Αφηρημένο

Η τραβεκτεδίνη (Yondelis, ΕΤ-743) είναι ένα θαλάσσιο προερχόμενο τετραϋδροϊσοκινολίνης αλκαλοειδές. Είναι αρχικά προέρχεται από την Καραϊβική θαλάσσια χιτωνόζωο

Ecteinascidia turbinata

και σήμερα παράγεται συνθετικά. Τραβεκτεδίνη είναι δραστικό έναντι μιας ποικιλίας κυτταρικών γραμμών όγκου που αναπτύσσονται σε καλλιέργεια. Η παρούσα μελέτη επικεντρώθηκε στην επίδραση της τραβεκτεδίνης στον πολλαπλασιασμό κυττάρων, στην εξέλιξη του κυτταρικού κύκλου, απόπτωση και σχηματισμό σφαιροειδών σε καρκίνο προστάτη βλαστικά κύτταρα (ΚΕΠ). Συστάδας διαφοροποιήσεως (CD) 133

+ υψηλής /CD44

+ υψηλής ΚΕΠ προστάτη απομονώθηκαν από το DU145 και PC-3 ανθρώπινου προστάτη καρκινική κυτταρική γραμμή μέσω κυτταρομετρίας ροής. Μελετήσαμε τα ανάπτυξης ανασταλτικές επιδράσεις της τραβεκτεδίνης και μοριακών μηχανισμών του στην ανθρώπινη ΚΕΠ προστάτη και μη-ΚΕΠ. DU-145 και PC-3 ΚΕΠ υποβλήθηκαν σε αγωγή με 0.1, 1, 10 και 100 ηΜ τραβεκτεδίνης για 24, 48 και 72 ώρες και τα ποσοστά αναστολής της ανάπτυξης εξετάστηκαν χρησιμοποιώντας τον προσδιορισμό σχηματισμού σφαίρας. αναλύσεις προσδιορισμού και ανοσοφθορισμού Annexin-V πραγματοποιήθηκαν για την ανίχνευση του κυτταρικού θανάτου. Εξαρτώμενη από τη συγκέντρωση επιδράσεις της τραβεκτεδίνης επί του κυτταρικού κύκλου αξιολογήθηκαν επίσης. Τα κύτταρα εκτέθηκαν για τις διάφορες δόσεις της trabectedin για 24, 48 και 72 ώρες για να αξιολογηθεί η επίδραση της trabectedin στον αριθμό και τη διάμετρο του σφαιροειδή. Σύμφωνα με τα αποτελέσματα, η τραβεκτεδίνη επαγόμενη κυτταροτοξικότητα και απόπτωση στο IC

50 δόσεων, με αποτέλεσμα τη σημαντική αύξηση της έκφρασης της κασπάσης-3, κασπάσης-8, κασπάσης-9, p53 και να μειώσει την έκφραση του bcl-2 σε δοσοεξαρτώμενη τρόπος. Οι αναλύσεις κυτταρικού κύκλου αποκάλυψαν ότι η τραβεκτεδίνη επάγει δοσο-εξαρτώμενη G2 /M φάση διακοπή του κυτταρικού κύκλου, ιδιαίτερα σε αγωγές υψηλών δόσεων. Τρισδιάστατο μελέτες καλλιέργειας έδειξαν ότι η τραβεκτεδίνη μείωσε τον αριθμό και τη διάμετρο των σφαιροειδή DU145 και PC3 ΚΕΠ. Επιπλέον, έχουμε βρει ότι η τραβεκτεδίνη διαταραχθεί αλληλεπιδράσεις κυττάρου-κυττάρου μέσω Ε-καδερίνης σε prostasphere του DU-145 και PC-3 ΚΕΠ. Τα αποτελέσματά μας έδειξαν ότι η τραβεκτεδίνη αναστέλλει τον κυτταρικό πολλαπλασιασμό και επιταχύνει αποπτωτικά γεγονότα στο ΚΕΠ του προστάτη? και μπορεί να είναι ένας πιθανός αποτελεσματικός θεραπευτικός παράγοντας κατά του καρκίνου του προστάτη

Παράθεση:. Acikgoz E, Guven U, Duzagac F, Uslu R, Kara M, Soner π.Χ., et al. (2015) Ενισχυμένη G2 /M σύλληψης, κασπάσης σχετίζονται με την απόπτωση και μειωμένη Ε-καδχερίνη Εξαρτάται ενδοκυτταρικής συγκολλήσεως από Τραβεκτεδίνη στον καρκίνο του προστάτη βλαστικά κύτταρα. PLoS ONE 10 (10): e0141090. doi: 10.1371 /journal.pone.0141090

Επιμέλεια: Shian-Ying Σουνγκ, Ταϊπέι Ιατρικό Πανεπιστήμιο, Ταϊβάν

Ελήφθη: 23 Ιουλίου, 2015? Αποδεκτές: 3η Οκτωβρίου, 2015? Δημοσιεύθηκε: 20 Οκτωβρίου, 2015

Copyright: © 2015 Acikgoz et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα: Όλα τα σχετικά δεδομένα είναι εντός του χαρτιού

χρηματοδότηση:.. Οι συγγραφείς δεν έχουν καμία υποστήριξη ή χρηματοδότηση για να αναφέρετε

Αντικρουόμενα συμφέροντα:. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Ο καρκίνος βλαστοκύτταρα (ΚΕΠ) υπόθεση δηλώνει ότι οι όγκοι περιέχουν μόνο ένα μικρό υποπληθυσμό κυττάρων με ένα δυναμικό αυτο-ανανέωσης και της διαφοροποίησης. ΚΕΠ πιστεύεται ότι είναι υπεύθυνος για την έναρξη και διατήρηση της ανάπτυξης του όγκου και η επιβίωση των κυττάρων μετά από χημειοθεραπεία καρκινικών λόγω της αντίστασης τους σε συμβατικές αντικαρκινικών θεραπειών [1]. Κατά τη διάρκεια της ανάπτυξης όγκων σε πρώιμο στάδιο, ΚΕΠ μπορούν να υποβληθούν σε μια συμμετρική αυτο-ανανέωση των κυττάρων διαίρεση σε δύο ταυτόσημες κόρη ΚΕΠ, αλλά και να δημιουργήσει μεγαλύτερο μέρος του πληθυσμού της μη-ΚΕΠ από ασύμμετρη κυτταρική διαίρεση [2]. Η πλειονότητα των κυττάρων σε χύδην όγκων έχουν περιορισμένη ογκογόνο και μεταστατικό δυναμικό σε σύγκριση με ΚΕΠ. Για μια πιο αποτελεσματική θεραπεία του καρκίνου, μπορεί να είναι απαραίτητο να στοχεύσουν τις δύο ΚΕΠ και των πληθυσμών μη-CSC.

έχουν ΚΕΠ προηγουμένως απομονωθεί χρησιμοποιώντας CSC-ειδικούς δείκτες κυτταρικής επιφάνειας όπως CD44, CD133, CD24, α2β1 ιντεγκρίνης και dehydrogenase1 αλδεΰδη. CD133 και CD44 είναι η πιο συχνά χρησιμοποιούμενη κυτταρική

–

επιφανειακούς δείκτες για τον προσδιορισμό των ΚΕΠ. CD133 είναι μέλος της pentaspan διαμεμβρανικές γλυκοπρωτεΐνες. Περιγράφηκε για πρώτη φορά σε αιμοποιητικά και νευρικών βλαστικών /προγονικών κυττάρων και είναι επίσης ένας δείκτης για CSCs σε πολλούς συμπαγείς όγκους [3, 4]. CD44 είναι ένα πανταχού παρόν πολυ-δομικές και πολυ-λειτουργικό γλυκοπρωτεΐνη κυτταρικής επιφάνειας. Συμμετέχει στην κυτταρική προσκόλληση, η μετανάστευση και η μετάσταση μίας ποικιλίας καρκινικών κυττάρων και ρύθμιση βλαστική ικανότητα των ΚΕΠ [5]. Έχει ήδη δείξει ότι CD44

+ /α2β1

υψηλή /CD133

+ φαινότυπο αντιπροσωπεύουν τις ογκογόνων κυττάρων υποψήφιος καρκίνο του προστάτη [6]. Ως εκ τούτου, CD133

+ /CD44

+ κύτταρα θα μπορούσαν να είναι πιθανοί στόχοι αντικαρκινικών θεραπειών στο μέλλον.

Η συμβατική μονοστρωματική δύο διαστάσεων (2D) μελέτες κυτταρικής καλλιέργειας είχαν επιτυχία στην εξήγηση της συμπεριφοράς των ΚΕΠ. Από την άλλη πλευρά, in vitro μιμείται τρισδιάστατη (3D) μοντέλο καρκίνου τα χαρακτηριστικά της in vivo περιβάλλον και ως εκ τούτου παρέχει μια καλύτερη ευκαιρία να κατανοήσουν κρίσιμο μηχανισμούς του καρκίνου των βλαστικών κυττάρων και για την ανάπτυξη νέων κλινικών θεραπευτικών εφαρμογών [7]. In vitro, ΚΕΠ τείνουν να αυθόρμητα για να σχηματίσουν τρισδιάστατα κυτταρικά συσσωματώματα, που ονομάζεται σφαιροειδή τα οποία αντιπροσωπεύουν τις ιδιότητες διαφοροποίηση των ΚΕΠ και χρησιμοποιούνται για τη συμβολή στην παραγωγή του όγκου, της εξέλιξης και της αντίστασης σε χημειοθεραπεία σε αρκετές μελέτες. Έχει αποδειχθεί ότι το E-cadherin είναι το κύριο μόριο προσκόλλησης που μεσολαβούν αλληλεπίδραση σφιχτό κυττάρου-κυττάρου και έχει συσχετιστεί με μια συμπαγή σχηματισμό σφαιροειδές σε κυτταρικές σειρές καρκίνου του προστάτη [8, 9].

Τραβεκτεδίνη είναι μια θαλάσσια τετραϋδροϊσοκινολίνη αλκαλοειδές. Η τραβεκτεδίνη έχει απομονωθεί από την Καραϊβική θαλάσσια χιτωνόζωο

Ecteinascidia turbinata

και σήμερα παράγεται συνθετικά [10]. Τραβεκτεδίνη έχει ισχυρή κυτταροτοξική δραστικότητα έναντι ποικιλίας τύπων όγκων σε αρκετούς στερεούς όγκους

in vitro

και

in vivo

. Είναι που υποβάλλονται σε φάση Ι και ΙΙ κλινικές δοκιμές στην Ευρώπη και στις Ηνωμένες Πολιτείες με υπόσχονται μια αντικαρκινικό φάρμακο για τη θεραπεία μιας σειράς όγκων [11]. Παρ ‘όλα αυτά αντικαρκινική δράση και ο μηχανισμός δράσης παραμένει ασαφής. Έχει αποδειχθεί ότι η τραβεκτεδίνη δεσμεύεται με την θέση του Ν2 γουανίνες στην μικρή αύλακα του DNA, κάμπτοντας DNA προς μεγάλη αύλακα και παρεμβαίνει με διάφορους παράγοντες μεταγραφής και οδούς επιδιόρθωσης του DNA [11]. Είναι επίσης γνωστό ότι η τραβεκτεδίνη προκαλεί βλάβη στο DNA. Αυτό αλλάζει την κανονική λειτουργία των διεργασιών επιδιόρθωσης DNA και η μεταγραφή, που προκύπτει με μια σύλληψη του πολλαπλασιασμού, της διαφοροποίησης και κυτταρικού θανάτου. [11, 12, 13]. Η αντι-πολλαπλασιαστική δραστικότητα της τραβεκτεδίνης είναι δοσοεξαρτώμενη: σε χαμηλές συγκεντρώσεις (1-10 ng /ml), η τραβεκτεδίνη παράγει διαταραχές του κυτταρικού κύκλου με μειωμένο ρυθμό εξέλιξης και η συσσώρευση των κυττάρων στη φάση G2 S-φάσης. Σε υψηλότερες συγκεντρώσεις (10-100 ng /ml), διαδικασία μεταγραφής ανεξάρτητη οδηγεί σε απόπτωση μέσω ενεργοποίησης διαφόρων οδών μεταγωγής σήματος που περιλαμβάνει απελευθέρωση μιτοχονδριακού κυτοχρώματος c, JNK και caspase- 3 ενεργοποίησης [14]. Τα κυτταροστατικά και προ-αποπτωτική δραστηριότητες τραβεκτεδίνης προκύπτουν από την ενεργοποίηση της εγγενούς και /ή εξωγενή αποπτωτικών διαδρομών. Η ενδογενής οδός χαρακτηρίζεται από μιτοχονδριακές διαπερατοποίηση εξωτερικής μεμβράνης και απελευθέρωση του κυτοχρώματος-c στο κυτταρόπλασμα? μια διαδικασία ρυθμίζεται από την Bcl-2 οικογένεια πρωτεϊνών. Προηγούμενη εργασία υποδεικνύει ότι η τραβεκτεδίνη πυροδοτεί το κυτόχρωμα c απελευθέρωση από μιτοχόνδρια που κανονικά αναστέλλεται από Bcl-2 υπερέκφραση [14].

Πρόσφατα, οι αναδυόμενες ενδείξεις έχουν δείξει ότι τα ΚΕΠ παίζουν κρίσιμο ρόλο στην ανάπτυξη της ανθεκτικότητας στα φάρμακα, μετάσταση και επανάληψη. Έτσι, είναι σημαντικό να διερευνηθεί και να βρουν νέα φάρμακα τα οποία επιλεκτικά και αποτελεσματικά θα στοχεύσουν και να σκοτώσουν ΚΕΠ. Η παρούσα μελέτη στοχεύει να διερευνήσει τις επιδράσεις της τραβεκτεδίνης στην CD133

+ υψηλής /CD44

+ υψηλής ΚΕΠ του προστάτη στο σύστημα καλλιέργειας 2D και 3D.

Υλικά και Μέθοδοι

καλλιέργειας κυττάρων συνθήκες και τα αντιδραστήρια

Ανθρώπινα ορμόνες καρκίνου του προστάτη και κυτταρικές σειρές ανθεκτικών στα φάρμακα, PC-3 και DU145 είχαν purchsed από την American Type Culture Collection (Manasas, VA, USA) και αναπτύχθηκαν σε RPMI 1640 (

Lonza

,

Basel

,

Ελβετία

μέσο καλλιέργειας) που περιέχει 10% θερμο-απενεργοποιημένο βόειο εμβρυϊκό ορό (Gibco, Invitrogen Life Technologies, Paisley, UK), 1% πενικιλλίνη και στρεπτομυκίνη ( Sigma-Aldrich, St Louis, MO, USA). Τα κύτταρα καλλιεργήθηκαν σε 25 cm

2 φιάλες πολυστυρενίου (Corning Life Sciences, UK) και διατηρήθηκαν μέσα σε έναν επωαστήρα στους 37 ° C σε υγροποιημένη ατμόσφαιρα στην παρούσα από 5% CO

2. Η ανάπτυξη και η μορφολογία ελέγχθηκαν μικροσκοπικά καθημερινά για να διασφαλίσει την υγεία των κυττάρων. Τα κύτταρα χωρίστηκαν διόδου όταν είχαν φτάσει περίπου σε συρροή 80%. Κύτταρα σε ημισυρρεόντων φιάλες συλλέχθηκαν χρησιμοποιώντας 0.05% θρυψίνη (Sigma-Aldrich) και φυγοκεντρήθηκε (Nuve NF200? Laboratory και Αποστείρωση Τεχνολογίας, Άγκυρα, Τουρκία) μετά την προσθήκη RPMI 1640 για την αδρανοποίηση της θρυψίνης. Μετά τη φυγοκέντρηση επαναιωρήθηκαν σε μέσο καλλιέργειας. Τραβεκτεδίνη παρεσχέθη από PharmaMar (Μαδρίτη, Ισπανία) και παρασκευάστηκε ως πυκνό διάλυμα 2 mM σε διμεθυλοσουλφοξείδιο (DMSO). Η συγκέντρωση DMSO στην δοκιμασία δεν υπερέβη το 0,1% και δεν ήταν κυτταροτοξική για τα κύτταρα του όγκου. Τα αντισώματα που χρησιμοποιήθηκαν ήταν αντι-κασπάση-3 (1: 100 αραιωμένο? 3510-100, BioVision, Inc., Milpitas, CA, USA), αντι-κασπάση-8 (1: 100 αραιωμένο? 250,576, Abbiotec, USA), αντι- κασπάση-9 (1: 100 αραιωμένο? SantaCruz Biotechnology, USA, sc-17784), αντι-ρ53 (1: 100 αραιωμένο? 3036R-100, BioVision, Inc.), αντι-BCL2 (1: 100 αραιωμένο? SantaCruz Biotechnology, ΗΠΑ, sc-135757), αντι-Ε-cadherin (1: 100 αραιωμένο? Bios, ΗΠΑ, BS-1519R), γίδινο αντι-κουνελιού ανοσοσφαιρίνη G-(FITC) (1: 100 αραιωμένο? sc-2012, Σάντα Cruz Biotechnology, Inc., Santa Cruz, CA, USA) και ανοσοσφαιρίνη κοτόπουλο αντι-κουνελιού Alexa fluor

® 594 (1: 100 αραιωμένο? Invitrogen, USA, A21442)

ενεργοποιούμενη με φθορισμό διαλογή κυττάρων. (FACS)

πριν από τη συγκομιδή, οι κυτταρικές γραμμές αναπτύχθηκαν μέχρι μιας συρροής 80%. Για FACS (FACSAria? BD Biosciences, San Jose, CA, USA), τα κύτταρα αποκολλήθηκαν χρησιμοποιώντας μη-ενζυμικό διάλυμα διαστάσεως κυττάρων (Sigma-Aldrich) και επαναιωρήθηκαν σε ρυθμισμένο με φωσφορικό αλατούχο Dulbecco (DPBS, Invitrogen, USA). Περίπου 5×10

4 κύτταρα επωάστηκαν με ένα αντίσωμα (αραιωμένο 1: 100 σε FACS πλύνετε με 0,5% αλβουμίνη βόειου ορού? 2 mM NaN3 και 5 mM EDTA) για 15 λεπτά στους 4 ° C. Ένα ισότυπο και τη συγκέντρωση ταιριαστό φυκοερυθρίνη (ΡΕ) -σημασμένου αντίσωμα ελέγχου (Miltenyi Biotec Ltd., Woking, Surrey, UK) χρησιμοποιήθηκε και τα δείγματα σημάνθηκαν με ΡΕ-επισημασμένο CD133 /1 (κλώνος AC133 /1? Miltenyi Biotec Ltd. ) και FITC-επισημασμένα CD44 (κλώνος G44-26? BD Biosciences). Μετά από 3-5 λεπτά, τα κύτταρα πλύθηκαν και ακολούθως επαναιωρήθηκαν. Τα κύτταρα ταξινομήθηκαν για να είναι CD 133

υψηλή /CD44

υψηλή πληθυσμιακή (διαλογή κυττάρων) και μη διαλογής ομολόγους χρησιμοποιώντας ένα FACSAria κυτταρόμετρο ροής, με την ανάλυση μετα-ταξινόμησης για να επιβεβαιώσει την καθαρότητα του πληθυσμού. Ταξινόμηση κυτταρικών πληθυσμών καλλιεργήθηκαν σε δύο διαφορετικές ρυθμίσεις, μονοστρωματική καλλιέργεια 2D ή 3D πολυκύτταρους σφαιροειδές όγκου.

Η βιωσιμότητα των κυττάρων αναλύσεις

Η βιωσιμότητα των κυττάρων μετά από θεραπεία προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας την Muse ™ Count και κιτ Βιωσιμότητας (Αναλυτής κυττάρων μούσα ™? Millipore, Billerica, ΜΑ, USA) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Εν συντομία, τα κύτταρα σπάρθηκαν σε τριπλούν σε πλάκες των 6 φρεατίων σε πυκνότητα 1 × 10

4cells /φρεάτιο. Μετά από 24 ώρες επώαση, τα κύτταρα εκτέθηκαν σε αυξανόμενες συγκεντρώσεις τραβεκτεδίνης (0.1, 1, 10, 100 ηΜ). Στη συνέχεια, οι πλάκες επωάστηκαν στους 37

° C σε ένα 5% CO

2 εκκολαπτήριο για 24, 48, και 72 ώρες. Μετά την επώαση, όλα τα κύτταρα συλλέχθηκαν και αραιώνονται με φυσιολογικό ορό ρυθμισμένο με φωσφορικό (PBS). 50 μΙ κυτταρικού εναιωρήματος προστέθηκε κατόπιν σε 450 μΐ MUSE Count και αντιδραστήριο Βιωσιμότητας (10χ αραίωση), επωάστηκαν για 5 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου, και αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας το MUSE Κυττάρων Analyzer. Τα δεδομένα παρουσιάστηκαν ως αναλογική βιωσιμότητα (%) με σύγκριση της ομάδας υπό θεραπεία τραβεκτεδίνης με τα μη επεξεργασμένα κύτταρα, η βιωσιμότητα των οποίων υποτίθεται ότι είναι 100%.

Ο κυτταρικός θάνατος αναλύσεις

Η αποπτωτική διανομή κύτταρο προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας το MUSE αννεξίνη V BD Diagnostic Systems, Detroit ΜΙ, USA) σε RPMI 1640 που περιείχε 10% FBS και επωάζονται στους 37 ° C σε υγροποιημένη ατμόσφαιρα 5% CO

2. Τα μέσα κυτταρικής καλλιέργειας αντικαταστάθηκε κάθε 2-3 ημέρες με φρέσκο ​​μέσο για την απομάκρυνση κυτταρικών υπολειμμάτων και των σφαιροειδών που δεν ήταν καλοσχηματισμένα. Μετά την έναρξη του σχηματισμού πολυκύτταρων σφαιροειδών όγκου, τραβεκτεδίνη προστέθηκε σε διάφορες συγκεντρώσεις τραβεκτεδίνης (0.1, 1, 10, 100 ηΜ) και επωάζονται επί 24, 48 και 72 ώρες. Ο αριθμός και η διάμετρος των αποικιών μέσα σε κάθε φρεάτιο φωτογραφήθηκε και υπολογίζονται κάθε μέρα κάτω από το μικροσκόπιο (Olympus ΒΧ-51? Ολύμπου, Αμβούργο, Γερμανία) και οι εικόνες των αντιπροσωπευτικών πεδία συνελήφθησαν. Κάθε δείγμα αναλύθηκε εις τριπλούν και όλες οι πειράματα εκτελέστηκαν τρεις φορές.

ανοσοφθορισμού χρώση

Μετά τη θεραπεία με IC

50 δόσης τραβεκτεδίνης, τα κύτταρα τοποθετήθηκαν σε καλυπτρίδες επικαλυμμένες λυσίνη, σταθερό σε 4% παραφορμαλδεΰδη για 15 λεπτά. Στη συνέχεια, τα κύτταρα κατέστησαν διαπερατά με 0.1% Triton Χ-100 για 10 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου, πλύθηκαν τρεις φορές με PBS, αποκλείστηκαν με PBS που περιέχει 5% αλβουμίνη βόειου ορού για 1 ώρα και επωάστηκαν με πρωτεύοντα αντισώματα εναντίον της κασπάσης-3, caspase- 8, κασπάσης-9 p53, bcl-2 και ε-καδερίνης για όλη τη νύχτα στους 4 ° C. Στη συνέχεια, τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με το δευτερογενές αντίσωμα για 1 ώρα σε θερμοκρασία δωματίου σε ένα υγροποιημένο θάλαμο. Τα ανοσοχρωματίστηκε κύτταρα τοποθετούνται σε μέσο που περιέχει DAPI στερέωσης και έγιναν ορατά με μικροσκόπιο φθορισμού εξοπλισμένο με κάμερα (Olympus ΒΧ-51 και η ψηφιακή δοκιμών της Olympus C-5050).

Η στατιστική ανάλυση

τα πειράματα διεξήχθησαν εις τριπλούν. Η στατιστική ανάλυση πραγματοποιήθηκε με τη χρήση μονόδρομης ανάλυσης της διακύμανσης, ακολουθούμενη από την δοκιμή Tukey post hoc ή Dunett του. p & lt? 0,05 θεωρήθηκε για να δείξει μια στατιστικά σημαντική διαφορά

Αποτελέσματα

Αγνότητα και τα ποσοστά ταξινόμησης των CD 133

υψηλή /CD44

υψηλή ταξινομημένο και μη ταξινομημένο υποπληθυσμό

DU145 και PC-3 καρκινικά κύτταρα ανθρώπινου προστάτη ταξινομηθεί για έκφραση CD133 και CD44 επιφάνεια με FACS (Σχήμα 1Α και 1Β). Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι τα ποσοστά των DU-145 ΚΕΠ και μη-ΚΕΠ ήταν 3.2 ± 5.4% (Σχήμα 1Α) και 96,8 ± 5,4% (Σχήμα 1Β), αντίστοιχα. Σε κύτταρα PC-3, τα ποσοστά ήταν 3,9 ± 5,4 για τα κύτταρα διαλογή και 96,1 ± 5,4 για τα μη διαλογή κυττάρων. Μια μετα-ανάλυση του είδους πραγματοποιήθηκε για να προσδιοριστεί η καθαρότητα των διαλογή κυτταρικών πληθυσμών? η οποία βρέθηκε να είναι & gt?. 85%

(Α) DU-145 ΚΕΠ απομονώθηκαν από DU-145 κυτταρική σειρά ανθρώπινου προστάτη. (Β) PC-3 ΚΕΠ απομονώθηκαν από DU-145 κυτταρική σειρά ανθρώπινου προστάτη. CD133

υψηλή /CD44

υψηλή πληθυσμούς που παρουσιάζονται σε P6. CD, συστάδα της διαφοροποίησης? FACS, ενεργοποιημένων με φθορισμό διαλογή κυττάρων.

Η

Αύξηση κυτταροτοξικότητα της CD133

υψηλή /CD44

υψηλή προστάτη ΚΕΠ με τραβεκτεδίνη

Για να προσδιοριστεί η επίδραση της trabectedin για τη βιωσιμότητα των ανθρώπινων κυττάρων του επιθηλίου του προστάτη (RWPE-1), κύτταρα καρκίνου του προστάτη (DU-145 και PC-3), ΚΕΠ του προστάτη (DU-145 και PC-3 ΚΕΠ) και χύμα πληθυσμού (DU-145 μη-ΚΕΠ και PC-3 μη-ΚΕΠ) εκτέθηκαν σε αυξανόμενες συγκεντρώσεις τραβεκτεδίνης (0.1-100 ηΜ) για 24, 48 και 72 ώρες, και το ποσοστό των βιώσιμων κυττάρων στα δείγματα προσδιορίστηκαν με δοκιμασία κυτταρικής βιωσιμότητας.

τραβεκτεδίνη μειωμένη κυτταρική βιωσιμότητα σε DU145 ανθρώπινη κυτταρική σειρά του προστάτη, DU-145 ΚΕΠ και DU-145 μη-ΚΕΠ σε ένα χρόνο και εξαρτάται από τη συγκέντρωση τρόπο (Εικόνα 2). Μετά από 24 ώρες θεραπείας, Η ημιμέγιστη ανασταλτική συγκέντρωση (IC

50) τιμές τραβεκτεδίνης βρέθηκε να είναι 100 ηΜ σε DU-145 μη-ΚΕΠ? ενώ δεν θα μπορούσε να επιτευχθεί IC

50 αξία της τραβεκτεδίνης στο DU-145 κυτταρική σειρά και ΚΕΠ (Σχήμα 2Α). Μετά από 48 ώρες θεραπείας, το IC

50 τιμές τραβεκτεδίνης βρέθηκαν να είναι 10 nM, 100 nm και 9,2 nM, αντίστοιχα στην κυτταρική σειρά DU-145, DU-145 ΚΕΠ και DU-145 μη-ΚΕΠ (Εικ 2Β). Μετά από 72 θεραπεία h, το IC

50 τιμές τραβεκτεδίνης βρέθηκαν να είναι 1 nM, 9.3 nm και 1 nM, αντίστοιχα στην κυτταρική σειρά DU-145, DU-145 ΚΕΠ και DU-145 μη-ΚΕΠ (Σχήμα 2C) .

η κυτταροτοξικότητα προσδιορίστηκε από τον αναλυτή κυττάρων Muse ™. Τα αποτελέσματα εκφράζονται ως μέσος όρος από 3 διαφορετικά πειράματα (± SD) (ρ & lt? 0.001 σε σύγκριση με μη επεξεργασμένο μάρτυρα).

Η

Τραβεκτεδίνη μειώθηκε η βιωσιμότητα των κυττάρων σε PC-3 ανθρώπινος κυτταρική σειρά προστάτη, PC- 3 ΚΕΠ και PC-3 μη CSCs με χρονο και εξαρτάται από τη συγκέντρωση τρόπο (Σχήμα 2). IC

50 αξία της τραβεκτεδίνης δεν μπορεί να επιτευχθεί σε όλα τα τρία ομάδα για 24 ώρες. Μετά από 48 ώρες θεραπείας, το IC

50 τιμές τραβεκτεδίνης βρέθηκαν να είναι 100 ηΜ στην PC-3 κυτταρική γραμμή και PC-3 μη-ΚΕΠ? ενώ δεν θα μπορούσε να επιτευχθεί IC

50 αξία της τραβεκτεδίνης σε PC-3 ΚΕΠ (Σχήμα 2Β). Μετά από 72 θεραπεία ώρες, το IC

50 τιμές τραβεκτεδίνης βρέθηκαν να είναι 9 ηΜ, 10 ηΜ και 8 ηΜ, αντιστοίχως, PC-3 κυτταρική γραμμή, PC-3 ΚΕΠ και PC-3 μη-ΚΕΠ (Σχήμα 2C). Παρά το γεγονός ότι, η τραβεκτεδίνη μείωσε την βιωσιμότητα των ΚΕΠ και μη CSCs σε συγκέντρωση-εξαρτώμενο τρόπο, η βιωσιμότητα των κυττάρων RWPE-1 ήταν σημαντικά υψηλότερη από κύτταρα καρκίνου του προστάτη μετά από έκθεση στην τραβεκτεδίνη, υποδεικνύοντας ότι ο καρκίνος του προστάτη βλαστικά κύτταρα ήταν περισσότερο ευαίσθητα στην τραβεκτεδίνη από κύτταρα RWPE-1 φυσιολογικά επιθηλιακά προστάτη.

τραβεκτεδίνη προκαλείται από αποπτωτικό κυτταρικό θάνατο δύο ΚΕΠ και μη-ΚΕΠ

Για να εξεταστεί εάν τα κύτταρα υφίστανται απόπτωση, ακατέργαστα ή τραβεκτεδίνη επεξεργασμένο κυτταρική σειρά DU-145, DU -145 ΚΕΠ, DU-145 μη-ΚΕΠ, PC-3 κυτταρική γραμμή, PC-3 ΚΕΠ, PC-3 μη-ΚΕΠ εκτέθηκαν σε αυξανόμενες συγκεντρώσεις τραβεκτεδίνης και αξιολογούνται από την Muse ™ Annexin V και δοκιμασία Dead κυττάρων (Σχήμα 3 ). Annexin V και Dead ανάλυση κυττάρων από κύτταρα μπορούν να διακρίνουν τα κύτταρα σε τέσσερις ομάδες, δηλαδή βιώσιμο (αννεξίνη V (-) και 7-AAD (-), πρώιμη απόπτωση αννεξίνης V (+) και 7-AAD (-), αργά απόπτωση, Annexin V (+) και 7-AAD (+) και νεκρωτικές αννεξίνης V (-).. και 7-AAD (+) τραβεκτεδίνη σημαντικά επαγόμενη απόπτωση σε όλες τις ομάδες σε μία συγκέντρωση τρόπο που εξαρτάται από στατιστικές αναλύσεις έδειξαν σημαντική διαφορά μεταξύ των κυττάρων σε επεξεργασία τραβεκτεδίνης σύγκριση για τον έλεγχο (ρ & lt? 0.001).

(Α) κυτταρική σειρά DU-145, (Β) DU-145 ΚΕΠ, (C) DU-145 μη-ΚΕΠ, (D) PC-3 κυτταρική γραμμή, (Ε) PC-3 ΚΕΠ, (F) PC-3 μη-ΚΕΠ. τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε αγωγή με 0.1, 1, 10 και 100 ηΜ τραβεκτεδίνης για 48 ώρες. Αφού τα κύτταρα χρόνο επώασης συλλέχθηκαν και ο εξωτερίκευσης phosphatydilserine αξιολογήθηκε χρησιμοποιώντας αννεξίνη V . πρωτόκολλο όπως περιγράφουν Βάσει αννεξίνης V αντιδραστικότητα και η ένταση του φθορισμού 7-AAD, τα κύτταρα μπορούν να ταξινομηθούν σε τέσσερις κατηγορίες:. νεκρός, ζωντανά, πρώιμη απόπτωση και αργά απόπτωση /νεκρός τραβεκτεδίνη δείχθηκε ότι επάγει αποπτωτικό κυτταρικό θάνατο στον καρκίνο βλαστικά κύτταρα κυρίως με την αύξηση της πρώιμη απόπτωση (πράσινο), τα κύτταρα και η εμφανής μείωση στο ποσοστό των ζωντανών κυττάρων. Τραβεκτεδίνη επίσης προκάλεσε σημαντικά το συνολικό αποπτωτικών κυττάρων (κίτρινο) με δοσο-εξαρτώμενο τρόπο. Τα δεδομένα αντιπροσωπεύουν τη μέση τιμή ± SEM τριών διαφορετικών πειραμάτων. Η στατιστική σημασία προσδιορίστηκε με μονόδρομη ανάλυση της διακύμανσης, ακολουθούμενη από την δοκιμή Tukey post hoc ή Dunett του. p & lt? 0,05 θεωρήθηκε για να δείξει μια στατιστικά σημαντική διαφορά

Η

Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι η έκθεση τραβεκτεδίνη σε αυξανόμενες συγκεντρώσεις οδήγησε σε υψηλότερο πληθυσμό των πρώιμων αποπτωτικών κυττάρων.. Με βάση τα δεδομένα μας συμπεραίνουμε ότι η τραβεκτεδίνη επάγει αποπτωτικό κυτταρικό θάνατο σε όλες τις ομάδες που δοκιμάστηκε με μία σημαντική αύξηση στην πρώιμη απόπτωση στις 48 ώρες. Τραβεκτεδίνη που προκαλείται από το σύνολο των αποπτωτικών κυττάρων σε κυτταρική σειρά DU-145 (Σχήμα 3Α), DU-145 ΚΕΠ (Σχήμα 3Β), DU-145 μη-ΚΕΠ (Σχήμα 3C), PC-3 κυτταρική γραμμή (Σχήμα 3D), PC-3 ΚΕΠ (Σχήμα 3Ε) και PC-3 μη-ΚΕΠ (Σχήμα 3F) σε ένα δοσοεξαρτώμενο τρόπο.

κασπάση-3, κασπάση-8, κασπάση-9, ρ53 και bcl-2 modulate φλαβοπιριδόλη σχετιζόμενη απόπτωση

χρώση ανοσοφθορισμού για κασπάση-3, κασπάση-8, κασπάση-9, ρ53 και bcl-2 υποστηρίζεται αποτελεσμάτων μας και έδωσε πληροφορίες για την εμπλέκονται αποπτωτικό μονοπάτι. Στην κυτταρική γραμμή DU-145 (Σχήμα 4Α), DU-145 ΚΕΠ (Σχήμα 4Β) και DU-145 μη-ΚΕΠ (Σχήμα 4C) κατεργάζεται 10 ηΜ τραβεκτεδίνη οδήγησε σε σημαντική αύξηση στην χρώση ανοσοφθορισμού της κασπάσης-3, κασπάσης-8 , κασπάσης-9 και ρ53. Αντίθετα, η χρώση ανοσοφθορισμού του bcl-2 ήταν εμφανώς μειωμένη σε σχέση με το μάρτυρα. Παρόμοιες παρατηρήσεις καταγράφονται σε PC-3 κυτταρική γραμμή, PC-3 ΚΕΠ και PC-3 μη-ΚΕΠ: χρώση ανοσοφθορισμού της κασπάσης-3, κασπάσης-8, και ρ53 αυξήθηκαν και χρώση ανοσοφθορισμού των bcl-2 μειώθηκε. Δεν παρατηρήθηκαν σημαντικές μεταβολές στην χρώση ανοσοφθορισμού της κασπάσης-9.

(Α) DU-145, (Β) DU-145 ΚΕΠ, (C) DU-145 μη-ΚΕΠ. Μετά τη θεραπεία με 10 nM τραβεκτεδίνη? κασπάσης-3, κασπάσης-8, κασπάσης-9, ρ53 και bcl-2 οπτικοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας FITC-συζευγμένο δευτερογενές αντίσωμα (πράσινο). Πυρηνική χρώση οπτικοποιήθηκε χρησιμοποιώντας ϋΑΡΙ (μπλε) χρώση. Οι εικόνες είναι αντιπροσωπευτικά τριών ανεξάρτητων πειραμάτων. Η ράβδος κλίμακας αντιπροσωπεύει 50 μm.

Η

ρύθμιση κυτταρικού κύκλου με τη θεραπεία με τραβεκτεδίνη υψηλής δόσης

Για να εκτιμηθεί κατά πόσον Τραβεκτεδίνη που προκαλείται αναστολή της ανάπτυξης των κυττάρων προκαλείται μέσω αλλαγών στο κυτταρικό κύκλο, εμείς εξέτασε την επίδραση της τραβεκτεδίνης στην κατανομή του κυτταρικού κύκλου από νεκρά κιτ προσδιορισμού των κυττάρων. Αύξηση του χρόνου επώασης οδήγησε σε αύξηση της ποσότητας των κυττάρων σε G2 /M σε όλες τις ομάδες? ιδιαίτερα με υψηλές δόσεις (10 και 100 ηΜ) θεραπείες.

Μετά από 48 ώρες από 0,1 κυτταρικών πληθυσμών θεραπεία τραβεκτεδίνη ηΜ στην G0 /G1, S και G2 /M φάσεις ήταν 55,3, 27,6 και 17,1%, αντίστοιχα στην κυτταρική σειρά DU-145, και 58,3, 23,1 και 18,6%, αντίστοιχα, σε DU-145 ΚΕΠ. Μετά από 1 nM επώασης τραβεκτεδίνη, τα ποσοστά ήταν 54,0, 21,2 και 24,8%, αντίστοιχα, σε DU-145 κύτταρα? και 50,1, 26,9 και 23,0%, αντίστοιχα, σε DU-145 ΚΕΠ. Επώαση με 10 nM τραβεκτεδίνη είχε ως αποτέλεσμα τα ποσοστά των 35,7, 29,8 και 34,5% αντίστοιχα, σε κυτταρική σειρά DU-145 και 37,0, 32,5 και 30,4%, αντίστοιχα, DU-145 ΚΕΠ (Σχήμα 5Α και 5Β). Όταν τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με 100 ηΜ trabectedin, τα ποσοστά των τριών κατηγοριών των κυττάρων ήταν 28,0, 29,5 και 42,5%, αντίστοιχα, σε κυτταρική γραμμή DU-145? και 38,1, 21,8 και 40,0%, αντίστοιχα, σε DU-145 ΚΕΠ. Σε DU-145 μη-ΚΕΠ, κυτταρικών πληθυσμών σε G0 /G1, S και G2 /M φάσεις ήταν 56,2, 24,4, 19,4%, αντίστοιχα, μετά από 48 ώρες επώαση με 0,1 nM τραβεκτεδίνη. Τα ποσοστά των τριών κατηγοριών των κυττάρων με 1 ηΜ επώαση trabectedin ήταν 50,1, 19,3, 30,6%? με 10 nM τραβεκτεδίνη και 37,2, 22,9 και 39,9% (σχήμα 5C)? με 100 nM τραβεκτεδίνη 25,5, 29,1, 45,4% αντίστοιχα μετά από 48 ώρες επώασης.

(Α) DU-145, (Β) DU-145 ΚΕΠ, (C) DU-145 μη-ΚΕΠ, (D) PC-3, (Ε) PC-3 μη-ΚΕΠ, (F) PC-3 ΚΕΠ. Τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με 10 ηΜ trabectedin για 48 ώρες. Το ποσοστό των κυττάρων σε G0 /G1, S και G2 /M φάσεις στη συνέχεια υπολογίστηκε χρησιμοποιώντας ένα αναλυτή κυττάρων μούσα. Ιστογράμματα από ένα αντιπροσωπευτικό πείραμα δείχνουν την επίδραση της τραβεκτεδίνης στο προφίλ κυτταρικού κύκλου. Αξιοσημείωτα, τραβεκτεδίνη επηρεάζεται σημαντικά τα κύτταρα στη φάση G2 /M, ιδιαίτερα στη θεραπεία υψηλής δόσης. Τα δεδομένα που παρουσιάζονται εδώ είναι από ένα αντιπροσωπευτικό πείραμα επαναλήφθηκε τρεις φορές με παρόμοια αποτελέσματα.

Η

Μετά από 48 ώρες της θεραπείας με 0.1 ηΜ trabectedin, κυτταρικών πληθυσμών στη G0 /G1, S και G2 /M φάσεις ήταν 57,0 , 24,6 και 18,4% αντίστοιχα, στην κυτταρική σειρά PC-3, και 69,4, 12,7 και 17,8%, αντίστοιχα, σε PC-3 μη-ΚΕΠ. Η επώαση με 1 ηΜ trabectedin, τα ποσοστά των τριών κατηγοριών των κυττάρων ήταν 45,8, 25,5 και 28,6%, αντίστοιχα στην κυτταρική σειρά PC-3 και 48,7, 22,9 και 28,3%, αντίστοιχα σε PC-3 μη-ΚΕΠ. Η επώαση με 10 ηΜ trabectedin, τα ποσοστά των τριών κατηγοριών των κυττάρων ήταν 49,5, 17,7 και 32,7% (Σχήμα 5D), αντίστοιχα στην κυτταρική σειρά PC-3 και 35,8, 31,1 και 33,0% (Σχήμα 5Ε), αντίστοιχα σε PC- 3 μη-ΚΕΠ. Η επώαση με 100 ηΜ trabectedin, τα ποσοστά ήταν 43,8, 18,9 και 37,3%, αντίστοιχα στην κυτταρική σειρά PC-3 και 28,0, 26,4 και 45,6% αντίστοιχα το PC-3 μη-ΚΕΠ. Παρόμοιες παρατηρήσεις καταγράφονται σε PC-3 ΚΕΠ. Η έκθεση αυτών των κυττάρων σε συγκεντρώσεις τραβεκτεδίνη 0.1, 1, 10 και 100 ηΜ οδήγησε σε 76,4, 62,7, 50,3, 45,8% σύλληψης στην φάση Ο0 /Ο1, αντίστοιχα? και 15,0, 22,0, 27,6, 26,3% σύλληψης (αντίστοιχα) στη φάση S και 8,6, 15,3, 20,9, 27,9% σύλληψης (αντίστοιχα) στην φάση G2 /M (σχήμα 5F). Αυτά τα αποτελέσματα έδειξαν ότι η αναστολή της ανάπτυξης που παρατηρήθηκε σε όλες τις ομάδες που έλαβαν από τραβεκτεδίνη συνδέεται κυρίως με την G2 /M σύλληψη φάση.

Σύγκριση σφαιροειδές ικανότητα σχηματισμού των ΚΕΠ και των μη-ΚΕΠ

DU-145 και PC-3 ΚΕΠ και μη-ΚΕΠ αναπτύχθηκαν σε 3D μη προσκολλημένα συνθήκες καλλιέργειας. σχηματισμό σφαιροειδές αξιολογήθηκε κάτω από ένα μικροσκόπιο αντίθεσης φάσης. CD133

υψηλή /CD44

υψηλή ανθρώπινη ΚΕΠ του προστάτη (Σχήμα 6Α και 6Β) ήταν σε θέση να σχηματίσει σφαιροειδή? ενώ οι μη-ΚΕΠ απέτυχε (Σχήμα 6C και 6D).

Α) DU-145 ΚΕΠ, Β) PC-3 ΚΕΠ, (C) DU-145 μη-ΚΕΠ, (D) PC-3 μη ΚΕΠ. CD133

υψηλή /CD44

υψηλή ανθρώπινη ΚΕΠ του προστάτη ήταν σε θέση να σχηματίσουν σφαιροειδή? ενώ οι μη-ΚΕΠ απέτυχε.

Η

Η αναστολή του σχηματισμού σφαίρας με τραβεκτεδίνη

DU-145 ΚΕΠ και PC-3 ΚΕΠ σχηματίζεται tumoroids την ημέρα πέντε και τρία, αντίστοιχα. Τα πρώτα σφαιροειδή επωάστηκαν για 24, 48 και 72 ώρες και τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με 0,1, 1, 10 και 100 ηΜ τραβεκτεδίνης. Ο αριθμός και η διάμετρος των αποικιών σε κάθε εκβάθυνση προσδιορίζεται κάθε μέρα κάτω από το μικροσκόπιο. Μετρήσεις tumoroid μέγεθος και αριθμούς αποκάλυψε ένα εξαρτώμενο από την δόση κυτταροτοξικότητα σε αγωγή tumoroids σε σύγκριση με χωρίς θεραπεία ελέγχους. Τραβεκτεδίνη μείωσε τον αριθμό και τη διάμετρο των σφαιροειδή DU145 ΚΕΠ και PC3 CSCs σε μια δόση και το χρόνο εξαρτώμενο τρόπο (Σχήματα 7 και 8). Με την αύξηση των δόσεων τραβεκτεδίνης, αυξημένο κυτταρικό θάνατο παρατηρήθηκε να συνοδεύσει τη διάλυση της σφαιροειδή DU145 ΚΕΠ και PC3 ΚΕΠ.

(Α) DU-145 ΚΕΠ, (Β) PC-3 ΚΕΠ. Ικανότητα σχηματισμού σφαίρας CD133

υψηλή /CD44

υψηλής DU-145 και PC-3CSCs είναι αισθητά καταστέλλεται σε ένα δοσοεξαρτώμενο τρόπο από την αρχή του σφαιροειδούς συντάγματος. Μετά την έναρξη του σχηματισμού πολυκύτταρων σφαιροειδών όγκου, τραβεκτεδίνη προστέθηκε σε διάφορες συγκεντρώσεις τραβεκτεδίνης (0.1, 1, 10, 100 ηΜ) για 24, 48 και 72 ώρες. Μια σημαντική μείωση παρατηρήθηκε στην διάμετρο του σχηματισμού σφαιροειδών. Τα αποτελέσματα είναι αντιπροσωπευτικά των δεδομένων που συλλέγονται από τουλάχιστον τρία πειράματα.

Η

(Α) DU-145 ΚΕΠ, (Β) PC-3 ΚΕΠ. Μετά την έναρξη του σχηματισμού πολυκύτταρων σφαιροειδών όγκου, τραβεκτεδίνη προστέθηκε σε διάφορες συγκεντρώσεις τραβεκτεδίνης (0.1, 1, 10, 100 ηΜ) για 24, 48 και 72 ώρες. Ο αριθμός των σφαιροειδή 15-20 τυχαία πεδία μετρήθηκαν και υπολογίστηκε. Τραβεκτεδίνη μείωσε τον αριθμό των σφαιροειδή DU145 ΚΕΠ και ΚΕΠ PC3 σε μια δόση και το χρόνο εξαρτώμενο τρόπο.

Έκφραση

E-cadherin μειώθηκε στο CD133

υψηλή /CD44

υψηλή ΚΕΠ του προστάτη με τραβεκτεδίνη

Για να ερευνηθεί ο ρόλος της τραβεκτεδίνης στην έκφραση της Ε-καδερίνης μεσολάβηση προσκόλλησης κυττάρου-κυττάρου σε DU-145 και PC-3 αναπτύχθηκαν υπό ΚΕΠ τρισδιάστατη συνθήκες in vitro, εξετάσαμε την χρώση ανοσοφθορισμού των Ε- cadherin. δοκιμασίες ανοσοφθορισμού μας αποτελέσματα έδειξαν ότι μετά τη θεραπεία του απεμπλουτισμένου ουρανίου-145 και PC-3 ΚΕΠ με IC

50 δόσεις τραβεκτεδίνη, η έκφραση Ε-καδερίνης σημαντικά μειωμένη σε σύγκριση με τον έλεγχο (Σχήμα 9).

(Α) DU -145 ΚΕΠ, (Β) PC-3 ΚΕΠ. Μετά την πολυκύτταρων σχηματισμό σφαιροειδές όγκου, DU-145 ΚΕΠ και PC-3 ΚΕΠ σφαιροειδή υποβλήθηκαν σε θεραπεία με τραβεκτεδίνη. Τραβεκτεδίνη διαταραχθεί Ε-καδερίνης μεσολάβηση αλληλεπιδράσεων κυττάρου-κυττάρου σε πολυκύτταρους σφαιροειδή DU-145 και PC-3 ΚΕΠ. E-cadherin απεικονίστηκαν χρησιμοποιώντας Alexa φθόριο

® 594 συζευγμένο δευτερεύον αντίσωμα (κόκκινο) πυρήνες βάφονται με DAPI (μπλε). bar κλίμακας: 100 μm

Η

Συζήτηση

Η μελέτη μας είναι η πρώτη που αποδεικνύει τα καρκινικά προληπτικές επιδράσεις της τραβεκτεδίνης στην ανθρώπινη ΚΕΠ του προστάτη.. Πρόσφατες μελέτες του καρκίνου έχουν αποκαλύψει ότι ένας πληθυσμός μειονότητας των κυττάρων σε όγκους όγκοι είναι υπεύθυνη για την έναρξη του όγκου, την ανάπτυξη και την αντίσταση σε συμβατικές θεραπείες. Οι περισσότεροι από αντικαρκινικά φάρμακα υπό έρευνα, ενώ σκοτώνοντας το μεγαλύτερο μέρος των κυττάρων του όγκου, τελικά αποτυγχάνουν να eleminate ΚΕΠ, τα οποία προκαλούν επανεμφάνισης του όγκου και της μετάστασης. Ως εκ τούτου, η προσοχή έχει επικεντρωθεί στον καθορισμό νέων αντικαρκινικών φαρμάκων για την πρόληψη του καρκίνου και της θεραπείας με την εξάλειψη των ΚΕΠ.

Η τραβεκτεδίνη έχει τη δυνατότητα να είναι ένας αποτελεσματικός χημειοθεραπευτικό παράγοντα για την ανάπτυξη νέων θεραπευτικών στρατηγικών που στοχεύουν ειδικά ΚΕΠ του προστάτη. Τα δεδομένα μας υποδηλώνουν έντονα ότι η τραβεκτεδίνη αναστέλλει την ανάπτυξη των ΚΕΠ του προστάτη σε ένα δοσο-εξαρτώμενο τρόπο, μέσω διακοπή του κυτταρικού κύκλου και της απόπτωσης.