Αφηρημένο

Η διαδικασία της περιτοναϊκής μετάστασης περιλαμβάνει τη διαπίδυση των ενδοκοινοτικών συναλλαγών -abdominal απολέπιση γαστρικά καρκινικά κύτταρα μέσω των mesothelial κυττάρων μονοστιβάδες? Ωστόσο, οι συναφείς μοριακοί μηχανισμοί για τη διαδικασία αυτή είναι ακόμα ασαφής. Heterocellular χάσμα-συνδετικούς ενδοκυτταρική επικοινωνία (GJIC) μεταξύ γαστρικά καρκινικά κύτταρα και mesothelial κύτταρα μπορούν να διαδραματίσουν ενεργό ρόλο κατά τη διάρκεια διαπίδυση. Σε αυτή τη μελέτη ανιχνεύθηκε η έκφραση του συνδετίνης 43 (Cx43) σε πρωτογενείς γαστρικό καρκινικούς ιστούς, ενδοκοιλιακή απολέπιση καρκινικά κύτταρα, και να συνδυαστούν μεταστατικό περιτοναϊκή ιστούς. Βρήκαμε ότι η έκφραση της Cx43 στην πρωτοβάθμια γαστρικό καρκινικούς ιστούς ήταν σημαντικά μειωμένη? οι ενδοκοιλιακές απολεπιδωμένου καρκινικά κύτταρα και να συνδυαστούν μεταστατικών περιτοναϊκή ιστούς παρουσίασαν αύξηση της έκφρασης σε σύγκριση με το πρωτογενές γαστρικό καρκινικούς ιστούς. BGC-823 και SGC-7901 ανθρώπινο γαστρικό καρκίνο κύτταρα τροποποιημένα ώστε να εκφράζουν Cx43 ή Cx43T154A (μία μεταλλαγμένη πρωτεΐνη που μόνο ζευγάρια μεσοκυττάριου αλλά δεν παρέχει καμία ενδοκυτταρική επικοινωνία) και συν-καλλιεργήθηκαν με ανθρώπινα περιτοναϊκή μεσοθηλιακών κυττάρων (HPMCs). Heterocellular GJIC και διαπίδυση μέσω HPMC μονοστιβάδες επί matrigel-επικαλυμμένες ερευνήθηκαν. Βρήκαμε ότι BGC-823 και SGC-7901 γαστρικών καρκινικών κυττάρων που εκφράζουν Cx43 σχηματίζεται λειτουργική heterocellular μεσοκυττάριου με HPMC μονοστοιβάδες εντός μιας ώρας. Μία σημαντική αύξηση σε διαπίδυση παρατηρήθηκε σε μηχανικής Cx43 κύτταρα που εκφράζουν σε σύγκριση με Cx43T154A και ομάδα ελέγχου κυττάρων, τα οποία πρότεινε ότι η παρατηρούμενη προς τα πάνω ρύθμιση του διαπίδυση σε Cx43 κύτταρα που εκφράζουν απαιτείται heterocellular GJIC. Περαιτέρω μελέτη αποκάλυψε ότι τα γαστρικά καρκινικά κύτταρα transmigrated μέσα από το μεσοκυττάριο χώρο ανάμεσα στα mesothelial κύτταρα μέσω μιας παρακυτταρικής οδού. Τα αποτελέσματά μας δείχνουν ότι η μη φυσιολογική έκφραση του Cx43 παίζει ουσιαστικό ρόλο στην περιτοναϊκή μετάσταση και ότι Cx43 μεσολάβηση heterocellular GJIC ανάμεσα γαστρικά καρκινικά κύτταρα και μεσοθηλιακών κυττάρων μπορεί να είναι ένα σημαντικό ρυθμιστικό βήμα κατά τη διάρκεια της μετάστασης. Τέλος, παρατηρήσαμε ότι η διαπίδυση της απολέπιση γαστρικών καρκινικών κυττάρων μέσω mesothelial εμπόδια είναι μια βιώσιμη οδό της μετανάστευσης παρακυτταρικής

Παράθεση:. Tang Β, Peng Zh, Yu PW, Yu G, Qian F, Zeng Dz, et al. (2013) ανώμαλη έκφραση της Cx43 συνδέεται με την περιτοναϊκή μετάσταση του καρκίνου του στομάχου και Cx43 Μεσολαβεί Gap Junction Ενισχύει Γαστρικό καρκίνο του διαπίδυση από περιτοναϊκή Mesothelium. PLoS ONE 8 (9): e74527. doi: 10.1371 /journal.pone.0074527

Επιμέλεια: Johanna M Brandner, Πανεπιστημιακό Νοσοκομείο Hamburg-Eppendorf, Γερμανία

Ελήφθη: 19 Ιαν 2013? Αποδεκτές: 6 Αυγ 2013? Δημοσιεύθηκε: 11 του Σεπτεμβρίου 2013

Copyright: © 2013 Tang et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε από επιχορήγηση Νο 30801097 και Νο 81272366 από το Εθνικό Ίδρυμα Φυσικών Επιστημών της Κίνας. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Η συχνότητα του καρκίνου του στομάχου μειώνεται, αλλά παραμένει μια σημαντική αιτία θανάτου από καρκίνο σχετίζονται με όλο τον κόσμο. Τα κυρίαρχα χαρακτηριστικά των γαστρικών καρκινικών κυττάρων περιλαμβάνουν επεμβατικές και μεταστατικές ικανότητές τους. Περιτοναϊκή μετάσταση είναι ένα κρίσιμο χαρακτηριστικό για την εξέλιξη του όγκου σε προχωρημένο γαστρικό καρκίνο [1]. Κατά τη διαδικασία της περιτοναϊκής μετάστασης, γαστρικό καρκίνο κύτταρα αλληλεπιδρούν διακυτταρικά με πολλαπλούς τύπους κυττάρων, και η αλληλεπίδραση των ενδοκοιλιακών απολεπιδωμένου γαστρικά καρκινικά κύτταρα και τα περιτοναϊκά μεσοθηλιακών κυττάρων έχει ιδιαίτερη σημασία. Όπως συνεχούς ανθρώπινης περιτοναϊκής μεσοθηλιακών κυττάρων (HPMC) μονοστοιβάδες ενεργεί σαν ένα εμπόδιο ενάντια σε περιτοναϊκή μετάσταση, μόλις λάβει χώρα η διαπίδυση του απολεπιδωμένου γαστρικού καρκίνου κυττάρων μέσω μεσοθηλιακών μονοστιβάδες κυττάρων, η άφθονη παροχή αίματος στη μήτρα κάτω από τη mesothelium θα προσφέρει ένα άνετο περιβάλλον για μεταστατικό γαστρικό τα καρκινικά κύτταρα και να προωθήσει τον αποικισμό τους. Ως εκ τούτου, διαπίδυση των απολέπιση γαστρικών καρκινικών κυττάρων μέσω της mesothelial μονοστοιβάδα κυττάρων είναι ένα σημαντικό βήμα κατά τη διάρκεια της περιτοναϊκής μετάστασης. Η αλληλεπίδραση μεταξύ αυτών των κυττάρων συνοδεύεται από ενδοκυτταρική επικοινωνία (IC), το οποίο κατά κύριο λόγο διαμεσολαβείται από χάσμα μεταξύ κυττάρων κόμβων [2]. Τα στενά τμήματα του μεσοκυττάριου σχηματίζονται από συνδετίνες μεμβράνη πλάσματος, καθένα από τα οποία αποτελείται από έξι συνδεσινών (CXS) [3]. Μέχρι σήμερα, έχουν 20 διαφορετικές ισομορφές συνδετίνης έχουν αναγνωριστεί σε ανθρώπους. Cx43 είναι μια γενική ισομορφή εκφράζεται στους περισσότερους επιθηλιακών ιστών. Προηγούμενες μελέτες [4-6] έδειξαν ότι η έκφραση Cx43 μειώθηκε κατά τη διάρκεια της ογκογένεσης και ως εκ τούτου κατατάσσονται ως καταστολέας των όγκων. Ωστόσο, υπάρχει ένα αυξανόμενο σώμα αποδείξεων ότι συνδεσινών μπορεί να εμπλέκεται στην ενδαγγείωση και εξαγγείωση των καρκινικών κυττάρων και να παίξουν ένα θετικό ρόλο στην διαδικασία της μετάστασης [7,8]. Είτε η Cx43 μεσολάβηση στενών τμημάτων του μεσοκυττάριου παίζει σημαντικό ρόλο σε διαπίδυση του γαστρικού καρκίνου κυττάρων μέσω της περιτοναϊκής μεσοθηλιακών φράγμα παραμένει ασαφής. Για την αντιμετώπιση του υπόθεση εξετάσαμε την έκφραση του Cx43 σε πρωτογενείς γαστρικό καρκινικούς ιστούς, απολέπιση γαστρικό καρκινικά κύτταρα, και περιτοναϊκή μεταστατικό ιστούς. Κατασκευάσαμε ένα Cx43 που εκφράζουν φορέα και ένα φορέα μετάλλαξη τοποθεσία Cx43T154A. Στη συνέχεια, χρησιμοποιήσαμε δύο ανθρώπινες κυτταρικές γραμμές γαστρικού καρκίνου (BGC-823 και SGC-7901), που είναι GJIC ανεπαρκές και δεν εκφράζει καμία γνωστή συνδετίνες [9]. Επειδή μεσοθηλιακών κυττάρων άφθονα εκφράζουν Cx43, έχουμε μηχανικής γαστρικά καρκινικά κύτταρα για να εκφράσουν είτε άγριου τύπου Cx43 ή ένα site-specific μεταλλαγμένο για να προσδιοριστεί αν το δυναμικό της διαπίδυση γαστρικών καρκινικών κυττάρων »μέσω του mesothelium θα άλλαζε τόσο από ή από τους όρους αυτούς. Στην παρούσα μελέτη δείξαμε ότι η έκφραση Cx43 απορυθμίζει καρκινικών κυττάρων διαπίδυση μέσω GJIC-εξαρτώμενο μηχανισμό

Υλικά και Μέθοδοι

2.1:. Αντιδραστήρια και αντισώματα

Anti-κοννεξίνης 43 πολυκλωνικό αντίσωμα (Zymed, San Diego, CA, USA), Matrigel (Becton-Dickenson, Bedford, ΜΑ, USA), 1, 1′-diocta-δεκυλο-3, 3, 3 ‘, 3’-tetramethylindocarbocyanine percholate (Dil? Molecular Probes, Eugene, OR, USA), Calcein-ΑΜ (Dojindo, Kumamoto, Japan), και ΡΙΤΟ-συζευγμένο φαλλοϊδίνη αγοράστηκαν από την Sigma (Sigma-Aldrich, St. Louis, ΜΟ, USA).

2.2 : δείγματα ιστών και κυτταρολογική εξέταση

Όλοι οι συμμετέχοντες παρείχαν ενυπόγραφη ενημερωμένη συγκατάθεση (από τους κηδεμόνες τους, εφόσον είναι απαραίτητο). Αυτή η μελέτη διεξήχθη σύμφωνα με τις αρχές της Διακήρυξης του Ελσίνκι και των τροποποιήσεών της και εγκρίθηκε από την επιτροπή δεοντολογίας της ΝΔ νοσοκομείο, το τρίτο Στρατιωτικό Ιατρικό Πανεπιστήμιο. Ο πληθυσμός της μελέτης αποτελείτο από 42 ασθενείς οι οποίοι είχαν χαρακτηριστεί ως το στάδιο IV σύμφωνα με την έβδομη έκδοση του UICC ΤΝΜ ταξινόμηση των κακοήθων όγκων. Οι κλινικοπαθολογικοί μεταβλητές παρατίθενται στον Πίνακα 1. Όλοι οι ασθενείς που συμμετείχαν στη μελέτη μας υποβλήθηκαν παρηγορητική ή διερευνητική χειρουργική επέμβαση. Πρωτογενής όγκου και τη μεταστατική περιτοναϊκή ιστοί συλλέχθηκαν πριν από το τέλος της χειρουργικής επέμβασης, και απολέπιση γαστρικού καρκίνου κύτταρα συλλέχθηκαν με φυγοκέντρηση του ασκίτη ή υγρό περιτοναϊκής πλύσης (αν δεν υπήρχε ασκίτης). Η εμπύρηνων κυτταρική στιβάδα αλείφεται πάνω σε μία γυάλινη αντικειμενοφόρο πλάκα και χρωματίστηκαν με αιματοξυλίνη και ηωσίνη (ΗΕ). Δύο έμπειρους κυτταροπαθολόγους εκτελούνται τα κυτταρολογικά αξιολογήσεων. CEA χρησιμοποιήθηκε ως βιοδείκτη για να βοηθήσει στον εντοπισμό των κυττάρων αδενοκαρκινώματος με ανοσοφθορισμό με θετική χρώση. Περιπτώσεις εξαιρέθηκαν από την παρούσα μελέτη, όταν τα ευρήματα και των δύο κυτταροπαθολόγους δεν ήταν σε συμφωνία

ομάδα

Αριθμός

τοις εκατό (%)

Φύλο male2764.0 female1536.0Age (έτη) & lt.? 501.740,4 ≥502559.6Tumor θέση τύπο Antral2150.0 Body1228.6 Fundic911.4Pathological Λοιπόν differentiated24.7 Μέτρια differentiated49.5 κακώς differentiated3685.8Bormann πληκτρολογώντας προσέγγιση I00 II12.4 III1228.5 IV2969.1Ascites Yes1535.7 No2764.3Surgical παρηγορητική gastrectomy2457.1 διερευνητικές + biopsy1842.9Table 1. Κλινική και παθολογικά χαρακτηριστικά των 42 περιπτώσεις ασθενών με καρκίνο του στομάχου

CSV Λήψη CSV

2.3:. Ανοσοϊστοχημεία

δείγματα παραφίνης ιστού των πρωτοπαθών όγκων και των μεταστατικών περιτοναϊκή ιστοί σειριακά και ΗΕ χρώση επιβεβαίωσε την ύπαρξη του γαστρικού καρκίνου. Διαδοχική τομές αποπαραφινοποιήθηκαν, αφυδατωμένα, και υποβλήθηκαν σε ανάκτηση αντιγόνου με τη σειρά. Οι τομές επωάστηκαν με ένα αντι-αντίσωμα Cx43 πολυκλωνικό κουνελιού για 24 ώρες στους 4 ° C. θέσεις συνδέσεως έγιναν ορατά με 3, 3′-διαμινο-βενζιδίνη (DAB) σε 5 λεπτά αντίδρασης. Οι τομές με αιματοξυλίνη Mayer, η αφυδάτωση, εκκαθαρίζονται και να τοποθετηθεί. Η παράλειψη του πρωτογενούς αντισώματος χρησιμοποιήθηκε ως αρνητικός έλεγχος. Η ανοσοϊστοχημική χρώση αξιολογήθηκε με την ανάθεση μια βαθμολογία με βάση την έκταση και την ένταση της ανοσοαντιδραστικότητας. Χρώση έκταση αξιολογήθηκε ημιποσοτικά σε κυτταρόπλασμα και μεμβράνη ως αρνητικό (μηδέν, & lt? 5% των κυττάρων χρωματίζονται), θετικός 1 + (6-25% των κυττάρων χρωματίζονται), θετικός 2 + (26-50% κύτταρα χρωματίστηκαν) ή θετικό 3 + ( & gt? βάφονται 50% των κυττάρων). Η ένταση χρώσης βαθμολογήθηκε ως 0 (καμία χρώση), 1 (ασθενής χρώση, κίτρινο καφέ), 2 (μέτρια χρώση, κίτρινο καφέ), ή 3 (ισχυρή χρώση, καφέ). . Τα αποτελέσματα Ανοσοβαφή βαθμολογήθηκαν ως το άθροισμα της έκτασης και της έντασης της ανοσοαντιδραστικότητας, θεωρώντας μια βαθμολογία ≥3 θετικό και ένα σκορ & lt? 3 αρνητικές

2.4: ανοσοφθορισμού

Cx43 έκφραση σε ενδοκοιλιακές αποφλοιωμένα γαστρικά καρκινικά κύτταρα αξιολογήθηκε χρησιμοποιώντας ανοσοφθορισμού. Σαράντα δύο περιπτώσεις είχαν εγγραφεί στη μελέτη μας. Τα κύτταρα αλείφεται σε γυάλινες καλυπτρίδες καθηλώθηκαν με 4% παραφορμαλδεΰδη και πλύθηκαν με PBS που περιέχει 0.5% (ρυθμιστικό διάλυμα έκπλυσης) BSA. Τα κύτταρα στη συνέχεια επωάστηκαν για 24 ώρες στους 4 ° C με ένα αντίσωμα αντι-Cx43 (1: 150). Οι καλυπτρίδες πλύθηκαν και επωάστηκαν με δευτερογενές αντίσωμα αντι-κουνελιού συζευγμένο με FITC κατσίκας. Οι πυρήνες χρωματίστηκαν με χρήση 10 μg /ml ϋΑΡΙ (Sigma-Aldrich, St. Louis, ΜΟ, USA). Οι καλυπτρίδες απεικονίστηκαν χρησιμοποιώντας ένα μικροσκόπιο φθορισμού (Siemens, Γερμανία). Οι έλεγχοι (πρωτογενή αντισώματα αντικαταστάθηκαν από PBS) ήταν αρνητικά για όλα τα πειράματα (τα δεδομένα δεν φαίνονται)

2.5:. Κυτταρική καλλιέργεια και Σταθερή έκφραση Cx43 και Cx43 μεταλλαγμένα

μη κακοήθη ανθρώπινα αθανατοποιημένα μεσοθηλιακών κυττάρων , Met-5Α, ελήφθησαν από την ATCC. Αυτά τα κύτταρα διατηρήθηκαν και πολλαπλασιάστηκαν σε Μέσο 199 που περιέχει 1.5 g /L διττανθρακικό νάτριο, 10% ορό εμβρύου μόσχου, 3,3 ηΜ επιδερμικού αυξητικού παράγοντα (EGF), 400 ηΜ υδροκορτιζόνης, 870 ηΜ χωρίς ψευδάργυρο ινσουλίνη βοοειδούς, 20 mM HEPES, και 3.87 μg /L σεληνιακού οξέος (H2SeO3).

το ανθρώπινο αδενοκαρκίνωμα στομάχου κυτταρικές σειρές BGC-823 και SGC-7901 ελήφθησαν από την τράπεζα της Σαγκάης Ινστιτούτο κυττάρων, κινεζική Ακαδημία Επιστημών. Cx43- και Cx43T154A εκφράζουν φορείς κατασκευάστηκαν χρησιμοποιώντας λεντοϊού μόλυνση. PTA2-Cx43, η οποία περιελάμβανε μια ανθρώπινη αλληλουχία Cx43-κωδικοποίησης, δομήθηκε στο εργαστήριο μας. Ο φορέας μετάλλαξη εργοτάξιο Cx43T154A επιτεύχθηκε χρησιμοποιώντας Επικάλυψη επέκταση PCR, η οποία κωδικοποιείται μια πρωτεΐνη που λειτουργούσε ως μεσοκυττάριου χωρίς IC όπως περιγράφηκε προηγουμένως [10]. εισήχθη Το cDNA του Cx43 και Cx43T154A εντός του φορέα Lenti-GFP και διαμολύνθηκε στην 293Τ κυτταρική σειρά συσκευασίας. Η λεντοϊού υπερκείμενο συλλέχθηκε μετά από 48 ώρες, διηθείται μέσω φίλτρου 0.45 μπι και χρησιμοποιήθηκε για να μολύνει BGC-823 και SGC-7901 κύτταρα. Το μέσο αντικαταστάθηκε με RPMI1640 24 ώρες μετά την μόλυνση, και τα κύτταρα καλλιεργήθηκαν σαν ρουτίνα. Περισσότερο από το 90% των κυττάρων του όγκου που εκφράζεται Cx43 ή Cx43T154A μετά από τρεις κύκλους ιικής μόλυνσης? τα μολυσμένα με επιτυχία κύτταρα συλλέχθηκαν με κυτταρομετρία ροής

2.6:. εκχύλιση πρωτεϊνών και ανάλυση Western blot

Τα τροποποιημένα Cx43- και Cx43T154A εκφράζουν BGC-823 και SGC-7901 γαστρικό καρκίνο κύτταρα λύθηκαν . Πρωτεΐνη (50 μg) από κάθε κυτταρικό τύπο διαχωρίστηκε σε μια 12% SDS-πολυακρυλαμιδίου και μεταφέρθηκαν σε μεμβράνες νιτροκυτταρίνης. μεμβράνες νιτροκυτταρίνης αποκλείστηκαν με 5% άπαχο ξηρό γάλα και στη συνέχεια ανιχνεύθηκαν για την πρωτεΐνη Cx43 χρησιμοποιώντας πολυκλωνικό αντίσωμα αντι-Cx43 (1: 500). Τα ανοσοστυπώματα ανιχνεύθηκαν με τα κατάλληλα δευτερεύοντα αντισώματα συζευγμένα με υπεροξειδάση αρμορακίας (Sigma-Aldrich, St. Louis, ΜΟ, USA) σε αραίωση 1: 10.000. Οι πρωτεΐνες οπτικοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας ένα υπόστρωμα SuperSignal West Pico χημειοφωταύγειας (Pierce Chemical Co.) και ανοσοαποτυπώματα εκτέθηκαν σε Amersham Hyperfilm (Amersham Biosciences, Piscataway, NJ, USA) για 30 s

2.7:. Tumor κυττάρων /Mesothelial Δοκιμασία σύμφυσης κυττάρων

μεσοθηλιακών κυττάρων αναπτύχθηκαν μέχρι συρροής μονοστοιβάδας σε γυάλινες καλυπτρίδες σε πλάκες 24 φρεατίων. Η μηχανικής Cx43- και Cx43T154A εκφράζουν γαστρικό καρκίνο κύτταρα σημάνθηκαν με ένα διάλυμα /ml Dil 10 μg επί 15 λεπτά στους 37 ° C. Dil είναι ένας συχνά χρησιμοποιούμενος ανιχνευτής φθορισμού που δείχνει ένα πορτοκαλί-κόκκινο φθορισμό σε μεμβράνες και χρησιμοποιήθηκε στη μελέτη μας για την επισήμανση γαστρικά καρκινικά κύτταρα. Αυτά τα επισημασμένα κύτταρα στη συνέχεια προστέθηκαν στα μεσοθηλιακών μονοστοιβάδες των κυττάρων και επωάζονται για 1 ώρα στους 37 ° C. Τα μη προσκολλημένα κύτταρα απομακρύνθηκαν με πλύση και τα κύτταρα που είχαν προσκολληθεί στα μεσοθηλιακών κυτταρικές μονοστιβάδες σταθεροποιήθηκαν με 4% παραφορμαλδεΰδη. Τα πλακίδια καλλιέργειας τοποθετημένα σε Mowiol (Calbiochem) και εξετάστηκαν χρησιμοποιώντας μικροσκόπιο φθορισμού (Leica MPS 60)

2.8:. Όγκων Κυττάρων /Mesothelial κυττάρων GJIC δοκιμασία

Η μηχανικής Cx43- και Cx43T154A εκφράζουν BGC-823 και SGC-7901 γαστρικό καρκίνο κύτταρα σημάνθηκαν για 15 λεπτά στους 37 ° C με 2 ml Opti-ΜΕΜ που περιείχε 10 μg /ml καλσεΐνης-ΑΜ και 10 μg /ml Dil. Calcein-ΑΜ είναι ένα φθορίζον υπόστρωμα που διασπάται σε βιώσιμα κύτταρα σε μια μεμβράνη αδιαπέραστη από μορφή που μπορεί να περάσει μέσα από λειτουργικές διασταυρώσεις χάσμα, αλλά όχι τα άλλα κανάλια της πλασματικής μεμβράνης. Mesothelial κυτταρικές μονοστιβάδες υποβλήθηκαν σε προεπεξεργασία για 4 ώρες με 150 μΜ καρβενοξολόνη (CBX) να εμποδίσει ομοτυπική GJIC και μετά υποβλήθηκαν σε αγωγή για 15 λεπτά με 10 μg /ml καλσεΐνης-ΑΜ (Molecular Probes) σε ένα διάλυμα Opti-ΜΕΜ. Τα καλά προετοιμασμένη επισημασμένα γαστρικά καρκινικά κύτταρα προστέθηκαν στις μονοστιβάδες Met-5A για την Matrigel, και ανιχνεύθηκε η ετερότυπη GJIC ανάμεσα στα γαστρικά καρκινικά κύτταρα και τα μεσοθηλιακών κυττάρων. ανάκτηση φθορισμός σε λευκασμένο κύτταρα θα συμβεί μόνο εάν χρωστική περνά μέσα από τις διασταυρώσεις χάσμα των παρακείμενων αλεύκαστων γαστρικών καρκινικών κυττάρων. Μεμονωμένα μεσοθηλιακών κυττάρων που γειτνιάζουν με γαστρικά καρκινικά κύτταρα λευκασμένα για περίπου 30 s χρησιμοποιώντας ένα Zeiss σάρωση με λέιζερ συνεστιακό μικροσκόπιο και ένα λέιζερ αργού στους 33% της ισχύος για κάθε πειραματική συνθήκη. Ενιαία mesothelial κύτταρα που δεν μπορούσε να αποδείξει την GJIC επιλέχθηκαν να υποβληθούν blenching ως μάρτυρες. Μη επεξεργασμένα κύτταρα χρησιμοποιήθηκαν ως φόντο τροποποίηση κύτταρα. Η μέση ένταση φθορισμού από λευκασμένο /αλεύκαστων κυττάρων μετρήθηκε με το χρόνο χρησιμοποιώντας λογισμικό απεικόνισης Scion, και το ποσοστό ανάκτησης φθορισμού υπολογίστηκε καθώς και (Kt = (Ib-Ib0) /Ιιι × 100%, Kt: ποσοστό ανάκτησης φθορισμός σε χρόνο t? Ib: η ένταση φθορισμού στο κύτταρο λευκανθεί στο χρόνο t? Ib0: η ένταση φθορισμού στο κύτταρο λευκασμένα κατά το χρόνο t = 0? IU:. ένταση φθορισμού στην παρακείμενη αλεύκαστο κύτταρο κατά το χρόνο t) [11]

2,9: transmesothelial μετανάστευση δοκιμασία

Η δοκιμασία transmesothelial μετανάστευση εκτελέστηκε όπως περιγράφηκε προηγουμένως [12]. Εν συντομία, 1 × 10

5 κύτταρα μεσοθηλιακών Met-5A σπάρθηκαν πάνω σε καλυπτρίδες από γυαλί 12 mm που επικαλύφθηκαν με Matrigel (Becton-Dickenson, USA). Μονοστιβάδες έφθασαν σε συρροή όπως προσδιορίζεται χρησιμοποιώντας μικροσκοπία φωτός. Οι καλυπτρίδες μεταφέρθηκαν σε μία πλάκα 24 φρεατίων και καλλιεργήθηκαν για 48 ώρες σε EGM. Γαστρικό καρκίνο κύτταρα διαιρούνται με άδειο ομάδα φορέα, Cx43 εκφράζουν ομάδα, Cx43T154A εκφράζουν ομάδα και CBX προεπεξεργασμένων ομάδα (Cx43 εκφράζουν γαστρικά καρκινικά κύτταρα υποβλήθηκαν σε προεπεξεργασία για 4 ώρες με 150 μΜ καρβενοξολόνη (CBX) για να εμποδίσει ομοτυπική GJIC) και επισημαίνονται με Dil . Περίπου 1 χ 10

5 κυττάρων προστέθηκαν σε μεσοθήλια κυτταρικές μονοστιβάδες σε αναλογία 1:10 (των καρκινικών κυττάρων: μεσοθηλιακών κυττάρων). Τα κύτταρα συν-καλλιεργήθηκαν για διαφορετικούς χρόνους (1, 4, ή 7 ώρες) πριν να ζήσουν παρατήρηση ή καθήλωση και ανοσοχρώση. Τυφλωμένος ερευνητές ποσοτικά διαπίδυση χρησιμοποιώντας LSM, όπως περιγράφηκε προηγουμένως [7]. Εν συντομία, η συν-καλλιέργειες σταθεροποιήθηκαν και χρωματίστηκαν για F-ακτίνης. Διαπίδυση ποσοτικοποιήθηκε ως ο αριθμός των κυττάρων όγκου που ήταν σε επαφή με το μεσοθήλιο και ταξινομούνται σε τρία στάδια σύμφωνα με τη θέση τους σε σχέση με το mesothelium: 1) στρογγυλεμένες – καρκινικά κύτταρα με ένα σφαιρικό σχήμα στην κορυφαία επιφάνεια του mesothelium? 2) μεταναστεύουσα – καρκινικά κύτταρα είχαν διεισδύσει μέσα από τις κυτταρικές μονοστιβάδες μεσοθηλιακών στο μεσοθηλιακών διασταυρώσεις κυττάρου με ένα τμήμα του κυτταρικού σώματος πάνω από το μεσοθήλιο και ένα τμήμα της εξάπλωσης κυτταρικό σώμα στο Matrigel κάτω από τα μεσοθηλιακών κυττάρων F-ακτίνης ίνες στρες? και 3) κάτω από – ολόκληρο το σώμα των κυττάρων του όγκου ήταν κάτω από το επίπεδο των μεσοθηλιακών κυττάρων ινών στρες. Μετεγκατάσταση και κάτω από τα κύτταρα ταξινομήθηκαν ως διαμετακινήθηκαν. Περίπου 100 mesothelium προσκολλημένα κύτταρα καταγράφηκαν και μετρήθηκαν ανά καλυπτρίδα, και όλα τα πειράματα επαναλήφθηκαν τρεις φορές με τρία αντίγραφα καλυπτρίδες

2.10:. Στατιστική ανάλυση

Όλοι στατιστική ανάλυση πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας το λογισμικό SPSS ( έκδοση 13.0). Πιθανότητες P & lt? 0.05 θεωρήθηκαν στατιστικά σημαντικές

Αποτελέσματα

3.1:. Έκφραση Cx43 σε πρωτογενείς όγκους και συμφωνημένα μεταστατικό περιτοναϊκή ιστούς

Σαράντα δύο φυσιολογικό επιθήλιο (100%) εξέφρασε Cx43 με τυπικά μεμβρανώδη και κυτταροπλασματική χρώση (Σχήμα 1Α). Έντεκα από 42 πρωτογενείς όγκους (26,2%) ήταν θετικά για Cx43, η οποία ήταν σημαντικά μειωμένη σε σχέση με γειτονικό κανονικό επιθήλιο (ρ & lt? 0,05). έκφραση Cx43 ήταν ετερογενής σε διαφορετικά δείγματα ιστών: σε καλά διαφοροποιημένο γαστρικό καρκινικούς ιστούς, η έκφραση Cx43 έδειξε κύρια μικτή (κυτταροπλασματική και μεμβρανώδη) χρώση (Σχήμα 1Β)? μετρίως διαφοροποιημένο γαστρικό καρκινικούς ιστούς είχε μόνο κυτταροπλασματική έκφραση Cx43 (Σχήμα 1C)? και Cx43 ήταν μόλις και μετά βίας εκφράζεται σε φτωχά διαφοροποιημένο γαστρικό καρκινικούς ιστούς (Σχήμα 1D). Αντίθετα, η έκφραση Cx43 ήταν σημαντικά αυξημένη σε 29 από τις 42 μεταστατικών περιτοναϊκή ιστούς (69,0%) και επέδειξε χαρακτηριστική κυτταροπλασματική και μεμβρανώδη χρώση (ρ & lt? 0,05). (Σχήμα 1 Ε) (Πίνακας 2)

(Α) Cx43 εκφράστηκε σε κανονική επιθήλια με τυπικά μεμβρανώδη και κυτταροπλασματική χρώση. (Β) έκφραση Cx43 σε καλά διαφοροποιημένο γαστρικό καρκινικούς ιστούς, τα καρκινικά κύτταρα παρουσίασαν θετική μεμβράνη και κυτταροπλασματική πρότυπο χρώσης. (C) Cx43 έδειξαν μια σημαντική θετική χρώση στο κυτταρόπλασμα σε μέτρια διαφοροποιημένο γαστρικό καρκινικούς ιστούς (D) έκφραση Cx43 σε φτωχά διαφοροποιημένο γαστρικό καρκινικούς ιστούς, κύτταρα του όγκου παρουσιάζουν αρνητική πρότυπο χρώσης. έκφρασης (Ε) Cx43 στο μεταστατικό περιτοναϊκή ιστούς έδειξαν θετική πρότυπο χρώσης. (F) Ενδοκοιλιακές απολεπιδωμένου γαστρικό καρκίνο κύτταρα προσδιορίστηκαν με αιματοξυλίνη και ηωσίνη (Η και Ε) χρώση. (G, H, I) Η έκφραση της Cx43 στην ενδο-κοιλιακή απολεπιδωμένου γαστρικό καρκίνο κυττάρων πρόσβαση με ανοσοφθορισμό. Αρχική μεγέθυνση: (AF, × 400)

Η κοννεξίνης 43

Δημοτικό γαστρικού καρκίνου (υποθέσεις) (%)

παρακείμενο φυσιολογικό ιστό (υποθέσεις) (%)

μεταστατικός περιτοναϊκή ιστού (περιπτώσεις. ) (%)

Αρνητικό (βαθμολογία & lt? 3) 31 (73,8%) 0 (0) 13 (31,0%) Θετική (score≥3) 11 (26,2%) * 42 (100%) 29 (69,0%) . † πίνακα 2. αποτελέσματα Ανοσοϊστοχημεία για συνδετίνης 43 έκφραση σε πρωτογενή γαστρικού καρκινικούς ιστούς, παρακείμενο φυσιολογικό γαστρικό ιστούς και περιτοναϊκή μεταστατικούς ιστούς (Ν = 42)

* σε σύγκριση με παρακείμενες φυσιολογικούς ιστούς, η έκφραση του συνδετίνης 43 μειώθηκε σημαντικά (ρ & lt? 0,05)? † Σε σύγκριση με πρωτογενή γαστρικού καρκινικούς ιστούς, η έκφραση του συνδετίνης 43 σε μεταστατικό περιτοναϊκή ιστού αυξήθηκε σημαντικά (ρ & lt? 0,05). CSV Λήψη CSV

3.2: έκφραση Cx43 στην ενδο-κοιλιακή απολεπιδωμένου γαστρικά καρκινικά κύτταρα

υπάρχουν

Οι περισσότεροι ενδοκοιλιακή απολεπιδωμένου γαστρικά καρκινικά κύτταρα, όπως πολυκύτταρων σφαιροειδή (Σχήμα 1 F). Θετική ανοσοχρώση Cx43 παρατηρήθηκε σε 35 από τις 42 περιπτώσεις ενδοκοιλιακών απολεπιδωμένου καρκινικά κύτταρα με μικτή κυτταροπλασματική και μεμβρανώδη χρώση, και το θετικό ποσοστό είναι 83,3% (Σχήμα 1 G, Η, και Ι).

3.3 : έκφραση εξωγενούς Cx43 σε BGC-823 και SGC-7901 γαστρικών καρκινικών κυττάρων

γαστρικό καρκινικά κύτταρα τροποποιημένα ώστε να εκφράζουν λειτουργικό Cx43, Cx43T154A και ένα άδειο φορέα λεντοϊού ως έλεγχος για τη διερεύνηση των επιδράσεων της έκφρασης Cx43 για την βιολογική συμπεριφορά αυτών των κυττάρων. έκφραση Cx43 απουσίαζε στο άδειο ομάδα φορέα, αλλά οι άλλες δύο ομάδες μηχανικής ανιχνεύθηκαν για να εκφράσουν είτε Cx43 ή Cx43T154A (Σχήμα 2Α).

(Α) και Cx43 Cx43T154A έκφραση του BGC-823 και SGC-7901 γαστρικά καρκινικά κύτταρα μετά την επιμόλυνση. (Β, Γ) Επιπτώσεις της Cx43 σε in vitro πρόσφυση του BGC-823 και SGC-7901 γαστρικά καρκινικά κύτταρα να μεσοθηλιακών κυττάρων. Τα προσκολλημένα κύτταρα όγκου μετρήθηκαν (μεγέθυνση: Χ 200), τα αποτελέσματα έδειξαν ότι η προσκόλληση των κυττάρων που επιμολύνθηκαν με Cx43 ή Cx43T154A ήταν σημαντικά αυξημένη σε σύγκριση με εκείνη των κυττάρων που επιμολύνθηκαν με άδειο φορέα (* Ρ & lt? 0,05). Τα δεδομένα παρουσιάζονται ως μέσος όρος ± SEM

Η

3.4:. Πρόσφυση Ιδιότητες Τα καρκινικά κύτταρα γαστρικού να μεσοθηλιακών κυττάρων

Η επίδραση της Cx43 στην προσκόλληση των γαστρικών καρκινικών κυττάρων στα μεσοθηλιακών κυττάρων ερευνήθηκε επίσης. Κατασκευασμένα γαστρικά καρκινικά κύτταρα που εκφράζουν είτε άγριου τύπου Cx43 ή Cx43T154A παρουσίασαν μια σημαντική αύξηση στην προσκόλληση σε μεσοθηλιακών κυττάρων σε σύγκριση με κενό φορέα ομάδα (Ρ & lt? 0,05). Δεν παρατηρήθηκαν σημαντικές διαφορές στην ικανότητα προσκόλλησης μεταξύ Cx43- και Cx43T154A εκφράζουν ομάδες (Ρ & gt? 0,05)., γεγονός που υποδηλώνει ότι Cx43 προάγει την πρόσφυση γαστρικού καρκίνου των κυττάρων, η οποία είναι ανεξάρτητη της GJIC (Σχήμα 2Β)

1.photobleaching mesothelial κύτταρα? 2.adjacent γαστρικά καρκινικά κύτταρα. Α, πριν από την λεύκανση? B, C, D, E, F αντιπροσωπεύουν εικόνες σε 0, 1, 2, 3, 4 λεπτά μετά φωτολεύκανση, αντίστοιχα.

Η

Οπτικά τμήματα που λαμβάνονται με σάρωση με λέιζερ συνεστιακή μικροσκοπία στα εστιακά επίπεδα που αναφέρονται στο ( Α, Ε, Ι) εντοπίστηκαν τρία βασικά στάδια της διαπίδυση: στρογγυλό στην κορυφή του (Α-Δ), μεταναστεύουν μέσω της (Ε-η), ή που βρίσκεται κάτω από (I-L), η mesothelium. (Β) Γαστρικό καρκινικά κύτταρα, με στρογγυλό σχήμα είχε ύπαρξη φιλοποδίων παρουσιάζονται στο κυτταρόπλασμα (βέλη). (H) Γαστρικό καρκινικά κύτταρα που βρίσκονται σε μεσοθηλιακών κόμβους κυττάρου-κυττάρου είχε μακριά άτρακτο και παχιά δέσμες F-ακτίνης παρουσιάζεται κοντά στο κυτταρόπλασμα (βέλη). (K, L) Εκείνοι που ολοκληρώθηκε διαπίδυση έδειξε εξέχοντα ίνες στρες διανέμεται χαλαρά στο κυτταρόπλασμα (βέλη)

Η

3.5:. Engineered Cx43 εκφράζουν BGC-823 και SGC-7901 κύτταρα σχηματίζουν λειτουργικούς διαύλους διασταύρωση χάσμα με μεσοθηλιακών μονοστοιβάδες κυττάρων

συγκαλλιεργήθηκαν μηχανικής Cx43- και Cx43T154A εκφράζουν γαστρικών καρκινικών κυττάρων με μεσοθηλιακών μονοστιβάδες κυττάρων για να εξετάσει την ικανότητα του Cx43 εκφράζουν κύτταρα να σχηματίζουν κόμβους χάσμα και να δημιουργήσουν GJIC με μεσοθηλιακών κυττάρων. Τα αποτελέσματα δείχνουν ότι η γαστρική καρκινικά κύτταρα είτε στο κενό ομάδα φορέα ή την ομάδα Cx43T154A απέδειξε GJIC με παρακείμενες περιτοναϊκή μεσοθηλιακών κυττάρων μετά τη λεύκανση με λέιζερ, ενώ η Cx43 εκφράζουν ομάδα ήταν σε θέση να αποδείξει την GJIC με περιτοναϊκή μεσοθηλιακών κυττάρων με επιτυχία. Η ενδοκυτταρική ένταση φθορισμού ανιχνεύθηκε πριν την λεύκανση, κατά τη στιγμή της λεύκανσης, και είτε 1 λεπτό, 2 λεπτά, 3 λεπτά ή 4 λεπτά μετά την λεύκανση. Τα αποτελέσματα δείχνουν ότι, σε Cx43 εκφράζουν ομάδα, η ενδοκυτταρική ένταση φθορισμού λευκασμένα μεσοθηλιακών κυττάρων μειώθηκαν γρήγορα μετά την λεύκανση. Η ένταση του φθορισμού στη συνέχεια σταδιακά ανακτηθούν λόγω βαφή διέλευση από διασταυρώσεις χάσμα με παρακείμενα αλεύκαστο γαστρικά καρκινικά κύτταρα, και το ποσοστό ανάκτησης φθορισμού μέσος όρος ήταν 35,6 ± 0,9% και 39,4 ± 0,8% σε 4 λεπτά μετά blenching στην BGC-823 και SGC-7901 κύτταρα, αντίστοιχα, τα οποία ήταν σημαντικά υψηλότερη από ότι σε Cx43T154A και άδειο ομάδα Vetor (p & lt? 0,05). (Σχήμα 3, Πίνακας 3)

ομάδα

μέσο ποσοστό ανάκτησης φθορισμού (%,

x

± s ) (t=4min)

BGC-823Cx4335.6±0.9*BGC-823Cx43T154A12.1±0.6BGC-823v13.4±0.7SGC-7901Cx4339.4±0.8†SGC-7901Cx43T154A15.3±0.4SGC-7901v14.7±0.6Table 3. Σύγκριση των ποσοστών ανάκτησης μέση φθορισμού μετά την λεύκανση στο BGC-823 και SGC-7901 γαστρικά καρκινικά κύτταρα (ένταση φθορισμού,

x

± s)

CSV Λήψη CSV

3.6:. Μορφολογικά αξιολόγηση του όγκου των κυττάρων διαπίδυση

Έχουμε καθιερώσει ένα

in vitro

σύστημα για την εικόνα της transmesothelial μετανάστευση των γαστρικών καρκινικών κυττάρων για τη διερεύνηση του μηχανισμού και της οδού διαπίδυση. Αυτό μιμείται δοκιμασία πτυχές του αγγειακού τοιχώματος και έχει χρησιμοποιηθεί προηγουμένως για την ανάλυση λευκοκυττάρων διαπίδυση [11]. Dil-επισημασμένα καρκινικά κύτταρα βαθμολογήθηκαν σύμφωνα με την μορφολογία και τη θέση τους σε σχέση με το μεσοθήλιο. Ορίσαμε τρία διακριτά στάδια της μετανάστευσης με συνεστιακή μικροσκοπία: στρογγυλεμένες (Εικόνα 4Α)? μεταναστεύουν (Σχήμα 4Ε)? και κάτω (Σχήμα 4I). Tumor κύτταρα στην κορυφή του mesothelium πριν διαπίδυση εμφάνισαν ένα στρογγυλό ή ovular σχήμα, και αυτό το σχήμα διατηρήθηκε από την κορυφαία (Σχήμα 4Β) προς την βασική επιφάνεια (Σχήμα 4C, D). Μεταναστεύοντα κύτταρα όγκου που περνά μεταξύ των γειτονικών μεσοθηλιακών κυττάρων άλλαξε σχήμα από ovular σε μια μεγάλη άτρακτο με ενδοκυτταρικά F-ακτίνης συναρμολογούνται σε ακτίνη δέσμες νήματος (Σχήμα 4F, G, H). Τα καρκινικά κύτταρα που ολοκληρώθηκε διαπίδυση βρίσκονται τελείως κάτω από το mesothelium. Το σχήμα των κυττάρων άλλαξε σταδιακά από το μακρύ άξονα στο σχήμα στρογγυλεμένο, και οι ενδοκυτταρικές F-ακτίνης νημάτια σταδιακά επεκτείνεται και είχαν μια αραιά διατεταγμένα μεταξύ νημάτων (Σχήμα 4J, K, L). Η μελέτη μας έδειξε ότι διαπίδυση γαστρικά καρκινικά κύτταρα »συνέβη μέσω μιας παρακυτταρικής οδού

3.7:. Cx43 μεσολάβηση GJIC ενισχυμένη γαστρικά καρκινικά κύτταρα διαπίδυση

Είμαστε συν-καλλιεργημένα Cx43-, Cx43T154A εκφράζουν gasric καρκίνο κύτταρα και CBX προκατεργάστηκαν Cx43 κύτταρα που εκφράζουν με μεσοθηλιακών κυττάρων για 1, 4 και 7 ώρες για να συγκρίνουν την αποτελεσματικότητα διαπίδυση τους [1,2]. Αυτά τα κύτταρα βαθμολογήθηκαν με τη χρήση των κριτηρίων που περιγράφονται για τη μετανάστευση. Το ποσοστό των αποδημητικών Cx43T154A και CBX προεπεξεργασμένα κύτταρα δεν ήταν σημαντικά διαφορετική από τα κενά κελιά διάνυσμα ομάδα μετά από 7 ώρες συν-καλλιέργειας (ρ & gt? 0,05), αλλά η αποτελεσματικότητα διαπίδυση του Cx43 κυττάρων που εκφράζουν ομάδα ήταν σημαντικά υψηλότερη από ό, τι άλλες τρεις ομάδες (ρ & lt ? 0,05) (Σχήμα 5). Αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν ότι η παρουσία της πρωτεΐνης Cx43 μόνο στο κύτταρο όγκου δεν είναι υπεύθυνη για την παρατηρούμενη αύξηση της διαπίδυση, αλλά ότι heterocellular GJIC μεταξύ κυττάρων όγκου και μεσοθηλιακών κυττάρων απαιτείται για να αυξήσει την αποτελεσματικότητα της διαπίδυση για γαστρικά καρκινικά κύτταρα. Αυτά τα αποτελέσματα πρότειναν ότι Cx43 διευκολύνει GJIC εξαρτώμενη διαπίδυση των καρκινικών κυττάρων.

Τα προσκολλημένα κύτταρα στη διαδικασία της διαπίδυση και τα κύτταρα που είχαν ολοκληρώσει διαπίδυση βαθμολογήθηκαν μαζί ως έχοντα μεταναστεύσει κύτταρα επιτυχώς. (Α) Ποσοστό προσκολλημένα κύτταρα που μεταναστεύουν σε κύτταρα BGC-823 ομάδα (%), σε σύγκριση με BGC-823v (έλεγχος), σημαντική αύξηση σε διαπίδυση των κυττάρων BGC-823Cx43 παρατηρήθηκε σε 1, 4 και 7 ώρες (* ρ & lt? 0,05)? (Β) Ποσοστό προσκολλημένα κύτταρα που μεταναστεύουν σε SGC-7901 κύτταρα ομάδα (%), σε σύγκριση με SGC-7901v (έλεγχος), σημαντική αύξηση σε διαπίδυση των κυττάρων SGC-7901Cx43 παρατηρήθηκε σε 1, 4 και 7 ώρες (* ρ & lt? 0.05).

Η

Συζήτηση

τα Gap κόμβους και υπομονάδες συνδετίνης ρυθμίζεται προς τα κάτω σε διάφορους καρκίνους [4,13,1,4]. Ωστόσο, πρόσφατες εκθέσεις δείχνουν ότι η έκφραση συνδετίνες «δεν διατηρείται πάντα σε μειωμένα επίπεδα κατά τη διάρκεια της εξέλιξης του όγκου? αντιστρόφως, μπορούν να είναι παρόντες κατά τη διάρκεια των μετέπειτα στάδια της καρκινογένεσης, την αύξηση της ικανότητας μετανάστευσης των μεταστατικών κυττάρων [2,15-11,7]. Αυτή η επανεμφάνιση των συνδεσινών είναι σαφώς παρατηρείται κατά τη διάρκεια της εξέλιξης του ανθρώπινου καρκίνου του μαστού, όπου Cx26- και Cx43 αρνητικά πρωτοπαθείς όγκους που αναπτύχθηκε Cx26- και Cx43 θετικά μεταστάσεις στους λεμφαδένες [18,1,9]. Παρόμοια αποτελέσματα έχουν επίσης ληφθεί στην καρκινογένεση του δέρματος ποντίκι? έκφραση Cx26 είναι μειωμένη κατά τα πρώτα στάδια της καρκινογένεσης, αλλά αποκαθίσταται σε μεταστατικούς λεμφαδένες [20]. Αυτές οι μελέτες υποδηλώνουν ότι συνδετίνες παίζουν διαφορετικούς ρόλους κατά τη διαδικασία της καρκινογένεσης. Η μελέτη μας ήταν η πρώτη φορά για να εξετάσει την έκφραση του Cx43 κατά τα διάφορα στάδια της εξέλιξης του καρκίνου του γαστρικού (πρωτογενής γαστρικό καρκινικούς ιστούς, ενδοκοιλιακή απολεπιδωμένου γαστρικά καρκινικά κύτταρα και να συνδυαστούν μεταστατικό περιτοναϊκή ιστούς). Τα αποτελέσματα δείχνουν μία σημαντική μείωση στην έκφραση Cx43 σε πρωτογενείς γαστρικό καρκινικούς ιστούς σε σύγκριση με τις παρακείμενες κανονικές γαστρικού ιστούς (ρ & lt? 0,05). Αντίθετα, η έκφραση Cx43 της ενδοκοιλιακής απολεπιδωμένου γαστρικά καρκινικά κύτταρα και ιστούς μεταστατικό περιτοναϊκή ήταν σημαντικά αυξημένη. Αυτά τα αποτελέσματα υποδηλώνουν ότι Cx43 πιθανότατα παίζει σημαντικό ρόλο στην περιτοναϊκή μετάσταση.

Για να διερευνηθεί αν η έκφραση Cx43 έχει επίδραση στην περιτοναϊκή μετάσταση, Cx43 επιμολύνθηκε σε BGC-823 και SGC-7901 γαστρικών καρκινικών κυττάρων, και ένα μετάλλαξη θέση Cx43T154A κατασκευάστηκε για να προσδιοριστεί ο ρόλος της επικοινωνίας μεσοκυττάριου στη διαδικασία της περιτοναϊκής μετάστασης. Η προσκόλληση και διαπίδυση των καρκινικών κυττάρων στους μεσοθηλιακών κυτταρικές μονοστιβάδες είναι δύο κρίσιμα βήματα για τον σχηματισμό της περιτοναϊκής μετάστασης. Ένα

in vitro δοκιμασία

προσκόλλησης κυττάρου αποκάλυψε ότι Cx43- και Cx43T154A εκφράζουν BGC-823 και SGC-7901 κύτταρα παρουσίασαν περισσότερο αποτελεσματική προσκόλληση στα μεσοθηλιακών κυτταρικές μονοστιβάδες από κενά κύτταρα φορέα και ότι η αποτελεσματικότητα του προσκόλληση Cx43T154A εκφράζουν καρκινικά κύτταρα ήταν παρόμοια με Cx43-εκφράζοντα κύτταρα. Αυτά τα αποτελέσματα υποδηλώνουν ότι Cx43 προάγει την πρόσφυση των γαστρικών καρκινικών κυττάρων σε μεσοθηλιακών κυττάρων, η οποία είναι ανεξάρτητη από την ανακοίνωση μεσοκυττάριου. Όσον αφορά το σχετικό μηχανισμό της, προηγούμενη μελέτη μας είχε δείξει ότι Cx43 μπορεί να αλληλεπιδρά με πρωτεΐνες προσκόλλησης που σχετίζονται κύτταρο, όπως Ε-καδερίνης, που συμμετέχουν στη διαδικασία της προσκόλλησης [21], η οποία μπορεί να προτείνει ένα θετικό ρόλο της έκφρασης Cx43 στην αύξηση κυτταρική προσκόλληση.

Η διαπίδυση των γαστρικών καρκινικών κυττάρων μέσω mesothelial μονοστιβάδες κυττάρων

in vitro

ερευνήθηκε περαιτέρω στα πειράματά μας. Η μελέτη μας έδειξε ότι η διαπίδυση του Cx43 εκφράζουν γαστρικά κύτταρα ήταν σημαντικά αυξημένη σε σύγκριση με Cx43T154A-εκφράζοντα κύτταρα, υποδεικνύοντας ότι η έκφραση Cx43 επηρεάζονται κυτταρική κινητικότητα, η οποία ήταν σύμφωνη με αρκετές προηγούμενες εκθέσεις [2, 14, 22, και 23]. Ωστόσο, παραμένει να διευκρινιστεί αν η έκφραση Cx43 συσχετίστηκε με διακυτταρική επικοινωνία. Στη συνέχεια διερευνηθεί κατά πόσον GJIC διαδραματίζει κεντρικό ρόλο στη διαπίδυση.