Αφηρημένο

Τα microRNAs, μη-κωδικοποίησης 20-22 νουκλεοτιδίων μονόκλωνο RNA που, ως αποτέλεσμα μεταγραφική καταστολή ή την υποβάθμιση και την γονιδιακή σίγηση γονιδίων στόχων τους, και συμβάλλουν σημαντικά στη ρύθμιση της γονιδιακής έκφρασης. Στην παρούσα μελέτη, αναφέρουμε ότι η έκφραση miR-182 ήταν σημαντικά ρυθμισμένη προς τα πάνω σε προστάτη καρκινικούς ιστούς και τέσσερις κυτταρικές γραμμές, σε σύγκριση με καλοήθη προστατική υπερπλασία ιστούς και φυσιολογικά επιθηλιακά κύτταρα του προστάτη (RWPE-1). Έκτοπη υπερέκφραση του miR-182 προάγει σημαντικά τον πολλαπλασιασμό, αυξάνει την εισβολή, προωθεί την G1 /S μετάβαση του κυτταρικού κύκλου και μειώνει νωρίς απόπτωση των PC-3 κύτταρα, ενώ η καταστολή της miR-182 μείωσε τον πολλαπλασιασμό και την εισβολή, αναστέλλει την G1 /S μετάβαση του κυτταρικού κύκλου και την αύξηση νωρίς απόπτωση του PC-3 κύτταρα. Επιπλέον, αποδείξαμε ότι το miR-182 θα μπορούσε να ρυθμίζουν προς τα κάτω την έκφραση των NDRG1 με απευθείας στόχευση των NDRG1 3′-αμετάφραστη περιοχή. Συμπερασματικά, τα αποτελέσματά μας δείχνουν ότι miR-182 παίζει σημαντικό ρόλο στον πολλαπλασιασμό των ανθρώπινων κυττάρων καρκίνου του προστάτη με την άμεση καταστολή του γονιδίου καταστολέα όγκου NDRG1. Έχουμε ανακαλύψει μια νέα επιγενετική ρύθμιση της NDRG1

Παράθεση:. Liu R, Li J, Teng Ζ, Zhang Ζ, Xu Y (2013) υπερεκφράζεται microRNA-182 προωθεί τον πολλαπλασιασμό και την εισβολή στον καρκίνο του προστάτη PC-3 κύτταρα από Down-ρύθμιση Ν-myc μεταγενέστεροι Ρυθμιζόμενη Gene 1 (NDRG1). PLoS ONE 8 (7): e68982. doi: 10.1371 /journal.pone.0068982

Επιμέλεια: Daotai Nie, Southern Illinois University School of Medicine, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 7 Απριλίου 2013? Αποδεκτές: 8 Ιούν 2013? Δημοσιεύθηκε: 16 του Ιούλη του 2013

Copyright: © 2013 Liu et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτή η μελέτη υποστηρίχθηκε από επιχορηγήσεις από το Εθνικό Ίδρυμα Φυσικών Επιστημών της Κίνας (No: 30800226), Tianjin Δημοτική Επιστήμης και Τεχνολογίας της Επιτροπής (No: 12ZCDZSY17200) και το δεύτερο Νοσοκομείο της Tianjin Ιατρικό Πανεπιστήμιο (No: Y1003). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Ο καρκίνος του προστάτη (PCA) εξακολουθεί να είναι ένα από τα μεγαλύτερα προβλήματα υγείας για τη γήρανση του αρσενικού, με κατ ‘εκτίμηση 238.590 νέες περιπτώσεις και 29.720 θάνατοι που σχετίζονται με τον καρκίνο αναμένεται το 2013 και μόνο στις Ηνωμένες Πολιτείες [1]. Αν και Κινέζοι άνδρες ανήκουν στην ομάδα χαμηλού κινδύνου που έχουν προστάτη, η συχνότητα και το ποσοστό θνησιμότητας έχουν αυξηθεί σημαντικά λόγω της γήρανσης του πληθυσμού, αλλαγές στον τρόπο ζωής και άλλες αιτίες. PCa έχει καταστεί μία από τις πιο κοινές κακοήθειες στους άνδρες παγκοσμίως, με έντονα διαφορετικά ποσοστά εξέλιξης του όγκου και των αντιδράσεων στη θεραπεία. Εάν ο όγκος περιορίζεται στον προστάτη, οι ασθενείς μπορούν να θεραπευτούν με χειρουργική αφαίρεση του όγκου ή με ακτινοβολία, με υψηλή αποτελεσματικότητα. Αντιθέτως, η θεραπεία για ανεμπόδιστη όγκων εξακολουθεί να αποτελεί σημαντικό πρόβλημα. Τυπική θεραπεία για αυτούς τους ασθενείς είναι αντιανδρογόνα για να επιτευχθεί συνολικό αποκλεισμό των ανδρογόνων [2]. Δυστυχώς, ότι οι όγκοι της προόδου και έτσι παρακάμπτουν η θεραπεία είναι ένα πολύ συχνό γεγονός και δεν υπάρχουν αποτελεσματικές θεραπείες για ανθεκτικά προστάτη (CRPC) ασθενείς ευνουχισμό, αν και ουρολόγος προσπαθείτε να χρησιμοποιήσετε χημειοθεραπευτικά. Παρά το γεγονός ότι και οι δύο γενετικοί και περιβαλλοντικοί παράγοντες που θεωρούνται σημαντικοί παράγοντες, οι μοριακοί μηχανισμοί ανάπτυξης και εξέλιξης του προστάτη παραμένουν σε μεγάλο βαθμό unknown.Therefore, την καλύτερη κατανόηση της παθογένεσης του προστάτη και τη διερεύνηση νέων στόχων παρέμβασης για προστάτη επειγόντως απαιτητικές εργασίες.

τα microRNAs (miRNAs) είναι μια ομάδα μικρών (περίπου 20-22 νουκλεοτίδια) ενδογενή μη κωδικοποιητική RNA. Ώριμη miRNAs ρυθμίζουν αρνητικά γονίδια στόχους τους μέσω ατελών συμπληρωματική σύζευξη αλληλουχίας με την 3 ‘αμετάφραστη περιοχή (UTR) των γονιδίων στόχων αποτέλεσμα είτε αποικοδόμηση mRNA ή μεταφραστικά καταστολή. Πολυάριθμες μελέτες έχουν δείξει ότι παρεκκλίνουσα έκφραση των miRNAs συνδέεται στενά με τον πολλαπλασιασμό, την εισβολή, τη μετάσταση και την πρόγνωση των διαφόρων μορφών καρκίνου, συμπεριλαμβανομένων προστάτη, του καρκίνου του μαστού, το γλοίωμα και καρκίνο του πνεύμονα [3] – [6]. Προστάτη εξέλιξη συνδέεται με αλλοιωμένη έκφραση πολλών ογκογονιδίων και καταστολείς των όγκων, και miRNAs μπορεί δυνητικά να ρυθμίσει αυτά τα γονίδια? Ωστόσο, η σχέση μεταξύ miRNAs και προστάτη έχει αρχίσει μόνο να διευκρινιστεί κατά τα τελευταία χρόνια [7]. Περισσότερα από 50 miRNAs αναφερθεί ότι εμπλέκεται σε PCa? Ωστόσο, τα περισσότερα από τα τρέχοντα δεδομένα δείχνουν ότι μόνο ένας μικρός αριθμός από αυτά σχετίζονται με την παθογένεση της προστάτη [8]. . Περισσότερα miRNAs θα πρέπει να επιλέγονται και να μελετηθεί με σκοπό την καλύτερη κατανόηση της εξέλιξης του προστάτη

Μέχρι σήμερα, πολλά άρθρα διερευνήθηκε η έκφραση των miRNAs σε δείγματα προστάτη, ωστόσο, τα αποτελέσματα ήταν πολύ ασυνεπής [9] – [15]. Κανένα αποτέλεσμα ανίχνευσης miRNA μικροσυστοιχιών έχουν αναφερθεί από την κινεζική δείγματα του προστάτη μέχρι στιγμής. Στην παρούσα μελέτη, θα προβληθεί για πρώτη φορά τα miRNAs που σχετίζονται με προστάτη από miRNA microarrays, και σύμφωνα με τα προκαταρκτικά αποτελέσματα, διαπιστώσαμε ότι microRNA-182 (miR-182) ήταν υπερεκφράζεται σε ιστούς του προστάτη. Μελέτες έδειξαν ότι το miR-182 θα μπορούσε να προωθήσει τη μετάσταση του μελανώματος από την καταστολή FOXO3 και τον παράγοντα μεταγραφής μικροφθαλμίας που σχετίζονται [16], εν τω μεταξύ, miR-183-96-182 συμπλέγματος υπερεκφράζεται σε ιστό του προστάτη και μπορεί να ρυθμίζουν την ομοιόσταση του ψευδαργύρου στα κύτταρα του προστάτη [17]. MiR-182 πιστεύεται ότι είναι ένας σημαντικός oncomiR. Ωστόσο, miR-182 θα μπορούσε να suppresse πνεύμονα ογκογένεση μέσω προς τα κάτω ρύθμιση της έκφρασης RGS17 in vitro [18]. Επιπλέον, μια νέα μελέτη έδειξε ότι το miR-182 και microRNA-200a θα μπορούσε να ελέγξει άλφα-13 (GNA13) έκφραση υπομονάδα της G-πρωτεΐνης και κυτταρική εισβολή συνεργικά στα κύτταρα του προστάτη [19]. Αυτά τα αντιφατικά αποτελέσματα δείχνουν ότι η λειτουργία του miR-182 είναι πολύπλοκη και χρειάζεται περαιτέρω μελέτη. Στην παρούσα μελέτη, δείξαμε ότι miR-182 προωθείται προστάτη PC-3 κύτταρα πολλαπλασιασμού και εισβολή από απ ‘ευθείας στόχευση του 3’-UTR του Ν-myc κατάντη ρυθμιζόμενο γονίδιο 1 (NDRG1, NM_006096.3) mRNA. Τα αποτελέσματά μας δείχνουν ότι το miR-182 μπορεί να διαδραματίσει σημαντικό ρόλο στην ανάπτυξη και την εξέλιξη του προστάτη.

Υλικά και Μέθοδοι

Δήλωση Ηθικής

Η μελέτη εγκρίθηκε από την ηθική διοικητικού συμβουλίου του Δεύτερου Νοσοκομείου Tianjin Ιατρικό Πανεπιστήμιο. Όλα τα δείγματα ελήφθησαν από ασθενείς που υπέγραψε ενημερωμένη συγκατάθεση για την έγκριση της χρήσης των ιστών τους για ερευνητικούς σκοπούς μετά την επέμβαση.

προστάτη δείγματα ιστών

Πέντε προστάτη ιστοί συλλέχθηκαν μετά από ριζική προστατεκτομή στο Τμήμα Ουρολογίας του νοσοκομείου μεταξύ Ιανουαρίου 2010 και Δεκεμβρίου 2012. Κανένας από τους ασθενείς είχαν λάβει εισαγωγική θεραπεία με αυξητική ορμόνη πριν από τη λειτουργία. Τρεις καλοήθους υπερπλασίας του προστάτη (ΒΡΗ) ιστοί συλλέχθηκαν μετά υπερηβική εκπυρήνιση του προστάτη. Φρέσκα ιστοί του προστάτη ελήφθησαν δείγματα αμέσως μετά την χειρουργική αφαίρεση των gland.These δείγματα καταψύχθηκαν αμέσως σε υγρό άζωτο και χρησιμοποιήθηκαν για πειράματα μικροσυστοιχιών miRNA. Ένα διαγνωστικό H & amp?. Το τμήμα Ε ήταν διατεθειμένη να ελέγξει το περιεχόμενο του όγκου και μόνο περιπτώσεις με τον ιστό του όγκου πάνω από το 90% θεωρήθηκαν για περαιτέρω ανάλυση

Mirna μικροσυστοιχιών Ανάλυση

Mirna κιτ απομόνωσης (Ambion) ήταν χρησιμοποιήθηκε για την απομόνωση ολικού RNA με εμπλουτισμένο miRNAs από δείγματα ιστού του προστάτη. δοκιμασία μικροσυστοιχιών εκτελέστηκε χρησιμοποιώντας ένα φορέα παροχής υπηρεσιών (LC Επιστημών, Houston, TX, https://www.lcsciences.com) όπως περιγράφηκε προηγουμένως [20]. Εκείνοι με πολλαπλή μεταβολή & gt? 2 ή & lt? -2 Και τις αξίες & lt Ρ? 0,05 (t test) θεωρήθηκαν ως διαφορικά εκφρασμένων miRNAs. Real-time RT-PCR χρησιμοποιήθηκε για την επιβεβαίωση ορισμένων διαφορικά εκφρασμένων miRNAs.

Cell Culture

κυτταρικές σειρές ανθρώπινου PCa LNCap, PC-3, DU145, 22Rv1 και φυσιολογικό προστάτη επιθηλιακή κυτταρική γραμμή RWPE-1 ελήφθησαν από την American Type Culture Collection (ATCC, Manassas, VA, USA) και διατηρήθηκε στο εργαστήριο μας. Τα κύτταρα καλλιεργήθηκαν σε RPMI-1640 (Gibco) συμπληρωμένο με 10% εμβρυϊκό ορό-ορό και πενικιλίνη (100 U /ml). Οι καλλιέργειες διατηρήθηκαν υπό ατμόσφαιρα που περιέχει 5% CO

2.

Ολικό RNA Εκχύλιση και σε πραγματικό χρόνο RT-PCR

Το συνολικό RNA εξήχθη χρησιμοποιώντας το αντιδραστήριο ΤπζοΙ (Invitrogen, CA, USA ). cDNA συντέθηκε χρησιμοποιώντας M-MLV microRNA Reverse Transcription Kit (Promega, USA). Real-time RT-PCR πραγματοποιήθηκε με SYBR® Προμίγματα Ex Taq ™ (Takara, Biotech Co., Ltd, Dalian, Κίνα). RT αστάρι για miR-182 ήταν 5′-GTCGTATCCAGTGCAGGGTCCGAGGTGCACTGGATACGACAGTGTGA -3 ‘, εκκινητών PCR για miR-182 ήταν 5′-TGCGGTTTGGCAATGGTAGAAC-3′ (προς τα εμπρός), 5’-CCAGTGCAGGGTCCGAGGT-3 ‘(αντίστροφο). Το επίπεδο έκφρασης κανονικοποιούνται σε U6. RT αστάρι για U6 ήταν 5’-GTCGTATCCA GTGCAGGGTCCGAGG TGCACTGGATACGACAAAAT ATGG -3 ‘, εκκινητών PCR για U6 ήταν 5′-TGCGGGTGCTCGCTTCGGCAGC -3′ (προς τα εμπρός), 5’-CCAGTGCAGGGTCCGAGGT -3 ‘(reverse). PCR διεξήχθη υπό τις ακόλουθες συνθήκες: 94 ° C για 4 λεπτά, ακολουθούμενη από 40 κύκλους στους 94 ° C για 30 s, 50 ° C για 30 s και 72 ° C για 40 s. Κάθε δείγμα εις τριπλούν.

Western Blotting

στύπωση Western διεξήχθη για να προσδιοριστεί η έκφραση πρωτεΐνης NDRG-1. Όλες οι πρωτεΐνες διαχωρίστηκαν σε μια SDS-μετουσιωμένο πήκτωμα πολυακρυλαμιδίου 8% και στη συνέχεια μεταφέρθηκαν σε μεμβράνη νιτροκυτταρίνης. Οι μεμβράνες επωάστηκαν με ρυθμιστικό διάλυμα αποκλεισμού για 90 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου και στη συνέχεια επωάζεται με ένα αντίσωμα έναντι NDRG-1 ή βήτα-τουμπουλίνης με Blotto όλη τη νύκτα στους 4 ° C. Οι μεμβράνες πλύθηκαν και επωάστηκαν με υπεροξειδάση (HRP) δευτερογενές αντίσωμα. Η έκφραση της πρωτεΐνης εκτιμήθηκε με ενισχυμένη χημειοφωταύγεια και έκθεση σε φιλμ χημιφωταύγειας. Η απόκτηση και η ανάλυση της εικόνας λογισμικού Labworks (UVP, LLC) χρησιμοποιήθηκε για την ποσοτικοποίηση εντάσεις μπάντα. Όλα τα αντισώματα αγοράστηκαν από Saier Biotechnology (Tianjin, Κίνα).

διαμόλυνσης κυττάρων

Οι επιμολύνσεις πραγματοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας Λιποφεκταμίνη 2000 (Invitrogen, CA, USA) σύμφωνα με το πρωτόκολλο του κατασκευαστή. Εν συντομία, PC-3 κύτταρα τοποθετήθηκαν σε έξι φρεατίων και αναπτύχθηκαν χωρίς αντιβιοτικά σε 60-80% συρροή. Κάθε καλά έλαβε 10 μl αντιδραστηρίου λιποφεκταμίνης και 50 pmol από συνθετικό miR-182 μιμείται (GenePharma Co., Ltd, Shanghai, Κίνα), συνθετικά αρνητικό miRNAs ελέγχου (miR-182 μιμείται-NC), συνθετική αλληλουχία miR-182-αναστολέα ή συνθετικό miR-182-αναστολέα αρνητικού ελέγχου (miR-182 αναστολέα-NC). Ακολουθίες miR-182 μιμείται, miR-182 μιμείται-NC, miR-182-αναστολέα και miR-182 αναστολέα-NC φαίνονται στον πίνακα 1. Όλα τα μιμητικά και αναστολείς σημάνθηκαν με FAM (καρβοξυφλουορεσκεΐνη). Έξι ώρες μετά την επιμόλυνση, τα κύτταρα PC-3 παρατηρήθηκαν χρησιμοποιώντας μικροσκόπιο φθορισμού και μέσο ελεύθερο ορού αλλάχθηκε σε πλήρες μέσο.

Η

ΜΤΤ Δοκιμασία

PC-3 κύτταρα επιμολυσμένα με είτε ΜΙΚ 182 μιμείται ή miR-182 μιμείται-NC, ή miR-182-αναστολέα και miR-182 αναστολέα-NC απλώθηκαν σε πλάκες 96-φρεατίων σε 1 × 10

4 κύτταρα /φρεάτιο. Βιώσιμα κύτταρα μετρήθηκαν 1, 2, 3, 4, και 5 ημέρες μετά την επιμετάλλωση. Μετά την επώαση με 3- (4, 5- διμεθυλοθειαζολυλ-2) -2, 5-διφαινυλτετραζόλιο βρωμίδιο (ΜΤΤ), τα κύτταρα λύθηκαν σε 150 ml από 100% διμεθυλοσουλφοξείδιο (DMSO) και UV-ορατή απορρόφηση μετρήθηκε στα 490 nm με τη χρήση ο αναγνώστης πλάκας 96-φρεατίων. Κάθε δείγμα εις τριπλούν.

κυτταρικού κύκλου Ανάλυση

PC-3 κύτταρα επιμολυσμένα είτε με miR-182 μιμείται ή miR-182 μιμείται-NC ή miR-182-αναστολέα και ΜΙΚ 182 αναστολέα-NC συλλέχθηκαν 72 ώρες μετά την επιμόλυνση, πλύθηκε με ψυχρό αλατόνερο ρυθμισμένο με φωσφορικό (PBS) και σταθεροποιήθηκαν σε 1 ml 70% αιθανόλης. Μετά από ολονύκτια επώαση στους 4 ° C σε αιθανόλη, τα κύτταρα πλύθηκαν σε PBS και αιωρήθηκαν σε 500 ml propidine ιωδίδιο (ΡΙ) 30 λεπτά πριν από την κυτταρομετρία ροής. Πληθυσμοί σε G0-G1, S και G2 φάση-M μετρήθηκαν με κυτταρομετρία ροής (BD Biosciences, USA) και τα δεδομένα αναλύθηκαν με χρήση του κυτταρικού κύκλου Multicycle-DNA Αναλύθηκε μέτρηση Software.The εκτελέστηκε εις τριπλούν.

Ανίχνευση κυττάρων πρώιμη απόπτωση

PC-3 κύτταρα επιμολυσμένα με είτε miR-182 μιμείται ή miR-182 μιμείται-NC, ή miR-182-αναστολέα και miR-182 αναστολέα-NC συλλέχθηκαν και μονιμοποιήθηκαν με 70% αιθανόλη για την ανίχνευση της πρώιμης απόπτωσης. Η βαφή των κυττάρων πραγματοποιήθηκε σύμφωνα με τις οδηγίες του κιτ ανίχνευσης κυτταρικής απόπτωσης αννεξίνης V-Κ-ΡΕ (SouthernBiotech, USA). Η κυτταρομετρία ροής (BD Biosciences, USA) χρησιμοποιήθηκε για την ανίχνευση του ποσοστού της πρόωρης απόπτωσης. Η μέτρηση πραγματοποιήθηκε εις τριπλούν.

Transwell τηλέφωνα εισβολή Δοκιμασία

PC-3 κύτταρα επιμολυσμένα είτε με miR-182 μιμείται ή miR-182 μιμείται-NC ή miR-182-αναστολέα και miR -182 αναστολέας-NC συλλέχθηκαν. 5 × 10

4 κύτταρα PC-3 τοποθετήθηκαν επί του άνω θάλαμο κάθε ένθετου επικαλυμμένα με 50 μΙ 2 mg /ml Matrigel (αυξητικός παράγοντας μειωμένη BD MatrigelTM μήτρα) και 600μL από RPMI 1640 με 20% FBS προστέθηκε σε το κατώτερο τμήμα του θαλάμου. Μετά από επώαση για 24 ώρες, οι θάλαμοι αποσυναρμολογήθηκαν, και οι μεμβράνες κηλιδώθηκαν με ένα διάλυμα 2% ιώδους κρυστάλλου για 15 λεπτά και τοποθετήθηκαν σε ένα γυάλινο πλακίδιο. Στη συνέχεια, τα κύτταρα που είχαν μεταναστεύσει δια μέσου της μεμβράνης μετρήθηκαν σε πέντε τυχαία οπτικά πεδία χρησιμοποιώντας ένα μικροσκόπιο φωτός. Όλες οι αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν τρεις ανεξάρτητες φορές εις τριπλούν.

miRNA Στόχοι Πρόβλεψη

Οι υποθετικές στόχοι miRNA είχαν προβλέψει τη χρήση του TargetScan (https://www.targetscan.org/vert_50/), miRBase (https://www.mirbase.org/index.shtml), και PicTar (http: //pictar.mdc – berlin.de/). αλγορίθμων

Κατασκευή πλασμιδίου

PmirGLO- Dual-λουσιφεράσης φορέα αναφοράς (7350 bp, Promega, Madison, WI, USA) χρησιμοποιήθηκε για να επιβεβαιωθεί η λειτουργία του υποτιθέμενου θέση πρόσδεσης miR-182 στην NDRG1 3′-UTR. Σύμφωνα με την πιθανή αλληλουχία δέσμευσης miR-182 της NDRG1 3′-UTR, ένα διπλό – έλικας αλληλουχία ελήφθη με αναδιάταξη χρησιμοποιώντας δύο μονά-κλώνων NDRG1-Top, (NheI) 5′-CTAGCTAGCGGCCGCTAGT CCTC AGAGAC ACCAAACTGCCAAAAG- 3 ‘? NDRG1-Bot (SalI) 5’-TCGACTTTTGGCA GTTTGGTGTC TCTGAGG ACTAGCGGCCGCTAG- 3 ‘, και στη συνέχεια κλωνοποιήθηκε στις θέσεις NheI /Sall του pmirGLO-Dual-λουσιφεράσης φορέα αναφοράς. Ανόπτηση διεξήχθη όπως: 95 ° C για 5 λεπτά και θερμοκρασία δωματίου για 2 ώρες. Η ανακατασκευασμένη πλασμίδιο επιβεβαιώθηκε με πέψη ενδονουκλεάσης περιορισμού και αλληλουχίας, και ονομάστηκε pmirGLO /NDRG1-UTR.

Διπλή Luciferase Reporter Assay Gene

PC-3 κύτταρα χωρίστηκαν σε πέντε ομάδες ανάλογα με διάφορες περιεχόμενο επιμόλυνση: α: (κενό) pmirGLO /NDRG1-UTR? β: pmirGLO /NDRG1-UTR + miR-182 αναστολέα-NC? c: pmirGLO /NDRG1-UTR + miR-182-αναστολέα? δ: pmirGLO /NDRG1-UTR + miR-182 μιμείται-NC? e: pmirGLO /NDRG1-UTR + miR-182 μιμείται. PC-3 κύτταρα σπάρθηκαν εις τριπλούν σε πλάκες 96 φρεατίων, αφήνεται να κατακαθίσει επί 24 ώρες και στη συνέχεια συν-επιμολύνθηκαν με διαφορετικές περιεκτικότητες χρησιμοποιώντας Lipofectamine 2000 (Invitrogen, CA, USA). Λουσιφεράσης και η δραστικότητα της Renilla μετρήθηκαν 48 ώρες μετά την επιμόλυνση χρησιμοποιώντας την διπλής LuciferaseReporter Assay Kit (Promega) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Τρία ανεξάρτητα πειράματα και τα δεδομένα παρουσιάζονται ως μέσος όρος ± SD. τιμές δραστηριότητα λουσιφεράσης κανονικοποιήθηκε προς δραστηριότητα Renilla ως μονάδα σχετικού φωτός (RLU)

Στατιστική Ανάλυση

Ο δύο tailed t-test του Student χρησιμοποιήθηκε για την αξιολόγηση της σημασίας των διαφορών μεταξύ των δύο ομάδων.?

P

τιμές & lt?. 0.05 θεωρήθηκαν σημαντικές

Αποτελέσματα

MiR-182 ρυθμίζεται αυξητικά σε προστάτη ιστοί

Μετά την αρχική ανάλυση miRNA μικροσυστοιχιών, σε ιστούς προστάτη , πέντε miRNAs (miR-345, miR-145, miR-221, miR-27b και miR-378) ήταν κάτω-ρυθμίζονται και είκοσι δύο miRNAs ήταν πάνω ρυθμισμένα (Σχήμα 1). MiR-182 ήταν ρυθμισμένο με φορές μεταβολής 6,14 και επιβεβαιώθηκε περαιτέρω με πραγματικού χρόνου RT-PCR με πολλαπλή μεταβολή 5,70. Ως το πιο σημαντικό που εκφράζονται διαφορικά miRNA μεταξύ του προστάτη και BPH ιστούς, miR-182 επιλέχθηκε για περαιτέρω μελέτη. Όλα τα διαφορικά εκφρασμένων miRNAs παρατηρήθηκαν στον Πίνακα S1.

Στους ιστούς του προστάτη, πέντε miRNAs ήταν κάτω-ρυθμίζονται και είκοσι δύο miRNAs ήταν ρυθμισμένα προς τα πάνω. miRNA-182 ήταν πάνω ρυθμισμένα με φορές μεταβολής 3,07 και επιβεβαιώθηκε περαιτέρω με πραγματικού χρόνου RT-PCR με πολλαπλή μεταβολή 2,85.

Η

MiR-182 ρυθμίζεται αυξητικά στις γραμμές κυττάρων προστάτη

σε πραγματικό χρόνο ανάλυση RT-PCR αποκάλυψε ότι η έκφραση miR-182 ήταν σημαντικά αυξημένη σε τέσσερα κοινά κυτταρικές σειρές προστάτη που δοκιμάστηκαν (PC-3, DU145, 22Rv1 και LNCaP), σε σύγκριση με φυσιολογικά επιθηλιακά προστάτη RWPE-1 κυττάρων, υποδεικνύοντας ότι miR -182 ρυθμίζεται αυξητικά σε κυτταρικές σειρές προστάτη και PC-3 έχει το υψηλότερο επίπεδο έκφρασης (Σχήμα 2). Στη συνέχεια, τα κύτταρα PC-3 επιλέχθηκαν για περαιτέρω μελέτη.

σε πραγματικό χρόνο RT-PCR δείχνουν ότι το σχετικό επίπεδο έκφρασης PC-3 κύτταρα είναι η υψηλότερη σε τέσσερις κυτταρικές σειρές καρκίνου του προστάτη και RWPE-1 έχει το χαμηλότερο επίπεδο έκφρασης. Οι τιμές αντιπροσωπεύουν μέσα από τρία ξεχωριστά πειράματα και οι ράβδοι σφάλματος αντιπροσωπεύουν την SD.

Η

MiR-182 Έκφραση Επίπεδο έχει μεταβληθεί σημαντικά μετά από επιμόλυνση με Μιμείται ή αναστολείς

-182 MiR επίπεδο έκφρασης ανιχνεύθηκε με πραγματικού χρόνου RT-PCR μετά από επιμόλυνση με μιμείται ή αναστολείς σε PC-3 κύτταρα. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι μιμείται ή αναστολείς επιμόλυναν αποτελεσματικώς (Εικόνα 3) και το επίπεδο έκφρασης είναι υψηλότερο στη miR-182 ομάδα μιμείται και χαμηλότερα στην miR-182 ομάδα αναστολέας (Εικόνα 4). Αυτά τα αποτελέσματα έδειξαν ότι αυτά τα μιμητικά ή αναστολείς μπορούν να μιμούνται ή να αναστέλλουν αποτελεσματικά miR-182.

Τα αποτελέσματα δείχνουν ότι το ποσοστό διαμολύνσεως είναι περισσότερο από 80%. Αντιπροσωπευτικές εικόνες και τυχαία επιλεγμένα πεδία εμφανίζονται.

Η

Λευκά δώρα κενό έλεγχο. Τα αποτελέσματα δείχνουν ότι το επίπεδο έκφρασης είναι υψηλότερο στη miR-182 ομάδα μιμείται και το χαμηλότερο στην miR-182 ομάδα αναστολέα. Οι τιμές αντιπροσωπεύουν μέσα από τρία ξεχωριστά πειράματα και οι ράβδοι σφάλματος αντιπροσωπεύουν την SD.

Η

Η υπερέκφραση του miR-182 προωθεί τον πολλαπλασιασμό σε κύτταρα PC-3

Για να διερευνήσουν τη λειτουργία ΜΙΚ 182 στο ΣΕΣ, θα επιμολυσμένα miR-182 μιμείται ή inhibitros στα κύτταρα του προστάτη 3 PC-και μετρημένη πολλαπλασιασμό των κυττάρων. Χρησιμοποιώντας αναλύσεις ΜΤΤ, παρατηρήσαμε ότι ο ρυθμός αύξησης του miR-182 κύτταρα που υπερεκφράζουν αυξήθηκε δραματικά, σε σύγκριση με το miR-182 μιμείται -ΝΟ-επιμολυσμένα κύτταρα (

P

& lt? 0,05). Αντίθετα, μετά την προς τα κάτω ρύθμιση των miR-182 από inhiobitor, ο ρυθμός αύξησης των PC-3 κύτταρα δραματικά μειωμένη σε σχέση με το miR-182 αναστολέα -ΝΟ-επιμολυσμένα κύτταρα (

P

& lt? 0,05) (Σχήμα 5). Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι πάνω ρύθμιση miR-182 προάγει τον πολλαπλασιασμό των PC-3 κύτταρα.

Λευκά δώρα κενό έλεγχο. UV-ορατή απορρόφηση μετρήθηκε στα 490 nm. Η σχετική απορρόφηση ήταν σημαντικά διαφορετική 3 ημέρες μετά την επιμόλυνση (

P

& lt? 0,05). Οι τιμές αντιπροσωπεύουν μέσα από τρία ξεχωριστά πειράματα.

Η

Η υπερέκφραση του miR-182 Προωθεί την G1 /S του κυτταρικού κύκλου μετάβαση σε κύτταρα PC-3

Ερευνήσαμε περαιτέρω την επίδραση του miR-182 επί του πολλαπλασιασμού χρησιμοποιώντας κυτταρομετρία ροής. MiR-182 που υπερεκφράζουν PC-3 κύτταρα είχαν σημαντικά χαμηλότερο ποσοστό κυττάρων στην φάση Ο0 /Ο1 και αυξημένο ποσοστό των κυττάρων στη φάση S, σε σύγκριση με miR-182 μιμείται-NC- επιμολυσμένων κυττάρων. Αντίθετα, μετά από ρύθμιση προς τα κάτω του miR-182 από έναν inhiobitor, PC-3 κύτταρα είχαν σημαντικά υψηλότερο ποσοστό των κυττάρων στη φάση Ο0 /Ο1 και μειώθηκε το ποσοστό των κυττάρων στη φάση S, σε σύγκριση με miR-182 αναστολέα-NC- επιμολυσμένα κύτταρα (Σχήμα 6). Αυτά τα δεδομένα πρότειναν ότι η υπερέκφραση του miR-182 θα μπορούσε να προωθήσει τη μετάβαση κύκλου G1 /S κύτταρο, και ως εκ τούτου, μπορεί να ενισχύσει τον πολλαπλασιασμό των PC-3 κύτταρα.

Blank δώρα κενό ελέγχου. Οι τιμές αντιπροσωπεύουν μέσες τιμές από τρία ξεχωριστά πειράματα και οι ράβδοι σφάλματος αντιπροσωπεύουν την SD. (*

P

& lt? 0,05).

Η

Η υπερέκφραση του miR-182 Μειώνει πρώιμη απόπτωση των PC-3 κύτταρα

Για να διερευνηθεί η πιθανή ρυθμιστική συμμετοχή του miR -182, πρώιμη απόπτωση των PC-3 κύτταρα ανιχνεύθηκαν μετά την επιμόλυνση. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι η πρώιμη ποσοστό απόπτωσης του miR-182 κύτταρα που υπερεκφράζουν ήταν δραματικά μειωμένη, σε σύγκριση με miR-182 μιμείται-NC-επιμολυσμένα κύτταρα. Αντίθετα, μετά από ρύθμιση προς τα κάτω του miR-182 από inhiobitor, η πρώιμη ρυθμός απόπτωση των PC-3 κύτταρα ήταν δραματικά αυξημένη σε σύγκριση με miR-182 αναστολέα-NC-επιμολυσμένα κύτταρα (Σχήμα 7). Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι πάνω ρύθμιση miR-182 μειώνει την πρώιμη απόπτωση των PC-3 κύτταρα.

Λευκά δώρα κενό έλεγχο. Τα αποτελέσματα δείχνουν ότι το ποσοστό πρώιμη απόπτωση είναι χαμηλότερη σε miR-182 ομάδα μιμείται και το υψηλότερο στη miR-182 ομάδα αναστολέα (*

P

& lt? 0,05, **

P

& lt? 0,01) . Εκπρόσωπος εικόνες έδειξαν και στις αρχές κύτταρα απόπτωση φαίνεται στο Q4 (LR) περιοχή.

Η

Η υπερέκφραση του miR-182 Αυξάνει Εισβολή σε κύτταρα PC-3

Η υπερέκφραση του miR-182 σημαντικά αύξησε την επιθετική πιθανότητα του PC-3 κύτταρα επιμολυσμένα με όταν miR-182 μιμείται σύγκριση με τα κύτταρα ελέγχου σε προσδιορισμό Transwell με Matrigel, και κύτταρα επιμολυσμένα με τον αναστολέα miR-182 είχε ως αποτέλεσμα μια σημαντικά decresed επεμβατική δυναμικό (Σχήμα 8). Αυτά τα δεδομένα υποδεικνύουν ότι miR-182 αυξάνει εισβολή σε κύτταρα PC-3

in vitro

.

δοκιμασίες Invasion πραγματοποιήθηκαν με PC-3 κύτταρα επιμολυσμένα με miR-182 μιμείται ή αναστολείς. Λευκά παρουσιάζει κενό έλεγχο. Αντιπροσωπευτικές εικόνες και τυχαία επιλεγμένα πεδία εμφανίζονται (*

P

& lt? 0,05, **

P

& lt? 0,01).

Η

Αναγνώριση του miR-182 Βιβλιοδεσία τοποθεσίες σε NDRG1 3′-UTR Περιφέρεια

Μετά την πρόβλεψη με online miRNA Στόχοι εργαλεία, πολλές υποθετικές γονίδια είχαν προβλεφθεί. Επελέγησαν γονίδια που σχετίζονται με τον κυτταρικό πολλαπλασιασμό, απόπτωση, εισβολή και μετάσταση, συμπεριλαμβανομένων NDRG1. Επιπλέον, βρήκαμε ότι NDRG1 ήταν ένα γονίδιο μετάστασης supressor [21] – [25] ή ογκοκατασταλτικό γονίδιο [26], και NDRG1 ήταν αναγκαία για ρ53-εξαρτώμενη απόπτωση [27]. Η μελέτη μας έδειξε επίσης ότι NDRG1 ήταν κατιούσα ρύθμιση σε ιστούς προστάτη και PC-3 κύτταρα σε σύγκριση με τους ιστούς και τα κύτταρα ΒΡΗ RWPE-1 (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Τέλος, επελέγη NDRG1 για περαιτέρω μελέτη. Στη συνέχεια, βρήκαμε ότι η περιοχή NDRG1 3′-UTR έχει μόνο ένα εξαιρετικά διατηρημένες θέσεις σύνδεσης miR-182 (Σχήμα 9).

NDRG1 3′-UTR περιοχή έχει μόνο ένα εξαιρετικά διατηρημένες θέσεις σύνδεσης miR-182 μετά βιοπληροφορικής ανάλυσης.

η

miR-182 στοχεύει άμεσα την Μετάσταση supressor Gene NDRG1 σε κύτταρα PC-3

Δυτική Blotting αποτελέσματα έδειξαν ότι η υπερέκφραση του miR-182 σε κύτταρα PC-3 μειώθηκε σημαντικά η τα επίπεδα έκφρασης πρωτεΐνης του NDRG1 μετά από επιμόλυνση με miR-182 μιμείται, σε σύγκριση με miR-182 μιμείται -ΝΟ-επιμολυσμένα κύτταρα. Αντίθετα, μετά από ρύθμιση προς τα κάτω του miR-182 από έναν inhiobitor, τα επίπεδα έκφρασης πρωτεΐνης του NDRG1was αυξηθεί δραματικά σε σύγκριση με miR-182 αναστολέα-NC-επιμολυσμένα κύτταρα (Σχήμα 10), υποδεικνύοντας ότι NDRG1 είναι ένας δυνητικός γονίδιο στόχος miR-182.

Λευκά δώρα κενό έλεγχο. Η υπερέκφραση του miR-182 μείωσε σημαντικά τα επίπεδα έκφρασης της πρωτεΐνης του NDRG1 και αρνητική ρύθμιση του miR-182 αυξήθηκε δραματικά τα επίπεδα έκφρασης της πρωτεΐνης του NDRG1 (*

P

& lt? 0,05, **

P

& lt ? 0,01). Οι τιμές αντιπροσωπεύουν μέσα από τρία ξεχωριστά πειράματα και οι ράβδοι σφάλματος αντιπροσωπεύουν το SD

Η

Για να επιβεβαιώσετε τη λειτουργία της υποθετικής θέσης δέσμευσης miR-182 στην NDRG1 3′-UTR, συνθέσαμε το διπλό -. Έλικας ακολουθίας η οποία περιελάμβανε την θέση δέσμευσης miR-182 και κλωνοποιήθηκε στο πλασμίδιο αναφοράς λουσιφεράσης. Η δραστικότητα λουσιφεράσης της pmirGLO /NDRG1-UTR ανεστάλη δραματικά από την υπερέκφραση του miR-182 με συνεπιμόλυνση με miR-182 μιμείται και αυξήθηκε σημαντικά με ρύθμιση προς τα κάτω του miR-182 με συνδιαμόλυνση με αναστολείς miR-182 σε κύτταρα PC-3, σε σύγκριση με το πλασμίδια ελέγχου (Σχήμα 11), γεγονός που υποδηλώνει ότι το miR-182 στοχεύει ειδικά την NDRG1 3′-UTR.

η δραστηριότητα της λουσιφεράσης της pmirGLO /NDRG1-UTR δραματικά ανέστειλε το miR-182 ομάδα μιμείται και αύξησε σημαντικά το miR ομάδα -182 αναστολείς, σε σύγκριση με τις ομάδες ελέγχου (*

P

& lt? 0,05, **

P

& lt? 0,01).

Η

Συζήτηση

κατά τα τελευταία χρόνια, εκατοντάδες miRNAs έχουν δειχθεί ότι παίζουν σημαντικό ρόλο στη ρύθμιση της γονιδιακής έκφρασης μέσω αποικοδόμηση του mRNA ή καταστολής της μετάφρασης σε μια ποικιλία συστημάτων μοντέλου [28] – [29]. Τα στοιχεία δείχνουν ότι miRNAs μπορεί να λειτουργήσει ως μία νέα κατηγορία τόσο ογκογόνων και καταστολής όγκου γονίδια [30]. Σε αυτή τη μελέτη, έχουμε ετοιμάσει πρώτα δέκα δείγματα προστάτη και δέκα δείγματα ΚΥΠ, όμως, μόνο πέντε δείγματα προστάτη και τρία δείγματα ΚΥΠ συναντήθηκαν το πρότυπο ελέγχου της δοκιμής μικροσυστοιχιών. Μετά την ανάλυση μικροσυστοιχιών miRNA και σε πραγματικό χρόνο RT-PCR επιβεβαίωση, αποδείξαμε ότι το miR-182 απορυθμίζεται στα κινεζικά ιστούς του προστάτη, σε σχέση με τους ιστούς BPH. Το αποτέλεσμα αυξητική ρύθμιση του miR-182 ήταν σύμφωνο με την μελέτη των Schaefer Α et al [14]. Στη συνέχεια αποκάλυψε ότι η έκφραση miR-182 ήταν σημαντικά αυξημένη σε τέσσερα κοινά κυτταρικές σειρές προστάτη που δοκιμάστηκαν (PC-3, DU145, 22Rv1 και LNCaP), σε σύγκριση με φυσιολογικά επιθηλιακά προστάτη RWPE-1 κυττάρων, υποδεικνύοντας ότι miR-182 ρυθμίζεται αυξητικά σε PCa κύτταρο γραμμές και PC-3 έχει το υψηλότερο επίπεδο έκφρασης. Στη συνέχεια, PC-3 κύτταρα επιλέχθηκαν για περαιτέρω μελέτη. Στη συνέχεια θα αποδείξουμε ότι το miR-182 στοχεύει ειδικά την NDRG1 3′-UTR στα κύτταρα PC-3.

Προηγούμενες μελέτες αποκάλυψαν ότι NDRG1 ήταν ένα γονίδιο μετάστασης supressor ή ογκοκατασταλτικό γονίδιο του προστάτη [21], [24] , [25]. Η μελέτη μας έδειξε επίσης ότι NDRG1 ήταν κατιούσα ρύθμιση σε ιστούς προστάτη και PC-3 κύτταρα σε σύγκριση με τους ιστούς και τα κύτταρα ΒΡΗ RWPE-1 (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Περαιτέρω λειτουργική πείραμα έδειξε ότι προς τα κάτω ρύθμιση του NDRG1 θα μπορούσε να αυξήσει τον πολλαπλασιασμό και την εισβολή του PC-3 κύτταρα, και προς τα πάνω ρύθμιση του NDRG1 θα μπορούσε να μειώσει τον πολλαπλασιασμό και την εισβολή του PC-3 κύτταρα (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Μελέτες έδειξαν ότι η μοριακή ρύθμιση της NDRG1 invovles ΡΤΕΝ [21], [26], P21 [22], Wnt-β-κατενίνης [23], παράγοντα ενεργοποίησης μεταγραφής 3 [24], ATF3-NF κΒ συμπλόκου [25] και p53 [27]. Ωστόσο, δεν υπήρξε καμία αναφορά για NDRG1 ρυθμίζεται από microRNA στον προστάτη για την προώθηση της διάδοσης σαφώς και άμεσα ακόμα. Είναι η πρώτη για μας να αποκαλύψει τη νέα σχέση της ρύθμισης των NDRG1 και microRNA στη ΣΕΣΣ. Παρατηρήσαμε ότι miR-182 ήταν σημαντικά υπερεκφράζεται σε κυτταρικές σειρές προστάτη, σε σύγκριση με RWPE-1. Επιπλέον, έκτοπη υπερέκφραση του miR-182 προάγει σημαντικά τον πολλαπλασιασμό, αυξάνει την εισβολή, προωθεί την G1 /S μετάβαση του κυτταρικού κύκλου και μειώνει νωρίς απόπτωση των PC-3 κύτταρα, ενώ η καταστολή της miR-182 μείωσε τον πολλαπλασιασμό και την εισβολή, αναστέλλει την G1 /S μετάβαση του κυτταρικού κύκλου και την αύξηση νωρίς απόπτωση του PC-3 κύτταρα. Για να διερευνήσουν τον μηχανισμό του miR-182, εντοπίσαμε NDRG1 ως υποθετικό γονίδιο στόχο miR-182, χρησιμοποιώντας βιοπληροφορική ανάλυση, και επιβεβαίωσε ότι NDRG1 είναι ένας άμεσος στόχος του miR-182 με δοκιμασία γονιδίου αναφοράς διπλής λουσιφεράσης. Αυτά τα αποτελέσματα έδειξαν ότι miR-182 αυξάνει τον πολλαπλασιασμό και την εισβολή του PC-3 κύτταρα προστάτη με άμεση στόχευση του NDRG1 3′-UTR να ρυθμίζουν προς τα κάτω NDRG1.

Τα τελευταία χρόνια, NDRG1 έχει περιγραφεί ως ένας ενδεχόμενος ογκοκατασταλτικό γονίδιο σε διάφορους ανθρώπινους καρκίνους, και μπορεί να σχετίζεται με την επιθετικότητα του όγκου και τη μετάσταση [31] – [34]. Ωστόσο, η αποσιώπηση machanism της NDRG1 δεν είναι ακόμη σαφής. Ένας τρόπος με τον οποίο τα καρκινικά κύτταρα σίγαση της έκφρασης γονιδίου καταστολής όγκου είναι επιγενετικές μεταβολές, οι οποίες περιλαμβάνουν DNA υπερμεθυλίωση προαγωγού CpG νησίδων και /ή αλλαγές σε συνδεδεμένες τροποποιήσεις των ιστονών μετα-μεταφραστική οδηγεί σε μεταγραφική καταστολή [35]. Ο υποκινητής του NDRG1 περιέχει ένα μεγάλο νησί CpG, αυξάνοντας την πιθανότητα ότι θα μπορούσε να σιγήσει DNA υπερμεθυλίωση στον καρκίνο. Ως εκ τούτου, οι ερευνητές αρχίζουν να μελετούν την επιγενετική ρύθμιση της NDRG1 πρόσφατα. Angst et al [36] μελέτη έδειξε ότι η έκφραση NDRG1 μπορεί να ρυθμιστεί με τη φαρμακολογική αναστολή της μεθυλίωσης του DNA και απακετυλίωση ιστόνης σε παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα. Ωστόσο, δεν μεθυλίωση της CpG νησίδα του προαγωγού NDRG1 βρέθηκε σε παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα, υποδηλώνοντας μια έμμεση μηχανισμό για NDRG1 de-καταστολή από αυτές τις θεραπείες. Λι και Chen [37] μελέτη έδειξε ότι η αποσιώπηση των NDRG1 σε κυτταρικές σειρές καρκίνου του παχέος εντέρου SW620 και SW480 οφειλόταν σε τροποποιήσεις των ιστονών, εκτός από υπερμεθυλίωση προαγωγού. Ωστόσο, Chang et al [38] η μελέτη έδειξε ότι η μειωμένη έκφραση των NDRG1 mRNA και της πρωτεΐνης σε κυτταρικές γραμμές γαστρικού καρκίνου και ιστών οφειλόταν σε μεθυλίωση του γονιδίου NDRG1 υποκινητή. Αυτές οι μελέτες προτείνουν ότι η επιγενετική ρύθμιση της NDRG1 είναι διαφορετική σε διαφορετικούς τύπους καρκινικών κυττάρων. Σε αυτή τη μελέτη, δείξαμε ότι NDRG1 θα μπορούσε να απευθύνονται απ ‘ευθείας από το miR-182 και αποκάλυψε μια νέα επιγενετική ρύθμιση της NDRG1, γεγονός που υποδηλώνει ότι η ρύθμιση προς τα άνω του miR-182 μπορεί να παρέχει έναν εναλλακτικό μηχανισμό για τη μειωμένη έκφραση του καταστολέα πρωτεΐνης NDRG1 όγκου σε κύτταρα προστάτη .

η περαιτέρω έρευνα εξακολουθεί να απαιτείται να εξεταστεί κατά πόσον άλλα miRNAs ή μονοπάτια σηματοδότησης μπορεί να ρυθμίσει NDRG1 στο ΣΕΣ, επειδή δεν μπορούσε να αποκλείσει ότι μπορεί να υπάρχουν και άλλοι microRNAs, δεν έχει ακόμη βρεθεί, να διαδραματίσει σημαντικό ρόλο στη ρύθμιση NDRG1 σε προστάτη, και αν miR-182 μπορούν να στοχεύσουν τα άλλα μέλη της οικογένειας NDRG1. Για παράδειγμα, θα ήταν ενδιαφέρον να γνωρίζουμε αν οι άλλες οδοί που εμπλέκονται στην αντι-πολλαπλασιαστική επίδραση του NDRG1 και να διερευνήσουν ποιες άλλες συνιστώσες του κακοήθους φαινοτύπου καθορίζονται από NDRG1 και miRNAs στα κύτταρα του προστάτη, και τα θέματα αυτά είναι επί του παρόντος υπό περαιτέρω έρευνα σε μας εργαστήριο.

Συμπεράσματα

Εν ολίγοις, το βασικό εύρημα της παρούσας μελέτης είναι ότι το miR-182 μπορεί να αυξήσει τον πολλαπλασιασμό των κυτταρικών σειρών προστάτη με τη στόχευση NDRG1. Αυτά τα δεδομένα δείχνουν ότι το miR-182 διαδραματίζει σημαντικό ρόλο στη ρύθμιση του κυτταρικού πολλαπλασιασμού προστάτη και μπορεί να λειτουργήσει ως ένα ογκο-miRNA. MiR-182 μπορεί να κόβω ως νέο θεραπευτικό στόχο για τη θεραπεία της ΣΕΣΣ.

Υποστήριξη Πληροφορίες

Πίνακα S1.

διαφορικά εκφράζονται miRNAs μεταξύ του προστάτη και BPH ιστούς. Bold Mirs ρυθμίστηκαν προς τα κάτω Mirs σε ιστούς προστάτη

doi:. 10.1371 /journal.pone.0068982.s001

(DOC)