Abstract

Γαστρικό καρκίνο (GC) είναι μία από τις πιο κοινές κακοήθεις καρκίνους παγκοσμίως. Ωστόσο, λίγα είναι γνωστά για το μοριακό διαδικασία με την οποία η ασθένεια αναπτύσσεται και εξελίσσεται. Αυτή η μελέτη διερεύνησε τη συσχέτιση μεταξύ της έκφρασης του παράγοντα πυρηνικής μεταγραφής SOX4 και διάφορες κλινικοπαθολογική παραμέτρων καθώς και την επιβίωση των ασθενών. Τα επίπεδα έκφρασης του πυρηνικού SOX4 αναλύθηκαν με ανοσοϊστοχημεία? τα στοιχεία που περιλαμβάνονται γαστρικών ιστών από 168 ασθενείς με GC. Ζεύγη

t

δοκιμές χρησιμοποιήθηκαν για την ανάλυση των διαφορών στην έκφραση πυρηνικών SOX4 μεταξύ όγκου και μη όγκου ιστών από κάθε ασθενή. Δίπλευρη Χ

2 δοκιμές έγιναν για να προσδιοριστεί εάν οι διαφορές στην έκφραση των πυρηνικών SOX4 και κλινικοπαθολογική παραμέτρους ήταν σημαντικές. Time-to-event τελικά σημεία για κλινικοπαθολογική παραμέτρων καταγράφηκε χρησιμοποιώντας τη μέθοδο Kaplan-Meier και η στατιστική σημαντικότητα προσδιορίσθηκε με τη χρήση μονοπαραγοντική δοκιμές log-rank. Cox αναλογικό μοντέλο κινδύνου χρησιμοποιήθηκε για την πολυπαραγοντική ανάλυση για να προσδιοριστεί η ανεξαρτησία των προγνωστικών αποτελεσμάτων της έκφρασης πυρηνικών SOX4. Η υπερέκφραση των πυρηνικών SOX4 συσχετίστηκε σημαντικά με το βάθος της εισβολής (

P

& lt? 0,0001), κομβικό κατάσταση (

P

= 0,0055), μακρινή μετάσταση (

P

= 0.0195 ), το στάδιο (

P

= 0,0003), και αγγειακή διήθηση (

P

= 0,0383). Οι ασθενείς που εμφανίζονται υψηλά επίπεδα έκφρασης των πυρηνικών SOX4 πέτυχε σημαντικά φτωχότερη επιβίωση ελεύθερη νόσου, σε σύγκριση με τους ασθενείς με επίπεδα έκφρασης χαμηλά SOX4 (

P

= 0,003). ανάλυση παλινδρόμησης μονοπαραγοντική Cox έδειξε ότι η υπερέκφραση της πυρηνικής SOX4 ήταν σαφής προγνωστικός δείκτης για GC (

P

= 0,004). Η υπερέκφραση των πυρηνικών SOX4 μπορεί να χρησιμοποιηθεί ως δείκτης για την πρόβλεψη της έκβασης των ασθενών με GC

Παράθεση:. Fang C-L, Hseu Υ-C, Λιν Υ-F, Hung S-Τ, Tai C, Uen Y-H, et al. (2012) Κλινική και προγνωστική Συλλόγου Μεταγραφή Factor SOX4 σε γαστρικό καρκίνο. PLoS ONE 7 (12): e52804. doi: 10.1371 /journal.pone.0052804

Επιμέλεια: Αντώνης WI. Lo, το Κινεζικό Πανεπιστήμιο του Χονγκ Κονγκ, Χονγκ Κονγκ

Ελήφθη: 12 του Σεπτεμβρίου του 2012? Αποδεκτές: 21 Νοεμ 2012? Δημοσιεύθηκε: 20 του Δεκεμβρίου 2012

Copyright: © 2012 Fang et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε από δύο υποτροφίες (CMFHR10020 και CMFHR10064) από Chi Mei Medical Center (www.chimei.org.tw). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Η συχνότητα του καρκίνου του στομάχου (GC) μειώθηκε μεταξύ των 1940 s και 1980 s στο δυτικό κόσμο, αλλά GC παραμένει εξαιρετικά διαδεδομένη σε όλο τον κόσμο. Επηρεάζει περίπου ένα εκατομμύριο ανθρώπους ετησίως και είναι η δεύτερη πιο συχνή αιτία θανάτου από καρκίνο [1], [2]. Μια μεγάλη διακύμανση στην συχνότητα εμφάνισης είναι εμφανής σε όλες τις ηπείρους [1]. Στην Ασία και τμήματα της Νότιας Αμερικής, GC είναι η πιο κοινή κακοήθεια επιθηλιακά και είναι η κύρια αιτία των θανάτων από καρκίνο. Στην Ταϊβάν, κυβερνητικές στατιστικές που εκδόθηκαν το 2011 κατετάγη GC ως η έκτη πιο συχνά διαγιγνώσκονται κακοήθης νόσος, με αποτέλεσμα να είναι περισσότερο από 2000 θανάτους ετησίως (https://www.doh.gov.tw/statistic/index.htm). έχουν ουσιαστική πρόοδος στις χειρουργικές τεχνικές και η χημειοθεραπεία, οι οποίες έχουν βελτιώσει τη θεραπεία της GC, αλλά το ποσοστό θεραπεία για προχωρημένες περιπτώσεις παραμένει σε χαμηλά επίπεδα και η νοσηρότητα παραμένει σε υψηλά επίπεδα [3], [4]. Μια πληρέστερη κατανόηση της παθογένειας και βιολογικά χαρακτηριστικά της νόσου είναι απαραίτητη για την περαιτέρω βελτίωση των μεθόδων θεραπείας.

Ανάμεσα στους προγνωστικούς δείκτες τώρα διαθέσιμο για GC, το πιο σημαντικό είναι η αμερικανική μεικτής επιτροπής για τον Καρκίνο (AJCC) στάδιο καθορίζεται από το βάθος της εισβολής, τη συμμετοχή των λεμφαδένων, και μακρινή μετάσταση. Ωστόσο, η πρόγνωση ποικίλλει ακόμα και μεταξύ των ασθενών στο ίδιο στάδιο. Έτσι, η αναζήτηση για συγκεκριμένους βιολογικούς δείκτες για τον εντοπισμό υποομάδες των ασθενών που είναι πιθανό να αντιμετωπίσετε μια ιδιαίτερα επιθετική πορεία της νόσου είναι σε εξέλιξη [5]. Τις τελευταίες δεκαετίες, αρκετές μελέτες έχουν δείξει ότι οι γενετικές τροποποιήσεις μπορεί να παίζει ένα ρόλο στην ανάπτυξη και την πρόοδο της GC [6]. Μελέτες στη μοριακή παθολογία μπορεί να βοηθήσει στην κατανόηση της παθογένειας της νόσου και μπορεί επίσης να αποκαλύψει χρήσιμο προγνωστικό μοριακών δεικτών. Ορισμένοι πρότειναν βιολογικών προγνωστικούς δείκτες περιλαμβάνουν υπερέκφραση της πρωτεΐνης CK2 κινάσης, Vav3, mesothelin, και ο υποδοχέας του επιδερμικού αυξητικού παράγοντα [7] – [11].

Στους ανθρώπους, η περιοχή φύλο καθορισμό οικογένεια Υ (SRY) κουτί, που αναφέρεται επίσης ως οικογένεια SOX, περιλαμβάνει 20 άκρως συντηρημένη παράγοντες μεταγραφής που παίζουν σημαντικό ρόλο στην ανάπτυξη. Αυτοί οι παράγοντες μεταγραφής που ορίζεται από μία διατηρημένη αλληλουχία υπογραφή στο πεδίο ομάδας υψηλού κινητικότητας (HMG) δέσμευσης DNA (DBD) [12], [13]. SOX4 είναι μια πρωτεΐνη 47-kDa που κωδικοποιείται από ένα μόνο γονίδιο εξόνιο, το οποίο διατηρείται σε υψηλό βαθμό στα σπονδυλωτά. Στα ποντίκια, SOX4 εκφράζεται ειδικά στην ωοθήκη, όρχεις, μαστικού αδένα, και θύμο και σε Τ ποντικού και προ-Β λεμφοκυτταρική κυτταρικές γραμμές [14]. Επιπλέον, SOX4 είναι απαραίτητη για την ανάπτυξη της καρδιάς, λεμφοκύτταρα, και θυμοκύτταρα, και SOX4-null ποντίκια πεθαίνουν από καρδιακές ανωμαλίες [15]. Η πολλαπλασιαστική ικανότητα των Β-κυττάρων προγόνων είναι σοβαρά μειωμένη σε κύτταρα από ποντίκια knockout SOX4 [16].

Η κλινική σημασία της SOX4 έχει αποκτήσει ιδιαίτερη προσοχή τα τελευταία χρόνια, με πολυάριθμες αναφορές που υποδηλώνει ότι η SOX4 μπορεί να συνεισφέρει στον όγκο προχώρηση. Τρεις ανεξάρτητες μελέτες προσυμπτωματικού ελέγχου για σημαντικό ογκογονίδια έδειξε ότι SOX4 συχνά μεταβάλλεται μέσω ρετροϊικής ενθέσεις [17] – [19]. Ο ιός λευχαιμίας ποντικού τυπικά στοχευμένη SOX4, και σταθεροποιήθηκε το μήνυμα SOX4 να παράγουν Β-κυτταρικά λεμφώματα που επέδειξαν αυξημένα επίπεδα μήνυμα SOX4 [19]. Η αυξημένη έκφραση SOX4 σχετίζεται με όγκους της ουροδόχου κύστης, του προστάτη, και του κόλου, και με όγκους του πνεύμονα μη-μικρού κυττάρου [20] – [23]. Ωστόσο, ο ρόλος του SOX4 σε τέτοιες όγκους δεν είναι πλήρως κατανοητός και τα αναφερόμενα στοιχεία έχουν δείξει ορισμένες αντιφάσεις. Ενώ SOX4 knockdown είχε σαν αποτέλεσμα την απόπτωση των κυττάρων ACC3 αδενοειδών κυστική καρκινώματος, SOX4 υπερέκφραση προωθείται διακοπή του κυτταρικού κύκλου και της απόπτωσης των κυττάρων καρκινώματος κόλου HCT116 [24], [25]. Η microRNA (miRNA) miR-335 ανέστειλε μεταστατικό εισβολή των κυττάρων και ενήργησε, τουλάχιστον εν μέρει, μέσω της στόχευσης

sox4

και υποθετικό στόχο του

TNC

, το οποίο κωδικοποιεί ένα εξωκυτταρικό συστατικό μήτρας εμπλέκεται στην κυτταρική μετανάστευση [26]. Αντίθετα, όσο υψηλότερο είναι το επίπεδο της έκφρασης SOX4, τόσο καλύτερη είναι η πρόγνωση για τους ασθενείς με μυελοβλαστώματα και άλλους τύπους όγκων [27]. Έτσι, SOX4 μπορεί να ασκεί διαφορετικές επιδράσεις σε κύτταρα όγκου ανάλογα με το πλαίσιο και πρωταρχικός μηχανισμός μετασχηματισμού? Οι περαιτέρω μελέτες δικαιολογείται να διευκρινιστεί αυτό το θέμα.

Μέχρι σήμερα, η προγνωστική σημασία των επιπέδων έκφρασης των πυρηνικών SOX4 στην ανθρώπινη GC δεν έχει τεκμηριωθεί. Αυτή η μελέτη διερεύνησε τις συσχετίσεις μεταξύ της έκφρασης των πυρηνικών SOX4 και κλινικοπαθολογική παραμέτρους, και αξιολόγησε τη σημασία της πυρηνικής SOX4 στην πρόβλεψη της πρόγνωσης για ασθενείς με GC.

Υλικά και Μέθοδοι

Δήλωση Ηθικής

Η επιτροπή δεοντολογίας σε Chi Mei Ιατρικό Κέντρο ενέκρινε το πρωτόκολλο της απόκτησης ιστών για τη μελέτη ανοσοϊστοχημική και ανοσοαποτύπωση. Γραπτή συγκατάθεση λήφθηκε από κάθε συμμετέχοντα πριν την απόκτηση του ιστού.

Οι συμμετέχοντες και οι δείγματα

Η ομάδα των ασθενών περιελάμβανε 168 συνεχόμενες περιπτώσεις GC από το 1997 έως το 2004 που τεκμηριώνουν παθολογικών και κλινικών παραγόντων και της κλινικής έκβασης. Όλες οι περιπτώσεις στην μελέτη αυτή έλαβαν ριζική ολική ή υφολική γαστρεκτομή με D2 ή D3 λεμφαδένων. Πληρότητα των χειρουργική εκτομή επιτεύχθηκε σε όλες τις περιπτώσεις, και παθολογική εξέταση αποκάλυψε καμία εμπλοκή του όγκου των περιθωρίων εκτομής σε χειρουργικά δείγματα (που ταξινομούνται ως R0: καμία υπολειμματική όγκου με βάση την κατηγορία R στην κατάταξη AJCC). Κανένας από τους ασθενείς της μελέτης μας είχαν λάβει προεγχειρητική χημειοθεραπεία και /ή ακτινοθεραπεία. Το τμήμα μη-όγκου ελήφθη από χονδροειδώς φυσιολογικό γαστρικό βλεννογόνο, ξεχωριστό από τον όγκο, σε εκτομή γαστρικού δείγμα. Κλινικοπαθολογικοί παράμετροι GCs προσδιορίστηκαν σύμφωνα με την ταξινόμηση AJCC. Η διάρκεια παρακολούθησης για την επιβίωση ελεύθερη νόσου ορίστηκε ως το χρονικό διάστημα μεταξύ της ημερομηνίας λειτουργία και την ημέρα της υποτροπής, σύμφωνα με το διάγραμμα του ασθενούς. Για κάθε ασθενή, αναλύσαμε ένα ζεύγος όγκου και μη όγκου γαστρικών ιστών για τον προσδιορισμό της έκφρασης πυρηνικών SOX4.

ανοσοϊστοχημική ανάλυση

έκφραση Πυρηνική SOX4 αναλύθηκε με ανοσοϊστοχημεία. μπλοκ ιστού εγκλεισμένες σε παραφίνη τομές των 5 mm και μεταφέρθηκαν σε πλάκες μικροσκοπίου (Muto Pure Chemicals Co. Ltd., Tokyo, Japan). ιστός του μαστού χρησιμοποιήθηκε θετικός έλεγχος για SOX4. Ο αρνητικός έλεγχος συνεπάγεται παράλειψη του πρωτογενούς αντισώματος και επώαση με φωσφορικό ρυθμιστικό αλατούχο διάλυμα. Οι τομές αποκηρωμένα με ξυλόλιο, που ακολουθείται από επανενυδάτωση σε διαβαθμισμένες αλκοόλες. Αποπαραφινωθείσες τομές επωάστηκαν σε ρυθμιστικό διάλυμα ρΗ 6.0 κιτρικού για 40 λεπτά στους 95 ° C σε ηλεκτρική εστία για να ανακτήσετε αντιγόνα. Περαιτέρω μπλοκάρισμα αντιγόνο διεξήχθη χρησιμοποιώντας Dako REAL υπεροξειδάση Ανασταλτικό Διάλυμα (Dako North America Inc., Carpinteria, CA) για 5 λεπτά. Οι πλάκες στη συνέχεια επωάστηκαν με πρωτογενές αντίσωμα: πολύκλωνο αντι-SOX4 (Life-Span, Βικτώρια, Καναδάς) για 1 ώρα σε θερμοκρασία δωματίου, σε αραίωση 1:400. Η ανίχνευση του ανοσοαντιδραστικού χρώση διεξήχθη με τη χρήση του συμπλόκου μέθοδο αβιδίνης-βιοτίνης-υπεροξειδάσης σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Ένα ευαίσθητο Dako REAL EnVision Σύστημα Ανίχνευσης (Dako North America Inc., Carpinteria, CA) χρησιμοποιήθηκε. Μετά την επώαση με διαμινοβενζιδίνη για 5 λεπτά, οι τομές βάφτηκαν αντίθετα με αιματοξυλίνη και συναρμολογείται σε Dako Faramount Υδατικό Τοποθέτηση Medium (Dako North America Inc., Carpinteria, CA) για μικροσκοπική ερμηνεία. Ως παράγοντας μεταγραφής, μόνο η πυρηνική SOX4 ήταν σκόραρε. Ημιποσοτική βαθμολόγησης της έντασης (0, καμία χρώση? 1, ασθενής χρώση? 2, ισχυρή χρώση) και το κλάσμα των θετικών καρκινικών κυττάρων (0, καμία χρώση? 1, λιγότερο από το μισό? 2, περισσότερο από το ήμισυ) αναλήφθηκε [22]. Η τελική βαθμολογία υπολογίστηκε για κάθε δείγμα πολλαπλασιάζοντας την ένταση και το ποσοστό των ανοσοχρώση: 0, καμία χρώση? 1, ασθενής χρώση? 2, μέτρια χρώση? 4, ισχυρή χρώση. Τμήματα με σκορ 0 ή 1 εμφανίζεται χαμηλή έκφραση του SOX4, ενώ εκείνοι που σημείωσε 2 ή 4 ορίστηκαν ως έχει υψηλή έκφραση ή υπερέκφραση SOX4. Κλινικά συλλογή δεδομένων και ανοσοϊστοχημική ανάλυση διεξήχθησαν ανεξάρτητα το ένα από το άλλο, σε μια μελέτη ερευνητή τυφλή.

RNA Εκχύλιση και cDNA Synthesis

Σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή, ολικό RNA από 10 όγκων και μη -tumor ζεύγη των γαστρικών ιστών απομονώθηκε χρησιμοποιώντας ένα κιτ εκχύλισης RNA (Sigma, St. Louis, ΜΟ). ποιότητα RNA αναλύθηκε με τη χρήση Agilant 2100 Bioanalyzer. Οι τιμές όλων των RIN 20 δείγματα ήταν πάνω από 7. σύνθεση cDNA εκτελέστηκε όπως περιγράφεται στο προηγούμενο μελέτη μας [28]. Συντίθεται cDNA αποθηκεύθηκε στους -20 ° C μέχρι τη χρήση.

Εκκινητές και Ανιχνευτές

Taqman Gene Expression Δοκιμασίες συμπεριλαμβανομένων εκκινητές και ανιχνευτές της SOX4 και β-ακτίνη, ένας εσωτερικός έλεγχος, αγοράστηκαν από την Applied Biosystems. Οι αριθμοί Δοκιμασία SOX4 και β-ακτίνη ήταν Hs00268388_s1, και Hs99999903_m1, αντίστοιχα.

ποσοτική πραγματικού χρόνου PCR

Τα επίπεδα έκφρασης των γονιδίων στόχων μετρήθηκαν χρησιμοποιώντας ποσοτική PCR πραγματικού χρόνου σε ο Prism 7300 Σύστημα ανίχνευσης ΑΒΙ Sequence (Applied Biosystems) όπως περιγράφεται στο προηγούμενη μελέτη μας [28]. κύκλος κατωφλίου (

C

t

) είναι ο αριθμός κλασματική κύκλος στον οποίο ο φθορισμός που δημιουργείται με διάσπαση του ανιχνευτή υπερβαίνει ένα σταθερό επίπεδο πάνω από την αρχική τιμή. Για ένα επιλεγμένο κατώφλι, ο αριθμός αντιτύπου μικρότερα εκκίνησης οδηγεί σε μια υψηλότερη

C

t

αξία. Το ποσό των SOX4 mRNA σε όγκο ή μη καρκινικών ιστών, τυποποιηθεί έναντι του ποσού του mRNA β-ακτίνης, εκφράστηκε ως Δ

C

όγκου

ή Δ

C

μη-όγκου

=

C

t

(SOX4) -.

C

t

(β-ακτίνη)

Πολιτισμός τηλέφωνα

Ανθρώπινη φυσιολογική (Hs738.St/Int) και κυτταρικές γραμμές GC (AGS και ΝΟΙ-Ν87) ελήφθησαν από την American Type Culture Collection (ATCC? Manassas, VA, USA). Οι κυτταρικές σειρές που είχαν επικυρωθεί από το πρόγραμμα κυτταρικής βιολογίας ATCC, και διαβιβάστηκαν για όχι περισσότερο από 6 μήνες πριν από τη νέα κύτταρα εξέρχονται από το παγωμένη κατάσταση ή ένα νέο δείγμα κυττάρων αγοράστηκε από την ATCC. Τα κύτταρα καλλιεργήθηκαν σε ϋΜΕΜ (Hs738.St/Int), F-12K (AGS), ή RPMI-1640 (NCI-Ν87) μέσα συμπληρωμένα με 10% εμβρυϊκό βόειο ορό, 100 μονάδες /ml πενικιλλίνη G, 100 μg /mL στρεπτομυκίνη θειικό, και 250 ng /mL αμφοτερικίνη Β

πυρηνικής πρωτεΐνης Παρασκευή

πυρηνικές πρωτεΐνες εκχυλίστηκαν χρησιμοποιώντας το αντιδραστήριο NE-PER Nuclear Extraction (Pierce Biotechnology, Rockford, IL) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή . Τα δείγματα αποθηκεύτηκαν στους -80 ° C μέχρι να χρησιμοποιηθούν. Η συγκέντρωση πρωτεΐνης προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας ένα BCA Protein Assay Kit (Pierce Biotechnology) με αλβουμίνη βόειου ορού ως πρότυπο.

ανοσοαποτύπωσης

μετουσιωμένα δείγματα πρωτεΐνης υποβλήθηκαν σε 12% SDS-PAGE. Οι πρωτεΐνες μεταφέρθηκαν σε μεμβράνες νιτροκυτταρίνης, και μπλοκάρει κηλίδες επωάστηκαν στους 4 ° C όλη τη νύκτα με αντι-SOX4 πολυκλωνικό αντίσωμα (1:1000 αραίωση). πρωτεΐνη σύνδεσης ΤΑΤΑ χρησιμοποιήθηκε ως εσωτερικός έλεγχος για την ίση φόρτωσης πρωτεΐνης. Το κύτταρο κλασματοποίηση επιβεβαιώθηκε με β-ακτίνης για να αποκλείσει το ενδεχόμενο μόλυνσης. Τα στυπώματα επωάστηκαν περαιτέρω με δευτερογενή αντισώματα συζευγμένα με υπεροξειδάση (Sigma, St. Louis, ΜΟ) για 1 ώρα σε θερμοκρασία δωματίου. Αυτά στη συνέχεια επωάστηκαν με SuperSignal West Femto Μέγιστο Ευαισθησία Υπόστρωμα (Pierce Biotechnology, Inc., Rockford, IL), και εκτέθηκαν σε Fuji Film ιατρική ακτίνων Χ (Fuji Photo Film Co., Tokyo, Japan). Επεξεργασία εικόνας πραγματοποιήθηκε με τη χρήση του λογισμικού Image Gauge Fuji.

Στατιστική Ανάλυση

Paired

t

δοκιμασίες χρησιμοποιήθηκαν για την αξιολόγηση της διαφοράς στην έκφραση πυρηνικών SOX4 μεταξύ όγκου και μη όγκου ιστούς για κάθε ασθενή. Εξετάσαμε διάφορες κλινικοπαθολογική παραμέτρους: την ηλικία, το φύλο, το βάθος της εισβολής, κομβική θέση, μακρινή μετάσταση, το στάδιο, το βαθμό διαφοροποίησης, και αγγειακή διαπερατότητα. Η συσχέτιση μεταξύ της έκφρασης των πυρηνικών SOX4 και κάθε κλινικοπαθολογική παράμετρος εξετάστηκε χρησιμοποιώντας χ

2 τεστ. Τα τελικά σημεία time-to-εκδήλωση για όλους τους κλινικοπαθολογική παραμέτρων καταγράφηκε με τη μέθοδο Kaplan-Meier, και ο βαθμός της σημασίας υπολογίστηκε με το τεστ μονοπαραγοντική log-rank. Παραμέτρους που προέκυψαν ως σημαντική (

P

≤0.05) στην μονοπαραγοντική ανάλυση ενεγράφησαν ως μεταβλητές στο μοντέλο παλινδρόμησης Cox πολυμεταβλητή, και η αναλογία κινδύνου (HR) και η ανεξαρτησία των προγνωστικών αντίκτυπο θα μπορούσε να προσδιοριστεί σε μια σταδιακή πίσω της μόδας. Όλα τα δεδομένα αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας SPSS έκδοση λογισμικού 14 (SPSS, Chicago, IL). Ένα

P

αξία των & lt? 0,05 θεωρήθηκε σημαντική

Αποτελέσματα

Βασικά δεδομένα

Αυτή η μελέτη συμμετείχαν 168 ασθενείς με GC, 104 από τους οποίους ήταν. άνδρες και 64 ήταν γυναίκες (Πίνακας 1). τις ηλικίες των ασθενών κυμαίνονταν 34-88 ετών κατά την πρώτη διάγνωση (μέσος όρος 64,9 χρόνια). Με βάση την ταξινόμηση AJCC, 45 ασθενείς ήταν στο στάδιο I, 45 ήταν σε στάδιο II, 54 ήταν σε στάδιο III, και 24 ήταν σε στάδιο IV. Η περίοδος παρακολούθησης για όλους τους ασθενείς κυμαίνεται από 0 έως 136,2 μήνα (μέσος όρος 21,4 μήνες). Κατά τη διάρκεια της παρακολούθησης, 86 ασθενείς πέθαναν από GC.

Η

Έκφραση Πυρηνική SOX4 ρυθμίζεται αυξητικά και των συνδεδεμένων με κλινικοπαθολογική Παράμετροι GC

Χρησιμοποιήσαμε ανοσοϊστοχημική ανάλυση για τη διερεύνηση της έκφρασης των πυρηνικών SOX4 σε ιστούς που λαμβάνονται από τους ασθενείς της μελέτης μας (Σχήματα 1Α έως C). έκφραση Πυρηνική SOX4 ήταν σημαντικά υψηλότερη σε ιστούς όγκων σε σχέση με το μη καρκινικούς ιστούς (

P

& lt? 0.001). Η υπερέκφραση των πυρηνικών SOX4 (βαθμολογίες 2 ή 4) παρατηρήθηκε σε 90 από τις 168 ασθενείς (53,5%). Η ανάλυση στυπώματος Western κατέδειξε επίσης ότι η έκφραση του SOX4 αυξήθηκε σημαντικά σε γαστρικό καρκίνο κύτταρα και ιστούς σε σύγκριση με τα φυσιολογικά κύτταρα και τους ιστούς (Σχήμα 1 D). Επιπλέον, η ποσοτική πραγματικού χρόνου PCR ανάλυση έδειξε ότι η έκφραση του mRNA SOX4 αυξήθηκε σημαντικά σε ιστούς όγκων σε σύγκριση με τα μη καρκινικούς ιστούς (Πίνακας 2). Όπως φαίνεται στον Πίνακα 3, η υπερέκφραση της πυρηνικής SOX4 συσχετίζεται σημαντικά με τις ακόλουθες παραμέτρους: το βάθος της εισβολής (

P

& lt? 0,0001), κομβικών κατάσταση (

P

= 0,0055), μακρινή μετάσταση (

P

= 0.0195), το στάδιο (

P

= 0,0003), και αγγειακή διήθηση (

P

= 0,0383). Δεν παρατηρήθηκε σημαντική συσχέτιση προέκυψε μεταξύ υπερέκφραση της πυρηνικής SOX4 και την ηλικία ή το φύλο.

Η

δείγματα GC αναλύθηκαν με ανοσοϊστοχημεία με ένα αντίσωμα έναντι SOX4. Η χρώση του SOX4 παρατηρείται στον πυρήνα και είναι πολύ αδύναμος στο κυτταρόπλασμα. Πίνακας Α δείχνει ένα δείγμα μη-όγκου χωρίς έκφραση της πυρηνικής SOX4? Πίνακας Β δείχνει ένα δείγμα όγκου με χαμηλό επίπεδο έκφρασης των πυρηνικών SOX4? Πίνακας Γ δείχνει ένα δείγμα όγκου με υψηλό επίπεδο έκφρασης της πυρηνικής SOX4. Πίνακας D: έκφραση πρωτεΐνης Πυρηνική SOX4 εξετάστηκε σε 3 γαστρικά κύτταρα και ζεύγη 5 μη-όγκου /όγκου του γαστρικού ιστών. Μεγέθυνση:. 200 ×

Η

Η υπερέκφραση της πυρηνικής SOX4 ως προγνωστικός δείκτης για τη GC

Οι συσχετίσεις των κλινικών αποτελεσμάτων με την έκφραση της πυρηνικής SOX4 φαίνονται στην Εικόνα 2. Η υπερέκφραση της πυρηνικής SOX4 ήταν σημαντικά που σχετίζεται με μικρότερη επιβίωση ελεύθερη νόσου (

P

= 0,003). Οι ασθενείς με υψηλά επίπεδα έκφρασης των πυρηνικών SOX4 επιτευχθεί ένα ποσοστό επιβίωσης ελεύθερης νόσου 5 ετών 45,6% σε σύγκριση με 66,5% για τους ασθενείς με χαμηλά επίπεδα έκφρασης. Επιπλέον, υψηλής στάδιο GC (σταδίου III και IV) χρησιμοποιήθηκε για να μάθετε το αποτέλεσμα της υπερέκφρασης των πυρηνικών SOX4 για την πρόγνωση. Ωστόσο, η σχέση μεταξύ υπερέκφραση της πυρηνικής SOX4 και ελεύθερη νόσου επιβίωση ήταν μόνο οριακά σημαντική (

P

= 0.102, Εικόνα 3).

Όλες οι στατιστικές δοκιμασίες ήταν αμφίδρομες και το επίπεδο σημαντικότητας ήταν

P

& lt?. 0.05

η

Όλες οι στατιστικές δοκιμασίες ήταν αμφίδρομες και το επίπεδο σημαντικότητας ήταν

P

& lt?. 0.05

η

τα αποτελέσματα της μονοπαραγοντική ανάλυση των δεικτών πρόγνωσης του GC φαίνονται στον πίνακα 4. η ελεύθερη νόσου επιβίωση συσχετίστηκε σημαντικά με κάθε ένα από τα παρακάτω: κομβικό κατάσταση (

P

& lt? 0.001), μακρινή μετάσταση (

P

& lt? 0.001), το στάδιο (

P

& lt? 0.001), αγγειακή εισβολή (

P

& lt? 0.001), και η υπερέκφραση των πυρηνικών SOX4 (

P

= 0,004). Ωστόσο, η σχέση μεταξύ υπερέκφραση της πυρηνικής SOX4 και η επιβίωση δεν ήταν σημαντική μετά τον έλεγχο για άλλες γνωστές προγνωστικοί δείκτες σε πολυπαραγοντική ανάλυση (

P

= 0,186, Πίνακας 5). Στην πολυπαραγοντική ανάλυση, το βάθος της εισβολής (Λόγος Κινδύνου (HR) = 2.091, 95% Διάστημα Εμπιστοσύνης (CI) = 1,073 – 4,077,

P

= 0.030), κομβικό κατάσταση (HR = 3,901, 95% CI = 1,589 έως 9,580,

P

= 0,003), μακρινή μετάσταση (HR = 15.453, 95% CI = 6,419 έως 37,114,

P

& lt? 0.001) και η αγγειακή εισβολή (HR = 1,849, 95 % CI = 1,058 – 3,229,

P

= 0,031) ήταν προγνωστική ανεξάρτητοι.

η

Συζήτηση

Καρκίνος στομάχου παραμένει ένα μείζον πρόβλημα δημόσιας υγείας σε όλο τον κόσμο [ ,,,0],1]. Η χειρουργική εκτομή είναι γενικά θεωρείται η καλύτερη θεραπεία για να βελτιώσει την πρόγνωση, όταν έγκαιρη διάγνωση του GC είναι επιτυχής [29]. Δυστυχώς, οι περισσότερες περιπτώσεις του GC διαγνωστεί αργά, σε τοπικά προχωρημένο στάδιο. Οι ασθενείς με προχωρημένους όγκους συχνά υποβάλλονται σε ρίζα γαστρεκτομή, η οποία οδηγεί σε ένα υψηλό επίπεδο νοσηρότητας και δεν μειώνει τον κίνδυνο υποτροπής [30]. Μεγαλύτερη γνώση των μοριακών μηχανισμών που διέπουν την ανάπτυξη αυτής της θανάσιμης νεόπλασμα απαιτείται εάν νέες στρατηγικές για την πρόληψη και τη θεραπεία GC πρόκειται να αναπτυχθούν. Ειδικότερα, η ταυτοποίηση μορίων που έχουν αλλοιωθεί κατά την έναρξη και την πρόοδο του καρκίνου μπορούν να παρέχουν πολύτιμα εργαλεία ως προγνωστικοί δείκτες ή θεραπευτικούς στόχους.

Η έκφραση της SOX4 σε ανθρώπινους καρκίνους ποικίλλει ανάλογα με τον τύπο του καρκίνου. Το επίπεδο SOX4 είναι αυξημένα σε πολλές ανθρώπινους καρκίνους, συμπεριλαμβανομένου της ουροδόχου κύστης, του προστάτη, ενδομητρίου, και το ήπαρ, ενώ μειώνεται σε μελάνωμα και τον καρκίνο της χοληδόχου κύστης [20], [21], [31] – [34]. ανασκόπηση της βιβλιογραφίας μας προσδιορίζονται μόνο μία μελέτη που διερεύνησε την έκφραση των SOX4 στην ανθρώπινη GC. Η μελέτη αυτή, από Shen et al., Έδειξαν ότι SOX4 υπερεκφράστηκε σε ασθενείς GC [35]. Στην παρούσα μελέτη, αξιολογήσαμε τα επίπεδα έκφρασης των πυρηνικών SOX4 σε γαστρικό ιστούς που λαμβάνονται από 168 ασθενείς με GC. Τα αποτελέσματά μας ήταν σύμφωνα με αυτά του Shen et al. και έδειξε ότι η έκφραση της πυρηνικής SOX4 ανυψώθηκε σε γαστρικό ιστούς όγκου σε σχέση με μη-όγκου γαστρικών ιστών. Τα αποτελέσματα ανοσοκηλιδώσεως επιβεβαίωσαν ότι η έκφραση της πυρηνικής SOX4 ήταν υψηλότερη σε κύτταρα GC σε σχέση με το κανονικό γαστρικό κύτταρα.

Τα ευρήματά μας έδειξαν επίσης ότι η υπερέκφραση της πυρηνικής SOX4 σε ιστούς GC ήταν συσχετίζεται στενά με την εισβολή όγκου και μετάσταση. Ο μηχανισμός με τον οποίο SOX4 ασκεί επεμβατική και μεταστατική δραστηριότητα της παραμένει ασαφής. Στην πρώτη γραμμή των αποδείξεων, miRNAs (RNAs μικρό μη κωδικοποιητική με ρυθμιστικές λειτουργίες) έχουν δειχθεί ότι συνδέονται με εισβολή και μετάσταση όγκου [36] – [38]. Προηγούμενη εργασία από Tavazoie et al. έδειξε ότι το miR-335 καταστέλλει την μετάσταση μέσω ρύθμισης προς τα κάτω της SOX4 [26]. Αυτό το αποτέλεσμα πρότεινε ότι SOX4 συνδέεται με την επιθετικότητα του όγκου.

Η δεύτερη γραμμή του παρασχέθηκαν αποδείξεις από μελέτες σε επιθηλιακά-μεσεγχυματικά μετάβασης (EMT), το οποίο είναι ένα βασικό βήμα κατά τη διάρκεια της εμβρυογένεσης [39]. Συσσωρευμένα στοιχεία δείχνουν ότι ακατάλληλη χρήση των EMT μπορεί να είναι ένα συστατικό της εισβολής πολλών όγκων των επιθηλιακών ιστών. Τα χαρακτηριστικά των κυττάρων επηρεάζονται έντονα κατά τη διάρκεια της ΕΜΤ, με αποτέλεσμα μεταβολές κυττάρου-κυττάρου και των αλληλεπιδράσεων κυττάρου-μήτρας, κυτταρική κινητικότητα και διεισδυτικότητα [40], [41]. Πρόσφατη μελέτη των Zhang et al. έδειξε ότι η υπερέκφραση του SOX4 σε ανθρώπινα επιθηλιακά κύτταρα μαστού οδήγησε στην απόκτηση μεσεγχυματικών γνωρίσματα, και ενισχυμένη κυτταρική μετανάστευση και εισβολή. Επιπλέον, SOX4 θετικά ρυθμίζεται η έκφραση των γνωστών επαγωγέων ΕΜΤ και ενεργοποιείται το μονοπάτι ΤΟΡ-β να συμβάλει στην EMT. Η έκφραση του SOX4 προκλήθηκε με ΤΟΡ-β και ήταν απαραίτητο για τον ΤΟΡ-β επαγόμενη EMT. Αυτά τα ευρήματα δείχνουν ότι η SOX4 παίζει σημαντικό ρόλο στην εξέλιξη του καρκίνου του μαστού, με τη μεθόδευση EMT [42]. Αυτές οι μελέτες μπορεί να ευθύνεται εν μέρει για τη σύνδεση των υπερέκφραση των πυρηνικών SOX4 με εισβολή και μετάσταση όγκων.

Ακριβής πρόβλεψη του κινδύνου επανεμφάνισης θα βοηθούσε στην ελαχιστοποίηση των δυσμενών επιπτώσεων της GC και μεγιστοποίηση του θεραπευτικού αποτελέσματος της θεραπείας. Από τις διαθέσιμες προγνωστικούς δείκτες για GC, το στάδιο AJCC είναι το πιο σημαντικό. Ωστόσο, η πρόγνωση ποικίλλει ακόμα και μεταξύ των ασθενών στο στάδιο ίδια ασθένεια? ως εκ τούτου, οι εναλλακτικές προγνωστικοί δείκτες επιδιώκεται. Λίγες μελέτες έχουν διερευνήσει την προγνωστική αξία των πρωτεϊνών SOX4. Jafarnejad et al. έδειξαν ότι σε ασθενείς με μελάνωμα, μια ισχυρή συσχέτιση υπήρχε μεταξύ μειωμένη έκφραση SOX4 και κακή επιβίωση των ασθενών [33]. Παρομοίως, Kim et al. έδειξε ότι η υπερέκφραση της πρωτεΐνης SOX4 σε ασθενείς με ηπατοκυτταρικό καρκίνωμα συσχετίσθηκε με βελτιωμένη έκβαση των ασθενών [32]. Επιπλέον, Aaboe et al. έδειξε ότι υπήρχε μια ισχυρή συσχέτιση μεταξύ της αυξημένης έκφρασης SOX4 και αυξημένη επιβίωση των ασθενών στις περιπτώσεις καρκίνου της ουροδόχου κύστης [20]. Εμείς δεν βρήκε δημοσιευμένες εκθέσεις συζητούν την προγνωστική σημασία της SOX4 στην ανθρώπινη GC. Τα αποτελέσματα αυτής της μελέτης έδειξαν ότι η πυρηνική SOX4 υπερέκφραση ήταν αντιστρόφως ανάλογη με την επιβίωση των ασθενών? Το εύρημα αυτό αντικρούεται τα προηγούμενα αναφερθεί θετικές συσχετίσεις. Η μελέτη μας ήταν η πρώτη που δείχνει ότι η υπερέκφραση της πυρηνικής SOX4 μπορεί να προβλέψει φτωχότερα αποτελέσματα για τους ασθενείς με GC. Η υπερέκφραση των πυρηνικών SOX4 φαίνεται να είναι ένας χρήσιμος δείκτης για την πρόβλεψη των αποτελεσμάτων σε ασθενείς με GC που έλαβαν χειρουργική εκτομή του όγκου. Έτσι, οι ασθενείς με GC που εμφανίζει υπερέκφραση της πυρηνικής SOX4 θα πρέπει να παρακολουθούνται προσεκτικά. Επειδή η ομάδα μας ασθενή ήταν μικρή, μελλοντικές μελέτες θα πρέπει να περιλαμβάνει μια μεγαλύτερη ομάδα ασθενών GC για τη διαλεύκανση της προγνωστικής σημασίας της πυρηνικής SOX4 σε αυτή τη νόσο.

Εν ολίγοις, αυτή η μελέτη παρείχε στοιχεία για την κλινική σημασία των υπερεκφράζεται SOX4 σε ασθενείς με GC. Τα ευρήματά μας δείχνουν ότι η στόχευση SOX4 μπορεί να παρέχει μια νέα θεραπευτική τροπικότητα για τη θεραπεία της GC.

Ευχαριστίες

Οι συγγραφείς θα ήθελα να ευχαριστήσω Jung-Chin Hsu για την εξαιρετική τεχνική βοήθεια της.