Αφηρημένο

Τα αποτελέσματα της Όπως

4O

6 ως ανοσοενισχυτικό για φωτοδυναμική θεραπεία (PDT) μελετήθηκαν. Ως

4O

6 θεωρείται ότι έχει αντικαρκινική δράση μέσω διαφόρων βιολογικές δράσεις, όπως η παραγωγή και η αναστολή της έκφρασης του VEGF ελεύθερων ριζών. PDT ή Όπως

4O

6 ανέστειλε σημαντικά τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων TC-1 με δοσο-εξαρτώμενο τρόπο (

P

& lt? 0,05) με δοκιμασία ΜΤΤ. Το αντι-πολλαπλασιαστική επίδραση της θεραπείας συνδυασμού ήταν σημαντικά υψηλότερη από ό, τι σε TC-1 κύτταρα κατεργασμένα με είτε φωτοδυναμική θεραπεία ή ως

4O

6 μόνη της (62,4 και 52,5% μείωση σε σύγκριση με έκδοχο μόνο επεξεργασμένα κύτταρα TC-1 , αντίστοιχα,

P

& lt? 0,05). Επιπλέον, τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων σε συνδυασμό φωτοδυναμικής θεραπείας και As

4O

6 αγωγή μειώθηκαν σημαντικά κατά 77,4% (

P

& lt? 0,05). μονοπάτι κυτταρικής επιβίωσης (

Naip1, τ

και

Aip1

) και p53-εξαρτώμενη οδό (

Bax, p21

Cip1, Fas, GADD45, IGFBP-3

και

Mdm-2

) ήταν σημαντικά αυξημένη από συνδυασμένη θεραπεία της φωτοδυναμικής θεραπείας και As

4O

6. Επιπλέον, η ανοσολογική απόκριση σε σκέτη οδό (

Ly-12, CD178

και

IL-2

) επίσης διαμορφωμένο μετά από τη θεραπεία συνδυασμού, υποδηλώνοντας βελτιωμένη επιδράσεις κατά του όγκου με τον έλεγχο ανεπιθύμητης ανάπτυξης-διεγερτικών μονοπάτια. Το αποτέλεσμα συνδυασμού αντικατοπτρίζεται εμφανώς συμφωνία με in vitro δεδομένα, στον περιορισμό της ανάπτυξης του όγκου

in vivo

και σε σχέση με ορισμένες οδούς σηματοδότηση μέσω κοινού με εκείνες που παρατηρήθηκαν

in vitro

. Τα ευρήματα αυτά υποδηλώνουν το όφελος των συνδυαστική θεραπεία με φωτοδυναμική θεραπεία και As

4O

6 για την αναστολή του τραχήλου της ανάπτυξης των καρκινικών κυττάρων

Παράθεση:. Kim YW, Bae SM, Battogtokh G, Bang HJ, Ahn WS (2012) συνεργική αντι-όγκου επιπτώσεις του συνδυασμού της φωτοδυναμικής θεραπείας και της Ενώσεως Αρσενικό σε κύτταρα καρκίνου του τραχήλου: σε vivo και in vitro μελέτες. PLoS ONE 7 (6): e38583. doi: 10.1371 /journal.pone.0038583

Επιμέλεια: Irina V. Λεμπέντεβα, Enzo Life Sciences, Inc., Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 19η Δεκεμβρίου 2011? Δεκτές: 7 Μάη του 2012? Δημοσιεύθηκε: 8 Ιουν 2012

Copyright: © 2012 Kim et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Η μελέτη υποστηρίχθηκε από την Καθολική Χάρβαρντ Wellman Photomedicine Πυρήνας Τεχνική Κέντρο Ανάπτυξης, Σεούλ, Δημοκρατία της Κορέας (Grant # 5-2012-A0154-00001). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

η φωτοδυναμική θεραπεία (PDT) περιλαμβάνει το συνδυασμό του μη-τοξικές βαφές γνωστή ως φωτοευαισθητοποιητές (PSS) και το ορατό φως του σωστού μήκους κύματος που απορροφάται από το PSS. Με την παρουσία του οξυγόνου, αυτό οδηγεί σε παραγωγή αντιδραστικών μορφών οξυγόνου (ROS) που μπορεί να βλάψει τα κυτταρικά συστατικά, που οδηγεί σε κυτταρικό θάνατο [1], [2]. Η ανακάλυψη του προγραμματισμένου κυτταρικού θανάτου, ή απόπτωση, έφερε επανάσταση στον τομέα της κυτταροτοξική θεραπεία σε γενικές γραμμές, και PDT ιδίως [3] – [5]. Ωστόσο, η πλήρης εκρίζωση των καρκινικών κυττάρων με PDT και μόνο δεν έχει εγγυημένη [6]. . Η περαιτέρω μελέτη του ελέγχου της ανάπτυξης ανεπιθύμητης-διεγερτικών οδών μετά PDT είναι επιθυμητό να ελαχιστοποιηθεί ο κίνδυνος των επιβλαβών δυσμενών επιπτώσεων

αρσενικού ενώσεις έχουν αποδειχθεί ότι κατέχουν ζωής διατηρώντας ιδιότητες στη θεραπεία του καρκίνου [7] – [10]. Ελπιδοφόρα αποτελέσματα αναφέρθηκαν, δείχνοντας ότι Διαρσενικό οξειδίου (Όπως

2O

3) θεραπεία θα μπορούσε να προσφέρει μια εναλλακτική λύση στη χημειοθεραπεία για οξεία προμυελοκυτταρική λευχαιμία (APL). Κυτταροπαθολογικά μελέτες έδειξαν επίσης επαγωγή της απόπτωσης σε κύτταρα APL. Πρόσφατες αναφορές πρότειναν ότι αρσενικού ενώσεις αναστέλλουν τον πολλαπλασιασμό των ανθρώπινων ομφάλιων φλεβικών ενδοθηλιακών κυττάρων (HUVEC) μέσω G1 και G2 /M φάση σύλληψη του κυτταρικού κύκλου [8]. Επιπλέον, οι ανασταλτικές επιδράσεις στην από bFGF ή τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων που διεγείρεται με VEGF προτείνει την αντιαγγειογενετική δυναμικό του αρσενικού ενώσεων [11]. Επιπλέον, τετρα-αρσενικού οξείδιο (As

4O

6) αναφέρθηκε ότι έχει αντιαγγειογενετικές επιπτώσεις στο NGF-επαγόμενη σχηματισμό νέων αιμοφόρων στον κερατοειδή του αρουραίου, σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου και As

2O

3 ομάδα που έλαβε αγωγή [9]. Έχει επομένως προταθεί ότι Όπως

4O

6 θα μπορούσε να είναι ένα νέο αρσενικό ένωση, όπως επαγόμενη απόπτωση σε καρκινικά κύτταρα σε πολύ χαμηλότερη συγκέντρωση από ότι

2O

3 [10]. Ενώσεις αρσενικού μπορεί να αυξήσει δραστικά είδη οξυγόνου (ROS) σε κύτταρα και έτσι να αυξηθεί η έκκριση επαγωγής απόπτωσης παράγοντα (ΟΕΕ) μέσω της ενεργοποίησης του PARP-1, και, τέλος, επάγουν την κυτταρική απόπτωση. Η απελευθέρωση του κυτοχρώματος c και παράγοντας επαγωγής απόπτωσης (AIF) είναι σωστά ρυθμισμένες από Bcl-2 πρωτεϊνών της οικογένειας με οποιονδήποτε από τους ακόλουθους δύο τρόπους: σύμφωνα με μία πιθανός μηχανισμός, Bax παρόν στο κυτταρόπλασμα μετατοπίζεται στην μιτοχονδριακή μεμβράνη, όπου υφίσταται διαμορφωτικές αλλαγές επικουρούμενο από τον Bid. Η σύνδεση του Bax στην εξωτερική μεμβράνη (ΟΜ) προκαλεί του

in situ

πολυμερισμό, οπότε ΡΤΡ είναι περιφραγμένη και κυτόχρωμα c απελευθερώνεται. Bcl-2 και Bcl-xL αναστέλλουν διαμορφωτικές αλλαγές σε Βαχ και ως εκ τούτου αναστέλλουν την απελευθέρωση του κυτοχρώματος c και απόπτωση. Υψηλό επίπεδο της παραγωγής ROS είναι η κύρια αιτία της απόπτωσης από το αρσενικό ένωση. Ως ελεύθερη ρίζα, ROS μπορεί να αντιδράσει με τις περισσότερες βιολογικών μακρομορίων, και ως εκ τούτου όχι μόνο μπορεί να προκαλέσει οξειδωτική βλάβη στο DNA, αλλά επίσης να αλλάξει τη δομή και τη λειτουργία της πρωτεΐνης [12] – [14].

Από την άλλη πλευρά, ROS μπορεί να ρυθμίζουν την έκφραση της γενετικής δρώντας ως ένας δεύτερος αγγελιαφόρος. Αρκετές μελέτες έχουν προτείνει ότι η οξειδωτική βλάβη μπορεί να εμπλέκεται στην έναρξη γεγονότα στον καρκίνο, και θα μπορούσε να βοηθήσει να προκαλέσει την έναρξη της απόπτωσης μετά από μια αύξηση του πολλαπλασιασμού των κυττάρων [15], [16]. ένωση αρσενικού θα μπορούσε επίσης να φέρεται ρυθμίζουν την ανοσολογική απόκριση να εμπλέξει λειτουργία κατά του καρκίνου, μέσω της μείωσης της έκφρασης του VEGF [12] – [14]

Σε αυτή τη μελέτη, πρώτον έδειξε την ενισχυμένη αντικαρκινική δράση της PDT. χρησιμοποιώντας Radachlorin με Όπως

4O

6 σε ποντικούς που φέρουν όγκους που προκαλούνται από ιό των ανθρωπίνων θηλωμάτων (HPV) 16 Ε6 /Ε7 ογκογονιδίου εκφράζεται TC-1 κύτταρα όγκου. Η παρούσα μελέτη έδειξε ότι η θεραπεία συνδυασμού της PDT συν Όπως

4O

6 ήταν πολύ πιο αποτελεσματική για την καταστολή της ανάπτυξης του όγκου, σε σύγκριση με PDT ή Ως

4O

και μόνο 6.

Αποτελέσματα

In vitro ανασταλτική επίδραση της ανάπτυξης των κυττάρων του As

4O

6 συν Radachlorin /PDT σε κύτταρα TC-1

για να δείτε το αποτέλεσμα αναστολής της ανάπτυξης της PDT για TC -1 κύτταρο, το φως του 6.25J /cm

2 εκτέθηκε σε 12 ώρες μετά τη θεραπεία Radachlorin επί των κυττάρων, και στη συνέχεια η κυτταρική ανάπτυξη μετρήθηκε για ένα προκαθορισμένο χρονικό διάστημα. Η βιωσιμότητα των κυττάρων σε επεξεργασία με διάφορες δόσεις Radachlorin που ακολουθείται από ακτινοβολία φωτός μειώθηκε σε ένα δοσοεξαρτώμενο τρόπο σε σύγκριση με τον έλεγχο, αντίστοιχα (Σχήμα 1Α). Για να δείτε το αποτέλεσμα αναστολής της ανάπτυξης του As

4O

6 επί TC-1 κυττάρων, η κυτταρική ανάπτυξη μετρήθηκε για ένα προκαθορισμένο χρονικό διάστημα μετά Όπως

4O

6 θεραπεία. Η βιωσιμότητα των κυττάρων σε επεξεργασία με διάφορες δόσεις Όπως

4O

6 μειώθηκε κατά εξαρτώμενο από τη δόση τρόπο σε σύγκριση με τον έλεγχο, αντίστοιχα (Εικόνα 1Β). Χρησιμοποιώντας αυτά τα δεδομένα, η βιωσιμότητα των κυττάρων προσδιορίστηκε μετά από επεξεργασία των καλλιεργημένων TC-1 κυττάρων με 3 μΜ του As

4O

6 και διαφορετικές δόσεις Radachlorin /PDT ανά ημέρα. Η θεραπεία συνδυασμού έδειξε συνεργιστικό αποτέλεσμα, μειώνοντας βιωσιμότητα σε ένα δοσοεξαρτώμενο τρόπο σε σύγκριση με τον έλεγχο, όπως φαίνεται στο Σχήμα 1C. Η βιωσιμότητα των κυττάρων βρέθηκε να είναι 62,4% για PDT μόνο και 52,5% μετά Όπως

4O

6 μόνη θεραπεία σε χαμηλή δόση. Αντίθετα, μετά από PDT συν Όπως

4O

6 αγωγή, το ποσοστό της κυτταρικής ανάπτυξης βρέθηκε μικρότερο από 23%. Παρατηρήσαμε επίσης τη συνδυασμένη επίδραση έναντι εφάπαξ δόσεις την πάροδο του χρόνου για να αποσαφηνιστεί εάν η συνδυαστική προσέγγιση μπορεί να οδηγήσει σε μεγαλύτερη διάρκεια ζωής περιορισμός του πολλαπλασιασμού των κυττάρων σε σύγκριση με μεμονωμένες θεραπείες (Σχήμα 2). Η βιωσιμότητα των κυττάρων βρέθηκε να είναι λιγότερο από 10% για 0,2 μg /ml του Radachlorin /PDT συν Όπως

4O

6 θεραπεία για τρεις ημέρες, σε σύγκριση με την ατομική θεραπεία. Για την αξιολόγηση της συνεργίας μεταξύ Radachlorin /PDT και As

4O

6 θεραπείας, χρησιμοποιήσαμε ένα δείκτη συνδυασμό που υπολογίζονται Chou και Talalay της μεθόδου (Πίνακας 1). Μεταξύ των διαφόρων συνδυασμών της θεραπείας, 0,2 μg /ml Radachlorin /PDT συν 3 μΜ του As

4O

6 την ημέρα 3 και 4 οδήγησε στο υψηλότερο ποσοστό κυτταρικού θανάτου και έδειξε συνέργεια. Λίγα περισσότερα κυτταρικές σειρές όπως HaCaT, HeLa, και τα κύτταρα SiHa συμπεριλήφθηκαν για την αξιολόγηση της αναστολής της κυτταρικής ανάπτυξης (Συμπλήρωμα Σχήμα S1). Ενώ τα αποτελέσματα της HaCaT και SiHa ήταν συνεπή με προηγούμενες εκτιμήσεις της ανάλυσης ΜΤΤ, HeLa έδειξε Radachlorine /PDT ανθεκτικά τάση σε σύγκριση με τα άλλα κύτταρα. Η κυτταρική βιωσιμότητα των δύο κυτταρική γραμμή βρέθηκε να είναι λιγότερο από 25% για 0.15 μg /ml του Radachlorin /PDT συν Όπως

4O

6 θεραπεία για τέσσερις ημέρες, σε σύγκριση με την ατομική μεταχείριση. Εμείς χαρακτηριζόμενη κυτταρικό θάνατο με χρώση των κυττάρων TC-1 υποβάλλεται σε επεξεργασία με 0,15 μg /ml Radachlorin /PDT ή /και 3 μΜ του As

4O

6 για 1 ημέρα. Όπως αναμενόταν, η επίδραση της θεραπείας συνδυασμού ήταν μεγαλύτερο από κάθε απλή θεραπεία. Σε περίπτωση απουσίας του Radachlorin /PDT ή Όπως

4O

6, τα κύτταρα πέτυχαν εντελώς συρρέουσα πυκνή μονοστιβάδα μετά από 48 ώρες καλλιέργειας (Εικόνα 1D). Τα κύτταρα παρέμειναν συνδέονται με το υπόστρωμα καλλιέργειας ιστού και υιοθέτησαν ένα επίμηκες μορφολογία. Αντίθετα, η πλειοψηφία των κυττάρων που έλαβαν θεραπεία με Radachlorin /PDT συν Όπως

4O

6 αποσπάστηκε από την πλάκα και ήταν στρογγυλεμένες? χαρακτηριστικές κυττάρων που υφίστανται θάνατο μέσω απόπτωσης. Τα κύτταρα κατεργασμένα με Radachlorin /PDT ή Όπως

4O

6, όμως, υιοθέτησε μορφολογίες που ήταν ενδιάμεσο στην φύση. Μετρήσαμε διαφορετικών πληθυσμών αποπτωτικό κυττάρων που προκαλείται από 0,15 μg /ml Radachlorin /PDT ή /και 3 μΜ του As

4O

6 για 1 ημέρα. Όπως φαίνεται στο Σχήμα συμπλήρωμα S2, το θάνατο των κυττάρων αυξήθηκε σημαντικά μετά Radachlorin /PDT συν ως

4O

6 θεραπείας. Πρώιμων αποπτωτικών πληθυσμού ήταν 9,9% στα Radachlorin /PDT συν Όπως

4O

6 θεραπείας. Σε αντίθεση, πρώιμων αποπτωτικών κυτταρικών πληθυσμών ήταν 4,3% και 4,1% σε Radachlorin /PDT και As

4O

6 θεραπείας, αντίστοιχα. Αυτό δείχνει ότι η θεραπεία συνδυασμού προκάλεσε περισσότερο πρώιμων αποπτωτικών κυττάρων σε σύγκριση με μεμονωμένες θεραπείες.

(Α) κύτταρα TC-1 (3 χ 10

3) καλλιεργήθηκαν σε 12-φρεατίων εις τριπλούν επί μία νύκτα και υποβλήθηκε σε επεξεργασία με διαφορετικές συγκεντρώσεις Radachlorin και PDT (6.25 J /cm

2), όπως περιγράφεται στο Υλικά και Μέθοδοι. Μετά PDT, τα κύτταρα καλλιεργήθηκαν για ένα προκαθορισμένο χρονικό διάστημα. επιδράσεις (Β) Αναστολή της κυτταρικής ανάπτυξης Όπως

4O

6 επί TC-1 κύτταρα. TC-1 κύτταρα καλλιεργήθηκαν και επεξεργασία όπως περιγράφεται στο Υλικά και Μέθοδοι. Μετά Όπως

4O

6 αγωγή, τα κύτταρα καλλιεργήθηκαν για ένα προκαθορισμένο χρονικό διάστημα. Η βιωσιμότητα των κυττάρων προσδιορίστηκε με βάση την ανάλυση ΜΤΤ. (C)

In vitro

κυτταρική ανάπτυξη ανασταλτικές επιδράσεις του As

4O

6 συν Radachlorin /PDT επί κυττάρων TC-1. TC-1 κύτταρα καλλιεργήθηκαν με 3 μΜ του As

4O

6 και διαφορετικές δόσεις Radachlorin /PDT για 1 ημέρα, όπως περιγράφεται ανωτέρω. Η βιωσιμότητα των κυττάρων προσδιορίστηκε με βάση την ανάλυση ΜΤΤ. Κάθε ράβδος αντιπροσωπεύει μέσο [± SD (κάθετη γραμμή)] από τρεις επαναλήψεις ανά δόση (

n

= 3). * Και #: διαφέρουν σημαντικά (

P

& lt? 0,05) από τον έλεγχο και την PDT από t-test του μαθητή. (D) Μορφολογικές αλλαγές των κυττάρων TC-1. TC-1 κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με 0,15 μg /ml Radachlorin /PDT ή /και 3 μΜ του As

4O

6 για 1 ημέρα. Τα κύτταρα στη συνέχεια προβάλλονται με μικροσκόπιο. Ελήφθησαν εικόνες με μικροσκοπία αντίθεσης φάσης σε X300. (Α) μη επεξεργασμένο? (Β) 0,15 μg /ml Radachlorin /PDT και μόνο? (Γ) 3 μΜ Όπως

4O

6 μόνη της? (Δ) 3 μΜ Όπως

4O

6 συν 0,15 μg /ml Radachlorin /PDT.

Η

TC-1 κύτταρα καλλιεργήθηκαν με 3 μΜ του As

4O

6 και (Α) 0,15 ug /ml και (Β) 0,2 μg /ml του Radachlorin /PDT, αντίστοιχα. Η βιωσιμότητα των κυττάρων προσδιορίστηκε με βάση την ανάλυση ΜΤΤ. Κάθε ράβδος αντιπροσωπεύει μέσο [± SD (κάθετη γραμμή)] από τρεις επαναλήψεις (n = 3). * Και #:. Διαφέρουν σημαντικά (P & lt? 0,05) από τον έλεγχο και η PDT από t-test του φοιτητή

Η

προφίλ

Η γονιδιακή έκφραση των TC-1 κύτταρα επεξεργασμένα με Όπως

4O

6 συν Radachlorin /PDT

Χρησιμοποιήσαμε RT

2 Profiler Σύστημα PCR Array να κατανοήσουν τις κυτταρικές αλλαγές διαδικασία μέσω της οποίας TC-1 κύτταρα θα μπορούσε να επηρεαστεί από τη θεραπεία συνδυασμού με Όπως

4O

6 συν Radachlorin /PDT. Βρήκαμε 63 γονίδια τα οποία ήταν τουλάχιστον δύο φορές ανάντη ή μειωτικά (κάθε γονίδιο περιγράφεται λεπτομερώς στον Πίνακα 2) και χρησιμοποιήθηκαν ιεραρχική συσταδοποίηση να δείξει διαφορικά εκφραζόμενα γονίδια (Σχήμα 3Α). Να ανιχνεύσει τις διαφορές στα λειτουργικά χαρακτηριστικά, τοποθετήσαμε διαφορικά εκφραζόμενων γονιδίων στο πλαίσιο των σημερινών γνώσεων interactome, χρησιμοποιώντας τα εργαλεία Ingenuity Pathways Ανάλυση (

P

για όλους & lt? 0,05), δείχνει ότι η ενισχυμένη αναστολή της κυτταρικής ανάπτυξης και τις επιπτώσεις κατά του όγκου ήταν σημαντικά σχετίζονται με τα επίπεδα γονιδιακής έκφρασης των γονιδίων που σχετίζονται με τον κυτταρικό θάνατο, δηλαδή ρ53 και ΝΡΑΤ οδού (Σχήμα 3Β). Κάθε γονίδιο στο μονοπάτι ελέγχθηκε με ποσοτική PCR (Σχήμα 4) και τα αποτελέσματα της συστοιχίας PCR και qRT-PCR ήταν παρόμοια. Αυτά περιλαμβάνονται γονίδια που κωδικοποιούν για Τριτ, Aip1, Bax, ρ21, Fas, GADD45, IGFBP-3, Mdm-2, Ly-12, και IL-2, σε σύγκριση με εκφράζεται ελαφρώς γονίδια όπως Naip1 και CD178. Σημαντικά επάνω ρυθμισμένη μοριακή λειτουργίες για την ομάδα θεραπείας συνδυασμού ήταν οδό ρ53. Η μοριακή συνάρτηση προς τα κάτω-ρυθμίζονται ήταν NEAT μονοπάτι. ΜΑΡΚ, η αλληλεπίδραση υποδοχέα κυτοκίνης-κυτοκίνης, εστιακή πρόσφυση, μονοπάτια κυτταρικής προσκόλλησης μελετήθηκαν επίσης στα σύνολα γονιδίων, αλλά δεν συσχετίζεται απόλυτα με την ενισχυμένη αναστολή της κυτταρικής ανάπτυξης (

P

για όλους & gt? 0,05) (Σχήμα 3Γ- F).

(Α) Όλα τα δεδομένα μεσαίο κέντρο και συγκεντρωμένα χρησιμοποιώντας μια ιεραρχική ομαδοποίηση. Μια εικόνα σύμπλεγμα που εκπροσωπούν 63 από τα γονίδια που παρουσιάζεται σε μορφή πίνακα, όπου σειρές αντιπροσωπεύουν μεμονωμένα γονίδια και οι στήλες αντιπροσωπεύουν κάθε δοκιμασία. Κάθε κύτταρο στη μήτρα αντιπροσωπεύει το επίπεδο έκφρασης ενός γονιδίου σε ένα άτομο δοκιμασίας. Κόκκινα και πράσινα κύτταρα αντανακλούν υψηλά και χαμηλά επίπεδα έκφρασης, αντίστοιχα. (Β) Δέκα γονίδια (ρ53 και τακτοποιημένη οδών) που δείχνει στατιστικά σημαντικές διαφορές σε τρεις ομάδες δείχνονται ως εικόνα σύμπλεγμα. (C) ΜΑΡΚ μονοπατιού ως εικόνα σύμπλεγμα. (D) Cytokine-κυτοκίνης μονοπάτι αλληλεπίδραση υποδοχέα. (Ε) Focal μονοπάτι πρόσφυσης. (F) μονοπάτι πρόσφυσης Cell.

Η

Τα αποτελέσματα παρουσιάζονται ως επίπεδα μεταγραφής σε σχέση με το επίπεδο σε μη-κατεργασμένα κύτταρα ελέγχου, χρησιμοποιώντας τη μέθοδο του CT, με το μέσο επίπεδο του mRNA του πέντε γονίδια εσωτερικού ελέγχου, περιλαμβανομένων b- ακτίνη, χρησιμοποιείται ως έλεγχος κανονικοποίηση. (Α) διαδρομή κυτταρικής επιβίωσης. (Β) NEAT οδού. (C) οδός p53.

Η

Όπως

4O

6 συν Radachlorin /PDT καταστέλλει την ανάπτυξη όγκων σε TC-1 ζωικό μοντέλο

Για να προσδιοριστεί η συνεργική αντικαρκινικά αποτελέσματα του As

4O

6 συν Radachlorin /PDT

in vivo

, C57BL /6 ποντικοί προκλήθηκαν sc με TC-1 κύτταρα και στη συνέχεια κατεργάζεται με Όπως

4O

6 ή /και Radachlorin /PDT. Η θεραπεία άρχισε την ημέρα 0, όταν οι όγκοι ήταν ~ 230 mm

3 σε μέγεθος. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 5Α, As

4O

6 ή Radachlorin /PDT αγωγή ομάδες ζώων έδειξαν σημαντική καταστολή της ανάπτυξης του όγκου, σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου χωρίς θεραπεία. Ωστόσο, τα ζώα που έλαβαν θεραπεία με συνδυασμό Όπως

4O

6 συν Radachlorin /PDT έδειξε την πιο σημαντική καταστολή του όγκου, σε σύγκριση με τις άλλες ομάδες. Αυτό πρότεινε ότι Όπως

4O

6 μπορεί να παίζει ένα σημαντικό ρόλο στην αναστολή της ανάπτυξης από Radachlorin /PDT.

(Α) καμπύλες ανάπτυξης όγκου για TC-1 από ποντικούς που υπέστησαν αγωγή με Radachlorin /PDT και ή /και ως

4O

6 (n = 7 για κάθε ομάδα). όγκους ποντίκια που φέρουν δόθηκαν ενδοφλεβίως Radachlorin (10 mg /kg σ.β.) ή /και περιτοναϊκή ενέσεις 7,5 mg /kg Όπως

4O

6. Τρεις ώρες αργότερα, τα κύτταρα εκτέθηκαν σε λέιζερ, το μέγεθος του όγκου παρακολουθήθηκε στη συνέχεια, όπως περιγράφεται στο Υλικά και Μέθοδοι, και μέση ελλειψοειδές όγκος του παραστάθηκε γραφικά συναρτήσει του χρόνου. Σημαντική αναστολή της ανάπτυξης του όγκου ανιχνεύθηκε με ANOVA. *:

P

& lt? 0,01, σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου, #:

P

& lt? 0,01, σε σύγκριση με την μόνη ομάδα Radachlorin /PDT και $:

P

& lt? 0,01, σε σύγκριση με τον Ως

4O

6 μόνη ομάδα. (Β) αιμάτωσης και μορφολογικές αλλαγές σε TC-1 όγκων σε ποντίκια C57BL /6 με αγωγή Όπως

4O

6 (10 mg /kg σ.β., ε.π.). ιστοί όγκου συλλέχθηκαν μετά από 48 ώρες μετά Όπως

4O

6 θεραπεία. Ιστών δει σε μήκος κύματος 365 nm και φωτογραφήθηκαν σε x200 μεγέθυνση. (C) Ποσοστό ζώνης της περιοχής διάχυσης του TC-1 όγκων σε ποντίκια C57BL /6 με αγωγή Όπως

4O

6 σε σύγκριση με μη κατεργασμένα όγκους. Οι καρκινικοί ιστοί συλλέχθηκαν σε ενδεδειγμένους χρόνους μετά Όπως

4O

6 θεραπείας. Διαδοχική αλλαγές διαχέονται περιοχές σε 1, 3, 6, 12, 24, και 48 ώρες μετά Όπως

4O

6 θεραπείας. *

P

& lt? 0,05, σε σύγκριση με χωρίς θεραπεία ελέγχους. (D) τμήματα όγκου CD31-ανοσοχρωματίστηκε (αρχική μεγέθυνση, χ400) και Καθώς οι

4O

6 επεξεργασμένο τμήματα εμφανίζονται. Είκοσι τέσσερις ώρες μετά Όπως

4O

6 θεραπεία, TC-1 όγκων έδειξαν εκτεταμένη απώλεια της χρώσης CD31 ενδεικτικό της σημαντικής As4O6 επαγόμενης αγγειακής βλάβης.

Η

Επίδραση της θεραπείας αρσενικού στην περιφερειακή αιμάτωση στον ιστό του όγκου

χρησιμοποιήθηκε

Hoechst 33342 για να απεικονίσει διαποτίζονται σκάφη, όπως περιγράφεται στα υλικά και μεθόδους. Σε ιστό ελέγχου, τα αγγειακά ενδοθηλιακά κύτταρα ήταν σαφώς χρωματίστηκαν με Hoechst 33342 στα δύο εξωτερική ακμή τους και την κεντρική περιοχή (Σχήμα 5Β). Αντιμετωπίζονται ιστός κεντρικά αποχρωματίζεται και το σήμα περιφέρεια florescence ήταν σχεδόν μη ανιχνεύσιμη. Αυτό το φαινόμενο συνεχίζεται μέχρι το σημείο 24 h. Ωστόσο, ο φθορισμός στην περιφέρεια των κυττάρων ήταν σαφώς εμφανής στις 48 ώρες μετά την αγωγή, ενώ οι κεντρικές χρώση παρέμεινε απούσα. Για να παρατηρήσουμε τις αλλαγές της λειτουργίας του πλοίου στο σύνολό του όγκου, το τμήμα του όγκου σαρώθηκαν κάθε πεδίο. Οι διαδοχικές αλλαγές περιοχή αιμάτωσης μετά Όπως

4O

6 θεραπεία φαίνεται στο Σχήμα 5C. Σε κάθε χρονικό σημείο, το ποσοστό του κάθε τμήματος με το πεδίο του όγκου ήταν συγκρίσιμη με τον έλεγχο ιστό σε κάθε χρονικό σημείο. Η περιοχή διάχυσης μειώθηκε αμέσως μετά Όπως

4O

6 θεραπείας. Στις 6 και 12 ώρες, η περιοχή διάχυσης ήταν το ελάχιστο, στις 24 ώρες η περιοχή διάχυσης ήταν 14,4% σε σύγκριση με ιστό από PBS αγωγή ιστό ελέγχου. Tumor διαστάσεις πυκνότητα μικροαγγείων μετρήθηκαν μετά την χορήγηση Όπως

4O

6 σε ποντίκια που φέρουν TC-1 ξενομοσχευμάτων όγκου. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 5D, υπήρχε σημαντική διαφορά στην πυκνότητα των αγγείων του όγκου όπως ανιχνεύεται με χρώση CD31 μεταξύ της Όπως

4O ομάδα

6-θεραπεία και το χρονικό αντίστοιχη ομάδα μαρτύρων με PBS αγωγή μετά από 24 ώρες από Καθώς

4O

6 θεραπείας. Τα ποντίκια που έλαβαν θεραπεία με Όπως

4O

6 παρουσίασαν μείωση των διαστάσεων δοχείο όγκου σε σύγκριση με τα ζώα ελέγχου, με CD31 χρωματίστηκαν μικροαγγείων εξακολουθεί να είναι εμφανής στην εξωτερική άκρη του όγκου.

στην έκφραση γονιδίων vivo επίπεδα ιστών όγκου σε επεξεργασία με όπως

4O

6 συν Radachlorin /PDT

TC-1 κύτταρα υποβλήθηκαν σε αγωγή με όπως

4O

6 και Radachlorin /PDT για 1 ημέρα, όπως υποδεικνύεται στην ενότητα «Υλικά και Μέθοδοι». Η έκφραση των γονιδίων mRNA σε ιστούς όγκων εξετάστηκε με qRT-PCR (Σχήμα 6Α). Τα αποτελέσματα παρουσιάζονται ως επίπεδα μεταγραφής σε σχέση με το επίπεδο σε μη-κατεργασμένα κύτταρα ελέγχου, χρησιμοποιώντας τη μέθοδο της CT, και β-ακτίνης mRNA επίπεδα χρησιμοποιήθηκαν ως έλεγχος κανονικοποίηση. Χρησιμοποιώντας αντιγόνο CD5 στην ομάδα της θεραπείας συνδυασμού, η έκφραση γονιδίου Ly-12 και IL-2 αυξήθηκαν 26 και 17 φορές, αντίστοιχα, σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου, που δείχνουν ότι η ρ53 εμπλέκεται στη ρύθμιση της ΝΡΑΤ μονοπάτι του ρ21, GADD45, IGFBP-3 , Mdm-2 και άλλα γονίδια. Η γονιδιακή έκφραση βρέθηκε αυξήθηκε σε τρία διαδοχικά πειράματα. Να καθορίσει τους ρόλους των οδών σηματοδότησης ρ53 στα συνεργιστική αντικαρκινική επιπτώσεις της Όπως

4O

6 συν Radachlorin /PDT

in vivo

, θα διερευνηθούν περαιτέρω οι p53, p21, και τα επίπεδα της πρωτεΐνης GADD45 in vivo (Σχήμα 6Β). Όπως αντιμετωπίζεται

4O

6 ή Radachlorin /PDT ομάδες ζώων δεν έδειξε σημαντικές μεταβολές έκφραση, σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου χωρίς θεραπεία. Σε αντίθεση, ρ53, ρ21, και GADD45 πρωτεΐνη ήταν σημαντικά αυξημένες στην θεραπεία συνδυασμού με Όπως

4O

6 συν Radachlorin /PDT.

(Α) Η έκφραση των γονιδίων mRNA σε ιστούς όγκου ήταν εξετάστηκαν από Q-PCR. Τα αποτελέσματα παρουσιάζονται ως επίπεδα μεταγραφής σε σχέση με το επίπεδο σε μη-κατεργασμένα κύτταρα ελέγχου, χρησιμοποιώντας τη μέθοδο του CT, με β-ακτίνης mRNA επίπεδα χρησιμοποιούνται ως έλεγχος κανονικοποίηση. (Β) Ανάλυση Western blot της in vivo ιστούς όγκων σε επεξεργασία με 0,15 μg /ml Radachlorin /PDT ή /και 3 μΜ του As

4O

6 για αρκετές ημέρες.

Η

Συζήτηση

Σε αυτή τη μελέτη, συγκριτικά αναλύθηκαν τα αποτελέσματα του ενιαίου θεραπεία της Όπως

4O

6 ή φωτοδυναμική ομάδες θεραπείας με εκείνα που λαμβάνονται με τη συν-θεραπεία χρησιμοποιώντας Ε6 /Ε7 που εκφράζουν TC-1 κυτταρική γραμμή και C57BL /6 μοντέλο ποντικού που μεταμοσχεύονται με αυτό το κύτταρο. Πρέπει επιτέλους να αναφέρουν τις ενισχυμένη αναστολή και αντικαρκινική δράση της κυτταρικής ανάπτυξης και αλλαγές στα επίπεδα γονιδιακής έκφρασης των γονιδίων που σχετίζονται με τον κυτταρικό θάνατο, δηλαδή ρ53 και NFAT οδού, που προκαλείται από την παρούσα Όπως

4O

6 και PDT συν-θεραπεία μέθοδο.

Οι επιδράσεις αυτές που παράγονται από την φωτοδυναμική θεραπεία ανάλογα με τη συγκέντρωση του φωτοευαισθητοποιητή Radachlorin, και από το επικουρικό

4O

6 μεταχείριση σε εξαρτώμενο από τη συγκέντρωση τρόπο. Στα PDT-μη επεξεργασμένα κύτταρα, η κυτταρική ανάπτυξη διατηρείται σταθερή μέχρι το τέλος της περιόδου παρατήρησης. PDT-κατεργασμένα κύτταρα οπισθοχωρούν μόνο για 1 ημέρα μετά την PDT, αλλά η κυτταρική ανάπτυξη ήταν εκ νέου αυξήθηκε μετά από 2 ημέρες μετά την PDT. Όσο χαμηλότερη είναι η Καθώς

4O

6 επίπεδο ήταν, τόσο πιο αργή η ανασταλτική δράση των κυττάρων της ανάπτυξης παρουσιάστηκε. Κάτω από 3 μΜ του As

4O

6, αναστολή της κυτταρικής ανάπτυξης φάνηκε να αρχίζει από την 1η ημέρα της θεραπείας και διατηρήθηκε σταθερά κάτω% επίπεδο ανάπτυξης των κυττάρων 60-80 κατά τη διάρκεια των 4 πρώτων ημερών της θεραπείας. Σε αντίθεση, οι συγκεντρώσεις Αδ

4O

6 υψηλότερο από 3 μΜ φάνηκαν να είναι κυτταροτοξική. Στην ομάδα συν-θεραπεία του As

4O

6 και PDT, βρέθηκαν πιο σημαντικές επιδράσεις επί της αναστολής της κυτταρικής ανάπτυξης και περισσότερο μορφολογικές αλλαγές, σε σύγκριση με κάθε ομάδα και μόνο θεραπεία. Είναι γνωστό ότι παράγοντες κατά του όγκου παράγουν αντιδραστικά οξυγόνου και αντιδραστικά είδη αζώτου για να επάγει απόπτωση και νέκρωση του κυττάρου [17] – [19]. Ως ένας από τους παράγοντες κατά του όγκου, ο μηχανισμός κατά του όγκου του αρσενικού ένωσης να παράγουν αντιδραστικά είδη οξυγόνου και αζώτου στην ορθοκολικό καρκίνο κυτταρική σειρά έχει επίσης αναφερθεί [20]. Η παροχή επαρκούς οξυγόνου και η παραγωγή δραστικών ειδών οξυγόνου (ROS) είναι γνωστό ότι είναι σημαντικούς παράγοντες που καθορίζουν την επίδραση της φωτοδυναμικής θεραπείας [4], [21]. Ως εκ τούτου, η επαγωγή των ROS μεσολάβηση του όγκου παράγοντες μπορεί να έχουν συμβάλει στην ενίσχυση της αποτελεσματικότητας της PDT.

Στη συνέχεια, συγκριτικά ανέλυσε την αλλαγή της ενδοκυτταρικής πορείας σήματος της κάθε μονής ομάδας /συν-θεραπείας, με τη χρήση του RT

2Profiler

TM μέθοδο array PCR, και τα αποτελέσματα αυτά επιβεβαιώθηκαν από την PCR πραγματικού χρόνου εξέτασης χρησιμοποιώντας 13 διαφορετικούς εκκινητές. Χρησιμοποιώντας το πραγματικού χρόνου μέθοδο PCR, αναλύσαμε την αλλαγή στα επίπεδα έκφρασης του 84 γονιδίων που εμπλέκονται σε 15 μονοπάτια σηματοδότησης. Βρήκαμε σημαντικές αλλαγές στα επίπεδα έκφρασης των γονιδίων που είναι γνωστό ότι εμπλέκονται στην οδό κυτταρικής επιβίωσης (π.χ., Naip1, τ, Aip1, κλπ), ρ53 μονοπάτι (π.χ., Βαχ, ρ21, Fas, GADD45, IGFBP-3, Mdm- 2, κ.λπ.), και ΝΡΑΤ (πυρηνικός παράγοντας Τ-κυττάρων Ενεργοποίηση) οδού (π.χ., Ly-12, CD178, IL-2, κλπ) που συμμετέχουν στην ρύθμιση της ανοσολογικής απόκρισης. Ειδικά, τα επίπεδα έκφρασης του Naip1, η οποία είναι γνωστή ως το γονίδιο ανασταλτική απόπτωση, και τριτ, την ανάστροφη μεταγραφάση τελομεράσης, μειώθηκαν σε κάθε διαδρομή κυτταρικής επιβίωσης, ενώ το επίπεδο έκφρασης του γονιδίου που επάγει την απόπτωση Aip1 ενισχύθηκε. Επιπλέον, τα αποτελέσματα συστοιχία PCR έδειξαν μειωμένα επίπεδα γονιδιακής έκφρασης Τριτ 2,7, 17,1, και 34,6 φορές ως

4O

6 μόνο, PDT και μόνο, και συν-θεραπεία ομάδες, αντίστοιχα, το καθένα σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου . γονίδιο Τριτ είναι γνωστό ότι σχετίζεται με την ενεργοποίηση του τελομεράσης, και σε περίπτωση καρκίνου του τραχήλου της μήτρας, ο c-myc γονίδιο φαίνεται να επάγουν την ενεργοποίηση της τελομεράσης με την έκφραση Τριτ [22]. Ως εκ τούτου, προτείνουμε ότι κάτω-ρύθμιση του γονιδίου Τριτ που προκαλείται από την παρούσα συν-θεραπεία Όπως

4O

6 και PDT μπορεί να έχουν εμπλακεί σε κυτταρικό θάνατο. Η αναστολή της γονιδιακής Τριτ επιβεβαιώθηκε επίσης από την PCR εξέταση σε πραγματικό χρόνο εκτελείται μετά από RT

2 Profiler

ανάλυση της σειράς TM PCR, και η μείωση του επιπέδου έκφρασης του γονιδίου Τριτ είχε δείξει με συνέπεια στην ομάδα συν-θεραπεία, τόσο

in vitro

και

in vivo

.

Παρατηρήσαμε επίσης αλλαγές στα επίπεδα έκφρασης του ρ21, Fas, GADD45, IGFBP-3, και Mdm-2 γονιδίων, γνωστών να συμμετέχει στο μονοπάτι ρ53, και η ομάδα συν-θεραπεία έδειξαν περισσότερο σημαντική αύξηση σε σχέση με κάθε ομάδα και μόνο θεραπεία. Ωστόσο, δεν παρατηρήθηκε κάποια σημαντική αλλαγή της γονιδιακής έκφρασης Βαχ (που είναι γνωστό ότι ενεργοποιείται από ρ53). Επιπλέον, από την απουσία σημαντικών αλλαγών του επιπέδου ρ53, αυτές οι αλλαγές του p21, Fas, GADD45, τα επίπεδα IGFBP-3, και γονιδιακή έκφραση Mdm-2 φαίνεται να διαμεσολαβείται από p53-ανεξάρτητες οδούς.

Εκτός , λαμβάνοντας υπόψη τα επίπεδα έκφρασης των γονιδίων, όπως Ly-12, CD178, και IL-2, που είναι γνωστό ότι εμπλέκεται στην οδό ΝΡΑΤ, αυξημένη Ly-12 έκφραση, ενώ CD178 και IL-2 εκφράσεις μάλλον μειώθηκε στην ομάδα συν-θεραπεία, σε σύγκριση με κάθε ομάδα και μόνο θεραπεία. Καθώς η ενδοκυτταρική οδός της ΝΡΑΤ έχει γίνει γνωστό ότι σχετίζονται με αυξημένη ανοσοαποκρίσεις, περιμέναμε ότι θα μπορούσε να ρυθμίζεται προς τα πάνω με PDT? Ωστόσο, τα επίπεδα γονιδιακής έκφρασης σε αυτή την οδό, περιλαμβανομένων των IL-2, μειώθηκαν μετά την θεραπεία PDT και περαιτέρω μείωση βρέθηκε στην ομάδα συν-θεραπεία. Ωστόσο, όταν προσπαθήσαμε να επιβεβαιωθούν τα αποτελέσματα της RT

2Profiler

TM σειρά PCR χρησιμοποιώντας τη μέθοδο του πραγματικού χρόνου PCR, βρήκαμε αντίθετα αποτελέσματα σε σχέση με εκείνες του RT

2Profiler

array TM PCR, δηλαδή έκφραση της IL-2 μειώθηκαν στην ομάδα μόνη θεραπεία PDT και αυξήθηκε στην ομάδα συν-θεραπείας, τα δύο δείχνουν παρόμοια αποτελέσματα κάτω από το

in vitro

και

in vivo

συνθήκες. Έχει αναφερθεί ότι PDT ίσως διεγείρουν αυξητικών ανοσοποιητικό σήματα όγκου και θα μπορούσε να βελτιωθεί με τον έλεγχο ανεπιθύμητης ανάπτυξης-διεγερτικών οδών [23], [24]. Ως εκ τούτου, τα αποτελέσματα μας για την IL-2 φαίνεται να δείχνουν ότι PDT μείωσε την έκφραση αυτού του γονιδίου, ενώ αυξήθηκε από την ένωση θεραπείας αρσενικού, υποδεικνύοντας ότι η θεραπεία συνδυασμού συνδυάζουν δύο πλεονεκτήματα επάγοντας ανοσολογικών μεσολαβητών και των αποτελεσμάτων κατά του όγκου. Επιπλέον, αυτή η ταυτόχρονη θεραπεία αυξήθηκε ο

in vitro

και

in vivo

επίπεδα έκφρασης του γονιδίου αντιγόνου CD5 και Ly-12 έως και 23 και 26 φορές, αντίστοιχα. Ωστόσο, τα επίπεδα έκφρασης των Ly-12 ή IL-2 δεν παρουσίασαν σημαντικές μεταβολές στην ομάδα και μόνο θεραπεία PDT? Ως εκ τούτου, η αυξημένη έκφραση του γονιδίου φάνηκε να επάγεται από την ένωση του αρσενικού. Μέχρι στιγμής, ωστόσο, δεν υπάρχουν άλλα μελέτες έχουν αναφέρει τη σχέση μεταξύ της συνδυασμένης PDT-As

4O

6 αγωγή και η οδός NFAT, και πιο εντατικές μελέτες θα πρέπει να διεξαχθούν.

Ομοίως, μας TC-1 line-μεταμοσχευμένων μοντέλο ποντικού κυττάρων έδειξαν σημαντικά ενισχυμένη αντικαρκινική επίδραση στο PDT και As

ομάδα 4O

6 συν-θεραπεία, σε σύγκριση με κάθε ομάδα μόνο-θεραπεία. Για να προσδιοριστεί ο μηχανισμός αυτής της επίδρασης, πραγματοποιήσαμε σε πραγματικό χρόνο πείραμα PCR χρησιμοποιώντας 10 διαφορετικούς εκκινητές και τελικά παρατηρήθηκαν σημαντικές μεταβολές στα επίπεδα έκφρασης των γονιδίων που είναι γνωστό ότι εμπλέκεται στην διαδρομή κυτταρικής επιβίωσης, μονοπάτι ρ53, και μονοπάτι ΝΡΑΤ, παρόμοιες με εκείνες που προέρχονται από

in vitro

πειράματα. Τα δεδομένα μας στύπωμα Western καταδεικνύει ότι συν-κατεργασία αυξημένη έκφραση του p53, p21, GADD45 σε 7 ημέρα σε σύγκριση με τη θεραπεία μονού παράγοντα και ελέγχου. Η ενεργοποίηση της πρωτεΐνης ρ53 παίζει έναν κρίσιμο ρόλο στον έλεγχο του καρκινικού κυττάρου απόκριση σε χημειοθεραπευτικούς παράγοντες και παράγοντες προκαλούν βλάβη στο DNA. ρ21 και GADD45, κατάντη τελεστές της ρ53, ενεργοποιήθηκαν σε συνδυασμό θεραπεία απόπτωσης που παράγουν σε TC-1 κύτταρα όγκου. Αυτά τα αποτελέσματα υποδεικνύουν ότι η απόπτωση μπορεί να διαμεσολαβούνται μέσω της οδού σηματοδότησης ρ53 μέσω πάνω ρύθμιση προαποπτωτικών πρωτεϊνών.

Κατά τη διάρκεια της PDT, ενδοκυτταρική εξάντληση του οξυγόνου και κατέρρευσε αιμοφόρων αγγείων θα μπορούσαν να επάγουν ενδοκυτταρική υποξία και αυτό θα μπορούσε να ρυθμίζουν το επίπεδο της έκφρασης του VEGF για την κατάλυση της αγγειογένεσης [25]. Πολλές μελέτες επί PDT έχουν προσπαθήσει να αυξήσει την αποτελεσματικότητα αυτής της μεθόδου με την υποστήριξη της δημιουργίας ενδοκυττάριων ROS, ή με την εκτέλεση αυτής της μεθόδου σε συνδυασμό με διάφορους αναστολείς της αγγειογένεσης, όπως COX-2, ΜΜΡ, ή VEGF [9], [ ,,,0],26] – [31]. Οι ενώσεις αρσενικού χρησιμοποιούνται σήμερα ως θεραπευτικοί παράγοντες για την οξεία λευχαιμία και διάφορους συμπαγείς όγκους, και έχουν επίσης αναφερθεί για τη δημιουργία ROS και αναστέλλουν την έκφραση του VEGF [17], [19]. Σε αυτή τη μελέτη, η αγγειακή διαταραχή επίδραση του As

4O

6 προσδιορίσθηκε με Hoechst33342 αιμάτωσης και χρώση ανοσοϊστοχημείας CD31. Αίμα περιοχή αιμάτωσης μειώθηκε γρήγορα μετά Όπως

4O

6 θεραπείας. Από τη χρονική στιγμή 3 ώρες, το κεντρικό τμήμα των όγκων εξαφανίστηκε σε σχέση με την δραστηριότητα αιμάτωσης και, τέλος, σχεδόν κανένα σήμα θα μπορούσε να ανιχνευθεί σε ολόκληρη την περιοχή του όγκου, ακόμη και την εξωτερική άκρη. Είναι ενδιαφέρον ότι, η μείωση αυτή της περιοχής διάχυσης ανακτήθηκε από το χρονικό σημείο 24 ώρες, και ο φθορισμό εμφανίστηκε από την εξωτερική άκρη σαφώς στις 48 και 72 ώρες. Ακόμη και αν η αιμάτωση φάνηκε να ανακτηθεί από το εξωτερικό άκρο 72 ώρες μετά την επεξεργασία, δεν ανιχνεύτηκε κανένα σήμα από το εσωτερικό των όγκων. Αυτά τα δεδομένα έδειξαν ότι παρατηρήθηκαν πολύ πιο εντατική μικροαγγείων ανοσοαντιδραστικά σε ιστούς όγκων από ποντικούς που υπέστησαν αγωγή με PBS, αλλά λίγο χρώση CD31 ήταν παρούσα στην κεντρική περιοχή των ιστών όγκων από ποντικούς που υπέστησαν αγωγή με Όπως

4O

6. Τα αποτελέσματα απηχούν αυτά των μελετών στις οποίες συμμετείχαν Όπως

2O

3 και Conbretastatin Α-4 [32], [33]. Όπως

2O

3 μειωμένη αρτηριακή αιμάτωση σε σχέση με τους ελέγχους μέχρι 6 ώρες μετά Όπως

2O

3 θεραπεία με κάποια ανάκτηση στις 24 ώρες [32], καθώς επίσης και CA-4-Ρ, 24 h μετά τη θεραπεία για όγκους P22 αγγειακές λειτουργίες εμφανίζονται μερική ανάκτηση [33]. Ως εκ τούτου, στην παρούσα μελέτη, χρησιμοποιήσαμε μία από τις ενώσεις του αρσενικού, δηλ Όπως

4O

6, σε συνδυασμό με τη μέθοδο της PDT για τη διερεύνηση της αυξανόμενη επίδραση κατά των όγκων και επίσης την ενδοκυτταρική μονοπάτια σηματοδότησης του. Αυτά τα δεδομένα έδειξαν ότι η επίδραση της συνδυαστική θεραπεία για την VEGF και των συναφών οδών ενισχύθηκαν με τις εκτιμήσεις του σχετιζόμενου με τον όγκο αγγείωση στο ζωικό μοντέλο και δεικτών αγγειογένεσης σε αλλοιώσεις όγκου.