Αφηρημένο

RBP2 έχει βρεθεί να συμμετάσχουν ενεργά στην εξέλιξη του καρκίνου. Αναστέλλει την γήρανση των κυττάρων του καρκίνου, μεσολαβεί πολλαπλασιασμός καρκινικών κυττάρων και προάγει μετάσταση καρκίνου. Είναι επίσης σημαντικό να ανοχή του φαρμάκου. Ωστόσο, τα αποτελέσματα της RBP2 σε επιθηλιακά-μεσεγχυματικά μετάβαση είναι ακόμη άγνωστες. Σε αυτή τη μελέτη, αναλύσαμε τις επιδράσεις της RBP2 σε επιθηλιακά-μεσεγχυματικά μετάβαση σε μη μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι RBP2 κάτω ρυθμισμένη την έκφραση της Ε-καδερίνης με αναστολή της δραστικότητας προαγωγού της Ε-καδερίνης και επάνω ρυθμισμένη η έκφραση του Ν-καδερίνης και σαλιγκάρι μέσω της ενεργοποίησης της Akt σηματοδότησης, και η υπερέκφραση του RBP2 επάγεται epithelial- μεσεγχυματικά μετάβαση σε μη μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα κύτταρα κύτταρο. Η μελέτη μας έδειξε περαιτέρω thatRBP2 μπορεί να είναι ένας πιθανός στόχος για τη θεραπεία του καρκίνου του αντι-πνεύμονα

Παράθεση:. Wang S, Wang Υ, Wu Η, Χου L (2013) RBP2 Προκαλεί Τα επιθηλιακά-μεσεγχυματικά μετάβαση σε μη-μικροκυτταρικού καρκίνου Καρκίνος του πνεύμονα. PLoS ONE 8 (12): e84735. doi: 10.1371 /journal.pone.0084735

Συντάκτης: Vladimir V. Kalinichenko, Ιατρικό Κέντρο Νοσοκομείο Σινσινάτι των παιδιών, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 18 του Αυγούστου, 2013? Αποδεκτές: 19 Νοεμβρίου, 2013? Δημοσιεύθηκε: 20 του Δεκεμβρίου 2013

Copyright: © 2013 Wang et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε από το Ίδρυμα Φυσικών Επιστημών της επαρχίας Shandong [Z2005C02]. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

ο καρκίνος του πνεύμονα είναι η πιο συχνή αιτία θνησιμότητας από καρκίνο, και η νοσηρότητα της αυξάνεται παγκοσμίως [1]. Μη μικροκυτταρικός καρκίνος του πνεύμονα (NSCLC) αντιπροσωπεύει το 85% όλων των καρκίνων του πνεύμονα. Δυστυχώς, πολλοί ασθενείς αναπτύσσουν NSCLC μακρινή μετάσταση κατά το πρώιμο στάδιο της νόσου. Επιπλέον, η θνησιμότητα σε ασθενείς με ΜΜΚΠ είναι πιο συχνά προκαλούνται από μετάσταση και όχι πρωτογενείς όγκους τους. Ως εκ τούτου, η έγκαιρη ανίχνευση και την πρόληψη των μεταστάσεων είναι ένα βασικό βήμα για να σταματήσει η εξέλιξη της NSCLC [2].

ρετινοβλάστωμα δεσμευτική πρωτεΐνη-2 (RBP2) είχε αρχικά χαρακτηριστεί ως κρίσιμο πρωτεΐνη ρετινοβλαστώματος (pRB) που δεσμεύουν πρωτεΐνες [3]. Το 2007, RBP2 για πρώτη φορά βρέθηκε να είναι ένα διμεθυλάση ιστονών για τρι- και διμεθυλιωμένους λυσίνης 4 της ιστόνης Η3 στην (Η3-K4me2 και H3K4me3) [4,5]. Είναι ευρέως αποδεκτό ότι η ιστόνη μεθυλίωση είναι πολύ σημαντική για την έκφραση των διαφόρων γονιδίων και παίζει σημαντικό ρόλο στη πρόοδο του καρκίνου [6-8]. Παρεκκλίνουσα μεθυλίωση συμβάλλει στην υπερβολική πολλαπλασιασμό των κυττάρων και την καρκινογένεση, και το κράτος H3K4me0 συσχετίζεται ιδιαίτερα με κακή πρόγνωση σε ασθενείς με καρκίνο του μαστού [9]. Ως διμεθυλάση ιστονών, RBP2 συμμετέχει ενεργά στην εξέλιξη του καρκίνου. Ωστόσο, σε αντίθεση με άλλα ένζυμα ιστόνης τροποποιητικά, RBP2 μπορούν να δεσμεύουν άμεσα DNA στόχο. Έχει μια πλούσια σε ΑΤ περιοχή αλληλεπίδρασης (άγονες) που αναγνωρίζει ειδικά την αλληλουχία DNA CCGCCC [10]. Αυτή η ειδική αλληλουχία DNA είναι εμπλουτισμένη στις περιοχές υποκινητή των γονιδίων στόχων RBP2. Στον καρκίνο του στομάχου, του RBP2 συνδέεται με τις περιοχές υποκινητή του p16

ΙΝΚ4 &, p21

Cip1 και p27

kip1 γονίδια να αναστέλλει τις εκφράσεις τους και να μειώσουν την γήρανση των κυττάρων του καρκίνου [11]. Στον καρκίνο του πνεύμονα, RBP2 δεσμεύεται με την περιοχή προαγωγού του ρ27, η κυκλίνη D1 και ιντεγκρίνης β1 να μεσολαβήσουν πολλαπλασιασμό των καρκινικών κυττάρων και τη μετάσταση [12]. Σε αυτή τη μελέτη, αναλύσαμε τα αποτελέσματα της RBP2 σε επιθηλιακά-μεσεγχυματικά μετάβασης (EMT) σε NSCLC.

Υλικά και Μέθοδοι

Δήλωση Ηθικής

λήφθηκαν πληροφορίες και τα δείγματα των ασθενών με τη γραπτή συγκατάθεση. Κάθε ασθενής σε αυτή τη μελέτη έδωσαν γραπτή συγκατάθεση για τη δημοσίευση αυτών των στοιχείων υπόθεση. Η έρευνα είχε εγκριθεί από την επιτροπή δεοντολογίας της Qilu Νοσοκομείο.

Ασθενείς

Τα δείγματα καρκίνου του πνεύμονα (n = 61) και μακρινό φυσιολογικούς ιστούς των πνευμόνων (n = 47, 5 cm από το περιθώριο του καρκίνου του πνεύμονα) συλλέχθηκαν από ασθενείς με NSCLC σε Qilu νοσοκομείο από το 2007 έως το 2008. οι ιστοί αποθηκεύονται στους -80 ° C μέχρι τη χρήση. Όλα τα δείγματα ήταν από ασθενείς οι οποίοι δεν είχαν υποβληθεί σε προεγχειρητική ακτινοθεραπεία ή χημειοθεραπεία. Η παθολογική σταδιοποίηση από τους 61 ασθενείς διεξήχθη σύμφωνα με το σύστημα του όγκου-node-μετάσταση (TNM) στάσης [13].

Η ανοσοϊστοχημεία

Τα δείγματα ιστού ενσωματωμένα σε παραφίνη. Οι τομές αποπαραφινοποιήθηκαν σε ξυλόλιο και επανυδατώθηκαν σε μια κλίση αιθανόλης. Μετά ανακτήθηκαν τα αντιγόνα, τα τμήματα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με 3% Η

2O

2 για 10 λεπτά, ακολουθούμενη από 5% αλβουμίνη βόειου ορού (BSA) για 30 λεπτά. Στη συνέχεια, οι τομές επωάστηκαν με πρωτεύοντα αντισώματα εναντίον RBP2 (1: 250 αραίωση), Ε-καδερίνης (αραίωση 1: 200), Ν-cadherin (αραίωση 1: 200) ή σαλιγκάρι (αραίωση 1: 200) όλη τη νύκτα στους 4 ° C και δευτερογενή αντισώματα συζευγμένα σε HRP (Santa Cruz Biotechnologies, Santa Cruz, CA, USA) προστέθηκαν για 1 ώρα στους 37 ° C. Οπτικοποίηση της δέσμευσης αντισώματος διεξήχθη χρησιμοποιώντας χρώση DAB. Οι πυρήνες βάφτηκαν με αιματοξυλίνη. Τα ανοσοχρώσης αποτελέσματα εκτιμήθηκαν ανεξάρτητα από δύο παθολόγους. Το ποσοστό των θετικών καρκινικών κυττάρων εκτιμήθηκε σύμφωνα με τα ακόλουθα κριτήρια: 0 = καμία θετική καρκινικά κύτταρα, 1 = & lt? 10% θετικά καρκινικά κύτταρα, 2 = 10% -35% θετικών καρκινικών κυττάρων, 3 = 35% -75% θετικά καρκινικά κύτταρα και 4 = & gt? 75% θετικά καρκινικά κύτταρα. Η ένταση χρώσης εκτιμήθηκε σύμφωνα με τα ακόλουθα κριτήρια: 1 = καθόλου χρώση, 2 = ελαφρώς κίτρινο χρώση (ασθενής χρώση), 3 = η κίτρινη χρώση (ενδιάμεσο χρώση) και 4 = καφέ χρώσης (ισχυρή χρώση) [14]. Το τελικό σκορ ήταν ίσο με το σκορ περιοχή και το σκορ της έντασης [15]. Μια τελική βαφή σκοράρει ≥ 4 ορίστηκε ως η υπερέκφραση, και ένα τελικό σκορ χρώση & lt? 4 ορίστηκε ως nonoverexpression [15].

Cell Culture, παρεμβολή RNA και υπερέκφραση της γονιδιακής

Το ανθρώπινο καρκίνο του πνεύμονα κυτταρικών σειρών Α549 και SK-MES-1 και η ανθρώπινη βρογχική επιθηλιακή κυτταρική γραμμή Beas2B ελήφθησαν από την American Type Culture Collection (Manassas, VA, USA). Beas2B και Α549 κύτταρα αναπτύχθηκαν στους 37 ° C με 5% CO

2 σε RPMI-1640 (Sigma, Santa Clara, CA, USA) μέσα συμπληρωμένα με 10% εμβρυϊκό βόειο ορό (FBS) (Gibico, Carlsbad, CA, ΗΠΑ). Τα SK-MES-1 κύτταρα αναπτύχθηκαν σε ΜΕΜ (Gibico, Carlsbad, CA, USA) συμπληρωμένο με 10% FBS. Όταν αναλύσαμε τα αποτελέσματα της Akt σηματοδότησης για την έκφραση του Ν-καδερίνης και σαλιγκάρι, τα κύτταρα Α549 υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με 24 μΜ αναστολέα ΡΙ3Κ (LY294002) (Cell Signaling Technology, Danvers, ΜΑ, USA) για 24 ώρες. Για παρεμβολή RNA και γονίδιο υπερέκφραση, τα κύτταρα καλλιεργήθηκαν σε τρυβλία 6 φρεατίων (1.0 χ 10

5 κύτταρα /φρεάτιο) όλη τη νύκτα, που ακολουθείται από επιμόλυνση με 5 μΐ RBP2 siRNA (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) ή 2 μg του pcDNA3-ΗΑ-RBP2 πλασμίδιο (μία γενναιόδωρη προσφορά από WG Kaelin) χρησιμοποιώντας 5 μΙ Lipofectamine 2000 (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA)? τα κύτταρα στη συνέχεια καλλιεργήθηκαν για 48 ώρες. Οι ακόλουθες αλληλουχίες siRNA χρησιμοποιήθηκαν σε αυτή τη μελέτη: RBP2 siRNA1 5′-AAUAUCCAGGGCCUUCAUGUAGCCC-3 ‘? RBP2 siRNA2 5’-UUGUGUACUCGUCAAACUCUACUCC-3 ‘? RBP2 siRNA3 5’-UUAACAUGCCGGUUAUCCAGGCUCU-3 ‘? ελέγχου siRNA 5’-UUCUCCGAAGGUGUCACGUTT -3 ‘. Το siRNA RBP2 που θα μπορούσε να καταστρέφουν τον πλέον αποτελεσματικό RBP2 χρησιμοποιήθηκε στα ακόλουθα πειράματα.

RNA Εκχύλιση και ποσοτική πραγματικού χρόνου PCR

Ολικό RNA από τα δείγματα των ιστών και κυτταρικών σειρών απομονώθηκε χρησιμοποιώντας το ΤπζοΙ αντιδραστήριο (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA). cDNA συντέθηκε χρησιμοποιώντας τον πρώτο κλώνο cDNA Synthesis Kit (Thermo, San Jose, CA, USA). Για ανάλυση σε πραγματικό χρόνο PCR, τα cDNA ενισχύθηκαν χρησιμοποιώντας SYBR Πρόμιγμα Εχ Taq (Takara, Otsu, Shiga, Japan) και ανιχνεύθηκαν χρησιμοποιώντας ένα Applied Biosystems 7500 Real-Time PCR System. Σχετική έκφραση γονιδίου κανονικοποιήθηκε με την έκφραση β-ακτίνης και υπολογίστηκε χρησιμοποιώντας τον 2

(- △△ CT) μέθοδος [16]. Οι ακόλουθοι εκκινητές χρησιμοποιήθηκαν σε αυτό το πείραμα: β-ακτίνη προς τα εμπρός 5′-ATCGTGCGTGACATTAAGGAGAAG-3 ‘και αντίστροφος 5′-AGGAAGGAAGGCTGGAAGAGTG-3′? RBP2 εμπρός 5’-GCTTGGCAATGGG AACAAAA-3 ‘και αντίστροφος 5′-CCGTTGTCTCATTTGCATGTTAA-3’.

Western Blot

Σύνολο κυτταρικές πρωτεΐνες εκχυλίστηκαν χρησιμοποιώντας ανοσοκαθίζηση Δοκιμασία Radio ρυθμιστικό λύσης, και 50 μα συνολικών πρωτεϊνών χρησιμοποιήθηκε για την ανάλυση στυπώματος western. Οι μεμβράνες διφθοριούχου πολυβινυλιδενίου ανιχνεύθηκαν με αντισώματα έναντι β-ακτίνης (αραίωση 1: 1000), RBP2 (αραίωση 1: 1000), Ε-καδερίνης (αραίωση 1: 1000), Ν-cadherin (αραίωση 1: 1000), σαλιγκάρι (1 : 1000 αραίωση), ρ-Akt (αραίωση 1: 1000) ή Akt (αραίωση 1: 1000) (Cell Signaling Technology, Danvers, ΜΑ, USA), που ακολουθείται από επώαση με ένα υπεροξειδάση αρμορακίας αντι-κουνελιού (HRP) ανοσοσφαιρίνης G (IgG) (1: 2000 αραίωση). Τα στυπώματα στη συνέχεια αναπτύχθηκε με τη χρήση της ενισχυμένης χημειοφωταύγειας μέθοδο (Millipore, Billerica, ΜΑ, USA). Το σήμα β-ακτίνης χρησιμοποιήθηκε ως έλεγχος.

ανοσοφθορισμού

κύτταρα Α549 καλλιεργήθηκαν σε πλάκα 96 φρεατίων και επιμολύνθηκαν με RBP2 siRNA για 48 ώρες. Στη συνέχεια, τα κύτταρα μονιμοποιήθηκαν με 4% παραφορμαλδεΰδη, κατέστησαν διαπερατά με 0.2% Triton Χ-100, και επωάστηκαν με πρωτεύοντα αντισώματα εναντίον RBP2 (1: 250 αραίωση) ή Ε-καδερίνης (αραίωση 1: 200) για 1 ώρα στους 37 ° C . Τα κύτταρα στη συνέχεια επωάστηκαν με συζευγμένο με FITC δευτερογενή αντισώματα (Santa Cruz Biotechnologies, Santa Cruz, CA, USA) για 30 λεπτά στους 37 ° C. Οι εικόνες φθορισμού συλλήφθηκαν χρησιμοποιώντας ένα συνεστιακό μικροσκόπιο σάρωσης με λέιζερ

Transwell εισβολή Αναλύσεις

Transwell μεμβράνες (μέγεθος πόρων 8 μm, διάμετρος 6,5 χιλιοστά? Corning, Tewksbury, MA, USA). Ήταν προ- επικαλυμμένα με Matrigel (1 μg /ml, αραιώνεται με RPMI-1640 μέσο χωρίς ορό). Μετά παρεμβολή RNA ή θεραπεία υπερέκφραση του γονιδίου για 48 ώρες, 1.0 × 10

5 κύτταρα σε 200 μΙ RPMI-1640 χωρίς FBS απλώθηκαν στους άνω θαλάμους. Στη συνέχεια, 500 μΙ RPMI-1640 με 10% FBS προστέθηκε στον κάτω θάλαμο. Μετά από 12 ώρες, τα κύτταρα επί της άνω επιφάνειας των μεμβρανών Transwell απομακρύνθηκαν με ένα βαμβάκι. Τα κύτταρα που εισέβαλαν μέσω της μεμβράνης στην κατώτερη επιφάνεια σταθεροποιήθηκαν με μεθανόλη και χρωματίστηκαν με ηωσίνη. Τα κύτταρα μετρήθηκαν υπό μικροσκόπιο φωτός.

Επούλωση Δοκιμασίες

επούλωσης τραυμάτων δοκιμασίες διεξήχθησαν όπως αναφέρθηκε προηγουμένως [17]. Εν συντομία, τα κύτταρα επιμολύνθηκαν και καλλιεργήθηκαν για 48 ώρες και αναπτύχθηκαν σε μία συρρέουσα μονοστοιβάδα κυττάρων. Στη συνέχεια, ένας γραμμικός » τραύματος » συντάχθηκε στην κυτταρική μονοστιβάδα με ένα πλαστικό ρύγχος πιπέτας. Τα κύτταρα επωάστηκαν στους 37 ° C, και η πληγή είχε απεικονιστεί αμέσως και παρακολουθήθηκε μετά από 24 ώρες. Η απόσταση μεταξύ των δύο περιθωρίων του «πληγή» υπολογίστηκε.

λουσιφεράσης

Α549 κύτταρα μορφομετατράπηκαν με RBP2 siRNA την ημέρα 1 και με το Ε-καδερίνης πλασμίδιο αναφοράς προαγωγέα (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) την ημέρα 2. Για την παρακολούθηση της διαμόλυνσης αποδοτικότητα, ένα Renilla ελέγχου λουσιφεράσης ανταποκριτή πλασμίδιο ελέγχεται από τον υποκινητή της κινάσης της θυμιδίνης συνεπιμολύνθηκε εντός των κυττάρων. κύτταρα Beas2B συνεπιμολύνθηκαν με τον pcDNA3-ΗΑ-RBP2 πλασμιδίου και των δύο παραπάνω πλασμίδια αναφοράς. Μετά από 48 ώρες, ένα διπλό σύστημα προσδιορισμού ανταποκριτή λουσιφεράσης (Promega, Madison, WI, USA) χρησιμοποιήθηκε για τον προσδιορισμό της δραστηριότητας της λουσιφεράσης. Το πλασμίδιο αναφοράς Ε-καδερίνης είχε την ίδια αλληλουχία προαγωγού (-799 να -579), η οποία περιγράφηκε προηγουμένως [18].

Στατιστικές Αναλύσεις

Όλες οι στατιστικές αναλύσεις διεξήχθησαν χρησιμοποιώντας το SPSS17.0 λογισμικό. Το χ

2 τεστ που χρησιμοποιούνται για την ανάλυση της σχέσης μεταξύ των κλινικοπαθολογοανατομικών χαρακτηριστικά και την έκφραση RBP2. Διμεταβλητή συσχέτιση μεταξύ RBP2, E-cadherin, N-cadherin και σαλιγκάρι επίσης αναλύθηκαν από το 2 τεστ χ

. Άλλες στατιστικές αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν με τη χρήση ενός Student t test. Τα δεδομένα παρουσιάζονται ως μέσος όρος ± SD από 3 ανεξάρτητες δοκιμασίες. Μια στατιστικά σημαντική διαφορά θεωρήθηκε όταν

P

& lt? 0.05.

Αποτελέσματα

Σχέσεις μεταξύ RBP2 και των κλινικοπαθολογοανατομικών χαρακτηριστικά του NSCLC

Για τη μελέτη των ρόλων των RBP2 στον καρκίνο του πνεύμονα, που εντοπίστηκε για πρώτη φορά την έκφραση της RBP2 στους ιστούς NSCLC και τα αντίστοιχα φυσιολογικούς ιστούς χρησιμοποιώντας ανοσοϊστοχημεία (Σχήμα 1Α). Τα αποτελέσματα συνοψίζονται στον Πίνακα 1. Δείγματα που υπερεκφράζονται RBP2 αντιπροσώπευαν 52,46% των δειγμάτων καρκίνου, και τα περισσότερα από αυτά τα δείγματα παρουσίασαν ενδιάμεσα στην ισχυρή χρώση. Ωστόσο, τα δείγματα με RBP2 υπερέκφραση αντιπροσώπευαν μόνο 29,79% των παρακείμενων φυσιολογικών ιστών του πνεύμονα, και τα περισσότερα από αυτά τα δείγματα εμφάνισαν αδύναμος στο ενδιάμεσο χρώση. Η έκφραση του RBP2 ήταν σημαντικά υψηλότερη στα δείγματα NSCLC από ότι στους φυσιολογικούς ιστούς των πνευμόνων (Πίνακας 1). Τα επίπεδα RBP2 σε 10 ιστούς καρκίνου του πνεύμονα και των αντίστοιχων φυσιολογικών ιστών των πνευμόνων τους περαιτέρω ανιχνεύθηκαν χρησιμοποιώντας κηλίδα western και σε πραγματικό χρόνο PCR αναλύσεις. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι και οι δύο πρωτεΐνες RBP2 και mRNA αυξήθηκαν στους ιστούς καρκίνου του πνεύμονα (Σχήματα 1Β & amp? 1C).

A. Immunohistochemistrical ανάλυση RBP2, Ε-καδερίνης, Ν-καντερίνης και σαλιγκάρι (μεγέθυνση χ 200). RBP2, Ν-cadherin και σαλιγκάρι ήταν έντονα θετικά και στα δύο δείγματα αδενοκαρκίνωμα και πλακώδες καρκίνωμα, ενώ E-cadherin ήταν ασθενώς χρωματισμένο ή χωρίς χρώση. Η ανάλυση στυπώματος Western Β της πρωτεΐνης RBP2. Ν = φυσιολογικό πνευμονικό ιστό, ο = ιστός καρκίνου του πνεύμονα. Γ πραγματικό χρόνο ανάλυση PCR του RBP2 mRNA. Το επίπεδο της RBP2 mRNA ήταν υψηλότερη σε ιστούς καρκίνου του πνεύμονα από ό, τι στους φυσιολογικούς ιστούς των πνευμόνων (

P

= 0,0011). *

P

& lt? 0.05 και **

P

& lt? 0.01.

Η Μεταβλητό

n

υπερέκφραση * (n)

ποσοστό υπερέκφραση (%)

χ

2

P

Η Καρκίνο tissue613252 . .465.5810.018Adjacent tissue471429.79Table 1. Έκφραση της RBP2 στους ιστούς NSCLC και των παρακείμενων φυσιολογικών ιστών τους

*: σκοράρει μια τελική βαφή ≥ 4 ορίστηκε ως η υπερέκφραση, και ένα τελικό σκορ χρώση & lt? 4 ορίστηκε ως nonoverexpression. CSV Λήψη CSV

Στη συνέχεια, ανέλυσε τη σχέση μεταξύ RBP2 και «κλινικοπαθολογοανατομικές χαρακτηριστικά, συμπεριλαμβανομένων των ασθενών των ασθενών ηλικία, το φύλο, παθολογικές τύπου, τη διαφοροποίηση και την ταξινόμηση ΤΝΜ. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι δεν υπήρχε σαφής συσχέτιση ανάμεσα στην υπερέκφραση RBP2 και αυτά τα χαρακτηριστικά (Πίνακας 2).

Η RBP2 (υπερέκφραση *)

Η Μεταβλητό

No. των ασθενών

δεν

ναι

P

Η Age0.099≤50 years321220 & gt? 50 years291712Gender0.167Male331320Female281612Pathological type0.757Squamous371720Adeno241212Differentiation0.532Well1064Moderate261313Poor251015T classification0.415T1-2411823T3-420119N classification0.533N0291514N1321418Table 2 .. Συσχέτιση των μεταβλητών κλινικοπαθολογοανατομικών με πρωτεΐνη RBP2 σε ιστούς NSCLC

*: η τελική βαφή σκοράρει ≥ 4 ορίστηκε ως η υπερέκφραση, και ένα τελικό σκορ χρώση & lt? 4 ορίστηκε ως nonoverexpression. CSV Λήψη CSV

Επιδράσεις της RBP2 για NSCLC κυτταρική μετανάστευση

Για να διερευνήσουν το ρόλο της RBP2 στη μετάσταση του καρκίνου του πνεύμονα, ερευνήσαμε αν RBP2 ρυθμίζει την κυτταρική μετανάστευση. Κατ ‘αρχάς, ανιχνεύσαμε την αναστολή των RBP2 από τις τρεις siRNAs RBP2 σε κύτταρα Α549 για να επιλέξετε την πιο αποτελεσματική siRNA. Η ανάλυση στυπώματος Western έδειξε ότι το επίπεδο της πρωτεΐνης RBP2 ήταν υψηλή στα κύτταρα Α549 ελέγχου και μειώθηκαν μετά παρεμβολή RNA του RBP2. Είναι σημαντικό ότι η ομάδα RBP2 siRNA2 εμφάνισαν το χαμηλότερο έκφραση της πρωτεΐνης RBP2 (Εικόνα 2Α). Επιπλέον, η έκφραση του RBP2 στην ομάδα RBP2 siRNA2 ανιχνεύθηκε με ανάλυση ανοσοφθορισμού. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι RBP2 ήταν αρνητική στην ομάδα RBP2 siRNA2 αλλά θετική στην ομάδα ελέγχου (Σχήμα 2Β). Έτσι, επιλέξαμε RBP2 siRNA2 για την εξάντληση των RBP2 στα ακόλουθα πειράματα. Στη συνέχεια, οι κυτταρικές μεταναστευτικές συμπεριφορές των κυττάρων Α549 και κύτταρα Beas2B μελετήθηκαν χρησιμοποιώντας Transwell δοκιμασία εισβολής και περιελίσσεται δοκιμασία επούλωσης. Σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου, λιγότερα κύτταρα Α549 διέρχεται μέσω του matrigel μετά deleption του RBP2 ενώ πιο Beas2b κύτταρα πέρασαν όταν RBP2 ήταν ρυθμισμένα (Σχήματα 3Α & amp? 3Β). Με συνέπεια, υπήρχαν λιγότερα κύτταρα Α549 που μετανάστευσαν από την «πληγή» άκρη προς το κέντρο χώρο όταν RBP2 ήταν κάτω-ρύθμιση, αλλά ο αριθμός των μετανάστευσαν κυττάρων Beas2b αυξήθηκε σημαντικά μετά την υπερέκφραση της RBP2 (Εικόνες 3C & amp? 3D). Αυτά τα δεδομένα έδειξαν ότι RBP2 πιθανόν παίζει ένα ρόλο στην κυτταρική μετανάστευση.

A. Τα επίπεδα της πρωτεΐνης RBP2 στα κύτταρα Α549 χωριστά σε επεξεργασία με διαφορετικά siRNAs. Β ανοσοφθορισμού ανάλυση των RBP2 στα μη επεξεργασμένα κύτταρα Α549 και τα κύτταρα που έλαβαν θεραπεία με RBP2 siRNA2 (μεγέθυνση χ 200).

Η

Α. ανάλυση εισβολή Transwell (μεγέθυνση χ 200). B. Ο αριθμός των εισέβαλαν κυττάρων. Περισσότερα κύτταρα Beas2B εισέβαλε μετά από επιμόλυνση με το pcDNA3-ΗΑ-RBP2 πλασμίδιο (

P

= 0,0011), ενώ ο αριθμός των εισέβαλαν κυττάρων Α549 μειώθηκε σημαντικά όταν έλαβαν θεραπεία με RBP2 siRNA2 (

P

= 0.0005 ). *

P

& lt? 0.05, **

P

& lt? 0,01 και ***

P

& lt? 0.001. C. Ο αριθμός των μετανάστευσαν κυττάρων. Ο αριθμός των μετανάστευσαν κυττάρων Beas2B αυξήθηκε σημαντικά όταν επιμολυσμένα με pcDNA3-ΗΑ-RBP2 plasimid (

P

= 0,0010), ενώ λιγότερα κύτταρα Α549 μετανάστευσαν στο κέντρο χώρο όταν επιμολυσμένα με RBP2 siRNA2 (

P

= 0,0014). *

P

& lt? 0.05, **

P

& lt? 0,01 και ***

P

& lt? 0.001. Δ επούλωσης τραυμάτων δοκιμασίες (μεγέθυνση χ 100).

Η

Διμεταβλητά συσχετίσεις των RBP2 με E-cadherin, N

–

cadherin ή σαλιγκάρι στους ιστούς NSCLC

Για να διερευνήσουν το ρόλο των RBP2 στη μετάσταση του καρκίνου, εμείς μελέτησαν την επίδραση της RBP2 για EMT, όπως EMT συσχετίζεται στενά με τη μετάσταση καρκίνου [19]. Πρώτον, η Ε-καντερίνη, Ν-cadherin και σαλιγκάρι ανιχνεύτηκαν σε ιστούς καρκίνου του πνεύμονα και τους αντίστοιχους φυσιολογικούς ιστούς των πνευμόνων χρησιμοποιώντας ανοσοϊστοχημεία (Σχήμα 1Α). Το ποσοστό των δειγμάτων που υπερεκφράζονται Ε-καδερίνης μειώθηκε στους καρκινικούς ιστούς σε σύγκριση με φυσιολογικούς ιστούς παρακείμενα τους (κανονική vs καρκίνος, 80,85% έναντι 40,98%,

P

& lt? 0,01), αλλά το ποσοστό των δειγμάτων ότι υπερεκφράζεται Ν-καντερίνη ή σαλιγκάρι αυξήθηκε στους ιστούς του καρκίνου (κανονική vs καρκίνος, Ν-cadherin, 12,77% έναντι 72,13%,

P

& lt? 0,01? κανονική vs καρκίνου, σαλιγκάρι, 17.02% έναντι 68.85%,

P

& lt? 0,01). Στη συνέχεια, οι διμεταβλητή συσχετίσεις των RBP2 με κάθε μία από αυτές τις τρεις πρωτεΐνες αναλύθηκαν από το 2 τεστ χ

. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι η έκφραση του RBP2 σημαντικά αντιστρόφως ανάλογη με την έκφραση της Ε-καδερίνης (Πίνακας 3), αλλά δεν υπήρξε καμία σημαντική συσχέτιση μεταξύ RBP2 και Ν-καδερίνης ή σαλιγκάρι (Πίνακας 3).

Η RBP2 (υπερέκφραση *)

Η Μεταβλητό

No. του patients

no

yes

P

E-cadherin0.032overexpression*25169nonoverexpression*361323N-cadherin0.095overexpression*441826nonoverexpression*17116Snail0.276overexpression*421824nonoverexpression*19118Table . 3. Οι συσχετίσεις μεταξύ RBP2 και E-cadherin, N-cadherin και σαλιγκάρι σε ιστούς NSCLC

*: Η τελική βαφή σκοράρει ≥ 4 ορίστηκε ως η υπερέκφραση, και μια τελική βαφή βαθμολογίας & lt? 4 ορίστηκε ως nonoverexpression. CSV Λήψη CSV

Επιδράσεις της RBP2 για EMT σε κυτταρικές σειρές NSCLC

Για να επιβεβαιωθεί περαιτέρω τα αποτελέσματα της RBP2 για EMT, ανιχνεύσαμε την έκφραση της RBP2, E-cadherin, N-cadherin και σαλιγκάρι στο Beas2B κύτταρα, κύτταρα Α549 και SK-MES-1 κύτταρα χρησιμοποιώντας κηλίδα western και σε πραγματικό χρόνο PCR αναλύσεις. Η ανάλυση στυπώματος Western έδειξε ότι η έκφραση του RBP2, Ν-cadherin και σαλιγκάρι αυξήθηκε, ενώ η έκφραση Ε-καδερίνης μειώθηκε στα κύτταρα Beas2B επιμολυσμένα με το pcDNA3-ΗΑ-RBP2 πλασμίδιο (Σχήμα 4Α). Εν τω μεταξύ, τόσο το Α549 και SK-MES-1 κύτταρα εμφάνισαν χαμηλότερα επίπεδα RBP2, Ν-cadherin και πρωτεΐνες σαλιγκάρι και υψηλότερο επίπεδο πρωτεΐνης Ε-καδερίνης όταν επιμολύνονται με RBP2 siRNA2 (Σχήμα 4Α). Ομοίως, σε πραγματικό χρόνο ανάλυση PCR έδειξε περαιτέρω ότι η RBP2, Ν-cadherin και σαλιγκάρι mRNAs αυξηθεί και το επίπεδο της Ε-καδερίνης μειώθηκε mRNA στα κύτταρα Beas2B κατεργασία με το pcDNA3-ΗΑ-RBP2 πλασμίδιο (Σχήμα 4Β). Επιπλέον, χαμηλότερα επίπεδα RBP2, Ν-cadherin και mRNAs σαλιγκάρι και ένα υψηλότερο επίπεδο Ε-καδερίνης mRNA παρατηρήθηκαν τόσο στο Α549 και SK-MES-1 κύτταρα που υποβλήθηκαν σε αγωγή με RBP2 siRNA2 (Σχήμα 4C).

Ένα. Ανάλυση κηλίδας Western των RBP2, Ε-καδερίνης, Ν-cadherin και σαλιγκάρι έκφραση στα Beas2B, SK-MES-1 και τα κύτταρα Α549. Όταν τα κύτταρα Beas2B διαμολύνθηκαν με το pcDNA3-ΗΑ-RBP2 πλασμιδίου, τα επίπεδα του RBP2, πρωτεΐνες Ν-καδερίνης και σαλιγκάρι αυξηθεί, και το επίπεδο της πρωτεΐνης Ε-καδερίνης μειώθηκε. Όταν τα κύτταρα SK-MES-1 και Α549 επιμολύνονται με RBP2 siRNA2, τα επίπεδα του RBP2, Ν-cadherin και πρωτεΐνες σαλιγκάρι αυξήθηκαν, και το επίπεδο της πρωτεΐνης Ε-καδερίνης μειώθηκε. B. ανάλυση σε πραγματικό χρόνο των επιπέδων της Ε-καδερίνης, Ν-cadherin και σαλιγκάρι mRNAs στα κύτταρα Beas2B. Το επίπεδο Ε-καδερίνης mRNA ήταν υψηλότερη στα κύτταρα Beas2B κατεργασία με το pcDNA3-ΗΑ-RBP2 πλασμιδίου από ό, τι στα κύτταρα Beas2B ελέγχου (

P

= 0.0005), αλλά τα επίπεδα του Ν-καντερίνης και mRNAs σαλιγκάρι ήταν χαμηλότερες (Ν-cadherin,

P

= 0.0063? σαλιγκάρι,

P

= 0,0101). *

P

& lt? 0.05, **

P

& lt? 0,01 και ***

P

& lt? 0.001. Γ ανάλυση σε πραγματικό χρόνο των επιπέδων της Ε-καδερίνης, Ν-cadherin και σαλιγκάρι mRNAs στα κύτταρα Α549. Το επίπεδο Ε-καδερίνης mRNA ήταν χαμηλότερη στα κύτταρα Α549 σε επεξεργασία με RBP2 siRNA2 ό, τι στα κύτταρα Α549 ελέγχου (

P

= 0,0007), αλλά τα επίπεδα του Ν-καντερίνης και σαλιγκάρι mRNAs ήταν υψηλότερες (Ν- cadherin,

P

= 0,0037? σαλιγκάρι,

P

= 0,0014). *

P

& lt? 0.05, **

P

& lt? 0,01 και ***

P

& lt? 0.001.

Η

Επιδράσεις της RBP2 για τον υποκινητή E-cadherin

Επειδή Huang et al. επιβεβαίωσε ότι RBP2 θα μπορούσε να συνδεθεί άμεσα με την περιοχή υποκινητή (-799 έως -579) του Ε-καδερίνης [18] χρησιμοποιώντας δοκιμασία CHIP, εξετάσαμε τη δραστικότητα της ίδιας περιοχής προαγωγού Ε-καδερίνης χρησιμοποιώντας δοκιμασία λουσιφεράσης στο Α549 και Beas2B κύτταρα. Όταν τα κύτταρα Α549 επιμολύνονται με RBP2 siRNA2, δραστικότητα προαγωγού Ε-καδερίνης αυξήθηκε σημαντικά (Σχήμα 5Α), ενώ η δραστηριότητα προαγωγού Ε-καδερίνης μειώθηκε εντυπωσιακά μετά RBP2 υπερέκφραση σε κύτταρα Beas2B (Σχήμα 5Β).

Α. δράση προαγωγού Ε-cadherin Eelevated στα κύτταρα Α549 επιμολυσμένα με RBP2 siRNA2 (

P

= 0,0098). *

P

& lt? 0.05, **

P

& lt? 0.01. B. Η αναστολή της δράσης προαγωγέα στα κύτταρα Beas2B επιμολυσμένα με το pcDNA3-ΗΑ-RBP2 πλασμίδιο (

P

= 0,0075). *

P

& lt? 0.05, **

P

& lt? 0.01. C. Η έκφραση των πρωτεϊνών ρ-Akt και Akt στα κύτταρα Α549 σε επεξεργασία με RBP2 siRNA2. D. Τα επίπεδα του p-Akt, πρωτεΐνες Ν-καδερίνης και σαλιγκάρι στα κύτταρα Α549. Όταν τα κύτταρα Α549 υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με LY294002, η έκφραση αυτών των τριών πρωτεϊνών ήταν μειωμένη

Η

Επιδράσεις της RBP2 επί N

-.

Cadherin και σαλιγκάρι

Τόσο Ν- καδερίνης και σαλιγκάρι έχει αποδειχθεί ότι είναι το κατάντη της οδού ΡΙ3Κ /Akt [20,21]. Ως εκ τούτου, υποθέσαμε ότι RBP2 ρυθμίζεται Ν-καντερίνης και σαλιγκάρι μέσω της ενεργοποίησης του Akt σηματοδότησης, και εξετάσαμε τα επίπεδα του p-Akt και Akt στα κύτταρα Α549 χρησιμοποιώντας ανάλυση κηλίδος Western. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι το ρ-Akt πρωτεΐνη ήταν υψηλή στα κύτταρα Α549 και μειώθηκαν μετά την εξάντληση του RBP2 (Σχήμα 5C). Η έκφραση του ρ-Ακί συσχετίστηκε θετικά με την έκφραση του RBP2. Στη συνέχεια, για να επιβεβαιώσει τα αποτελέσματα της Akt σηματοδότησης για την έκφραση του Ν-καδερίνης και σαλιγκάρι, εμείς επεξεργασμένα κύτταρα Α549 με έναν αναστολέα της ΡΙ3Κ (LY294002) για 24 ώρες και εξετάστηκαν τα επίπεδα της Ν-καντερίνης και πρωτεΐνες σαλιγκάρι. LY294002 έχει δειχθεί ότι μπλοκάρει Akt φωσφορυλίωση και κινάσης δράση ΡΙ3Κ-εξαρτώμενη. Είναι ενδιαφέρον ότι, τα επίπεδα τόσο της Ν-καντερίνης και σαλιγκάρι μειώθηκαν (Σχήμα 5D). Ως εκ τούτου, η έκφραση της Ν-cadherin και σαλιγκάρι συσχετιζόταν θετικά με την έκφραση p-Akt.

Συζήτηση

RBP2, ένα πρόσφατα εντοπίστηκαν διμεθυλάση ιστονών, ανήκει στην οικογένεια JARID και διαθέτει ένα άγονες (Α /Τ περιοχή πλούσια αλληλεπίδραση). Συχνά καταλαμβάνει και ρυθμίζει τους υποκινητές των πολλαπλών γονιδίων που περιέχουν το H3K4me3 [5,22]. Το πιο σημαντικό, RBP2 πιστεύεται ότι συμμετέχουν σε πολλές κυτταρικές βιολογικές λειτουργίες, ειδικά στη βιολογία του όγκου. Η μελέτη μας αποκαλύπτει μια νέα εικόνα για την παθοφυσιολογία της EMT, και παρέχουν αποδείξεις ότι RBP2 προκαλεί EMT στον NSCLC.

RBP2 παίζει σημαντικό ρόλο στον καρκίνο του ανθρώπου. Για παράδειγμα, η υπερέκφραση του RBP2 αναστέλλει την γήρανση του γαστρικού καρκινικών κυττάρων [11]. Η εξάντληση των RBP2 παρεμποδίζει τον πολλαπλασιασμό αλλά προωθεί γήρανση και διαφοροποίηση σε ποντίκια που στερούνται MEN1 και Rb1 [23]. ανοχή Drug του καρκίνου του πνεύμονα κυττάρων απαιτεί RBP2 [24]. Νοκ ντάουν της RBP2 οδήγησε σε αυξημένα επίπεδα H3K4me3 στους υποστηρικτές της DAF και τα γονίδια HMOX1 στα κύτταρα Beas2B [25]. RBP2 up-ρυθμίζει την έκφραση της κυκλίνης D1, κυκλίνης Ε1 και ιντεγκρίνης β1 για να ενισχύσει τον κυτταρικό πολλαπλασιασμό, τη μετανάστευση και εισβολή [12]. Στην εργασία αυτή, εντοπίσαμε επίσης την έκφραση της RBP2 στους ιστούς NSCLC και ανέλυσε τις σχέσεις μεταξύ RBP2 και κάθε ένα από τα κλινικοπαθολογοανατομικών χαρακτηριστικά του NSCLC. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι RBP2 υπερεκφράστηκε σε ανθρώπινο NSCLC, αλλά δεν υπήρχε σημαντική σχέση μεταξύ της υπερέκφρασης του RBP2 και κάθε κλινικοπαθολογοανατομικές χαρακτηριστικό. Επιπλέον, τα αποτελέσματα της RBP2 για τη μετανάστευση των καρκινικών κυττάρων του πνεύμονα μελετήθηκαν, και βρήκαμε ότι θα μπορούσε να ενισχύσει RBP2 NSCLC κυτταρική μετανάστευση. Όλα αυτά τα δεδομένα υποδηλώνουν ότι η RBP2 είναι ένα ογκογονίδιο και να παρέχει καθοδήγηση για τη θεραπεία του καρκίνου.

EMT είναι ένα καίριο βήμα για την μετάσταση του καρκίνου. Κατά τη διάρκεια αυτής της διαδικασίας, τα καρκινικά κύτταρα που προέρχονται από επιθηλιακά κύτταρα χάνουν τα επιθηλιακά τους χαρακτηριστικά, όπως κυτταρική προσκόλληση, αλλά αποκτούν χαρακτηριστικά μεσεγχυματικά, όπως κινητικότητα κυττάρου, να ξεφύγουν από την πρωτογενή ιστό και εισβάλλουν στον περιβάλλοντα στρώμα [26-30]. Επιθηλιακά καντερίνη (Ε-καδερίνης), ένα μόριο κυτταρικής προσκόλλησης, είναι ένα βασικό μόριο του EMT. Παίζει ζωτικό ρόλο στη διατήρηση της επιθηλιακής φαινότυπο. Η απουσία Ε-καδερίνης οδηγεί σε απώλεια των επιθηλιακών μορφολογία [31]. Είναι ενδιαφέρον ότι η μειωμένη έκφραση της Ε-καδερίνης συχνά συνοδεύεται από αυξημένη έκφραση της νευρικής καντερίνης (Ν-καντερίνης) [32]. Ν-καντερίνης έχει δειχθεί ότι εξασθενούν την κυτταρική προσκόλληση και την προώθηση των καρκινικών κυττάρων του μαστού διεισδυτικότητα [32,33]. Σαλιγκάρι είναι ένα άλλο σημαντικό μόριο της EMT. Έχει επιβεβαιωθεί ότι η υπερέκφραση σαλιγκάρι ενισχύει εισβολή καρκίνου με την προώθηση της κυτταρικής κινητικότητας [34]. Σε αυτό το πείραμα, RBP2 δείχθηκε να ρυθμίζουν την έκφραση της Ε-καδερίνης και ρυθμίζουν προς τα κάτω την έκφραση της Ν-καντερίνης και σαλιγκάρι. Αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν ότι RBP2 είναι σε θέση να προκαλέσει EMT. Πρόσφατα, Teng et al. επιβεβαίωσε ότι RBP2 προωθείται η μετάσταση του καρκίνου, με την ενεργοποίηση β1 ιντεγκρίνης [12]. Εδώ, σας παρουσιάζουμε ένα νέο μηχανισμό που RBP2 μπορεί να διαδραματίσει ένα ρόλο στη μετάσταση του καρκίνου με την πρόκληση EMT.

E-cadherin έχει επίσης αποδειχθεί ότι είναι ένα βασικό μεσολαβητή της EMT, και διαταραχή της E-cadherin αποδεικνύεται να είναι μια αιτία της EMT. Για παράδειγμα, Cheng et al. και Masszi et al. Βρέθηκε ότι ο ΤΟΡ-β1 δεν ήταν σε θέση να επάγει EMT παρουσία επαφής κυττάρου-κυττάρου [35,36]. Masszi et al. ακόμη και κατέληξε στο συμπέρασμα ότι η απουσία Ε-καδερίνης μεσολάβηση επαφής κυττάρου-κυττάρου ήταν ανεκτικό για την επαγωγή της EMT. Συνεπής με Masszi et al., Zheng et al. ανέφεραν ότι ο ΤΟΡ-β1 δεν θα μπορούσε να προκαλέσει ΕΜΤ σε επιθηλιακά κύτταρα συρρέοντα σωληνοειδές, αλλά ότι η υπερέκφραση της Ε-καδερίνης σε ινοβλάστες που επάγεται μεσεγχυματικά-επιθηλιακά μετάβασης και ανέστειλαν EMT σε σωληνοειδή επιθηλιακά κύτταρα [37]. Αρκετοί παράγοντες μεταγραφής έχει αποδειχθεί για τον έλεγχο της ΕΜΤ καταστέλλοντας δράση προαγωγού Ε-καδερίνης και την καταστολή της έκφρασης Ε-καδερίνης [38,39]. Σε αυτή την εργασία, διερευνήσαμε αν RBP2 που προκαλείται EMT καταστέλλοντας δράση προαγωγού Ε-cadherin και την αναστολή της έκφρασης Ε-καδερίνης. Επειδή Huang et al. επιβεβαίωσε ότι RBP2 δεσμεύονται άμεσα με την περιοχή Ε-καδερίνης προαγωγό (-799 έως -579) [18], εξετάσαμε τη δραστικότητα της ίδιας περιοχής προαγωγού Ε-καδερίνης και διαπίστωσε ότι RBP2 πράγματι αποδυναμωθεί δράση προαγωγού Ε-cadherin. Αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν ότι RBP2 ρυθμίζει προς τα κάτω την έκφραση της Ε-καδερίνης με αναστολή της δραστικότητας προαγωγού της Ε-καδερίνης.

Ο μηχανισμός με τον οποίο RBP2 ρυθμίζει Ν-καντερίνης και σαλιγκάρι μελετήθηκε επίσης σε αυτό το χαρτί. Πολλά στοιχεία τα σημεία σε ένα κρίσιμο ρόλο της Akt σηματοδότησης για EMT. Για παράδειγμα, η ενεργοποίηση της Akt σηματοδότησης προωθεί TGFβ- και EGF-εξαρτώμενη ΕΜΤ [40,41]. Akt μπορεί επίσης να φωσφορυλιώνει ΙΚΚα να αυξήσει σαλιγκάρι έκφρασης [20]. Biflorin μπλοκάρει την ικανότητα εισβολής των κυττάρων δια τα κάτω ρύθμιση Ν-καδερίνης, πιθανότατα μέσω Akt σηματοδότηση [21]. Εδώ, οι παρατηρήσεις μας έδειξαν ότι RBP2 επάνω ρυθμισμένη η έκφραση του Ν-καδερίνης και σαλιγκάρι μέσω της ενεργοποίησης της Akt σηματοδότησης, και ο αναστολέας Akt θα μπορούσε να μπλοκάρει τις επιδράσεις της RBP2 στην έκφραση του Ν-καδερίνης και σαλιγκάρι.

Πρόσφατα, Teng et al. έκανε ανάλυση cDNA μικροσυστοιχιών στα κύτταρα NSCLC [12]. Και βρήκαν ότι 10 γονίδια που συμμετέχουν στη μετάσταση μεταβλήθηκαν σημαντικά μετά την εξάντληση των RBP2, συμπεριλαμβανομένων dihydropyrimidinase-σαν 3, ιντεγρίνης β1, διαλυμένη ουσία οικογένεια μεταφορέας 7 μέλος 11, διαλυμένη ουσία οικογένεια μεταφορέας 7 μέλος 5, δεσμογλεΐνη 2, σφιγγοσίνης-1-φωσφορικής λυάση 1 , κολλαγόνο τύπου 1 α1, 1α tropomyosin, τον κύκλο κυτταρικής διαίρεσης 42 και πρωτοκαδερίνη β10. Ωστόσο, αυτή η μελέτη δεν εξέτασε τις επιπτώσεις της RBP2 στο E-cadherin, N-cadherin και σαλιγκάρι που είναι σημαντικά μόρια που εμπλέκονται στη μετάσταση του καρκίνου. Η έρευνά μας εμπλουτίζει τους μηχανισμούς του RBP2 μεσολάβηση της μετάστασης του καρκίνου.

Εκτός αυτού, ΕΜΤ έχει αποδειχθεί ότι οδηγεί σε επίκτητη αντοχή σε gefitinib σε κύτταρα NSCLC [42]. Εν τω μεταξύ, RBP2 είναι απαραίτητη για gefitinib ανθεκτικότητα σε κύτταρα NSCLC [24]. Σύμφωνα με τα αποτελέσματά μας, μπορούμε να συμπεράνουμε ότι η RBP2 μεσολάβηση αντίσταση gefitinib σε κύτταρα NSCLC μπορεί να σχετίζεται στενά με την επίδραση της RBP2 για EMT.

Η φαρμακευτική θεραπεία είναι μια σημαντική θεραπεία για τον καρκίνο του πνεύμονα. Λαμβάνοντας υπόψη το τρέχον χαμηλό ποσοστό επιβίωσης, νέων θεραπευτικών στόχων χρειάζονται επειγόντως. Έχει αποδειχθεί ότι RBP2 υπερεκφράζεται στον καρκίνο του πνεύμονα, και η έκφρασή της σχετίζεται σε μεγάλο βαθμό με τον πολλαπλασιασμό των καρκινικών κυττάρων, εισβολή, τη μετανάστευση και την ανοχή του φαρμάκου. Τα πειράματά μας έδειξαν ότι RBP2 θα μπορούσε να προκαλέσει EMT στον NSCLC. Όλες αυτές οι μελέτες δείχνουν ότι RBP2 είναι ένας πιθανός στόχος για τη θεραπεία του καρκίνου του αντι-πνεύμονα.

Ευχαριστίες

Θα θέλαμε να ευχαριστήσουμε τον William G. Καείίη, Jr. (Ιατρικό Ινστιτούτο Howard Hughes, Dana -Farber Ινστιτούτο Καρκίνου και Νοσοκομείου Brigham and Women της, Harvard Medical School, USA) για τα πλασμίδια.