Abstract

Ιστορικό

Καρκίνος σχετιζόμενη ινοβλάστες, που αποτελείται από ενεργοποιημένων ινοβλαστών ή μυοϊνοβλάστες, βρίσκονται στο στρώμα που περιβάλλει συμπαγείς όγκους. Αυτές οι μυοϊνοβλάστες προάγουν εισβολή και τη μετάσταση των καρκινικών κυττάρων. Μηχανισμοί που ρυθμίζουν την ενεργοποίηση των ινοβλαστών και την έναρξη της εισβολής ογκογένεση είναι μεγάλο ενδιαφέρον. Προς τα πάνω ρύθμιση της κυτταροσκελετική πρωτεΐνη, Palladin, έχει ανιχνευθεί στους μυοϊνοβλάστες στρωματικά γύρω πολλά στερεών καρκίνων και σε οθόνες έκφρασης για τα γονίδια που εμπλέκονται στην εισβολή. Χρησιμοποιώντας ένα παγκρεατικό καρκίνο μοντέλο, ερευνήσαμε τη λειτουργική συνέπεια υπερέκφραση εξωγενούς Palladin σε φυσιολογικούς ινοβλάστες

in vitro

και την επίδρασή της στα πρώτα στάδια της εισβολής των όγκων.

Κύρια Ευρήματα

Palladin έκφραση σε ινοβλάστες στρωματικά εμφανίζεται πολύ νωρίς στην ογκογένεση.

In vivo

, σύμφωνη έκφραση Palladin και του δείκτη μυοϊνοβλαστών, άλφα ομαλή ακτίνη μυών (α-SMA), εμφανίζεται νωρίς στα δυσπλαστικών στάδια περιαστικών όγκων στρώματος και σταδιακά αυξάνει σε παγκρεατικά ογκογένεση.

In vitro

εισαγωγή εξωγενών 90 kD Palladin σε κανονική ανθρώπινους δερματικούς ινοβλάστες (ΚΑΕ) προκαλεί την ενεργοποίηση των ινοβλαστών στρωματικών σε μυοϊνοβλάστες όπως χαρακτηρίστηκε από επαγωγή α-SMA και βιμεντίνη, και μέσα από την φυσική μεταβολή της μορφολογίας των κυττάρων. Επιπλέον, Palladin έκφραση σε ινοβλάστες αυξάνει την κυτταρική μετανάστευση, εισβολή μέσω της εξωκυττάριας μήτρας, και τη δημιουργία σηράγγων μέσω των οποίων τα καρκινικά κύτταρα μπορεί να ακολουθήσει. Η εισβολή ινοβλαστών και δημιουργία σηράγγων αποτελέσματα από την ανάπτυξη του invadopodia-όπως κυτταρικά προεξοχές που εκφράζουν πρωτεΐνες invadopodia και πρωτεολυτικά ένζυμα. Palladin έκφραση σε ινοβλάστες ενεργοποιείται από την συν-καλλιέργεια των φυσιολογικών ινοβλαστών με k-ras-επιθηλιακών κυττάρων που εκφράζουν.

Συμπεράσματα

Σε γενικές γραμμές, Palladin έκφραση μπορεί να μεταδώσει μυοϊνοβλαστών ιδιότητες, με τη σειρά του την προώθηση της επεμβατικής δυναμικό αυτών των περι-καρκινικών κυττάρων με invadopodia γνώμονα αποδόμηση της εξωκυττάριας μήτρας. Palladin έκφραση σε ινοβλάστες μπορεί να προκληθεί από την έκφραση k-ras σε γειτονικά επιθηλιακά κύτταρα. Αυτά τα δεδομένα υποστηρίζουν ένα μοντέλο σύμφωνα με την οποία Palladin ενεργοποιούνται οι ινοβλάστες διευκολύνουν στρωματικά εξαρτώμενη από μετάσταση και απόφυση των ογκογόνο επιθηλίου

Παράθεση:. Brentnall TA, Lai LA, Coleman J, Bronner MP, Παν S, Chen Ε (2012) διέγερση του Καρκίνου-Associated Stroma: Η υπερέκφραση του Palladin Ενεργοποιεί ινοβλάστες για την προώθηση του όγκου εισβολή. PLoS ONE 7 (1): e30219. doi: 10.1371 /journal.pone.0030219

Επιμέλεια: Donald Gullberg, Πανεπιστήμιο του Μπέργκεν, Νορβηγία

Ελήφθη: 22 Μαρτίου, 2011? Αποδεκτές: 15η Δεκεμβρίου του 2011? Δημοσιεύθηκε: 23 Ιαν 2012

Copyright: © 2012 Brentnall et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε από τον Gene και Mary Ann Ταμείο Walters για καρκίνο του παγκρέατος Ερευνών (ΟΤΑ), των Καναρίων Ίδρυμα (ΟΤΑ), και ΝΙΗ NCI 5K07 CA116296 (RC). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Οι ινοβλάστες να διαδραματίσει κεντρικό ρόλο στην εισβολή του καρκίνου, μετάσταση, και χημειοαντίσταση [1] – [7]. ινοβλάστες Καρκίνος σχετιζόμενη είναι μυοϊνοβλάστες με συσταλτικές ιδιότητες και άλφα-λείου μυός ακτίνη (α-SMA) χρώσης είναι ένα χαρακτηριστικό γνώρισμα των εν λόγω [8] κύτταρα. Ο μηχανισμός με τον οποίο μυοϊνοβλάστες ενισχύσει ογκογένεση υπογραμμίζεται από τρεις βασικές μελέτες που αποκαλύπτουν: 1) σχετίζονται με τον καρκίνο ινοβλάστες chaperone τα καρκινικά κύτταρα από την πρωταρχική θέση στο μεταστατικό θέση 2) ​​μπλοκάροντας τα ενεργοποιούνται οι ινοβλάστες

πριν

εισβολή όγκου μύστες μπορεί να αποτρέψει τον καρκίνο? αλλά σταματώντας τις μυοϊνοβλάστες μετά εισβολή έχει αρχίσει είναι πολύ αργά για την πρόληψη του καρκίνου και 3) θεραπευτική αγωγή του καρκίνου του παγκρέατος που μειώνει τις σχετιζόμενες με καρκίνο ινοβλάστες είναι πιο αποτελεσματική στην παράταση επιβίωσης από την κλασική χημειοθεραπεία που στοχεύει μόνο τα καρκινικά κύτταρα [9] – [11 ].

Η 90 kD ισομορφή Palladin, εμβρυϊκό και κυτταροσκελετική πρωτεΐνη ζωτικής σημασίας για την κυτταρική κινητικότητα, υπερεκφράζεται στα καρκινικά σχετιζόμενη ινοβλάστες από ένα πλήθος τύπων όγκου συμπεριλαμβανομένων του παγκρέατος, του μαστού, του πνεύμονα, των νεφρών και των ωοθηκών αλλά εκφράζεται σε χαμηλότερα επίπεδα σε φυσιολογικό στρωματικά ινοβλάστες [12] – [15]. Palladin εκφράζουν ινοβλάστες βρίσκονται επίσης πλησίον καρκινικά κύτταρα σε λεμφαδένα και ηπατικές μεταστάσεις [12]. Δυσλειτουργία του Palladin από καλλιεργημένα κύτταρα οδηγεί σε παρεκκλίνουσα οργάνωση της ακτίνης, απορυθμισμένη κυτταρική προσκόλληση και κινητικότητα, και το ακαθάριστο διάσπαση της μορφολογίας των κυττάρων [16] – [20]. Δεν αποτελεί έκπληξη, Palladin έχει ανιχνευθεί σε οθόνες έκφρασης για εισβολή-ειδικά γονίδια σε παγκρεατικά και του καρκίνου του μαστού [21], [22].

Μια ενδιαφέρουσα συσχέτιση μεταξύ του καρκίνου που σχετίζεται με ινοβλάστες και Palladin στη ρύθμιση του καρκίνου του παγκρέατος έχει έρθει στο φως. Έχουμε αναφέρει ένα εξαιρετικά διεισδυτικό, σπάνια μορφή οικογενούς καρκίνου του παγκρέατος (Οικογένεια Χ) που προκαλείται από μια μετάλλαξη σε μια εξαιρετικά διατηρημένη περιοχή του 90 kD Palladin. Αυτή η μετάλλαξη προκαλεί κυτταροσκελετικές ανωμαλίες και ενισχύει τη μετανάστευση όταν επιμολύνεται σε κύτταρα τα οποία κανονικά εκφράζουν ελάχιστες ποσότητες του kD Palladin ισομορφή 90 [19]. Ήταν ενδιαφέρον να διαπιστώσει ότι η Palladin πρωτεΐνη υπερεκφράζεται κατά προτίμηση και παντού στο διαμέρισμα στρωματικά του καρκίνου του παγκρέατος και όχι στα επιθηλιακά κύτταρα του πόρου [12], [23].

Ο θεμελιώδης ρόλος του Palladin στο κελί κινητικότητα και η αυξανόμενη συνειδητοποίηση ότι ενεργοποιούνται οι ινοβλάστες μπορεί πραγματικά να συνεργαστεί με τα καρκινικά κύτταρα για την προώθηση εισβολή και τη μετάσταση οδήγησαν σε αυτές τις έρευνες. Στο παρόν, χρησιμοποιώντας τον καρκίνο του παγκρέατος ως πρότυπο, θα ξετυλίξουν 1)

όταν

σε νεοπλασματικά εξέλιξη κάνει Palladin ενεργοποιούν τους ινοβλάστες, 2) η

μηχανισμό

διέπουν τη μετάβαση της κανονικής ινοβλαστών σε μια ενεργοποιημένη μυοϊνοβλαστών στην η ρύθμιση του καρκίνου και 3)

πώς

το μυοϊνοβλαστών θα μπορούσε να βοηθήσει τα καρκινικά κύτταρα να ξεφύγουν. Επιπλέον, θα διερευνηθούν επίσης τα αποτελέσματα μιας κληρονόμησε μεταλλαγμένα 90 kD Palladin στους ινοβλάστες του μια αδελφή προδιάθεση για καρκίνο του παγκρέατος (Οικογένεια Χ ή FX). Θα μπορούσε ένας Palladin-μεταλλαγμένο ινοβλαστών στρωματικά ξεκινήσει τον καρκίνο;

Αποτελέσματα

Palladin έκφραση σε ινοβλάστες που σχετίζονται με όγκους εμφανίζεται νωρίς στη νεοπλασματική εξέλιξη και συν-εντοπίζεται με α-SMA σε ανθρώπινο παγκρεατικό καρκίνο

Η ανοσοϊστοχημική (IHC) χρώση του δείκτη μυοϊνοβλαστών, α-SMA, και 90 kD Palladin διεξήχθησαν ταυτόχρονα σε μπλοκ ανθρώπινη μικροσυστοιχία ιστού που περιέχει όλα τα ιστολογικά στάδια της ανθρώπινης παγκρεατικής καρκίνου, συμπεριλαμβανομένου προκαρκινικών βλαβών (Εικόνα 1). Κανονική πάγκρεας έλειπε 90 kD Palladin έκφραση πρωτεΐνης, εκτός από την επένδυση των ενδοθηλιακών κυττάρων. Αντίθετα, το 90 kD έκφραση Palladin αυξήθηκε με νεοπλασματική εξέλιξης τα προ-καρκινικές βλάβες δυσπλαστικές και το πιο εντυπωσιακό χαρακτηριστικό ήταν ότι Palladin χρώση περιορίστηκε σε ινοβλάστες αμέσως γειτονικά προς τα δυσπλαστικά κύτταρα των πόρων (Σχήμα 1). Σε καρκίνο του παγκρέατος, διάχυτη και έντονη Palladin έκφραση παρατηρήθηκε σε όλο το στρώμα, ιδιαίτερα στην περιοχή γύρω από τα κύτταρα αδενοκαρκινώματος, σε συμφωνία με την από προηγούμενες εκθέσεις [12], [23]. Η έκφραση της α-SMA στο στρώμα του καρκίνου παραλληλίζεται στενά εκείνη της Palladin όπως αναφέρθηκε προηγουμένως στο νεφροκυτταρικό καρκίνωμα [15]. Συν-έκφραση α-SMA και Palladin στους ινοβλάστες που περιβάλλουν τις προ-καρκινικές βλάβες υποδεικνύει ότι ο φαινότυπος μυοϊνοβλάστη ενεργοποιείται νωρίς σε νεοπλασματικά εξέλιξης και γίνεται πιο διαδεδομένη στον καρκίνο.

Α) Έκφραση Palladin και α- SMA εξετάστηκε μέσω κηλίδωσης σε δείγματα πάγκρεας. Αριστερά: υπάρχει λίγο έως καθόλου χρώση σε φυσιολογικό πάγκρεας. αυξήσεις έκφραση στα περι-καρκινικές ινοβλάστες του παγκρέατος δυσπλασία ή PanIN 2. Δεξιά:: Μέση έκφραση είναι υψηλότερη και πιο διαδεδομένη στους ινοβλάστες που περιβάλλουν τον καρκίνο του παγκρέατος. Β) Ημι-ποσοτική αναγνώσεις παρέχουν IHC βαθμολογίες για χρώση μικροσυστοιχιών ιστό της κανονικής (NL), χαμηλού βαθμού δυσπλασία (PanIN 2), υψηλού βαθμού δυσπλασία (PanIN 3) και του καρκίνου (CA) από Palladin και α-SMA. Χρώση των Palladin ή α-SMA βαθμολογήθηκε με 0 έως 4. Βλέπε επίσης πίνακα S1.

Η

Palladin up-ρυθμίζει α-SMA και ενεργοποιεί τους ινοβλάστες για να γίνει μυοϊνοβλάστες

Με βάση τα έκφραση της πρωτεΐνης του Palladin και α-SMA στην περι-καρκινική ινοβλάστες, επιδιώξαμε να διαλευκάνουν τη σχέση μεταξύ αυτών των πρωτεϊνών. Palladin είναι αισθητά πάνω ρυθμισμένα κατά τη διάρκεια της μετάβασης μετά την αγωγή ινοβλαστών προς μυοϊνοβλάστη με ΤΟΡ-β1 [4], όπως είναι α-SMA [3]. Σε αγγειακά λεία μυϊκά κύτταρα, Palladin έκφραση απαιτείται για α-SMA αυξητική ρύθμιση [24], [25]. Έχουμε αναρωτηθεί τι ρυθμιστικό αποτέλεσμα οι δύο αυτές μυοϊνοβλαστών που σχετίζονται πρωτεΐνες θα μπορούσε να έχει ένα πάνω στο άλλο και ο φαινότυπος μυοϊνοβλαστών (βλέπε παρακάτω δεδομένα). Η επιμόλυνση του kD ισομορφή του άγριου τύπου (WT) ή μεταλλαγμένης P239S (FX) Palladin σε κανονική ανθρώπινους δερματικούς ινοβλάστες (ΚΑΕ) 90 up-ρυθμίζει μυοϊνοβλάστη δείκτες, α-SMA και βιμεντίνη, και είναι επαρκής για να προκαλέσει μια φαινότυπο μυοϊνοβλάστη εξής Palladin επαγωγή. Μέχρι την ημέρα 5 μετά την Palladin επιμόλυνση, α-SMA είναι σημαντικά αυξημένα (27,4% ± 2,8%) και ακόμη περισσότερο αυξήθηκε κατά 9 ημέρες (79% ± 15,7%) (Σχήμα 2). Η επιμόλυνση του Palladin είχε επίσης ως αποτέλεσμα προς τα πάνω ρύθμιση συσταλτικών πρωτεϊνών 11 μυοϊνοβλάστη αναφερθεί από Μάλστρομ et al. [26] (συμπεριλαμβανομένων κοφιλίνη, βιμεντίνη, προφιλίνη, καλδεσμόνη, τροπομυοσίνη, άλφα ενολάση, βήτα ακτίνης, τουμπουλίνης, Rho GTP διαστάσεως αναστολέα 1, calponin, και πεπτιδυλο-προλυλο cis-trans ισομεράσης Α). Αυτή η ανάλυση πρωτεομική συζητείται λεπτομερέστερα αργότερα.

κύτταρα Α) HDF επιμολυσμένα με 90 kD Palladin (WT ή FX) ή κενό φορέα (EV) εξετάστηκαν για τους δείκτες μυοϊνοβλαστών α-SMA και βιμεντίνη μέσω IF. Κόκκινο = α-SMA ή βιμεντίνης? Μπλε = DAPI. Β) τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία HDF όπως ανωτέρω στο (Α) και η έκφραση της α-SMA αναλύθηκε με RT-PCR. RNA συλλέχθηκε από τον αριθμό των ημερών που αναφέρονται μετά την επιμόλυνση. Γ) έκφραση του α-SMA αναλύθηκε με RT-PCR. GAPDH χρησιμοποιήθηκε ως εσωτερικός έλεγχος φόρτωσης και η σχετική έκφραση του κάθε δείγματος έναντι επεξεργασμένα δείγματα ΤΟΡ-β1 χαράσσονται ως πλάσια επαγωγή ± SD.

Η

Palladin-ενεργοποιημένων ινοβλαστών αναπτύσσουν ένα φαινότυπο μυοϊνοβλάστη

Εισαγωγή 90 kD Palladin (WT ή FX) σε κύτταρα HDF (στη συνέχεια αναφέρεται ως HDF-WT ή HDF-FX) είχε ως αποτέλεσμα μεταβολές στην κυτταρική μορφολογία (Σχήμα 3Α). Υπό κανονικές συνθήκες ανάπτυξης (με πλήρες μέσο), Palladin εκφράζουν ινοβλάστες έδειξε μια μείωση στην κυτταρική επιφάνεια, και μια αύξηση στο λεπτό κυτταρική προεξοχές με ακίδα-όπως εξαρτήματα σε σύγκριση με τα γονικά κύτταρα ελέγχου. Κυτταροσκελετού αλλαγές που περιλαμβάνονται τόσο επιμήκυνση και πάχυνση /ομαδοποίηση ακτίνης ίνες στρες (Σχήμα 3Α). Thin κυτταρική προεξοχές με ακίδα-όπως αποφύσεις είναι ορατά με ηλεκτρονική μικροσκοπία στα Palladin εκφράζουν ινοβλάστες (Σχήμα 3Β). Επειδή πολλοί καρκίνοι σχηματίζουν σε μια φλεγμονώδη τοποθεσία, και επειδή ο καρκίνος θεωρείται η πληγή που δεν επουλώνονται [27], εξετάσαμε επίσης τα ινοβλάστες Palladin εκφράζουν μετά από επώαση σε τραυματισμό μέσο (ρυθμισμένα μέσα από ινοβλάστες που τραυματίστηκαν με ένα ρύγχος πιπέτας ) για να καθορίσει εάν η περαιτέρω αλλαγές ήταν αξιοσημείωτη (Εικόνα 3Α). Οι μορφολογικές αλλαγές αισθητά βελτιωμένη σε σύγκριση με τις ινοβλάστες ελέγχου με άδεια φορέα (Σχήμα 3C). Τα κύτταρα αναπτύσσονται πιο ατρακτοειδή ή μεσεγχυματικών σχήμα με μακρύ λεπτό προεξοχές σε σύγκριση με τους ινοβλάστες ελέγχου με άδεια φορέα (Σχήμα 3C).

Α) HDF επιμολυσμένα με WT-Palladin (WT) ή FX-Palladin (FX) ήταν σε σύγκριση με το κενό φορέα (EV) χρησιμοποιώντας Εάν η ανάλυση των phalloidin βάφονται κύτταρα που αναπτύσσονται σε πλήρη μέσα ή τραυματισμό των μέσων ενημέρωσης. Β) φαλλοειδίνη-βάφονται προεξοχή κυττάρων HDF-WT μεγεθύνθηκε από ηλεκτρονίων μικρογραφία (

ένθετο

). Γ) HDF υποβλήθηκαν σε επεξεργασία όπως ανωτέρω στο (Α) και καλλιεργήθηκαν σε τραυματισμό μέσα ενημέρωσης. Phalloidin χρωματισμένα κύτταρα αναλύθηκαν με IF. Οικόπεδα απεικονίζουν τη σχετική επιφάνεια των κυττάρων (

πάνω

) και το μέσο μήκος των προεξοχών (

κάτω

). Τα δεδομένα είναι αντιπροσωπευτικά δύο ανεξάρτητων πειραμάτων? Οι τιμές εκφράζονται ως μέσος όρος ± SEM. (T-test, *, p-value Υπό το φως των δεδομένων που μας δείχνει το νωρίτερο χρονική πορεία για την αυξητική ρύθμιση των Palladin στις περι-ογκική ινοβλάστες λαμβάνει χώρα σε χαμηλού βαθμού δυσπλασία (γνωστό ως PanIN 2 στο πάγκρεας), υποθέσαμε ότι Palladin ρύθμιση πρέπει να γίνει σχετικά νωρίς στην ογκογένεση . μεταλλάξεις K-ras είναι πανταχού παρόντα σε καρκίνο του παγκρέατος: παρόν και στις δύο καρκινικών και προ-καρκινικών κυττάρων του πόρου [42]. Επειδή Palladin υπερέκφραση σημειώνεται στα μυοϊνοβλάστες αμέσως δίπλα στις προ-καρκινικά κύτταρα των πόρων (Σχήμα 1), μπορούμε εικάζουν αν k-ras ενεργοποίηση μόνη της σε πόρου κυττάρων ήταν αρκετή για να προκαλέσει ρύθμιση προς τα πάνω του 90 kD Palladin σε γειτονικές φυσιολογικούς ινοβλάστες . Ένα παρόμοιο πείραμα συγκαλλιέργειας, χρησιμοποιώντας τα transwells επινοήθηκε με τις κανονικές ινοβλάστες στον κατώτερο θάλαμο? ο άνω θάλαμος περιείχε φυσιολογικό παγκρεατικού πόρου επιθηλιακά κύτταρα (HPDE) επιμολυσμένα με άγριου τύπου k-ras, μεταλλαγμένο k-ras, ή ένα άδειο-φορέα. Έκφραση είτε constituently ενεργοποιημένων άγριου τύπου

ή

μεταλλαγμένο k-ras σε κύτταρα HPDE ήταν αρκετή για να προκαλέσει την προς τα πάνω ρύθμιση του Palladin και α-SMA στα γειτονικά φυσιολογικούς ινοβλάστες (Σχήμα 7Β). Ούτε Palladin ούτε έκφραση α-SMA αυξήθηκαν κατά συν-καλλιέργεια με τη γονική κύτταρα παγκρεατικού πόρου (HPDE) επιμολυσμένα με ένα άδειο φορέα.

Προς τα πάνω ρύθμιση α-SMA και Palladin σε ινοβλάστες από τα γειτονικά κύτταρα καρκίνου εμποδίζεται από φίμωση των 90 kD Palladin

για να καθοριστεί αν η ras που προκαλείται από το μετασχηματισμό των ινοβλαστών σε μυοϊνοβλάστες στηρίχθηκε σε ένα Palladin εξαρτάται οδού, χρησιμοποιήσαμε shRNA να δημιουργήσει σταθερούς κλώνους του HDF με Palladin νοκ ντάουν και στη συνέχεια μετράται Palladin και α-SMA παραγωγή μετά από 9 ημέρες συν-καλλιέργειας των κανονικών ινοβλαστών με την παγκρεατική καρκινική κυτταρική γραμμή, Panc-1. Εμείς απέτυχε να ανιχνεύσει α-SMA έκφρασης με RT-PCR μετά την συν-καλλιέργεια κυττάρων HDF σταθερά επιμολυσμένα με οποιοδήποτε από τρεις διακριτές shRNA κατασκευές στόχευσης 90 kD Palladin (Σχήμα 8Α? Δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Ωστόσο, προς τα πάνω ρύθμιση του α-SMA παρατηρήθηκε μετά συν-καλλιέργεια με κύτταρα Panc-1 κύτταρα αν HDF επιμολύνθηκαν με έναν έλεγχο shRNA πλασμίδιο ή σε μη επεξεργασμένα κύτταρα HDF. Υπήρξε επίσης μια λειτουργική συνέπεια να επιβάλλει σιωπή Palladin σε ινοβλάστες, όπως αποδεικνύεται από τη μετανάστευση και την εισβολή δοκιμασίες (Σχήματα 8Β Σε αυτές τις μελέτες, διαπιστώσαμε ότι το FX Palladin εκφράζουν ινοβλάστες ήταν σημαντικά πιο επεμβατική από ινοβλάστες που περιέχουν άγριου τύπου Palladin. Επιπλέον, η ποσοτική ανάλυση πρωτεώματος ανιχνεύεται έκφραση 88 πρωτεϊνών που ήταν μοναδική για την HDF-FX (Πίνακας S2) και δεν ανιχνεύεται σε HDF-WT.