Αφηρημένο

Ιστορικό

Αυθόρμητη καρκίνου των ωοθηκών σε κοτόπουλα μοιάζει με ανθρώπινο όγκοι τόσο ιστολογικά και βιοχημικά. Ο στόχος ήταν να καθοριστεί αν υπάρχουν διαφορές στο περιεχόμενο των λεμφοκυττάρων μεταξύ της κανονικής ωοθηκών και των ωοθηκών σε κοτόπουλα ως βάση για περαιτέρω μελέτες για να κατανοήσουν το ρόλο της ασυλίας στην ανθρώπινη εξέλιξη του καρκίνου των ωοθηκών.

Μέθοδοι

Κοτόπουλα επελέγησαν με τη χρήση της κλίμακας του γκρι και έγχρωμο Doppler υπερηχογράφημα για να διαπιστωθεί αν είχαν φυσιολογικό ή όγκου μορφολογία. Τα κύτταρα απομονώθηκαν από τις ωοθήκες (n = 6 όρνιθες) και τους αριθμούς των λεμφοκυττάρων προσδιορίστηκαν με κυτταρομετρία ροής χρησιμοποιώντας αντισώματα για τη γρίπη CD4 και CD8 Τ και τα κύτταρα Β (Bu1a). Ωοθηκών τμήματα από ένα άλλο σύνολο των ορνίθων (n = 26) αξιολογήθηκαν για να επαληθεύσετε τον τύπο του όγκου και το στάδιο και να μετρήσει CD4, CD8 και Bu1a ανοσοχρωματίστηκε κύτταρα με μορφομετρική ανάλυση.

Αποτελέσματα

Τ και Β κύτταρα ήταν πιο πολυάριθμες σε όγκους των ωοθηκών σε σχέση με φυσιολογικές ωοθήκες με κυτταρομετρία ροής και ανοσοϊστοχημεία. Υπήρχαν λιγότερα κύτταρα CD4 + από CD8 + και Bu1a + κύτταρα σε φυσιολογικές ωοθήκες ή όγκους των ωοθηκών. CD8 + κυττάρων ήταν το κυρίαρχο υπο-τύπου Τ κυττάρων σε τόσο στρώμα των ωοθηκών και σε θυλάκια των ωοθηκών σε σύγκριση με κύτταρα CD4 +. Bu1a + κύτταρα βρέθηκαν σταθερά στο στρώμα του φυσιολογικές ωοθήκες και των ωοθηκών, αλλά δεν συνδέθηκαν με θυλάκια. Ο αριθμός των κυττάρων του ανοσοποιητικού συστήματος ήταν υψηλότερη σε προχωρημένο στάδιο ορώδες όγκους σε σύγκριση με ενδομητριοειδές και βλεννώδεις όγκων.

Συμπεράσματα

Τα αποτελέσματα υποδεικνύουν ότι παρόμοια με τον ανθρώπινο καρκίνο των ωοθηκών υπάρχουν συγκριτικά πιο ανοσοκύτταρα σε ωοθηκών κοτόπουλου όγκων σε σχέση με φυσιολογικές ωοθήκες, και το υψηλότερο περιεχόμενο ανοσοκυττάρων συμβαίνει σε ορώδες όγκους. Έτσι, αυτή η μελέτη καθορίζει ένα θεμέλιο για την περαιτέρω μελέτη του όγκου ανοσοαποκρίσεων σε ένα αυθόρμητο μοντέλο του καρκίνου των ωοθηκών το οποίο θα διευκολύνει τις μελέτες του ρόλου της ανοσίας στις αρχές της εξέλιξης του καρκίνου των ωοθηκών και τη χρήση του κότα σε δοκιμές προ-κλινικά εμβόλιο.

Παράθεση: Bradaric MJ, Penumatsa Κ, Barua Α, Edassery SL, Yu Υ, Abramowicz JS, et al. (2013) κύτταρα του ανοσοποιητικού συστήματος Κανονική ωοθηκών και Αυθόρμητες ωοθηκών όγκοι στον Τοποθέτηση Hen (

κότες

) Μοντέλο του Ανθρώπινου καρκίνου των ωοθηκών. PLoS ONE 8 (9): e74147. doi: 10.1371 /journal.pone.0074147

Επιμέλεια: Ρατζίβ Samant, Πανεπιστήμιο της Αλαμπάμα στο Μπέρμιγχαμ, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 22 Μαρ 2013? Αποδεκτές: 26 του Ιουλίου του 2013? Δημοσιεύθηκε: 9 Σεπτεμβρίου 2013

Copyright: © 2013 Bradaric et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτή η μελέτη υποστηρίχθηκε από ΝΙΗ R01AI055060 (JL), DOD OC073325 (JL), το Ίδρυμα Segal (JL) και το Ίδρυμα πρόληψη του καρκίνου (ΑΒ). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Ιστορικό

Πολλαπλά στοιχεία εμπλέκονται στην ανάπτυξη και εξέλιξη του καρκίνου συμπεριλαμβανομένης της γενετικής, επιγενετική, περιβαλλοντικών και ανοσολογικών παραγόντων [1], [2]. Αν και είναι σαφές ότι η ανοσία έχει σημαντικό ρόλο στον καρκίνο και ότι ο έλεγχος ανοσοαποκρίσεις σε όγκους έχει σημαντικό δυναμικό για την πρόληψη και τη θεραπεία του καρκίνου, η ανοσοαπόκριση σε όγκους δεν είναι καλά κατανοητός. Μια υψηλότερη περιεκτικότητα όγκου του CD3 + Τ κυττάρων [3] ή CD8 + κυτταροτοξικά Τ κύτταρα [4] σε όγκους προχωρημένο στάδιο σχετίζεται με καλύτερη πρόγνωση για τους ασθενείς με καρκίνο των ωοθηκών, ενώ μια υψηλότερη σχετική περιεκτικότητα των ρυθμιστικών κυττάρων Τ συνδέεται με μια χειρότερη πρόγνωση [5 ], υποδεικνύοντας τον αριθμό και τους τύπους των κυττάρων του ανοσοποιητικού συστήματος είναι σημαντικά για την κλινική έκβαση. Πρόσφατα στοιχεία δείχνουν ότι οι CD20 + Β κύτταρα που βρίσκονται στις δύο όγκους πρώιμο και όψιμο στάδιο των ωοθηκών και ότι μεγαλύτεροι αριθμοί μπορεί να σχετίζεται με καλύτερη πέντε ποσοστά χρόνου επιβίωσης [6]. Ωστόσο, υπάρχει αντικρουόμενα στοιχεία σχετικά με το ρόλο της ασυλίας όσον αφορά την πρόληψη ή την εξέλιξη της νόσου, έχει προταθεί ότι ο λειτουργικός ρόλος των αλλαγών της ασυλίας κατά τη διάρκεια της εξέλιξης του όγκου [7].

Ο καρκίνος των ωοθηκών είναι συνήθως διαγιγνώσκεται σε προχωρημένο στάδιο και έχει ένα υψηλό ποσοστό υποτροπής και θνησιμότητας επειδή δεν υπάρχουν τυποποιημένες μεθόδους έγκαιρης ανίχνευσης. Επειδή πρώιμο στάδιο του καρκίνου των ωοθηκών είναι δύσκολο να ανιχνευθούν, οι περισσότερες μελέτες χρησιμοποιούν δείγματα προχωρημένο στάδιο και ως εκ τούτου υπάρχει σχετικά λίγες πληροφορίες σχετικά με την ασυλία στην έναρξη και την πρώιμη εξέλιξη του καρκίνου των ωοθηκών. Τα πρώιμα στάδια του καρκίνου των ωοθηκών πιο εύκολα μελετηθεί σε ζωικά μοντέλα και τα μοντέλα αυτά αντιπροσωπεύουν μια εναλλακτική προσέγγιση για τη διαλεύκανση αιτιολογία του όγκου και του ρόλου της ανοσίας στον καρκίνο των ωοθηκών. Περαιτέρω ανάπτυξη της προ-κλινικά μοντέλα του καρκίνου των ωοθηκών είναι απαραίτητη για να διευκολύνει την ανάπτυξη και τη δοκιμή των εμβολίων για τη θεραπεία του καρκίνου των ωοθηκών.

Υπάρχει μια σειρά από μοντέλα τρωκτικών του καρκίνου των ωοθηκών με βάση γενετικά ή χημικά επαγόμενων όγκων ή για εμφύτευση ανθρώπινων όγκων σε SCID (σοβαρή συνδυασμένη ανοσοανεπάρκεια) ή RAG (γονίδιο ενεργοποίησης ανασυνδυασμό) ανεπαρκή ποντίκια [8]. Ωστόσο, τα περισσότερα μοντέλα τρωκτικών δεν αναπτύσσουν καρκίνο των ωοθηκών αυθόρμητα και εκείνοι που κάνουν συχνά παράγουν μόνο ένα histotype [8], [9], [10], [11], [12]. Ενώ αυτά τα μοντέλα είναι χρήσιμα για τις ιδέες σε γενετικούς και περιβαλλοντικούς παράγοντες που συμβάλλουν στην καρκίνους και στην ανάπτυξη στρατηγικών χημειο-θεραπευτική, είναι λιγότερο κατάλληλες για τη διερεύνηση των πρώιμων αυθόρμητες εκδηλώσεις που σχετίζονται με την ανοσολογία όγκων, επειδή δεν είναι σαφές εάν αυτά υφίστανται το ίδιο φυσικό ή αυθόρμητες εκδηλώσεις που οδηγούν σε όγκους των ωοθηκών.

Η θέσπιση κότα (

κότες

) γεμίζει αυτό το κενό, δεδομένου ότι αναπτύσσεται αυθόρμητα προοδευτική όγκους των ωοθηκών με μεταγενέστερο στάδιο μεταστάσεις και την παραγωγή του ασκίτη [13]. Εμείς και άλλοι ανέφεραν ότι η περί κότα είναι ένα έγκυρο μοντέλο για τη μελέτη του ανθρώπινου καρκίνου των ωοθηκών [14], [15], [16], [17], [18]. Αυθόρμητη όγκους των ωοθηκών στις κότα μοιράζονται πολλά χαρακτηριστικά του ανθρώπινου καρκίνου των ωοθηκών. Η ιστολογία και τη μορφολογία των κότα και ανθρώπινων όγκων των ωοθηκών είναι παρόμοια? όγκοι όρνιθα έχουν συνήθως ορώδης, ενδομητριοειδές, σαφείς κυττάρων και βλεννώδες ιστολογία συγκρίσιμες με τις συχνές επιθηλιακά υποτύπους του ανθρώπινου καρκίνου των ωοθηκών [14]. Δείξαμε προηγουμένως ότι οι όγκοι των ωοθηκών σε ωοτόκες όρνιθες μπορούν επίσης να ανιχνευθούν με διακολπικό υπερηχογράφημα χρησιμοποιώντας τον τύπο του εξοπλισμού που χρησιμοποιούνται συνήθως σε κλινικές [19], [20]. Όταν συνδυάζεται με παράγοντες αντίθεσης [21], ήμασταν σε θέση να προωθήσει το στάδιο στο οποίο ανιχνεύθηκαν αγγειογένεση των ωοθηκών των όγκων και των μικρών μικροσκοπική εστιών του όγκου. Έτσι, οι μη επεμβατικές μέθοδοι για την επιλογή των ορνίθων για μελέτες και για την παρακολούθηση της εξέλιξης του όγκου είναι διαθέσιμες. Περαιτέρω, φυσικώς ενυπάρχουσες γενετικές μεταλλάξεις, όπως ρ53, Ras και Her2 /neu βρίσκονται σε όγκους όρνιθα [22], [23], [24]. Παρομοίως, υπάρχει μια αυξανόμενη λίστα των πρωτεϊνών που εκφράζονται σε όγκους των ωοθηκών κοτόπουλο όπως CA125 [25], mesothelin [26], COX 1 [27], [28], σελήνιο Protein Binding 1 [29], E-cadherin [30] και VEGF που ομοίως μεταβάλλονται σε όγκους ανθρώπινων ωοθηκών [17], [20], [31]. Είναι επίσης εντυπωσιακό το γεγονός ότι η ασπιρίνη [32] και εξωγενών προγεστερόνης [33] εν μέρει τη μείωση των όγκων των ωοθηκών παρόμοια με τους ανθρώπους. Ο καρκίνος των ωοθηκών σε κότα έχει πολλές από τις πτυχές της ανθρώπινης ασθένειας και ως εκ τούτου είναι ένα έγκυρο μοντέλο.

Η θέσπιση μοντέλο κότα είναι ιδιαίτερα κατάλληλη για τις μελέτες του καρκίνου των ωοθηκών και της ασυλίας. Η κότα είναι γνωστή για σπερματικού συνεισφορές στην κατανόηση της ανοσολογίας, συμπεριλαμβανομένης της πρώτα στοιχεία για διαφορετικές καταγωγές για τα Τ και Β λεμφοκυττάρων [34]. Στην ωοθήκη, υπάρχει μια αύξηση στη συνδεδεμένη θυλακίου Τ κύτταρα, μακροφάγα και κύτταρα Β κατά την διάρκεια της ωρίμανσης των ωοθηκών και στη συνέχεια μια μείωση με τη γήρανση [35], [36], [37], [38]. Επιπλέον, ο ορός των ορνίθων με όγκους των ωοθηκών περιέχει αντι-ωοθηκών και κατά του όγκου αντισώματα [39] που είναι παρόμοια με τις γυναίκες [40], [41], [42]. Έτσι, η τοποθέτηση μοντέλο όρνιθα αντιπροσωπεύει ένα εφικτό πρότυπο για τη μελέτη ανοσία και τον καρκίνο των ωοθηκών πρώιμο στάδιο.

Ωστόσο, τα είδη και το περιεχόμενο των κυττάρων του ανοσοποιητικού συστήματος σε όρνιθες με όγκους των ωοθηκών και οι αλλαγές σε σύγκριση με φυσιολογικές ωοθήκες είναι άγνωστες. Ως εκ τούτου, ο στόχος της μελέτης αυτής διατομής ήταν να περιγράψει και να ποσοτικοποιηθούν τα Τ και Β κυττάρων που σχετίζονται με όγκους των ωοθηκών στη θέσπιση κότα, προκειμένου να δημιουργηθεί μια βάση για τη μελέτη των μηχανισμών της ασυλίας στον ανθρώπινο καρκίνο των ωοθηκών.

Υλικά και Μέθοδοι

Animal Care και επιλογής

Λευκό όρνιθες Λιβόρνο (3 ετών, στέλεχος W96) στεγάστηκαν στο Πανεπιστήμιο του Illinois at Urbana-Champaign πτηνοτροφείο στο Τμήμα Επιστήμης Ζωικής Παραγωγής . Τροφή και νερό δόθηκαν

κατά βούληση

και όρνιθες διατηρήθηκαν σε 17:07 ώρες (φως: σκούρο) το χρονοδιάγραμμα. Ωοθηκών μορφολογία και την αγγειογένεση αξιολογήθηκαν χρησιμοποιώντας διακολπική σάρωσης με υπερήχους όπως περιγράφεται προηγουμένως [19] και τα δεδομένα χρησιμοποιήθηκαν για την επιλογή όρνιθες με φυσιολογικές ωοθήκες ή όγκους των ωοθηκών. Για κυτταρομετρία ροής, τα κύτταρα από το σύνολο του ωοθήκη παρασκευάστηκαν χωρίς περαιτέρω ιστολογική εκτίμηση. Για ανοσοϊστοχημικές μελέτες, οι κότες είχαν ομοίως επιλέξει. Κανονική ή όγκου ιστολογία και όγκου στάδιο επαληθεύτηκαν και τον τύπο του όγκου προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας αιματοξυλίνη και εοσίνη (Η &? Ε) τομές ωοθήκης όπως περιγράφηκε προηγουμένως [14]. Αυτή η μελέτη διεξήχθη σύμφωνα με τις συστάσεις στον Οδηγό για τη Φροντίδα και Χρήση των Ζώων Εργαστηρίου των Εθνικών Ινστιτούτων Υγείας. Το πρωτόκολλο εγκρίθηκε από τις Επιτροπές Φροντίδα και Χρήση Θεσμικών ζώων στο Rush University Medical Center (αριθμός 08-011) και το Πανεπιστήμιο του Illinois (αριθμός 05147).

κυτταρομετρίας ροής

Η κυτταρομετρία ροής ήταν χρησιμοποιείται για να φαινότυπο λεμφοκύτταρα σε ωοθήκες κότα (n = 6) και τον σπλήνα (n = 2). Τ κύτταρα ανιχνεύθηκαν με Β κύτταρα CD4-FITC και CD8-ΡΕ (Southern Biotech, Birmingham, AL) και ανιχνεύθηκαν με αντι-Bu1a (Abcam, Cambridge, ΜΑ) συζευγμένο με αλλοφυκοκυανίνη (APC) (σύστημα επισήμανσης Zenon, Invitrogen, Carlsbad CA) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Οι ωοθηκών λεμφοκύτταρα ανιχνεύθηκαν χρησιμοποιώντας κυτταρομετρία ροής σε ένα στάδιο [43]. Οι θετικοί έλεγχοι αποτελούνταν από λεμφοκύτταρα από σπλήνες και αρνητικοί έλεγχοι συμπεριλαμβάνονται υποκατάσταση των αντισωμάτων του ίδιου ισοτύπου για πρωτογενή αντισώματα (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Ο συνολικός αριθμός των κυττάρων του ανοσοποιητικού συστήματος στην συνέχεια υπολογίζεται από την κυτταρομετρία ροής δεδομένων και των συνολικών απαριθμήσεις κυττάρου ελήφθησαν από το εκχύλισμα ιστών.

Ολόκληρα ωοθήκες κόπηκαν σε 2-3 κομμάτια cm και τα κύτταρα απελευθερώθηκαν με ενζυμική πέψη χρησιμοποιώντας κολλαγενάσης (2000 IU /1 gm ιστού? Worthington, Lakewood, NJ), ϋΝάση Ι (200 μg? StemCell Technologies, Vancouver, BC), και DMEM /F12 μέσο (Invitrogen, Carlsbad, CA) (40 ° C, 2 ώρα με ανακίνηση). Οι σωλήνες φυγοκεντρήθηκαν (100 χ g, 5 λεπτά). Το σφαιρίδιο του κυττάρου εναιωρήθηκε σε αλατόνερο ρυθμισμένο με ψυχρό φωσφορικό (PBS) που περιέχει 1 mM EDTA (1 mL, 2 λεπτά), φυγοκεντρήθηκε (100 χ g? 5 λεπτά) και το σφαιρίδιο εναιωρήθηκε σε Balanced Salt Solution 10 mL Hank (HBSS) που περιέχει 2 % εμβρυϊκό βόειο ορό (FBS). Τα κύτταρα μετρήθηκαν με έναν μετρητή Coulter οριστεί για 5-11 microns. Τα κύτταρα (6 × 10

6) επισημάνθηκαν και σταθεροποιήθηκαν σε 2% παραφορμαλδεΰδη και 5 × 10

5 κύτταρα /δείγμα αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας FACS Calibur (BD Biosciences, San Jose, CA). Τα δεδομένα αναλύθηκαν με CellQuest 1 λογισμικό (BD Biosciences, San Jose, CA).

Προετοιμασία ιστών για ιστολογική εξέταση και ανοσοϊστοχημεία

Ωοθήκες σταθεροποιήθηκαν σε 10% ΡΒδ-ρυθμισμένης φορμαλίνης και εγκλείστηκαν σε παραφίνη. H & amp? Ε τομές των ωοθηκών αναλύθηκαν από μια πίνακας-επικυρωμένο παθολόγος στο Πανεπιστήμιο Rush για τον τύπο του όγκου και το στάδιο με βάση τις ομοιότητες με την ανθρώπινη μορφολογία όπως περιγράφηκε προηγουμένως [14]

Ένα τμήμα της κάθε ωοθήκης επίσης ενσωματωμένο. σε OCT ένωση (Tissue Tek, Sakura, Torrence, CA), καταψύχθηκαν σε ξηρό πάγο ψυχόμενο μεθανόλη και αποθηκεύτηκε στους -80 ° C. Εικοσιτέσσερις ώρες πριν από την κοπή σε κρυοστάτη Leicha, οι ιστοί φέρθηκαν σε -20 ° C και προσκολλάται σε ένα στάδιο μέταλλο με OCT ενσωμάτωση ενώσεως. Οι ιστοί τεμαχίσθηκαν (10 μm), σταθεροποιήθηκαν σε ψυχρή ακετόνη (4 ° C, 20 λεπτά), ξηραίνεται στον αέρα σε θερμοκρασία δωματίου (30 λεπτά) και αποθηκεύεται στους -80 ° C μέχρι τη χρήση.

Ανοσοϊστοχημεία

κύτταρα του ανοσοποιητικού ανιχνεύθηκαν με αντισώματα έναντι δεικτών για την κότα CD4 Τ κύτταρα, CD8 Τ κύτταρα (Southern Biotech, Birmingham, AL) και Β κύτταρα (Bu1a /chB6) (Abcam, Cambridge, ΜΑ). Οι τομές ανοσοχρωματίστηκαν χρησιμοποιώντας ένα κιτ με διαμινοβενζιδίνη (DAB) ως υπόστρωμα (Vector Labs, Burlingame, CA). Οι τομές πλύθηκαν (15 λεπτά), με αιματοξυλίνη (Fisher Scientific, Rockford, IL), αφυδατωμένα, εφαρμόζεται σε πλάκες και ξηραίνεται (37 ° C, 16 ώρες). Μικροσκοπία διεξήχθη σε ένα μικροσκόπιο Nikon Microphot FXA.

μορφομετρική ανάλυση των κυττάρων του ανοσοποιητικού

ωοθηκών τομές χρωματίστηκαν με αντισώματα έναντι CD4, CD8, και Bu1a και εξετάστηκαν χρησιμοποιώντας μικροσκόπιο φωτός (Olympus ΒΧ -41? Όλυμπο America Inc., το Κέντρο Valley, PA). Ανοσοθετικών κυττάρων μετρήθηκαν χρησιμοποιώντας MicroSuite Πέντε λογισμικού (Olympus America Inc.). Εν συντομία, τουλάχιστον τρία τμήματα από κάθε ωοθήκη 20-6 όρνιθες μετρήθηκε ανά ανοσοποιητικό δείκτη κυττάρων (CD4, CD8 και Bu1a) για ένα σύνολο 243 διαφανειών (slides 3 × 27 × ωοθήκες 3 δείκτες).

Σύνολο κύτταρα του ανοσοποιητικού συστήματος μετρήθηκαν σε κάθε τμήμα. Για κάθε τμήμα, από 5 έως 20 τυχαία πεδία μετρήθηκαν σε μεγέθυνση 20χ (ή 84.000 μm

2) ανάλογα με το μέγεθος του δείγματος. Οι αριθμοί κυττάρων υπολογίστηκαν κατά μέσο όρο για κάθε τμήμα για την κανονικοποίηση των δεδομένων αφού ένας διαφορετικός αριθμός πεδίων μετρήθηκαν σε διαφορετικά τμήματα μέγεθος. Τρία τμήματα τέθηκαν στον μέσο όρο για κάθε όρνιθα για κάθε δείκτη. Οι τιμές για κάθε ομάδα (κανονικό, νωρίς, και αργά όγκους) κατά μέσο όρο και, στη συνέχεια, εκφράζονται ως ο μέσος αριθμός των κυττάρων σε 8,4 × 10

4 μm

2 του ωοθηκικού ιστού. ονομασιών Group (κανονικό, πρώιμο και όψιμο στάδιο καρκίνου) βασίστηκαν σε ιστολογική εκτίμηση των Η &?. Ε τομές ακόλουθα ορίσθηκε προηγουμένως στάσης για τον καρκίνο των ωοθηκών όρνιθα [14]

Επιπλέον, ο αριθμός των κυττάρων σε θυλάκια των οι ίδιες τομές μετρήθηκε και εκφράστηκε ως ο αριθμός των κυττάρων του ανοσοποιητικού ανά 2 × 10

5 μm

2 εμβαδού θύλακα. Κύτταρα του ανοσοποιητικού συστήματος σε εκφυλισμένους (θανάτου) θυλάκια [44] είχαν αποφευχθεί, δεδομένου ότι είναι γνωστό ότι περιέχουν μια εισροή των λεμφοκυττάρων προφανώς ως απάντηση στην απόπτωση [45], [46].

Στατιστικές Αναλύσεις

Στατιστική δοκιμές πραγματοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας SPSS (Chicago, IL). Η δοκιμασία Mann Whitney U χρησιμοποιήθηκε για να προσδιοριστεί εάν μέσες διαφορές ήταν σημαντικές με p & lt? 0,5 ​​θεωρείται σημαντική

Αποτελέσματα

Επιλογή κότας και των ωοθηκών Μορφολογία

Κότες επιλέχθηκαν σε ομάδες. με και χωρίς όγκους των ωοθηκών με υπερηχογράφημα Doppler χρώμα και το ακαθάριστο μορφολογία της ωοθήκης. Όπως περιγράφηκε προηγουμένως, φυσιολογικές ωοθήκες περιέχουν πολλαπλά αναπτυσσόμενων ωοθυλακίων (σχήμα 1Α και 1 D) και διακριτά αιμοφόρα αγγεία (Σχήμα 1Α) στο στρώμα που περιβάλλει ωοθυλακίων. Στον καρκίνο των ωοθηκών πρώιμο στάδιο, η ωοθήκη περιέχει λιγότερες αναπτυσσόμενων ωοθυλακίων, και περισσότερο τα αιμοφόρα αγγεία σε σύγκριση με φυσιολογικές ωοθήκες (Σχήμα 1 Β και 1 Ε). Στον καρκίνο των ωοθηκών προχωρημένο στάδιο, μια στερεή μάζα με ασκίτη είναι προφανής και δεν υπάρχουν αναπτυσσόμενων ωοθυλακίων (σχήμα 1C και 1 F).

Μια φυσιολογική ωοθήκη (Α και D) με ωρίμανση ωοθυλακίων (F1, F2) και αιμοφόρα αγγεία στρωματικά (βέλη) με φυσιολογική μορφολογία ακαθάριστο δείχνει ωρίμανση (F1, F2) ωοθυλακίων. Ένα παράδειγμα μιας μη φυσιολογικής ωοθήκης (Β και Ε) που περιέχει περισσότερα αιμοφόρα αγγεία (βέλη) από ό, τι στην κανονική ωοθήκη, χωρίς ανιχνεύσιμα μεγάλα ώριμα ωοθυλάκια και ένα μικρό μάζα στερεού ιστού (κύκλος) στην ωοθήκη. Ένα παράδειγμα του καρκίνου προχωρημένο στάδιο των ωοθηκών (C) χαρακτηρίζεται από μια μεγάλη στερεή μάζα με αυξημένη ροή αίματος (βέλη) και ακατάσχετη ασκίτη (*). Η ακαθάριστη μορφολογία (F) επιβεβαίωσε την παρουσία πολλαπλών στερεών μαζών και μετάσταση όγκου σε άλλα όργανα. Συντομογραφίες: CT = τυφλού αμυγδαλές? F1-F2 = μεγάλα ωοθυλάκια προωορρηκτικό? GI = γαστρεντερικό σωλήνα? OV = ωοθηκών? S = στρώμα των ωοθηκών? SM = μάζα στερεού ιστού στην ωοθήκη? SP = σπλήνα? UOD = άνω σάλπιγγα? UT = μήτρα.

Η

Εντοπισμός των λεμφοκυττάρων στην Κανονική ωοθηκών, πρώιμο στάδιο και αργά Στάδιο ωοθηκών όγκοι

CD4 + Τ κύτταρα παρατηρήθηκαν εντός των ελύτρου στρώματα των ωοθυλακίων στις φυσιολογικές ωοθήκες (Σχήμα 2 ), αλλά όχι στα κοκκιωδών κυττάρων ή ωοκύτταρο διαμερίσματα των ωοθυλακίων. CD4 + Τ κύτταρα σημειώθηκαν σε όλη την κανονική ωοθήκη, που συμβαίνουν σποραδικά στο στρώμα και δίπλα σε θυλάκια, μέσα εκφυλισμένους αδένες (δεν φαίνεται) και κοντά αιμοφόρα αγγεία. Σε ωοθήκες όγκου που περιέχει, CD4 + Τ κύτταρα εμφανίστηκαν στο στρώμα τόσο πρώιμο στάδιο (Εικόνα 3) και όψιμου σταδίου όγκους των ωοθηκών (Σχήμα 4) και ήταν λιγότερο συχνές από είτε CD8 + είτε Bu1a + κύτταρα. Σε αντίθεση με τα CD8 + Τ κύτταρα και Bu1a + Β κύτταρα, CD4 + Τ κύτταρα ήταν κοντά, αλλά όχι μέσα, πρώιμες βλάβες του όγκου (Σχήμα 3). CD8 + Τ κύτταρα παρομοίως εντοπισμένη σε κανονική ωοθυλακίων και στο στρώμα κοντά ωοθυλακίων (σχήμα 2). CD8 + Τ κύτταρα βρέθηκαν σε πρώιμη και όψιμη όγκοι στάδιο (Σχήματα 3 και 4). Ενώ Β (Bu1a +) και Τ κύτταρα παρομοίως διανεμηθεί στο στρώμα των ωοθηκών, χρώση Bu1a + σπανίως βρέθηκαν σε θυλάκια (Σχήμα 2).

Bu1a +, CD4 + και CD8 + κυττάρων (βέλη) που ανιχνεύεται με ανοσοϊστοχημεία σε φυσιολογικές ωοθήκες σε το στρώμα (S) των ωοθηκών, δίπλα σε θυλάκια (στ), στο ελύτρου στρώμα των ωοθυλακίων (διπλό βέλος) και ήταν άφθονα στην κυτταρική στιβάδα κάτω από την επιφάνεια του επιθηλίου των ωοθηκών (SE). Αρχική μεγέθυνση, 10x? κλίμακα bar = 100 μm. Οι επιλεγμένες περιοχές (διακεκομμένη κουτιά) που φαίνεται στο ένθετο υπό μεγαλύτερη μεγέθυνση για χρώση Bu1a και CD8? κλίμακα ένθετο μπάρες = 10 μm.

Η

Τα κύτταρα Bu1a +, CD4 + και CD8 + εμφανίζονται σε παρόμοιες περιοχές της σειριακής τμήματα που περιέχουν εστίες όγκου. Πιο CD8 + Τ κύτταρα και Β κύτταρα είναι παρόντα σε εστίες όγκων από CD4 + Τ κύτταρα. (Α) Early-στάδιο του όγκου που δείχνει CD4 + κυττάρων σε έναν όγκο με ελάχιστα διαφοροποιημένα δομή (PD), και CD8 + και Β κύτταρα σε μία παρακείμενη καλά διαφοροποιημένα περιοχή (WD). (Β) Ένα μικρό βλάβης (διακεκομμένη κύκλος) που περιέχει CD8 + Τ κύτταρα και Bu1a + κύτταρα, αλλά όχι τα κύτταρα CD4 +. (C) Μια περιοχή με νεοπλασματικά κύτταρα που περιέχουν CD8 + και Bu1a + κύτταρα, αλλά όχι τα κύτταρα CD4 +. Αρχική μεγέθυνση, 10x? κλίμακα bar = 100 μm. Χρωματισμένο CD8 + λεμφοκυττάρων σε μια επιλεγμένη περιοχή (διακεκομμένες κουτί) φαίνεται στο ένθετο υπό μεγαλύτερη μεγέθυνση? μπάρα κλίμακας = 10 μm.

Η

Οι παρόμοιες περιοχές από τους τρεις τύπους όγκων φαίνεται στο σειριακές τομές χρωματίστηκαν για Bu1a, ​​CD4 και CD8.

Επάνω Row:

Ένα παράδειγμα των τμημάτων αυτών από μια ορώδες ωοθηκικό όγκο που δείχνει μερικά CD4 + κυττάρων εντός του όγκου σε σύγκριση με Bu1a + και CD8 + κύτταρα.

Μέση Row:

ένα παράδειγμα από ένα βλεννώδες ωοθηκών όγκου δείχνει καταθέσεις των Bu1a +, CD4 + και CD8 + κυττάρων μεταξύ τους αδένες και σε όλο τον όγκο.

Κάτω σειρά:

ένα παράδειγμα μιας ενδομητριοειδές ωοθηκών όγκου δείχνει Bu1a +, CD4 + και CD8 + κύτταρα. Αρχική μεγέθυνση, 10x? κλίμακα bar = 100 μm. Βιτρώ CD8 + και CD4 + λεμφοκύτταρα σε επιλεγμένες περιοχές (διακεκομμένη κουτιά) παρουσιάζονται στον ένθετα σε μεγαλύτερη μεγέθυνση? μπάρα κλίμακας = 10 μm.

Η

ποσοτική εκτίμηση του αριθμού των κυττάρων του ανοσοποιητικού σε Κανονική ωοθηκών, πρώιμο στάδιο και αργά Στάδιο ωοθηκών όγκοι

Σε αρχικά πειράματα, ο συνολικός αριθμός των Τ και Β κύτταρα που απομονώνονται από το σύνολο ωοθήκη προσδιορίστηκε με κυτταρομετρία ροής. Ένα αντιπροσωπευτικό κυτταρομετρίας ροής διάγραμμα διασποράς δείχνει την κατανομή του μεγέθους των κυττάρων από ένα φυσιολογικό ωοθήκη χωρίς όγκου (Σχήμα 5Α) με μια πύλη για την περιοχή των λεμφοκυττάρων (R1). Τα αντίστοιχα αντιπροσωπευτικά διαγράμματα στιγμών για κάθε φθορίζουσα σήμανση δείχνεται επίσης (Σχήμα 5Β). Αν και φαίνεται να είναι λιγότερα CD4 + Τ κύτταρα σε όγκους των ωοθηκών σε σύγκριση με φυσιολογικές ωοθήκες (σχήμα 5C) εκεί, υπήρχε επίσης μια σημαντική διακύμανση στην περιεκτικότητα των κυττάρων CD4 + μεταξύ όρνιθες, η οποία είναι πιθανό να οφείλεται σε διακυμάνσεις στην περιεκτικότητα θύλακα και το στάδιο του όγκου, όπως φαίνεται στο κελί μετρήσεις που λαμβάνονται χρησιμοποιώντας μορφομετρία. Ένας περιορισμός κυτταρομετρίας ροής είναι ότι ολόκληρη η ωοθήκη χρησιμοποιείται για την παρασκευή λεμφοκύτταρα και ως εκ τούτου δεν μπορεί να εκτιμηθεί η θέση των κυττάρων του ανοσοποιητικού σε σχέση με όγκους ή θυλάκια. Ομοίως, δεν ήταν δυνατόν να προσδιοριστεί ο τύπος του όγκου, η μορφολογία των ωοθηκών ή το στάδιο του όγκου με ιστολογία. Ο συνολικός αριθμός των Τ και Β κυττάρων προσδιορίστηκε περαιτέρω με μορφομετρική εκτίμηση του ανοσοχρώση τομές φυσιολογικού ωοθηκών και των ωοθηκών. Η προσέγγιση αυτή επέτρεψε επίσης να καθοριστεί το στάδιο του όγκου των ωοθηκών και να αξιολογήσει τις πιθανές διαφορές στη θέση των λεμφοκυττάρων

(Α):. Εκπρόσωπος εμπρός εναντίον διάγραμμα διασποράς πλευρά για κύτταρα από σύνολο ωοθήκης που δείχνει την πύλη (R1) που χρησιμοποιείται για τα λεμφοκύτταρα. (Β) Τα κύτταρα πρώτα περιφραγμένη χρησιμοποιώντας την πύλη στο (Α) και στη συνέχεια βάφτηκαν είτε με Bu1a-APC, CD4-FITC ή CD8-ΡΕ. Το ποσοστό των επισημασμένων κυττάρων μέσα στην πύλη φαίνεται στο κάτω δεξί τεταρτημόριο για κάθε κηλίδα. (Γ) Ο συνολικός αριθμός των Bu1a-APC, CD4-FITC και CD8-ΡΕ επισημασμένα κύτταρα από τις ωοθήκες φυσιολογικών και καρκινικών κότα (η = 3 /ομάδα) εμφανίζονται με τη διάμεση τιμή που υποδεικνύεται από την οριζόντια γραμμή.

Η

Εντός ωοθυλακίων (σχήμα 6), CD8 + Τ κυττάρων μειώθηκε (p = 0,052), ενώ CD4 + Τ κυττάρων αυξήθηκε (ρ = 0.009) από την κανονική για την πρόωρη όγκους και κανονικό σε όγκους προχωρημένο στάδιο. Β κύτταρα δεν συνδέθηκαν τυπικά με ωοθυλακίων και δεν μετρήθηκαν. Ο αριθμός των ωοθυλακίων μειωμένη ή απουσίαζαν στις ωοθήκες με όγκους σε σύγκριση με φυσιολογικές ωοθήκες (σχήμα 1).

(Α) Β κύτταρα (Bu1a +) σπανίως βρέθηκαν σε θυλάκια και ως εκ τούτου δεν μετρήθηκαν. Ο αριθμός των CD4 + Τ κυττάρων αυξήθηκε ελαφρώς (p = 0.052) και ο αριθμός των CD8 + Τ κυττάρων μειώθηκε (ρ = 0,009) σε όγκους των ωοθηκών προχωρημένο στάδιο σε σύγκριση με φυσιολογικές ωοθήκες. Σε κάθε στάδιο, υπήρχαν περισσότερες CD8 + σε σύγκριση με τα CD4 + Τ κύτταρα (κανονική ωοθήκη, ρ = 0.003? Πρώιμο στάδιο του όγκου, ρ = 0.008? Όγκο όψιμου σταδίου, p = 0,007). Θυλάκια ορίστηκαν όπως φαίνεται στο (Β) και κύτταρα εντός της οριοθετημένης περιοχής μετρήθηκαν και το μέσο που καθορίζεται ανά 2 × 10

5 μm

2 περιοχή του θύλακα. Τρία τμήματα από κάθε ωοθήκη για κάθε όρνιθα μετρήθηκαν σε μεγέθυνση 20x? γραμμή κλίμακας = 50 μm. Οι ράβδοι σφάλματος αντιπροσωπεύουν μέση τιμή ± SEM.

Η

Ο στρωματικά (δηλαδή, μη-θυλακιώδη) ανοσο περιεχόμενο κύτταρο αυξηθεί συνολικά με το στάδιο του όγκου (Σχήμα 7) και χαρακτηρίζεται από ένα μεγαλύτερο αριθμό των CD8 + Τ κυττάρων από τα CD4 + Τ κύτταρα σε κάθε στάδιο (CD8 έναντι κυττάρων CD4 για κανονική ωοθήκη, ρ = 0.003? πρώιμο στάδιο του όγκου, ρ = 0.008 και όγκο όψιμου σταδίου, p = 0,007). Παρόμοια με κυτταρομετρία ροής, Bu1a + κυττάρων και CD8 + Τ κύτταρα ήταν πιο πολυάριθμες από CD4 + Τ κύτταρα σε φυσιολογικά ωοθήκη και στις αρχές και των ωοθηκών προχωρημένο στάδιο (Σχήμα 7Α, Β και C). Ο αριθμός των CD4 + Τ κυττάρων ήταν σημαντικά χαμηλότερη σε όγκους πρώιμο στάδιο σε σύγκριση με φυσιολογικούς ωοθήκη (p = 0.03) και δεν υπήρχε καμία διαφορά μεταξύ Bu1a + και CD8 + κυττάρων. CD4 + κύτταρα ήταν σημαντικά αυξημένη (ρ = 0.05), ενώ η αύξηση στις μέσες τιμές για Bu1a + και CD8 + κύτταρα δεν έφθασαν σημασία σε όγκους προχωρημένο στάδιο σε σύγκριση με το φυσιολογικό. Συνολικά, η συνολική ανοσοκύτταρα αυξήθηκε από φυσιολογικό να πρώιμο στάδιο σε όγκους προχωρημένο στάδιο (Σχήμα 7D).

Όπως φαίνεται στο πάνελ AC για την κανονική (Ν), η πρώιμη (Ε) και όψιμου σταδίου (L) του καρκίνου των ωοθηκών, Bu1a + κυττάρων και CD8 + Τ κύτταρα ήταν πιο πολυάριθμοι συνολικά από CD4 + Τ κύτταρα, ιδιαίτερα σε όγκους προχωρημένο στάδιο. Στο πάνελ Α, προστέθηκαν τα Β και Τ κύτταρα μετράει. Υπήρχε μια συνολική αύξηση στο σύνολο (μη-θυλακιώδη) κύτταρα του ανοσοποιητικού συστήματος από την κανονική ωοθήκη σε όγκους προχωρημένο στάδιο. Τα κύτταρα μετρήθηκαν σε πολλαπλά πεδία σε τρία τμήματα από κάθε ωοθήκη για κάθε όρνιθα σε μεγέθυνση 20x. Ο μέσος αριθμός των Β (Bu1a +) κύτταρα και κύτταρα CD4 + και CD8 + Τ εκτιμήθηκε από 11 όρνιθες με φυσιολογικές ωοθήκες (αριθμός πεδίων μετρήθηκαν ήταν Bu1a = 524, CD4 = 425 και CD8 = 360), 8 κότες με καρκίνο των ωοθηκών πρώιμο στάδιο ( αριθμός των πεδίων που μετρήθηκαν ήταν Bu1a = 228, CD4 = 190 και CD8 = 225) και 7 όρνιθες με καρκίνο των ωοθηκών προχωρημένο στάδιο (αριθμός των πεδίων που μετρήθηκαν ήταν Bu1a = 180, CD4 = 190 και CD8 = 200). Δεδομένου ότι οι περιοχές που αξιολογούνται ποικίλα σε μέγεθος, όλες οι μετρήσεις κανονικοποιήθηκαν με 8 × 10

με 4 μm

2.

Η

Ο αριθμός των κυττάρων του ανοσοποιητικού συστήματος διέφερε από τον τύπο του όγκου (Σχήμα 8). Μόνο αξιολογήθηκαν οι προχωρημένο στάδιο (III /IV) όγκους εφόσον ο καθορισμός της ιστολογίας όγκου ήταν σαφέστερα σε αυτά τα στάδια. Υπήρχαν περισσότερα Β κύτταρα στο ορώδες όγκους σε σχέση με το βλεννώδες (p = 2.6 × 10

–

14) ή ενδομητριοειδές (p = 7,6 × 10

–

9) όγκους. Υδαρής όγκους είχαν σημαντικά λιγότερα CD4 + Τ κυττάρων σε σύγκριση με βλεννώδες (p = 3.8 × 10

–

5) ή ενδομητριοειδές (p = 2.9 × 10

–

9) όγκους. Ο αριθμός των CD8 + Τ κυττάρων ήταν παρόμοια μεταξύ των τύπων όγκων (ρ & gt? 0,2).

Επειδή η ιστολογική ταξινόμηση των όγκων είναι σαφέστερη σε όγκους όψιμο στάδιο των ωοθηκών, ο μορφομετρική ανάλυση περιορίστηκε σε όγκους προχωρημένο στάδιο. Clear όγκους των κυττάρων έλαβε χώρα σε σχετικά χαμηλούς αριθμούς και δεν συμπεριλήφθηκαν στην ανάλυση. Ο αριθμός των Bu1a +, CD4 + και CD8 + κυττάρων μετρήθηκε όπως περιγράφεται στις Μεθόδους για ορώδης (66 πεδία στις ωοθήκες 3 όρνιθα)? βλεννώδες (53 πεδία σε 2 ωοθήκες της κότας) και ενδομητριοειδές (37 πεδία υπολογίζονται σε 2 ωοθήκες της κότας) όγκους ιστολογία. Υπήρξαν σημαντικά περισσότερες B (Bu1a +) κύτταρα στο ορώδες όγκους σε σχέση με το βλεννώδες (p = 2.6 × 10

–

14) ή ενδομητριοειδές (p = 7,6 × 10

–

9) όγκους. Σε αντίθεση, ορώδες όγκους είχαν σημαντικά λιγότερες CD4 + Τ κυττάρων σε σύγκριση με βλεννώδες (p = 3.8 × 10

–

5) ή ενδομητριοειδές (p = 2.9 × 10

–

9). Ο αριθμός των CD + 8 Τ κυττάρων δεν διέφερε σημαντικά από την ιστολογική εξέταση του όγκου (p & gt? 0,2).

Η

Συζήτηση

Αυτή η μελέτη είναι η πρώτη που διερευνά κύτταρα του ανοσοποιητικού συστήματος που σχετίζεται με όγκους των ωοθηκών στο μοντέλο αυγού κότας πόντισης των αυθόρμητων καρκίνου των ωοθηκών. Η συνολική περιεκτικότητα ανοσοκυττάρων σε ωοθήκες με όγκους ήταν υψηλότερη σε σύγκριση με εκείνη στην κανονική ωοθήκες. Το αποτέλεσμα ήταν παρόμοιο με τη χρήση δύο πρότυπες μεθόδους? κυτταρομετρία ροής και μορφομετρική ανάλυση των ανοσοϊστοχημικώς επισημασμένου τομές ιστών. Με κυτταρομετρία ροής, υπήρχαν σχετικά μεγάλες διακυμάνσεις του αριθμού των κυττάρων για κάθε κυτταρικό τύπο, ιδιαίτερα για τις όρνιθες με όγκους. Αυτές οι παραλλαγές που βρέθηκαν με κυτταρομετρία ροής θα μπορούσε να οφείλεται εν μέρει στην μεταβλητή συμπερίληψη των κυττάρων από τα αιμοφόρα αγγεία και το μεταβλητό περιεχόμενο των ενεργών ωοθυλακίων καθώς η ωοθήκη εξελίσσεται από μια κανονική ωοθήκη να ωοθήκες με ένα προηγμένο στάδιο του όγκου. Ως εκ τούτου, δόθηκε μεγαλύτερη έμφαση στον προσδιορισμό του ανοσοποιητικού αριθμούς κυττάρων με ανοσοϊστοχημική μορφομετρία από την τοποθεσία των λεμφοκυττάρων σε σχέση με τον όγκο ή στα θυλάκια θα μπορούσαν να αξιολογηθούν και δεδομένου ότι οι όγκοι θα μπορούσε να χαρακτηριστεί από την ιστολογία και το στάδιο.

Η διαπίστωση ανοσοκυττάρων στην κανονική ωοθήκη σε αυτή τη μελέτη είναι σύμφωνη με προηγούμενες μελέτες στις όρνιθες [38], άλλα ζωικά μοντέλα [47] και στον άνθρωπο [45], [48]. Σε μια λεπτομερή μελέτη της κανονικής ωοθήκης αρουραίου, λεμφοκύτταρα ήταν άφθονο και επίσης αυξηθεί παροδικά συμπίπτει με την ωορρηξία [47]. Όταν σπληνεκτομήθηκαν αρουραίους, των ωοθηκών λεμφοκύτταρα μειώθηκαν αλλά δεν εξαλείφεται γεγονός που υποδηλώνει ότι στην κανονική ωοθήκη, υπάρχουν «κάτοικος» λεμφοκύτταρα, ή ότι δεν είναι όλα τα λεμφοκύτταρα κυκλοφορία από το σπλήνα. Σε αυτή τη μελέτη της κότας, εκεί επίσης φαίνεται να είναι «κάτοικος» λεμφοκυττάρων στην κανονική ωοθήκη τα οποία είναι παρακείμενα στο εξωτερικό στρώμα κυττάρων των θυλακίων, καθώς και στο στρώμα και επιφανειακό επιθήλιο των ωοθηκών. Αυτό θέτει ένα ερώτημα ως προς το εάν τα κύτταρα του ανοσοποιητικού που βρέθηκαν στους όγκους των ωοθηκών προέρχονται από σπλήνα ή λεμφαδένες ή αν τα κύτταρα του ανοσοποιητικού που κατοικούν στην ωοθήκη συμβάλλουν σε κακοήθη μετατροπή.

Στην κανονική ωοθήκη της κότας, Β κύτταρα βρέθηκαν με σχετικά υψηλής συχνότητας στο στρώμα και μυελώδη περιοχές, παρόμοια με CD4 + και CD8 + κύτταρα. Ωστόσο, Β κύτταρα σπάνια παρατηρήθηκαν εντός των θυλάκων, σε αντίθεση με CD4 + και CD8 + κυττάρων. Η σχετικά υψηλή αφθονία των Τ κυττάρων στα θυλάκια προτείνει ότι έχει ένα ρόλο στη φυσιολογική λειτουργία των ωοθηκών. Ενώ ο δείκτης Bu1a είναι ειδικό για όρνιθα Β κύτταρα, εκφράζεται επίσης σε μακροφάγα πτηνών και σε πολύ μικρότερο βαθμό από τα άλλα είδη μη-Β κυττάρου [49]. Έτσι, η περαιτέρω μελέτη είναι απαραίτητη σε δευτερογενή δείκτες για διαφοροποίηση των κυττάρων Β και μη-Β κυττάρων στο όρνιθα. Παρ ‘όλα αυτά, αυτή η μελέτη έδειξε ότι τα κύτταρα Β αντιπροσωπεύουν ένα σημαντικό ποσοστό των λεμφοκυττάρων σε όγκους των ωοθηκών.

Με βάση πολυάριθμες αναφορές από άλλες ομάδες σε ζωικά μοντέλα και στους ανθρώπους, τα κύτταρα του ανοσοποιητικού αναμένονταν σε όγκους των ωοθηκών [50], [ ,,,0],51], [52]. Έχει δειχθεί ότι η επιβίωση του ασθενούς σχετίζεται με τον αριθμό των διηθητικών λεμφοκυττάρων όγκου [5] σε χειρουργικό υλικό το οποίο συνήθως αποκτάται από τη νόσο όψιμου σταδίου. Είναι δύσκολο να καθοριστεί ο ρόλος αυτών των κυττάρων σε πρώιμα στάδια αφού ο καρκίνος των ωοθηκών είναι σπάνια ανιχνεύεται νωρίς σε ανθρώπους. Ομοίως, όταν ο καρκίνος των ωοθηκών προκαλείται σε ζωικά μοντέλα δεν είναι σαφές εάν τα γεγονότα έναρξης είναι μοντέλα ανάπτυξης αυθόρμητης όγκου. Δεν υπάρχουν μελέτες των κυττάρων του ανοσοποιητικού συστήματος στην κότα ωοθηκών όγκους και λίγες μελέτες που συγκρίνουν αυτά τα κύτταρα σε κανονική ωοθήκη και οι όγκοι των ωοθηκών να αξιολογήσει τις πιθανές αλλαγές κατά τη διάρκεια της αυθόρμητης ανάπτυξης όγκων των ωοθηκών. Σε αυτή τη μελέτη βρήκαμε ότι ο συνολικός αριθμός των κυττάρων του ανοσοποιητικού συστήματος στην ωοθήκη τείνει να είναι υψηλότερη παρουσία αυθόρμητων όγκων, η οποία είναι συνεπής με την αποδεκτή έννοια ότι κύτταρα του ανοσοποιητικού συστήματος κίνησης προς και εισβάλουν όγκους [5], [53], [ ,,,0],54]. Επιπλέον, η περιεκτικότητα ανοσοκυττάρων είναι υψηλότερη σε όγκους προχωρημένο στάδιο, ιδιαίτερα στο τελευταίο στάδιο ορώδες όγκους. Δεδομένου ότι η τάση αυτή είναι παρόμοια με εκείνη σε ανθρώπους [50], [52], [55], [56], [57], τα αποτελέσματα υποστηρίζουν τη χρήση του μοντέλου όρνιθα να ερευνήσει ανοσοαποκρίσεις σε όγκους των ωοθηκών και για προ-κλινικές δοκιμές εμβολίου.

Στους ανθρώπους, το περιεχόμενο των λεμφοκυττάρων προσδιορίζεται από την ανοσοϊστοχημεία σε όγκους των ωοθηκών δεν είναι συνεπής σε διαφορετικές μελέτες, ιδιαίτερα σε σχέση με τα κύτταρα Β [58]. Late-στάδιο ανθρώπινο βιοψίες των ωοθηκών των όγκων που περιέχονται κυρίως CD8 + /CD45RO + Τ κύτταρα και CD68 + μακροφάγα, ενώ ΝΚ και Β-λεμφοκύτταρα συνέβη σε χαμηλότερες αριθμούς [50]. Σε αντίθεση, CD20 + Β κυττάρων βρέθηκαν στο 42% των όγκων των ωοθηκών σε μια άλλη μελέτη [6]. Σε μελέτες επιβίωσης, ένα υψηλότερο αριθμό CD19 + Β κυττάρων συνδέθηκε με μια χειρότερη πρόγνωση [59], ενώ μεγαλύτεροι αριθμοί CD20 + Β κύτταρα συνδέεται με αυξημένη ασθένεια επιβίωση χωρίς [6]. Διαφορές σε αυτές τις μελέτες μπορεί να οφείλεται στη χρήση διαφορετικών δεικτών, αλλά μπορούν επίσης να αντανακλούν διαφορές στην σχετική περιεκτικότητα των διαφορετικών όγκων ιστο-τύποι σε αυτές τις μελέτες [6]. Β κύτταρα και CD8 + Τ κύτταρα παρατηρήθηκαν σε όγκους των ωοθηκών της κότας με σχετικά υψηλή συχνότητα, ενώ τα CD4 + κύτταρα ανιχνεύθηκαν σε σχετικά χαμηλότερη συχνότητα.

ανοσοποιητικού κύτταρα εμφανίστηκαν σε όλα τα τρία του όγκου ιστο-τύπους που εξετάστηκαν ( ορώδες, βλεννώδες και ενδομητριοειδές), αλλά υπήρχαν περισσότερα κύτταρα του ανοσοποιητικού συστήματος σε προχωρημένο στάδιο ορώδες όγκους.