Αφηρημένο

Ιστορικό

Οι συνέπειες των ελαττωματικών ομόλογου ανασυνδυασμού (HR) δεν είναι κατανοητή στο σποραδικό καρκίνο των ωοθηκών, ούτε και έχουν τη δυνατότητα ρόλος των πρωτεϊνών HR εκτός από BRCA1 και BRCA2 έχουν καθοριστεί με σαφήνεια. Ωστόσο, είναι σαφές ότι οι ατέλειες σε HR και άλλων οδών επιδιόρθωσης DNA είναι σημαντικές για την αποτελεσματικότητα των σημερινών θεραπειών. Υποθέτουμε ότι ένα υποσύνολο των σποραδικών καρκινωμάτων ωοθηκών ενδέχεται να φέρουν ανωμαλίες σε μονοπάτια HR, και ότι ένα προφίλ BRCAness (ελαττώματα HR ή άλλες οδούς επιδιόρθωσης του DNA) θα μπορούσε να επηρεάσει το ποσοστό απόκρισης και την επιβίωση μετά από αγωγή με φάρμακα λευκόχρυσου. Κλινική διαθεσιμότητα ενός προφίλ BRCAness σε ασθενείς ή /και οι όγκοι θα πρέπει να βελτιώσει τα αποτελέσματα της θεραπείας.

Στόχος

Για να ορίσετε το προφίλ BRCAness σποραδικών καρκινώματος των ωοθηκών και να καθορίσει αν BRCA1, PARP, FANCD2, ΡΤΕΝ, H2AX, ATM, και πρωτεΐνη Ρ53 έκφραση συσχετίζεται με ανταπόκριση στη θεραπεία, υποτροπή της νόσου, και επιβίωσης χωρίς υποτροπή.

Υλικά και Μέθοδοι

ανάλυση πρωτεΐνη μικροσυστοιχιών ιστού καρκίνου των ωοθηκών χρησιμοποιήθηκε για τον καθορισμό της πρωτεΐνης τα επίπεδα έκφρασης για πρωτεΐνες ορίζονται επιδιόρθωση του DNA. Συσχέτιση με κλινικές και παθολογικές παραμέτρους σε 186 ασθενείς με προχωρημένο στάδιο ΙΙΙ-IV και βαθμού 3 καρκίνο των ωοθηκών αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας πλατεία Chi, τη μέθοδο Kaplan-Meier, Cox μοντέλο αναλογικών κινδύνων, και αθροιστική συνάρτηση συχνότητας.

Αποτελέσματα

Υψηλή PARP, FANCD2 και BRCA1 εκφράσεις συσχετίζονταν σημαντικά με το άλλο? Ωστόσο, η αυξημένη έκφραση p53 συνδέθηκε μόνο με την υψηλή PARP και FANCD2. Από όλους τους ασθενείς, 9% υποτροπιάσει εντός του πρώτου έτους. Μεταξύ επαναλαμβανόμενες ασθενείς νωρίς, 41% είχαν υψηλά επίπεδα της PARP, FANCD2 και Ρ53, σε σύγκριση με 19,5% των ασθενών, χωρίς πρώιμη υποτροπή (p = 0.04). Οι γυναίκες με υψηλά επίπεδα PARP, FANCD2 ή /και Ρ53 είχε την πρώτη χρονιά συχνότητα αθροιστική καρκίνου του 17% σε σύγκριση με το 7% για τις άλλες ομάδες (P = 0,03).

Συμπεράσματα

Οι ασθενείς με ταυτόχρονα υψηλά επίπεδα PARP, FANCD2 και η έκφραση της πρωτεΐνης P53 διατρέχουν αυξημένο κίνδυνο πρόωρης επανάληψης ωοθηκών και αντίσταση από λευκόχρυσο

Παράθεση:. Wysham WZ, Mhawech-Fauceglia P, Li H, Hays L, συριακά S, Skrepnik Τ, et al. (2012) BRCAness Προφίλ του Σποραδικές καρκίνο των ωοθηκών Προβλέπει Νοσημάτων υποτροπή. PLoS ONE 7 (1): e30042. doi: 10.1371 /journal.pone.0030042

Επιμέλεια: Jun Li, η Sun Yat-sen University Medical School, Κίνα

Ελήφθη: 9η Μάη 2011? Αποδεκτές: 8 Δεκεμβρίου του 2011? Δημοσιεύθηκε: 11 του Ιανουαρίου, 2012

Copyright: © 2012 Wysham et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτή η μελέτη υποστηρίχθηκε από την Sherie Hildreth καρκίνου των ωοθηκών (SHOC) του Ιδρύματος. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

ο καρκίνος των ωοθηκών είναι η δεύτερη πιο συχνή γυναικολογική κακοήθεια και η πιο κοινή αιτία θανάτου μεταξύ των γυναικών με γυναικολογικό καρκίνο. Οι περίπου 21.000 περιπτώσεις καρκίνου των ωοθηκών διαγιγνώσκονται ετησίως και περίπου 14.000 θάνατοι από καρκίνο των ωοθηκών συμβαίνουν κάθε χρόνο [1]. Παρά το γεγονός ότι έχουν σημαντικές βελτιώσεις έχουν γίνει τις τελευταίες δεκαετίες για την επέκταση μέση διάρκεια ζωής μετά τη διάγνωση του καρκίνου των ωοθηκών, λιγότερο από το 30% των ασθενών μπορεί να θεραπευτεί με τη βέλτιστη χειρουργική cytoreduction και πρότυπο επικουρική χημειοθεραπεία με έναν παράγοντα που περιέχει λευκόχρυσο, και μακροχρόνια επιβίωση έχει δεν βελτίωσε [2].

οι ασθενείς με μεταλλάξεις BRCA1 ή BRCA2, τα γονίδια που εμπλέκονται στην επιδιόρθωση του δίκλωνου DNA διαλείμματα με ομόλογο ανασυνδυασμό (HR), έχουν αυξημένη ευαισθησία σε χημειοθεραπεία πλατίνα, βελτιώνοντας έτσι τη συνολική επιβίωση τους έκβαση [3] – [5]. Επιπλέον, τα κύτταρα με προϋπάρχουσες ανωμαλίες στο μονοπάτι HR (BRCA 1 ή BRCA 2 μετάλλαξη) μπορεί να στοχεύεται από ένα δεύτερο χτύπημα με τη μορφή μια αναστολή της επιδιόρθωσης βάσης εκτομή (BER) μονοπάτι που οδηγεί σε κυτταρικό θάνατο. Αυτή η έννοια της συνθετικής θνησιμότητας – ο συνδυασμός των δύο γενετικές αλλαγές, οι οποίες από μόνες τους είναι μη-θανατηφόρα, αλλά μαζί να οδηγήσει σε θανατηφόρο φαινότυπο – οδήγησε σε ενδιαφέρον σε αναστολείς των οδών BER. Ένας τέτοιος αναστολέας BER είναι ο αναστολέας πολυ-ΑϋΡ ριβόζης πολυμεράσης (PARP), γεγονός που καθιστά ανεπαρκή κύτταρα HR ιδιαίτερα ευαίσθητη σε ζημία του DNA που προκαλείται από χημειοθεραπεία [6] – [8]. Ενώ τα φυσιολογικά κύτταρα μπορεί να επισκευάσει τη ζημιά και να επιβιώσει, τα BRCA-ανεπαρκή κύτταρα δεν μπορούν να ενεργοποιήσουν το σύστημα HR και ως εκ τούτου να πεθάνουν (6). Οι αναστολείς PARP έχουν δείξει ελπιδοφόρα αποτελέσματα σε ασθενείς με BRCA1- ή BRCA2-θετικό καρκίνο των ωοθηκών [9] – [11].

Ενώ μόνο το 10-15% των γυναικών με καρκίνο των ωοθηκών έχουν βλαστικής σειράς BRCA1 ή BRCA2 μεταλλάξεις, οι πρόσφατες στοιχεία δείχνουν ότι η σποραδική καρκίνοι των ωοθηκών μπορεί λιμάνι αποκτήσει γενετικών και επιγενετικών ελαττώματα BRCA και σε άλλα γονίδια επιδιόρθωσης του DNA και πρωτεϊνών, όπως PTEN, RAD51, και Fanconi αναιμία (FA) γονίδια [7], που μπορεί να συμβάλει στην «προφίλ BRCAness» . Δεδομένου του ρόλου που μοιράστηκε BRCA1 και BRCA2 έχουν με άλλα γονίδια επιδιόρθωσης του DNA, ελαττώματα σε αυτές τις άλλες πρωτεΐνες επιδιόρθωσης DNA και μόνο θα μπορούσε να επηρεάσει την απόκριση στη θεραπεία, τα ποσοστά υποτροπής, και τη συνολική επιβίωση και την αύξηση της ευαισθησίας σε αναστολείς PARP. Η πρόκληση είναι να καθορίσει τα προφίλ BRCAness στο σποραδικό καρκίνο των ωοθηκών και συσχετίζονται αυτό με την κλινική έκβαση.

Έτσι, ο στόχος της παρούσας μελέτης είναι να προσδιορίσει το προφίλ BRCAness της σποραδικό καρκίνο των ωοθηκών. Συγκεκριμένα έχουμε ως στόχο να προσδιοριστεί αν η έκφραση των πρωτεϊνών επιδιόρθωσης του DNA, συμπεριλαμβανομένων των PARP, FANCD2, BRCA1, ΡΤΕΝ, Η2ΑΧ, ΑΤΜ, καθώς και ρ53, συσχετίζεται με την απόκριση στη θεραπεία, το ποσοστό υποτροπής, και την επιβίωση στον καρκίνο των ωοθηκών.

Υλικά και Μέθοδοι

Ηθική Δήλωση

Όλοι οι ασθενείς υποβλήθηκαν σταδιοποίηση του καρκίνου των ωοθηκών ή debulking χειρουργική επέμβαση στο Roswell Park Cancer Institute στο Μπάφαλο της Νέας Υόρκης. Όλα τα δείγματα παθολογία συλλέχθηκαν και αναθεωρούνται στο θεσμικό μας όργανο, και οι όγκοι ταξινομούνται σύμφωνα με τα κριτήρια του ΠΟΥ [12]. Τα ιατρικά αρχεία των ασθενών αναδρομικά στο πλαίσιο εγκεκριμένου πρωτοκόλλου Roswell Park Cancer Institute Institutional Review Board που απαιτεί γραπτή συγκατάθεση του ασθενούς. Η αναθεώρηση περιλάμβανε έκβαση και ενδονοσοκομειακή θεραπεία, συμπεριλαμβανομένης της χειρουργικής επέμβασης και χημειοθεραπείας. Η συνολική επιβίωση και χρόνο έως την εξέλιξη προσδιορίστηκαν, κάθε μετρούμενο από τη στιγμή της διάγνωσης (κατά την αρχική χειρουργική επέμβαση). Πρόοδος ορίστηκε ως αντικειμενική ένδειξη υποτροπής. Η διάρκεια της συνολικής επιβίωσης ήταν το διάστημα μεταξύ διάγνωσης και θανάτου. χρόνος παρακολούθησης ήταν το διάστημα μεταξύ διάγνωσης και τελευταία επαφή (θάνατος ή η τελευταία παρακολούθηση). Τα δεδομένα περικόπηκαν κατά την τελευταία παρακολούθησης για τους ασθενείς χωρίς ενδείξεις υποτροπής, εξέλιξης ή του θανάτου.

Αντισώματα

χρησιμοποιήθηκαν έξι εμπορικά διαθέσιμα πρωτογενή μονοκλωνικά αντισώματα, ειδικά για ΑΤΜ (Abcam, Boston, MA), BRCA1 (Biocare εργαστήριο, Concord, CA), FANCD2 (Epitomics, San Francisco, CA), PARP (Abcam), ρ53 (Novacastra, Lica Microsystems, Buffalo Grove, IL), PTEN (Millipore, Billerica, ΜΑ ), και ένα πολυκλωνικό αντίσωμα για Η2ΑΧ (Bethyl Laboratories, Montgomery, ΤΧ) (Πίνακας 1). Η ανίχνευση πραγματοποιήθηκε με τη χρήση του συμπλόκου μέθοδο αβιδίνης-βιοτίνης-υπεροξειδάσης (LASB-kit, DakoCytomation, Glostrup, Denmark).

Η

Tissue μικροσυστοιχιών Παρασκευή

ιστούς παραφίνης από 202 ασθενείς με καρκίνο των ωοθηκών χρησιμοποιήθηκαν για να κατασκευαστεί μικροσυστοιχίες ιστού όπως περιγράφηκε προηγουμένως από Kononen et al. [13]. Εν συντομία, επιλέγοντας μετά προσεκτικά το μορφολογικά εκπρόσωπο περιοχή από το αιματοξυλίνη-ηωσίνη (ΗΕ) ενότητα, 0.6 πυρήνες mm αποκόπηκαν από τις επιμέρους εμπεδωθεί με παραφίνη μπλοκ (μπλοκ δότη), και μεταφέρεται στο δέκτη παραφίνη-ενσωματωμένες μπλοκ (μπλοκ δέκτη). Για να ξεπεραστεί η ετερογένεια του όγκου, πυρήνας βιοψίες από τρεις διαφορετικές περιοχές κάθε όγκου. Ένα τμήμα χρωματίστηκε με Η &? Ε να επιβεβαιωθεί η παρουσία του όγκου από μικροσκοπία φωτός

Οι τομές επωάσθηκαν με αντισώματα προς ΑΤΜ, BRCA1, FANCD2, ΡΤΕΝ, Η2ΑΧ, PARP, και ρ53 (Πίνακας 1).. Η βιοτίνη-free HRP επισημασμένο με ένζυμο πολυμερές του Envision Plus Σύστημα Ανίχνευσης (DakoCytomation) χρησιμοποιήθηκε ως δευτερεύον αντιδραστήριο. Το συγκρότημα διαμινοβενζιδίνη χρησιμοποιήθηκε ως χρωμογόνο. Ως θετικός έλεγχος, ενδομητριοειδές αδενοκαρκίνωμα του ενδομητρίου χρησιμοποιήθηκε για ΡΤΕΝ, ωοθηκών ορώδες καρκίνωμα για ρ53, καρκίνωμα μαστού για PARP, ΑΤΜ και BRCA1, η κανονική αμυγδαλές για FANCD2, και το καρκίνωμα πλακωδών κυττάρων για Η2ΑΧ. Για αρνητικούς ελέγχους, φυσιολογικό ορό κατσίκας αντί του πρωτογενούς αντισώματος. Η έκταση της ανοσοχημικής αντιδραστικότητας βαθμολογήθηκε με βάση την ένταση ως εξής: 0 (φόντο), 1+ (φως), 2 + (μέτρια), 3+ (ισχυρή). Αρνητικές πλάκες ελέγχου παραλείποντας το πρωτογενές αντίσωμα συμπεριλήφθηκαν σε όλες τις δοκιμασίες

Στατιστικές Αναλύσεις

Οι στατιστικές αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν με τη χρήση του στατιστικού λογισμικού SAS. (Έκδοση 9.2? SAS Institute Inc, Cary, NC). Οι επτά πρωτεΐνες επιδιόρθωσης του DNA (προφίλ BRCAness) μετρήθηκαν στην βασική γραμμή και ομαδοποιήθηκαν ως αρνητικό (όχι ή ελαφρά χρώση) και θετικά (μέτρια ή έντονη χρώση) με βάση την χρώση ένταση. Οι συσχετίσεις μεταξύ αρχική κατάσταση του καρκίνου (βαθμός, το στάδιο, ο τύπος ιστολογίας, και η παρουσία του υπολειμματικού όγκου) και το προφίλ BRCAness και τις ενώσεις μεταξύ των p53, PARP, FANCD2 και BRCA 1 εξετάστηκαν χρησιμοποιώντας την τετραγωνική Chi και δοκιμές τάση Cochran Armitage.

Όπου είναι δυνατόν, εξετάστηκε χρόνος από τη διάγνωση μέχρι την εξέλιξη /υποτροπή εντός των πρώτων 3 ετών. Οι ασθενείς που έχασαν τη ζωή τους μέσα σε 3 χρόνια, έχουν λογοκριθεί κατά τη στιγμή του θανάτου, και οι ασθενείς οι οποίοι είχαν υποτροπή μετά από 3 χρόνια ή που δεν είχαν υποτροπή επίσης λογοκρισία στα 3 έτη. Η συσχέτιση του κάθε ένταση χρώσης των πρωτεϊνών και σύμπτωση πολλαπλών υψηλά επίπεδα πρωτεϊνών με 3-χρόνος επιβίωσης χωρίς υποτροπή αξιολογήθηκαν χρησιμοποιώντας την μέθοδο Kaplan-Meier (KM). Τα αποτελέσματα από τη μέθοδο KM στη συνέχεια επαληθεύονται από αθροιστικά ποσοστά επίπτωσης με την περίπτωση ορίζεται ως υποτροπή και ανταγωνιστικών κινδύνων ορίζονται ως μη επανεμφάνιση του θανάτου χρησιμοποιώντας τη λειτουργία αθροιστική συχνότητα [14]. αναλογία ρυθμίζεται κίνδυνο την ηλικία και τον καρκίνο καθεστώς των 3 ετών υποτροπή υπολογίστηκε χρησιμοποιώντας το μοντέλο αναλογικών κινδύνων Cox. Σύνδεσης μεταξύ σύμπτωση πολλαπλών υψηλά επίπεδα πρωτεϊνών και την κατάσταση επανάληψης στους 6 μηνών και 1 έτους ήταν επίσης διερευνηθεί. Όλες οι αναφερόμενες τιμές p είναι διπλής όψης, και μια τιμή p & lt?. 0.05 θεωρήθηκε στατιστικά σημαντική

Αποτελέσματα

Τα χαρακτηριστικά των ασθενών κατά την έναρξη συνοψίζονται στον Πίνακα 2. Συνολικά 186 202 ασθενείς μελετήθηκαν. Η μέση ηλικία του πληθυσμού της μελέτης ήταν 62 έτη (εύρος 33 – 89) και η διάμεση διάρκεια παρακολούθησης για υποτροπή ήταν 22 μήνες (εύρος 20 ημέρες έως 3 έτη). Όπως ήταν αναμενόμενο, η πλειοψηφία των ασθενών είχαν ελάχιστα διαφοροποιείται, βαθμού 3 καρκίνους (161/186, 86,6%), το στάδιο ΙΙΙ ή IV της νόσου (174/186, 93,5%), και ορώδες ιστολογία (164/186, 88,2%). Σε χειρουργική επέμβαση 59 ασθενείς δεν είχαν καμία υπολειμματική νόσο, ενώ 125 ασθενείς είχαν τουλάχιστον ελάχιστης υπολειμματικής νόσου. Όλοι οι ασθενείς έλαβαν με βάση την πλατίνα χημειοθεραπεία πρώτης γραμμής. Η μέση εκτιμώμενη συνολική επιβίωση για όλους τους ασθενείς ήταν 40,7 μήνες (95% CI, 36,8 έως 45,0 μήνες). Η επιβίωση μεταξύ των ασθενών με απουσία του υπολειμματικού όγκου (58,1%) και η παρουσία του υπολειμματικού όγκου (59,7%) ήταν παρόμοια.

Η

Η έκφραση των πρωτεϊνών επιδιόρθωσης του DNA σε επιθηλιακό καρκίνο των ωοθηκών

Η πρωτεΐνη έκφραση του ΑΤΜ, FANCD2, PARP, ΡΤΕΝ, Η2ΑΧ, BRCA1 και ρ53 σε επιθηλιακά καρκινικά δείγματα των ωοθηκών ερευνήθηκε με ανοσοκυτταροχημεία και ενώσεις τους με υποτροπή του καρκίνου των ωοθηκών σε 3 χρόνια συνοψίζονται στον πίνακα 3. PARP ήταν θετική σε 111 (60%) των περιπτώσεων, FANCD2 ήταν θετική σε 68 περιπτώσεις (39%), Η2ΑΧ ήταν θετική σε 59% και ρ53 σε 55% των περιπτώσεων. Αντιθέτως, οι περισσότεροι όγκοι ήταν αρνητικά για BRCA1 (87%), ΡΤΕΝ (σε 89%) και ATM (92%). Αν και δεν είναι στατιστικά σημαντική, KM περίπου 3 χρόνια χωρίς υποτροπή επιβίωση για ασθενείς με υψηλό PARP (56,5% έναντι 67,5%) και υψηλό FANCD2 (55,5% έναντι 66,9%) ήταν περισσότερο από 10% χαμηλότερα από τα χαμηλά τους ομολόγους χρώση τους. Οι ασθενείς με υψηλά επίπεδα της PARP ή /και FANCD2 ήταν πιο πιθανό να έχουν επίσης υψηλή ρ53, 66% και στις δύο θετικά, το 53% σε είτε θετικά, και 43% τόσο αρνητικά αποτελέσματα έχουν θετικά p53 (p για τάση = 0,01, Σχήμα 1). Συνολικά, η έκφραση είτε FANCD2 ή PARP παρατηρήθηκε στο 35% των δειγμάτων. Συν-έκφραση της PARP και FANCD2 αποδείχθηκε σε 56 από 173 δείγματα (32%). Υψηλή έκφραση του PARP, FANCD2 και BRCA1 συσχετίζονταν σημαντικά με το άλλο, ενώ καμία συσχέτιση μεταξύ BRCA1 και ρ53 βρέθηκε (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται).

σύνδεσης μεταξύ PARP, FANCD2, και Ρ53. Ασθενείς με θετική PARP ή θετικά FANCD2 είχαν περισσότερες πιθανότητες να έχουν θετική P53. Ασθενείς θετικοί τόσο για PARP και FANCD2 ήταν στατιστικά πιο πιθανό να λεκιάσουν θετικά για Ρ53.

Η

Συσχέτιση FANCD2 και Έκφρασης PARP με την κλινική έκβαση

Οι ασθενείς χωρίστηκαν σε πέντε αμοιβαία αποκλειστικές ομάδες με βάση την έκφρασή τους του PARP, FANCD2, και ρ53 (Σχήμα 2). Δείγματα χρώση αρνητική και για τις τρεις πρωτεΐνες σε 31 ασθενείς (18%), θετικά για ρ53 μόνη της σε 51 ασθενείς (30%), και θετικά για FANCD2 και PARP μόνο σε 19 ασθενείς (11%). Πάνω από το 40% των ασθενών με θετική PARP ή /και FANCD2 είχε πρωτεΐνη p53 υπερέκφραση, συμπεριλαμβανομένων 37 (22%) με υπερέκφραση των 3 πρωτεϊνών, και 32 (19%) με την ρ53 και PARP ή FANCD2 υπερέκφραση. KM εκτιμάται καμπύλες επιβίωσης χωρίς υποτροπή 3-χρόνου για αυτές τις ομάδες αμοιβαία αποκλειόμενα της ρ53, PARP και FANCD2 εμφανίζονται στο Σχήμα 3, και η επίδραση του προφίλ BRCAness επί χωρίς υποτροπή επιβίωση δείχνεται στον Πίνακα 4. Οι διαφορές στην επιβίωση των περισσότερων από παρατηρήθηκε 10% στους 12 μήνες και σχεδόν το 20% στους 24 μήνες μεταξύ της ομάδας με θετική χρώση για όλες τις τρεις πρωτεΐνες (ρ53, PARP και FANCD2) και η ομάδα με τα τρία αρνητική χρώση. Η επιβίωση κινήθηκαν προς βραχύτερη σε όλες τις τρεις θετικές ομάδες σε σύγκριση με τις άλλες ομάδες, αν και αυτό δεν ήταν στατιστικά σημαντικό σε αυτό το μικρό μέγεθος του δείγματος (Σχήμα 3Α). Έχουμε περαιτέρω αναμενόμενη καμπύλες επιβίωσης 3 πενταετής υποτροπή άνευ μεταξύ των ασθενών με υψηλά επίπεδα και των τριών πρωτεϊνών (ρ53, PARP, FANCD2) και «άλλες» ασθενείς όπως φαίνεται στο Σχήμα 3Β. Ασθενείς με όλα τα υψηλά επίπεδα ήταν περισσότερο πιθανό να έχουν νωρίτερα υποτροπή εντός 3 ετών σε σχέση με όλους τους άλλους ασθενείς (p = 0.03). Στους 12 μήνες μετά τη διάγνωση, η επιβίωση χωρίς υποτροπή ήταν 81% για τους ασθενείς με όλα τα θετικά επίπεδα της PARP, FANCD2 και ρ53 ενώ τα υπόλοιπα ασθενείς είχαν ποσοστό επιβίωσης χωρίς υποτροπή του 92%. Στους 18 μήνες, η ελεύθερη υποτροπής επιβίωση ήταν 64% για την ομάδα με όλες τις τρεις θετικές πρωτεΐνες και 81% για όλους τους άλλους, και το αθροιστικό ποσοστό υποτροπής επίπτωση ήταν 16,5% για τους ασθενείς με όλα τα υψηλά επίπεδα της PARP, FANCD2 και p53 σε σύγκριση με 31,8% για τους άλλους ασθενείς. Ασθενείς με ταυτόχρονη υψηλά επίπεδα PARP, FANCD2 και ρ53 είχαν διπλάσιες πιθανότητες να έχουν υποτροπή εντός 3 ετών, μετά την προσαρμογή ως προς την ηλικία και την κατάσταση του καρκίνου κατά την στιγμή της διάγνωσης (Πίνακας 4). Η πιθανή επίπτωση των εναπομενόντων όγκων και άλλων βασική κλινικούς παράγοντες για την πρόωρη υποτροπή λογιστικοποιούνται με πολυπαραγοντική ανάλυση. Αξίζει να σημειωθεί ότι η παρουσία υπολειμματικού όγκου δεν συσχετίστηκε με υποτροπή της νόσου. Ωστόσο, οι ασθενείς με υπολειπόμενη όγκων μετά την αρχική χειρουργική επέμβαση έτειναν να έχουν θετική PARP, FANCD2, και έκφραση Ρ53 σε σύγκριση με την ομάδα χωρίς υπολειμματικό όγκου (26% έναντι 14%, Ρ = 0,07).

Διανομή πέντε αλληλοαναιρούνται ομάδες ρ53, PARP, και FANCD2. 37 ασθενείς (22%) ήταν θετικά για τις τρεις από τις πρωτεΐνες.

Η

Kaplan-Meier εκτιμάται καμπύλες επιβίωσης χωρίς υποτροπή 3 ετών. Α: Δεν παρατηρήθηκε διαφορά στην επιβίωση χωρίς υποτροπή όταν καθένα από τα 5 αλληλοαποκλειόμενες ομάδες με έκφραση ΡΑΚΡ, FANCD2, και Ρ53 εξετάστηκαν ανεξάρτητα. Β: Ασθενείς θετικοί για τις τρεις PARP, FANCD2, και Ρ53 είχαν χαμηλότερη επιβίωση χωρίς υποτροπή σε σύγκριση με ασθενείς που δεν είναι θετικό και για τις τρεις

Η

Σε αυτή τη μελέτη, ορίσαμε ανθεκτικά πλατίνα ασθένεια όπως. νόσος επαναλαμβανόμενες εντός 12 μηνών από την ολοκλήρωση της θεραπείας πρωτοβάθμια, ενώ αναγνωρίζει ότι η πιο τυπικός ορισμός θα σηματοδοτήσει την αντίσταση λευκόχρυσου ως υποτροπή μετά από 6 μήνες. Ως εκ τούτου, το Σχήμα 4 διερευνά την ταυτόχρονη έκφραση της PARP, FANCD2 και Ρ53 σε ασθενείς με και χωρίς 6 μηνών και 12 μηνών επανάληψη. Μεταξύ των 4 ασθενών οι οποίοι είχαν υποτροπή εντός 6 μηνών, 2 (50%) είχαν και τα 3 θετικά, ενώ 34 από 162 (21%) χωρίς επανεμφάνιση είχε και τα 3 θετικά επίπεδα. Μεταξύ των 17 ασθενών που υποτροπίασαν εντός του πρώτου έτους της διάγνωσης, περίπου 41% (7/17) είχαν όγκους με υψηλά επίπεδα όλων των 3 πρωτεϊνών, σε σύγκριση με 19% (29/149) και με τα 3 θετικά σε καμία ομάδα επανάληψης (Ρ = 0.04). Ως εκ τούτου, η πρώιμη υποτροπή, η οποία είναι αντιπροσωπευτική των ανθεκτικών πλατίνα νόσου, φαίνεται να χαρακτηρίζεται από την ταυτόχρονη υψηλά επίπεδα PARP, FANCD2 και p53.

Σύνδεσης μεταξύ θετικών Ρ53, PARP, και FANCD2 σε ασθενείς με και χωρίς πρώιμη υποτροπή . Οι ασθενείς με πρώιμη υποτροπή, τόσο σε 6 και 12 μήνες μετά τη διάγνωση ήταν πολύ πιο πιθανό να έχουν υψηλά επίπεδα όλων των 3 πρωτεϊνών (50% στους 6 μήνες και το 41,2% στους 12 μήνες).

Η

Συζήτηση

Πρόσφατα, ο ρόλος των γονιδίων επιδιόρθωσης του DNA και τις πρωτεΐνες στον καρκίνο των ωοθηκών, η έννοια της BRCAness καρκίνων των ωοθηκών, καθώς επίσης και ο μηχανισμός των συνθετικών θνησιμότητας έχει αναδειχθεί ως απαραίτητα για την κατανόηση της παθογένεσης ωοθηκών και οδοί προς νέες θεραπείες [7], [8]. Καθώς το 20% των υψηλής ποιότητας ορώδες σποραδικά καρκινώματα των ωοθηκών έχουν BRCA1 και BRCA2 μεταλλάξεις, ο ρόλος του HR στον καρκίνο των ωοθηκών έχει καθιερωθεί [15], [16]. Ωστόσο, πολλές κληρονομικές και σποραδικές καρκίνους των ωοθηκών δεν έχουν μεταλλάξεις BRCA ή αλλοιωμένη έκφραση γονιδίων BRCA και έτσι αιτιολογημένη ότι η απώλεια άλλων πρωτεϊνών HR μπορεί να συνεισφέρει στον καρκίνο των ωοθηκών. Στην πραγματικότητα, επιγενετική αποσιώπηση FANCF μέσω υποκινητή μεθυλίωσης [17] και μειωμένα επίπεδα FANCD2 [18] έχουν προηγουμένως ανιχνευθεί σε καρκίνο των ωοθηκών. Εμείς αιτιολογημένη περαιτέρω ότι η υπερέκφραση διαφόρων πρωτεϊνών HR μπορεί να ευθύνεται για αποκτήθηκε πλατίνα-αντίσταση και ως εκ τούτου μπορεί να χρησιμοποιηθεί ως μια πιθανή οθόνη για (i) αναγνώριση ασθενών που διατρέχουν υψηλότερο κίνδυνο για υποτροπή και (ii) τον εντοπισμό νέων θεραπευτικών στόχων. Για τη μέτρηση της BRCAness (δηλαδή το HR) προφίλ του σποραδικούς καρκίνους των ωοθηκών, χρησιμοποιήσαμε ανοσοκυτταροχημεία (ICH) να εξετάσει πρωτεΐνη έκφραση πρωτεϊνών απόκριση βλάβης DNA FANCD2, BRCA1, PARP, Η2ΑΧ και ΑΤΜ, καθώς και ΡΤΕΝ και ρ53, ογκοκατασταλτικά γονίδια τα οποία έχουν επίσης μια λειτουργία στη διατήρηση της γονιδιωματικής σταθερότητας με τη συμμετοχή στην επιδιόρθωση του DNA [19] – [25]. σε ένα πάνελ των σποραδικών καρκινωμάτων των ωοθηκών

Για τις γνώσεις μας, δεν υπήρξε καμία προηγούμενη συστηματική ανάλυση των ΑΤΜ και έκφραση Η2ΑΧ σε καρκίνους των ωοθηκών. Εδώ βρήκαμε ότι οι πρωτεΐνες που εκφράζονται σε 46% και 59% των δειγμάτων μας, αντίστοιχα, που μπορεί να δείχνουν δυνητικά αντισταθμιστικά έκφρασή τους σε ανεπαρκή κύτταρα ανθρώπινου δυναμικού.

Στήριξη του ρόλου των p53 και ΡΤΕΝ ως καταστολείς των όγκων, η πλειοψηφία του καρκίνωμα ωοθήκης δοκιμάστηκε ήταν θετικά για ρ53 (55%), ως το αντίσωμα ανιχνεύει τόσο άγριου τύπου και μεταλλαγμένες μορφές της ρ53, και αρνητικές για έκφραση ΡΤΕΝ (89%). Αυτά τα αποτελέσματα είναι παρόμοια με άλλες μελέτες με προχωρημένους καρκίνους [21] – [22].

Είναι ενδιαφέρον, βρήκαμε ότι 86,7% των περιπτώσεων είχε αρνητικές ICH BRCA1. Οι περισσότερες από τις προηγούμενες μελέτες σχετικά με την ανεπάρκεια BRCA1 εις σποραδικό καρκίνο των ωοθηκών έχουν επικεντρωθεί στην ανάλυση μεταλλάξεων, μελέτες μεθυλίωση, και γονιδιακή έκφραση, με λίγες μόνο ανοσοκυτταροχημικές μελέτες. Μια πρόσφατη έκθεση από Skytte et al. αποκάλυψε αρνητική BRCA ICH μόνο το 20% των καρκίνων των ωοθηκών [26]. Αυτές οι διαφορές μπορούν να εξηγηθούν από τη χρήση διαφορετικών αντισωμάτων για την ανίχνευση της πρωτεΐνης BRCA [27]. Στην πραγματικότητα, σε μια συγκριτική μελέτη των 84 περιπτώσεων με σποραδικό καρκίνο του μαστού με τέσσερα διαφορετικά αντισώματα αντι-BRCA, Al-Mulla et al. ανιχνευθεί απώλεια BRCA1 πρωτεΐνη έκφραση σε 83% των περιπτώσεων που χρησιμοποιούν την ίδια BRCA αντίσωμα ΑΒ-1, έναντι του επιτόπου Ν-άκρο [28]. Στη μελέτη NCIC που συσχετίζεται έκφραση πρωτεΐνης BRCA1 με ICH με αντίστοιχα κλινικά δεδομένα, 251 δείγματα καρκίνου των ωοθηκών αναλύθηκαν με τη χρήση ενός μονοκλωνικού αντισώματος ποντικού BRCA1 (MS110, Calbiochem, Germany) και το 65% των όγκων έδειξε καμία χρώση ή πολύ ήπια χρώση [29 ]. Το αντίσωμα που χρησιμοποιείται στη μελέτη μας ήταν διαφορετική από τα αντισώματα που χρησιμοποιούνται στις προηγούμενες μελέτες. Επιπλέον, λόγω του μικρού μεγέθους του δείγματος στη μελέτη μας και ομοίως στη μελέτη NCIC, βαθμολόγησης μας ομαδοποιούνται τα αποτελέσματα χρώσης των τεσσάρων κατηγοριών σε αρνητικό (όχι ή ασθενής) και θετικά (μέτρια ή ισχυρά) με βάση την χρώση ένταση. Ως εκ τούτου, παραμένει απαραίτητη για τις μελλοντικές μελέτες για να περιγράψει με σαφήνεια τις κατευθυντήριες γραμμές για τη χρώση BRCA1 και βαθμολόγησης στις μελέτες αυτού του δείκτη. Παρ ‘όλα αυτά, η απώλεια του BRCA1 στην πλειονότητα των όγκων στη μελέτη μας σε συνδυασμό με την αυξημένη έκφραση του PARP στους περισσότερους από τους καρκίνους (που συζητούνται παρακάτω) υποδηλώνει ότι PARP αυξορρύθμιση μπορεί να είναι ένας αντισταθμιστικός μηχανισμός από τα καρκινικά κύτταρα για να αντέχουν πλατίνα-θεραπεία που προκαλείται θάνατος .

τα αποτελέσματά μας με PARP είναι επίσης συνεπής με προηγούμενες μελέτες. Βρήκαμε υψηλή έκφραση της PARP στο 60% των δειγμάτων, που είναι παρόμοια με προηγούμενες αναφορές που υποδηλώνει θετική χρώση πρωτεΐνης PARP στο 76% των καρκινωμάτων των ωοθηκών [26]. Μέτρια χρώση FANCD2 βρέθηκε στις περισσότερες (85%) του σταδίου Ι ορώδες καρκίνωμα των ωοθηκών [Πέγιοβιτς, αδημοσίευτα στοιχεία], ενώ σε αυτή τη σειρά, διαπιστώνουμε ότι το 40% των προηγμένων ορώδες καρκίνωμα υπερεκφράζουν FANCD2. Έτσι, η υπερέκφραση του FANCD2 επιπροσθέτως PARP μπορεί να αυξήσει την ικανότητα των κυττάρων για την επιδιόρθωση του DNA διπλής και μονής αλυσίδας που συμβάλλουν στην αντίσταση λευκόχρυσου.

συνέργεια μεταξύ PARP, FANCD2 και η έκφραση της πρωτεΐνης ρ53 είναι ένα από τα εντυπωσιακά αποτελέσματα στη μελέτη μας. Όγκοι με υψηλή έκφραση ΡΑΚΡ ή /και FANCD2 ήταν πιο πιθανό να δείξουν υπερέκφραση της ρ53. Το προφίλ πρωτεΐνη που προσδιορίζεται από την υψηλή έκφραση και των τριών πρωτεϊνών ΡΑΚΡ, FANCD2, και ρ53 συνδέεται με υψηλό κίνδυνο υποτροπής. Δεν ήταν μόνο ποσοστό υποτροπής σε τρία έτη διπλάσιος σε αυτή την ομάδα, αλλά είναι ιδιαίτερα αξιοσημείωτο ότι πάνω από το ήμισυ των ασθενών επαναλαμβανόμενες εντός των πρώτων 12 μηνών μετά την πρωτοβάθμια επεξεργασία (ανθεκτικό πλατίνα νόσος) είχαν σημαντικά αυξημένα έκφραση αυτών των τριών πρωτεϊνών. Αυτή η υπο-ομάδα ασθενών με ιδιαίτερα δύσκολη για τη θεραπεία του καρκίνου των ωοθηκών δεν έχει προηγουμένως προσδιοριστεί από πρωτεΐνη ή άλλα μοριακά προφίλ. Έτσι, τα αποτελέσματα αυτά επιτρέπουν τόσο την αναγνώριση των γυναικών σε υψηλότερο κίνδυνο για υποτροπή και να προτείνει πιθανούς θεραπευτικούς στόχους. Πρόσφατα, ελπιδοφόρα αποτελέσματα αναφέρθηκαν σε μια κλινική δοκιμή φάσης ΙΙ του αναστολέα PARP BSI-201 (iniparib) σε συνδυασμό με γεμσιταβίνη και καρβοπλατίνη σε 19 ασθενείς με ανθεκτική πλατίνα καρκίνο των ωοθηκών [30].

Η μελέτη μας έχει αρκετούς περιορισμούς . Κατ ‘αρχάς, αν και εξετάσαμε 186 ασθενείς, αυτό είναι ακόμα ένα περιορισμένο μέγεθος του δείγματος για όλες τις κλινικές συσχετίσεις εξετάστηκαν. Δεύτερον, οι ασθενείς οι οποίοι είναι BRCA1 και BRCA2 μετάλλαξη μεταφορείς δεν έχουν εντοπιστεί σε αυτή τη μελέτη. Οι αυστηρές κατευθυντήριες γραμμές για τις προγνωστικές μελέτες χρησιμοποιώντας ανοσοκυτταροχημεία χρησιμοποιώντας τυποποιημένα κριτήρια εξακολουθούν να αναπτύσσονται. Επίσης εξετάσαμε μόνο ένα υποσύνολο των πρωτεϊνών επιδιόρθωσης του DNA, ενώ συμπερίληψη άλλων πρωτεϊνών που εμπλέκονται στη HR όπως ATR, CHK2 ή RAD51, και λειτουργικές μελέτες του σχηματισμού RAD51 εστιών να αξιολογηθεί η ευαισθησία αυτών των κυττάρων σε PARP (και FANCD2) αναστολή είναι που βρίσκονται σε εξέλιξη.

Τέλος, ενώ πιστεύουμε ότι τα πιο σημαντικά αποτελέσματα της μελέτης αυτής είναι: (i) τον προσδιορισμό του προφίλ BRCAness που δεν σχετίζεται με BRCA1 και (ii) σύνδεση της εν λόγω triple-θετικό καρκίνο των ωοθηκών ( FANCD2 + /PARP + /Ρ53 +) με πολύ πρώιμη υποτροπή του καρκίνου των ωοθηκών και, ως εκ τούτου αντίστασης πλατίνας. Αυτοί οι ασθενείς μπορεί να ωφεληθούν από διπλή αναστολή των FANCD2 και PARP και /ή μικρών μορίων στόχευσης μεταλλαγμένο ρ53. Στην πραγματικότητα, η αναστολή της /BRCA μονοπάτι FA σε σποραδικές καρκίνους από διαφορετικές ενώσεις, συμπεριλαμβανομένων Circumin, έχει αποδειχθεί ότι ευαισθητοποιεί καρκίνων στους παράγοντες πλατίνας [31]. Έτσι, η συνδυασμένη θεραπεία των αναστολέων της οδού FA /BRCA και αναστολείς PARP ήδη σε κλινικές μελέτες μπορεί να είναι μια αποτελεσματική θεραπεία για την υποτροπιάζουσα ασθενείς που έχουν εντοπιστεί να υπερεκφράζουν FANCD2 και PARP.