Αφηρημένο

Καθώς η κεντρική πρωτεΐνη των διπλών διαλείμματα σκέλος (ΟΕΔ) μονοπάτι της επαγόμενης από την επιδιόρθωση του DNA,

NBS1

συμμετέχει στην ανίχνευση των DSBs και διαδραματίζει ουσιαστικό ρόλο στη διατήρηση της γονιδιωματικής σταθερότητας. Πολυμορφισμούς μονών νουκλεοτιδίων (SNPs) στο

NBS1

γονίδιο που συνήθως δοκιμάζονται αυτή που σχετίζεται με την ευαισθησία σε πολλαπλές μορφές καρκίνου, αλλά τα αποτελέσματα παραμένουν αμφιλεγόμενα. Έτσι, πραγματοποιήσαμε δύο ανεξάρτητες μελέτες ασθενών-μαρτύρων νοσοκομείο με βάση το οποίο περιλαμβάνει 1.072 ασθενείς με καρκίνο του παχέος εντέρου και 1.263 ελέγχους για να αξιολογήσει τη σχέση μεταξύ των τεσσάρων

NBS1

SNPs και κίνδυνο ορθοκολικού καρκίνου. Το αποτέλεσμα έδειξε ότι rs2735383C /G πολυμορφισμό στην 3′-αμετάφραστη περιοχή (UTR) του

NBS1

συσχετίστηκε σημαντικά με τον κίνδυνο καρκίνου του παχέος εντέρου με τη χρήση της λογιστικής παλινδρόμησης (

P

& lt? 10

-4). Επιπλέον, παρατηρήσαμε ότι rs2735383CC γονότυπος σχετίζεται με σημαντικά αυξημένο κίνδυνο ορθοκολικού καρκίνου (αναλογία πιθανοτήτων = 1,55, 95% διάστημα εμπιστοσύνης = 1,27 έως 1,94), σε σύγκριση με τους γονότυπους rs2735383GC + GG. Περαιτέρω λειτουργικά πειράματα έδειξαν ότι το αλληλόμορφο rs2735383C στο

NBS1

διαταράσσεται η συγγένεια δέσμευσης του έχει-miR-509-5p στο

NBS1

3′-UTR σε καρκίνο του παχέος εντέρου κύτταρα, που επηρεάζουν το

NBS1

μεταγραφική δραστηριότητα και το επίπεδο έκφρασης. Εν κατακλείδι, τα τρέχοντα στοιχεία δείχνουν ότι η rs2735383C /G πολυμορφισμός μπορεί να συμβάλλουν στον κίνδυνο για καρκίνο του παχέος εντέρου

Παράθεση:. Li J-T, Zhong Β-Υ, Xu Η-Η, Qiao S-Υ, Wang G, Huang J, et al. (2015) Σύλλογοι μεταξύ

NBS1

πολυμορφισμών και ορθοκολικού καρκίνου στην κινεζική πληθυσμού. PLoS ONE 10 (7): e0132332. doi: 10.1371 /journal.pone.0132332

Επιμέλεια: Yifeng Zhou, Ιατρικό Κολέγιο του Πανεπιστημίου Soochow, ΚΙΝΑ

Ελήφθη: 5, Μαΐου 2015? Αποδεκτές: 14 Ιουν 2015? Δημοσιεύθηκε: 17 του Ιούλη 2015

Copyright: © 2015 Li et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα: Όλα τα σχετικά δεδομένα είναι εντός του χαρτιού

Χρηματοδότηση:. Δρ Χονγκ-Chuan Zhao λάβει κεφάλαια από το Εθνικό υψηλής Τεχνολογίας Έρευνας και Ανάπτυξης του Προγράμματος της Κίνας (863 Program) (Αρ 2014AA020801), Διεθνές Επιστημονικό & amp? Πρόγραμμα τεχνολογικής συνεργασίας της Κίνας (No.2013DFA31510) και του Ταμείου Έρευνας του Πεκίνου Δημοτική Επιστήμης & amp? Τεχνολογία Επιτροπής (Αρ Z111107067311021)? Ο Δρ Hui-Zhen Fan υποστηρίχθηκε από το Εθνικό Ίδρυμα Φυσικών Επιστημών της Κίνας (Νο 81360606). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Ο ορθοκολικός καρκίνος (CRC) είναι μία από τις πιο κοινές κακοήθειες κύρια αιτία των θανάτων από καρκίνο που σχετίζονται με ολόκληρο τον κόσμο [1]. Κατά την τελευταία δεκαετία, έχουν μεγάλες προσπάθειες έχουν επικεντρωθεί στην ανάπτυξη νέων μεθόδων θεραπείας και διαγνωστικών τεχνολογιών, ωστόσο, η συχνότητα και η θνησιμότητα αυξάνει σημαντικά σε ένα ασιατικό πληθυσμό [2, 3]. Εκτός από τους παράγοντες περιβαλλοντικού κινδύνου και συνήθειες του τρόπου ζωής [4, 5], γενετικές αλλοιώσεις συμπεριλαμβανομένων πολυμορφισμών μοναδικού νουκλεοτιδίου (SNPs) σε υποψήφια γονίδια τα οποία εμπλέκονται στη οδού επιδιόρθωσης DNA έχουν εμπλακεί σε ορθοκολικό καρκινογένεση [6-9].

μονοπάτια επιδιόρθωσης του DNA διαδραματίζουν βασικό ρόλο στη διατήρηση της γονιδιωματικής ακεραιότητας και πρόληψης κύτταρα κατά του καρκίνου [10]. Αντίθετα, έχει γίνει εμφανές ότι οι ελλείψεις των διαλειμμάτων (DSBs) επισκευή διπλής έλικος DNA από καρκινογόνους παράγοντες μπορεί να οδηγήσει σε γενετική αστάθεια και, κατά συνέπεια, συσχετίζονται με την ανάπτυξη του καρκίνου [11]. Δύο οδοί επιδιόρθωσης του DNA περιλαμβάνει ομόλογο ανασυνδυασμό επιδιόρθωση (HR) και μη-ομόλογες άκρο συναρμογής (NHEJ) οδών που εμπλέκονται σε ανθρώπινα κύτταρα οδηγούν σε βλάβη επισκευή προσλαμβάνοντας συγκεκριμένα μόρια επιδιόρθωσης του DNA στην θέση της βλάβης [12-14]. Η πρόσληψη της πυρηνικής πρωτεΐνης αταξία τηλαγγειεκτασία κινάση μεταλλαγμένη (ΑΤΜ) σε DNA DSBs θεωρείται ως το κρίσιμο στάδιο των δύο οδών σε ενεργοποίηση και λειτουργία του. Ωστόσο, έχει αναγνωριστεί ότι η πρόσληψη ΑΤΜ σε θέσεις DSBs που απαιτούνται και διευκολύνθηκε από ειδικές πρωτεΐνες εταίρος μειωτικού ανασυνδυασμού 11 ομόλογο (MRE11), ανθρώπινη RAD50 ομόλογο (RAD50) και Σύνδρομο Θραύσης του Nijmegen 1 (NBS1) [15]. Ως κεντρικό παίκτης του συγκροτήματος MRN, NBS1 αλληλεπιδρά άμεσα με H2AX να σχηματίσουν πυρηνικά εστίες στις περιοχές της βλάβης του DNA και ενεργοποιεί τα επόμενα βήματα για την βλάβη του DNA έγκαιρη αντίδραση [15, 16]. Επιπλέον,

NBS1

διαδραματίζει ουσιαστικό ρόλο στη συνέλευση του MRN συγκροτήματα και κατευθύνει MRN συγκροτήματα συντονίζει ϋδΒδ την επεξεργασία και την επισκευή [17, 18]. Ως εκ τούτου, οι γενετικές παραλλαγές στο

NBS1

γονίδιο μπορεί να ρυθμίζει την ικανότητα επιδιόρθωσης του DNA, και να επηρεάσει την τάση να προκαλέσει καρκίνο. Συσσωρευμένα μελέτες έχουν διερευνήσει τις ενώσεις μεταξύ των κοινών πολυμορφισμών στο

NBS1

και ανθρώπινους καρκίνους του κινδύνου [19-22]. Για ένα παράδειγμα, ένας από τους πιο συχνά μελετηθεί πολυμορφισμοί rs1805794G /C έχει διερευνηθεί που σχετίζονται με την ευαισθησία σε πολλαπλές καρκίνους [22-24]. Επιπλέον, η SNPs rs2735383C /G στην 3′-UTR του

NBS1

μπορεί να επηρεάσουν την δεσμευτική ικανότητα του microRNAs, έτσι μπορούν να επηρεάσουν την έκφραση του γονιδίου του [22, 23]. Ωστόσο, οι περιορισμένες πληροφορίες που έχει αναφερθεί για τις συσχετίσεις μεταξύ αυτών των κοινών

NBS1

πολυμορφισμούς και τον κίνδυνο CRC σε κινεζικά πληθυσμού. Ως εκ τούτου, υποθέσαμε ότι η κοινή πολυμορφισμοί του

NBS1

γονίδιο μπορεί να συνδεθεί με τον κίνδυνο της CRC.

Με βάση αυτές τις υποθέσεις, πραγματοποιήσαμε δύο μελέτες ασθενών-μαρτύρων νοσοκομείο με βάση αξιολόγηση της ενδεχόμενης επίδραση των κοινών πολυμορφισμών (rs1805794G /C, 31129G /A, 924T /C και rs2735383C /G) στο CRC κινδύνου στην κινεζική πληθυσμό.

Υλικά και Μέθοδοι

Τα άτομα της μελέτης

Όλα τα άτομα που ήταν γενετικά άσχετη εθνοτικά ομοιογενείς Κινέζων Χαν, και είναι επιλέξιμες οι συμμετέχοντες ήταν 21 έως 90 ετών κατά την πρόσληψη κατά τη διάρκεια της περιόδου της μελέτης. Για το σύνολο ανακάλυψη, συνολικά 763 ασθενείς διαγνώστηκαν CRC και 892 έλεγχοι συχνότητας ταιριάζουν με τις υποθέσεις σε σχέση με την ηλικία (± 5 έτη), το φύλο και την κατοικημένη περιοχή είχαν διαδοχικά προσληφθεί από το Νοσοκομείο του Λαού της Yichun City (Yichun, Κίνα) και της Κίνας-Ιαπωνίας Νοσοκομείο Φιλίας (Πεκίνο, Κίνα). Για την επικύρωση, 313 ασθενείς CRC και 371 έλεγχοι συχνότητας ταιριάζουν με τις υποθέσεις σε σχέση με την ηλικία (± 2 έτη), το φύλο και την κατοικημένη περιοχή είχαν διαδοχικά εγγραφεί από την Κίνα, την Ιαπωνία Νοσοκομείο Φιλίας (Πεκίνο, Κίνα). Μεταξύ των επιλέξιμων συμμετεχόντων, τα ποσοστά προσλήψεων ήταν περίπου 95% για τους ασθενείς και περίπου 81% για τους ελέγχους. Όλοι οι ασθενείς που δεν είχαν λάβει καμία χημειοθεραπεία ή ακτινοθεραπεία και δεν υπήρχαν περιορισμοί στην ηλικία, το στάδιο, ή ιστολογία. Όγκου στάσης και παθολογικές τύπου αξιολογήθηκαν σύμφωνα με την 2002 αμερικανική μεικτής επιτροπής για το σύστημα Καρκίνος στάσης. Το ποσοστό συμμετοχής των ελέγχων ήταν 89%. Τα κλινικά χαρακτηριστικά των ασθενών και των ελέγχων του συνόλου ανακάλυψη και σύνολο επικύρωσης που αναφέρονται στον Πίνακα 1. Σε προσλήψεις, κάθε συμμετέχων είχε προγραμματιστεί για μια συνέντευξη με επιδημιολογική ερωτηματολόγιο αφού δώσει γραπτή συγκατάθεση και υπό τον όρο περίπου δείγματος αίματος 5 ml για ανάλυση DNA . Η επιδημιολογική ερωτηματολόγιο περιελάμβανε δημογραφικά δεδομένα, λεπτομερείς πληροφορίες του καπνίσματος και της κατανάλωσης αλκοόλ, το οικογενειακό ιστορικό καρκίνου και ούτω καθεξής. Η μελέτη αυτή εγκρίθηκε από την Επιτροπή Ιατρικής Δεοντολογίας του Νοσοκομείου της Λαϊκής Δημοκρατίας της Yichun City και της Επιτροπής Ιατρικής Δεοντολογίας της Κίνας-Ιαπωνίας Φιλίας Νοσοκομείο στην πόλη του Πεκίνου.

Η

Γονοτυπικές αναλύσεις

Με βάση την η δυνατότητα της λειτουργικής αλλαγής του

NBS1

SNPs στο πλαίσιο γονιδίωμα, τέσσερα

NBS1

SNPs (924T /C σε 5′-UTR, rs1805794G /C στο εξόνιο 5, 31129G /A στο εξώνιο επιλέχθηκαν 10 και rs2735383C /G σε 3′-UTR) έχουν αναφερθεί στο παρελθόν σε σχέση με τα αποτελέσματα της νόσου, συμπεριλαμβανομένων των καρκίνων και αναλύθηκαν [22, 25]. Γονιδιωματικό DNA απομονώθηκε από δείγματα περιφερικού αίματος για κάθε θέμα μελέτης με τη χρήση του αίματος Γονιδιώματος DNA Extraction Kit (Takara? Dalian, Κίνα). Αυτά τα τέσσερα

NBS1

SNPs γονότυπος με φασματομετρία μάζας MALDI-TOF αλληλόμορφο-ειδική (Sequenom, San Diego, CA) όπως περιγράφεται προηγουμένως [26, 27] χωρίς τη γνώση της κατάστασης υποκειμένων. Επίσης, για να επιβεβαιώσει τα γονοτυπική αποτελέσματα από την ανάλυση φασματομετρίας μάζας, επιλέξαμε τυχαία 100 δείγματα για άμεση αλληλούχιση, και το αποτέλεσμα ήταν 100% σύμφωνη.

Κατασκευή των πλασμιδίων δημοσιογράφος

Από μια σημαντική συσχέτιση παρατηρήθηκε για τον πολυμορφισμό rs2735383C /G και τον κίνδυνο CRC, δύο πλασμίδια ανταποκριτές που περιέχουν rs2735383G ή αλληλόμορφο rs2735383C κατασκευάστηκαν για να αξιολογηθεί η επίδραση αυτού του πολυμορφισμού στη γονιδιακή έκφραση του

in vitro

. Το πλήρους μήκους του ανθρώπινου

NBS1

3′-UTR πλευρικές SNP πολυμορφισμός rs2735383 συντέθηκε από την Εταιρεία Genewiz και στη συνέχεια κλωνοποιήθηκαν εντός του φορέα βασική psi-CHECK2 (Σχήμα 1Α). Τα δύο προκύπτοντα μορφώματα psi-CHECK2-

NBS1

-rs2735383C και psi-CHECK2-

NBS1

-rs2735383G ήταν όλοι εκ νέου σε ακολουθία για να επιβεβαιωθεί η αλληλουχία και την ακεραιότητα των ένθετα κάθε κατασκεύασμα του.

Η δραστικότητα της λουσιφεράσης του αλληλόμορφου παραλλαγής rs2735383 επί λουσιφεράσης που φέρουν

NBS1

3′-UTR συν-επιμολύνθηκαν με ή χωρίς HSA-miR-509-5p μιμείται ή αναστολείς HSA-miR-509-5p σε κύτταρα HCT116 (Α) και ΗΤ-29 κύτταρα (Β). δραστικότητα λουσιφεράσης Renilla μετρήθηκε και ομαλοποιήθηκε ως προς λουσιφεράση πυγολαμπίδας. Έξι αντίγραφα διεξήχθησαν για κάθε ομάδα, και το πείραμα επαναλήφθηκε τουλάχιστον τρεις φορές. Τα δεδομένα είναι μέσες ± τυπικό σφάλμα του μέσου όρου? **

P

& lt? 0,01. (C)

NBS1

επίπεδο έκφρασης του mRNA σε δείγματα καρκινικού ιστού από καρκίνο του παχέος εντέρου άτομα με διαφορετική παραλλαγή rs2735383 αλληλόμορφα γονότυπο (11 rs2735383GG, 13 rs2735383GC και 5 rs2735383CC)? δεδομένα είναι μέσος όρος ± τυπικό σφάλμα του μέσου, κανονικοποιημένη προς

GAPDH

,

P

= 0.027. (Δ) της έκφρασης του mRNA της HSA-miR-509-5p σε 29 παχέος ιστούς καρκίνου ομαδοποιούνται ανάλογα με το rs2735383 C /G γονότυπους. Η έκφραση του mRNA της HSA-miR-509-5p υπολογίστηκε σε σχέση με την έκφραση του

U6

mRNA. Τα δεδομένα είναι μέση τιμή ± τυπικό σφάλμα του μέσου όρου,

P

= 0,345.

Η

Παροδικές επιμολύνσεις και δοκιμασίες λουσιφεράσης

Επειδή ο ουσιαστικός ρόλος της 3′-UTR στην γονίδιο, έχουμε προβλέψει την rs2735383C /G πολυμορφισμό στην 3′-UTR με ανάλυση βιοπληροφορικής μας (https://snpinfo.niehs.nih.gov/). Το αποτέλεσμα έδειξε ότι η μετατροπή από Γ έως Ζ του 3′-UTR rs2735383 πολυμορφισμός προκαλέσει νέα θέση δέσμευσης των microRNA HSA-miR-629, έχει-miR-499-5p, και έχει-miR-509-5p. Για τον προσδιορισμό παροδικής διαμόλυνσης, ανθρώπινου ορθοκολικού κυτταρικές σειρές, δηλαδή HCT116 και ΗΤ-29 σπάρθηκαν σε 1 × 10

5 κύτταρα ανά φρεάτιο σε πλάκες 24 φρεατίων (Βϋ Biosciences, Bedford, ΜΑ). Οι δοκιμασίες λουσιφεράσης έγιναν όπως περιγράφηκε προηγουμένως [28]. Για την ανάλυση της λουσιφεράσης δραστηριότητα, 800ng psi-CHECK2-

NBS1

3′-UTR φορείς συνεπιμολύνθηκαν με μιμείται 40pmol microRNA (HSA-miR-629, HSA-miR-499-5p, και HSA-miR-509 -5p) και με ή χωρίς 40pmol αναστολέων με Lipofectamine 2000 (Invitrogen, Carlsbad, CA) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Μετά τη διαμόλυνση επί 24 ώρες, τα κύτταρα συλλέχθηκαν και η δραστικότητα λουσιφεράσης Renilla μετρήθηκε με το Dual-Luciferase Reporter Assay System (Promega, Madison, WI) (Promega). Τρία ανεξάρτητα πειράματα έγιναν για κάθε πλασμίδιο κατασκεύασμα.

ποσοτική πραγματικού χρόνου PCR (qRT-PCR)

29 CRC ιστούς με διαφορετικούς γονότυπους rs2735383 υποβλήθηκαν σε διερεύνηση της συσχέτισης μεταξύ του

NBS1

επίπεδα mRNA και rs2735383C /G πολυμορφισμό. Ολικό RNA απομονώθηκε χρησιμοποιώντας το αντιδραστήριο ΤπζοΙ (Invitrogen Inc., USA) και ανέστρεψε μεταγράφηκε σε cDNA χρησιμοποιώντας ολιγο-άΤ εκκινητή. Πραγματοποιήσαμε σύστημα 7500 ανίχνευσης ακολουθίας ΑΒΙ Prism να αξιολογήσει

NBS1

και

GAPDH

επίπεδα mRNA με βάση την SYBR-Πράσινο μέθοδο. Ο τελευταίος χρησιμοποιήθηκε ως εσωτερικός ποσοτικό έλεγχο και

NBS1

επίπεδο έκφρασης ομαλοποιήθηκε στο

GAPDH

. Ο TaqMan microRNA Αναλύσεις (Applied Biosystems) χρησιμοποιήθηκε για την ανίχνευση HSA-miR-509-5p έκφρασης σύμφωνα με το πρωτόκολλο του κατασκευαστή και την καθολικά εκφράζονται

U6

μικρό πυρηνικό RNA χρησιμοποιήθηκε για τον εσωτερικό έλεγχο.

Στατιστική Ανάλυση

Οι διαφορές στην κατανομή συχνότητας των επιλεγμένων δημογραφικών μεταβλητών, καθώς και rs2735383C /G αλληλόμορφο και γονοτύπων μεταξύ περιπτώσεων και ελέγχων εκτιμήθηκαν με τις chi-square τεστ. Η ισορροπία Hardy-Weinberg (HWE) των καρκινικών χωρίς ελέγχους κατανομές γονότυπου δοκιμάστηκε με ένα τεστ chi-square καλοσύνη-of-fit. Η δύναμη της σύνδεσης μεταξύ της rs2735383C /G πολυμορφισμό και τον κίνδυνο καρκίνου του CRC υπολογίστηκε με αναλογίες πιθανοτήτων (OR) με διαστήματα εμπιστοσύνης 95% (ΠΙ) χρησιμοποιώντας άνευ όρων λογιστικής παλινδρόμησης και προσαρμογή για την ηλικία και το φύλο. σύγκριση Ομίλου αναλύθηκε με t-test του Student (διπλής όψης). Στρωματοποιημένη ανάλυση πραγματοποιήθηκε επίσης από υποομάδες ηλικία, το φύλο ή άλλα χαρακτηριστικά (κάπνισμα, την κατάσταση κατανάλωσης αλκοόλ, ΔΜΣ, το στάδιο και το οικογενειακό ιστορικό) για να αξιολογήσει τις μεταβλητές που σχετίζονται με ΕΑΠ στρώμα μεταξύ των

NBS1

γονότυπους. Η μονόδρομη ANOVA χρησιμοποιήθηκαν για να αξιολογηθούν οι διαφορές στη δραστικότητα λουσιφεράσης ανταποκριτή και την επίδραση της rs2735383C /G στο

NBS1

έκφραση μεταξύ των ασθενών CRC. Η στατιστική ισχύς υπολογίστηκε με τη χρήση του λογισμικού PS (https://biostat.mc.vanderbilt.edu/twiki/bin/view/Main/PowerSampleSize). Όλες οι δοκιμασίες ήταν δύο όψεων με τη χρήση του λογισμικού SAS (έκδοση 9.1? SAS Institute, Cary, NC). Στατιστικά σημαντικό επίπεδο ορίστηκε ως

P

& lt?. 0.05

Αποτελέσματα

γονότυποι και CRC

κινδύνου

Στη μελέτη, ο γονότυπος τεσσάρων κοινών πολυμορφισμών ( rs1805794G /C, 31129G /A, 924T /C και rs2735383C /G) του

NBS1

γονιδίου σε 1076 ασθενείς με CRC και 1263 υγιείς μάρτυρες. Οι συχνότητες γονοτύπου αυτών πολυμορφισμών στο έλεγχοι ήταν συνεπής με την HWE (

P

& gt? 0,05 για όλους). Οι κατανομές γονότυπου

Οι NBS1

πολυμορφισμοί των περιπτώσεων και οι έλεγχοι στο σύνολο ανακάλυψη και την επικύρωση παρουσιάζονται στον Πίνακα 2. Μια σημαντική συσχέτιση με CRC κίνδυνος παρατηρήθηκε για rs2735383C /G, αλλά όχι για άλλους πολυμορφισμούς στα δύο πληθυσμούς (

P

& lt? 10

-4 για rs2735383C /G στο σύνολο ανακάλυψη και

P

= 0,039 για rs2735383C /G στο σύνολο επικύρωσης). Όπως έδειξε στον Πίνακα 2, τα άτομα με rs2735383CC γονότυπους ήταν στατιστικά σημαντικά υψηλότερο κίνδυνο από ό, τι των μεταφορέων με τους γονότυπους rs2735383GG + GC (προσαρμογή OR = 1,52? 95% CI = 1,20 – 1,99,

P

& lt? 10

-4 για την ανακάλυψη που και προσαρμογή OR = 1,60? 95% CI = 1,11 – 2,37,

P

= 0,025 για το σύνολο επικύρωσης). Επιπλέον, παρατηρήθηκε σημαντική συσχέτιση μεταξύ των πολυμορφισμών rs2735383 και του κινδύνου CRC όταν συνδυάζονται τα δύο πληθυσμούς (

P

& lt? 10

-4).

Η

Εμείς περαιτέρω πραγματοποιούνται οι αναλύσεις διαστρωμάτωση για την αξιολόγηση των επιπτώσεων της rs2735383C /G γονότυπους για CRC κινδύνου ανάλογα με την ηλικία, το φύλο, το κάπνισμα, η κατανάλωση αλκοόλ και το οικογενειακό ιστορικό καρκίνου στο σύνολο ανακάλυψη. Όπως έδειξε στον Πίνακα 3, ένα σημαντικά αυξημένο κίνδυνο CRC που συνδέονται με τον πολυμορφισμό ήταν εντονότερη μεταξύ των υποομάδων πότες. Σε σύγκριση με το rs2735383GG και γονότυπους GC, CC γονότυπο έδειξε 2,2 φορές τον κίνδυνο του CRC σε πότες (OR = 1,70, 95% CI = 1,51 – 2,88,

P

= 0,004). Ωστόσο, δεν υπήρχε στατιστικά διαφορά μεταξύ των κατανομών των άλλων επιλεγμένων μεταβλητών και του κινδύνου CRC.

Η

Επίδραση του

NBS1

rs2735383C /G πολυμορφισμό στην μεταγραφική δραστηριότητα

κατασκευάσαμε φορέων αναφοράς λουσιφεράσης με τη χρήση του φορέα psi-CHECK2 με είτε το rs2735383C ή rs2735383G αλληλόμορφο και μορφομετατρέψει πρόσκαιρα HCT116 και ΗΤ-29 κυττάρων με HSA-miR-629, HSA-miR-499-5p, και HSA-miR-509- 5ρ, αντίστοιχα. Εξετάσαμε αν η microRNA έχει ένα αλληλόμορφο-ειδική επίδραση στο

NBS1

έκφραση στα κύτταρα CRC. Το αποτέλεσμα έδειξε ότι τα κύτταρα CRC συν-επιμολύνθηκαν παροδικώς HSA-miR-509 μιμείται και φορείς που περιέχουν το αλληλόμορφο rs2735383C σημαντικά μειωμένη δραστηριότητα λουσιφεράσης, σε σύγκριση με κύτταρα φορείς που περιέχουν το αλληλόμορφο rs2735383G (

P

& lt? 0,05 σε κύτταρα HCT116 και ΗΤ-29 κύτταρα? Σχήμα 1Β). Ωστόσο, δεν βρέθηκε σημαντική διαφορά μεταξύ αυτού του πολυμορφισμού και της δραστηριότητας της μεταγραφής με HSA-miR-629 και HSA-miR-499-5p στα κύτταρα CRC. Αυτά τα δεδομένα έδειξαν ότι rs2735383C /G μπορεί να επηρεάσει τη μεταγραφή του

NBS1

επηρεάζοντας τη θέση δέσμευσης των microRNA στο

NBS1

3′-UTR.

Σύλλογος rs2735383C /G πολυμορφισμό με

NBS1

έκφραση του mRNA

εξεταστεί περαιτέρω η

NBS1

έκφρασης σε 29 CRC ιστούς με διαφορετικό rs2735383C /G γονότυπων από qRT-PCR. Όπως φαίνεται στο Σχ 1C, βρήκαμε ότι οι ασθενείς με το γονότυπο ομοζυγώτη rs2735383CC είχαν σημαντικά χαμηλότερα

NBS1

επίπεδα του mRNA (μέση ± τυπικό σφάλμα: 0.161 ± 0.037) από τους ασθενείς με το GC (0.363 ± 0.047) ή GG ( 0,400 ± 0,050? τεστ ANOVA:

P

= 0,026) γονότυπους. Επιπλέον, QRT-PCR χρησιμοποιήθηκε περαιτέρω να εξεταστεί αν HSA-miR-509-5p εκφράζεται ιδιοσυστατικά σε δείγματα ιστού CRC. Όπως φαίνεται στο Σχ 1D, HSA-miR-509-5p ήταν ιδιοσυστατικά εκφράζεται σε ιστούς CRC? εκτιμώντας ότι δεν υπήρχε σημαντική συσχέτιση μεταξύ της έκφρασης φόντο της HSA-miR-509-5p και το

NBS1

rs2735383C /G γονότυπων σε ιστούς όγκων που συλλέχθηκαν από ασθενείς CRC (

P

= 0,345).

Συζήτηση

CRC καρκινογένεση είναι πολυπαραγοντική. Όχι μόνο περιβαλλοντικούς παράγοντες κινδύνου, αλλά και γενετικοί παράγοντες μπορεί να παίζουν σημαντικό ρόλο στην αιτιολογία της CRC. Σε αυτή τη μελέτη ασθενών-μαρτύρων νοσοκομείο με βάση, διερευνήθηκε ο ρόλος των τεσσάρων κοινών

NBS1

SNPs στην ευπάθεια σε CRC στην κινεζική πληθυσμούς. Βρήκαμε ότι η HSA-miR-509-5p μπορεί να συνδέονται στενά με 3′-UTR του

NBS1

που περιέχει το αλληλόμορφο rs2735383C, ρυθμίζει αρνητικά το επίπεδο των

NBS1

. Επιπλέον, στις ακόλουθες στρωματοποιημένη αναλύσεις, φάνηκε ότι ένα φαινόμενο υψηλού κινδύνου αυτού του πολυμορφισμού ήταν ιδιαίτερα εμφανής μεταξύ των υποομάδων των πότες.

NBS1

αποτελεί βασικό ρυθμιστή που συμμετέχει στην επιδιόρθωση DSB κατευθύνοντας το σύμπλοκο πρωτεΐνης MRN στους χώρους της βλάβης του DNA και την τόνωση της δέσμευσης του DNA του και δραστικότητα νουκλεάσης. Οι κύριες λειτουργικές περιοχές του

NBS1

στις απαντήσεις βλάβη του DNA που περιλαμβάνει την συντηρημένη forkhead σχετιζόμενη (FHA) τομέα και τον καρκίνο του μαστού καρβοξυ-τερματικό (ΒΑΟΤ) τομέα, τα οποία είναι σημαντικά για την αναγνώριση και την επισκευή των έκτροπου DNA [ ,,,0],29-31]. Πολυάριθμες αναφορές έχουν τονίσει την δυνητικά κρίσιμο ρόλο του

NBS1

, ένα σημαντικό μέρος του συγκροτήματος MRN, στη διατήρηση της γονιδιωματικής σταθερότητας και της πρόληψης των ογκογόνο διαδικασίες με την πρόσληψη επισκευής και οδοφράγματος πρωτεϊνών κατά τη διάρκεια των διαλειμμάτων του DNA [32, 33]. Έτσι, οι μεταλλάξεις του

NBS1

μπορεί να επηρεάσει την λειτουργία του

NBS1

και αλληλεπίδρασης πρωτεΐνης-πρωτεΐνης, και περαιτέρω πιθανώς να αυξήσει την ευαισθησία του καρκίνου. Ως ένα από τα πιο συχνά διερευνηθεί πολυμορφισμοί, rs1805794G /C βρίσκεται στην περιοχή BACT και να επηρεάσει το σχηματισμό ενός συμπλόκου επιτήρηση γονιδιώματος συνδυάζεται με BRCA1 (BASC) αν και δέσμευση με BRCA1, το οποίο είναι υπεύθυνο για την ανίχνευση και την επισκευή του έκτροπου δομών DNA [ ,,,0],29]. Αρκετές γραμμές μελέτες έχουν διερευνήσει τη συσχέτιση μεταξύ του πολυμορφισμού και αρκετές καρκίνους [22, 34-37]. Ωστόσο, η σχέση μεταξύ

NBS1

rs1805794G /C παραλλαγή γονότυπους και ο κίνδυνος καρκίνου δεν είναι σύμφωνος με διαφορετικούς καρκίνους και εθνοτική ομάδα. Για παράδειγμα, σ Widlak διαπίστωσε ότι παραλλαγή rs1805794 γονότυπους δεν συνδέθηκαν με την ευαισθησία του CRC σε πολωνικό πληθυσμό [37]. Ομοίως, τα παρόντα αποτελέσματα είναι σύμφωνα με την παραπάνω μελέτη ότι ο πολυμορφισμός rs1805794G /C δεν συνδέεται με τον κίνδυνο της CRC στην κινεζική πληθυσμό.

Για τις γνώσεις μας,

NBS1

31129G /A και 924T /C που περιλαμβάνονται στην μελέτη μας σπάνια έχουν διερευνηθεί σε ανθρώπινους όγκους [22, 25]. Και εμείς δεν παρατηρούμε τη σχέση μεταξύ αυτών των δύο SNPs και του κινδύνου CRC. Όσο για rs2735383C /G πολυμορφισμός, που βρίσκεται στο 3′-UTR του

NBS1

γονίδιο. Αρκετές μελέτες έχουν διερευνήσει την rs2735383C /G πολυμορφισμό με την ευαισθησία του καρκίνου. Μια μετα-ανάλυση βασίζεται σε δεκατρία επιλέξιμες μελέτες συμπεριλαμβανομένων των 7561 υποθέσεων και 8432 άτομα ελέγχου διερευνώνται ότι δεν υπάρχει σημαντική συσχέτιση βρέθηκε μεταξύ των πολυμορφισμών στο

NBS1

γονιδίων και καρκίνου της ουροδόχου κύστης [38, 39], ο καρκίνος του μαστού [40], λεμφοειδείς κακοήθειες [41]. Πρόσφατα, έχει υποτεθεί ότι η προαναφερόμενη rs2735383C πολυμορφισμό /G θα μπορούσε να συμβάλει στην ανάπτυξη του κινδύνου καρκίνου του πνεύμονα. Ακόμη πιο ενδιαφέρον, μια άλλη κινεζική μελέτη μεταξύ 575 περιπτώσεις καρκίνου του πνεύμονα και 575 μάρτυρες ανέφεραν ότι η rs2735383C /G πολυμορφισμός δεν συσχετίστηκε με επιδεκτικότητα καρκίνου του πνεύμονα [42]. Στη μελέτη μας, rs2735383C /G πολυμορφισμό συσχετίστηκε σημαντικά με CRC κίνδυνο. αναλύσεις περαιτέρω διαστρωμάτωση έδειξαν ότι ο αυξημένος κίνδυνος που συνδέεται με την παραλλαγή αλληλόμορφο ήταν εντονότερη στην κατάσταση πόσιμο. Περαιτέρω λειτουργική ανάλυση έδειξε ότι οι υποκαταστάσεις νουκλεοτιδίου από G σε C προκαλέσει νέα θέση δέσμευσης του microRNA HSA-miR-509-5p, επηρεάζοντας έτσι τη μεταγραφική δραστικότητα του

NBS1

σε

vitro

, η οποία είναι σύμφωνα με τις προηγούμενα ευρήματα [24]. Στο σύνολό τους, τα ευρήματα αυτά υποδηλώνουν ότι η έκφραση dynormal του

NBS1

που προκύπτουν από τις γενετικές παραλλαγές στο

NBS1

, κατά συνέπεια, επηρεάζει την πρωτεΐνη NBS1 και άλλα επισκευαστεί πρωτεΐνες αλληλεπιδρούν στις διαδικασίες επιδιόρθωσης του DNA, έτσι μπορούν να ρυθμίσουν το CRC ευαισθησία.

Αυτή είναι η πρώτη μελέτη που έχουμε διεξοδικά ερευνηθεί τις ενώσεις μεταξύ των

NBS1

SNPs και του κινδύνου CRC. Είχαμε ένα αρκετά μεγάλο μέγεθος δείγματος για την μελέτη ασθενών-μαρτύρων. Επιπλέον, το γεγονός ότι οι συχνότητες γονοτύπου μεταξύ ελέγχους ταιριάζει με το νόμο ανισορροπία Hardy-Weinberg πρότεινε η τυχαία επιλογή θέματος. Και έχουμε αποκτήσει μια δύναμη 91% της μελέτης (δοκιμή διπλής όψης, α = 0,05) για την ανίχνευση ενός ή του 1,52 για τους γονότυπους rs2735383CC (η οποία επήλθε σε συχνότητα 16,14% στους ελέγχους) σε σύγκριση με τους γονότυπους rs2735383GC + GG στο το σύνολο ανακάλυψη, που μπορεί να έχουν ενισχύσει την αξιοσημείωτη του εύρημα μας.

Εν κατακλείδι, η μελέτη μας υποδηλώνει ότι ο πολυμορφισμός rs2735383C /G στο

NBS1

γονίδιο μπορεί να είναι ένας γενετικός παράγοντας ευαισθησίας για τον κίνδυνο του CRC στην κινεζική πληθυσμό. Επιπλέον, τα ευρήματά μας θα απαιτήσει μεγαλύτερες μελέτες ασθενών-μαρτύρων και καλά σχεδιασμένα μηχανιστικές μελέτες για την επαλήθευση.