodent Diet 5001, ΡΜΙ Nutrition International, LLC, ΜΟ, USA) και νερό. Όλες οι διαδικασίες χειρουργική επέμβαση πειραματόζωα εξετάστηκαν και εγκρίθηκαν από την επιτροπή δεοντολογίας του ζώου Memorial Hospital Mackay, Ταϊπέι, Ταϊβάν (MMH-AS-98011).

Οι αρουραίοι αναισθητοποιούνται με ουρεθάνη 1 g /ml και α-χλωραλόζη 0,1 g /ml (1 ml /kg με ενδοπεριτοναϊκή ένεση), και ακινητοποιήθηκαν σε έναν πίνακα, όταν υποβάλλονται σε υπολογιστική τομογραφία για προσομοίωση του πλήρους πεδίου της πυέλου. Η κρανιακή περιθώριο ορίστηκε στην κορυφή των διμερών κορυφές λαγόνιο για όλη την πυελική τομέα (Εικ. 7). Συμβατική ραδιοθεραπεία χρησιμοποιήθηκε για να παραδώσει την δόση της ακτινοβολίας μέσω του πρόσθια-οπίσθια (ΑΡ) και πύλες ΡΑ. Τα πειραματόζωα χωρίστηκαν τυχαία με τον έλεγχο, 2-Gy μόνο, 5-FU μόνη της, 0,5-Gy ακολουθούμενη από 5-FU, και 2-Gy ακολουθούμενη από 5-FU ομάδες. δεδομένα κάθε ομάδας συλλέχθηκε από έξι αρουραίους.

αλλομετρική κλιμάκωση των δόσεων ακτινοβολίας (0,5 και 2 Gy) μεταξύ των ανθρώπων και αρουραίους, αντίστοιχα, ήταν ένας σημαντικός παράγοντας στη μελέτη. Ο λόγος για τη χρήση των 0,5 και 2 Gy για τους αρουραίους ήταν να προσομοιώσουν τη σχετική περιοχή δοσολογίας για την καθημερινή αγωγή του ανθρώπινου κορμού, για την ασφάλεια και την λειτουργικότητα, όπως αναφέρθηκε προηγουμένως [16]. Εν συντομία, δεν υπήρξε άμεση σύγκριση των αλλομετρική κλιμάκωση χρησιμοποιώντας όλη την ακτινοβόληση της πυέλου. Παρ ‘όλα αυτά, ο αλλομετρική κλιμάκωση της θανατηφόρου δόσης (LD50) (Gy) του ολική ακτινοβόληση του σώματος για ανθρώπους και αρουραίους είναι 4 Gy και 6,75 Gy, αντίστοιχα [40]. Δεδομένου ότι η διαφορά αυτή είναι μέτρια, αποφασίσαμε να χρησιμοποιήσουμε 0,5 και 2 Gy για τους αρουραίους για να προσομοιώσει το σχετικό εύρος δόσης για την καθημερινή θεραπεία του ανθρώπινου κορμού.

Ambre

et al

. [41] μελέτησαν την εξάλειψη της 5-FU και των μεταβολιτών της μετά από ενδοφλέβια χορήγηση της 5-FU στα 15 και 150 mg /kg σε αρουραίους. Τα αποτελέσματα αυτής της μελέτης υπέδειξαν ότι ο κορεσμός της καταβολική οδό εμφανίστηκαν μετά από την υψηλότερη δόση. Jarugula

et al

. [42] απέδειξαν ότι η δόση-κανονικοποιημένη περιοχή κάτω από την καμπύλη (AUC) ήταν σημαντικά υψηλότερη μετά τη χορήγηση 100 mg /kg (μέση τιμή ± τυπική απόκλιση, SD, 1,14 ± 0,55 mg · h /L /mg) από ό, τι μετά από 50 mg /kg (μέση ± SD, 0,50 ± 0,16 mg · h /L /mg) ή 10 mg /kg (μέση ± SD, 0,43 ± 0,11 mg · h /L /mg). Έτσι, επιλέξαμε 100 mg /kg ως εφικτή δόση 5-FU σε αρουραίους για εξέταση των φαρμακοκινητικών παραμέτρων 5-FU, με βάση τις προηγούμενες εκθέσεις [16], [41], [42].

Είκοσι ώρες μετά RT, οι αρουραίοι χορηγήθηκαν 100 mg /kg 5-FU σε 2 mL φυσιολογικού ορού με ενδοφλέβια έγχυση στη μηριαία φλέβα για μια 2 λεπτών περιόδου [42]. Ένα δείγμα αίματος 150-μL αποσύρθηκε από την σφαγίτιδα φλέβα με ένα συλλέκτη κλασμάτων σύμφωνα με ένα προγραμματισμένο πρόγραμμα στα 5, 15, 30, 45, και 60 λεπτά, και 1,5, 2, 2,5, και 3 ώρες μετά τη χορήγηση του φαρμάκου. Τα δείγματα αίματος αμέσως φυγοκεντρήθηκαν στα 3300 χ

g

για 10 λεπτά. Το προκύπτον πλάσμα (50 μΕ) προστέθηκε σε 1 mL οξικού αιθυλεστέρα σε έναν καθαρό σωλήνα, στροβιλίζεται για 5 λεπτά, και φυγοκεντρήθηκε στα 5900 χ

g

για 10 λεπτά. Μετά τη φυγοκέντρηση, η άνω οργανική στιβάδα που περιείχε το οξικό αιθυλεστέρα μεταφέρθηκε σε ένα νέο σωλήνα και εξατμίστηκε μέχρι ξηρού υπό ρεύμα αζώτου. Το ξηρό υπόλειμμα ανασυστάθηκε με 50 μι νερό Milli-Q (Millipore). Ένα κλάσμα 20 μΙ του διαλύματος εγχύθηκε στην υγρή χρωματογραφία υψηλής απόδοσης-υπεριώδους (HPLC-UV) σύστημα ανίχνευσης.

Υψηλής απόδοσης υγρή χρωματογραφία

ανάλυση

Χρωματογραφικός διεξήχθη σε ένα μοντέλο LC -20AT σύστημα HPLC (Shimadzu, Tokyo, Japan) εφοδιασμένο με έναν ανιχνευτή μοντέλο SPD-20A μήκους κύματος UV, SIL-20AC αυτόματο δειγματολήπτη, και ένα σύστημα επεξεργασίας δεδομένων LC Solution. Μια στήλη LiChroCART RP-18e (Purospher, 250 mm, 5 μm, Merck, Darmstadt, Γερμανία) με στήλη προστασίας LiChroCART 4-4 χρησιμοποιήθηκε για διαχωρισμό. Η κινητή φάση αποτελούνταν από 10 φωσφορική-μεθανόλη μΜ καλίου (99:1, ν /ν, ρΗ 4,5 ρυθμίστηκε με 85% φωσφορικό οξύ), και ο ρυθμός ροής της κινητής φάσης ήταν 1 ml /min. Το μήκος κύματος ανίχνευσης ορίστηκε στα 266 nm. Υπό αυτές τις συνθήκες, ο χρόνος κατακράτησης του 5-FU ήταν 5,4 λεπτά. Η γραμμικότητα των καμπυλών βαθμονόμησης αποδείχθηκε από τις καλές συντελεστές προσδιορισμού (

r

2) που λαμβάνονται για τη γραμμή παλινδρόμησης. Καλή γραμμικότητα επιτεύχθηκε στο εύρος του 0.01-5 μg /ml, με όλους τους συντελεστές συσχέτισης μεγαλύτερο από 0.998. Όλα τα δείγματα παρασκευάστηκαν φρέσκα, συμπεριλαμβανομένων των προτύπων διαλυμάτων, από το ίδιο διάλυμα αποθέματος (5 mg /mL). Ο /mL όριο 0,01-μα της ποσοτικοποίησης ορίστηκε η χαμηλότερη συγκέντρωση στην καμπύλη βαθμονόμησης που θα μπορούσε να μετρηθεί συστηματικά με αποδεκτή προκατάληψη και η σχετική SD. Η συνολική μέση ακρίβεια, που ορίζεται από τη σχετική SD, κυμάνθηκε από 0,2% έως 11,0%. Αναλυτική ακρίβεια εκφράστηκε ως το ποσοστό διαφορά των μέσων τιμών που παρατηρήθηκαν σε σύγκριση με γνωστές συγκεντρώσεις που κυμαίνονται από -10,0% σε 14,0%. Τα αποτελέσματα ανάκτησης για τις συγκεντρώσεις 0,1-10 μg /mL ήταν 92,0% -94,0%

Η αξιολόγηση της ηπατικής λειτουργίας

Τα επίπεδα της αμινοτρανσφεράσης της αλανίνης (ALT) στο πλάσμα μετρήθηκαν για να ελέγξετε την επιρροή της διάφορους τρόπους για την ηπατική λειτουργία με μια τυπική χρωματομετρική μέθοδο χρησιμοποιώντας ένα φασματοφωτόμετρο Synchron LX20 (Beckman Coulter) και παρέχεται από τον κατασκευαστή αντιδραστηρίων.

ορού κυτοκινών ανάλυση

Τα επίπεδα των κυτοκινών (αυξητικός παράγοντας μετασχηματισμού βήτα πλάσμα 1 (TGF-β1) και παράγοντα άλφα νέκρωσης όγκου (TNF-α)) που λαμβάνονται από τα δείγματα αίματος ποντικού αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας ενζυμο-συνδεδεμένη ανοσορροφητική δοκιμασία (ELISA) (Κ & amp?. D Systems) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή

συστοιχία αντισωμάτων κυτοκίνης

Ο αρουραίος δείγματα πλάσματος αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας το ένα συστοιχία αντισωμάτων κυτοκίνης (RayBio® Mouse Antibody Cytokine Arrays II, RayBiotech, Inc., Norcross, Ga.) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή και όπως προηγουμένως περιγράφεται [43] για την ανίχνευση πιθανών μεσολαβητών της αλληλεπίδρασης 5-FU-RT. Η συγκεκριμένη σειρά ανιχνεύει ταυτόχρονα 34 ποντικού κυτοκίνες. (Εικ. 4) Εν συντομία, οι μεμβράνες συστοιχία κυτοκίνης αποκλείστηκαν σε 2 ml 1 χ ρυθμιστικό διάλυμα μπλοκαρίσματος για 30 λεπτά και στη συνέχεια επωάστηκαν με 1 ml δείγματος πλάσματος σε θερμοκρασία δωματίου για 1-2 ώρες. Τα δείγματα στη συνέχεια μεταγγίζεται από κάθε δοχείο, και οι μεμβράνες πλύθηκαν τρεις φορές με 2 ml l χ ρυθμιστικό διάλυμα πλύσης Ι, που ακολουθείται από δύο πλύσεις με 2 ml L Χ ρυθμιστικό διάλυμα έκπλυσης II σε θερμοκρασία δωματίου με ανακίνηση. Οι μεμβράνες στη συνέχεια επωάστηκαν σε 1:250 αραιωμένο συζευγμένο με βιοτίνη πρωτογενή αντισώματα σε θερμοκρασία δωματίου για 1-2 ώρες και πλύθηκαν όπως περιγράφεται παραπάνω, πριν από την επώαση σε 1:1000 αραιώνεται με υπεροξειδάση (HRP), συζευγμένης στρεπταβιδίνης. Μετά από επώαση σε συζευγμένο με HRP στρεπταβιδίνη για 30-60 λεπτά, οι μεμβράνες πλύθηκαν επιμελώς και εκτίθεται σε ένα υπόστρωμα υπεροξειδίου (ρυθμιστικά ανίχνευση Γ και Δ, RayBiotech, Inc.) για 5 λεπτά στο σκοτάδι πριν από την απεικόνιση. Οι μεμβράνες στη συνέχεια εκτέθηκαν σε φιλμ ακτίνων Χ (Kodak Χ-ΟΜΑΤ AR) σε θερμοκρασία δωματίου για 1 λεπτό. εντάσεις σήματος αναλύθηκαν με Fuji Film πολλαπλών Gauge V2.1. Βιοτίνη-συζευγμένο IgG χρησίμευσε ως θετικός έλεγχος σε έξι σημεία, όπου χρησιμοποιείται για να προσδιορίσει τον προσανατολισμό της μεμβράνης και να ομαλοποιήσει τα αποτελέσματα από διαφορετικές μεμβράνες που είχαν που συγκρίνονται. Για κάθε σημείο, η καθαρή οπτική πυκνότητα προσδιορίστηκε αφαιρώντας το υπόβαθρο οπτική πυκνότητα από το σύνολο των πρώτων οπτική πυκνότητα και η οπτική πυκνότητα κάθε κυτοκίνη εκπροσωπήθηκε ως ποσοστό του θετικού μάρτυρος.

Προσδιορισμός των ενδοκυττάριων 5- επίπεδα FU, με ή χωρίς ανασυνδυασμένη ΜΜΡ-8 με υγρή χρωματογραφία υψηλής απόδοσης

για να εξεταστεί το αποτέλεσμα ΜΜΡ-8 σε φυσιολογικά ηπατικά κύτταρα, μία ανθρώπινη ηπατοβλάστωμα κυτταρική γραμμή που λαμβάνεται, HepG2, χρησιμοποιήθηκε για την προσομοίωση κανονικής ηπατικά κύτταρα σε επιπλέον πειράματα μας. Μετά την επεξεργασία με 10 μg /mL ανασυνδυασμένη ΜΜΡ-8 συν 50 μΜ 5-FU ή 50 μΜ 5-FU μόνη της, τα κύτταρα HepG2 (ανθρώπινου ηπατοκυτταρικού καρκινώματος κυτταρική γραμμή) συλλέχθηκαν κάθε 10 λεπτά μέχρι 60 λεπτά και πλύθηκαν δύο φορές σε αλατούχο διάλυμα ρυθμισμένο με φωσφορικό (PBS) που ακολουθείται από φυγοκέντρηση στις 13.000 rpm για 5 λεπτά. Για την εξαγωγή ενδοκυτταρική 5-FU, ενός διαλύματος εκχύλισης που περιέχει 0.1% Triton Χ-100 σε διμεθυλοσουλφοξείδιο προστέθηκε στα κυτταρικά ιζήματα, και αυτό το εναιώρημα περιδινήθηκε και φυγοκεντρήθηκε at13000 rpm για 5 λεπτά. Το προκύπτον διάλυμα αναμίχθηκε με έναν ίσο όγκο ακετονιτριλίου για αποπρωτεΐνωση. Τα ιζήματα πρωτεΐνης απομακρύνθηκαν με φυγοκέντρηση (13.000 rpm για 5 λεπτά), και ένα κλάσμα 20 μί του υπερκειμένου υποβλήθηκε σε υψηλής απόδοσης υγρή χρωματογραφία ανάλυση ως αναφορά προηγουμένως.

παρασκεύασμα αναστολέα Mediator και πειράματος

ΜΜΡ-8 αναστολέα Ι (Calbiochem, La Jolla, CA) χορηγήθηκε σε αρουραίους για να εξετάσει κατά πόσον ή όχι RT διαμόρφωση των φαρμακοκινητικών παραμέτρων 5-FU μπορεί να αποκλειστεί. Εν συντομία, ΜΜΡ-8 αναστολέα Ι διαλύθηκε σε PEG400 /αιθανόλη [4:01 (ν /ν)] διάλυμα, αποδίδοντας ένα τελικές συγκεντρώσεις των 5 mg /mL. Δύο ώρες πριν από την ακτινοβόληση, 10 mg /kg της ΜΜΡ-8 αναστολέα Ι εγχύθηκε σε φλέβα της ουράς του αρουραίου σε ένα 2-λεπτών περιόδου. Μετά από αυτό, οι αρουραίοι αναισθητοποιήθηκαν με ουρεθάνη 1 g /ml και α-χλωραλόζη 0,1 g /ml (1 ml /kg με ενδοπεριτοναϊκή ένεση), και ακινητοποιήθηκαν σε έναν πίνακα για να υποβληθούν σε αξονική τομογραφία για προσομοίωση του πλήρους πεδίου της πυέλου και έλαβε ακτινοβολία, όπως περιγράφηκε προηγουμένως. Τα πειραματόζωα χωρίστηκαν τυχαία σε έλεγχο χωρίς /αιθανόλης [(ν /ν) 4:01] λύση PEG400 (0 Gy), έλεγχος με το διαλύτη (0 Gy), ολόκληρο το πυελικό ακτινοβολίας (2 Gy) με διαλύτη και ακτινοβόληση ολόκληρου πυέλου (2 Gy) με ΜΜΡ-8 αναστολέα και ομάδες διαλύτη, αντίστοιχα. Μετά RT sham RT 20 ώρες, όλοι οι αρουραίοι έλαβαν 5-FU (100 mg /kg) ενέσεων και οι φαρμακοκινητικές παράμετροι της 5-FU αναλύθηκαν. δεδομένα κάθε ομάδας συλλέχθηκε από τέσσερις αρουραίους.

Η φαρμακοκινητική και η ανάλυση των δεδομένων

Οι φαρμακοκινητικές παράμετροι, συμπεριλαμβανομένης της AUC για τη συγκέντρωση συναρτήσει του χρόνου, τελικής αποβολής φάση t

1/2, Cmax, MRT, ολική κάθαρση πλάσματος και Vss υπολογίστηκαν χρησιμοποιώντας το λογισμικό υπολογισμού φαρμακοκινητική WinNonlin Standard Edition, Έκδοση 1.1 (Scientific Consulting, Apex, NC, USA) χρησιμοποιώντας ένα διαμερισματικό μοντέλο.

Στατιστικές μέθοδοι

Τα αποτελέσματα είναι παρουσιάζονται ως μέσο ± τυπικές αποκλίσεις. Οι διαφορές στις αναλογιστικές αποτελέσματα μεταξύ των ομάδων υπολογίστηκαν χρησιμοποιώντας μονόδρομη ανάλυση διακύμανσης (ANOVA), με post hoc πολλαπλές συγκρίσεις. Όλες οι αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν με τη χρήση του SPSS, έκδοση 12.0 (SPSS, Chicago, IL, USA).