Αφηρημένο

Εισαγωγή

Η πρόγνωση των ασθενών με χειρουργήσιμο καρκίνο του λάρυγγα είναι εξαιρετικά μεταβλητή και ως εκ τούτου είναι ισχυροί προγνωστικοί βιοδείκτες δικαιολογημένη. Ο υποδοχέας αυξητικού παράγοντα που μοιάζει με ινσουλίνη (IGFR) μονοπατιού σηματοδότησης διαδραματίζει έναν κρίσιμο ρόλο στην λαρυγγική καρκινογένεση και της εξέλιξης.

Ασθενείς και Μέθοδοι

Εντοπίσαμε όλους τους ασθενείς με εντοπισμένο στάδιο TNM Ι-ΙΙΙ του καρκίνου του λάρυγγα κατάφερε με πιθανώς θεραπευτική χειρουργική επέμβαση μεταξύ 1985 και 2008. η ανοσοϊστοχημική (IHC) έκφραση IGF1R-άλφα, IGF1R-βήτα και IGF2R αξιολογήθηκε χρησιμοποιώντας το ανοσοαντιδραστικό βαθμολογία (IRS) και τα επίπεδα mRNA των σημαντικών δραστών της οδού IGFR αξιολογήθηκαν, συμπεριλαμβανομένων IGF1R, πρωτεΐνη σύνδεσης IGF 3 (IGFBP3), κατασταλτικά κυτοκίνης σηματοδότησης 2 (SOCS2) και τα μέλη της ΜΑΡ-κινάσης (MAP2K1, MAPK9) και φωσφατιδυλο-ινοσιτόλη-3 κινάσης (PIK3CA, PIK3R1) οικογένειες. μοντέλα Cox-παλινδρόμησης εφαρμόστηκαν για την αξιολόγηση της προγνωστικής αξίας των βιοδεικτών στην επιβίωση ελεύθερη νόσου (DFS) και τη συνολική επιβίωση (OS).

Αποτελέσματα

Μεταξύ 289 επιλέξιμων ασθενείς, 95,2% είχαν τρέχουσα ή πρώην καπνιστές, 75,4% ήταν άτομα που κάνουν κατάχρηση αλκοόλ, το 15,6% είχαν θετικούς λεμφαδένες νόσου και 32,2% είχαν λάβει μετεγχειρητική ακτινοβολία. Μετά από μια μέση περίοδο παρακολούθησης των 74,5 μηνών, διάμεση DFS ήταν 94,5 μήνες και η διάμεση OS ήταν 106,3 μήνες. Χρησιμοποιώντας το διάμεσο IRS ως προκαθορισμένες αποκοπής, οι ασθενείς των οποίων οι όγκοι είχαν αυξηθεί IGF1R-άλφα κυτταρόπλασμα ή έκφραση μεμβράνη έμπειρος οριακά μικρότερη DFS και σημαντικά μικρότερη OS σε σύγκριση με εκείνα των οποίων οι όγκοι είχαν έκφραση χαμηλού IGF1R-άλφα (91,1 vs 106,2 μήνες ρ = 0,0538 και 100,3 vs 118,6 μηνών, p = 0,0157, αντίστοιχα). Αυξημένα επίπεδα mRNA του MAPK9 συνδέθηκαν με παρατεταμένη DFS (p = 0,0655) και OS (p = 0,0344). Σε ανάλυση πολλαπλών μεταβλητών, IGF1R-άλφα υπερέκφραση σχετίστηκε με αύξηση 46,6% στην πιθανότητα για υποτροπή (p = 0,0374). Ανεξάρτητους προγνωστικούς παράγοντες για την κακή OS περιλαμβάνονται κόμβου-θετική νόσο (HR = 2,569, p & lt? 0,0001)., Υπογλωττιδική /transglottic εντοπισμού (HR = 1,756, p = 0,0438) και της πρωτεΐνης υπερέκφραση IGF1R-άλφα (HR = 1,475, p = 0,0504)

Συμπέρασμα

υπερέκφραση πρωτεΐνης IGF1R-άλφα μπορεί να χρησιμεύσει ως ανεξάρτητος προγνωστικός δείκτης της υποτροπής και της επιβίωσης σε λειτουργική καρκίνο του λάρυγγα. Υποψήφιοι αξιολόγηση της IGF1R-άλφα προγνωστική χρησιμότητα δικαιολογείται

Παράθεση:. Mountzios G, Κωστόπουλος Ι, Κωτούλα V, Σφακιανάκη Ι, Fountzilas Ε, Μάρκου Κ, et al. (2013) ινσουλίνη αυξητικός παράγοντας 1 Receptor (IGF1R) Έκφραση και επιβίωσης σε λειτουργική πλακωδών κυττάρων του λάρυγγα-Cancer. PLoS ONE 8 (1): e54048. doi: 10.1371 /journal.pone.0054048

Επιμέλεια: Rodrigo Alexandre Panepucci, Hemocentro de Ριμπεϊράο Πρέτο, HC-FMRP-USP, Βραζιλία

Ελήφθη: 30, Ιούλη του 2012? Αποδεκτές: 5 Δεκεμβρίου, 2012? Δημοσιεύθηκε: 24η του Ιανουαρίου 2013

Copyright: © 2013 Mountzios et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο ήταν εν μέρει χρηματοδοτήθηκε από την Ελληνική Συνεργαζόμενη Ογκολογική Ομάδα (HE R_5G έρευνα επιχορήγησης). Ο χρηματοδότης δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

καρκίνο του λάρυγγα αντιπροσωπεύει την πιο κοινή μορφή της ακανθοκυτταρικό καρκίνωμα της κεφαλής και του λαιμού (SCCHN) σε πληθυσμούς με υψηλό επιπολασμό του καπνίσματος. Αντιπροσωπεύοντας περίπου 160.000 νέες περιπτώσεις ανά έτος και για το 2,5% όλων των όγκων στους άνδρες, του λάρυγγα καρκίνος παραμένει μια σημαντική επιβάρυνση της νόσου σε παγκόσμιο επίπεδο [1]. Παρά τις πρόσφατες προόδους στη διεπιστημονική διαχείριση των πρώιμα στάδια της νόσου, συμπεριλαμβανομένων των χειρουργική αφαίρεση ή του λάρυγγα, η διατήρηση πρωτοκόλλων εφαρμογής χημειοραδιοθεραπεία, ένα σημαντικό ποσοστό των ασθενών με εντοπισμένο ή τοπικά προχωρημένη νόσο τελικά θα υποτροπιάζουν και πεθαίνουν [2]. Ακόμη και για τους ασθενείς που υποβάλλονται στη διαδικασία ακρωτηριασμό των ολική λαρυγγεκτομή, η πρόγνωση είναι εξαιρετικά μεταβλητή και unpredictible, καθιστώντας την ανάγκη να προσδιοριστούν ισχυροί προγνωστικοί δείκτες ιατρική προτεραιότητα. Η ακριβής και επαναλήψιμη εκτίμηση της πρόγνωσης σε ασθενείς με πρώιμο καρκίνο του λάρυγγα θα επέτρεπε επιθετική θεραπεία των ατόμων που διατρέχουν υψηλό κίνδυνο υποτροπής και θα αποφευχθούν δυνητικά επικίνδυνες υπερθεραπεία στην ομάδα με μια υποτιθέμενη ευνοϊκή έκβαση.

Η ινσουλίνη και η ινσουλίνη-όπως υποδοχέα αυξητικού παράγοντα (IGFR) – μεσολάβηση μοριακών οδών πρόσφατα έχουν εμφανιστεί ως σημαντικά τελεστές της νεοπλαστικού μετασχηματισμού σε διάφορες κακοήθειες του αναπνευστικής οδού, περιλαμβανομένων των μη μικρών κυττάρων καρκίνου του πνεύμονα [3], [4], του θυρεοειδούς καρκίνο [5], [6 ], καρκίνο του οισοφάγου [7] και SCCHN [8]. Η οδός IGFR περιλαμβάνει δύο συνδέτες (IGF1 και IGF2), πρωτεΐνες σύνδεσης τους (τα πιο άφθονα είναι IGFBP-3) και δύο υποδοχείς (IGF1R και IGF2R), [2]. Σε αντίθεση με την ινσουλίνη, η οποία ενεργεί ως ένα τυπικό ορμόνη, IGF1 και IGF2 έχουν διαπιστευτήρια τόσο ως ορμόνες που κυκλοφορούν με αυτοκρινείς ιδιότητες και η ανάπτυξη των ιστών παράγοντες? IGF1R έχει την ικανότητα μεταγωγής σήματος μέσω ενδοκυτταρικής κινάσης τυροσίνης που συνδέονται με RAS /RAF /μιτογόνο κινάση ενεργοποιημένη πρωτεΐνη (ΜΑΡΚ) και οι φωσφατιδυλ-ινοσιτόλη-3 κινάση (ΡΙ3Κ) -Akt οδών [9]. Πρόδρομη διάσπαση πολυπεπτιδίου οδηγεί στην παρουσία δύο ισομορφών IGF1R: Ισόμορφης άλφα (IGF1R-άλφα), η οποία εκφράζεται κατά προτίμηση σε πολλούς καρκίνους και είναι σε θέση να συνδέεται με την ινσουλίνη, IGF1 και IGF2, και ισομορφή-βήτα (IGF1R-βήτα), η οποία δεσμεύεται αποκλειστικά στην ινσουλίνη [10]. IGF2R, από την άλλη πλευρά, συνδέεται μόνο προς IGF2, είναι δομικά διακριτές, με την έννοια ότι δεν έχει μια ενδοκυτταρική περιοχή κινάσης τυροσίνης, και επομένως χάνει από την ικανότητα να μετάγει μιτογόνα σήματα, ενεργώντας κυρίως ως ένα «περιθώριο ανοχής» για IGF2 βιοδραστικότητα [ ,,,0],10]. Η κατασταλτική κυτοκίνης σηματοδότησης (SOCS) οικογένεια πρωτεϊνών είναι αναστολείς των μονοπατιών σηματοδότησης μέσω αρνητικό βρόχου ανάδρασης που αφορούν κυρίως την αναστολή της Janus-κινάσης δραστηριότητα [11], [12]. Πιο πρόσφατα στοιχεία, ωστόσο, δείχνουν ότι SOCS πρωτεΐνες και ιδιαίτερα SOCS2 μπορεί επίσης να ρυθμίσει IGF1R μεσολάβηση σηματοδότηση [13], [14]. Είναι σημαντικό, οι προκλινικές και μεταφραστική μελέτες δείχνουν ότι τα συστατικά του IGFR μεσολάβηση μονοπάτι που εμπλέκονται στην SCCHN κινδύνου [15], η αγγειογένεση [16], φαρμακογενετική [17], [18], χημειοευαισθησία [19], η ανοσοθεραπεία [20] και η ακτινοβολία ανταπόκριση [21].

σε μια πρόσφατη δημιουργική εργασία στον τομέα [22] μια πολυγονιδιακή προγνωστικός δείκτης της υποτροπής στις αρχές του λάρυγγα καρκίνος αναπτυχθεί και επικυρωθεί. Στη μελέτη αυτή, μια ομάδα γονιδίων που κωδικοποιούν για τα μέλη του μονοπατιού IGFR αναδειχθεί ως ένα ισχυρό προγνωστικό εργαλείο είναι σε θέση να διακρίνουν τους ασθενείς με φτωχή και ευνοϊκή πρόγνωση (ρ & lt? 0,0001 στο σύνολο εκπαίδευσης και ρ = 0.0001 στο πρώτο σετ επικύρωσης) [22 ]. Αυτά τα αποτελέσματα που παρήχθησαν την υπόθεση ότι η έκφραση πρωτεΐνης και mRNA επίπεδα από τις σημαντικότερες τελεστές της οδού IGFR μπορεί να σχετίζεται με την κλινική έκβαση σε ασθενείς με πρώιμη του λάρυγγα καρκίνο και μπορεί έτσι να χρησιμεύσει ως προγνωστική βιολογικών δεικτών της υποτροπής και επιβίωσης σε αυτή τη ρύθμιση. Για να ελεγχθεί αυτή η υπόθεση, εξετάσαμε αναδρομικά όγκων μεταγραφή γονιδίου σημαντικά στοιχεία του μονοπατιού IGFR και αξιολογήσαμε πρωτεΐνη έκφραση των ίδια μόρια σε καρκινικά κύτταρα από ασθενείς με χειρουργικά καρκίνο του λάρυγγα.

Χαρακτηριστικά Ασθενούς και Μέθοδοι

ομάδα των ασθενών

Η μελέτη διεξήχθη αναδρομικά σε μια σειρά ασθενών με εντοπισμένο σταδίου Ι-ΙΙΙ καρκίνο του λάρυγγα (ΤΝΜ ταξινόμηση 6ο, διατίθεται στη διεύθυνση: https://www.uicc.org/node/7735) που διαχειρίζεται από τον Μάιο του 1985 και Ιουνίου 2008 στο Τμήμα ΩΡΛ του «ΑΧΕΠΑ» Νοσοκομείο στη Θεσσαλονίκη, στην Ελλάδα, με δυνητικά θεραπευτική εκτομή με ή χωρίς εξωτερική ακτινοβολία. Η παρούσα μελέτη εγκρίθηκε από την Επιτροπή Βιοηθικής του Αριστοτελείου Πανεπιστημίου Θεσσαλονίκης, Ιατρική Σχολή. Άρση της συγκατάθεσης ελήφθη από αυτή την επιτροπή όλοι οι ασθενείς που συμπεριλήφθηκαν στη μελέτη πριν από το 2003. Όλοι οι ασθενείς που συμπεριλήφθηκαν στη μελέτη μετά το 2003 προβλέπεται ενημέρωσε τη γραπτή συγκατάθεσή τους για την παροχή βιολογικού υλικού για τις μελλοντικές ερευνητικές μελέτες. Η μελέτη συμμορφώθηκε με τις συστάσεις ΠΑΡΑΤΗΡΗΣΗ για δείκτη όγκου προγνωστικές μελέτες με τη χρήση βιολογικού υλικού (διαθέσιμο σε https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2361579).

Οι ασθενείς αξιολογήθηκαν κλινικά σε τακτικές μηνιαίες επισκέψεις για το πρώτο έτος μετά την επέμβαση και κάθε δύο μήνες αργότερα και ανέβασε με ακτινογραφία θώρακα, του τραχήλου της μήτρας, του θώρακα και της άνω κοιλίας υπολογιστικής τομογραφίας σαρώνει κάθε έξι μήνες για τα πρώτα δύο χρόνια μετά την επέμβαση και ετήσια στη συνέχεια ή και νωρίτερα εάν ενδείκνυται κλινικά. Άλλες διαγνωστικές ή στάσης διαδικασίες πραγματοποιήθηκαν κατά τις κλινικές ενδείξεις ή ειδοποίηση σύμπτωμα. αξιολόγηση της επίδρασης της θεραπείας πραγματοποιήθηκε σύμφωνα με τα κριτήρια RECIST για συμπαγείς όγκους (www.eortc.be/recist/documents/RECISTGuidelines.pdf).

Η ιστολογική αξιολόγηση

Ένας έμπειρος παθολόγος αναθεωρηθεί αιματοξυλίνη-ηωσίνη (η &? Ε) βάφτηκαν διαφάνειες από μπλοκ ιστού για επάρκεια του υλικού και τον υπολογισμό του ποσοστού των κυττάρων όγκου σε κάθε περίπτωση. Διακόσιοι ογδόντα εννέα τμήματα ιστού ενσωματωμένα σε παραφίνη σταθεροποιημένα με φορμαλίνη είχαν ιστολογικά αξιολογήθηκαν για τον τύπο του όγκου και 285 από αυτά με επαρκή ιστό του όγκου σημάνθηκαν για χειροκίνητη ανατομή. Η τελευταία εκτελέστηκε σε ρουτίνα αποπαραφινοποιήθηκαν τμήματα, ώστε να αυξηθεί το περιεχόμενο των κυττάρων του όγκου στα εκχυλισμένα μοριακά πρότυπα, τα οποία περιείχαν & gt? Κύτταρα όγκου κατά 50% σε 64,2% των περιπτώσεων και 30-50% στις υπόλοιπες. Το διάγραμμα ροής της μελέτης, συμπεριλαμβανομένων των αντίστοιχων αριθμών του δείγματος παρουσιάζεται στο Σχήμα 1 (διάγραμμα ΠΑΡΑΤΗΡΗΣΗ).

Η

εκχύλιση RNA και μεθοδολογία RT-qPCR

Ένα σύνολο 230 όγκων που περιέχουν μπλοκ παραφίνης ήταν διαθέσιμα για μοριακή έρευνες (Σχήμα 1). Macrodissection διεξήχθη σε περιπτώσεις με & lt? Κύτταρα όγκου κατά 50%, ώστε να αυξηθεί το περιεχόμενο των κυττάρων του όγκου σε μοριακό δείγματα. Κατά τη διάρκεια της νύχτας και αποπαραφινώσεως θραύσμα ιστού λύσεως με πρωτεϊνάση Κ στους 56 ° C, το RNA εκχυλίστηκε με το αντιδραστήριο LS TRIzol® και μεταγράφεται ανάστροφα με τυχαία εναύσματα (αρ. Κατ 48190-011) και το SuperScript® III ανάστροφης μεταγραφάσης (όλα τα αντιδραστήρια από την Invitrogen /Life Technologies, Paisley, UK), σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Μετά τις μετρήσεις UV, 0,5-3 ug ολικού RNA μεταγράφηκαν ανάστροφα, cDNAs ομαλοποιήθηκαν στα 25 ng template /ul και διατηρήθηκε στους -20 ° C μέχρι τη χρήση. έκφρασης σε σχέση mRNA εκτιμήθηκε με qPCR και υδρόλυση ανιχνευτές χρησιμοποιώντας προκατασκευασμένα ενιαίο σωλήνα TaqMan® Gene Expression Αναλύσεις (Applied Biosystems /Life Technologies) σε ένα σύστημα ABI7900HT υπό προεπιλεγμένες συνθήκες για τους ακόλουθους στόχους (σε παρένθεση: προσδιορισμός ταυτότητας? Genbank αναφοράς? τοποθεσία αμπλικόνιο ? μέγεθος): IGF1R (Hs00609566_m1? NM_000875.3? εξώνια 10-11? 64 bp), IGFBP3 (Hs00426289_m1? NM_000598.4, NM_001013398.1? εξόνια 4-5? 84 bp), MAP2K1 (Hs00983247_g1? NM_002755.3? εξώνια 10-11? 68 bp), MAPK9 (Hs00177102_m1? NM_001135044.1, NM_002752.4, NM_139068.2, NM_139069.2, NM_139070.2? εξόνια 2-3? 102 bp), PIK3CA (Hs00180679_m1? M_006218.2? εξώνια 6-7? 104 bp), PIK3R1 (Hs00933163_m1? NM_001242466.1, NM_181504.3, NM_181523.2, NM_181524.1? εξόνια 8-9, 9-10, 15-16? 82 bp), και, SOCS2 ( Hs00919620_m1? NM_003877.3? εξώνια 2-3? 91 bp). Τα δείγματα εξετάστηκαν σε 10 υΐ αντιδράσεις (50 ng template /αντίδραση) με TaqMan® καθολική PCR Master Mix και έτρεξαν εις διπλούν σε πλάκες 384-φρεατίων. Ένα εμπορικά διαθέσιμο RNA αναφοράς (TaqMan® Ελέγχου Ολικό RNA, αρ. 4307281, Applied Biosystems /Life Technologies) χρησιμοποιήθηκε ως θετικός μάρτυρας σε κάθε πείραμα. Ως ενδογενής έλεγχος και για την εξομάλυνση των Cq (κύκλος ποσοτικοποίηση, η οποία είναι συνώνυμη με [το όριο του κύκλου] CT) αξίες, μια δοκιμασία που στοχεύουν GUSB mRNA (β-γλυκουρονιδάση [# 4333767F]) χρησιμοποιήθηκε. GUSB προτιμήθηκε πάνω εφαρμόζεται συνήθως ενδογενές ελέγχους, διότι (α) δεν ψευδογονίδια έχουν ακόμα αναφερθεί για αυτό το γονίδιο, και (β) έχει αναγνωριστεί ως ένα από τα καλύτερα διατηρημένα στόχους mRNA σε ιστούς FFPE [23]. Σχετική ποσοτικοποίηση (RQ) αξιολογήθηκε σε ένα γραμμικό τρόπο, όπως (40 – DCT) [24], σύμφωνα με την οποία DCT = (μ.ο. στόχο CT) – (avg CT GUSB). σταθερότητα δοκιμασία PCR αξιολογήθηκε μεταξύ τρέχει με το RNA αναφοράς (deltaRQs μεταξύ διοικούμενο: IGF1R 0,78? IGFBP3 0,72? MAP2K1 0,39? MAPK9 0,92? PIK3CA 0,62? PIK3R1 0,59? SOCS2 0,92). Κριτήρια αποκλεισμού για την ανάλυση RQ δείγμα ήταν GUSB CT τιμές υψηλότερες από 36 για κάθε δύο αντίτυπα? και, deltaRQ τιμές υψηλότερες από 0.85 ανά διπλούν ζευγάρι. Με τα παραπάνω κριτήρια, ενημερωτικό αποτελέσματα ελήφθησαν σε 191 (83%) από τα 230 δείγματα FFPE RNA. Ωστόσο, ο αριθμός των δειγμάτων ενημερωτικού κυμάνθηκε μεταξύ 175 (75%) για IGF1R έως 138 (59%) για SOCS2 με αποτέλεσμα μόνο 118 (51%) πληροφοριακό δείγματα για όλους τους στόχους. Έτσι, δεν ήταν δυνατόν να εκτιμηθεί η ομαδοποίηση των τιμών RQ για την αξιολόγηση των αντίστοιχων προφίλ γονιδιακής έκφρασης.

TMA κατασκευή, ανοσοϊστοχημεία και το σύστημα βαθμολόγησης

ΤΜΑ κατασκευή διεξήχθη όπως περιγράφηκε προηγουμένως [25] . Εν συντομία, σειριακές τομές 3 χιλιοστά πάχους σχηματίζουν τα αρχικά μπλοκ ή τα μπλοκ TMA, τοποθετημένα σε πλάκες μικροσκοπίου πρόσφυση, κόπηκαν στο Εργαστήριο Μοριακής Ογκολογίας του Ελληνικού Ιδρύματος Έρευνας για τον Καρκίνο, Αριστοτέλειο Πανεπιστήμιο Θεσσαλονίκης Ιατρική Σχολή. Η ανοσοϊστοχημική (IHC) επισήμανση πραγματοποιήθηκε, χρησιμοποιώντας Bond Max ™ (Leica Microsystems, Wezlar, Γερμανία) και i6000 (Biogenex, San Ramon, CA) autostainers. Οι τομές χρωματίστηκαν με αντι-IGF1R-άλφα (κλώνος 24-31, Lab Vision, Fremont, CA, σε αραίωση 1:50 για 1 ώρα), αντι- IGF1R-βήτα (C-20, SC-713, πολυκλωνικό αντίσωμα, εγείρεται έναντι χαρτογράφηση πεπτιδίου στο Ο-άκρο του IGF-IA μόριο, Santa Cruz, Santa Cruz, CA, στο 1:250 αραίωση επί 1 ώρα) και IGF-2R (C-15, SC-14410, κατσίκα πολυκλωνικό αντίσωμα, Santa Cruz, σε 1:250 αραίωση για 1 ώρα). Το σύμπλοκο αντιγόνου-αντισώματος οπτικοποιήθηκε χρησιμοποιώντας διαμινοβενζιδίνη (DAB) ως χρωμογόνο. Τα πλακίδια με αιματοξυλίνη Mayer, η πλύθηκαν σε γλυκό νερό, αφυδατωμένα, και τοποθετημένα. Όπως εξωτερικούς ελέγχους, χρησιμοποιήσαμε πυρήνες (12 συνολικά για κάθε ΤΜΑ) από διάφορα μη-νεοπλασματικών και νεοπλασματικών ιστών, συμπεριλαμβανομένων placenda, ενδομητρίου, των νεφρών, των αμυγδαλών, του μαστικού αδένα, λεμφαδένες, τον καρκίνο του προστάτη και το καρκίνωμα πλακωδών κυττάρων της κεφαλής και του λαιμός. Ως εσωτερικοί έλεγχοι, χρησιμοποιήσαμε το γειτονικό επιθήλιο του βλεννογόνου αδένων και την κανονική, υπερπλασίας και των δυσπλαστικών κυλινδρικό επιθήλιο.

Για την αξιολόγηση των IGF1R-άλφα, IGF-1 R-βήτα και IGF2R χρησιμοποιήσαμε ένα ημι-ποσοτικό προσέγγιση που βασίζεται στην ένταση χρώσης (SI) και το ποσοστό των θετικών κυττάρων (ΡΡ), για να δημιουργήσει το ανοσοαντιδραστικό σκορ (IRS) ως ακολούθως: IRS = SIxPP, για κάθε δείγμα, όπως περιγράφηκε προηγουμένως [26], [27]. Ένταση βαθμολογήθηκε ως εξής: 0 = καμία χρώση, 1 = ασθενώς θετική, 2 = μέτρια θετική, και 3 = ισχυρά θετική. Η βαθμολόγηση του προτύπου χρώσης βασίστηκε στο ποσοστό των θετικών κυττάρων όγκου: 0 = 0-5%, 1 = 6-25%, 2 = 26-50%, 3 = 51-100%). Η IRS βαθμολογία έτσι κυμαίνονταν από 0 έως 9. Ο εντοπισμός της χρώσης για κάθε πρωτεΐνη επίσης αναφέρεται είτε ως κυτταροπλασματικό ή κυτταροπλασματική /μεμβρανώδη ή μεμβρανώδη.

Όλα τα ασύμφωνα περιπτώσεις επιλύθηκαν κατά τις συνεδριάσεις συναίνεσης. Για να αποφευχθεί η ψευδώς θετικά ευρήματα προκύπτουν από πολλαπλούς υπολογισμούς αποκοπής, χρησιμοποιήσαμε τη μέση τιμή του IRS ως προκαθορισμένες αποκοπής για κάθε δείκτη, όπως προτάθηκε προηγουμένως [25]. Ένα δείγμα του όγκου θεωρείται «υψηλό-έκφραση« αν η IRS ήταν ίση ή μεγαλύτερη από τη μέση και «χαμηλής έκφραση» αλλιώς.

Στατιστικές Εκτιμήσεις

Όσον αφορά IHC έκφραση IGF1R και IGF2R την διάμεση IRS προ-ορίζεται ως η υποψήφια cut-off για την αξιολόγηση της προγνωστικής ρόλο της IGFR στην επιβίωση ελεύθερη νόσου (DFS) και τη συνολική επιβίωση (OS). Όσον αφορά βιοδείκτες του οποίου η έκφραση μετρήθηκε επί του mRNA επίπεδο της διανομής τους εξετάστηκε για το φυσικό cut-off. Σε περίπτωση μη αναγνώριση ενός φυσικού αποκοπής, ο πρώτος, ο δεύτερος και τρίτο τεταρτημόριο εξετάστηκαν μέσω μονοπαραγοντική ανάλυση παλινδρόμησης Cox δυνατόν όρια. Εάν μια cut-off έδειξε προγνωστική σημασία είχε χρησιμοποιηθεί για να διχοτομήσει των δειγμάτων σε χαμηλή και υψηλή όγκων που εκφράζουν. Πρόσθετες υποψήφιος cut-offs έχουν διερευνηθεί με τη χρήση του λειτουργικού χαρακτηριστικού δέκτη καμπύλες (ROC) χρησιμοποιώντας την τιμή του 3ετούς DFS παρατηρείται ως δυαδικό αποτέλεσμα επικυρωθεί με bootstrap ανάλυση. Στην περίπτωση που δεν αποκοπής εντοπίστηκε η διάμεσος χρησιμοποιήθηκε. Στην πολυπαραγοντική ανάλυση σημαντικότητας καθορίστηκε στο επίπεδο του 15% και μονομεταβλητών στο 5% (δύο όψεων).

DFS μετρήθηκε από τη στιγμή της διάγνωσης πριν ελεγχθούν εξέλιξη της νόσου, το θάνατο ή την τελευταία επαφή και το λειτουργικό σύστημα από διάγνωση μέχρι θανάτου από οποιαδήποτε αιτία ή την ημερομηνία της τελευταίας επαφής. Time-to-event διανομές υπολογίστηκαν χρησιμοποιώντας καμπύλες Kaplan-Meier. Ενώσεις μεταξύ βιοδείκτες και με βασικά χαρακτηριστικά του ασθενούς και του όγκου εξετάστηκαν χρησιμοποιώντας το ακριβές τεστ του Fisher για κατηγορηματική μεταβλητές και τον Mann-Whitney ή τη δοκιμή Kruskall-Wallis ενδεχομένως για τις συνεχείς μεταβλητές. Για την έκφραση συνεχή mRNA οι συσχετισμοί υπολογίστηκαν χρησιμοποιώντας δοκιμή συσχέτισης του Pearson του. Η στατιστική ανάλυση συμμορφωθεί με τις συστάσεις αναφοράς για το δείκτη όγκου προγνωστικές μελέτες [28].

Αποτελέσματα

κλινικοπαθολογοανατομικών χαρακτηριστικά και την έκβαση

Διακόσια ογδόντα εννέα ασθενείς, κυρίως άνδρες (95,8%), εν ενεργεία ή πρώην καπνιστές (95,2%) και άτομα που κάνουν κατάχρηση αλκοόλ (75,4%), με μέση ηλικία των 63 ετών κατά τη διάγνωση, συμπεριλήφθηκαν στην παρούσα ανάλυση. Όπως φαίνεται στον Πίνακα 1, οι διαγνωστικές κατεργασία οδήγησε στην διάγνωση του πλακώδες καρκίνωμα του λάρυγγα κυρίως υπεργλωττιδική (46,7%) ή γλωττίδας (43,3% των περιπτώσεων), κυρίως το στάδιο T3-4 (77,8% των περιπτώσεων) και πιο συχνά κόμβος με αρνητικό ως σε κλινική /ακτινολογική εξέταση (84,1%). Η αρχική διαχείριση αποτελούνταν από χειρουργική εκτομή του όγκου μέσω ολική λαρυγγεκτομή (84,1%) ή με πιο συντηρητική διαδικασιών (15,9%). Μια ανατομία του λαιμού πραγματοποιήθηκε στο 29,1% των περιπτώσεων, ενώ η μετεγχειρητική εξωτερική ακτινοθεραπεία χορηγήθηκε σε 32,2%.

Η

Κατά τη μέση περίοδο παρακολούθησης των 74,5 μηνών, 135 (46,7%) των ασθενών είχε υποτροπιάσει και 117 (40,5%) είχαν πεθάνει. Το μεσαίο και 5-year DFS ήταν 94,5 μήνες (95% CI: 80,9 – 108 μήνες) και 60,8%, αντίστοιχα, ενώ η μέση και 5 ετών OS ήταν 106,3 μήνες (95% CI: 89,3 – 123,3 μήνες) και 66,1% , αντίστοιχα. Όπως ήταν αναμενόμενο, η διάμεση OS ήταν σημαντικά μικρότερη για τους ασθενείς με λεμφαδένες θετική νόσο σε σύγκριση με εκείνους με λεμφαδένες αρνητικό (28,7 vs 106,5 μηνών, p & lt? 0.001), για ασθενείς ηλικίας άνω των 63 ετών, ηλικία κατά τη διάγνωση σε σύγκριση με τους νεότερους όνες (87,3 vs 139,1 μηνών, p = 0,006) και για τους ασθενείς των οποίων οι όγκοι είχαν Υπογλωττιδική ή transglottic τοποθεσία σε σύγκριση με εκείνα των οποίων οι όγκοι βρίσκονται supraglottically (82,8 vs 117,5 μηνών, p = 0.01). Σε σύγκριση με τους ασθενείς που είχαν αρχικά υποβληθεί σε ολική λαρυγγεκτομή, οι ασθενείς που είχαν υποβληθεί σε πιο συντηρητική χειρουργική επέμβαση παρουσίασαν στατιστικά σημαντικά μικρότερη διάμεση DFS (55,9 vs 106,2 μηνών, p = 0,011), αλλά δεν OS (124,8 έναντι 106,3 μηνών, p = 0.671), πιθανώς λόγω με την επίδραση της διάσωσης λαρυγγεκτομής.

IHC Έκφραση IGFR και η συσχέτιση με αποτέλεσμα

Αποτελέσματα χρώσης IHC ελήφθησαν για 285 (98,6%) των δειγμάτων όγκων για τους τρεις δείκτες (IGF1R-αλφα , IGF1R-βήτα και IGF2R). Το μοτίβο της ανοσοχρώση για IGF1R-άλφα ήταν κυρίως κυτταροπλασματική και /ή μεμβρανώδη και ήταν μέτρια έως ισχυρή (IRS≥3) σε 56,1% των περιπτώσεων (Σχήμα 2Α). Αντιθέτως, IGF1R-βήτα ανοσοχρώση ήταν ως επί το πλείστον κυτταροπλασματική (Σχήμα 2Β). και ήταν απούσα (IRS = 0) σε 81,7% των περιπτώσεων, παρά την ύπαρξη θετικών εσωτερικών ελέγχων (μακροφάγα και στρώμα). IGF2R ανοσοχρώση ήταν κυρίως κυτταροπλασματική και ήταν μέτρια έως ισχυρή (IRS≥2) σε 53,6% των περιπτώσεων, (Σχήμα 2C). Αξίζει να σημειωθεί ότι παρατηρήθηκε μία σημαντική συν-έκφραση μεταξύ IGF1R-άλφα κυτταροπλασματική και IGF1R-άλφα μεμβρανώδη ανοσοχρώση (r = 0,28, ρ & lt? 0,0001), αλλά όχι μεταξύ IGF1R-άλφα και IGF1R-βήτα (r = -0.02, ρ = 0.779) , ούτε μεταξύ IGF1R-άλφα και IGF2R (r = 0.09, ρ = 0.133). Τα ευρήματα αυτά μας προέτρεψε να διερευνήσει περαιτέρω τις IGF1R-άλφα κυτταροπλασματική /μεμβρανώδη έκφραση IHC σε σχέση με κλινικοπαθολογοανατομικές μεταβλητές.

Α. IGF1R-άλφα ισχυρή μεμβρανικό χρώση στο 100% των καρκινικών κυττάρων (IRS = 9)? Β IGF1R-βήτα ισχυρή κυτταροπλασματική χρώση σε 80% των καρκινικών κυττάρων (IRS = 9)? Γ IGF2R ισχυρή κυτταροπλασματική και μεμβρανικό χρώση σε 80% των καρκινικών κυττάρων (IRS = 9). Όλες οι εικόνες: μεγέθυνσης X 40.

Η

Όπως παρουσιάζεται στον Πίνακα 2, υψηλή έκφραση του IGF1R-άλφα (IRS≥3) ήταν σημαντικά σχετίζεται με τα χαρακτηριστικά της νόσου σε προχωρημένο στάδιο, συμπεριλαμβανομένων στάδιο TNM ΙΙΙ ή IV κατά τη διάγνωση (ρ = 0,011) και ολική λαρυγγεκτομή ως αρχική χειρουργική διαδικασία (p = 0.018). Αντιθέτως, IGF1R-βήτα και η έκφραση IGF2R IHC δεν συσχετίστηκε με καμία από τις μεταβλητές που μελετήθηκαν κλινικοπαθολογοανατομικών (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Στην μονοπαραγοντική ανάλυση, οι ασθενείς των οποίων οι όγκοι υπερεκφράζεται κυτταρόπλασμα /μεμβράνη IGF1R-άλφα παρουσίασαν οριακά μικρότερη διάμεση DFS σε σύγκριση με εκείνους των οποίων οι όγκοι δεν είχαν (91,1 vs 106,2 μηνών, p = 0,0538), και στατιστικώς σημαντικά μικρότερη διάμεση OS (100,3 έναντι 118,6 μήνες p = 0,0157), (Σχήμα 3). Κανένας από τους άλλους δείκτες IHC έδειξαν καμία συσχέτιση με τα αποτελέσματα της επιβίωσης, ούτε ο συνδυασμός των IGF1R-α έκφραση IHC με οποιαδήποτε άλλη απόδοση δείκτη περισσότερες πληροφορίες σχετικά με τα αποτελέσματα των ασθενών.

Η

mRNA έκφραση και συσχέτιση με αποτέλεσμα

Διαθεσιμότητα δείγματα όγκων για την αξιολόγηση της έκφρασης του mRNA για κάθε ένα από τα βιοδεικτών παρέχεται στο Σχήμα 1. προκειμένου να εκτιμηθεί η έκφραση του mRNA των γονιδίων οδού που σχετίζονται με τον IGFR και για τη διαλογή διανομή τους για το φυσικό κόψιμο -offs, ιστογράμματα συχνότητας των τιμών RQ για κάθε βιοδείκτη παρίστανται γραφικώς και οι αντίστοιχες Boxplots δομήθηκαν (Σχήμα S1). χειριστή του δέκτη ανάλυση χαρακτηριστικών (ROC) χρησιμοποιώντας το 3-year DFS, όπως η ανάλυση των δεικτών και τεταρτημόριο των διανομών που προσδιορίζονται ως cut-offs η διάμεση τιμή για IGF1R, IGFBP3, MAP2K1, MAPK9, PI3KR1 και SOCS2 και το 61

ου εκατοστημόριο για PIK3CA. Όταν ένωση δείκτες »αξιολογήθηκαν σε μια συνεχή μορφή, η έκφραση IGF1R mRNA συσχετίστηκε σημαντικά με την έκφραση του mRNA του IGFBP3 (r = 0.22, p = 0,0032), MAP2K1 (r = 0,50, ρ & lt? 0,0001), MAPK9 (r = 0,51, ρ & lt ? 0,0001), PIK3CA (r = 0,34, ρ & lt? 0,0001), PIK3R1 (r = 0,37, ρ & lt? 0.0001) και SOCS2 (r = 0.27, p = 0,0014), υποδεικνύοντας ότι IGF1R mRNA συν-εκφράζεται με όλες τις άλλες σημαντικές τελεστών της μοριακής οδού IGF. Τα μεταγενέστερα μόρια από τους δύο κύριους καταρράκτες σηματοδότησης ενεργοποιείται από την ενεργοποίηση IGFR (MAPK9 με MAP2K1 και PIK3CA με PIK3R1) επίσης συσχετίστηκε σημαντικά με το άλλο όσον αφορά την έκφραση του mRNA. Τέλος, η έκφραση IGFBP3 mRNA συσχετίστηκε με MAPK9, PIK3CA και έκφραση SOCS2 mRNA (Πίνακας S1).

Καμία έκφρασης mRNA του βιοδείκτη του, αξιολογούνται ως συνεχή μεταβλητή, συνδέθηκε με κάποια από τις κλινικοπαθολογοανατομικών μεταβλητές που μελετήθηκαν (τα δεδομένα δεν απεικονίζεται). Στην μονοπαραγοντική ανάλυση και τη χρήση των εντοπισθέντων τιμές cut-off, οι ασθενείς των οποίων οι όγκοι είχαν mRNA έκφραση υψηλής MAPK9 γνώρισε οριακά μεγαλύτερο διάμεσο DFS (91,8 vs 81,0 μηνών, p = 0.0665) και στατιστικά σημαντικά μεγαλύτερο διάμεσο OS (117,5 έναντι 87,3 μηνών, p = 0,0344 ), σε σύγκριση με τους ασθενείς των οποίων οι όγκοι είχαν χαμηλά επίπεδα MAPK9 mRNA. Παρομοίως, οι ασθενείς των οποίων οι όγκοι είχαν mRNA έκφραση υψηλού PIK3CA έμπειροι πλέον -αν δεν σημα- διάμεσος DFS (106,2 έναντι 80,5 μηνών, p = 0,0723) και διάμεση OS (141,8 έναντι 94,5 μηνών, p = 0,0726), σε σύγκριση με τους ασθενείς των οποίων οι όγκοι είχαν χαμηλά επίπεδα PIK3CA mRNA (Πίνακας S2).

Συσχέτιση της έκφρασης IGF1R IHC με τα επίπεδα του mRNA

Παρατηρήσαμε μια μη σημαντική τάση για συν-έκφραση IGF1R-άλφα μεμβρανώδη ή κυτταροπλασματική χρώση και IGF1R επίπεδα άλφα mRNA, όπως αξιολογήθηκε με δοκιμή του Spearman της συσχέτισης (r = 0,14, p = 0,0621), (Εικόνα S2). Ωστόσο, δεν υπήρχε συσχέτιση των IGF1R-α έκφραση IHC με τα επίπεδα του mRNA του σε οποιοδήποτε άλλο βιοδείκτες αξιολογήθηκε (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται).

Η πολυπαραγοντική ανάλυση

Στην πολυπαραγοντική ανάλυση, ανεξάρτητοι προγνωστικοί παράγοντες για την DFS ήταν ο τύπος της χειρουργικής επέμβασης (λαρυγγεκτομή vs συντηρητική χειρουργική), την κατάσταση των λεμφαδένων (θετικές vs αρνητική), το φύλο (αρσενικό vs γυναίκα), ηλικίας κατά τη διάγνωση (πάνω ή κάτω από το μέσο των 63 ετών), τη θέση του όγκου (Υπογλωττιδική /transglottic vs υπεργλωττιδική /γλωττίδας) και IGF1R-άλφα κυτταροπλασματική ή μεμβρανώδη έκφραση IHC (υψηλή vs χαμηλή), (Σχήμα 4Α). Ισχυροί παράγοντες πρόβλεψης για DSF ήταν το αρσενικό φύλο, η οποία σχετίστηκε με περισσότερες από τέσσερις φορές αύξηση του κινδύνου υποτροπής (HR = 4,459, 95% CI 1,079 έως 18,436, p = 0,039) και η παρουσία του έχει διεισδύσει (θετικό) λεμφαδένες , η οποία συσχετίστηκε με περισσότερο από δύο φορές αύξηση στην ίδια κινδύνου (HR = 2,313, 95% CI 1,477 έως 3,622, p = 0,0002). Είναι σημαντικό, οι ασθενείς των οποίων οι όγκοι υπερεκφράζεται IGF1R-άλφα είχαν αύξηση 46,6% στον κίνδυνο για υποτροπή, μετά την προσαρμογή για όλες τις προαναφερθείσες προγνωστικοί παράγοντες (HR = 1,466, 95% CI: 1,022 – 2,102, p = 0,0374).

Το τελικό μοντέλο για το OS περιλαμβάνονται τα ίδια κλινικοπαθολογοανατομικές μεταβλητές συν T-στάδιο (Τ3 /Τ4 vs T1 /T2). Οι πιο ισχυρές δυσμενείς προγνωστικοί παράγοντες για το OS είχαν διεισδύσει στους λεμφαδένες (HR = 2,569, 95% CI: 1,610 – 4,100, p & lt? 0,0001), ηλικίας πάνω από 63 ετών (HR = 1,785, 95% CI: 1,211 – 2,630, p = 0,0034) και Υπογλωττιδική /transglottic θέση (HR = 1,756, 95% CI: 1,016 – 3,036, p = 0,0438). Όπως φαίνεται στην Εικόνα 4Β, αυξημένη κυτταροπλασματική ή έκφραση μεμβρανώδη πρωτεΐνη IGF1R-άλφα, συνδέθηκε με μια απόλυτη αύξηση 47,5% στον κίνδυνο θανάτου μετά από προσαρμογή για όλες τις άλλες κλινικοπαθολογικών παραμέτρων και αυτό το αποτέλεσμα ήταν οριακά σημαντική (HR = 1,475, 95% CI : 1,000 – 2,178, p = 0,0504). Αξίζει να σημειωθεί ότι, η ενσωμάτωση της έκφρασης IGF1R IHC στην πολυμεταβλητή μοντέλο επέτρεψε την διαστρωμάτωση των ασθενών σε τρεις ομάδες με διακριτές πρόγνωση ανάλογα με τον αριθμό των αρνητικών προγνωστικών παραγόντων (1-2, 3 και 4 ή περισσότερες δυσμενείς παράγοντες για την ευνοϊκή, ενδιάμεση και δυσμενείς ομάδα πρόγνωση αντίστοιχα). Για παράδειγμα, η διάμεση OS ήταν 70,7 μήνες (95% CI: 35,4 – 100,3 μήνες) για τους ασθενείς στη δυσμενή ομάδα πρόγνωση και 106,3 μήνες (95% CI: 84,8 – 130,4 μήνες) στην ενδιάμεση ομάδα πρόγνωση, ενώ δεν επιτεύχθηκε σε η ευνοϊκή ομάδα πρόγνωση (Σχήμα 5).

η

Συζήτηση

στην παρούσα μελέτη, η μόνη γνώση μας εξερευνώντας την προγνωστική ρόλο της IGF1R στις αρχές του λάρυγγα καρκίνος, έχουμε δείξει ότι η αυξημένη κυτταροπλασματική IGF1R-άλφα και /ή μεμβρανικό έκφραση, όπως εκτιμήθηκε με ανοσοϊστοχημεία και ποσοτικοποιούνται με το σύστημα IRS, είναι ένας ανεξάρτητος δυσμενή προγνωστικό παράγοντα για υποτροπή και την επιβίωση σε ασθενείς με πρώιμη (χειρουργικά) ακανθοκυτταρικό καρκίνωμα του λάρυγγα. έκφραση IGF1R-άλφα παρέμεινε ένα σημαντικό προγνωστικό παράγοντα τόσο για την DFS και OS, ακόμη και μετά την προσαρμογή για σαφώς καθορισμένες κλινικοπαθολογοανατομικές μεταβλητές, όπως η συμμετοχή κόμβο του τραχήλου της λέμφου, την ηλικία και τη θέση του όγκου. Αυτά τα αποτελέσματα είναι σύμφωνα με πρόσφατα δημοσιευμένη σημαντικά στοιχεία σχετικά με συστοιχίες γονιδίων [22] που τονίζουν τη σπουδαιότητα της IGFR μεσολάβηση μοριακού μονοπατιού στο λάρυγγα καρκινογένεση και την πρόοδο? Αξίζει να σημειωθεί ότι, τις τρέχουσες θεραπευτικές στα πρώιμα στάδια του καρκίνου του λάρυγγα περιλαμβάνουν χειρουργική εκτομή με ή χωρίς ανοσοενισχυτικό ακτινοθεραπεία, όπως χρησιμοποιείται στην ομάδα μας, καθιστώντας έτσι τα αποτελέσματά μας έγκαιρη και κλινικά σημαντική. Επιπλέον, η σκοπιμότητα και η επαναληψιμότητα της αξιολόγησης IRS σε ανεξάρτητα εργαστήρια παθολογίας καθιστούν έκφραση IGF1R-άλφα πρωτεΐνης μια ελκυστική βιοδείκτη για τη συνήθη κλινική πρακτική που μπορεί να χρησιμεύσει ως εργαλείο λήψης αποφάσεων για πιο επιθετική αγωγή στις αρχές του λάρυγγα καρκίνο.

Η IGFR μεσολάβηση μοριακό μονοπάτι έχει επανειλημμένα εμπλακεί σε νεοπλασματικό μετασχηματισμό και την εξέλιξη σε έναν αριθμό ανθρώπινων κακοηθειών, συμπεριλαμβανομένων εκείνων του αναπνευστικής οδού και να έχει έτσι καιρό προσελκύσει την προσοχή τόσο ως δυνητικός προγνωστικό βιοδείκτη [9], [10] και ως δυνητικό στόχος για θεραπευτική παρέμβαση [11], [12]. Τα δεδομένα που αφορούν IGFR προγνωστική αξία σε NSCLC είναι μάλλον αντικρουόμενα [3], [4], [29], αν και μια πρόσφατη μελέτη [5] έδειξε ότι η έκφραση της πρωτεΐνης IGF1R είναι υψηλότερη σε πλακωδών κυττάρων ιστολογίες και κατέληξε στο συμπέρασμα ότι IGF1R πρωτεΐνη και η έκφραση του γονιδίου ήταν δεν σχετίζεται με την επιβίωση, ενώ

IGF1R

αριθμού αντιγράφων γονιδίου έτρεφε προγνωστική αξία. Στον καρκίνο του λάρυγγα, η έλλειψη στοιχείων δεν επιτρέπει ασφαλή συμπεράσματα που πρέπει να συναχθούν: IGF1R και τα επίπεδα IGFBP3 ορό δεν προσδιορίστηκαν ως σημαντικοί προγνωστικοί της κλινικής έκβασης σε μόνο μεγάλη ομάδα 540 ασθενών με SCCHN, συμπεριλαμβανομένων 440 ασθενών με καρκίνο του λάρυγγα, δημοσιευθεί μέχρι σήμερα [9]? Η μελέτη αυτή, ωστόσο, αξιολογήθηκαν τα επίπεδα IGF1R και IGFBP3 αποκλειστικά ορό και δεν όγκων επιπέδων mRNA ή έκφραση IHC, όπως στην ομάδα μας. Είναι ενδιαφέρον, IGFBP3 έχει αναφερθεί ότι δρα ως καταστολέας του αγγειακού ενδοθηλιακού αυξητικού παράγοντα (VEGF) σε SCCHN αγγειογένεση [16] και να ρυθμίζεται προς τα κάτω στα πρώτα στάδια της κεφαλής και του λαιμού καρκινογένεσης [30]. Σε καρκίνωμα του στόματος πλακωδών κυττάρων, έκφραση IGFBP3 mRNA έχει συσχετιστεί με ένα πιο ευνοϊκό αποτέλεσμα, υποστηρίζοντας περαιτέρω το ρόλο της ως απενεργοποιητής IGF1 [31]. Σε μια μελέτη που δημοσιεύθηκε πρόσφατα [32], ο συνδυασμός των IGF1R και IGFBP3 IHC υπερέκφραση ήταν προγνωστικό για την κακή επιβίωση σε μία ομάδα από 131 ασθενείς με SCCHN. Στην ομάδα μας, αποτελούνταν αποκλειστικά από ασθενείς με καρκίνο του λάρυγγα, η ενσωμάτωση της έκφρασης IGFBP3 IHC δεν βελτίωσε την προγνωστική ικανότητα του IGF1R μόνο. Τέλος, ο ρόλος των IGF2R στον καρκίνο του λάρυγγα παραμένει να διευκρινιστεί [33], αν και φαίνεται πιθανόν ότι η έλλειψη μιας περιοχής κινάσης τυροσίνης στερεί τον υποδοχέα από την ικανότητα να μετάγει πολλαπλασιαστικά σήματα και μπορεί έτσι να εξηγήσει την απουσία προγνωστική αξία της δείκτη που παρατηρήθηκε σε ομάδα μας.

Ένα σημαντικό στοιχείο στο σχεδιασμό της μελέτης μας ήταν η χρήση ξεχωριστών μονοκλωνικών αντισωμάτων που στοχεύουν τις δύο διακριτές ισομορφές της πρωτεΐνης IGF1R (άλφα και βήτα).