Αφηρημένο

Ιστορικό

Η αποτυχία της θεραπείας στην στοματική καρκίνωμα πλακωδών κυττάρων (OSCC) που οδηγεί σε τοπική υποτροπή (ες) και μεταστάσεις οφείλεται κυρίως στην αντοχή στα φάρμακα. Τα καρκινικά βλαστικά κύτταρα (ΚΕΠ) πιστεύεται να είναι υπεύθυνοι για την ανάπτυξη αντοχής φαρμάκου. Ωστόσο, οι συσχετίσεις μεταξύ των ΚΕΠ, ανθεκτικότητα στα φάρμακα και νέα στρατηγική για την καταπολέμηση της αντοχής στα φάρμακα σε OSCC παραμένουν ασαφείς.

Μέθοδοι

Μια σφαίρα ανθεκτικών στα φάρμακα (DRSP) μοντέλο δημιουργήθηκε με τη χρήση ενός μη συγκολλητική πολιτισμό σύστημα για να επάγει τα κύτταρα ανθεκτικά σε φάρμακο από SCC25 καρκίνο του στόματος κύτταρα. Μια συγκριτική ανάλυση πραγματοποιήθηκε μεταξύ των κυττάρων ελέγχου και μητρικών DRSPs με ένα σχετικό θεραπευτικής στρατηγικής με επίκεντρο την έκφραση του επιθηλίου-μεσεγχύματος μετάβασης (ΕΜΤ) -associated δεικτών, γονίδια ανθεκτικότητας στα φάρμακα που σχετίζονται με τις ιδιότητες και CSC

in vitro

, καθώς και την ογκογονικότητα και το σχήμα για την υποχώρηση του όγκου

in vivo

.

Αποτελέσματα

Τα δεδομένα μας δείχνουν την παρουσία ενός φαινομένου της ΕΜΤ με βαθμιαία κυτταρική μετάβαση από ένα επιθηλιοειδής να μεσεγχυματικά-όπως σφαιροειδές μορφολογία κατά την επαγωγή της ανθεκτικότητας στα φάρμακα. Ο χαρακτηρισμός των DRSPs αποκάλυψε την προς τα πάνω ρύθμιση των γονιδίων φαρμακευτικής αντίστασης που συνδέονται με

ABCG2

και

MDR-1

και του CSC-αντιπροσωπευτικών δεικτών, γεγονός που υποδηλώνει ότι DRSPs έχουν μεγαλύτερη αντοχή στη σισπλατίνη (cis) και ισχυρότερη ιδιότητες CSC σε σύγκριση με τον έλεγχο. Επιπλέον, η υπερέκφραση των πρωτεϊνών φωσφορυλιωμένων θερμικού σοκ 27 (ρ-Hsp27) μέσω της ενεργοποίησης της σηματοδότησης ρ38 ΜΑΡΚ παρατηρήθηκε σε DRSPs. Εξόντωση Hsp27 μειώθηκε Cis αντίσταση και απόπτωση που επάγεται σε DRSPs. Επιπλέον, ένας αναστολέας της Hsp27, quercetin (Qu), κατέστειλαν έκφραση ρ-Hsp27, με μεταβολές της υπογραφής EMT, που οδηγεί στην προώθηση της απόπτωσης σε DRSPs. Μια ξενογραφικού μελέτη επιβεβαίωσε επίσης την αύξηση της ογκογένεσης με DRSPs. Ο συνδυασμός των Qu και της ΚΑΚ μπορούν να μειώσουν την ανάπτυξη του όγκου και να μειώσει την αντίσταση των ναρκωτικών στην OSCC.

Συμπεράσματα

Το p38 ΜΑΡΚ-Hsp27 άξονα παίζει σημαντικό ρόλο στην ΚΕΠ με τη μεσολάβηση της αντίστασης στα φάρμακα στην OSCC. Στόχευση αυτό άξονα χρησιμοποιώντας Qu σε συνδυασμό με Cis μπορεί να είναι μια θεραπευτική στρατηγική για τη βελτίωση της πρόγνωσης σε ασθενείς με OSCC

Παράθεση:. Chen S-F, Νιεχ S, Jao S-W, Liu C-L, Wu C-H, Chang Υ-C, et al. (2012) Κερσετίνη Καταστέλλει ανθεκτικών στα φάρμακα σφαίρες μέσω του p38 ΜΑΡΚ-Hsp27 αποπτωτικό μονοπάτι στο Προφορική καρκινικά κύτταρα. PLoS ONE 7 (11): e49275. doi: 10.1371 /journal.pone.0049275

Συντάκτης: Vladimir Ν Uversky, Πανεπιστήμιο της Νότιας Φλόριντα College of Medicine, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 20 Ιούλ του 2012? Αποδεκτές: 8 του Οκτώβρη 2012? Δημοσιεύθηκε: 12 Νοέμβρη, 2012

Copyright: © 2012 Chen et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτή η μελέτη εν μέρει υποστηρίζεται από την Tri-Service Γενικό Νοσοκομείο και το Εθνικό Ιατρικό Κέντρο άμυνας: Επιχορήγηση Όχι TSGH-C101-076? Τμήμα Οδοντικής Υγιεινής, η Κίνα Ιατρικού Πανεπιστημίου: Επιχορήγηση Όχι CMU99-N1-04-1? Εθνικό Επιστημονικό Συμβούλιο, Δημοκρατία της Κίνας (Ταϊβάν): Επιχορηγήσεις Όχι NSC-98-2314-Β-016-019-my3, NSC 99-2320-Β-039-028-my3 και NSC 100-2320-B-016- 009? Υπουργείο Υγείας, Εκτελεστικό Yuan, Δημοκρατία της Κίνας (Ταϊβάν): DOH100-TD-PB-111-TM007-22. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Στοματική καρκίνωμα πλακωδών κυττάρων (OSCC) είναι μία από τις πιο κοινές και θανατηφόρες κεφαλής και του λαιμού κακοήθειες στην Ταϊβάν και σε όλο τον κόσμο [1], [2]. Οι τρέχουσες θεραπείες για τον καρκίνο του στόματος είναι περιορισμένης αποτελεσματικότητας στην πρόληψη της υποτροπής και εξέλιξης του όγκου, και ένα σημαντικό ποσοστό των ασθενών που αναπτύσσουν τοπικές εισβολή και μετάσταση [3]. Η πρόγνωση των ασθενών με καρκίνο του στόματος είναι σχετικά φτωχή παρά τις πρόσφατες προόδους θεραπευτικό [4]. Cisplatin (Cis) -με βάση χημειοθεραπεία είναι η κύρια θεραπεία για ασθενείς με προχωρημένο καρκίνο του στόματος και χρησιμοποιείται τουλάχιστον για παρηγορητική σκοπούς. Ωστόσο, η αποτελεσματικότητα της χημειοθεραπείας περιορίζεται λόγω της

de novo

αντοχής φαρμάκου. Ως εκ τούτου, είναι σημαντικό για τη διαλεύκανση των μηχανισμών που διέπουν τη διαμεσολάβηση του χημειοαντίσταση και να αναπτύξει μια νέα στρατηγική για την θεραπεία της OSCC.

Πριν

Η έννοια του καρκίνου του βλαστικά κύτταρα (ΚΕΠ) προτάθηκε δεκαετίες βασίζεται στις ομοιότητες μεταξύ καρκινικών κυττάρων και φυσιολογικών αρχέγονων κυττάρων [5]. Η ύπαρξη ΚΕΠ για πρώτη φορά χαρακτηρίζεται από το πλαίσιο της λευχαιμίας [6]. Η υπόθεση CSC προτείνει ότι οι όγκοι περιλαμβάνουν ένα μικρό πληθυσμό κυττάρων που διαθέτουν όγκο σχηματισμού και την αυτο-ανανέωση ικανότητες [7]. Συσσωρευμένα αποδείξεις, ΚΕΠ, όχι μόνο μπορεί να οδηγήσει σε υποτροπή του καρκίνου και μετάσταση, αλλά συμβάλλει επίσης στην αντίσταση των όγκων στη χημειοθεραπεία [8].

ABCG2 είναι το πιο γνωστό γονίδιο και εκφράζεται σε μια ευρεία ποικιλία των βλαστικών κυττάρων η οποία έχει υπηρετήσει ως ένας δείκτης για βλαστικά κύτταρα από διάφορες πηγές [9], [10]. έκφραση MDR1 έχει επίσης αναφερθεί σε διάφορα είδη χημειοθεραπεία φαινοτύπων όγκου [11], [12]. Πολλαπλές μηχανισμοί έχουν προταθεί για την αντοχή σισπλατίνη πρόσφατα [13], [14] με βάση το γεγονός ότι η σισπλατίνη δρα μια πολλαπλή κυτταρικών στόχων που αντιπροσωπεύουν διαφορετικές οδούς μεταγωγής σήματος [13]. Ένας από τους πιο σημαντικούς μηχανισμούς άλλες από τη ρύθμιση του

ABCG2

και

MDR-1

σε συνδυασμό με αντίσταση στην σισπλατίνη είναι μειωμένη ενδοκυτταρική συσσώρευση οφείλεται σε διαταραχή της πρόσληψης του φαρμάκου που περιλαμβάνουν στη συντήρηση της ομοιόστασης χαλκού όπως Ανθρώπινα μεταφορέας του χαλκού 1 και τα δύο χάλκινα μεταφορείς εκροής ATP7A και ATP7B που ρυθμίζουν την εκροή της σισπλατίνης [15] – [17]

Παρά τη σύνδεση μεταξύ της επαγωγής των ΚΕΠ στα κύτταρα του όγκου και την απόκτηση ανθεκτικότητας στα φάρμακα. και την επανάληψη των όγκων, ο υποκείμενος μηχανισμός των φαινομένων αυτών παραμένει σε μεγάλο βαθμό άγνωστη.

είναι

πρωτεΐνες θερμικού σοκ (Hsps) γενικά προκαλείται από το περιβαλλοντικό στρες και λειτουργούν ως μοριακοί συνοδοί, οι οποίες είναι υπεύθυνες για τη διατήρηση της σωστής διαμόρφωσης των άλλων πρωτεϊνών . Hsps ταξινομούνται σε υψηλού μοριακού βάρους Hsps, όπως Hsp90 και Hsp70, και χαμηλού μοριακού βάρους Hsps, συμπεριλαμβανομένων Hsp27 [18]. Εκτός από τη συμβατική λειτουργία του ως συνοδός, Hsp27 έχει αναφερθεί ότι υπερεκφράζεται σε μαστού, των ωοθηκών, και κεφαλής και τραχήλου [19] – [21]. Η έκφραση της Hsp27 έχει συσχετιστεί με φτωχή πρόγνωση και τα ποσοστά επιβίωσης σε ασθενείς με διαφορετικούς καρκίνους. Επιπλέον, Hsp27 έχει δειχθεί ότι σχετίζεται με χημειοαντίσταση και επαγωγή των καρκινικών κυττάρων που φέρουν βλαστικών κυττάρων που μοιάζουν με ιδιότητες στον καρκίνο του μαστού και πολλές άλλες κακοήθειες. Ωστόσο, οι εκθέσεις της εμπλοκής της Hsp27 στην αντοχή φαρμάκου σε και την πρόγνωση, OSCC είναι περιορισμένες. Quercetin (Qu) είναι η κύρια φλαβονοειδών ένωση (3,30,40,5,7-πεντα-υδροξυ-φλαβονοειδών) συνήθως εξάγεται από cranberries, βατόμουρα, τα μήλα, και τα κρεμμύδια. Διαθέτει ένα ευρύ φάσμα βιολογικών φαρμακολογικές ιδιότητες [22] και μπορεί να προσφέρει πολλά υποσχόμενες νέες επιλογές για την ανάπτυξη πιο αποτελεσματικών χημειοπροληπτική και χημειοθεραπευτικών στρατηγικών λόγω των ισχυρών αντιοξειδωτικών και ελευθέρων ριζών παγίδευσης ιδιότητες [23]. Μια προηγούμενη έκθεση αποκάλυψε επίσης ότι Qu παίζει ένα ρόλο ως ένας αναστολέας της σύνθεσης Hsp και έχει προστατευτική δράση σε ηπατική βλάβη ποντικού για την κυτταρική ομοιόσταση [24]. Ωστόσο, οι λεπτομέρειες της σχέσης μεταξύ Qu και Hsp27 όσον αφορά τη συμμετοχή τους στην αντίσταση στα φάρμακα για τον καρκίνο χρειάζονται περαιτέρω έρευνα.

Η ομάδα μας ιδρύθηκε προηγουμένως ένα μυθιστόρημα χωρίς κόλλα σύστημα σφαίρα του πολιτισμού που μας επέτρεψε να εξαγνίσει και να εμπλουτίσει πληθυσμό OSCC κυττάρων με βλαστοκύτταρα ιδιότητες που μοιάζουν [25]. Εδώ, πήραμε πλεονέκτημα αυτής καθιερωμένη σύστημα καλλιέργειας για να διερευνήσει την αντίσταση του καρκίνου του στόματος με Cis και υποκείμενη μοριακό μηχανισμό της. Με βάση την δημιουργία ανθεκτικών στα φάρμακα σφαίρες (DRSPs), ο στόχος της παρούσας μελέτης ήταν να επικυρώσει τον πιθανό ρόλο της Hsp27 και συνδέονται σηματοδοτικό μονοπάτι του στη διαμόρφωση της απόπτωσης. Επιπλέον, επιλέξαμε το συνδυασμό Qu και Cis ως πιθανός θεραπευτικός παράγοντας για να διερευνήσουμε πώς Qu αλληλεπιδρά με Hsp27 και ο μηχανισμός στηρίζεται η αποτελεσματική Qu μεσολάβηση καταστολή χημειοαντίσταση και ανάπτυξης όγκου σε OSCC. Η μελέτη αυτή μπορεί να παρέχει μια εικόνα σε στρατηγικές αντίστασης στα φάρμακα και νέα αγωγή κατά της ανθεκτικότητας στα φάρμακα, τα οποία θα μπορούσαν να χρησιμοποιηθούν για να βελτιώσουν την πρόγνωση και την επιβίωση σε ασθενείς με OSCC.

Μέθοδοι

Κυττάρου και Σφαίρα Πολιτισμός

Η γλώσσα καρκινική κυτταρική σειρά ανθρώπινου SCC25, ελήφθη από την ATCC (αριθμός ATCC: CRL-1628) καλλιεργήθηκαν σε RPMI συμπληρωμένο με 10% εμβρυϊκό βόειο ορό (FBS) στους 37 ° C υπό την παρουσία 5% CO

2. Το κύτταρο καλλιεργήθηκε σε καλλιέργεια πλαστικών ειδών με μη κολλώδης επιφάνεια. 10 cm τρυβλίου είναι κατασκευασμένα από μη συγκολλητική για κύτταρα με επικάλυψη με αγαρόζη λεπτών υμενίων. Τα κύτταρα επιστρώθηκαν σε πυκνότητα 5 χ 10

4 ζώντα κύτταρα /10 cm τρυβλίου, και το μέσο καλλιέργειας αλλάχθηκε κάθε δεύτερη ημέρα μέχρι το σχηματισμό σφαίρας, όπως φαίνεται στο προηγούμενο μας αναφερθεί [25].

Επαγωγή Drug Resistance Cells

SCC25 γονικά κύτταρα απλώθηκαν σε μια πυκνότητα 5 χ 10

4 ζώντα κύτταρα /10 cm τρυβλίου, συνέχισε θεραπεία με Cis προστέθηκαν στις τελικές συγκεντρώσεις (1, 5, 10, 20, και 30 μΜ) επί τρεις μήνας, κατά συνέπεια. Αφού τα κύτταρα κατεργασία συλλέχθηκαν και διατηρώντας χαμηλή συγκέντρωση cis (0,5 μΜ) μέσο καλλιέργειας και το μέσο καλλιέργειας αλλάχθηκε κάθε δεύτερη ημέρα.

Βιωσιμότητας Κυττάρων Ανάλυση

Τα Cis προστέθηκε σε ένα ρυθμό δόσης (5, 10, 20, και 30 μΜ). Τα κύτταρα σπάρθηκαν σε πλάκες 6-φρεατίων σε πυκνότητα 2 × 10

4 ανά φρεάτιο σε μέσο, ​​μετά από θεραπεία με Cis για 48 ώρες, και αναλύθηκαν με την δοκιμασία ΜΤΤ (Sigma-Aldrich).

παρεμβολή RNA

Οι ολίγο siRNA της Hsp27 αποτελούνταν από τρία στόχων ειδικών siRNAs σχεδιαστεί για να νοκ ντάουν γονιδιακής έκφρασης. Η ακολουθία των τριών στόχων που είχαν έδειξε παρακάτω: SC-29350A: νόημα: 5′-GAGUGGUCGCAGUGGUUAGtt -3 ‘? αντινόημα: 5’-CUAACCACUGCGACCACUCtt-3 ‘)? sc-29350B: νόημα: GACGAGCUGACGGUCAAGAtt? αντίθετης φοράς: UCUUGACCGUCAGCUCGUCtt? sc-29350C: Αίσθηση: CCACGCAGUCCAACGAGAUtt? Αντινόημα: AUCUCGUUGGACUGCGUGGtt ή αρνητικό ολίγο siRNA ελέγχου αγοράστηκε από Santa Cruz Biotechnologies, Inc. 2 × 10

6 κύτταρα επιμολύνθηκαν με μια τελική συγκέντρωση (100 ηΜ) Hsp27 siRNA χρησιμοποιώντας Λιποφεκταμίνη 2000 για 48 ώρες για να ανιχνεύσει το επίπεδο της πρωτεΐνης. Κύτταρα τα οποία επιμολύνθηκαν με μη ειδικό siRNA (MOCK ομάδα) απέδειξαν παραλληλισμό.

Ανάλυση Western Blot

λύματα ολόκληρων κυττάρων διαχωρίστηκαν με ηλεκτροφόρηση σε 12% SDS-PAGE και μεταφέρθηκαν σε φθοριούχο πολυβινυλιδένιο μεμβράνη. Οι μεμβράνες αποκλείστηκαν με 5% άπαχο γάλα σε θερμοκρασία δωματίου για 1 ώρα. Τα πρωτογενή αντισώματα χρησιμοποιήθηκαν: Hsp27 (Santa Cruz? Sc-1049? 1:1000) GAPDH (ab9482? 1:5000 αραίωση) (Abcam, Cambridge, MA, USA), Οκτ-3/4 (SC-8630? 1: 1000), Nanog (SC-81961? 1:1000), SOX2 (SC-17320? 1:500) (Santa Cruz Biotechnology), ΑΤΡ-δεσμευτική κασέτα υπο-μέλος της οικογένειας G 2 (ABCG2) (sc-8630? 1: 1000), MDR-1 (SC-8630? 1:1000), p38MAPK (SC-8630? 1:1000), pp38MAPK (SC-8630? 1:1000), Capase-3 (SC-8630? 1:1000) και PARP (sc-81961? 1:1000) σε ρυθμιστικό TBST που περιείχε 3% άπαχο γάλα σε 4 ° C όλη τη νύκτα και στη συνέχεια με αντι-ποντικού και δευτερογενές αντίσωμα κουνελιού αντι-κατσίκας συζευγμένο με υπεροξειδάση (1:1000) (Santa Cruz Biotechnology) στους 25 ° C για 1 ώρα. Οι ανοσοκηλιδώσεις αναπτύχθηκαν χρησιμοποιώντας ένα ενισχυμένο σύστημα χημειοφωταύγειας, και η φωταύγεια οπτικοποιήθηκε σε φιλμ ακτίνων Χ.

In vivo

Ογκογονικά Δοκιμασία

Το

in vivo

μελέτη ογκογενετικότητας διεξήχθη σύμφωνα με τις τοπικές κατευθυντήριες γραμμές επιτροπή δεοντολογίας που είχε πλήρη πιστοποίηση απονέμεται από την Ένωση για την αξιολόγηση και διαπίστευση του Εργαστηρίου Φροντίδα ζώων στο Ιατρικό Κέντρο Εθνικής άμυνας. Τα ποντίκια διατηρήθηκαν σε 18-26 ° C, 30-70% υγρασία, και ανεξάρτητα κλιματιζόμενο κάτω από ένα κύκλο φωτός /12 ώρες 12 ώρες σκοτάδι για 7 ημέρες πριν από την ένεση ξένου μοσχεύματος. Τα γονικά κύτταρα OSCC και σφαίρες εγχύθηκαν στο BALB /c γυμνά ποντίκια (6 εβδομάδες). Το κυτταρικό εναιώρημα (100 ml) εγχύθηκε υποδορίως σε κάθε ποντικό με διαφορετικούς αριθμούς κυττάρων από 1 × 10

6, 1 × 10

5, και 1 × 10

4 κύτταρα. Οι όγκοι που σχηματίζονται σε 7 ημέρες μετά την ένεση. Τα μεγέθη των όγκων παρακολουθούνται και μετρούνται κάθε εβδομάδα σύμφωνα με τον τύπο (μήκος χ πλάτος

2) /2. Στις 30 ημέρες μετά τον εμβολιασμό ή ορθοτοπική, οι ποντικοί υποβλήθηκαν σε ευθανασία υπό αναισθησία. Όλα τα ζώα ήταν σύμφωνη και έχουν εγκριθεί από την Επιτροπή Φροντίδας και Χρήσης Θεσμικών ζώων στο Εθνικό Ιατρικό Κέντρο Άμυνας (IACUC-11-064).

Η ανοσοϊστοχημεία

τμήματα ιστών ή μπλοκ των κυττάρων ήταν DE- κερωμένο σε ξυλόλιο και επανυδατώθηκαν σε αλκοόλη. Το αντιγόνο ανάκτηση διεξήχθη με επώαση σε 10 mM κιτρικό ρυθμιστικό (ρΗ 6.0) στους 95 ° C για 40 λεπτά. Η ενδογενής υπεροξειδάση αποκλείσθηκε με υπεροξείδιο του υδρογόνου 0,3% για 10 λεπτά και στη συνέχεια επωάστηκαν με 5% κανονικό ορό αλόγου σε φωσφορικό ρυθμιστικό αλατούχο διάλυμα (PBS) για 60 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου για να εμποδίσει μη ειδική αντίδραση αντισώματος. Μετά από μία πλύση με Tris ρυθμιστικό αλατούχο διάλυμα συν 0,1% Tween 20 (TBST), τα πλακίδια επωάστηκαν όλη τη νύχτα στους 4 ° C με πρωτεύοντα αντισώματα, Ε-καδερίνης (SC-8426? 1:800) και φιμπρονεκτίνης (sc-18825? 1: 500) (Santa Cruz Biotechnology, Inc., CA. USA). Αφού ξεπλύθηκαν σε TBST, τα πλακίδια επωάστηκαν για 30 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου με βιοτινυλιωμένο δευτερογενές αντίσωμα που ακολουθείται από στρεπταβιδίνη-βιοτινυλιωμένης-ενζύμου (kit streptABComplexes? Dako, Glostrup, Δανία). Ακολούθως, βάφτηκαν με 0,003% 3, 3-διαμινοβενζιδίνη τετραϋδροχλωρική, με αιματοξυλίνη Mayer, το αφυδατωμένο και τοποθετημένα.

Στατιστική Ανάλυση

t τεστ Student του ανεξάρτητου ή ANOVA χρησιμοποιήθηκε για σύγκριση οι συνεχείς μεταβλητές μεταξύ των ομάδων, ενώ το Χ

2 δοκιμή εφαρμόστηκε για τη σύγκριση της διχοτομικής μεταβλητής. Το επίπεδο στατιστικής σημαντικότητας ορίστηκε στο 0,05 για όλες τις δοκιμές. Όλες οι στατιστικές αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν με τη χρήση SPSS έκδοση 12.0 (SPSS Inc., Chicago, IL, USA).

Αποτελέσματα

Χαρακτηρισμός DRSPs σε OSCC κύτταρα

Η ανθεκτική στα φάρμακα κύτταρα (Λαϊκής Δημοκρατίας του Κονγκό), που προκαλείται από την κυτταρική γραμμή SCC25 πρώτα καθοριστεί μέσω πολλαπλών σταδίων θεραπείες Cis σε διάφορες συγκεντρώσεις (0, 5, 10, 20, και 30 μΜ). Μόνο ένα μικρό ποσοστό του Λαϊκής Δημοκρατίας του Κονγκό (20%) διατηρήθηκαν σε μακροπρόθεσμη βάση μετά την επεξεργασία Cis σε 25 μΜ (Σχήμα 1Α). Λαϊκής Δημοκρατίας του Κονγκό περαιτέρω καλλιεργήθηκαν χρησιμοποιώντας ένα μη συγκολλητική σύστημα καλλιέργειας, όπως περιγράφεται στην προηγούμενη έκθεσή μας. Πολιτισμός για 7 ημέρες έδωσαν ένα σφαιροειδές φαινότυπο ονομάζεται ανθεκτικών στα φάρμακα σφαίρα (DRSP). Μια σταδιακή μορφολογική αλλοίωση της Λαϊκής Δημοκρατίας του Κονγκό από επιθηλιοειδή, πολυγωνικό εμφάνιση σε μεσεγχυματικά-όπως, διαμόρφωση άτρακτος, η οποία είναι αντιπροσωπευτική του φαινομένου EMT, παρατηρήθηκε κατά τη διάρκεια της επαγωγής από τα κύτταρα γονέα OSCC να Λαϊκής Δημοκρατίας του Κονγκό (Σχήμα 1Β). Μετά την επεξεργασία με 25 μΜ Cis για 48 ώρες, DRSPs ήταν πολύ πιο ανθεκτικά σε Cis απο ότι ήταν τα OSCC ελέγχου κύτταρα (Σχήμα 1 C). Εκτός από τις μορφολογικές αλλοιώσεις που υποδηλώνουν το φαινόμενο ΕΜΤ κατά τη διάρκεια της επαγωγής, DRSPs χαρακτηρίστηκαν με αυξημένες ικανότητες μετανάστευση και εισβολή σε σύγκριση με τα κύτταρα ελέγχου (Σχήμα 1 D). Ο χαρακτηρισμός των DRSPs χρησιμοποιώντας ανάλυση κηλίδας Western έδειξε την αυξητική ρύθμιση των γονιδίων ανθεκτικότητας στα φάρμακα που σχετίζονται με

ABCG2

και

MDR-1

και της CSC-αντιπροσωπευτική δείκτες, συμπεριλαμβανομένων των Oct4, Nanog και Sox2 , γεγονός που υποδηλώνει ότι DRSPs έχουν μεγαλύτερη αντοχή σε Cis και ισχυρότερη ιδιότητες CSC σε σύγκριση με τα κύτταρα ελέγχου. Μια συγκριτική ανάλυση αποκάλυψε αλλοιώσεις του ΕΜΤ-σχετίζεται δείκτες, συμπεριλαμβανομένης μειωμένης έκφραση της Ε-καδερίνης, αυξημένη έκφραση ινωδονεκτίνης και Twist-1, και σημαντικά αυξημένη έκφραση του ΜΜΡ-2 και ΜΜΡ-9 σε DRSPs σύγκριση με τα κύτταρα ελέγχου (Σχήμα 1 Ε) .

(Α) Drug-ανθεκτικά κύτταρα OSCC (Λαϊκής Δημοκρατίας του Κονγκό) ιδρύθηκαν μέσω πολλαπλών σταδίων επεξεργασίας Cis σε διάφορες συγκεντρώσεις. Μόνο ένα μικρό ποσοστό των Λαϊκής Δημοκρατίας του Κονγκό διατηρήθηκαν σε μακροπρόθεσμη βάση μετά τη θεραπεία Cis. (Β) Λαϊκής Δημοκρατίας του Κονγκό καλλιεργήθηκαν περαιτέρω χρησιμοποιώντας ένα μη συγκολλητική σύστημα καλλιέργειας, η οποία απέδωσε ένα φαινότυπο σφαιροειδή ονομάζεται ανθεκτικών στα φάρμακα σφαίρες (DRSPs). Σταδιακή μορφολογικές αλλοιώσεις της Λαϊκής Δημοκρατίας του Κονγκό, που ήταν ενδεικτικά του φαινομένου EMT παρατηρήθηκαν κατά τη διάρκεια της επαγωγής. (Γ) Μετά την επεξεργασία με Cis, τα κύτταρα DRSP ήταν πιο ανθεκτικά στην Cis από κύτταρα ήσαν OSCC ελέγχου. (D) DRSPs χαρακτηρίστηκαν περαιτέρω με αυξημένες ικανότητες μετανάστευση και εισβολή σε σύγκριση με τα κύτταρα ελέγχου. (Ε) Οι συγκρίσεις των EMT- και δεικτών εισβολή που σχετίζονται, ναρκωτικά αντίσταση προϊόντων που σχετίζονται με το γονίδιο, και CSC-εκπρόσωπος δείκτες αποκάλυψε αλλοιώσεις της έκφρασης του ΕΜΤ-συνδέονται σημειωτές και σημαντική προς τα πάνω ρύθμιση του ΜΜΡ-2 και ΜΜΡ-9, τα ναρκωτικά αντίσταση που σχετίζονται με το γονίδιο προϊόντα, και CSC-αντιπροσωπευτική δείκτες σε DRSPs σε σύγκριση με τα κύτταρα ελέγχου.

Η

Συμμετοχή του p38 ΜΑΡΚ-Hsp27 Αντι-αποπτωτική διάβαση στο Drug Resistance στο OSCC

Η έκφραση της ρ-Hsp27 ήταν δοσο-εξαρτώμενο τρόπο συσχετίζεται με τη θεραπεία Cis σε OSCC κύτταρα (Σχήμα 2Α). P-Hsp27 είχε υπερεκφράζεται μέσω ενεργοποίησης των ανάντη σηματοδότησης p38 ΜΑΡΚ στην DRSPs. Μια επιπλέον μελέτη μέσω siRNA της Hsp27 αντίστροφα προκάλεσε την προς τα πάνω ρύθμιση του CI-κασπάσης 3 και PARP CI-, με αποτέλεσμα την προώθηση της απόπτωσης σε DRSPs. Ωστόσο, δεν υπήρξε καμία επίδραση στην έκφραση p38 ΜΑΡΚ (Σχήμα 2Β). Τα στοιχεία από ανάλυση κηλίδας Western έδειξε ότι το knockdown του p38 ΜΑΡΚ μειωτικά άμεσα ρ-Hsp27, υποδεικνύοντας την παρουσία αντιαποπτωτικού μονοπατιού ρ38 ΜΑΡΚ-Hsp27 σε DRSPs (Σχήμα 2C).

(Α) Η έκφραση της ρ- hsp27 ήταν δοσο-εξαρτώμενο τρόπο συσχετίζεται με τη θεραπεία Κις στα κύτταρα OSCC. P-Hsp27 είχε Correspondently υπερεκφράζεται μέσω της ενεργοποίησης των ανάντη σηματοδότησης p38 ΜΑΡΚ στην DRSPs. (Β) εξόντωση Hsp27 αντίστροφα προκάλεσε την προς τα πάνω ρύθμιση του CI-κασπάσης 3 και PARP CI-, με αποτέλεσμα την αύξηση της απόπτωσης σε DRSPs. Ωστόσο, δεν υπήρξε καμία μεταβολή των ανάντη p38 ΜΑΡΚ. (Γ) εξόντωση ρ38 ΜΑΡΚ μειωτικά άμεσα ρ-Hsp27, υποδεικνύοντας την παρουσία αντιαποπτωτικού μονοπατιού ρ38 ΜΑΡΚ-Hsp27 σε DRSPs.

Η

Qu μεσολάβηση Ανασταλτικό Αποτέλεσμα επί π-Hsp27 Με αποτέλεσμα Ενίσχυση των αποπτωτικών δραστηριότητα στο DRSPs

μια δοκιμασία ΜΤΤ έδειξαν ότι η θεραπεία με 100 μΜ Qu σε συνδυασμό με 10 μΜ Cis μειωμένη ανάπτυξη DRSP και σημαντικά chemosensitized DRSPs να Cis, όπως αποδεικνύεται από τη μείωση της κυτταρικής επιβίωσης μετά τη θεραπεία κις στο DRSPs (

P

& lt? 0,01). Qu ανέστειλε τα προϊόντα των γονιδίων φαρμακευτικής αντίστασης

ABCG2

σε δόση 500 μΜ και, επίσης, σταδιακά εξασθενημένα

MDR-1

με δοσο-εξαρτώμενο τρόπο.

MDR-1

ήταν πιο ευάλωτα στη θεραπεία Qu ό, τι ήταν

ABCG2

(Εικόνα 3Α). Η knockdown του Hsp27 ή η χρήση των Qu συνδυασμό με Cis έδωσαν παρόμοια αποπτωτικά αποτελέσματα, οδηγώντας σε ρύθμιση προς τα κάτω του ρ-Hsp27 και προς τα πάνω ρύθμιση του CI-κασπάσης 3 και CI-PARP, αλλά δεν είχε καμία επίδραση στην ρ38 ΜΑΡΚ σε DRSPs (Σχήμα 3Β). δοκιμασίες μετανάστευσης και της εισβολής έδειξε ότι η θεραπεία με Qu σε συνδυασμό με Cis μειώθηκε αισθητά η μετανάστευση και την εισβολή ικανότητες στο DRSPs (Σχήμα 3C). Η θεραπεία με Qu συνδυασμό με Cis ανέστρεψε την έκφραση του ΕΜΤ-συνδέονται σημειωτές, αποδίδοντας προς τα πάνω ρύθμιση της Ε-καδερίνης και προς τα κάτω ρύθμιση βιμεντίνης, Twist-1, και fascin-1 (Σχήμα 3D).

(α) ένα ΜΤΤ δοκιμασίας έδειξαν ότι η θεραπεία Qu σε μια δόση των 100 μΜ σε συνδυασμό με Cis μπορεί να καταστείλει DRSPs. Qu εξασθένησε την έκφραση των προϊόντων των γονιδίων φαρμακευτικής αντίστασης που συνδέονται με

ABCG2

και

MDR-1

με δοσο-εξαρτώμενο τρόπο. (Β) Τόσο η knockdown του Hsp27 και η χρήση του σε συνδυασμό με Qu Cis αποτελεσματικά προκάλεσε παρόμοιες αποπτωτικά αποτελέσματα που οδήγησαν στην μείωση του pHsp27 και ρύθμιση προς τα άνω του CI-κασπάσης 3 και PARP CI-σε DRSPs. (Γ) Η θεραπεία με Qu σε συνδυασμό με Cis αισθητά μειωμένο τις ικανότητες μετανάστευση και την εισβολή στην DRSPs. (Δ) κατεργασία με Qu συνδυασμό με Cis ανέστρεψε την έκφραση του ΕΜΤ-συνδέονται σημειωτές και επάγεται το φαινόμενο ΕΜΤ.

Η

αναστολή της ανάπτυξης όγκων και εξασθένιση της Cis Αντίστασης από τον Qu

in vivo

για να επιβεβαιώσετε τις δυνατότητες όγκου κίνηση των σφαιρών

in vivo

, τόσο μητρικά κύτταρα και σφαίρες ενέθηκαν σε αρσενικούς γυμνούς ποντικούς για μια ανάλυση των μεταμοσχευμένων ογκογονικότητας. Τα αποτελέσματα αυτού του πειράματος έδειξαν μία υψηλότερη ικανότητα για ογκογονικότητα σε DRSPs σύγκριση με κύτταρα ελέγχου. DRSPs προκάλεσε όγκους μετά την ένεση του 1 × 10

4 κύτταρα σε ποντικούς (δύο από τα τρία ποντίκια). Σε αντίθεση, περισσότερα κύτταρα ελέγχου που απαιτούνται για τη δημιουργία όγκων (ένεση 1 × 10

6 κύτταρα σε ποντικούς? Τρία από τα τρία ποντίκια), υποδεικνύοντας ότι οι DRSPs εμπλουτισμένα για ογκογενή κύτταρα κατά τουλάχιστον 20 φορές σε σύγκριση με κύτταρα ελέγχου (Σχήμα 4Α). Το μέγεθος και ο όγκος των DRSP επαγόμενης όγκους ήταν σημαντικά υψηλότερα από εκείνα των όγκων που διεγείρονται από τα κύτταρα ελέγχου. διαφορές ανάπτυξης στους όγκους που δημιουργούνται σταδιακά παρατηρούνται σε ένα χρονοεξαρτώμενο τρόπο μετά την έγχυση του DRSPs vs κυττάρων ελέγχου (

P

& lt? 0,05) (Σχήμα 4Β). Τα ποντίκια που έλαβαν θεραπεία με Qu συνδυασμό με Cis εμφάνισαν σημαντική αναστολή της ανάπτυξης του όγκου σε σύγκριση με την ομάδα που έλαβε αγωγή μόνο με οΐδ και την ομάδα ελέγχου (Σχήμα 4C). Μια συγκριτική ανάλυση των αντίστοιχων ανοσοϊστοχημικών αποτελέσματα για ρ-Hsp27 και τα ΕΜΤ-συνδέονται δείκτες που λαμβάνονται από τα οζίδια του όγκου των ποντικών μετά τη θεραπεία με Qu συνδυασμό με Cis αποκάλυψε μια αξιοσημείωτη προς τα κάτω ρύθμιση του π-Hsp27, βιμεντίνη, Twist-1, και το συναρπαστικό 1 και προς τα πάνω ρύθμιση της Ε-καδερίνης σε DRSPs σε σύγκριση με την ομάδα που δεν έλαβε θεραπεία (Σχήμα 4D).

(Α) Μια υψηλότερη ικανότητα της ογκογονικότητας δείχθηκε σε DRSPs σύγκριση με κύτταρα ελέγχου. (Β) Το μέγεθος και ο όγκος των DRSP επαγόμενης όγκους ήταν σημαντικά υψηλότερα από εκείνα των όγκων που διεγείρονται από τα κύτταρα ελέγχου. Παρατηρήθηκαν διαφορές αναπτύξεως των όγκων που δημιουργούνται σε ένα χρονο-εξαρτώμενο τρόπο με τον DRSPs vs. κύτταρα ελέγχου (

P

& lt? 0,05). (C) Το ακαθάριστο εμφάνιση ενός αντιπροσωπευτικού όγκου που σχηματίζεται μέσω εμβολιασμού των γονικών κυττάρων και διαχωρίστηκαν DRSPs σε NOD /SCID ποντίκια (η = 3 σε κάθε ομάδα). Τα ποντίκια που έλαβαν θεραπεία με Qu συνδυασμό με Cis αποκαλύπτονται στατιστικά σημαντική αναστολή της ανάπτυξης σε σύγκριση με την ομάδα που έλαβε αγωγή με Cis μόνο και της ομάδας ελέγχου (

P

& lt? 0,05). (D) Μια συγκριτική ανάλυση των αντίστοιχων ανοσοϊστοχημικών αποτελέσματα για ρ-Hsp27 και ΕΜΤ-συνδέονται δείκτες που λαμβάνονται από τα οζίδια του όγκου των ποντικών NOD /SCID μετά τη θεραπεία με Qu συνδυασμό με Cis αποκάλυψε μια αξιοσημείωτη προς τα κάτω ρύθμιση του π-Hsp27, βιμεντίνη, Twist- 1, και fascin-1 και προς τα πάνω ρύθμιση της Ε-καντερίνης DRSPs (μεγέθυνση, 100 ×).

η

Συζήτηση

Cis-χημειοθεραπεία με βάση την ευρέως χρησιμοποιείται για την κλινική θεραπεία του προχωρημένου Καρκίνος. Βελτιώνει την ταχύτητα πρόγνωση και την επιβίωση σε ασθενείς με OSCC. Η ανάπτυξη της ανθεκτικότητας Cis θεωρήθηκε μια σημαντική αιτία της υποτροπής του όγκου, που οδηγεί στην αποτυχία της κλινικής θεραπείας. Ο ρόλος των ΚΕΠ εντός όγκων στην επαγωγή χημειοαντίσταση κατά τη διάρκεια της χημειοθεραπείας είναι γνωστό [26]. Ως εκ τούτου, ο προσδιορισμός του μοριακού μηχανισμού που μεσολαβεί χημειοαντίσταση φαίνεται ζωτικής σημασίας για την επαλήθευση της αντιστοιχίας μεταξύ των υποτροπής, Cis αντίσταση και ΚΕΠ σε OSCC. Στο πλαίσιο αυτό, χρησιμοποιήσαμε ένα μη συγκολλητική σύστημα σφαίρα καλλιέργειας για την απομόνωση κυττάρων με βλαστικά κύτταρα ιδιότητες μεταξύ Cis-ανθεκτικά κύτταρα και δημιουργούνται DRSPs. Κατά τη διάρκεια της επαγωγής της DRSPs, έχουμε παρατηρήσει μια ενδιαφέρουσα και ειδικά το φαινόμενο EMT, όπως αποδεικνύεται από τη σταδιακή μορφολογική αλλοίωση από τις μητρικές OSCC κύτταρα να Λαϊκής Δημοκρατίας του Κονγκό. Αυτό σημαίνει ότι Λαϊκής Δημοκρατίας του Κονγκό έχουν την ιδιότητα της ανθεκτικότητας στα φάρμακα μέσω EMT. Προηγούμενες μελέτες έδειξαν ότι ΕΜΤ είναι ο κεντρικός μηχανισμός της επιθετικότητας του καρκίνου και έχει δειχθεί ότι συσχετίζεται με την ανάπτυξη του χημειοαντίσταση [27] – [29]. Αυτά τα καλοσχηματισμένα Λαϊκής Δημοκρατίας του Κονγκό με μεσεγχυματικά φαινότυπο μπορούν να υποβληθούν σε περαιτέρω σχηματισμό σφαίρα σε ένα μη κολλώδης σύστημα σφαίρα του πολιτισμού. Η αντιπαλότητα πληρούνται από σφαίρες σε μια μη κολλώδης, αναστέλλεται η κατάσταση δεν μπορεί να διεγερθεί μόνο από EMT, αλλά επίσης να ενθαρρύνει την εγγραφή του δυναμικού των ιδιοτήτων CSC, όπως περιγράφεται στην προηγούμενη μελέτη μας, και άλλοι [25], [30].

με βάση την μελέτη μας, πέρα ​​από τις μορφολογικές αλλοιώσεις μαζί με τις αλλαγές στην έκφραση του ΕΜΤ-σχετίζεται δείκτες, DRSPs χαρακτηρίστηκαν από την προς τα άνω ρύθμιση του

ABCG2

και

MDR-1

. Τα δύο αυτά γονίδια είναι γνωστά και εκφράζονται σε μια ευρεία ποικιλία των ΚΕΠ που έχουν υπηρετήσει ως χημειοθεραπεία δείκτες [9]. DRSPs κατέδειξε επίσης την υπερέκφραση της CSC-αντιπροσωπευτική και βλαστική ικανότητα δείκτες, συμπεριλαμβανομένων των Oct4, Nanog και Sox2, γεγονός που δείχνει ότι DRSPs εμφανίζουν μεγαλύτερη ικανότητα Cis-αντίσταση και ισχυρότερη ιδιότητες CSC από ό, τι τα κύτταρα OSCC ελέγχου. Τα στοιχεία αυτά όχι μόνο αποδεικνύουν ότι DRSPs είναι ένα χρήσιμο μοντέλο για τη μελέτη της αντοχής στα φάρμακα, αλλά επίσης να παρέχει επαρκή αποδεικτικά στοιχεία για την υποστήριξη της υπόθεσης που ΚΕΠ συμβάλλουν στην αντοχή στα φάρμακα σε καρκινικά κύτταρα, όπως αποδεικνύεται από τη μελέτη μας και έχουν επίσης αναφερθεί από άλλους στο παρελθόν [25] , [31]. Εκμεταλλευόμενοι DRSPs ως μοντέλο μελέτης για αντοχή φαρμάκου, βρήκαμε επίσης μια σημαντική αύξηση στην έκφραση του ρ-Hsp27 σε DRSPs, η οποία συσχετίζεται αρνητικά με την έκφραση της CI-κασπάσης 3 και πρωτεΐνες CI-ΡΑΚΡ, υποδεικνύοντας ότι η p -Hsp27 μπορούν να συμμετάσχουν στο φάρμακο που προκαλείται από αντιαποπτωτικού αποτέλεσμα. Όπως αναφέρθηκε προηγουμένως, Hsp27 συμβάλλει στις κακοήθεις ιδιότητες των καρκινικών κυττάρων, συμπεριλαμβανομένης της αυξημένης ογκογονικότητα, αντοχή σε θεραπεία, και η αναστολή της απόπτωσης [32]. δεικτών πρόγνωσης, όπως Hsp27 που συσχετίζεται στενά με την επιβίωση ή την ανταπόκριση στη θεραπεία των ασθενών, μπορεί να χρησιμεύσει ως νέων θεραπευτικών στόχων με βάση την ιδιοκτησία χημειοαντίσταση τους [33]. Υπάρχουν αυξανόμενες αποδείξεις για το ρόλο της Hsp27 σε αντίσταση στο φάρμακο και ο σχηματισμός CSC σε μία ποικιλία καρκίνων [29], [34]. Επιπλέον, η λειτουργία του Hsp27 ελέγχεται από μετα-μεταφραστική τροποποίηση, όπως φωσφορυλίωση? σηματοδότηση ρ38 ΜΑΡΚ είναι υπεύθυνη για την φωσφορυλίωση της Hsp27, η οποία οδηγεί σε λειτουργικές επαγωγή της [35]. Στην παρούσα μελέτη, προς τα πάνω ρύθμιση της φωσφορυλίωσης του Hsp27 μέσω της ενεργοποίησης της σηματοδότησης ρ38 ΜΑΡΚ παρατηρήθηκε σε DRSPs. Προτείνεται ότι η ενεργοποίηση της Hsp27 ενεργοποιείται από ένα κανονικό p38 ΜΑΡΚ καταρράκτη. Επιπλέον, knockdown του Hsp27 σε DRSPs μειωμένη Cis αντίσταση και απόπτωση που επάγεται μέσω της ενεργοποίησης της κασπάσης σηματοδότησης. Λαμβανόμενα μαζί, αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν ότι, μεταξύ των πολυάριθμων οδών σηματοδότησης, ρ38 ΜΑΡΚ εξαρτώμενη σηματοδότηση μπορεί να είναι το κρίσιμο στόχος του Hsp27. Ως εκ τούτου, Hsp27 διαδραματίζει σημαντικό ρόλο στην Cis-ανθεκτικά DRSPs, πιθανότατα μέσω αντιαποπτωτικού μονοπάτι σηματοδότησης. Μια πρόσθετη μελέτη που περιελάμβανε κλινικών περιπτώσεων που σχετίζονται με την κακή πρόγνωση με υποτροπιάζοντα ή μεταστατικό OSCC βρίσκεται σε εξέλιξη και έχει ως στόχο να τεμαχίσει το διακριτό ρόλο της Hsp27 για ναρκωτικά αντίσταση σε τμήματα ιστού με ανοσοϊστοχημεία.

Μια πρόσφατη μελέτη έδειξε ότι η έκφραση της Hsp27 αυξήθηκε σε ΚΕΠ πνεύμονα και ότι η θεραπεία αυτών των κυττάρων με ένα συνδυασμό σισπλατίνης /γεμσιταβίνη χημειοθεραπεία και το φυτό φλαβονοειδών ένωση Qu ανέστειλε έκφραση Hsp27 και κατέστειλε την ανάπτυξη του όγκου και την έκφραση των γονιδίων βλαστική ικανότητα, συμπεριλαμβανομένης

Oct4

,

Nanog

, και

Sox2

[24]. Μια άλλη έκθεση έδειξε ότι ο Qu αναστέλλει σφαιροειδή σχηματισμό, την κυτταρική επιβίωση και εισβολή σε καρκίνο του προστάτη βλαστικά κύτταρα [36]. Να συμβιβάσει το ρόλο του Qu ως συνπρόσθετο σε OSCC και αναστολέας της Hsp27, που επικυρώνεται περαιτέρω την υπόθεση ότι Qu ασκεί αποπτωτική δράση της μέσω της καταστολής της δραστικότητας του παράγοντα θερμικού σοκ και σχετικές μοριακής σηματοδότησης του, η οποία είναι κρίσιμη για OSCC, όπως αναφέρεται σε άλλους καρκίνους [34]. Το συμπέρασμα που Qu λειτουργεί ως ένα αποτελεσματικό χημειοαποτρεπτικός παράγοντα σε OSCC βασίστηκε στην απόδειξη ότι Qu ενισχύει τη δράση της κασπάσης 3 και PARP, επηρεάζουν άμεσα την κατάντη της οδού αποπτωτικών συμμετοχή Hsp27 /κασπάσης σηματοδότηση 3 /PARP. Δείξαμε ότι Qu μπορεί να μετριάσει την έκφραση του

ABCG2

και

MDR-1 γονίδιο

προϊόντων που σχετίζονται με δοσο-εξαρτώμενο τρόπο και να αντιστρέψει την έκφραση του ΕΜΤ-σχετίζονται πρωτεΐνες. Είτε knockdown του Hsp27 ή η χρήση του σε συνδυασμό με Qu Cis εξασκείται παρόμοια αποπτωτικά αποτελέσματα, όπως αποδεικνύεται από την ρύθμιση προς τα κάτω του ρ-Hsp27 και την προς τα πάνω ρύθμιση CI-κασπάσης 3 και PARP CI-σε DRSPs. Επιπλέον, Qu σε συνδυασμό με Cis ανέστειλε σημαντικά τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων, τη μετανάστευση και την εισβολή, τα οποία συνοδεύονται από αλλαγές στην έκφραση των fascin-1 και ΕΜΤ-σχετίζονται πρωτεΐνες σε DRSPs. Επιπλέον, Qu σε συνδυασμό με Cis εξασθένησε την ογκογονικότητα των DRSPs, υποδεικνύοντας ισχυρά ανασταλτική δράση του στη μείωση της ανάπτυξης του όγκου και μείωση της αντίστασης στα φάρμακα

in vivo

ως αποτέλεσμα της προς τα κάτω ρύθμιση του π-Hsp27 και μεταβολές στο φαινόμενο ΕΜΤ. Για τις γνώσεις μας, η παρούσα μελέτη είναι η πρώτη που δείχνει ότι οι σχεδιαστεί ειδικά DRSPs αποδείχθηκε ότι είναι εφαρμόσιμο μοντέλο το οποίο επικυρώνει το μοριακό μηχανισμό που κρύβεται πίσω από Hsp27-μεσολάβηση ανθεκτικότητα στα φάρμακα και τη σχετική στρατηγική της θεραπείας με τη χρήση Qu ως συνπρόσθετο τόσο

in vitro

και

in vivo

.

Εν κατακλείδι, η μελέτη μας παρέχει μια εικόνα για το μηχανισμό υποκείμενη αντίσταση των ναρκωτικών στην OSCC. Το p38 ΜΑΡΚ-Hsp27 άξονα διαδραματίζει ουσιαστικό ρόλο στην CSC μεσολάβηση αντίσταση Cis στον καρκίνο του στόματος. Στόχευση αυτό άξονα, χρησιμοποιώντας Qu συνδυασμό με την παραδοσιακή χημειοθεραπεία μπορεί να αντιπροσωπεύει μια θεραπευτική στρατηγική για τη βελτίωση της πρόγνωσης σε ασθενείς με OSCC.