Αφηρημένο

Στόχος

Η μετάσταση είναι η πιο κοινή αιτία θανάτου των ασθενών με καρκίνο του προστάτη. Ταυτοποίηση των ειδικών βιοδεικτών μετάσταση και νέων θεραπευτικών στόχων θεωρείται απαραίτητη για βελτιωμένη πρόγνωση και διαχείριση της ασθένειας. Τα microRNAs (miRNAs) αποτελούν μια κατηγορία μη-κωδικοποίησης μικρά μόρια RNA θεωρείται ότι είναι το κλειδί ρυθμιστές της γονιδιακής έκφρασης. απορύθμιση τους έχει αποδειχθεί ότι παίζουν ρόλο στην εμφάνιση του καρκίνου, την εξέλιξη και τη μετάσταση, και miRNAs αντιπροσωπεύουν μια πολλά υποσχόμενη νέα κατηγορία βιοδείκτες καρκίνου. Ο στόχος αυτής της μελέτης ήταν να προσδιοριστούν κατάντη και

Μέθοδοι

τεχνολογία αλληλουχίας up-ρυθμίζονται miRNAs στον καρκίνο του προστάτη που θα μπορούσε να παρέχει στους δυνητικούς βιοδείκτες ή /και θεραπευτικούς στόχους για τη μετάσταση του καρκίνου του προστάτη. Η επόμενη γενιά εφαρμόστηκε για τον προσδιορισμό εκφράζονται διαφορικά miRNAs σε ένα μεταμοσχεύσιμο μεταστατικού έναντι ενός μη μεταστατικού γραμμής ξενομοσχεύματος καρκίνου του προστάτη, και οι δύο προέρχονται από πρωτογενή καρκίνο ενός ασθενούς. Τα ξενομοσχεύματα αναπτύχθηκαν μέσω υπονεφρικής μεταμόσχευση κάψουλα του καρκίνου

ιστού

σε NOD /SCID ποντίκια, μια μεθοδολογία που τείνει να διατηρήσει τις ιδιότητες των αρχικών καρκίνων (π.χ., ετερογένεια του όγκου, γενετική προφίλ).

αποτελέσματα

διαφορικά εκφρασμένων γνωστό miRNAs, isomiRs και 36 νέα miRNAs εντοπίστηκαν. Ένας αριθμός αυτών των miRNAs (21/104) έχουν αναφερθεί προηγουμένως για να δείξει παρόμοια καθοδική ή ανοδική ρύθμιση σε καρκίνους του προστάτη σε σχέση με το φυσιολογικό ιστό προστάτη, και μερικοί από αυτούς (π.χ., miR-16, miR-34a, miR-126 *, miR-145, miR-205) έχουν συνδεθεί με τη μετάσταση του καρκίνου του προστάτη, υποστηρίζουν την εγκυρότητα της αναλυτικής προσέγγισης.

Συμπεράσματα

Η χρήση των μεταστατικών και μη μεταστατικό καρκίνο του προστάτη υπονεφρικάς ξενομοσχεύματα κάψουλα που προέρχεται από καρκίνο έναν ασθενή καθιστά πιθανό ότι τα διαφορικά εκφρασμένων miRNAs που προσδιορίζονται στην παρούσα μελέτη περιλαμβάνουν πιθανούς βιοδείκτες ή /και θεραπευτικών στόχων για την ανθρώπινη μετάσταση του καρκίνου του προστάτη

Παράθεση:. Watahiki Α, Wang Υ, Morris J, Dennis K, O’Dwyer HM, Gleave M, et al. (2011) Τα microRNAs συνδεδεμένες με μεταστατικό καρκίνο του προστάτη. PLoS ONE 6 (9): e24950. doi: 10.1371 /journal.pone.0024950

Επιμέλεια: Irina Agoulnik, Διεθνές Πανεπιστήμιο της Φλόριντα, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 25 Φλεβάρη του 2011? Αποδεκτές: 24 Αύγ του 2011? Δημοσιεύθηκε: 30 Σεπτεμβρίου 2011

Copyright: © 2011 Watahiki et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτή η μελέτη υποστηρίχθηκε από τις καναδικές Ινστιτούτα Υγείας Έρευνας (YZW /MG). YZW είναι αποδέκτης ενός Overseas Chinese Βραβείο Scholar από το Εθνικό Ίδρυμα Φυσικών Επιστημών της Κίνας (Όχι 30928027), και ο αποδέκτης ενός Βραβείο Καινοτόμου Μελετητή από το Διεθνές Καρκίνο Συμμαχία για την Έρευνα του Καρκίνου και Παιδείας και το Ίδρυμα ινωδοφυλλικό Καρκίνου. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:. Οι συγγραφείς δηλώνουν ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

καρκίνου

προστάτη είναι η πιο κοινή μορφή καρκίνου στους άνδρες και η δεύτερη κύρια αιτία θανάτου από καρκίνο στις Ηνωμένες Πολιτείες [1]. Ενώ οι σημαντικές πρόοδοι στη θεραπεία των εντοπισμένων, όγκους όργανο-περιορισμένο, ο καρκίνος του προστάτη είναι σήμερα ανίατη αφού έχει προχωρήσει σε μετάσταση, και οι περισσότεροι θάνατοι από αυτή την ασθένεια οφείλονται σε μεταστάσεις που είναι ιδιαίτερα ανθεκτικά σε συμβατικές θεραπείες. Επί του παρόντος, ειδικού προστατικού αντιγόνου (PSA) είναι ένας σημαντικός βιοδείκτης ορός που χρησιμοποιείται για την ανίχνευση και την παρακολούθηση της εξέλιξης του καρκίνου του προστάτη. Ωστόσο, η προγνωστική αξία των αυξημένων επιπέδων PSA είναι περιορισμένη, δεδομένου ότι προχωρημένο καρκίνο του προστάτη μπορούν να συσχετιστούν με πολύ χαμηλές ή κανονικές τιμές PSA. Υπάρχει, επομένως, επιτακτική ανάγκη για νέες, πιο συγκεκριμένες βιοδείκτες που μπορεί να χρησιμοποιηθεί για να προβλέψει την εξέλιξη του καρκίνου μόνοι τους ή σε συνεργασία με τις τρέχουσες βιοδεικτών όπως η PSA [2]. Επιπλέον, τα νέα θεραπευτικοί στόχοι που σχετίζονται με προστάτη μετάσταση καρκίνου χρειάζονται επειγόντως.

Τα microRNAs (miRNAs) είναι μικρά μη-κωδικοποίησης RNAs (17 έως 27 νουκλεοτίδια) που ρυθμίζουν αρνητικά την έκφραση γονιδίων στόχων με σύνδεση προς 3 ‘αμετάφραστες περιοχές (UTRs) των mRNA και αναστέλλοντας τη μετάφραση ή την προώθηση αποικοδόμηση του mRNA [3]. Πρόσφατες μελέτες έχουν δείξει απορύθμιση της miRNAs σε ανθρώπινους όγκους υποδεικνύοντας ένα ρόλο για τέτοια μόρια στην παθογένεση του καρκίνου, συμπεριλαμβανομένης της έναρξης του καρκίνου, την εξέλιξη και τη μετάσταση [4], [5]. Μέχρι στιγμής, μόνο ένας μικρός αριθμός από μελέτες έχουν διερευνήσει την έκφραση miRNA στον καρκίνο του προστάτη, και μόνο λίγα έχουν ασχοληθεί με μετάσταση της ασθένειας αυτής. Οι διαφορές στα προφίλ έκφρασης των miRNAs διαπιστώθηκε μέχρι τώρα μπορούν να έχουν προγνωστική αξία για τις διάφορες πτυχές της νόσου και την καλύτερη κατανόηση του ρόλου των miRNAs στην ανάπτυξη και εξέλιξη του καρκίνου του προστάτη είναι αναγκαία [6]. Περαιτέρω έρευνα μπορεί επίσης να οδηγήσει σε ταυτοποίηση νέων miRNAs που σχετίζονται ειδικά με την εξέλιξη του καρκίνου του προστάτη και μετάσταση. Τέτοια μετάστασης που σχετίζονται με miRNAs μπορεί να χρησιμεύσει ως μεταστατικό βιοδείκτες ή /και νέους στόχους για τη θεραπεία της μεταστατικής νόσου.

Οι μελέτες που αποσκοπούν στον εντοπισμό των γενετικών παραγόντων με τους βασικούς ρόλους στη μετάσταση του καρκίνου του προστάτη έχουν παρεμποδιστεί από την έλλειψη της βέλτιστης πειραματικά μοντέλα . Ενώ ξενομοσχεύματος μοντέλα που βασίζονται σε καθιερωμένες κυτταρικές γραμμές καρκίνου που αντιπροσωπεύουν διαφορετικά στάδια της εξέλιξης του καρκίνου μπορεί να είναι χρήσιμη για τον εντοπισμό των μηχανισμών που οδηγούν μετάσταση, δεν μιμούνται επαρκώς την κλινική νόσο [7]. Ως εκ τούτου, οι προσπάθειες έχουν επικεντρωθεί στην χρήση του καρκίνου του προστάτη ασθενών

ιστούς

. Ωστόσο, το τυπικό ετερογένεια τέτοιων ιστών, που αποτελείται από δύο μη μεταστατικό και δυνητικά μεταστατικό υποπληθυσμών, καθιστά δύσκολο να εντοπιστούν οι παράγοντες όπως τα γονίδια που αποτελούν τη βάση της ανάπτυξης της μετάστασης [8]. Επιπλέον, είναι δύσκολο να αποκτήσει μεταστατικό καρκίνο του προστάτη ιστούς από ασθενείς για πειραματικούς σκοπούς, δεδομένου ότι δεν είναι συνήθως ή εφικτούς βιοψία ή εκτομή από ασθενείς, και η ταχεία αυτοψία προγράμματα είναι εξαιρετικά ακριβό και δύσκολο στη διαχείρισή του. Για να ξεπεραστούν τα παραπάνω εμπόδια, αναπτύξαμε μοντέλα καρκίνου του προστάτη ξενομοσχεύματος επόμενης γενιάς που λαμβάνονται από ασθενή, που μοιάζουν περισσότερο με την κλινική κατάσταση, χρησιμοποιώντας υπονεφρικής μεταμόσχευση κάψουλα ιστού καρκίνου των ασθενών σε ανοσο-ανεπαρκή ποντίκια. Αυτή η μεθοδολογία ευνοεί τη διατήρηση των ιδιοτήτων των αρχικών καρκίνων [9] – [11]. Επιπλέον, κατέστη δυνατόν να διαπιστωθεί μεταμοσχεύσιμο, μεταστατικών και μη-μεταστατικών sublines καρκίνο του προστάτη από ετερογενή ξενομοσχεύματα [12], [13]. Χρήση των μεταστατικών και μη-μεταστατικών ξενομοσχεύματα έχει ήδη αποτελεσματική στην ταυτοποίηση καρκίνου του προστάτη γονιδίων μετάσταση σχετιζόμενη [13].

μαζικά παράλληλος της αλληλουχίας του DNA Illumina κατά τεχνολογία σύνθεσης είναι ευρέως υιοθετηθεί πλατφόρμα αλληλούχιση επόμενης γενιάς . Υποστηρίζει παράλληλη ανάλυση αλληλουχίας χρησιμοποιώντας ένα ιδιόκτητο αναστρέψιμη μέθοδος τερματισμού με βάση που επιτρέπει την ανίχνευση του ενιαίου βάσεων, όπως αυτές ενσωματώνονται σε αυξανόμενο κλώνους DNA. Ένα φθορισμικά-σημασμένο τερματιστή απεικονίζεται ως προστίθεται κάθε dNTP και στη συνέχεια διασπάται για να επιτραπεί η ενσωμάτωση του επόμενου βάσης. Δεδομένου ότι και οι τέσσερις αναστρέψιμη τερματισμού-δεσμεύεται dNTPs είναι παρόντα κατά τη διάρκεια κάθε κύκλου αλληλουχίας, φυσικό ανταγωνισμό ελαχιστοποιεί προκατάληψη ενσωμάτωση, που οδηγεί σε πραγματική βάση-με-βάση αλληλουχίας [14].

Στην παρούσα μελέτη, η τεχνολογία αλληλούχισης Illumina επόμενης γενιάς χρησιμοποιήθηκε για να συγκριθούν τα προφίλ miRNA ενός μεταμοσχεύσιμων μεταστατικού έναντι ενός μη μεταστατικού γραμμής ξενομοσχεύματος καρκίνου του προστάτη, και οι δύο προέρχονται μέσω νεφρική κάψα εμβολιασμό [10] – [12] από την πρωτογενή καρκινικό ιστό ενός ασθενούς. Διαφορικά εκφραζόμενο γνωστά και νέα miRNAs αποτελέσματα που μπορεί να έχουν συγκεκριμένους ρόλους στο μετάσταση του καρκίνου του προστάτη.

Υλικά και Μέθοδοι

μοντέλα καρκίνου του προστάτη ξενομοσχεύματος Patient προερχόμενο

NOD /SCID ποντίκια που χρησιμοποιήθηκαν για ξενομεταμόσχευση εκτράφηκαν και διατηρήθηκαν στο Μηχανισμό βρετανική Κολούμπια Κέντρο Έρευνας για τον Καρκίνο των ζώων (Βανκούβερ, Καναδάς). Όλα τα πειραματικά πρωτόκολλα εγκρίθηκαν από το Πανεπιστήμιο της Βρετανικής Κολομβίας Επιτροπή Φροντίδας Ζώων (A10-0100). Ένα δείγμα βιοψίας καρκίνου του προστάτη λήφθηκε στο BC Cancer Agency του με τη γραπτή συγκατάθεση του ασθενούς. Ηθικές έγκριση δόθηκε από το Πανεπιστήμιο της Βρετανικής Κολομβίας -. British Columbia Cancer Agency του Διοικητικού Συμβουλίου Δεοντολογίας Έρευνας (UBC BCCA REB # H04-60131)

Η δημιουργία μεταφυτεύσιμων προστάτη γραμμές ξενομοσχεύματος καρκίνου του ιστού μέσω υπονεφρικής μεταμόσχευση κάψουλα έχει περιγραφεί προηγουμένως [9]. Στην παρούσα μελέτη, ένα πρόσφατα παρασκευασμένα μεταστατικό προστάτη γραμμή ξενομοσχεύματος καρκίνου, LTL-313H [15], και ένα μη μεταστατικό ομόλογό του, LTL-313Β (αδημοσίευτο), χρησιμοποιήθηκαν που είχαν προέρχονται από διαφορετικούς τόπους της βιοψίας καρκίνου του προστάτη ενός ασθενούς δείγματος (www.livingtumorlab.com). Αμφότερες οι γραμμές ήταν PSA-και AR-θετικά, όπως φαίνεται μέσω ανοσοϊστοχημεία ([15]? Αδημοσίευτα δεδομένα). Αυτά συνήθως διατηρείται υπό νεφρική κάψουλες των αρσενικών ποντικών NOD /SCID συμπληρωμένο με τεστοστερόνη, όπως περιγράφηκε προηγουμένως [9]. Τα ξενομοσχεύματα LTL-313H έδειξε εισβολή του νεφρού ξενιστή ποντικού και τα καρκινικά κύτταρα ανιχνεύθηκαν στους πνεύμονες των ξενιστών μετά από 3 μήνες μεταμόσχευση. Σε αντίθεση, τα ξενομοσχεύματα LTL-313Β δεν έδειξε εμφανή εισβολή του νεφρού ποντικού και δεν έδειξαν καμία απομακρυσμένες μεταστάσεις (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται).

κατασκευή Μικρή βιβλιοθήκη RNA και cDNA αλληλούχιση

LTL- 313H και LTL-313Β ιστοί ξενομοσχεύματος συλλέχθηκαν και το RNA εκχυλίστηκε χρησιμοποιώντας ΤΚΙζοΙ (Invitrogen, Mississauga, ΟΝ, Canada) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Το RNA υποβλήθηκε στο Κέντρο Genome Sciences στο Βρετανικό Οργανισμό Columbia Cancer (www.bcgsc.bc.ca) για μικρές-RNA cDNA βιβλιοθήκη κατασκευή και αλληλούχιση όπως περιγράφηκε προηγουμένως [16] με μικρές τροποποιήσεις. Κάθε βιβλιοθήκη είχε μια ειδική αλληλουχία δείκτη σε 5 ‘προσαρμοστή του, δηλαδή «ACATCGA» για τη βιβλιοθήκη LTL-313H και «CGTGATA» για τη βιβλιοθήκη LTL-313Β? και οι δύο βιβλιοθήκες αναμείχθηκαν και η αλληλούχιση διεξήχθη σε μία κυψελίδα ροής σε πλατφόρμα της Illumina του.

χαρτογράφηση Μικρές RNA και τη διαφορική έκφραση

ανίχνευση

Ο 5 ‘αναπροσαρμόζονται αλληλουχίες cDNA χρησιμοποιήθηκαν για να διακρίνουν την προέλευση του τα RNA. 3 ‘αλληλουχίες μενου απομακρύνθηκαν από όλα διαβάζει και εκείνα τα υπόλοιπα ετικετών που ήταν 16 έως 27 νουκλεοτίδια σε μήκος και που εκφράζεται σε αριθμό ετικέτα 2 ή περισσότερο σε κάθε βιβλιοθήκη χρησιμοποιήθηκαν για περαιτέρω ανάλυση. Τα κομμένα ακολουθίες χαρτογραφήθηκαν σε miRBase 15 σειρές ανθρώπινων βλαστικών βρόχου (https://www.mirbase.org/) χρησιμοποιώντας το πρόγραμμα Novoalign (www.novocraft.com) που επιτρέπει μέχρι 3 αναντιστοιχίες. Εκείνοι που ταυτοποίησε μια αλληλουχία miRBase στη συνέχεια ομαδοποιούνται ως: 1) είναι γνωστές ώριμες miRNA και miRNA *, 2) υποθετική miRNA *, δεν έχουν αναφερθεί παλαιότερα στη miRBase, 3) σειρές βρόγχου και 4) αλληλουχίες που συμπλήρωσαν το loop-αλληλουχία αλλά δεν το έκανε οι γνωστές ώριμες ακολουθίες. Οι ακολουθίες που ταιριάζουν γνωστό miRNAs περαιτέρω συγκεντρωμένα, με βάση τις αρχικές τους θέσεις, και μετρήθηκαν. Τα πιο άφθονα ετικέτες θέση παραλλαγή /εκκίνησης χρησιμοποιήθηκαν για σύγκριση μεταξύ βιβλιοθηκών. μετρήσεις Tag κανονικοποιήθηκαν στις συνολικές μετρήσεις αυτές τις αλληλουχίες οι οποίες συμπίπτουν με τις miRBase 15 αλληλουχίες stem-loop και τις δύο βιβλιοθήκες συγκρίθηκαν για διαφορική έκφραση των αλληλουχιών χρησιμοποιώντας το ακριβές τεστ του Fisher με διόρθωση Bonferroni για. Ακολουθίες κρίθηκαν σημαντικά διαφορικά εκφράζονται από τις δύο βιβλιοθήκες, εάν η τιμή p ήταν & lt?. 0.001 και υπήρχε τουλάχιστον 2 φορές αλλαγή στην ομαλοποιημένη μετράει τις ακολουθίες »

ταυτοποίηση Μυθιστόρημα miRNA

Οι αλληλουχίες που δεν ταιριάζει με γνωστές αλληλουχίες stem-loop miRNA διηθούνται με γνωστές μεταγραφές ακολουθίες κατεβάσει από UCSC [17]. Για την ταυτοποίηση νέων υποψηφίων miRNA ανάμεσα στα υπόλοιπα απαράμιλλη αλληλουχιών, χρησιμοποιήθηκε το πρόγραμμα miRanalyzer [18] (https://web.bioinformatics.cicbiogune.es/microRNA/miRanalyser.php). Οι υποψήφιοι εξόδου ελέγχθηκαν ένα προς ένα για ομολογίες με γνωστά μη-κωδικοποίησης του RNA, και μη ομόλογες ακολουθίες ελήφθησαν ως νέων υποψηφίων miRNA.

πρόβλεψη στόχο miRNA και πορεία ανάλυσης

Τα γονίδια-στόχους για καθένα που εκφράζονται διαφορικά miRNA είχαν προβλεφθεί χρησιμοποιώντας MicroCosm έκδοση 5 [19], [20], με κατώτατο όριο των

p

= 0.001. Καθώς ορισμένα από τα γονίδια πιθανώς ρυθμίζεται από δύο up-ρυθμίζονται και τα κάτω-ρυθμίζονται miRNAs, εστιάσαμε για περαιτέρω ανάλυση σχετικά με τα γονίδια που δυνητικά ρυθμίζονται μόνο από τα πάνω ρυθμισμένα ή προς τα κάτω-ρυθμίζονται miRNAs. Ταυτοποίηση των οδών KEGG που σχετίζονται με πιθανά γονίδια-στόχους διεξήχθη με τη χρήση DAVID 6.7 (βάση δεδομένων για το σχολιασμό, την απεικόνιση και την Ολοκληρωμένη Discovery, https://david.abcc.ncifcrf.gov/). Επιπλέον, συγκρίναμε τις λίστες γονίδιο στόχο με δεδομένα γονιδιακής έκφρασης με δοκιμασία μικροσυστοιχιών χρησιμοποιώντας τα ίδια ξενομοσχεύματος ιστοί να εντοπίσει τους πιθανούς στόχους του που θα μπορούσε να ρυθμίζεται στο επίπεδο του mRNA.

ανάλυση γονιδιακής έκφρασης μικροσυστοιχιών

το RNA που χρησιμοποιήθηκε για τη βιβλιοθήκη αλληλούχιση miRNA χρησιμοποιήθηκε επίσης για την ανάλυση γονιδιακής έκφρασης του mRNA που βασίζεται χρησιμοποιώντας πλατφόρμα Ανθρώπινα GE 44K της Agilent κατά τη διευκόλυνση Κέντρο Βανκούβερ του προστάτη Microarray (www.mafpc.ca). Όλα τα δεδομένα είναι MIAME συμβατό και τα ανεπεξέργαστα δεδομένα έχουν κατατεθεί σε GEO (αριθμός ένταξης GSE28029). Το σήμα έκφραση μετατράπηκε σε βαθμολογία-z και υπολογίζονται z-αναλογία και τα mRNAs με περισσότερες από 1,96 Ζ-αναλογία εξετάστηκαν τα επάνω ρυθμισμένη και λιγότερο από -1,96 ως κάτω-ρυθμίζονται [21]. Τα δεδομένα επίσης φιλτράρεται από Σημαία.

Κυττάρων καλλιέργεια

Ο καρκίνος του προστάτη κυτταρική γραμμή 22Rv1 καλλιεργήθηκε σε RPMI-1640 συμπληρωμένο με 10% ορό εμβρύου βοός (FBS) στους 37 ° C σε μια υγροποιημένη ατμόσφαιρα που περιέχει 5% CO

2.

miRNA πρόδρομος διαμόλυνση

Ο πρόδρομος αλληλουχία του mir-486, φαίνεται στο miRBase, και ένα μη φίμωση αρνητικός έλεγχος υποκλωνοποιήθηκαν το πλασμίδιο pcDNA6.2-GW /EmGFP miR (Invitrogen). 22Rv1 κύτταρα σπάρθηκαν σε 12 φρεατίων πλάκες σε πυκνότητα 1,0 × 10

5 κύτταρα ανά φρεάτιο, 24 ώρες πριν από την επιμόλυνση. Η επιμόλυνση πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας Lipofectamine 2000 (Invitrogen), σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Η αποτελεσματικότητα επιμόλυνσης επικυρώθηκε από την παρακολούθηση του σήματος GFP χρησιμοποιώντας ένα σύστημα ανεστραμμένο μικροσκόπιο φθορισμού (Zeiss). Για να επιβεβαιωθεί αυξημένα επίπεδα των ώριμων στόχου miRNA, ένα τμήμα των επιμολυσμένων κυττάρων χρησιμοποιήθηκε για την επικύρωση από ποσοτικές (qPCR). Για το σκοπό αυτό, ολικό RNA εκχυλίστηκε χρησιμοποιώντας ένα κιτ miRNeasy mini (Qiagen) και την ποσότητα του RNA προσδιορίζεται με φασματοφωτομετρία nanodrop (Thermo Scientific). Τμήματα (25 ng) του καθενός από τα παρασκευάσματα ολικού RNA ήταν αντίστροφη μεταγραφή σε cDNA χρησιμοποιώντας ένα κιτ καθολικής cDNA Synthesis (Exiqon) ακολουθώντας τις οδηγίες του κατασκευαστή. Το cDNA αραιώνεται και αναμειγνύεται με εκκινητές microRNA LNA PCR και SYBR Green κύριο μείγμα (Exiqon). qPCR διεξήχθη χρησιμοποιώντας ένα ABIPrism 7900HT (Applied Biosystems) ακολουθώντας τις οδηγίες του κατασκευαστή. Η ΔΔCT χρησιμοποιήθηκε για τον υπολογισμό της πτυχής αλλάζει σε σχέση με τον έλεγχο και U6 χρησιμοποιήθηκε ως ενδογενής έλεγχος.

ΜΤΤ

δοκιμασία

Τα επιμολυσμένα κύτταρα σπάρθηκαν σε πλάκες 96 φρεατίων σε πυκνότητα 1 × 10

4 κύτταρα /φρεάτιο. διάλυμα ΜΤΤ (20 μΙ 5 mg /ml) προστέθηκε στις καλλιέργειες (200 μΙ όγκους) για μια επώαση 4 ωρών στους 37 ° C. Μετά την απομάκρυνση του μέσου καλλιέργειας, οι παραμένοντες κρύσταλλοι διαλύθηκαν σε DMSO και η απορρόφηση στα 570 nm μετρήθηκε.

Μετανάστευση /εισβολή δοκιμασία

θάλαμοι εισβολής Biocoat Matrigel (BD Biosciences) χρησιμοποιήθηκαν για τη μέτρηση της διηθητικότητα ιστού των κυττάρων. Στο άνω θαλάμους, 1 × 10

5 κύτταρα /φρεάτιο απλώθηκαν σε 0.50 ml μέσου χωρίς ορό. Στις κατώτερες θαλάμους, 0,75 ml μέσου /10% FBS παραδόθηκε. Οι θάλαμοι επωάστηκαν για 30 ώρες στους 37 ° C σε υγροποιημένη ατμόσφαιρα με 5% CO

2. Τα κύτταρα που παρέμειναν στον ανώτερο θάλαμο απομακρύνθηκαν και τα κύτταρα σταθεροποιούνται transmigrated σε μεθανόλη και χρωματίστηκαν με κρυσταλλικό ιώδες και χρωματισμένα κύτταρα μετρήθηκαν με μικροσκοπική ανάλυση. Εισβολή των καρκινικών κυττάρων εκφράστηκε ως το ποσοστό των κυττάρων που είχαν περάσει από τα επικαλυμμένα με Matrigel μεμβράνες σε σχέση με τον αριθμό των κυττάρων που είχαν περάσει από τα μη επικαλυμμένα μεμβράνες (δείκτης εισβολή). Όλες οι δοκιμασίες πραγματοποιήθηκαν εις τριπλούν.

Αποτελέσματα

miRNA αλληλούχιση και σχολιασμό

Μικρές RNAs απομονώθηκαν από μεταστατικό LTL-313H και μη μεταστατικό ξενομοσχεύματα ιστών καρκίνου του προστάτη LTL-313Β και επεξεργασία για να επιτραπεί βαθιά αλληλουχίας με τη χρήση της πλατφόρμας της Illumina του. Η διαβάζει με ακολουθίες δείκτη προσαρμογέα «ACATCGA» και «CGTGATA» δόθηκαν LTL-313H προέλευσης και LTL-313Β προέλευσης, αντίστοιχα. Περισσότερα από 10 εκατομμύρια συνολικά διαβάζει ελήφθησαν για κάθε μία από τις βιβλιοθήκες. Αυτά διαβάζει ήταν σε σύγκριση με τα δεδομένα ακολουθία στη βάση δεδομένων microRNA Ακολουθία miRBase 15. Για τις βιβλιοθήκες καρκινικού ιστού μεταστατικού και μη μεταστατικό προστάτη, 3.445.642 και 2.272.677 ετικέτες, αντίστοιχα, ήταν πλήρως χαρτογραφηθεί σε αλληλουχίες stem-loop ανθρώπινη miRNA υπάρχει στην βάση δεδομένων miRBase (Πίνακας 1). Το πλήρως συμφωνημένα διαβάζει σχολιάστηκαν, ανάλογα με τη θέση τους στη δομή στελέχους-βρόχου. Μια μετατόπιση μέχρι 2 βάσεις στη έναρξης και λήξης θέσεις επιτράπηκε για ακολουθίες να σχολιασμένο ως

ισομερή

γνωστών ώριμη miRNAs (isomiRs). Ο συνολικός αριθμός των γνωστών miRNAs συν miRNA * s στο μεταστατικό και μη μεταστατικό βιβλιοθήκες ήταν 447 και 509, αντίστοιχα (Πίνακας 1). Η πιο υψηλή έκφραση των miRNAs (και isomiR) ήταν το miR-148a με συνολικές μετρήσεις των 270.801 και 763.877 διαβάζει ανά μεταστατικών και μη-μεταστατικών βιβλιοθήκες, αντίστοιχα. Όταν οι isomiRs ομαδοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας την ίδια αρχική θέση, ο miR-148a παρέμεινε το πιο άφθονο miRNA στη μη μεταστατικό βιβλιοθήκη με συνολική καταμέτρηση των 846.468, ενώ στο μεταστατικό βιβλιοθήκη miR-21 ήταν πιο άφθονα με συνολική καταμέτρηση των 310.102 .

η

miRNA και miRNA * εκφράσεις

στο miRBase, miRNAs που προέρχεται από μία πρόδρομη χαρακτηρίζονται miRNA, την εκφράζεται κυρίως βραχίονα, και miRNA * το λιγότερο που εκφράζεται, απέναντι από το βραχίονα. Αν και τα δύο χέρια έχουν παρόμοια εκφράζονται, που αναφέρονται ως 5p και 3p όπλων. Η έκφραση των γνωστών miRNAs στα ξενομοσχεύματα καρκίνου του προστάτη ήταν γενικά υψηλότερη από εκείνη των miRNA * s. Σε ορισμένες περιπτώσεις, miRNA * s (όπως προσδιορίζεται από miRBase) ήταν περισσότερο εκφράζονται από τα αντίστοιχα miRNAs (Πίνακας 2). Έτσι miR-144 * ήταν σημαντικά πιο εκφράστηκε από miR-144 και στις δύο μεταστατικών και μη-μεταστατικών βιβλιοθήκες? Ομοίως miR-126 * ήταν περισσότερο από ό, τι εκφράζεται miR-126, αλλά μόνο στη μη μεταστατικό βιβλιοθήκη. Διαφορές βρέθηκαν επίσης στα πρότυπα έκφρασης του 3p και 5p miRNAs βραχίονα (Πίνακας 2). Οι 3ρ χέρια του miR-28 και miR-339 έδειξε υψηλότερη εκφράσεις από τις αντίστοιχες 5p όπλων στη μεταστατική γραμμή, ενώ έδειξαν μικρότερη εκφράσεις από τις αντίστοιχες 5p όπλων στη μη μεταστατικό γραμμή. Στον μεταστατικό γραμμή, το miR-542 έδειξε up-ρύθμιση του 3ρ βραχίονα, αλλά κάτω ρύθμιση της 5p βραχίονα. Θραύσματα που ήταν ομολόγους γνωστών ώριμη miRNAs, αλλά αυτό δεν είχε αναφερθεί προηγουμένως στη βάση δεδομένων miRBase, χαρακτηρίστηκαν «υποθετικό μυθιστόρημα miRNA *» είδη (Πίνακας 3). Παρατηρήθηκε μία συνολικά 32 τέτοιων υποθετικών miRNA * s δείχνει τουλάχιστον δύο διαβάζει σε μία από τις δύο βιβλιοθήκες. Μερικά από αυτά τα miRNA * s έδειξε επίσης υψηλότερη έκφραση από την αντίστοιχη miRNAs τους, π.χ., miR-1277 * και miR-1307 *.

Η

υποψηφίους Μυθιστόρημα miRNA

Ένα πλεονέκτημα του χρησιμοποιώντας μια προσέγγιση προσδιορισμού αλληλουχίας για miRNA προφίλ είναι η ευκαιρία για την ταυτοποίηση νέων miRNAs ή miRNA * s. Για το σκοπό αυτό, χρησιμοποιήσαμε ένα miRanalyzer, μια ανίχνευση microRNA και εργαλείο ανάλυσης [18], σε συνδυασμό με τις αναζητήσεις ομολογίας για τον εντοπισμό γνωστών μεταγραφές, συμπεριλαμβανομένων των μη-κωδικοποίησης RNAs (π.χ., rRNA, tRNA, κ.λπ.). Χρησιμοποιώντας το λογισμικό miPred να διακρίνει πραγματικό προ-miRNAs από άλλες ακολουθίες φουρκέτα με παρόμοιο στέλεχος-βρόχους [22], εντοπίσαμε 36 νέων υποψηφίων miRNA. Οι αλληλουχίες, θέσεις χρωμοσώματος και τον αριθμό των διαβάζει στον μεταστατικό και μη μεταστατικό βιβλιοθήκες τους παρουσιάζονται στον Πίνακα 4 και τον Πίνακα S1. Συγκριτική ανάλυση των δύο βιβλιοθήκες παρουσίασαν σημαντική διαφορική έκφραση κάποιων από αυτών των νέων miRNAs, συμπεριλαμβανομένων κάτω-ρυθμίζονται miR-5680-3p και miR-5681a-3ρ.

Η

Πιθανές μετάστασης που σχετίζονται με miRNAs

Συγκριτική ανάλυση των μεταστατικών και μη-μεταστατικών ξενομόσχευμα βιβλιοθήκες miRNA αποκάλυψε συνολικά 104 διαφορικά εκφρασμένων miRNAs ή miRNA * s με 55 κάτω-ρυθμίζονται και 49 up-ρυθμίζονται στο μεταστατικό γραμμή (Πίνακας 5,6,7). Από τα κάτω-ρυθμίζονται miRNAs, 24 miRNAs έδειξαν & gt? Μείωση 5-φορές, συμπεριλαμβανομένων τεσσάρων miRNAs, δηλαδή miR-205, miR-503, miR-708 και miR-2115 *, τα οποία ήταν μη ανιχνεύσιμα στο μεταστατικό γραμμή. Δύο miRNAs, δηλαδή miR-24-2 * και miR-101 *, έδειξαν αυξημένη έκφραση σε μορφή μιας βάσης-μετατόπισης. Μια μορφή μιας βάσης-μετατόπισης του miR-203 έδειξε κάποια αυξημένη έκφραση στο μεταστατικό γραμμή σε σχέση με την αναφορά miR-203, ενώ στη μη μεταστατικό γραμμή έδειξε μια χαμηλότερη έκφραση. Από τις up-ρυθμίζονται miRNAs, 23 miRNAs έδειξαν & gt? 5-φορές αλλαγή στις κανονικοποιημένες μετρήσεις. μορφές ενός βάσης-μετατόπισης του miR-9 *, miR-148b * και miR-1246 έδειξε υψηλότερη έκφραση από τα έντυπα αναφοράς και στις δύο μεταστατικών και μη-μεταστατικών γραμμές.

Η

Η

Μερικά από τα διαφορικά εκφρασμένων miRNAs έχουν προηγουμένως σχετίζεται με τον καρκίνο του προστάτη, η μετάσταση του καρκίνου του προστάτη ή μετάστασης άλλων τύπων καρκίνου (Πίνακας 5,6,7). Από τα ρυθμισμένα προς τα κάτω miRNAs ένας αριθμός έχει αναφερθεί να ρυθμίζεται προς τα κάτω σε σχέση με τον καρκίνο του προστάτη σε καλοήθη ιστούς του προστάτη, δηλαδή miR-16 [23] – [25], miR-24 [26] – [28], ΜΙΚ 29α [26], miR-145 [23], [24], [27], [29], [30], και miR-205 [24], [31], [32]. Η προς τα κάτω ρύθμιση του miR-16 [25], miR-34a [33], miR-126 * [34], miR-145 [35] και miR-205 [36] συσχετίζεται με την ανάπτυξη της μετάστασης του καρκίνου του προστάτη. Από τα επάνω ρυθμισμένη miRNAs (στο μεταστατικό βιβλιοθήκη), miR-210 έχει αναφερθεί ότι είναι προς τα πάνω ρυθμισμένα σε καρκινώματα του προστάτη σε σχέση με τα δείγματα ΒΡΗ [23] και miR-301 έχει συνδεθεί με μετάσταση καρκίνου του προστάτη [37]. Σε ορισμένες περιπτώσεις, miRNAs που βρέθηκαν να είναι πάνω ρυθμισμένα στην παρούσα μελέτη έχουν αναφερθεί να είναι είτε πάνω ρυθμισμένα σε καρκινώματα του προστάτη σε σύγκριση με φυσιολογικό ιστό του προστάτη [38] – [40], ή προς τα κάτω ρυθμισμένα [23], [24], [27] – [29]. Επιπλέον, ορισμένα από τα διαφορικά εκφρασμένων miRNAs έχουν αναφερθεί ότι παίζουν ρόλο στην μετάσταση των άλλων τύπων καρκίνου, για παράδειγμα, τα επάνω ρυθμισμένη miRNAs, ας-7i, miR-9, miR-30a, miR-125b, miR -142-5p, miR-151-3p, miR-450a και τα κάτω-ρυθμίζονται miRNAs, miR-24, mir-145, miR-146b-5P, miR-185, miR-186, miR-203 και miR-335 .

γονιδίων στόχων υποθετικές για διαφορικά εκφραζόμενων miRNAs

Ως πρώτο βήμα στην ταυτοποίηση των miRNAs με δυνητική σημασία στη μεταστατική διαδικασία, προσδιορίσαμε υποθετικών γονιδίων στόχων για κάθε μία από τις διαφορικά εκφρασμένων miRNAs χρησιμοποιώντας ανάλυση μικρόκοσμος, ένα πρόγραμμα πρόβλεψης στόχο με ένα ειδικό αλγόριθμο και την κάλυψη των miRNA, συμπεριλαμβανομένων των ποικιλιών στην αγκαλιά αστέρι? ένα όριο

σ

-τιμή = 0,001 διατηρήθηκε για να πάρει πιο αξιόπιστη ταυτοποίηση στόχου (Μικρόκοσμος) [41]. Υποθετική γονίδια-στόχους εντοπίστηκαν για 49 από τις 55 προς τα κάτω-ρυθμίζονται miRNAs και για 47 από τις 49 έως ρυθμιζόμενων miRNAs (Πίνακας S2)? είχαν σχολιασμένη χρησιμοποιώντας το πρόγραμμα DAVID. Οι υποθετικές γονίδια στόχος των κάτω ρυθμισμένα miRNAs συσχετίστηκαν με μία ποικιλία οδών KEGG συμπεριλαμβανομένων των «Fc γάμμα R-διαμεσολαβούμενη φαγοκυττάρωση» και «αλληλεπίδραση ECM-υποδοχέα (Πίνακας S3). Για τα πιθανά γονίδια στόχους των up-ρυθμίζονται miRNAs, σημειώθηκαν πορείες όπως «Μονοπάτια στον καρκίνο», «Focal πρόσφυση» και «μεταβολισμού της πουρίνης».

Σύγκριση των υποθετικών γονιδίων-στόχων των miRNAs με γονίδια που εκφράζονται διαφορικά σε η μεταστατικών και μη-μεταστατικών γραμμές ξενομόσχευμα

Αν και τα miRNAs σκέφτηκε να αλλάξει τα επίπεδα της πρωτεΐνης, έχουν σε ορισμένες περιπτώσεις έχει αποδειχθεί ότι επηρεάζει επίσης τα επίπεδα mRNA [3]. Εν όψει αυτού, οι δύο γραμμές ξενομοσχεύματος εξετάστηκαν για έκφραση απόκλιση mRNA. Όπως φαίνεται στον Πίνακα S4, 622 mRNAs ήταν ρυθμισμένα προς τα κάτω και 348 mRNAs ήταν πάνω ρυθμισμένα στην μεταστατική γραμμή. Μερικά από τα γονίδια που προσδιορίζονται από διαφορική έκφραση του mRNA ήταν δυνητικά απευθύνονται τόσο από πάνω και τα κάτω-ρυθμίζονται miRNAs. Εν όψει των ανωτέρω, η περαιτέρω ανάλυση περιορίστηκε σε γονίδια που δυνητικά αποτελούν στόχο είτε προς τα πάνω ρυθμισμένα ή προς τα κάτω ρυθμισμένα miRNAs. Η ομάδα που έδειξε μέχρι ρυθμίζονται mRNAs που σχετίζονται με μόνο κάτω-ρυθμίζονται miRNAs αποτελούνταν από 85 mRNAs? η ομάδα που έδειξε προς τα κάτω-ρυθμίζονται mRNAs που σχετίζονται με ρυθμίζονται up-μόνο miRNAs αποτελούνταν από 58 mRNA. Μεταξύ των mRNAs πάνω ρυθμισμένα στο μεταστατικό γραμμή, μερικοί έχουν αναφερθεί ότι έχει ένα ρόλο στην εισβολή ιστού ή /και μετάστασης μιας ποικιλίας καρκινικών κυττάρων, συμπεριλαμβανομένων των mRNA που εκφράζεται από το

FSCN1

[42],

VEGFA

[43]

FGFR1

[44],

ADAMTS1

[45],

CCL2

[46] και

VIM

[47 ] γονίδια. Ομοίως, τα mRNA κάτω-ρυθμίζονται στο μεταστατικό γραμμή, συμπεριλαμβανομένων των mRNAs που εκφράζονται από το

CTGF

[48] και

SERPINB5

[49] γονίδια, έχουν βρεθεί να είναι κάτω-ρυθμίζονται σε διάφορες μεταστατικό καρκίνους, το οποίο πιστοποιεί την αξιοπιστία των αναλύσεων μας (Πίνακας S5).

Αυξημένα επίπεδα των ώριμων miR-486 σε επιμολυσμένα κύτταρα

σε 24 ώρες μετά την επιμόλυνση των κυττάρων 22Rv1 με pcDNA6.2-GW /EmGFP-mir486 ή ακολουθία pcDNA6.2-GW /EmGFP ελέγχου, περισσότερο από το 90% των κυττάρων βρέθηκαν να είναι GFP θετικά. Ο πρόδρομος mir-486 είχε υποστεί την κατάλληλη επεξεργασία στην ώριμη miR-486 μορφή όπως υποδεικνύεται από qPCR. Σε σχέση με τον μάρτυρα, τα επίπεδα έκφρασης των δύο miR-486-5p και -3p βραχίονες ήταν 11,6 φορές υψηλότερες, υποδηλώνοντας ότι η πλειονότητα των κυττάρων εξέφρασαν υψηλά επίπεδα miR-486.

εισβολής miR-486- επιμολυσμένα κύτταρα 22Rv1

Ο ρυθμός πολλαπλασιασμού των miR-486-μορφομετατραπέντα κύτταρα και έλεγχο αλληλουχία-επιμολυσμένα ήταν παρόμοια όπως υποδεικνύεται από τη δοκιμασία ΜΤΤ (Εικ. 1Α). Ωστόσο, οι miR-486-μορφομετατραπέντα κύτταρα παρουσίασαν αύξηση περίπου 85% σε διεισδυτικότητα ιστό σε σχέση με τα κύτταρα ελέγχου (Σχ. 1Β). Παρά το γεγονός ότι το αποτέλεσμα αυτό έχει οριακή σημασία (

σ

= 0,08), δείχνει ότι η αυξημένη έκφραση του miR-486 ενισχύει τη διεισδυτικότητα των ιστών.

Α) Όπως υποδεικνύεται από δοκιμασία ΜΤΤ, δεν υπήρχε σημαντική διαφορά μεταξύ της αύξησης του miR-486-μορφομετατραπέντα κύτταρα και κύτταρα ελέγχου κατά τη διάρκεια μιας περιόδου 72-hr. Β) Tissue διεισδυτικότητα, όπως μετράται με Matrigel εισβολή, του miR-486 επιμολυσμένα κύτταρα και κύτταρα ελέγχου. Τα δεδομένα εκφράζονται ως επί τοις εκατό διεισδυτικότητα ± S.D. και δείχνουν αύξηση της εισβολής του miR-486-επιμολυσμένα κύτταρα (85%?

σ

= 0,08)

Η

Συζήτηση

έχουν miRNAs έχουν εμπλακεί στη ρύθμιση της. γονιδιακή έκφραση στο μετα-μεταγραφικό επίπεδο σε σχεδόν κάθε βιολογικό γεγονός, και υπάρχει ένας αυξανόμενος όγκος στοιχείων που έχουν αλλοιωθεί εκφράσεις των συγκεκριμένων miRNAs που εμπλέκονται στην ανάπτυξη και την εξέλιξη των καρκίνων [4], [5]. Χρησιμοποιώντας αλληλούχισης επόμενης γενιάς για μικρά ταυτοποίηση RNA, η παρούσα μελέτη με στόχο τον προσδιορισμό εκφράζονται διαφορικά γνωστές και νέες miRNAs στο μεταστατικό έναντι μη μεταστατικό καρκίνο του προστάτη ξενομοσχεύματα που θα μπορούσε να παίξει ένα ρόλο στην εξέλιξη του καρκίνου του προστάτη με την μεταστατική μορφή. Οι μεταμοσχεύσιμων γραμμές καρκίνου που χρησιμοποιήθηκαν φαίνονται να είναι ιδιαίτερα κατάλληλα για τον σκοπό διότι είχαν προέρχεται από καρκίνο ενός ασθενούς και έτσι διέθετε ένα κοινό γενετικό υπόβαθρο. Επιπλέον, είχαν αναπτυχθεί μέσω υπονεφρικής μεταμόσχευση κάψουλα του καρκίνου

ιστού

σε NOD ποντίκια /SCID, μια μεθοδολογία που έχει την τάση να διατηρούν σημαντικές ιδιότητες των αρχικών καρκίνων (π.χ., ετερογένεια του όγκου, η γενετική προφίλ) [9] – [11], [50]. Επίσης, η συντήρηση των γραμμών όγκων στον ίδιο τύπο του site μοσχεύματος (κάτω από την κάψα του νεφρού) διασφαλίζεται ότι η ανάπτυξή τους δεν επηρεάστηκε σημαντικά από μικρο-περιβαλλοντικές διαφορές που μπορεί να έχουν σημαντικό αντίκτυπο στην ανάπτυξη του καρκίνου [51]. Ομοίως, ο ίδιος τύπος θέσεως μοσχεύσεως θα ελαχιστοποιήσει τις διαφορές στην παραγωγή miRNA από κύτταρα-ξενιστές που υπάρχουν στα ξενομοσχεύματα. Αν και έχει δειχθεί ότι ξενομεταμόσχευση μπορεί να αλλάξει την έκφραση του miRNAs [52], η μελέτη μας επικεντρώθηκαν κυρίως στις διαφορές μεταξύ miRNAs αντίστοιχα δείγματα και οι διαφορές αυτές είναι επομένως πιθανόν να είναι πραγματική. Λαμβανόμενα μαζί, τα δεδομένα που λαμβάνονται σε αυτή τη μελέτη πρέπει να είναι χρήσιμες για την οριοθέτηση των miRNAs με ογκογόνο ιδιότητες που εμπλέκονται στην ανάπτυξη της μετάστασης του καρκίνου του προστάτη.

Το υψηλότερο διαβάζει στις δύο βιβλιοθήκες RNA παρατηρήθηκαν για ΜΙΚ 148a. Η έκφραση αυτής της miRNA είναι ανδρογόνο επαγώγιμη σε κύτταρα LNCaP [53]. Αυτό υποδηλώνει ότι η σχετικά υψηλή έκφραση του miR-148a βρίσκονται στις δύο βιβλιοθήκες είναι αποτέλεσμα της συμπλήρωσης της τεστοστερόνης των ζώων.

Από τις 104 miRNAs που βρέθηκαν να είναι μεταγενέστερος ή επάνω ρυθμισμένη στο μεταστατικό καρκίνο του προστάτη ξενομοσχεύματα, σε σχέση με μη μεταστατικό αντίστοιχά τους, 39 είχαν προηγουμένως αναφερθεί ότι εμπλέκεται στον καρκίνο του προστάτη (Πίνακας 5,6,7). Οι εκθέσεις αυτές ως επί το πλείστον βασίζονται σε συγκρίσεις των miRNA εκφράσεις του προστάτη καρκινικούς ιστούς έναντι των φυσιολογικών ιστών του προστάτη χωρίς να ορίζει την μεταστατική ικανότητα των κακοήθων δείγματα. Είναι ενδιαφέρον ότι 21 από τα 39 miRNAs έδειξε κατάντη ή up-κανονισμών στους μεταστατικούς ξενομοσχεύματα οποίες συμπίπτουν με εκείνες που αναφέρονται για τους ιστούς καρκίνου του προστάτη (σε σχέση με καλοήθη ιστούς), υποδηλώνοντας ότι αυτοί οι ιστοί του καρκίνου του προστάτη μπορεί να είχαν μεταστατική ικανότητα. Από τα miRNAs βρέθηκε να είναι ρυθμισμένα προς τα κάτω στο μεταστατικό ξενομοσχεύματα, miR-16, που δείχνει ένα & gt? 17-πλάσια μείωση στην έκφραση, έχει αναφερθεί να ρυθμίζεται προς τα κάτω στον καρκίνο του προστάτη [23], [24] και για να έχουν μια λειτουργία μετάσταση-καταστολή. Επιπλέον, η ανάπτυξη του όγκου του προστάτη μεταστατικό

in vivo

μπορούσε να ανασταλεί με συστημική διανομή του συνθετικού miRNA-16 [25]. Η μειωμένη έκφραση του miR-34a στο μεταστατικό γραμμή ξενομόσχευμα είναι συνεπής με αναφερόμενη αναστολή της μετάστασης του καρκίνου του προστάτη [33]. Η χαμηλότερη έκφραση του miR-126 * είναι σε συμφωνία με αναφορές ότι αυτό miRNA ρυθμίζεται προς τα κάτω σε μετάσταση καρκίνου του προστάτη [34] και ότι η έκτοπη έκφραση της miR-126 * ανέστειλε την μετανάστευση και διεισδυτικότητα καρκινικών κυττάρων προστάτη [34]. Το τελευταίο είναι ένα παράδειγμα ενός miRNA * παίζει ένα ρόλο ως καταστολέας όγκου. Είναι ενδιαφέρον ότι, miR-126, ένα miRNA αναφερθεί ως κάτω-ρυθμίζονται σε καρκίνο του προστάτη σε σχέση με το φυσιολογικό ιστό προστάτη [54], ήταν ρυθμισμένη στο μεταστατικό γραμμή ξενομοσχεύματος.