Αφηρημένο

Anti-όγκου CD8

+ Τ κύτταρα είναι καθοριστικό παράγοντα για τη συνολική επιβίωση σε ασθενείς μετά από χειρουργική εκτομή για στερεές κακοήθειες. Χρησιμοποιώντας ένα μοντέλο ποντικού του εμβολιασμού καρκίνου (μελάνωμα σχετιζόμενο με τον όγκο αντιγόνο αδενοϊό που εκφράζει (ΤΑΑ) -dopachrome ταυτομεράσης (AdDCT) και εκτομή με αποτέλεσμα μεγάλες χειρουργικές στρες (κοιλιακός νεφρεκτομή), αποδεικνύουμε ότι η χειρουργική αποτέλεσμα στρες σε μείωση του αριθμού των CD8

+ Τ κυττάρων που παράγουν κυτοκίνες (ΙΡΝγ, TNFa, Granzyme Β) σε απόκριση προς ΤΑΑ. Η επίδραση αυτή είναι δευτερεύων τόσο μειώνεται ο πολλαπλασιασμός και η εξασθενημένη λειτουργία Τ κυττάρων μετά δέσμευση αντιγόνου. σε ένα προφυλακτικό μοντέλο, χειρουργικά στρες καταργεί εντελώς προστασία των όγκων ανατίθενται από τον εμβολιασμό στην άμεση μετεγχειρητική περίοδο. σε μια κλινικά σημαντική χειρουργική μοντέλο εκτομή, εμβολιασμένα ποντίκια που υποβάλλονται σε μια θετική εκτομή περιθώριο με χειρουργικό στρες είχαν μειωμένη επιβίωση σε σύγκριση με ποντίκια με θετικό εκτομή περιθώριο και μόνο. ​​προεγχειρητική ανοσοθεραπεία με ΙΡΝα επεκτείνει σημαντικά την επιβίωση σε χειρουργικά τόνισε ποντίκια . Είναι σημαντικό, ο πληθυσμός που προέρχεται μυελοειδούς κυττάρου καταστολέα (MDSC) και λειτουργική ανεπάρκεια των ΤΑΑ-ειδικών CD8

+ Τ κυττάρων μεταβάλλεται σε χειρουργικά τόνισε ποντίκια. Οι παρατηρήσεις μας δείχνουν ότι η εξέλιξη του καρκίνου μπορεί να προκύψει από τη χειρουργική επέμβαση που προκαλείται καταστολή της ογκο-ειδικών CD8

+ Τ κύτταρα. Προεγχειρητική η ανοσοθεραπεία με στόχο τη στόχευση των prometastatic αποτελέσματα της χειρουργικής επέμβασης του καρκίνου θα μειώσει την επανάληψη και τη βελτίωση της επιβίωσης σε ασθενείς με χειρουργική επέμβαση για καρκίνο

Παράθεση:. Ananth AA, Tai LH, Lansdell C, Alkayyal ΑΑ, Baxter ΚΕ, Angka L, et al . (2016) Χειρουργικά στρες καταργεί Προϋπάρχουσα Προστατευτική Τ κύτταρο αντι-όγκου Ασυλία Οδηγώντας σε Μετεγχειρητική επανεμφάνισης του καρκίνου. PLoS ONE 11 (5): e0155947. doi: 10.1371 /journal.pone.0155947

Επιμέλεια: Hiroyoshi Nishikawa, διερευνητική Ογκολογίας Έρευνας & amp? Κλινικών Δοκιμών Κέντρο, Εθνικό Κέντρο Καρκίνου, ΙΑΠΩΝΙΑ

Ελήφθη: 9 Οκτωβρίου 2015? Αποδεκτές: 6η Μάη του 2016? Δημοσιεύθηκε: May 19, 2016

Copyright: © 2016 Ananth et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα:. Όλη η δεδομένα είναι εντός του Υποστηρίζοντας αρχεία πληροφοριών του χαρτιού και

Χρηματοδότηση:. η εργασία αυτή χρηματοδοτήθηκε από τον Terry Fox Research Institute, της Νέας Βραβείο ερευνητή (RCA)? Καναδικό Ινστιτούτο Υγείας Research Fellowship (ΙΗΤ)? Καναδική Εταιρεία Καρκίνου Ινστιτούτο Έρευνας, Καινοτομίας και Καινοτομίας για τη χορήγηση Επιπτώσεων (RCA)

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Η σημασία του ανοσοποιητικού επιτήρηση στον έλεγχο έκφυση των κακοήθων κυττάρων είναι γνωστή εδώ και δεκαετίες. Η αρχή που υπάρχουν φυσικά Τ κύτταρα με αντικαρκινική δυναμικό σε ανθρώπινο καρκίνο έχει οδηγήσει στην αναδυόμενο πεδίο της ανοσοθεραπείας του καρκίνου. Ίδιοι οι όγκοι, ωστόσο, είναι σε θέση να επισκιάσουν το ανοσοποιητικό σύστημα για την καταστολή του ανοσοποιητικού ελέγχου, δημιουργώντας ένα ευνοϊκό περιβάλλον, όχι μόνο για την πρωτογενή, αλλά και για τη μεταστατική έκφυση. Η τελευταία διαδικασία έχει ονομαστεί «συστηματική ηθική αυτουργία» [1]. Η κατανόηση αυτής της περιβάλλον ανοσοκατασταλτική όγκου και αναστροφή με στοχευμένες παράγοντες που αποδεικνύεται ότι είναι μια άκρως επιτυχημένη στρατηγική θεραπείας [2].

Η χειρουργική εκτομή είναι ο στυλοβάτης της θεραπεία για την θεραπευτική πρόθεση σε στερεά κακοήθειες. Ακόμη και με πλήρη εκτομή, πολλοί ασθενείς αναπτύσσουν τοπική υποτροπή ή μεταστάσεις και τελικά πεθαίνουν από τη νόσο τους [3-6]. Συσσωρευμένα στοιχεία δείχνουν μια συσχέτιση μεταξύ της παρουσίας των CD8

+ δραστικά Τ κύτταρα και βελτιωμένη πρόγνωση και την επιβίωση σε ένα αριθμό στερεών κακοηθειών, συμπεριλαμβανομένου του μαστού, των ωοθηκών, του παχέος εντέρου, καρκίνωμα νεφρικών κυττάρων, και του κακοήθους μελανώματος [7-9].

Αυτή η ένωση δείχνει ότι η παρουσία μιας ισχυρής κατά του όγκου άνοσο αντίδραση, ιδίως κατά του όγκου CD8

+ ενεργά Τ κύτταρα, μπορεί να αποτρέψει ή να εξαλείψει ελάχιστης υπολειμματικής νόσου ή μικρομεταστάσεων ακόλουθη πλήρη χειρουργική εκτομή του πρωτογενούς όγκου.

η ομάδα μας και άλλοι απέδειξαν ότι η άμεση μετεγχειρητική περίοδος είναι μια μοναδικά ευαίσθητα χρόνος για την ανάπτυξη των μεταστάσεων του καρκίνου υποτροπής [3, 4, 10]. Υπάρχει ένας αριθμός μηχανισμών που προτείνονται για να εξηγήσουν αυτό το φαινόμενο συμπεριλαμβανομένης της διάδοσης των καρκινικών κυττάρων στην κυκλοφορία [11], τοπική και συστηματική απελευθέρωση προ-αγγειογενετική και μιτογόνος μεσολαβητών (επιδερμικού αυξητικού παράγοντα και αγγειακού ενδοθηλιακού αυξητικού παράγοντα) [3, 10, 12 ] και βαθιά αναστολή της κυτταρικής ανοσίας [3, 10]. Έχουμε εμπλακεί προηγουμένως σε χειρουργική επαγόμενη καταστολή φυσικών φονικών κυττάρων (ΝΚ) στην ανάπτυξη της μετεγχειρητικής μεταστάσεων [3, 4] σε ένα επικυρωμένο μοντέλο ζώου της χειρουργικής στρες και των μεταστάσεων [13].

Ενώ προηγούμενες μελέτες έχουν ανέφεραν μείωση σε CD8

+ Τ κυττάρων και μειωμένη έκκριση κυτοκίνης σε απόκριση προς μη-ειδική διέγερση [14-17], κανένας δεν έχει διερευνηθεί η φύση των αποτελεσμάτων της χειρουργικής στρες επί ειδικού αντιγόνου CD8

+ Τ κυτταρικές αποκρίσεις ούτε έχουν αποδείξει την κατάργηση της προϋπάρχουσας προστατευτική αντικαρκινική CD8

+ Τ κυτταρική απόκριση. Σε αυτό το χειρόγραφο, έχουμε διερευνήσει τις επιπτώσεις της χειρουργικής άγχος σε ένα προστατευτικό CD8

+ ενεργά Τ κύτταρα ανοσία που προκαλείται από αντι-όγκου. Για να επιτευχθεί αυτό, χρησιμοποιούμε ένα εμβόλιο όγκου ιογενή-φορέα με βάση ονομάζεται AdDCT. Αυτή είναι μια αντιγραφή-ανίκανος Ε1 /Ε3-διαγράφεται ανθρώπου τύπου 5 αδενοϊού (Ad) που εκφράζει την dopachrome ταυτομεράσης (ΗϋΟΤ) γονίδιο πλήρους μήκους ανθρώπινο [18] ως ένα αντιγόνο που σχετίζεται με όγκο (ΤΑΑ). Έχει προηγουμένως δειχθεί ότι η προφυλακτική AdDCT εμβολιασμός μπορεί να προσδώσει προστασία έναντι υποδορίως (sc) εμφυτεύονται μελανώματος σε ένα CD8

+ Τ κυττάρου με τρόπο που εξαρτάται [18-21]. Παρέχουμε προκλινικές

in vivo

αποτελέσματα που δείχνουν σαφώς ότι η σημαντική χειρουργική επέμβαση μπορεί να μετριάσει σημαντικά την προϋπάρχουσα προστατευτικά Τ κυττάρων ανοσολογική απόκριση μετά τον εμβολιασμό του καρκίνου και να παρέχουν τη νέα χρήση της προεγχειρητικής ανοσοθεραπείας για να αντιστραφεί αυτό το αποτέλεσμα.

Υλικά και Μέθοδοι

ποντίκια

C57BL /6, BALB /c, και CD1-nude ποντίκια αγοράστηκαν από το Εργαστήριο Jackson (Bar Harbor). Τα ζώα στεγάστηκαν σε συνθήκες ελεύθερες παθογόνων και όλες οι μελέτες που διεξήχθησαν ήταν σύμφωνα με τις οδηγίες του ιδρύματος στην εγκατάσταση Φροντίδα Ζώων Κτηνιατρική Υπηρεσία του Πανεπιστημίου της Οττάβα (Οντάριο). Το Καναδικό Συμβούλιο για την φροντίδα των ζώων και την Επιτροπή Φροντίδας Ζώων του Πανεπιστημίου της Οτάβα ενέκρινε την εν λόγω μελέτη.

Δημιουργία χειρουργικής άγχος

Τακτική περιεγχειρητική φροντίδα (συμπεριλαμβανομένης της αναισθησίας και της διαχείρισης του πόνου) και χειρουργικές άγχος ήταν πραγματοποιήθηκε όπως περιγράφηκε προηγουμένως [3, 13]. Εν συντομία, οι ποντικοί υποβλήθηκαν σε 2.5% ισοφλουράνιο (Baxter Corp.) για εισαγωγή και διατήρηση της αναισθησίας. Χειρουργικά στρες προκλήθηκε σε ποντικούς με ένα κοιλιακό λαπαροτομία (3-cm μέσης γραμμής τομή) και το αριστερό νεφρεκτομή (Νχ). Όλα τα ζώα που υποβάλλονται σε χειρουργικές επεμβάσεις θα λάβουν προ και μετεγχειρητικές ενέσεις βουπρενορφίνη (0,05 mg /kg) χορηγείται SC. Προεγχειρητικά, οι ποντικοί εγχέονται SC 1 ώρα πριν από τη χειρουργική επέμβαση. Μετεγχειρητικά, οι ποντικοί εγχέονται SC κάθε 8 ώρες για 2 ημέρες. Το σωματικό βάρος και άλλες πτυχές της ευεξίας των ζώων καταγράφονται καθημερινά μετά τη χειρουργική επέμβαση (S1 πίνακα). δεδομένα αίμα δεν συλλέγονται. Τα ποντίκια υποβλήθηκαν σε ευθανασία με ενδοπεριτοναϊκή ένεση (ip) νατριούχου πεντοβαρβιτάλης (65 mg /kg).

Οι κυτταρικές σειρές

B16F10LacZ μελανώματος κυτταρική γραμμή ελήφθη από τον Dr. Κ Graham (Λονδίνο Επιστημών Υγείας, Ontario , αρχικά από την American Type Culture Collection) και διατηρήθηκαν σε πλήρες DMEM. Τα κύτταρα επαναιωρήθηκαν σε DMEM χωρίς ορό για ενδοφλέβια (IV) έγχυση μέσω της πλευρικής φλέβας της ουράς. Τα καρκινικά κύτταρα στο & gt? 95% βιωσιμότητα εγχύθηκαν σ ‘έναν όγκο 0.1 ml /ποντίκι

εμβολιασμός ποντικών

αναισθητοποιημένων ποντικών εμβολιάστηκαν με 1×10

6 μονάδες σχηματισμού πλάκας (PFU) του. AdDCT (ανασυσταθεί σε 100μl PBS) ή PBS μόνο με ενδομυϊκή (ΙΜ) ένεση σε κάθε μηρό (50 μλ ανά μηρό).

μοντέλα όγκων προληπτικός εμβολιασμός

τα ποντίκια εμβολιάστηκαν με AdDCT ή PBS την ημέρα 0. Την ημέρα 7, τα ποντίκια ενέθηκαν με καρκινικά κύτταρα είτε υποδορίως ή ενδοφλεβίως πριν από την επέμβαση. όγκοι Sc μελανώματος ιδρύθηκαν με την έγχυση 3×10

5 B16F10lacZ κυττάρων σε μέσα χωρίς ορό στο δεξί πίσω πλευρά? το μέγεθος του όγκου μετρήθηκε δύο φορές την εβδομάδα και οι όγκοι των όγκων υπολογίστηκαν χρησιμοποιώντας τον τύπο 1/2 (L Χ W

2). Τα ποντίκια ήταν αποφασισμένοι να έχουν φτάσει τελικό σημείο όταν ο όγκος του όγκου έφθασε τα 1.600 χιλιοστά

3. Συστημική μοντέλα διάδοσης σπάρθηκαν σε 1×10

6 B16F10lacZ κύτταρα μέσω ενδοφλέβια χορήγηση φλέβα της ουράς. Έφεραν όγκο πνευμόνων βάφτηκαν με Χ-gal για να απεικονίσει μικρομεταστάσεων όγκου όπως περιγράφηκε προηγουμένως [3].

μοντέλο όγκου θεραπευτικός εμβολιασμός

Ποντίκια ενέθηκαν sc με 1×10

5 κύτταρα B16F10lacZ σε μέσα χωρίς ορό επί πλευρό του δεξιού οπισθίου την ημέρα 0. την ημέρα 7, τα ποντίκια υποβλήθηκαν σε αγωγή με AdDCT ή PBS στην ενδεικνυόμενη δόση (pfu). Την ημέρα 14, οι όγκοι sc αποκόπηκαν με ένα 2×2 mm θετικό περιθώριο, με το μισό λαμβάνουν πρόσθετη χειρουργική άγχος με τη μορφή της κοιλιακής λαπαροτομία και αριστερά νεφρεκτομή. Το μέγεθος του όγκου μετρήθηκε δύο φορές την εβδομάδα και οι όγκοι των όγκων υπολογίστηκαν χρησιμοποιώντας τον τύπο 1/2 (L Χ W

2). Τα ποντίκια ήταν αποφασισμένοι να έχουν φτάσει τελικό σημείο όταν ο όγκος του όγκου έφθασε τα 1.600 χιλιοστά

3. Για προεγχειρητική θεραπεία ΙΡΝα (R &? D Systems), τα ποντίκια έλαβαν 1 υψηλή δόση (10.000 IU) κατά την ημέρα 10 και 3 χαμηλές δόσεις (1000 IU) κατά τις ημέρες 11 έως 13.

Τα πεπτίδια

το ανοσοκυρίαρχο πεπτίδιο από DCT που συνδέεται με H-2K

b (DCT

180-188, SVYDFFVWL? συμμερίζονται ανθρώπου και ποντικού DCT). συντέθηκε από Biomer Τεχνολογίας (Pleasanton, Καλιφόρνια)

η κυτταρομετρία ροής

για εξωκυτταρικό χρώση, σπληνοκύτταρα επωάστηκαν για 30 λεπτά στους 4 ° C στο σκοτάδι με fluorochrome- συζευγμένα αντισώματα (αραιωμένα 1: 100) ειδικά για αντιγόνα κυτταρικής επιφάνειας και σταθεροποιήθηκαν με 1% PFA. Τα ακόλουθα αντισώματα χρησιμοποιήθηκαν: CD3-PerCP (Biolegend), CD8α- FITC (BD Biosciences), CD4-ΡΕ (BD Pharmingen), Gr-1-FITC (eBioscience), CD25-FITC (Biolegend), FoxP3-APC (eBioscience ), CD11c-PeCy7 (eBioscience) και CD11b-PE (eBioscience). Για ενδοκυτταρική χρώση, 1-2×10

6 σπληνοκύτταρα διεγείρονται με DCT πεπτίδια (2 μg /ml) με την παρουσία του brefeldin Α (GolgiPlug? BD Pharmingen, 1 μg /ml προστίθενται μετά 1,5 ώρες επώασης). Μετά από 6 ώρες επώασης, τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε αγωγή με αντι-CD16 /CD32 και των αντιγόνων κυτταρικής επιφάνειας σημάνθηκαν με συζευγμένο με ένα φθοριόχρωμα αντισώματα. Τα κύτταρα στη συνέχεια κατέστησαν διαπερατά και σταθεροποιήθηκαν με Cytofix /Cytoperm (BD Pharmingen) και χρωματίζονται για ενδοκυτταρική κυτοκινών: ΙΡΝγ-ΡΕ (BD Biosciences), TNFα-PeCy7 (Biolegend) και Granzyme Β-APC (eBioscience). Τα δεδομένα που αποκτήθηκαν με χρήση ροής Cyan-ADP 9 κυτταρομετρητή με τη σύνοδο κορυφής 4.3 του λογισμικού (Beckman Coulter) και αναλύθηκαν με Καλούζα 1.2 του λογισμικού (Beckman Coulter).

DCT-ειδική ανάλυση MHCI τετραμερούς και ELISpot

σπληνοκύτταρα υπέστησαν αγωγή με αντι-CD16 /CD32 και επισημασμένα με ΡΕ-συζευγμένο DCT

180-188 φορτωμένων με πεπτίδιο MHC-I τετραμερούς (Baylor College), PerCP-CD3, και FITC-CD8α (eBioscience) για 30 λεπτά σε FACS ρυθμιστικό διάλυμα (1% PBS, 5% ορό εμβρύου μόσχου, 2,5% Naz). Για τις αναλύσεις ELISpot, ο ακριβής αριθμός των DCT-ΜΗΟΙ τετραμερούς

+ /CD8

+ Τ κύτταρα υπολογίστηκαν από τα αποτελέσματα κυτταρομετρίας ροής αναλογία και προστίθεται σε ένα ΙΡΝγ ELISpot ακολουθώντας τις οδηγίες του κατασκευαστή (Mabtech).

T κυτταρικής απόπτωσης

δοκιμασία

σπληνοκύτταρα υποβλήθηκαν σε αγωγή με αντι-CD16 /CD32 και των αντιγόνων κυτταρικής επιφάνειας σημάνθηκαν με ΡΕ-CD3 και FITC-CD8α (eBioscience). Τα κύτταρα στη συνέχεια επισημάνθηκαν με APC-Αηηβχίην και 7-AAD (BD Pharmingen) επί 15 λεπτά και τα δεδομένα αποκτήθηκε στο Cyan-ADP (Beckman Coulter) μέσα σε μια ώρα.

BrdU Τ κυτταρικό πολλαπλασιασμό δοκιμασία

κύτταρα σπλήνας διεγέρθηκαν πάλι in vitro με πεπτίδια (2 μg /ml) στους 37 ° C υπό την παρουσία brefeldin Α (GolgiPlug? BD Pharmingen, 1 μg /ml προστίθενται μετά 1,5 ώρες επώασης). Μετά από 3,5 ώρες επώασης, τα κύτταρα σημάνθηκαν με BrdU (BD Pharmingen) και επωάστηκε για μία επιπλέον ώρα. Μετά από 6 ώρες επώασης, τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε αγωγή με αντι-CD16 /CD32 και των αντιγόνων κυτταρικής επιφάνειας σημάνθηκαν με PerCP-CD3 και ΡΕ-CD8α. Ακολουθώντας τις οδηγίες του κατασκευαστή, τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία μέσω σειράς permeabilizations και στερεώσεις και χρωματίζονται για ενδοκυτταρική FITC-BrdU.

MDSC-T καταστολή κυττάρων

δοκιμασία

Τ κύτταρα απομονώθηκαν από τις σπλήνες ποντικών που έλαβε AdDCT εμβολιασμός 7 ημέρες πριν από τη συγκομιδή. MDSCs απομονώθηκαν από τις σπλήνες ελέγχου και χειρουργικά τόνισε ποντίκια (18 ώρες μετά την εγχείρηση). Τ κύτταρα θετικώς επιλέχθηκαν για χρήση μικροσφαιριδίων CD90.2 (Miltenyi Biotec) και MDSC θετικά επελέγησαν για χρήση μυελοειδούς προερχόμενοι Kit κατασταλτικών κυττάρων Απομόνωση (Miltenyi Biotec), και τα δύο ακόλουθα πρωτόκολλα του κατασκευαστή. Τα κύτταρα επαναιωρήθηκαν σε 1 × 10

6 κύτταρα /50 μλ cRPMI και συν-καλλιεργήθηκαν σε διάφορες MDSC: Τ αναλογίες (0,25: 1, 0,5: 1, 1: 1). CD3 /CD28 Dynabeads (Life Technologies) προστέθηκαν στην καλλιέργεια σε μια αναλογία 1: 1 bead- to-κύτταρο εκτός από 30 U /mL του ποντικού ανασυνδυασμένης ιντερλευκίνης-2 σύμφωνα με τη σύσταση του κατασκευαστή. Τα κύτταρα στη συνέχεια καλλιεργήθηκαν για 4 ημέρες σε ένα CO

2 επωαστήρα στους 37 ° C. Μετά από 4 ημέρες, τα κύτταρα μεταφέρθηκαν σε ένα V- πλάκα πυθμένα 96 φρεατίων για την εκ νέου διέγερση με DCT πεπτίδιο χρησιμοποιώντας το πρωτόκολλο που αναφέρονται παραπάνω για ενδοκυτταρική χρώση.

Στατιστική ανάλυση

μονόδρομη ανάλυση της διακύμανσης (ANOVA) και η post hoc δοκιμασία Bonferonni πραγματοποιήθηκαν για όλα τα δεδομένα. Μια τιμή Ρ & lt? 0,05 θεωρήθηκε σημαντική. Η στατιστική σημαντικότητα των καμπυλών επιβίωσης Kaplan-Meier προσδιορίστηκαν χρησιμοποιώντας τεστ log-rank.

Αποτελέσματα

Χειρουργική στρες βλάπτει αντικαρκινική ανοσία, με αποτέλεσμα μετάσταση στους πνεύμονες και υποδόρια ανάπτυξη όγκου

Για να προσδιορίσετε η επίδραση των χειρουργικών στρες στο ΤΑΑ-ειδικά Τ κύτταρα, έχουμε αναπτύξει ένα μοντέλο AdDCT χειρουργική εμβολιασμό. Με τη χρήση καθιερωμένων B16F10lacZ μελανώματος πνεύμονα μοντέλο μας επέμβαση μετάσταση [3, 13], που χορηγείται εισαγωγική AdDCT ακολούθησαν 7 ημέρες αργότερα με τον εμβολιασμό του όγκου με ενδοφλέβια ένεση και σημαντική χειρουργική επέμβαση με λαπαροτομία και νεφρεκτομή (Σχήμα 1α). Ο εμβολιασμός με 1×10

6 pfu του AdDCT ανατίθενται 3-φορές μείωση σε μεταστάσεις σε σύγκριση με ποντικούς αγωγής PBS ελέγχου. Ωστόσο, τα εμβολιασμένα ποντίκια υποβλήθηκαν σε σοβαρή χειρουργική επέμβαση έδειξαν μια 5-πλάσια αύξηση σε σύγκριση με μεταστάσεις εμβολιασμό μόνο (Σχήμα 1β). Αυτό υποδηλώνει ότι η χειρουργική επέμβαση μειώνει την αντικαρκινική ανοσία που παρέχεται από AdDCT εμβολιασμό.

(α) ποντίκια Β6 χορηγήθηκαν με εισαγωγική AdDCT σε 1 × 10

7 pfu. Την ημέρα 7, οι ποντικοί προκλήθηκαν ίν με 3×10

5 κυττάρων B16F10lacZ προκειμένου να καθοριστεί συγγενικά μεταστάσεις μελανώματος πνεύμονα, και στη συνέχεια υποβλήθηκαν σε κοιλιακή laparatomy και νεφρεκτομή (Nx) ή καμία χειρουργική επέμβαση. (Β) Οι πνεύμονες εκχυλίζονται κατά την ημέρα 10 (3 ημέρες μετά τον εμβολιασμό των καρκινικών κυττάρων) από PBS, Nx, AdDCT, AdDCT + Νχ και ποσοτικά με χρώση με X-Gal. Ν = 5 /ομάδα. (Γ) ποντίκια Β6 εμβολιάστηκαν με AdDCT, στη συνέχεια αμφισβήτησε την ημέρα 7 με sc 1×10

κύτταρα 6 B16F10lacZ, στη συνέχεια υποβλήθηκε σε χειρουργική επέμβαση ή καμία χειρουργική επέμβαση. (Δ) Ο όγκος του όγκου των ποντικών που έφεραν θεραπεία B16F10lacZ sc όγκου παρακολουθούνται καθημερινά. (Ε) Η επιβίωση των ποντικών που φέρουν όγκο αγωγή B16F10lacZ sc φαίνονται στις καμπύλες Kaplan-Meier. Ποσοστό ζώντων ποντικών υποδεικνύεται. N = 7-8 /ομάδα, (* Ρ & lt? 0,05, *** Ρ & lt? 0.001).

Η

Έχει προηγουμένως δειχθεί ότι iv εγχυθεί κύτταρα μελανώματος είναι πιο επιρρεπή σε προκαλούμενη από κύτταρο λύση ΝΚ σε σύγκριση με sc μελάνωμα, σε μεγάλο μέρος οφείλεται σε διαφορές στην μικροπεριβάλλον του όγκου και του ανοσοποιητικού αναλογίες κυττάρων [22, 23]. Να αποκλείσει έναν μεσολαβητικό ρόλο για τα κύτταρα ΝΚ, πραγματοποιήσαμε την πρόκληση του όγκου χρησιμοποιώντας μια υποδόρια ένεση των κυττάρων του όγκου B16F10lacZ στην πίσω πλευρά (Σχήμα 1γ). Σε AdDCT-εμβολιασμένα ποντίκια που δεν υποβλήθηκαν σε χειρουργική στρες, 100% απέρριψε μια επακόλουθη πρόκληση όγκου, ενώ όλα τα ποντίκια που υποβλήθηκαν σε μείζονα χειρουργική επέμβαση κατά τη στιγμή της όγκου πρόκληση ανέπτυξαν όγκους πλευρά με ρυθμό παρόμοιο με τα ποντίκια un-εμβολιασμένα ελέγχου (Σχήμα 1δ και 1ε). Επιπλέον, παρατηρήσαμε την εξασθένηση της προϋπάρχουσα ανοσία κατά του όγκου με χειρουργική στρες σε ορθοκολικό καρκίνο μοντέλο CT26 (S1 Σχήμα), γεγονός που υποδηλώνει ότι η χειρουργική επέμβαση που προκαλείται από δυσλειτουργία του όγκου-ειδική ανοσία δεν είναι αποκλειστική στο μοντέλο μελανώματος μας. Λαμβανόμενα μαζί, αυτά τα αποτελέσματα υποδηλώνουν ότι η χειρουργική στρες σε AdDCT εμβολιασμένα ποντίκια καταργεί μια προστατευτική αντινεοπλασματική ανοσοαπόκριση.

επαγόμενη Χειρουργική κατάργησης της προστασίας που παρέχεται από AdDCT εμβολιασμού εξαρτάται από CD3

+ κυττάρων Τ

για να καταδειχθεί μεσολαβητικό ρόλο για το ανοσοποιητικό σύστημα προσαρμοζόμενου σε χειρουργική επέμβαση που προκαλείται από βλάβη του προστατευτικού εμβολιασμού AdDCT, επαναλάβαμε το μοντέλο πρόκλησης όγκου sc σε CD-1 γυμνούς ποντικούς που είναι ελλιπείς σε Τ και Β κύτταρα, αλλά διατηρούν ΝΚ κύτταρο λειτουργία [24] (Σχήμα 2α). Σε γυμνούς ποντικούς, AdDCT εμβολιασμός δεν προστατεύει τα ποντίκια σχηματίζουν μια πρόκληση όγκου και χειρουργικές στρες δεν είχε ως αποτέλεσμα μια σημαντική διαφορές στην επιβίωση σε AdDCT-εμβολιασμένα ποντίκια (Σχήμα 2β). Αυτό υποδηλώνει ότι το προσαρμοστικό ανοσοποιητικό σύστημα είναι σημαντικό για τις προστατευτικές επιδράσεις της AdDCT εμβολιασμού και τις αρνητικές επιπτώσεις της χειρουργικής στρες έκφυση του όγκου στο μοντέλο μας. Για τη δημιουργία Τ κύτταρα ως μεσολαβητής τόσο για την προστασία του όγκου μετά AdDCT εμβολιασμού και για την ευαισθησία στην ανάπτυξη όγκου μετά από μείζονα χειρουργική επέμβαση, μπορούμε θετώς μεταφέρθηκε 1.0×10

7 καθαρισμένο σπληνός CD3

+ Τ κύτταρα από AdDCT-εμβολιασμένα ποντίκια και από χειρουργικά τόνισε AdDCT εμβολιασμένα ποντίκια σε αφελείς παραλήπτη ποντίκια. 1 ημέρα μετά τη μεταφορά Τ κυττάρων, δέκτες ποντικοί προκλήθηκαν με όγκους sc B16F10lacZ (Σχήμα 2c). Η επιβίωση παρακολουθήθηκε συναρτήσει του χρόνου. Τα ποντίκια που έλαβαν Τ κύτταρα από εμβολιασμένα δότες ήταν 90% προστατεύονται από την πρόκληση Β16 όγκου, ενώ εκείνα που έλαβαν τον ίδιο αριθμό των Τ κυττάρων από χειρουργικά τόνισε εμβολιασμένα δότες όλες οι ανεπτυγμένες προοδευτική όγκους πλευρό (Σχήμα 2d). Μεταφέροντας χειρουργικά τόνισε Τ κύτταρα και να δημιουργήσει εκ νέου το αποτέλεσμα της χειρουργικής επέμβασης στην προστατευτικού εμβολιασμού, διαπιστώσαμε ότι η επιβλαβής επίδραση της χειρουργικής επέμβασης για AdDCT εμβολιασμός Τ κύτταρο.

(α) CD-1 γυμνούς ποντικούς εμβολιάστηκαν με 1 × 10

7 pfu AdDCT. Την ημέρα 7, οι ποντικοί προκλήθηκαν με όγκους sc B16F10lacZ και στη συνέχεια υποβλήθηκε σε χειρουργική επέμβαση ή καμία χειρουργική επέμβαση. (Β) επιβίωσης των υπό θεραπεία B16F10lacZ φέρει όγκο CD-1 γυμνούς ποντικούς φαίνονται στις καμπύλες Kaplan-Meier. Ποσοστό ζώντων ποντικών υποδεικνύεται. Ν = 7-8 /ομάδα. (Γ) οι ποντικοί Β6 εμβολιάστηκαν με 1×10

7 pfu AdDCT και την ημέρα 7, τα ποντίκια υποβλήθηκαν σε χειρουργική επέμβαση ή καμία χειρουργική επέμβαση. Την ημέρα 8, σπλήνα CD3

+ Τ κύτταρα απομονώθηκαν και μεταφέρθηκαν σε naive ποντικούς παραλήπτη Β6. Την ημέρα 9, αποδέκτης ποντίκια προκλήθηκαν με όγκους sc B16F10lacZ. (Δ) Η επιβίωση των επεξεργασμένων B16F10lacZ ποντικούς που φέρουν όγκο δείχνονται στο Kaplan-Meier θεραπείες. Ποσοστό ζώντων ποντικών υποδεικνύεται. N = 7-8 /ομάδα.

Η

Χειρουργική αποτελέσματα στρες σε μία μείωση σε CD8

+ Τ κυττάρων παραγωγής κυτοκινών σε απόκριση προς ΤΑΑ

Από χειρουργικό στρες οδήγησε σε εξασθένηση του Τ κυττάρων με τη μεσολάβηση εκκαθάριση των καρκινικών κυττάρων

in vivo

, ρωτήσαμε αν προκαλείται από AdDCT Τ παραγωγή κυττάρων κυτταροκινών σε απάντηση της ΤΑΑ (DCT) επηρεάζεται από τη χειρουργική επέμβαση. Χρησιμοποιώντας το ίδιο μοντέλο εισαγωγική εμβολιασμού AdDCT ακολουθούμενη από τον εμβολιασμό του όγκου και σημαντική χειρουργική στρες 7 ημέρες αργότερα, αξιολογήσαμε την έκκριση κυτοκίνης σε DCT-ειδικά CD8

+ Τ-κύτταρα που απομονώνονται από τον σπλήνα στις 18 ώρες μετά την εγχείρηση. Παρατηρήσαμε μια σημαντική μείωση στα ποσοστά των CD8

+ Τ κύτταρα που εκκρίνουν ΙΡΝγ (Σχήμα 3α και 3β), TNFa (Εικόνα 3c) και Granzyme Β (Σχήμα 3D) σε απόκριση DCT πεπτίδιο διέγερση και η μείωση του αριθμού των CD8

+ Τ κύτταρα που εκκρίνουν ΙΡΝγ σε απόκριση σε μη-ειδική διέγερση με ΡΜΑ και ιονομυκίνη (S2 Εικ). Επιπλέον, πραγματοποιήσαμε μία δοκιμασία ELISPOT ΙΡΝγ να επιβεβαιώσουν ροής μας κυτταρομετρίας αποτελέσματα και βρήκε μια παρόμοια εξασθένηση του αριθμού των DCT-ειδικά CD8

+ Τ κύτταρα που παράγουν ΙΡΝγ μετά από μείζονα χειρουργική επέμβαση (Εικ 3ε και 3στ). Αυτά τα δεδομένα υποδεικνύουν ότι τα χειρουργικά αποτελέσματα στρες σε μείωση του αριθμού των ΤΑΑ-ειδικά CD8

+ Τ κυττάρων που εκκρίνουν κυτοκίνες κατόπιν DCT πεπτίδιο διέγερσης.

Β6 ποντικοί έλαβαν εισαγωγική εμβολιασμό με 1 χ 10

7 ρία AdDCT. Την ημέρα 7, οι ποντικοί προκλήθηκαν ίν με 3×10

5 κυττάρων B16F10lacZ προκειμένου να καθοριστεί συγγενικά μεταστάσεις μελανώματος πνεύμονα, και στη συνέχεια υποβλήθηκε σε χειρουργική επέμβαση ή καμία χειρουργική επέμβαση. Την ημέρα 8, τα ποντίκια θυσιάστηκαν και υποβλήθηκαν σε σπλήνα εκτίμηση ανοσοποιητικών κυττάρων. Ποσοστό DCT-ειδική (α) ΙΡΝγ

+, (γ) TNFα

+, (δ) Granzyme Β

+ CD8

+ Τ κύτταρα αντιδρούν στην DCT

έκθεσης 180-188 πεπτίδιο . (Β) Εκπρόσωπος κυτταρομετρία ροής διαγράμματα στιγμών DCT-ειδικών ΙΡΝγ

+ /CD8

+ Τ-κύτταρα αντιδρούν με DCT

180-188 έκθεσης πεπτιδίου. (Ε) Ποσοτικοποίηση των SFU σε δοκιμασία ELISPOT ΙΡΝγ. (Στ) Αντεπιστέλλον εκπρόσωπος εικόνες ΙΡΝγ ELISpot προσδιορισμού των CD8

+ Τ-αντιδρούν με DCT

180-188 έκθεσης πεπτιδίου. (* P & lt? 0.05, ** P & lt? 0,01, *** P & lt? 0.001)

Η

χειρουργικού τόνισε Τ κύτταρα εμφανίζουν μειωμένη έκκριση κυτοκινών, τον πολλαπλασιασμό και τη διήθηση του όγκου σε απάντηση ΤΑΑ

Προηγούμενες εκθέσεις έδειξαν μια παγκόσμια μείωση των CD8

+ Τ κυττάρων μετά από χειρουργική επέμβαση [10, 14]. Χρησιμοποιώντας το μοντέλο μας της AdDCT εμβολιασμός ακολουθείται από μείζονα χειρουργική επέμβαση 7 ημέρες αργότερα, αποδείξαμε επίσης μια μείωση των παγκόσμιων αριθμού των CD8

+ Τ κύτταρα απομονώθηκαν από τη σπλήνα 18 ώρες μετά το χειρουργείο (Σχήμα 4α). Η μείωση αυτή δεν ήταν δευτερογενής αυξημένο κυτταρικό θάνατο, όπως μετρήθηκε με Αηηβχίην και χρώση 7ΑΑΌ (Σχήμα 4β), αλλά συσχετίστηκε με μείωση του πολλαπλασιασμού των κυττάρων Τ, όπως μετράται με ενσωμάτωση BrdU εξής DCT-πεπτιδίου διέγερση (Σχήμα 4γ). Εμείς δίπλα προσπάθησε να προσδιορίσει αν η μείωση του αριθμού των CD8

+ Τ κυττάρων που εκκρίνουν κυτοκίνη σε απόκριση DCT ήταν δευτερεύουσα σε μείωση του ποσοστού των DCT-ειδικών CD8

+ Τ κύτταρα (δηλαδή Τ κύτταρα ικανά να δεσμεύουν DCT ) ή ένα λειτουργικό απομείωση της έκκρισης κυτοκίνης εξής DCT-διέγερση. Χρησιμοποιώντας ένα MHC τάξης Ι-ειδικό DCT τετραμερές, εμείς δεν έδειξαν μείωση του ποσοστού των DCT-ειδικών CD8

+ Τ κυττάρων μετά από χειρουργικές στρες σε εμβολιασμένα ποντίκια (Σχήμα 4d και 4e). Για να επιβεβαιωθεί ότι DCT-ειδικά CD8

+ Τ κύτταρα λειτουργικώς εξασθενημένη μετά από χειρουργική επέμβαση, μπορούμε επιστρώθηκαν ίσοι αριθμοί DCT τετραμερούς δέσμευσης CD8

+ Τ κυττάρων σε ένα ELISpot εξής DCT πεπτίδιο διέγερση και παρατηρήθηκε σημαντική μείωση του ΙΡΝγ έκκρισης (Σχήμα 4f). Επιπλέον, αξιολογήσαμε την κινητική της έκφρασης ΙΡΝγ σε DCT-ειδικά CD8

+ Τ κύτταρα σε διάφορα χρονικά σημεία μετά τον εμβολιασμό και τη χειρουργική επέμβαση και παρατηρούνται σε περίοδο ανάκαμψης της λειτουργικότητας των Τ κυττάρων μεταξύ μετεγχειρητική ημέρα (POD) 7 και POD 28 ( S3a και S3b σχήμα). Η παρατηρούμενη ανάκαμψη της λειτουργίας των Τ κυττάρων σε POD 28 συσχετίζεται επίσης με μια αντικαρκινική ανοσολογική απόκριση, όπως η χειρουργική επέμβαση, ανακτήθηκαν τα ποντίκια ήταν σε θέση να απορρίψει μια πρόκληση όγκου B16lacZ sc με την ίδια αποτελεσματικότητα όπως χωρίς ελέγχους χειρουργική επέμβαση (S3C σχήμα). Τέλος, αξιολογείται κατά πόσον CD8

+ μετανάστευση κυττάρων Τ στον όγκο επηρεάστηκε από τη χειρουργική στρες. Για να αντιμετωπιστεί αυτό, έχουμε εμβολιασμένα ποντίκια με AdDCT ακολουθείται 7 ημέρες αργότερα με υποδόρια ένεση κυττάρων όγκου αναμιγνύονται με ένα βύσμα Matrigel και μείζονα χειρουργική επέμβαση. βύσματα Matrigel αξιολογήθηκαν για λεμφοκύτταρα που διεισδύουν 3 ημέρες μετά την εμφύτευση. Τα δεδομένα μας αποδεικνύουν ότι τα CD8

+ Τ κύτταρα μειώθηκε κατά το ήμισυ στους όγκους του χειρουργικά τόνισε ποντικών, υποδεικνύοντας ότι η χειρουργική επέμβαση επηρεάζει ογκοάνοση διήθηση (Σχήμα 4 g). Λαμβανόμενα μαζί, αυτά τα αποτελέσματα προτείνουν ότι σημαντική χειρουργική επέμβαση οδηγεί σε μια συνολική μείωση σε CD8

+ Τ κύτταρα τα οποία δεν είναι δευτερεύων σε αυξημένο κυτταρικό θάνατο, αλλά σχετίζεται με την αναστολή του πολλαπλασιασμού. Το ποσοστό των DCT-ειδικών κυττάρων Τ δεν μειώνεται σε σχέση με τον παγκόσμιο αριθμό, αλλά οι υπόλοιπες DCT-ειδικών Τ κυττάρων είναι δυσλειτουργικά στην ικανότητά τους να εκκρίνουν ΙΡΝγ σε απόκριση στο αντιγόνο του όγκου. Τέλος, CD8

+ Τ κυτταρική διήθηση των όγκων είναι επίσης μειωμένη μετά από χειρουργική στρες.

Β6 ποντίκια έλαβαν εισαγωγική εμβολιασμός με 1 × 10

7 pfu AdDCT. Την ημέρα 7, οι ποντικοί προκλήθηκαν ίν με 3×10

5 κυττάρων B16F10lacZ προκειμένου να καθοριστεί συγγενικά μεταστάσεις μελανώματος πνεύμονα, και στη συνέχεια υποβλήθηκε σε χειρουργική επέμβαση ή καμία χειρουργική επέμβαση. Την ημέρα 8, τα ποντίκια θυσιάστηκαν και υποβλήθηκαν σε σπλήνα εκτίμηση ανοσοποιητικών κυττάρων. (Α) Συνολικός αριθμός των CD8

+ Τ κύτταρα, (β) συνολικός αριθμός των αννεξίνης V

– /7-AAD

– /CD8

+ T (live), Annexin V

+ /7-AAD

– /CD8

+ T (πρώιμη απόπτωση), Annexin V

+ /7-AAD

+ /CD8

+ T (τέλη απόπτωση) των κυττάρων, (c ) το ποσοστό των BrdU

+ /CD8

+ Τ κύτταρα, (δ) ποσοστό και (ε) εκπρόσωπο οικόπεδο dot του DCT-τετραμερούς

+ /CD8

+ Τ κύτταρα που αντιδρούν σε DCT

180-188 πεπτίδιο της έκθεσης, (στ) την ποσοτικοποίηση των SFU από DCT-τετραμερούς

+ /CD8

+ Τ κύτταρα που αντιδρούν σε DCT

180-188 έκθεση πεπτίδιο σε δοκιμασία ELISPOT ΙΡΝγ. (Ζ) Συνολικός αριθμός CD8

+ /CD3

+ Τ κύτταρα ανά mg όγκου από Β6 ποντίκια που προκλήθηκαν με όγκους sc B16F10lacZ αναμιγνύεται με Matrigel την ημέρα 7. Την ημέρα 10, τα βύσματα Matrigel αφαιρέθηκαν και αξιολογήθηκαν για το ανοσοποιητικό κυτταρική διήθηση με κυτταρομετρία ροής. Ν = 4-6 /ομάδα. (* Ρ & lt? 0,05, *** Ρ & lt? 0.001).

Η

Χειρουργική εξασθενεί την λειτουργία του εμβολίου σε ένα θεραπευτικό μοντέλο Β16 του ελάχιστης υπολειμματικής νόσου (MRD) και μπορεί να διασωθούν μερικώς με περιεγχειρητική ΙΡΝα

Λόγω των περιορισμών ενός προφυλακτικού μοντέλο του εμβολιασμού καρκίνου, έχουμε αναπτύξει ένα κλινικά σχετικό μοντέλο θεραπευτική Β16 μελανώματος της ελάχιστης υπολειμματικής νόσου (MRD) (Σχήμα 5α). Σε αυτό το μοντέλο, όλα τα ποντίκια είχαν όγκους πλευρό εμφυτεύονται την ημέρα 0 ακολουθείται από AdDCT εμβολιασμό την ημέρα 7, εκτομή του πρωτογενούς όγκου τους με ένα θετικό περιθώριο 2 mm σε ημέρα 14 για την προσομοίωση MRD σε ασθενείς ανθρώπινη επέμβαση καρκίνου, που ακολουθείται από επιπλέον χειρουργική στρες. Παρόμοια με την προφυλακτική μοντέλο, παρατηρήσαμε ότι AdDCT-εμβολιασμένα ποντίκια που έλαβαν μόνο εκτομή επέζησαν σημαντικά περισσότερο από AdDCT-εμβολιασμένα ποντίκια με επιπλέον χειρουργική στρες (Σχήμα 5β). Δεδομένων των κατασταλτικά αποτελέσματα της χειρουργικής επέμβασης σε προϋπάρχουσες DCT-ειδικά CD8

+ Τ κυτταρική ανοσία, χορηγήσαμε προεγχειρητική ανοσοθεραπεία κυτοκίνης με τη μορφή της θεραπείας ΙΡΝα για να διασώσει τη λειτουργία των Τ κυττάρων και τη βελτίωση της επιβίωσης (Σχήμα 5c). Παρατηρήσαμε ότι η μέση επιβίωση AdDCT εμβολιασμένων ποντικών που υποβλήθηκε σε εκτομή και νεφρεκτομή ήταν 17 ημέρες, ενώ η μέση επιβίωση παρατάθηκε για 27 ημέρες σε ποντικούς που υπέστησαν αγωγή περιεγχειρητική ΙΡΝα (Σχήμα 5d). Στη συνέχεια, εξετάσαμε άμεσα εάν η θεραπεία ΙΡΝα στο πλαίσιο των λειτουργιών εμβολιασμού AdDCT να βελτιωθεί DCT-ειδικές αποκρίσεις Τ κυττάρου. Είναι ενδιαφέρον, προεγχειρητική θεραπεία με ΙΡΝα δεν επηρέασαν σημαντικά την έκκριση κυτοκίνης (IFNγ και TNFα) από DCT-ειδικά CD8

+ Τ κύτταρα (S4 σχήμα). Λαμβανόμενα μαζί, αυτά τα αποτελέσματα καταδεικνύουν ότι μπορούμε να συνδυάσουμε την ανοσοθεραπεία με σημαντική χειρουργική επέμβαση για να παρατείνει την επιβίωση στην μετεγχειρητική περίοδο. Ωστόσο, άλλα κύτταρα-τελεστές (όπως είναι τα κύτταρα ΝΚ) μπορεί να διαδραματίσει έναν ρόλο πέραν DCT-ειδικά CD8

+ Τ κύτταρα στην διαμεσολάβηση τα ευεργετικά αποτελέσματα της ΙΡΝα.

(α) ποντικούς Β6 ενέθηκαν sc με 1×10

6 κύτταρα B16F10lacZ. Την ημέρα 7, οι ποντικοί εμβολιάστηκαν με AdDCT. Την ημέρα 14, οι όγκοι ανατμήθηκαν (Res) με 2 χιλιοστά περιθώριο +/- χειρουργικό στρες (Res + Νχ). (Β) Η επιβίωση των επεξεργασμένων B16F10lacZ ποντικούς που φέρουν όγκο φαίνονται στις καμπύλες Kaplan-Meier. Ν = 7-8 /ομάδα. γ) Η προεγχειρητική θεραπεία την ημέρα 10 με 1 υψηλή δόση (10.000 IU /ποντίκι) και τις ημέρες 11 έως 13 με 3 χαμηλές δόσεις (1000 IU /ποντίκι) του ανασυνδυασμένου mIFNα στο μοντέλο εμβολιασμού MRD. Επιβίωσης των υπό θεραπεία B16F10lacZ ποντικούς που φέρουν όγκο φαίνονται στις καμπύλες Kaplan-Meier. N = 5-6 /ομάδα.

Η

Χειρουργική επαγόμενη διαστολή του κοκκιοκυτταρικής MDSC εξασθενίζει Τ κυττάρου έκκριση κυτοκίνης

Τέλος, ερευνήσαμε τους μηχανισμούς καταστολής Τ κυττάρου σε ποντικούς που φέρουν όγκο παραλαβή εμβολιασμού και υποβάλλονται σε χειρουργικές στρες. Μυελοειδή Προέρχεται κατασταλτικά κύτταρα (MDSC) αντιπροσωπεύουν ένα πληθυσμό ανώριμων μυελοειδή κύτταρα που επεκτείνουν δραματικά κατά τη διάρκεια της εξέλιξης του όγκου και να βλάπτουν την προσαρμοστική ανοσία [25]. Σε ποντικούς υπάρχουν δύο πληθυσμοί MDSC ορίζεται από σχετική έκφραση τους Gr1 και λειτουργικής κατάστασης [26, 27]. Συγκεκριμένα, παρατηρήθηκε μια σημαντική αύξηση στο ποσοστό των σπλήνα κοκκιοκυτταρικής MDSC (gMDSC) σε χειρουργικά τόνισε και εμβολιασμένα ποντίκια (Σχήμα 6α), αλλά όχι μονοκυτταρική MDSC (mMDSC) (σχήμα 6Β) σε σύγκριση με τα εμβολιασμένα μάρτυρες χωρίς χειρουργική επέμβαση. Αντίθετα, δεν παρατηρήσαμε καμία διαφορά σε πληθυσμούς σπλήνα Τ ρυθμιστικών (Treg) μετά το εμβόλιο και η χειρουργική επέμβαση (Εικ 6γ). Για να αναλυθεί η ικανότητα της χειρουργικής επέμβασης προερχόμενων gMDSC να καταστείλει εμβόλιο ενεργοποιημένης λειτουργίας των Τ κυττάρων, σπληνικό gMDSC απομονώθηκαν από τον έλεγχο και χειρουργικά τόνισε ποντίκια και συν-καλλιεργήθηκαν με κύτταρα Τ από Ad-DCT-εμβολιασμένα ποντίκια. Με την παρουσία της χειρουργικής επέμβασης που προέρχεται gMDSC, την παραγωγή ΙΡΝγ (Σχήμα 6d) και ΤΝΡα (Σχήμα 6e) με CD8

+ DCT-ειδικά Τ κύτταρα αναστέλλεται σημαντικά σε απόκριση προς το πεπτίδιο DCT. Επιπλέον, θα αξιολογήσει κατά πόσον η προεγχειρητική θεραπεία ΙΡΝα μπορεί να αντιστρέψει τη συσσώρευση gMDSCs στο σπλήνα ποντικών μετά τον εμβολιασμό και τη χειρουργική επέμβαση (S5 σχήμα). Με μια πιο προσεκτική εξέταση, βρήκαμε ότι η προεγχειρητική θεραπεία ΙΡΝα δεν μειώνει την επέκταση των gMDSC σε ποντικούς όταν συγκρίνεται με ποντικούς εμβολιασμένους υποβάλλονται σε χειρουργική επέμβαση. Δείχνουμε επίσης ότι gMDSC κυτταρική επιφάνεια έκφραση της ενεργοποίησης δεικτών /ωρίμανση CD80 /CD86 δεν αλλοιώνονται εξής προεγχειρητική ΙΡΝα προτείνοντας ότι θεραπεία ΙΡΝα δεν επηρεάζει άμεσα gMDSC σύνθεση και λειτουργία στο σπλήνα.

Β6 ποντικοί προκλήθηκαν με B16F10lacZ όγκων, που ελήφθη AdDCT εμβολιασμό (ημέρα 7) και στη συνέχεια υποβλήθηκε σε χειρουργική επέμβαση, όπως περιγράφεται παραπάνω. Την ημέρα 8, τα ποντίκια θυσιάστηκαν και υποβλήθηκαν σε σπληνικά MDSC απομονώθηκαν για απαρίθμηση και λειτουργικές δοκιμασίες. Ποσοστό (α) κοκκιοκυτταρικής MDSC, (β) μονοκυτταρική MDSC και (γ) Τ ρυθμιστικά κύτταρα. Ποσοστό DCT-ειδική (δ) ΙΡΝγ

+ και (ε) TNFα

+ CD8

+ Τ κύτταρα από τον έλεγχο ή εμβολιασμένα ποντίκια αντιδρούν DCT

180-188 έκθεσης πεπτιδίου μετά από 4 ημέρες σε καλλιέργεια με τον έλεγχο ή χειρουργικά τόνισε MDSC. Ν = 4-6 /ομάδα. (* P & lt? 0.05, ** P & lt? 0,01, *** P & lt? 0.001).

Η

Συζήτηση

Η χειρουργική εκτομή είναι ο στυλοβάτης της θεραπείας για τις περισσότερες στερεές κακοήθειες, αλλά παρά πλήρης εκτομή, πολλοί ασθενείς λιμάνι MRD και τελικά πεθαίνουν υποτροπής [28]. εμβολίων κατά του καρκίνου είναι οι πλέον κατάλληλες για την εξάλειψη της MRD [22, 23, 29], προσφέροντας έναν ισχυρό λόγο να συνδυάσει τη χειρουργική επέμβαση και η ανοσοθεραπεία του καρκίνου κλινικές δοκιμές. Ωστόσο, ένα λογικά σχεδιασμένο κλινική δοκιμή του εμβολιασμού του καρκίνου πρέπει να λαμβάνει υπόψη την επίδραση της χειρουργικής άγχος στις απαντήσεις των Τ κυττάρων ΤΑΑ-ειδικά και των μηχανισμών που ευθύνονται αυτό.

Στην παρούσα μελέτη, αποδείξαμε ότι η παροδική, αλλά