Αφηρημένο

Μελέτη

Για να διερευνηθούν οι συγκεκριμένοι μηχανισμοί με τους οποίους Golgi φωσφοπρωτεΐνη 3 (GOLPH3) επηρεάζει την εξέλιξης του καρκίνου του στομάχου και να διερευνήσει την κλινική του σημασία.

Μέθοδοι

Ανοσοϊστοχημική ανάλυση χρησιμοποιήθηκε για να αξιολογήσει τις συσχετίσεις μεταξύ GOLPH3, φωσφορυλιωμένη mTOR (ρ-mTOR), φωσφορυλιωμένου Akt (ρ-Akt) , φωσφορυλιωμένη p70S6 (p-p70S6), φωσφορυλιωμένη 4Ε-BP1 (p-4E-BP1) και οι κλινικοπαθολογοανατομικές χαρακτηριστικά του καρκίνου του στομάχου. Τα επίπεδα έκφρασης του mRNA της GOLPH3, mTOR, Akt, p70S6 και 4Ε-ΒΡ1 σε καρκίνο του στομάχου, καρκίνωμα γειτονικών και αντιστοιχισμένο φυσιολογικό ιστό αναλύθηκαν με χρήση RT-PCR. Κηλίδωση Western χρησιμοποιήθηκε για να προσδιοριστεί η πρωτεΐνη έκφρασης GOLPH3, ρ-mTOR, ρ-Akt, ρ-p70S6 και ρ-4E-ΒΡ1 σε ιστούς.

Αποτελέσματα

επίπεδα πρωτεΐνης υψηλή έκφραση του GOLPH3, π-ΑΚΤ, π-mTOR, p70S6, π-4E-BP1 συσχετίστηκαν θετικά με ιστολογική βαθμό (

σ

& lt? 0.05), το βάθος της εισβολής (

σ

& lt? 0,05 ), μακρινή μετάσταση (

σ

& lt? 0,05) και τη συμμετοχή των λεμφαδένων (

σ

& lt? 0,05). Σε σύγκριση με καρκίνωμα-δίπλα και σε συνδυασμό φυσιολογικούς ιστούς, τα επίπεδα έκφρασης του mRNA της GOLPH3, ΑΚΤ, mTOR, p70S6 και 4EBP1 στο γαστρικό καρκινικούς ιστούς ήταν σημαντικά υψηλότερα. Τα επίπεδα έκφρασης πρωτεΐνης του GOLPH3, ρ-ΑΚΤ, ρ-mTOR, ρ-p70S6 και ρ-4E-ΒΡ1 σε γαστρικό καρκινικούς ιστούς ήταν επίσης σημαντικά υψηλότερα από ό, τι σε καρκίνωμα γειτονικών και αντιστοιχισμένο φυσιολογικούς ιστούς. Μια ισχυρή θετική συσχέτιση παρατηρήθηκε μεταξύ GOLPH3, π-mTOR, π-p70S6 και την έκφραση p-4EBP1 (

r

= 0.410, 0.303 και 0.276, αντίστοιχα,

σ

& lt? 0.05), αλλά δεν παρατηρήθηκε σημαντική συσχέτιση μεταξύ της έκφρασης GOLPH3 και p-Akt.

Συμπεράσματα

το επίπεδο έκφρασης GOPLH3 συσχετίζεται ιδιαίτερα με Akt /mTOR σηματοδότησης στον ανθρώπινο γαστρικό δείγματα καρκίνου. GOLPH3 συνδυασμό με την ενεργοποίηση σηματοδότησης Akt /mTOR μπορεί να διαδραματίσει σημαντικό ρόλο στην ανάπτυξη, τη διαφοροποίηση, την εισβολή και τη μετάσταση του καρκίνου του στομάχου

Παράθεση:. Peng J, Fang Υ, Tao Υ, Li K, Su T, Νονγκ Y, et al. (2014) Μηχανισμοί GOLPH3 συνδεδεμένων με την εξέλιξη του καρκίνου του στομάχου: μια προκαταρκτική μελέτη. PLoS ONE 9 (10): e107362. doi: 10.1371 /journal.pone.0107362

Επιμέλεια: Yuan-Σύντομα Ho, Ταϊπέι Ιατρικό Πανεπιστήμιο, την Ταϊβάν

Ελήφθη: 13 του Ιούνη 2014? Δεκτές: 7 του Αυγούστου του 2014? Δημοσιεύθηκε: 6 Οκτ, 2014

Copyright: © 2014 Peng et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα:. Η συγγραφείς επιβεβαιώνουν ότι όλα τα δεδομένα που διέπουν τα ευρήματα είναι πλήρως διαθέσιμα χωρίς περιορισμούς. είναι διαθέσιμα από το χειρόγραφο και τα στοιχεία όλα τα δεδομένα

Χρηματοδότηση:. Η μελέτη αυτή χρηματοδοτήθηκε από το Ίδρυμα Ερευνών του Guangxi Υγείας κατάλληλης τεχνολογίας και Έργων Ανάπτυξης (αριθμός Grant: S201415-01). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Αν και παγκόσμιες στατιστικές δείχνουν ότι γαστρικό καρκίνο (GC) είναι η τέταρτη πιο κοινή μορφή καρκίνου στους άνδρες και η πέμπτη πιο κοινή μορφή καρκίνου στις γυναίκες, η θνησιμότητα από καρκίνο του στομάχου κατατάσσεται δεύτερος μετά τον καρκίνο του πνεύμονα [1]. Η παγκόσμια συχνότητα εμφάνισης καρκίνου του στομάχου έχει μειωθεί από το Δεύτερο Παγκόσμιο Πόλεμο [2]. Ωστόσο, στις αναπτυσσόμενες χώρες, όπως η Κίνα, η νοσηρότητα και η θνησιμότητα του καρκίνου του στομάχου παρέμειναν υψηλά. Γαστρικό θεραπεία του καρκίνου έχει βελτιωθεί τα τελευταία χρόνια, αλλά οι περισσότεροι ασθενείς εξακολουθούν να διαγνωστεί με προχωρημένο καρκίνο του στομάχου, συχνά συμπεριλαμβανομένης της εισβολής και μακρινή μετάσταση, οδηγώντας σε μη ικανοποιητικό ρυθμό αποτέλεσμα της θεραπείας. Επειδή γαστρικό καρκίνο παρουσιάζει μια σημαντική απειλή για την ανθρώπινη υγεία και ζωή, είναι σημαντικό να κατανοήσουμε την παθογένεση του καρκίνου του στομάχου κατά τη διαδικασία της ογκογένεσης, εισβολή και τη μετάσταση να καθοδηγήσει την έγκαιρη διάγνωση και θεραπεία.

Είναι κοινώς αποδεκτό ότι σχηματισμός όγκου περιλαμβάνει την απορρύθμιση πολλών ογκογονιδίων, ογκοκατασταλτικά γονίδια και τα γονίδια της μετάστασης που σχετίζονται Golgi φωσφοπρωτεΐνη 3 (GOLPH3), η οποία είναι επίσης γνωστή ως GPP34, GMx33, ή MIDAS, είναι μία πρωτεΐνη μεμβράνης 34-kD που ταυτοποιήθηκε αρχικά στον ποντικό συσκευής Golgi από πρωτεομική ανάλυση [3]. GOLPH3 ανήκει στην οικογένεια πρωτεϊνών μήτρας Golgi, το οποίο διατηρείται σε υψηλό βαθμό από τους ζυμομύκητες στον άνθρωπο [4]. Μετά GOLPH3 έχει μεταφραστικά τροποποιημένο, είναι δυναμικά συνδέεται με την αρνητική μήτρα Golgi, ταχέως μεταφέρονται μέσω του δικτύου trans-Golgi (TGN) στο κυτταρόπλασμα, και κατανεμήθηκε σε κυστίδια μεμβράνης πλάσματος και ενδοκρινή κύτταρα [4]. Αρκετές μελέτες έχουν δείξει ότι GOLPH3 εμπλέκεται στην προχωρητική και οπισθοδρομική διακίνησης Golgi, την ανακύκλωση του υποδοχέα, και γλυκοζυλίωση από τη συσκευή Golgi στη μεμβράνη του πλάσματος? GOLPH3 παίζει επίσης ένα ρόλο στην κυτταροσκελετική αλληλεπιδράσεις και συντήρηση της δομής Golgi [4] – [7]. Scott et al. εντοπίστηκε για πρώτη φορά την ογκογόνο ρόλο του GOLPH3 αποκαλύπτοντας σημαντικό ρόλο της στην κυτταρική διαφοροποίηση και τον πολλαπλασιασμό του όγκου και η παρουσία της σε πολλές συμπαγών καρκίνων [8]. Είναι ενδιαφέρον ότι, κάποιες μελέτες έχουν δείξει ότι GOLPH3 ρυθμίζει τα καρκινικά κύτταρα με την ενίσχυση στόχου της ραπαμυκίνης στα θηλαστικά (mTOR) δραστηριότητα. mTOR είναι μια πρωτεϊνική κινάση σερίνης /θρεονίνης και ένα κλειδί ολοκληρωτής κινάσης (RTK-ΡΙ3Κ) οδών-3 φωσφατιδυλ-ινοσιτόλη γνωστό ότι ρυθμίζει την κυτταρική ανάπτυξη, τον πολλαπλασιασμό και την επιβίωση σε ανθρώπινα καρκινικά κύτταρα [9] – [10]. Πολλές μελέτες ερευνούν τη σχέση μεταξύ της GOLPH3 και αρκετών συμπαγών καρκίνων Ωστόσο, δεν υπάρχουν επαρκή στοιχεία που να υποστηρίζουν την υπόθεση ότι η έκφραση GOLPH3 συνδέεται με την ανθρώπινη γαστρικού εξέλιξη του καρκίνου και την πρόγνωση και τη μηχανιστική βάση με την οποία GOLPH3 επηρεάζει την ογκογένεση, εισβολή και μετάσταση του καρκίνου του στομάχου παραμένει ασαφής. Σε αυτή τη μελέτη, ερευνήσαμε την κλινική έννοιες της GOLPH3 και AKT /mTOR σηματοδότησης σε καρκίνο του στομάχου. Εν τω μεταξύ, ανακαλύψαμε τη σχέση GOPLPH3 και Akt /mTOR σηματοδότηση σε γαστρικό καρκίνο για να αποκαλύψει τον πιθανό ρόλο των GOLPH3 στη ρύθμιση mTOR μεσολάβηση γαστρικό καρκίνο ογκογένεσης, εισβολή και τη μετάσταση.

Υλικά και Μέθοδοι

Ηθικοί κανόνες

Όλες οι διαδικασίες μελέτης εξετάστηκαν και εγκρίθηκαν από το Διοικητικό συμβούλιο Θεσμικών Δεοντολογίας αναθεώρηση του πρώτου Affiliated Νοσοκομείο Guangxi Ιατρικό Πανεπιστήμιο και διεξάγονται σύμφωνα με τις αρχές που διατυπώνονται στη Διακήρυξη του Ελσίνκι. Ενημερωμένη συγκατάθεση εξαιρούνται από το διοικητικό συμβούλιο λόγω των φρέσκα δείγματα χειρισμός και ανώνυμα, σύμφωνα με ηθικά και νομικά πρότυπα.

δείγματα ιστών και κλινικά δεδομένα επιλογής

Τα δείγματα φρέσκου ιστού συλλέχθηκαν από ογδόντα ασθενείς με γαστρικό καρκίνο που υποβλήθηκαν σε χειρουργική θεραπεία στην Πρώτη Ενταγμένο Νοσοκομείο Guangxi Ιατρικό Πανεπιστήμιο, κατά την περίοδο από τον Ιανουάριο του 2012 έως Ιανουαρίου 2013. καρκινικά και καρκίνωμα-γειτονικούς ιστούς (απόσταση 3 cm από τον καρκίνο) και σε συνδυασμό φυσιολογικούς ιστούς ελήφθησαν από κάθε ασθενή , και ο ασθενής διαγνώστηκε ανεξάρτητα από δύο έμπειρους παθολόγους, σύμφωνα με την αμερικανική μεικτής επιτροπής σχετικά με τα κριτήρια του καρκίνου [11]. Πλήρης αρχική κλινικά δεδομένα ήταν διαθέσιμα για ασθενείς που διαγνώστηκαν με καρκίνο του στομάχου. Η ομάδα περιλάμβανε 36 γυναίκες και 44 άνδρες, με μέσο όρο ηλικίας 55,4 ± 13,1 χρόνια (εύρος 27 έως 75 ετών). Πρόσθετα χαρακτηριστικά των ασθενών παρουσιάζονται στον Πίνακα 1, Πίνακα 2 και Πίνακα 3. Οι ασθενείς που λαμβάνουν χημειοθεραπεία ή ακτινοθεραπεία πριν την εγχείρηση ή που είχαν ιστορικό άλλων όγκων αποκλείστηκαν. Στις ακόλουθες μελέτες, ένα μέρος του δείγματος που λαμβάνονται κατά τη διάρκεια της χειρουργικής επέμβασης έγινε αμέσως καταψύχθηκαν ταχέως σε υγρό άζωτο και στη συνέχεια αποθηκεύεται στους -80 ° C, και ένα τμήμα σταθεροποιήθηκε σε 10% ρυθμισμένη φορμαλίνη για 24 ώρες και ενσωματωμένα σε παραφίνη.

Η

Ανοσοϊστοχημεία

δείγματα εγκλεισμένα σε παραφίνη κόπηκαν σε τομές σε 3-μm πάχους τομές από τα καρκινικά, δείγματα φυσιολογικού ιστού καρκινώματος γειτονικών και αντιστοιχισμένο και τοποθετημένα σε γυαλί διαφάνειες. Οι τομές αρχικά ψήθηκαν στους 65 ° C για 2 ώρες. Στη συνέχεια, οι τομές απαλλάχθηκαν από την παραφίνη σε 100% ξυλόλιο και επανυδατώθηκαν σε μια σειρά κατερχόμενο αιθανόλης (100%, 90%, 80%, και 70% αιθανόλη) και απεσταγμένο νερό σύμφωνα με πρότυπα πρωτόκολλα. Στη συνέχεια, οι τομές εμποτισμένο στο κιτρικό ρυθμιστικό αντιγονική ανάκτηση, θερμάνθηκε σε ένα αυτόκλειστο, και αφέθηκε να ψυχθεί σε θερμοκρασία δωματίου. Μετά οι τομές πλύθηκαν σε PBS τρεις φορές για πέντε λεπτά, 3% υπεροξείδιο του υδρογόνου προστέθηκαν για να εμποδίσει την ενδογενή δραστηριότητα υπεροξειδάσης και η μη ειδική δέσμευση αντιγόνου σε θερμοκρασία δωματίου για 20 λεπτά. Μετά την πλύση και πάλι με PBS, οι τομές επωάστηκαν με ένα ειδικό αντίσωμα σε ένα υγρό θάλαμο όλη τη νύκτα στους 4 ° C. Τα ακόλουθα πρωτεύοντα αντισώματα χρησιμοποιήθηκαν: αντίσωμα GOLPH3 στο 1:100, ρ-mTOR αντίσωμα σε 1:200, ρ-Akt στο αντίσωμα 1:200, ρ-p70S6 αντισώματος σε 1:100, και ρ-4E-BP1 αντίσωμα σε 1 :200. Για τον αρνητικό έλεγχο, το πρωτογενές αντίσωμα αντικαταστάθηκε με PBS, και τα υπόλοιπα στάδια πραγματοποιήθηκαν όπως περιγράφηκε προηγουμένως. Τα δείγματα μετά πλύθηκαν με PBS, και ένα παράγοντα πολυμερές ενισχυτικό προστέθηκε σε τμήματα σε θερμοκρασία δωματίου για 20 λεπτά. Μετά την πλύση, οι τομές ιστού υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με IgG HRP-tagged κατσίκας αντι-κουνελιού, βιοτινυλιωμένο αντι-ανοσοσφαιρίνης κουνελιού, και στρεπταβιδίνη υπεροξειδάσης αντιδραστήριο για 30 λεπτά. Οι τομές στη συνέχεια οπτικοποιήθηκαν σε φρέσκο ​​διάλυμα 3-3 ‘διαμινοβενζιδίνη, αιματοξυλίνης, και 0.1% υδροχλωρικό οξύ (για να βοηθήσει διαχωρισμού χρωμάτων). Τέλος, τα πλακίδια τοποθετούνται σε ουδέτερο κόμμι και αναλύθηκαν με ένα μικροσκόπιο φωτεινού πεδίου.

Ο βαθμός ανοσοχρώση κάθε τμήματος ιστού αξιολογήθηκε ανεξάρτητα από δύο έμπειρους παθολόγους που ήταν τυφλός για κλινικά δεδομένα των ασθενών. Τα επίπεδα έκφρασης πρωτεΐνης αξιολογήθηκαν χρησιμοποιώντας ένα σύστημα ημι-ποσοτική βαθμολόγηση με βάση το συνολικό ποσοστό των θετικώς χρωματισμένων κυττάρων του όγκου και την ένταση χρώσης. Το ποσοστό των θετικώς χρωματισμένων κυττάρων βαθμολογήθηκε σύμφωνα με τα ακόλουθα κριτήρια: 0 (≤5% θετικά καρκινικά κύτταρα βάφονται), 1 (6-25% θετικών καρκινικών κυττάρων κηλιδώνονται), 2 (26-50% θετικά κύτταρα όγκου χρωματίζονται), 3 (≥51% θετικά καρκινικά κύτταρα βάφονται). Η ένταση χρώσης βαθμολογήθηκε χρησιμοποιώντας μια κλίμακα από 0 έως 3 ως εξής: 0 (καμία χρώση), 1 (ασθενής χρώση = ανοιχτό κίτρινο), 2 (μέτρια χρώση = κίτρινο-καφέ), 3 (ισχυρή χρώση = καφέ). Για την ανάλυση, τα συνολικά αποτελέσματα & lt? 4 ορίστηκαν ως χαμηλή έκφραση, και οι βαθμολογίες ≥4 ορίστηκαν ως υψηλή έκφραση

Η αντίστροφη μεταγραφή πολυμεράσης

αλυσιδωτής αντίδρασης

Το συνολικό RNA εξήχθη από φρέσκα ιστούς χρήση. αντιδραστήριο ΤΚΙζοΙ (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Οι RT-PCR εκκινητών που χρησιμοποιήθηκαν στη μελέτη σχεδιάστηκαν και συντέθηκαν από Σαγκάη Sangon Βιολογικής Μηχανικής Τεχνολογίας & amp? Services Co. Ltd. β-ακτίνης χρησιμοποιήθηκε ως εσωτερική αναφορά. Πληροφορίες σχετικά με τις αλληλουχίες εκκινητή που χρησιμοποιήθηκαν στη μελέτη παρουσιάζεται στον Πίνακα 4. Η RT-PCR πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας μια μέθοδο δύο σταδίων. Ένα μικρογραμμάριο του συνολικού RNA μεταγράφηκε αντίστροφα σε cDNA σε 37 ° C για 60 λεπτά και 85 ° C για 5 s. PCR πραγματοποιήθηκε στη συνέχεια σύμφωνα με τις ακόλουθες συνθήκες: θέρμανση στους 95 ° C για 5 λεπτά? 40 κύκλους αποδιάταξης για 30 δευτερόλεπτα στους 95 ° C, ανόπτηση στους 60 ° C για 30 s, και επέκταση για 30 s στους 72 ° C? και τελική επέκταση στους 72 ° C για 7 λεπτά πριν την αντίδραση φυλάχθηκε στους 4 ° C. Επτά μικρογραμμάρια του τελικού προϊόντος PCR φορτώθηκαν σε ένα πήκτωμα αγαρόζης 2% για ηλεκτροφόρηση και ανάλυση απεικόνισης κάτω από υπεριώδες φως. Η ποσότητα πρόγραμμα λογισμικού One (Bio-Rad, Hercules, CA, USA) χρησιμοποιήθηκε για να μετρήσει τις ζώνες και το β-ακτίνης γκρι αξία των προϊόντων PCR.

Η

κηλίδωση Western

Τα καρκινικά, δείγματα φυσιολογικού ιστού καρκινώματος γειτονικών και αντιστοιχισμένο ζυγίστηκαν και αλεσμένος σε μικρά κομμάτια σε υγρό άζωτο. Προ-παγωμένο PBS χρησιμοποιήθηκε για την πλύση των δειγμάτων, τα οποία στη συνέχεια φυγοκεντρήθηκαν στα 5000 rpm στους 4 ° C για 5 λεπτά. Μετά από πλύση τρεις φορές με PBS, προστέθηκαν προ-ψύξη φωσφορικό ρυθμιστικό διάλυμα λύσης και PMSF. Το δείγμα υποβλήθηκε σε υπερήχους στους 180 W στους 4 ° C για 5 λεπτά και φυγοκεντρήθηκε στα 1000 rpm στους 4 ° C για 5 λεπτά? Το υπερκείμενο στη συνέχεια απομακρύνθηκε αμέσως, και η συγκέντρωση πρωτεΐνης προσδιορίστηκε ποσοτικά με τη δοκιμασία Bradford χρησιμοποιώντας εμπορικό kit αγοράστηκε από την Bio-Rad Laboratories. Τα υπερκείμενα αναμείχθηκαν με ρυθμιστικό διάλυμα φόρτωσης και βράζεται στους 100 ° C για 5 λεπτά για να μετουσιώσει τις πρωτεΐνες. Ίσες ποσότητες κάθε δείγματος φορτώθηκαν σε φρεάτια ενός 4-12% δωδεκυλοθειικού πολυακρυλαμιδίου γέλη νάτριο, ηλεκτροφορήθηκε, και μεταφέρθηκε σε μία μεμβράνη φθοριούχου πολυβινυλιδενίου. Η μεμβράνη μπλοκαρίστηκε με 5% ρυθμιστικό BSA για 1 ώρα με ανακίνηση και στη συνέχεια επωάστηκαν στους 4 ° C όλη τη νύκτα με τις μεμονωμένες πρωτογενή αντισώματα αραιωμένα σε TBST. Τα ακόλουθα πρωτεύοντα αντισώματα χρησιμοποιήθηκαν: πολυκλωνικό κουνελιού αντι-ανθρώπινο GOLPH3 (1:1000, Abcam plc, Cambridge, UK), πολυκλωνικά κουνελιού αντι-ανθρώπινης ρ-p70S6 (Thr389) (1:1000, Cell Signaling Technology, Inc. Beverly, ΜΑ, USA), πολυκλωνικά κουνελιού αντι-ανθρώπινης ρ-Akt (Ser473) (1:1000, Cell Signaling Technology, Inc. Beverly, ΜΑ, USA), μονοκλωνικά αντι-ανθρώπινης ρ-mTOR (Ser2448) (1:1000, Cell Signaling Technology, Inc. Beverly, ΜΑ, USA) και μονοκλωνικά αντι-ανθρώπινης ρ-Akt (1:1000, Cell Signaling Technology, Inc. Beverly, ΜΑ, USA). Η μεμβράνη στη συνέχεια πλύθηκε με TBST πέντε φορές για πέντε λεπτά η κάθε μία, και χρένο συζευγμένο με υπεροξειδάση κατσίκας αντι-κουνελιού IgG δευτερεύον αντίσωμα (Santa Cruz Biotechnology, SC-2004) προστέθηκε πριν από την επώαση σε θερμοκρασία δωματίου για 1,5 ώρες με ανακίνηση. β-ακτίνη χρησιμοποιήθηκε ως ένας εσωτερικός έλεγχος. Μετά από πλύση με TBST τρεις φορές για πέντε λεπτά, η ζώνη ενδιαφέροντος ανιχνεύτηκε χρησιμοποιώντας το ECL προνομιακή κηλίδωση Western κιτ (Σαγκάη Pufei Biotechnology, Σαγκάη, Κίνα), και το λογισμικό ανάλυσης Ποσότητα One (Bio-Rad, CA, USA) χρησιμοποιήθηκε να αξιολογήσει τα δεδομένα πυκνότητας.

Στατιστικές αναλύσεις

Όλα τα στατιστικές αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν με τη χρήση του στατιστικού πακέτου για τις Κοινωνικές Επιστήμες, έκδοση 17.0 (SPSS Inc., Chicago, IL, USA). Οι RT-PCR και κηλίδωση Western αποτελέσματα παρουσιάζονται ως μέσος όρος ± SE. Μια ANOVA μονόδρομη που ακολουθείται από τις δοκιμές πολλαπλής LSD εμβέλειας χρησιμοποιήθηκε για να αναλυθούν οι διαφορές μεταξύ των ομάδων. Οι σχέσεις μεταξύ GOLPH3 και p-mTOR, π-Akt, π-4E-BP, και τα επίπεδα έκφρασης ρ-p70S6 εκτιμήθηκαν με τη χρήση συντελεστή συσχέτισης του Pearson. Οι συσχετίσεις μεταξύ της έκφρασης πρωτεΐνης και κλινικοπαθολογικών μεταβλητές αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας το τεστ chi-τετράγωνο. P & lt? 0,05 (two-tailed) χρησιμοποιήθηκε ως επίπεδο στατιστικής σημαντικότητας

Αποτελέσματα

Οι σχέσεις μεταξύ των κλινικοπαθολογοανατομικών μεταβλητές και τα επίπεδα έκφρασης της πρωτεΐνης με ανοσοϊστοχημεία

Ανοσοϊστοχημική ανίχνευση. έδειξε ότι GOLPH3, ρ-Akt, και ρ-4E-BP1 ήταν πιο κοινά στο κυτταρόπλασμα, και φωσφορυλιωμένη m-TOR (ρ-mTOR) ήταν επίσης παρούσα στον πυρήνα σε χαμηλό επίπεδο. Ωστόσο, η χρώση ρ-p70S6 παρατηρήθηκε μόνο στο κυτταρόπλασμα. GOLPH3 και φωσφορυλιωμένες πρωτεΐνες /mTOR μονοπάτι Akt ήταν περισσότερο εντόνως εκφρασμένο σε γαστρικό καρκίνο από ομάδα στον ιστό παρα-καρκίνωμα και αντιστοιχισμένο κανονική ομάδες βλεννογόνου (Σχήμα 1, Πίνακας 5). Επιπλέον, οι σχέσεις μεταξύ της έκφρασης κλινικοπαθολογοανατομικών μεταβλητών και πρωτεΐνη εξετάστηκαν και συνοψίζονται στον Πίνακα 1, Πίνακα 2 και Πίνακα 3. Μία στατιστική ανάλυση αποκάλυψε ότι η θετική ρυθμό έκφρασης του GOLPH3 στο γαστρικό καρκίνο ομάδα συσχετίζεται έντονα με ιστολογικές Βαθμός (

σ

= 0,011), το βάθος της εισβολής (

σ

= 0,007), μακρινή μετάσταση (

σ

= 0,002), και τη συμμετοχή λεμφαδένων (

p

& lt? 0,004), ενώ δεν συσχετίζονται σημαντικά με την ηλικία ή το φύλο (

σ

= 0,801 και 0,833, αντίστοιχα). Είναι ενδιαφέρον ότι, τα υψηλά επίπεδα έκφρασης του ρ-Akt, ρ-mTOR, ρ-4Ε-ΒΡ1 και ρ-p70S6 παρατηρήθηκαν να είναι συνεπής με την υψηλή έκφραση GOLPH3

Α:. Ο γαστρικός καρκίνος ομάδα Β: Το καρκίνωμα -adjacent ομάδα ιστού C: Η αντιστοίχιση κανονική ομάδα ιστού. Αντιπροσωπευτικές τομές ιστού από το γαστρικό καρκίνο ομάδα (n = 80), την ομάδα καρκίνωμα-γειτονικό ιστό (n = 80) και το αντιστοιχισμένο κανονική ομάδα ιστού (n = 80). Αποτελέσματα Η ανοσοϊστοχημεία έδειξε ότι ο GOLPH3, ρ-Akt, ρ-mTOR και ρ-4E-BP1 ήταν περισσότερο εκφράζονται στον πυρήνα, η ρ-p70S6 ήταν περισσότερο εκφράζονται στο κυτταρόπλασμα. Η GOLPH3, φωσφορυλιωμένη μονοπατιού Akt-mTOR σηματοδότηση, π-4E-BP1 και π-p70S6 ήταν άκρως εκφράζονται σε γαστρικό ομάδες του καρκίνου.

Η

έκφρασης του mRNA της GOLPH3 και mTOR σηματοδότησης γονίδια μονοπάτι που σχετίζονται με με RT-PCR

εκχυλίζεται RNA από καρκίνο του στομάχου, ιστό παρα-καρκίνωμα, και συμφωνημένα δείγματα φυσιολογικού ιστού από ογδόντα ασθενείς με καρκίνο του στομάχου. Τα επίπεδα έκφρασης του GOLPH3 και mTOR σηματοδότησης γονίδια οδού που σχετίζονται, μεταξύ των οποίων Akt, mTOR, παράγοντα έναρξης ευκαρυωτικό μετάφρασης 4Ε δεσμευτική πρωτεΐνη 1 (4Ε-ΒΡ1), και πρωτεΐνη ρ70 ριβοσωμική S6 κινάση (p70S6), αξιολογήθηκαν σε τρεις ομάδες με RT -PCR. Τα επίπεδα έκφρασης αυτών των γονιδίων σε γαστρικό καρκίνωμα ήταν υψηλότερες από ό, τι σε ιστούς καρκινώματος γειτονικών και σημαντικά υψηλότερη από ό, τι σε ζεύγη κανονικό γαστρικό ιστούς. Η μέση πυκνότητα και την κατανομή έκφραση GOPLH3, mTOR, Akt, 4Ε-ΒΡ1 και p70S6 φαίνονται στο Σχήμα 2. Μία στατιστική ανάλυση αποκάλυψε ότι τα επίπεδα έκφρασης GOLPH3 και mTOR σηματοδότησης γονίδια οδού που σχετίζονται ήταν σημαντικά διαφορετικές σε διαφορετικές γαστρικό ιστούς (

σ

& lt? 0,05)

καρκίνο:. Το γαστρικό καρκίνο ομάδα (n = 80)? paracancerous: Η paracancerous ομάδα ιστού (n = 80)? κανονική: Η αντιστοίχιση φυσιολογικό γαστρικό βλεννογόνο ομάδα (n = 80). Α, Β, C, D και Ε: Τα επίπεδα mRNA του GOPLH3, Akt, mTOR, 4Ε-ΒΡ1, p70S6 στα διάφορα μετράται με RT-PCR, αντίστοιχα. F, G, H, I και J: πυκνομετρική ποσοτικοποίηση της έκφρασης GOLPH3, Akt, mTOR, 4Ε-ΒΡ1 και p70S6 mRNA σε διάφορους ιστούς, αντίστοιχα. Η έκφραση mRNA ήταν σημαντικά διαφορετική μεταξύ τους και κορυφώθηκε σε καρκίνο. Τα δεδομένα παρουσιάζονται ως μέσος όρος ± SE. *

σ

& lt? 0,05 έναντι του καρκίνου,

#

σ

& lt?. 0,05 έναντι paracancerous

Η

Πρωτεΐνη έκφραση GOLPH3 και mTOR σηματοδότησης που σχετίζονται μονοπάτι πρωτεΐνες με κηλίδωση Western

ανάλυση κηλίδωσης Western έδειξε ότι GOLPH3, ρ-mTOR, ρ-Akt1, ρ-4EB-P1 και ρ-p70S6 εκφράστηκαν επίσης στο γαστρικό καρκίνο, καρκίνωμα γειτονικών και αντιστοιχισμένο φυσιολογικό γαστρικό βλεννογόνο ομάδες. Είναι ενδιαφέρον ότι, μια προοδευτική αύξηση παρατηρήθηκε στις μέσες τιμές των προαναφερθέντων επιπέδων έκφρασης πρωτεΐνης από την αντιστοιχισμένη φυσιολογική ομάδα γαστρικό βλεννογόνο στο γαστρικό ομάδα καρκίνου (Σχήμα 3), και υπήρχε σημαντική διαφορά μεταξύ των ομάδων (

ρ

& lt? 0,05)

Α:. Τα επίπεδα πρωτεΐνης του GOPLH3, ρ-Akt, ρ-mTOR, ρ-4Ε-ΒΡ1 και π-p70S6 στα διάφορα μετράται με κηλίδωση Western. B, C, D, Ε και F: Η GOPLH3, ρ-Akt, ρ-mTOR, ρ-4Ε-ΒΡ1 και ρ-p70S6 επίπεδα πρωτεΐνης σε διαφορετικούς ιστούς, αντίστοιχα. Καρκίνος: Ο γαστρικός καρκίνος ομάδα (n = 80)? paracancerous: Η paracancerous ομάδα ιστού (n = 80)? κανονική: Η αντιστοίχιση φυσιολογικό γαστρικό βλεννογόνο ομάδα (n = 80). Τα δεδομένα παρουσιάζονται ως μέσος όρος ± SE. *

σ

& lt? 0,05 έναντι του καρκίνου,

#

σ

& lt?. 0,05 έναντι paracancerous

Η

συσχετίσεις μεταξύ της έκφρασης της GOLPH3 και σηματοδότηση σηματοδότησης πρωτεΐνες μονοπάτι που σχετίζονται

ανάλυση συσχέτισης

Pearson αποκάλυψε μία ισχυρή συσχέτιση μεταξύ της έκφρασης GOLPH3 και ότι του μονοπατιού σηματοδότησης (Πίνακας 6). Μία στατιστική ανάλυση έδειξε ότι οι στιγμή προϊόν συντελεστές συσχέτισης Pearson ήταν όλα θετικά στο γαστρικό ομάδα καρκίνου. Είναι ενδιαφέρον ότι, η έκφραση GOLPH3 συνδέθηκε έντονα με π-mTOR, π-4E-BP1 και π-p70S6 (

r

= 0,410, 0,203 και 0,128, αντίστοιχα,

σ

& lt? 0,05) έκφρασης , και μια θετική συσχέτιση μεταξύ GOLPH3 και p-Akt ήταν σχεδόν σημαντική (

σ

= 0,054). Εν τω μεταξύ, η ισχυρή συσχετίσεις παρατηρήθηκαν μεταξύ της έκφρασης της ρ-4Ε-ΒΡ1 και τις προαναφερθείσες πρωτεΐνες με την εξαίρεση της ρ-mTOR. Φωσφορυλιωμένη έκφραση mTOR επίσης συσχετίζεται θετικά με p-Akt έκφρασης (

r

= 0.521,

σ

= 0,027). έκφραση φωσφορυλιωμένη p70S6 επίσης συσχετίστηκε με την έκφραση του ρ-Akt (

r = 0,274

,

ρ

& lt? 0.001) και ρ-mTOR (

r = 0,451

,

σ

= 0,007).

η

Συζήτηση

Αν και η συχνότητα εμφάνισης του καρκίνου του στομάχου έχει μειωθεί τα τελευταία χρόνια [2], παραμένει μια σοβαρή απειλή για την ανθρώπινη υγεία . Οι περισσότεροι ασθενείς με γαστρικό καρκίνο διαγιγνώσκεται σε προχωρημένα στάδια και τείνουν να παρουσιάζουν εισβολή όγκου και μετάσταση. Κατά την τελευταία δεκαετία, δεν υπάρχουν μεγάλες βελτιώσεις έχουν επιτευχθεί όσον αφορά την έγκαιρη διάγνωση και θεραπεία του καρκίνου του στομάχου. Η κατανόηση της μοριακής βιολογίας υποκείμενο γαστρικού καρκίνου εξακολουθεί να απουσιάζει. Από το 2009, GOLPH3 έχει λάβει σημαντική προσοχή ως ογκογονίδιο. Αυτή η πρωτεΐνη εντοπίζεται στο κυτταροπλασματικό πρόσωπο του trans-Golgi και έχει στενό δεσμό με κακοήθεια [3], [8]. Μεγάλες μελέτες έχουν δείξει ότι η υπερέκφραση GOLPH3 συμβαίνει σε αρκετούς ανθρώπινους καρκίνους, συμπεριλαμβανομένων επιθηλιακό καρκίνωμα ωοθηκών, καρκίνωμα νεφρικών κυττάρων, πολύμορφο γλοιοβλάστωμα, οισοφαγικό καρκίνωμα πλακώδους κυττάρου, καρκίνο του στόματος και της γλώσσας [12] – [16]. Τα στοιχεία δείχνουν ότι GOLPH3 εμπλέκεται στην ογκογένεση και συσχετίζεται με κακή πρόγνωση. Επιπλέον, μία μελέτη ανέφερε ότι GOLPH3 υπερέκφραση συνδέεται με κακή κλινική έκβαση σε γαστρικών καρκίνων [17]. Ωστόσο, οι ακριβείς μηχανισμοί που βρίσκονται πίσω αυτή τη σχέση είναι ασαφείς, και ο ακριβής μοριακός μηχανισμός με τον οποίο GOLPH3 εμπλέκεται σε καρκίνο του στομάχου ογκογένεση, εισβολή και μετάσταση είναι ελάχιστα κατανοητή. Για τη διερεύνηση των δυνατοτήτων μοριακός μηχανισμός με τον οποίο GOLPH3 εμπλέκεται σε γαστρικό καρκίνο, χρησιμοποιήσαμε πρώτα ανοσοϊστοχημεία για τον εντοπισμό της έκφρασης GOLPH3 σε διαφορετικούς γαστρικό ιστούς. Βρήκαμε ότι GOLPH3 ήταν κυρίως εντοπισμένη στο κυτταρόπλασμα, και εκφράστηκε σε καρκίνο του στομάχου, παρα-καρκίνωμα και αντιστοιχισμένο φυσιολογικό γαστρικό ιστούς. Είναι ενδιαφέρον, τα ποσοστά έκφρασης υψηλής GOLPH3 ήταν 75,00% (60 από 80) σε γαστρικό καρκινικούς ιστούς, 43.75% (35 από 80) σε ιστούς καρκινώματος-δίπλα και 12,50% (10 από 80) σε φυσιολογικούς ιστούς, αντίστοιχα ( Πίνακας 5). Επιπλέον, GOLPH3 υπερ-έκφραση παρατηρήθηκε σε γαστρικό καρκινικό ιστό και ιδιαίτερα σχετίζεται με γαστρικό εισβολή καρκίνου και μετάσταση. Τα αποτελέσματά μας προτείνει ότι έκφραση υψηλού GOLPH3 ήταν σημαντικά σχετίζεται με ιστολογική Βαθμός (

σ

= 0,015), το βάθος της εισβολής (

ρ

& lt? 0.001), λεμφαδένα μετάσταση (

ρ

& lt? 0.001), και μακρινή μετάσταση (

σ

= 0,006) σε γαστρικό καρκινικούς ιστούς (Πίνακας 1). Επιπλέον, κηλίδωση Western και RT-PCR διεξήχθησαν για να αξιολογηθεί η έκφραση GOLPH3 στην πρωτεΐνη και τα επίπεδα mRNA. Είναι ενδιαφέρον ότι, τα αποτελέσματα ήταν παρόμοια με εκείνα που παρατηρήθηκαν στην ανάλυση ανοσοϊστοχημείας. Τα παραπάνω ευρήματα δείχνουν ότι αυξημένη έκφραση GOLPH3 είναι στενά συνδεδεμένες με την συχνότητα εμφάνισης του καρκίνου του στομάχου, και GOLPH3 μπορεί να εμπλέκεται στο γαστρικό εισβολή καρκίνου και μετάσταση.

Πρόσφατα, ένας αυξανόμενος αριθμός των μονοπατιών μεταγωγής σήματος έχουν αναφερθεί να συμμετέχουν στην εισβολή και μετάσταση όγκων. Θηλαστικών στόχος της ραπαμυκίνης (mTOR), που είναι μια κινάση σερίνης /θρεονίνης κατάντη της φωσφατιδυλοϊνοσιτόλης 3-κινάσης (ΡΙ3Κ) /Akt μονοπάτι σηματοδότησης και περιλαμβάνει mTORC1 (mTOR /RAPTOR) και mTORC2 (mTOR /RICTOR), ρυθμίζει τη σύνθεση πρωτεϊνών, κυτταρική πολλαπλασιασμός, τον κυτταρικό μεταβολισμό και διαφοροποίηση [18], [19]. Ενεργοποιούνται διαδοχικά mTORC1 ενεργοποιεί άμεσα κατάντη στόχους, συμπεριλαμβανομένων p70S6 κινάση (S6K) και παράγοντα ευκαρυωτικών έναρξης 4Ε-πρωτεΐνης δέσμευσης 1 (4Ε-ΒΡ1) και mTORC2 έχει δειχθεί ότι παίζουν έναν κρίσιμο ρόλο στη φωσφορυλίωση της Akt σε Ser473, με αποτέλεσμα την πλήρη ενεργοποίηση της Akt [20], [21]. Αν και Akt ενεργοποιεί άμεσα mTOR /RAPTOR, μπορεί επίσης άμεσα ή έμμεσα ενεργοποιήσετε το p70S6 κινάσης /4EBP1 οδό αυτή την οδό με φωσφορυλίωση της ογκοκατασταλτικό TSC2 [22]. Η οδός /mTOR Akt έχει δειχθεί ότι ενεργοποιείται συχνά σε διάφορους κακοήθεις όγκους, συμπεριλαμβανομένου του καρκίνου του μαστού, ουροθηλιακό καρκίνωμα, καρκίνο των ωοθηκών, του παγκρέατος νευροενδοκρινείς όγκους, τα ανθρώπινα μυελοβλάστωμα, το μελάνωμα, ο καρκίνος του ενδομητρίου και ηπατοκυτταρικό καρκίνωμα? Ως εκ τούτου, αυτή η οδός αντιπροσωπεύει μια πιθανή θεραπευτικό στόχο σε πολλούς καρκίνους [23] – [30]. Στη μελέτη μας, η RT-PCR και κηλίδωση Western αποκάλυψαν ότι τα επίπεδα του mRNA και η έκφραση της πρωτεΐνης του ρ-Akt, ρ-mTOR, ρ-4Ε-ΒΡ1 και π-p70S6 στο γαστρικό ομάδα του καρκίνου ήταν σημαντικά υψηλότερα από ό, τι στην παρα-καρκίνωμα ιστούς και αντιστοιχισμένο φυσιολογικό γαστρικό ομάδων ιστού (Σχήμα 2, Σχήμα 3). Για να προσδιορίσετε αν τα επίπεδα έκφρασης του p-Akt, π-mTOR, π-4E-BP1 και π-p70S6 συνδέθηκαν με κρίσιμες κλινικοπαθολογοανατομικές χαρακτηριστικά, εκτελέσαμε περαιτέρω αναλύσεις. Σε αυτή τη μελέτη, 81,25% των 80 ασθενών με καρκίνο του στομάχου είχαν υψηλή έκφραση ρ-mTOR, 77.50% είχαν υψηλή έκφραση ρ-4Ε-ΒΡ, 76.25% είχαν υψηλή ρ-p70S6 έκφραση, και μόνο 75,00% είχαν υψηλή ρ-Akt έκφραση (Πίνακας 5). Απροσδόκητα, μία ανοσοϊστοχημική ανάλυση αποκάλυψε ότι τα επίπεδα έκφρασης αυτών των εκφράσεων πρωτεΐνης συσχετίστηκαν σε σημαντικό βαθμό με το βάθος της εισβολής, λεμφαδένα και μακρινή μετάσταση, και ιστολογική βαθμού αλλά δεν συνδέθηκαν με το φύλο ή την ηλικία (Πίνακας 1, Πίνακας 2 και Πίνακας 3) . Αυτά τα αποτελέσματα υποδηλώνουν ότι η οδός /mTOR Akt ενεργοποιείται σε γαστρικό καρκίνο και μπορεί να παίζει ένα σημαντικό ρόλο στην ογκογένεση γαστρικό καρκίνο, εισβολή και μετάσταση.

Πρόσφατα, Scott et al. αποκάλυψε ότι GOLPH3 μπορεί να προωθήσει τον μετασχηματισμό των κυττάρων και την ανάπτυξη του όγκου με ιδιοσυστατικά ενεργοποίηση της οδού σηματοδότησης mTOR σε κύτταρα μελανώματος και ότι GOLPH3 διεγείρει την οδό σηματοδότησης μέσω mTOR mTORC1 και συμπλοκών mTORC2, προωθώντας έτσι την ανάπτυξη του όγκου των κυττάρων και τον πολλαπλασιασμό [8]. Ωστόσο, δεν είναι σαφές αν αυτό το φαινόμενο εμφανίζεται επίσης σε γαστρικό καρκινικούς ιστούς. Για τις γνώσεις μας, η μελέτη μας είναι η πρώτη να διερευνήσει την παθογένεση του GOLPH3 προωθούνται ογκογένεσης, εισβολή και τη μετάσταση του καρκίνου του στομάχου. Τα δεδομένα μας δείχνουν σημαντική θετική σχέση μεταξύ της έκφρασης GOLPH3 και π-mTOR, ρ-4Ε-ΒΡ1, και ρ-p70S6 (

r = 0,410

, 0.203 και 0.128, αντίστοιχα,

ρ

& lt? 0,05). Ωστόσο, η συσχέτιση μεταξύ της έκφρασης των GOLPH3 και p-Akt δεν ήταν σημαντική (

r

= 0.258,

σ

& gt? 0,05) (Πίνακας 6). Ειδικότερα, σημαντικά υψηλότερη έκφραση GOLPH3 συνοδεύτηκε από υψηλή έκφραση του ρ-mTOR, ρ-4Ε-ΒΡ1, και ρ-p70S6 στο γαστρικό καρκινικούς ιστούς, και η σχέση αυτή συσχετίστηκε σημαντικά με το βάθος της εισβολής, η ιστολογική ποιότητα, και λεμφαδένα και μακρινή μετάσταση. Τα αποτελέσματά μας αποκάλυψε διάφορες σχέσεις μεταξύ GOLPH3 και /mTOR σηματοδότησης πρωτεΐνες Akt, και τη θετική συσχέτιση μεταξύ GOLPH3 και p-Akt ήταν σχεδόν σημαντική. Οι συγκεκριμένες αιτίες αυτής της σχέσης μεταξύ GOLPH3 και p-Akt είναι ασαφής και θα πρέπει να διερευνηθεί περαιτέρω. Υποθέτουμε ότι το μέγεθος του δείγματος μπορεί να ήταν πάρα πολύ μικρό. Επιπλέον, GOLPH3 μπορεί να ενεργοποιούν κυρίως τον /mTOR μονοπάτι σηματοδότησης Akt μέσω του ενεργοποιημένου mTORC1 συγκρότημα και όχι το συγκρότημα mTORC2, με αποτέλεσμα p70S6 και 4Ε-BP1 φωσφορυλίωση, επηρεάζοντας έτσι τον καρκίνο του στομάχου. Αυτά τα αποτελέσματα υποδεικνύουν ότι GOLPH3 μπορεί να εμπλέκεται στην ογκογένεση γαστρικό καρκίνο, εισβολή και μετάσταση μέσω ανώμαλη ενεργοποίηση της Akt /mTOR μονοπάτι σηματοδότησης.

Εν κατακλείδι, η παρούσα μελέτη ανιχνεύεται τα υψηλά επίπεδα έκφρασης του GOLPH3, ρ-Akt, p-mTOR, π-4E-BP1 και p-p70S6 στο γαστρικό καρκίνο ομάδα έντονα η οποία συσχετίζεται με την ιστολογική βαθμό, το βάθος της εισβολής, μακρινή μετάσταση, και η συμμετοχή των λεμφαδένων από κλινικοπαθολογοανατομικών ανάλυση μεταβλητών και ανοσοϊστοχημεία. Επιπλέον, η έκφραση του GOPLH3 συσχετίζεται ιδιαίτερα με την ενεργοποίηση του μονοπατιού σηματοδότησης Akt /mTOR σε ανθρώπινο γαστρικό δείγματα καρκίνου. Με βάση αυτά τα αποτελέσματα, εικάζουν ότι GOLPH3 θα μπορούσαν να επηρεαστούν εξέλιξη και τη μετάσταση του καρκίνου του στομάχου μέσω της ενεργοποίησης του Akt /mTOR μονοπάτι σηματοδότησης. Επιπλέον, προτείνουμε ότι η αναστολή της έκφρασης των γονιδίων στο μονοπάτι σηματοδότησης GOLPH3 και mTOR μπορεί να αντιπροσωπεύει μία νέα στόχο για γαστρικό θεραπεία του καρκίνου. Τέλος, οι μηχανισμοί εισβολής και της μετανάστευσης των GOLPH3 στο γαστρικό καρκίνο χρειάζονται περαιτέρω έρευνα.