Abstract

microRNA (miRNA ή miR) αναστολή των ογκογόνων σχετικών οδών έχει αποδειχθεί ότι είναι μια πολλά υποσχόμενη θεραπευτική προσέγγιση για τον καρκίνο. Η παρεκκλίνουσα λιπιδίων και της χοληστερόλης του μεταβολισμού εμπλέκεται στην ανάπτυξη του καρκίνου του προστάτη και εξέλιξης σε νόσο τελικού σταδίου. Δείξαμε πρόσφατα ότι ένας βασικός παράγοντας μεταγραφής για λιπογένεση, στερόλη ρυθμιστικό στοιχείο δέσμευσης πρωτεΐνης-1 (SREBP-1), που προκαλείται από λιπαρά οξέα και τη συσσώρευση λιπιδίων και υποδοχέα ανδρογόνων (AR) μεταγραφική δραστικότητα, και προωθείται επίσης την ανάπτυξη των καρκινικών κυττάρων του προστάτη και αντίσταση ευνουχισμός . SREBP-1 υπερεκφράζεται σε ανθρώπινο καρκίνο του προστάτη και δείγματα ασθενών ευνουχισμό ανθεκτικά. Αυτά τα πειραματικά και κλινικά αποτελέσματα υποδεικνύουν ότι SREBP-1 είναι ένας πιθανός ογκογόνο παράγοντα μεταγραφής στον καρκίνο του προστάτη. Σε αυτή τη μελέτη, προσδιόρισε δύο miRNAs, miR-185 και 342, που ελέγχουν λιπογένεση και cholesterogenesis σε καρκινικά κύτταρα του προστάτη μέσω της αναστολής SREBP-1 και 2 έκφραση και ρύθμιση προς τα κάτω στοχευόμενων γονιδίων τους, συμπεριλαμβανομένης της συνθάσης λιπαρού οξέος (FASN) και 3- υδροξυ-3-μεθυλγλουταρυλ αναγωγάσης CoA (HMGCR). Τόσο miR-185 και 342 ανέστειλε ογκογονικότητα, την κυτταρική ανάπτυξη, τη μετανάστευση και εισβολή σε κυτταρική καλλιέργεια καρκίνο του προστάτη και μοντέλα ξενομοσχεύματος συμπίπτει με αποκλεισμό τους από λιπογένεσης και cholesterogenesis. Η ενδογενής miR-185 και 342 έκφραση ήταν σημαντικά μειωμένη σε κύτταρα καρκίνου του προστάτη σε σύγκριση με μη-καρκινικές επιθηλιακών κυττάρων. Αποκατάσταση miR-185 και 342 οδήγησε σε κασπάση-εξαρτώμενη αποπτωτικό κυτταρικό θάνατο σε κύτταρα καρκίνου του προστάτη. Τα πρόσφατα εντοπίστηκαν miRNAs, miR-185 και 342, αντιπροσωπεύει ένα νέο μηχανισμό για τη θεραπεία του καρκίνου του προστάτη που στοχεύουν

Παράθεση:. Λι Χ, Chen Υ-Τ, Josson S, Mukhopadhyay ΝΚ, Kim J, Freeman MR, et al. (2013) microRNA-185 και 342 Αναστέλλουν Ογκογονικότητα και επάγουν απόπτωση μέσω αποκλεισμού της SREBP μεταβολικής πορείας στα κύτταρα του καρκίνου του προστάτη. PLoS ONE 8 (8): e70987. doi: 10.1371 /journal.pone.0070987

Επιμέλεια: Moray Campbell, Roswell Park Cancer Institute, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 18, Φεβρουαρίου του 2013? Αποδεκτές: 25 Ιουν, 2013? Δημοσιεύθηκε: 9 Αυγ, 2013

Copyright: © 2013 Li et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε από μια επιχορήγηση από το Υπουργείο άμυνας (W81XWH-08-1- 0321) και οι Cedars-Sinai Garber βραβεία για τον Καρκίνο Science (WCH). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

microRNA (miRNA ή miR) είναι μια μικρή (κατά μέσο όρο 22 nt), μονόκλωνο και ενδογενώς συμβαίνουν μη-κωδικοποίησης RNA που ρυθμίζει την έκφραση γονιδίων μετα-μεταγραφική από ζευγαρώματος συμπληρωματικών βάσεων στο 3 ‘αμετάφραστες περιοχές (UTR) του στόχος mRNAs [1], [2]. MiRNA ελέγχει την έκφραση ενός περίπου ένα τρίτο των ανθρώπινων γονιδίων που κωδικοποιούν πρωτεΐνες που εμπλέκονται στην βασικές κυτταρικές λειτουργίες, συμπεριλαμβανομένου του μεταβολισμού, τη διαφοροποίηση, την ανάπτυξη και την απόπτωση [2] – [5]. MiRNA έχει επίσης αποδειχθεί ότι παίζουν σημαντικό ρόλο στη νόσο, ιδιαίτερα του καρκίνου [6] – [8]. Ορισμένα είδη miRNA, όπως miR-20a, 23b, 34α, 126, 145, 146α, 221 και 222, τα παρεκκλίνοντα εκφράζονται σε καρκίνο του προστάτη [9], [10]. Ένας αριθμός miRNAs έχουν αποδειχθεί να συμβάλλουν στην έναρξη του όγκου, την ανάπτυξη και την θανατηφόρα εξέλιξη [11] – [15]. Αυτές οι ανακαλύψεις παρέχουν μια λογική για την εξέταση της αποτελεσματικότητας των θεραπευτικών μεθόδων αντικατάστασης miRNA-based, με στόχο την αναστολή της ογκογονιδίων και των σχετικών οδών τους, ή την αποκατάσταση ογκοκατασταλτικά γονίδια.

Sterol ρυθμιστικό στοιχείο δέσμευσης πρωτεΐνης (SREBP) είναι μια βασικός παράγοντας έλικας-βρόχου-έλικας μεταγραφή φερμουάρ λευκίνης με σημαντικές μεταβολικές ρόλους στην λιπογένεση και cholesterogenesis [16], [17]. Τρεις κύριες ισομορφές SREBP έχουν εντοπιστεί, SREBP-1α, SREBP-1c και SREBP-2 [18]. SREBP-1 ελέγχει γονίδια που εμπλέκονται στην λιπαρό οξύ, λιπίδιο και βιοσύνθεσης χοληστερόλης [16], [17], ενώ SREBP-2 ρυθμίζει ειδικότερα το μεταβολισμό της χοληστερόλης και την ομοιόσταση [19]. Δυσλειτουργία του SREBPs και κατάντη στοχευόμενων γονιδίων τους που συνδέονται με την λιπογένεση και cholesterogenesis έχει ενοχοποιηθεί σε καρκίνο. Παραδείγματα περιλαμβάνουν συνθάση λιπαρού οξέος (FASN), μια μεταβολική ογκογονίδιο [20], [21], και 3-υδροξυ-3-μεθυλγλουταρυλ αναγωγάσης CoA (HMGCR), το περιοριστικό του ρυθμού στάδιο στη βιοσύνθεση της χοληστερόλης? και οι δύο πρωτεΐνες έχουν αναφερθεί ότι εμπλέκεται στην ανάπτυξη και εξέλιξη του καρκίνου του προστάτη [20], [22] – [24]. Η υπερέκφραση του SREBP-1 παρατηρήθηκε σε δείγματα ανθρώπινου καρκίνου του προστάτη σε σύγκριση με την κανονική /καλοήθεις ιστούς του προστάτη [22], και αυτό θα μπορούσε να σχετίζεται με μηχανιστικά εξέλιξη σε /ευνουχισμό ανθεκτικά ασθένεια ανδρογόνα πυρίμαχο [22], [25]. Η στόχευση του παρεκκλίνουσα SREBP-λιπογένεσης-cholesterogenesis οδός μπορεί να οδηγήσει σε νέες προσεγγίσεις για τη θεραπεία του καρκίνου του προστάτη.

Ο ρόλος των miRNAs σε SREBP-λιπογένεση-cholesterogenesis στον καρκίνο του προστάτη παραμένει ασαφής. Στην παρούσα μελέτη, εντοπίσαμε και χαρακτηρίζεται δύο κρίσιμες miRNAs, miR-185 και 342, ως ρυθμιστές SREBP-λιπογένεση-cholesterogenesis στα καρκινικά κύτταρα του προστάτη. Τόσο miR-185 και 342 ανέστειλε την έκφραση του SREBP-1 και SREBP-2 και κατάντη γονιδίων τους, FASN και HMGCR, και κατόπιν μειώθηκε τα επίπεδα των λιπαρών οξέων και χοληστερόλης σε καρκινικά κύτταρα του προστάτη. Επιπλέον, και οι δύο miRNAs μειωμένη έκφραση του υποδοχέα ανδρογόνου (AR), έναν γνωστό παράγοντα ανάπτυξης και την επιβίωση. Επιπλέον, miR-185 και 342 κατέστειλε ογκογονικότητα και ανάπτυξη των κυττάρων και την απόπτωση που επάγεται μέσω ενεργοποίησης μιας κασπάσης /PARP μεσολάβηση αποπτωτική παθολογική οδό σε κύτταρα καρκίνου προστάτη και ποντικούς που φέρουν ξενομόσχευμα ανθρώπινους όγκους του προστάτη. Χαμηλότερα επίπεδα του miR-185 και 342 βρέθηκαν σε κύτταρα καρκίνου του προστάτη σε σύγκριση με την κανονική /επιθηλιακά κύτταρα του προστάτη μη καρκινικά. Στο σύνολό τους, δείχνουμε για πρώτη φορά ότι το miR-185 και 342 να παίξει ένα ρόλο καταστολέα όγκου μέσω αποκλεισμού ενός κεντρικού μηχανισμού λιπογένεσης-cholesterogenesis.

Υλικά και Μέθοδοι

Καρκίνος του προστάτη κυτταρικές σειρές, Κυτταροκαλλιέργεια και αντιδραστήρια

καρκινικές κυτταρικές σειρές ανθρώπινου προστάτη LNCaP (εξαρτώμενη από ανδρογόνο) και C4-2B, ένα LNCaP γράμμωσης που προέρχεται από ανδρογόνο ανεξάρτητος υπογραμμή [26], καλλιεργήθηκαν σε Τ-μέσο (Life Technologies, Μεγάλο Island, ΝΥ) συμπληρωμένο με ορό 5% εμβρυϊκό ορό (FBS), 100 IU /mL πενικιλλίνη και 100 μg /mL στρεπτομυκίνης. Ένα μη-καρκινικές ανθρώπινη κυτταρική σειρά επιθηλιακών προστάτη, RWPE-1 (ATCC, Manassas, VA), διατηρήθηκε σε μέσο κερατινοκυττάρων που περιέχουν εκχύλισμα βόειας υπόφυσης και ανθρώπινο ανασυνδυασμένο επιδερμικό αυξητικό παράγοντα (Life Technologies). Όλα τα κύτταρα διατηρήθηκαν σε 5% CO

2 στους 37 ° C. πρόδρομοι των ανθρωπίνων miRNA, αναστολείς miRNA, TaqMan miRNA δοκιμασία, κιτ απομόνωσης mirVana ™ miRNA και Lipofectamine 2000 αγοράστηκαν από την Life Technologies. Τα κατασκευάσματα 3 ‘UTR λουσιφεράσης DNA του SREBP-1 (HmiT017704-MT05) και SREBP-2 (HmiT017705-MT05) αγοράστηκαν από GeneCopoeia (Rockville, MD). CellTiter 96® Υδατικό One Λύση Κυττάρου Δοκιμασία Πολλαπλασιασμού (μιτοχονδριακή δοκιμασία MTS) και κασπάση-Glo® 3/7 συστήματα δοκιμασίας ελήφθησαν από την Promega (Madison, WI).

miRNA Επιμόλυνση

παροδική επιμόλυνση του miRNA προδρόμους ή αναστολείς διεξήχθη χρησιμοποιώντας Lipofectamine 2000 σύμφωνα με το πρωτόκολλο του κατασκευαστή. Ανθρώπινη miR-185 (PM12486) και 342 (PM13066) προδρόμους, αντι-miR-185 (AM12486) και 342 (AM13066), και έναν αρνητικό μάρτυρα (MIR-NC? AM17110) χρησιμοποιήθηκαν για δοκιμασίες

ποσοτική. Real-time αλυσίδα Reverse Transcription-αντίδραση πολυμεράσης (PCR qRT-)

Ολικό RNA παρασκευάστηκε από κύτταρα χρησιμοποιώντας το RNeasy Mini kit (Qiagen, Valencia, CA) και υποβλήθηκε σε αντίστροφη μεταγραφή με SuperScript® III της ανάστροφης μεταγραφάσης ( Life Technologies) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Οι αλληλουχίες εκκινητή που χρησιμοποιούνται για την ανάλυση PCR παρατίθενται στον Πίνακα S1. Μια θερμή εκκίνηση στους 95 ° C για 5 λεπτά ακολουθήθηκε από 40 κύκλους σε μετουσίωση στους 95 ° C για 15 s, ανόπτηση εκκινητών στους 60 ° C για 30 s και επιμήκυνση στους 72 ° C για 30 s με τη χρήση ΑΒΙ 7500 Fast Πραγματικό PCR System -Time (Life Technologies). Τα δεδομένα κανονικοποιήθηκαν σε 18S rRNA ή GAPDH και παριστάνεται ως η μέση φορές τριών ανεξάρτητων διπλότυπα. Για τον προσδιορισμό ενδογενή έκφραση miR-185 και 342, miRNA παρασκευάστηκε από κύτταρα χρησιμοποιώντας το κιτ απομόνωσης mirVana ™ miRNA (Life Technologies). Ώριμη miRNA ποσοτικοποιήθηκε με την δοκιμασία TaqMan miRNA (Life Technologies) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Τα δεδομένα ομαλοποιήθηκαν με RNU6B.

Ανάλυση Western Blot

Κυτταρολύματα παρασκευάστηκαν από miR-185, 342, NC (MIR-αρνητικός έλεγχος) -επιμολυσμένα ή μη επιμολυσμένα κύτταρα καρκίνου προστάτη χρησιμοποιώντας ένα ρυθμιστικό διάλυμα λύσης [50 mM Tris (ρΗ 8), 150 mM NaCl, 0,02% NaN

3, 0,1% SDS, 1% ΝΡ-40 και 0,5% δεοξυχολικό νάτριο] που περιέχει 1 mM φθοριούχο φαινυλμεθυλσουλφονύλιο και αναστολέα πρωτεάσης κοκτέιλ (Roche Applied Science, Indianapolis, IN). Η συγκέντρωση πρωτεΐνης προσδιορίστηκε με δοκιμασία Bradford χρησιμοποιώντας το αντιδραστήριο Coomassie Plus Protein (Thermo Scientific, Rockford, IL). κηλίδα Western διεξήχθη χρησιμοποιώντας το σύστημα Novex (Life Technologies) όπως περιγράφηκε προηγουμένως [27], [28]. Πρωτογενή αντισώματα αντι-SREBP-1, SREBP-2, FASN, HMGCR, AR και β2-μικροσφαιρίνη (β2Μ) (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA), και δευτερογενή αντισώματα τα οποία συζεύχθηκαν με υπεροξειδάση (GE Healthcare, Piscataway, NJ) χρησιμοποιήθηκαν. Ανίχνευση ζώνες πρωτεϊνών έγινε με τη χρήση Βελτιωμένη χημική φωταύγεια Western Blotting Αντιδραστηρίων Ανίχνευσης (GE Healthcare).

κυτταρικού πολλαπλασιασμού, κλωνογενοποιήσεως, τη μετανάστευση και την εισβολή Αναλύσεις

LNCaP ή C4-2B κύτταρα (6.000 κύτταρα /φρεάτιο ) τοποθετήθηκαν σε πλάκες 96 φρεατίων και επιμολύνθηκαν με miR-185, 342 ή NC. Ο πολλαπλασιασμός των κυττάρων μετρήθηκε 3 d μετά την επιμόλυνση με MTS δοκιμασία (Promega) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Για τη δοκιμασία ικανότητας κλωνισμού, LNCaP ή C4-2B κύτταρα επιμολυσμένα με miR-185, 342 ή NC σπάρθηκαν σε πλάκες 6-φρεατίων (500 κύτταρα /φρεάτιο). Τα κύτταρα καλλιεργήθηκαν στους 37 ° C με 5% CO

2 για 14 d. Οι αποικίες σταθεροποιήθηκαν με φορμαλίνη και χρωματίζονται με κρυσταλλικό ιώδες [27]. Οι αριθμοί των αναπτύχθηκαν αποικίες μετρήθηκαν και αναλύθηκαν για σημαντικές διαφορές.

In vitro

κυτταρική μετανάστευση ή την εισβολή προσδιορίστηκε σε θαλάμους Boyden προ-επικαλυμμένα με κολλαγόνο Ι (Sigma-Aldrich, St. Louis, ΜΟ? Για δοκιμασία μετανάστευσης) ή αυξητικό παράγοντα-εξαντλημένο μήτρα Matrigel (BD Bioscience, San Jose, CA? για δοκιμασία εισβολής). Τα κύτταρα (1.5 × 10

5 κύτταρα /φρεάτιο) διαμολύνθηκαν με miR-185, 342 ή NC σπάρθηκαν μέσα στο εσωτερικό του προ-επικαλυμμένες άνω θαλάμων. Μετά από επώαση στους 37 ° C με 5% CO

2 για 48 ώρες, οι αριθμοί των μετανάστευσαν ή εισβάλλοντα κύτταρα μετρήθηκαν με μία μέθοδο χρώσης crystal violet [27].

λιπαρό οξύ και χοληστερόλη Ποσοτικοποίηση

Τα ποσά των λιπαρών οξέων μακράς αλύσου και χοληστερόλες προσδιορίστηκαν χρησιμοποιώντας το ελεύθερο λιπαρό οξύ Ποσοτικοποίηση Kit και χοληστερόλης /χοληστερυλεστέρος Detection Kit (Abcam, Cambridge, ΜΑ) σε κύτταρα επιμολυσμένα με miR-185, 342 ή NC. Οι ποσότητες των λιπαρών οξέων και χοληστερόλης ομαλοποιήθηκαν με συνολικό αριθμό κυττάρων. Η σχετική λιπαρό οξύ ή χοληστερόλη (%) αποδόθηκε ως 100% σε κύτταρα NC.

Η απόπτωση Δοκιμασίες

Για τη χρώση αννεξίνης V, μια ανάλυση διαλογής ενεργοποιημένων με φθορισμό κυττάρου καρκίνου του προστάτη έγινε 72 ώρες μετά την επιμόλυνση των miRNAs χρησιμοποιώντας το αννεξίνης V-FITC Apoptosis Detection Kit Ι (BD Bioscience) και ένα FACScan κυτταρόμετρο ροής με λογισμικό CellQuest (Becton Dickinson Labware, Lincoln Park, NJ). Για την δοκιμασία δραστικότητας κασπάσης, κύτταρα επιμολυσμένα με miRNAs για 24 ώρες μετρήθηκαν για κασπάσης 3/7 ενζυματικές δραστηριότητες με κασπάση-Glo® Systems 3/7 Δοκιμασία (Promega). Τα δεδομένα ομαλοποιήθηκαν με ολικές πρωτεΐνες. Για ανάλυση στυπώματος κασπάσης-Western, λύματα ολόκληρων κυττάρων παρασκευάστηκαν από κύτταρα επιμολυσμένα με miRNAs επί 72 ώρες και υποβλήθηκε σε στύπωμα Western. Χρησιμοποιήθηκαν αντι-κασπάσης 9, 3 και PARP πρωτογενή αντισώματα (Cell Signaling Technology, Beverly, ΜΑ).

Δήλωση Ηθικής

Όλα τα πειράματα σε ζώα διεξήχθησαν αυστηρά σύμφωνα με τις συστάσεις ο Οδηγός για τη Φροντίδα και Χρήση των ζώων Εργαστηρίου των Εθνικών Ινστιτούτων Υγείας. Το πρωτόκολλο εγκρίθηκε από την Επιτροπή Θεσμικών Ζωικά Φροντίδα και Χρήση των Cedars Sinai Medical Center-(IACUC Πρωτόκολλο # 004252) και ακολουθήθηκε για τις μελέτες του ποντικιού.

In vivo

πειράματα σε ζώα

Για να εξεταστεί η αποτελεσματικότητα κατά του όγκου του miR-185 και 342

in vivo

, έξι-εβδομάδων αρσενικών αθυμικών γυμνών ποντικών (Harlan Laboratories, Placentia, CA) εμβολιάστηκαν υποδόρια με 2 × 10

6 C4-2B κύτταρα ανά ποντίκι. Το φορτίο του όγκου παρακολουθήθηκε με όγκος του όγκου (χρησιμοποιώντας τον τύπο V = 4 /3π × (d /2)

2 × D /2, όπου d είναι ο μικρός άξονας του όγκου και το D είναι ο κύριος άξονας του όγκου). Μετά από έξι εβδομάδες ενοφθαλμισμό, 100 pmole του miRNA σε σύμπλοκο με 3 μί Lipofetamine 2000 σε 50 μL PBS παραδόθηκε εντός του όγκου κάθε 3 ημέρες για ένα 21-d θεραπεία. Η δόση και το πρόγραμμα της ένεσης miRNA τροποποιήθηκαν από την προηγούμενη έκθεση [29]. Κατά τον τερματισμό της μελέτης των ζώων, ιστούς όγκων συλλέχθηκαν από τις ευθανασία ποντικούς και σταθεροποιήθηκαν σε 10% φορμαλίνη, αφυδατώθηκαν σε αιθανόλη, εγκλείστηκαν σε παραφίνη και τεμαχίστηκαν για διαφάνειες. Τα πλακίδια κενό ιστού υποβλήθηκαν σε ανοσοϊστοχημική χρώση (IHC) [30] χρησιμοποιώντας αντι-SREBP-1, SREBP-2, FASN, HMGCR, AR, PSA, Κί67 και διασπασμένη PARP πρωτογενή αντισώματα. Για τον ποσοτικό προσδιορισμό των Κί67 (πολλαπλασιασμού των κυττάρων) και διασπασμένης ΡΑΚΡ (απόπτωση) έκφρασης, 100 κύτταρα όγκου σε 5 τυχαία επιλεγμένα περιοχές μετρήθηκαν και Κύτταρα θετικής χρώσης καταγράφηκαν. Επιπροσθέτως, η μερική ιστούς νωπούς όγκου συλλέχθηκαν για να προσδιοριστεί η έκφραση του miR-185 ή 342 με qRT-PCR. miRNA παρασκευάστηκε από ιστούς όγκων χρησιμοποιώντας το κιτ απομόνωσης mirVana ™ miRNA.

Στατιστική Ανάλυση

Η στατιστική ανάλυση πραγματοποιήθηκε όπως περιγράφηκε προηγουμένως [31]. Μαθητή

t-test

και δίπλευρη κατανομή εφαρμόστηκαν για την ανάλυση της στατιστικής σημαντικότητας.

Αποτελέσματα

MiR-185 και 342 αναστέλλουν την έκφραση του SREBPs και μεταγενέστεροι γονίδιά τους σε κύτταρα του προστάτη Καρκίνος

για να διερευνηθεί αν miRNAs ρυθμίζουν την οδό SREBP-λιπογένεσης-cholesterogenesis μεταβολισμού στα καρκινικά κύτταρα του προστάτη, που χρησιμοποιήθηκε για πρώτη φορά TargetScanHuman 6.2 σε απευθείας σύνδεση λογισμικό (https://www.targetscan.org/) να προβλέψει εάν ένα ή περισσότερα miRNAs στοχεύουν τόσο SREBP-1 και SREBP-2, δύο βασικούς παράγοντες μεταγραφής που ρυθμίζουν λιπαρό οξύ, λιπίδιο και βιοσύνθεση χοληστερόλης και ομοιόσταση. Δύο miRNAs, miR-185 και 342, ανασύρθηκαν ότι ενδεχομένως συν-στοχευμένες 3 ‘UTRs της SREBP-1 και SREBP-2 mRNAs (Εικ. S1 Α). Για την περαιτέρω επαλήθευση εάν miR-185 και 342 δεσμεύουν άμεσα με το 3 ‘UTRs της SREBP-1 και SREBP-2, πραγματοποιήσαμε 3’ δοκιμασία ανταποκριτή λουσιφεράσης UTR και διαπίστωσε ότι οι σχετικές 3 ‘δραστηριότητες της λουσιφεράσης UTR τόσο SREBP-1 και SREBP- 2 μειώθηκαν σημαντικά σε miR-185 και 342 επιμολυσμένα κύτταρα καρκίνου του προστάτη (Σχ. S1B). Τα αποτελέσματα επιβεβαιώνουν ότι SREBP-1 και SREBP-2 mRNAs είναι άμεσοι στόχοι του miR-185 και 342. Για την επικύρωση εάν αυτές οι δύο miRNAs ελέγχουν το μονοπάτι SREBP-λιπογένεση-cholesterogenesis σε καρκινικά κύτταρα προστάτη, πραγματοποιήσαμε qRT-PCR, στύπωμα Western, και λιπαρό οξύ και τον ποσοτικό προσδιορισμό της χοληστερίνης αναλύσεις. Τόσο miR-185 και 342 ανέστειλε την έκφραση των mRNAs (Σχ. 1Α), καθώς και πρόδρομος (125 kDa) και ώριμη (68 kDa) πρωτείνες (Εικ. 1Β) του SREBP-1 και SREBP-2 σε LNCaP και C4-2B κυττάρων καρκίνου του προστάτη. Έκφραση FASN [32] και HMGCR [33], [34], τα οποία είναι SREBP κατάντη ρυθμιζόμενα γονίδια, μειώθηκε με miR-185 και 342 (Σχ. 1Α και 1Β). MiR-185 και 342 μειώνεται επίσης AR mRNA και έκφρασης πρωτεΐνης σε κύτταρα καρκίνου του προστάτη (Εικ. 1Α και 1Β). Επειδή FASN και HMGCR είναι σημαντικά ένζυμα για

de novo

σύνθεση λιπαρών οξέων και χοληστερόλης χωριστά, μπορούμε στη συνέχεια εξέτασαν τα επίπεδα των λιπαρών οξέων και της χοληστερόλης στα κύτταρα. Όπως φαίνεται στον Πίνακα 1, οι ποσότητες των ενδοκυτταρικών λιπαρών οξέων και της χοληστερόλης μειώθηκαν σημαντικά σε miR-185 και 342-μορφομετατραπέντα LNCaP και C4-2B κυττάρων σε σύγκριση με τις ομάδες ελέγχου. Για να ελεγχθεί περαιτέρω η εξειδίκευση του miR-185 και 342 για SREBP-λιπογένεση-cholesterogenesis, αντιπληροφοριακά ολιγονουκλεοτίδια έναντι miR-185 και 342 χρησιμοποιήθηκαν ως miR-185 και 342 αναστολέων. Με την αναστολή της ενδογενούς miR-185 και 342 σε καρκινικά κύτταρα του προστάτη, τόσο miR-185 και 342 οι αναστολείς αυξημένη SREBP-1, SREBP-2 και κατάντη γονιδιακή έκφραση τους (Σχ. 1 C). Αυτά τα αποτελέσματα υποδηλώνουν ότι miR-185 και 342 ανέστειλε SREBP σηματοδότηση μέσω της μείωσης της SREBP mRNA και πρωτεΐνης και μείωσε τα επίπεδα των λιπαρών οξέων και χοληστερόλης σε καρκινικά κύτταρα του προστάτη

Α, τόσο miR-185 και 342 ανέστειλε την έκφραση mRNA. της SREBP-1, SREBP-2, FASN, HMGCR και AR σε LNCaP και C4-2B καρκινικά κύτταρα του προστάτη καθορίζεται από qRT-PCR. -: Μη επιμολυσμένα? NC: miR-αρνητικό έλεγχο. Η έκφραση σχετική mRNA (πάσο) αποδόθηκε ως 1,0 σε μη-επιμολυσμένα κύτταρα. Τα δεδομένα κανονικοποιήθηκαν σε 18S rRNA και αντιπροσωπεύουν τη μέση τιμή ± SD τριών ανεξαρτήτων πειραμάτων διπλούν. **

P

& lt? 0.005 σημαντικές διαφορές από το NC. Β, MiR-185 και 342 ανέστειλε πρόδρομος (125 kDa) και ώριμη (68 kDa) μορφές SREBP-1 και SREBP-2, FASN, HMGCR και έκφραση AR σε LNCaP και C4-2B κύτταρα αναλύθηκαν με κηλίδα Western. β2-μικροσφαιρίνη (β2Μ) χρησιμοποιήθηκε ως έλεγχος φόρτωσης. C, MiR-185 και 342 αναστολείς (αντιπληροφοριακά ολιγονουκλεοτίδια εναντίον miR-185 και 342) αυξήθηκε SREBP-1, SREBP-2, FASN, HMGCR και έκφραση AR σε LNCaP και C4-2B κύτταρα καθορίζεται από qRT-PCR. Η έκφραση σχετική mRNA (πάσο) αποδόθηκε ως 1,0 σε μη-επιμολυσμένα κύτταρα. Τα δεδομένα κανονικοποιήθηκαν σε 18S rRNA και αντιπροσωπεύουν τη μέση τιμή ± SD τριών ανεξαρτήτων πειραμάτων διπλούν. **

P

& lt? 0.005 σημαντικές διαφορές από το NC. D, έκφραση της εγγενούς miR-185 και 342 σε RWPE-1, LNCaP και κυττάρων C4-2B. Αποτελέσματα qRT-PCR έδειξε ότι η σχετική έκφραση του miR-185 και 342 ήταν σημαντικά μειωμένη σε καρκινικά κύτταρα του προστάτη σε σύγκριση με την κανονική /μη-καρκινικές RWPE-1. Κάτω έκφραση και των δύο miRNAs παρατηρήθηκε σε επιθετική C4-2B σύγκριση με κύτταρα LNCaP. Η σχετική έκφραση των miRNAs (πάσο) αποδόθηκε ως 1,0 στα κύτταρα RWPE-1. **

P

& lt? 0.005 σημαντικές διαφορές από RWPE-1. Τα δεδομένα κανονικοποιήθηκαν σε RNU6B ελέγχου και αντιπροσωπεύουν τη μέση τιμή ± SD τριών ανεξαρτήτων πειραμάτων που εκτελούνται εις τετραπλούν.

Η

Στη συνέχεια, προσδιορίσαμε την έκφραση των εγγενών miR-185 και 342 σε διάφορες κυτταρικές γραμμές με κλινική σημασία, συμπεριλαμβανομένου ενός ανθρώπου φυσιολογική κυτταρική γραμμή /μη-καρκινικές επιθηλιακά προστάτη, RWPE-1, και LNCaP (εξαρτώμενων από ανδρογόνα) και C4-2B (ανεξάρτητο από ανδρογόνο) καρκινικά κύτταρα του προστάτη. MiRNA παρασκευάστηκε από αυτά τα κύτταρα. Σχετική έκφραση τόσο miR-185 και 342 ήταν σημαντικά μειωμένη σε καρκινικά κύτταρα σε σύγκριση με μη-καρκινικές RWPE-1 (Σχ. 1D), όπως προσδιορίστηκε με qRT-PCR. Επιπλέον, μειώνουν miR-185 και 342 έκφραση παρατηρήθηκε στην πιο επιθετική γραμμή C4-2B σε σύγκριση με LNCaP. Επιπλέον, εξετάσαμε την έκφραση του SREBPs, FASN και HMGCR να συσχετίζονται με εγγενή miR-185 και 342 σε αυτές τις κυτταρικές γραμμές. Σχετική έκφραση της SREBP-1, SREBP-2, FASN και HMGCR ήταν υψηλότερη σε LNCaP και C4-2B ό, τι σε RWPE-1 κύτταρα (Σχ. S2). Αυτά τα δεδομένα υποδεικνύουν ότι το miR-185 και 342 είναι αρνητικοί ρυθμιστές για τη σηματοδότηση SREBP στα καρκινικά κύτταρα του προστάτη.

MiR-185 και 342 καταστολή του κυτταρικού πολλαπλασιασμού, κλωνογενοποιήσεως, τη μετανάστευση και την εισβολή σε κύτταρα του προστάτη Καρκίνος

για να εκτιμηθεί το δυναμικό για βιολογικές συνέπειες που προκαλούνται από το miR-185 και 342, έχουμε εκ νέου εξέφρασε miR-185 και 342 στα κύτταρα LNCaP και C4-2B και εκτέλεσε μια σειρά από λειτουργικές δοκιμασίες που σχετίζονται με ογκογενετικότητας και εξέλιξης του καρκίνου. Όταν LNCaP και C4-2B κύτταρα επιμολύνθηκαν με miR-185 και 342, ο πολλαπλασιασμός των δύο τύπων κυττάρων αναστάλθηκε σε σύγκριση με miR-NC και μη επιμολυσμένα κύτταρα (Σχ. 2Α). Τόσο miR-185 και 342 μειώθηκε επίσης κλωνογονικότητας σε σύγκριση με τις ομάδες ελέγχου (Εικ. 2Β). Ένα από τα κύρια χαρακτηριστικά της προοδευτικής και μεταστατικών κυττάρων είναι η ικανότητά τους να εισβάλουν γύρω ιστούς και μεταναστεύουν αποτελεσματικά [35]. MiR-185 και 342 σημαντικώς ανέστειλαν

in vitro

μετανάστευση (Εικ. 2C) και την εισβολή (Σχ. 2D) σε κύτταρα LNCaP και C4-2B. Αντιστρόφως, μπλοκάροντας miR-185 και 342 σε καρκινικά κύτταρα του προστάτη, miR-185 και 342 οι αναστολείς αυξημένο πολλαπλασιασμό κυττάρων, σχηματισμό αποικιών, τη μετανάστευση και εισβολή (Εικ. S3). Αυτά τα δεδομένα υποδηλώνουν ότι και οι δύο miR-185 και 342 πορείες καταστέλλουν σχετικοί με την ογκογονικότητα και εξέλιξης του καρκίνου

Α, MiR-185 και 342 ανέστειλε τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων σε κύτταρα LNCaP και C4-2B σύγκριση με τα μη-επιμολυσμένα. (-) και miR-αρνητικό έλεγχο (NC) επιμολυσμένα κύτταρα 3 δ μετά από miRNA επιμόλυνση. Ο σχετικός πολλαπλασιασμός των κυττάρων (%) αποδόθηκε ως 100% σε μη-επιμολυσμένα (-) κύτταρα. **

P

& lt? 0.005 σημαντικές διαφορές από το NC. Τα δεδομένα αντιπροσωπεύουν τη μέση τιμή ± SD από δύο ανεξάρτητα πειράματα τετραπλούν. Β, MiR-185 και 342 κατέστειλε τον σχηματισμό αποικίας σε LNCaP και C4-2B κυττάρων σε σύγκριση με τις ομάδες ελέγχου μετά από 14 d miRNA την επιμόλυνση. *,

P

& lt? 0,05 και **,

P

& lt? 0.005 σημαντικές διαφορές από το NC. Τα δεδομένα αντιπροσωπεύουν τη μέση τιμή ± SD από δύο ανεξάρτητα πειράματα εις τριπλούν. C, η μετανάστευση των κυττάρων και D, εισβολή ήταν σημαντικά μειωμένα κατά miR-185 και 342 σε κύτταρα LNCaP και C4-2B σύγκριση με τις ομάδες ελέγχου. **

P

& lt? 0.005 σημαντικές διαφορές από το NC. Τα δεδομένα αντιπροσωπεύουν τη μέση τιμή ± SD από δύο ανεξάρτητα πειράματα τετραπλούν.

Η

MiR-185 και 342 Προκαλέστε κασπάσης-εξαρτώμενη αποπτωτικό κυτταρικό θάνατο σε κύτταρα του προστάτη Καρκίνος

Για να προσδιορίσετε αν το miR-185 και 342 επάγουν απόπτωση σε καρκινικά κύτταρα προστάτη, Αννεξίνη V-FITC /ιωδιούχου προπιδίου (ΡΙ) χρώση μέτρηση, δοκιμασία δραστικότητας κασπάσης και στυπώματος Western της έκφρασης κασπάσης και PARP διεξήχθησαν. Τα αποτελέσματα της χρώσης /ΡΙ αννεξίνης V-FITC και ανάλυση κυτταρομετρίας ροής έδειξε ότι miR-185 και 342 αύξησε τα αποπτωτικά κλάσματα κυττάρων (τόσο κλάσματα πρώιμη και όψιμη αποπτωτικών κυττάρων,

P

& lt? 0.005) σε LNCaP και C4 2Β κυττάρων σε σύγκριση με τις ομάδες ελέγχου (Σχ. 3Α). Caspase 3/7 δραστηριότητες επίσης επάγεται σημαντικά με miR-185 και 342 σε κύτταρα LNCaP και C4-2B (Σχ. 3Β). Επιπλέον, τα αποτελέσματα κηλίδος Western έδειξαν ότι προ-κασπάση 9 και 3 μειώθηκαν κατά miR-185 και 342 (Σχ. 3C). Επίσης, διασπασμένη κασπάση 3 και PARP, ένας μεταγενέστερος παράγοντας των κασπασών, ανιχνεύθηκαν σε miR-185 και 342 επιμολυσμένα κύτταρα (Σχ. 3C). Αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν ότι το miR-185 και 342 να προκαλέσουν καρκίνο του προστάτη κυτταρικό θάνατο μέσω της ενεργοποίησης ενός κασπάσης-εξαρτώμενο αποπτωτικό μηχανισμό.

Ένα, Ένα Annexin V-FITC /ΡΙ χρώση αποπτωτικών δοκιμασία και κυτταρομετρία ροής πραγματοποιήθηκαν σε LNCaP και C4-2B κύτταρα επιμολυσμένα με miRNAs. Τόσο miR-185 και 342 αυξήθηκαν τα αποπτωτικά κλάσματα των κυττάρων (τα δύο κλάσματα νωρίς και αργά αποπτωτικών κυττάρων?

P

& lt? 0.005) σε σύγκριση με τις ομάδες ελέγχου. Β, κασπάσης 3/7 δραστηριότητες αυξήθηκαν σημαντικά κατά το miR-185 και 342 στα κύτταρα LNCaP και C4-2B. Caspase 3/7 δραστηριότητες (πάσο) αποδόθηκαν ως 1,0 σε μη-επιμολυσμένα (-) κύτταρα. **

P

& lt? 0.005 σημαντικές διαφορές από το NC. Τα δεδομένα αντιπροσωπεύουν τη μέση τιμή ± SD από δύο ανεξάρτητα πειράματα εις τριπλούν. C, MiR-185 και 342 μειώνεται προ-κασπάσης 9, 3 και PARP, και ενεργοποιείται διασπασμένη κασπάση 3 και PARP έκφραση σε κύτταρα LNCaP όπως προσδιορίστηκε με στύπωση Western. β2Μ χρησιμοποιήθηκε ως έλεγχος φόρτωσης. C:. Διασπαστεί

Η

Η ενδονεοπλασματική Παράδοση του miR-185 και 342 οδηγεί σε παλινδρόμηση του προστάτη όγκοι σε ένα ποντίκι μοντέλο ξενομοσχεύματος

Επειδή αποδεικνύεται η

in vitro

δεδομένων αντι-ογκογόνο και αποπτωτικά ρόλοι των miR-185 και 342 σε καρκινικά κύτταρα του προστάτη, μπορούμε στη συνέχεια εξετάστηκε το θεραπευτικό δυναμικό του miR-185 και 342 χρησιμοποιώντας ένα υποδόριο μοντέλο ξενομοσχεύματος προστάτη όγκου ποντικού. Μετά από μια 21-d θεραπεία με ενδοογκική διανομή κάθε 3 ημέρες, και οι δύο miR-185 και 342 μειώνεται σημαντικά το φορτίο όγκου υποδόρια C4-2B σύγκριση με την ομάδα ελέγχου (Σχ. 4Α). Για να συσχετιστεί η θεραπευτική απόκριση με την παράδοση των miRNA, miRNA απομονώθηκε από φρέσκο ​​όγκους C4-2B και τα επίπεδα του miR-185 και 342 αξιολογήθηκαν από qRT-PCR. Όγκοι ένεση με miR-185 ή 342 περιείχε περίπου 116 ± 30 φορές (miR-185,

P

& lt? 0,05) ή 278 ± 59 φορές (miR-342,

P

& lt ? 0,05) υψηλότερη από τους όγκους ελέγχου (Εικόνα 4Β).. Αυτά τα ευρήματα υποδηλώνουν ότι η αναστολή της ανάπτυξης υποδόριου C4-2B οφειλόταν σε miR-185 ή 342 θεραπεία. Συνεπής με τα προηγούμενα

in vitro

αποτελέσματα κηλίδος Western (Εικ. 1Β), τα δεδομένα έδειξαν ότι η IHC ΜΙΚ-185 ή 342 ομάδες που έλαβαν είχαν μειωθεί SREBP-1, SREBP-2, FASN, HMGCR, AR και PSA, το οποίο είναι ένα γονίδιο προς τα κάτω στόχος AR, έκφραση σε σύγκριση με τους όγκους ελέγχου (Σχ. 4C). Επιπλέον, για να προσδιοριστούν τα αποτελέσματα του miR-185 και 342 επί του πολλαπλασιασμού των κυττάρων και την απόπτωση

in vivo

, εκτελέσαμε το βιοδείκτη Κί67 και διασπάται χρώση PARP στους όγκους C4-2. Όπως φαίνεται στο Σχ. 5Α και 5Β, μειώθηκε σημαντικά τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων (Ki67) και αυξημένη αποπτωτικό θάνατο (διασπασμένη PARP) της παρατηρήθηκαν C4-2B όγκους σε τόσο miR-185 και 342 κατεργάζεται δείγματα όγκων συγκριτικά με την ομάδα ελέγχου. Η

in vivo

αποτελέσματα δείχνουν ότι η άμεση εφαρμογή του miR-185 και 342 του προστάτη όγκοι μπορεί να παρέχει ένα θεραπευτικό όφελος σε ένα πρότυπο σύστημα του καρκίνου του προστάτη.

Α, την ανάπτυξη του όγκου υποδόρια C4-2B ήταν προσδιορίστηκαν από τον όγκο του όγκου μετά από ενδοογκική παράδοση του miR-185, 342 ή NC κάθε 3 d για ένα 21-δ θεραπείας σε ποντίκια. Τόσο miR-185 και 342 ανέστειλε σημαντικά την ανάπτυξη των όγκων C4-2B σύγκριση με όγκους NC-θεραπεία. *,

P

& lt? 0,05? **

P

& lt? 0,005 σημαντικές διαφορές από όγκους NC-αγωγή (Ν = 5 για κάθε ομάδα). Β, Η σχετική έκφραση του miR-185 ή 342 σε όγκους C4-2B. αποτελέσματα qRT-PCR έδειξε ότι οι σχετικές miR-185 ή 342 επίπεδα ήταν σημαντικά αυξημένη στα υποδόριων όγκων C4-2B ένεση με miR-185 ή 342 σε σύγκριση με τους όγκους ελέγχου. Η σχετική έκφραση των miRNAs (πάσο) ορίστηκε ως 1,0 στην περιοχή NC. *,

P

& lt? 0.05 σημαντικές διαφορές από το NC. Τα δεδομένα κανονικοποιήθηκαν σε RNU6B και αντιπροσωπεύουν τη μέση τιμή ± SD. C, τα αποτελέσματα έδειξαν ότι η IHC κάτω ρύθμιση των SREBP-1, SREBP-2, FASN, HMGCR, AR και PSA παρατηρήθηκε στην miR-185 και 342 που έλαβαν υποδόρια όγκους C4-2B σε σύγκριση με τους όγκους NC-θεραπεία. Ράβδοι κλίμακας = 25 μm

Η

Η ποσοτικοποίηση των Α, Κί67 (πολλαπλασιασμό των κυττάρων) και Β, διασπασμένη PARP (C-PARP? Απόπτωση). Θετικά κύτταρα σε δείγματα όγκου υποδόρια C4-2B συλλέγονται από το ΜΙΚ NC, 185 και 342 ομάδες που έλαβαν θεραπεία. Εκατό κύτταρα σε 5 τυχαίως επιλεγμένες περιοχές μετρήθηκαν και Κύτταρα θετικής χρώσης καταγράφηκαν. **

P

& lt? 0.005 σημαντικές διαφορές από την ομάδα ελέγχου NC. Τα δεδομένα αντιπροσωπεύουν τη μέση τιμή ± SD. Αιχμές βελών δείχνουν τα θετικά κύτταρα C-PARP. Ράβδοι κλίμακας = 100 μm.

Η

Συζήτηση

Η ανώμαλη λιπιδίων και αναβολισμό χοληστερόλη συνδέεται στενά με τον καρκίνο του προστάτη [36], [37]. Up-ρύθμιση λιπογένεσης και cholesterogenesis σε καρκινικά κύτταρα συνδέεται με αυξημένη ανάγκη για συστατικά της κυτταρικής μεμβράνης και ενεργοποίηση των λιπιδίων σχεδίας που σχετίζονται διακυτταρική μεταγωγή σηματοδοσίας κατά τη διάρκεια ανεξέλεγκτο πολλαπλασιασμό των κυττάρων και διαίρεση, καθώς και την ανάπτυξη του καρκίνου και της εξέλιξης [24], [38] – [41]. Ο αποκλεισμός των ανώμαλων λιπογένεσης και cholesterogenesis παρέχει μια πολλά υποσχόμενη θεραπευτική προσέγγιση για την πρόληψη ή τη θεραπεία του προστατικού κακοήθειας. MiRNA έχει αναφερθεί να ρυθμίσει πολλαπλές σημαντικές βιολογικές διεργασίες, συμπεριλαμβανομένου του μεταβολισμού [3], [5] και έχει δυνητική χρήση στην θεραπεία του καρκίνου [42] – [44]. Ωστόσο, το πώς miRNA μεσολαβεί παρεκκλίνουσα του μεταβολισμού του λίπους και της ομοιόστασης σε κύτταρα καρκίνου του προστάτη παραμένει ασαφής. Σε αυτή τη μελέτη, εντοπίζουμε δύο miRNAs που παίζουν σημαντικό ρόλο στη ρύθμιση της λιπογένεσης και cholesterogenesis σε καρκινικά κύτταρα του προστάτη. MiR-185 και 342 ανέστειλε λιπαρό οξύ και τη βιοσύνθεση της χοληστερόλης μέσω της προς τα κάτω ρύθμιση των βασικών lipogenic και cholesterogenic παράγοντες μεταγραφής, SREBP-1 και SREBP-2, και προς τα κάτω ρυθμιζόμενα γονίδια τους, συμπεριλαμβανομένων FASN και HMGCR. SREBP-1 και FASN έχουν δειχθεί ότι είναι ένας δυνητικά ογκογόνο παράγοντα μεταγραφής [22] και μια μεταβολική ογκογονιδίου [20], [21], αντίστοιχα. MiR-185 και 342 μειώνεται κυτταρικό πολλαπλασιασμό, κλωνογονικότητας, τη μετανάστευση και την εισβολή, και επάγεται κασπάσης-εξαρτώμενη απόπτωση σε κύτταρα καρκίνου του προστάτη. Αυτά τα δεδομένα υποδεικνύουν ότι miR-185 και 342 παίζει ένα ρόλο ογκο-κατασταλτική με αναστολή της έκφρασης SREBP-1 και SREBP-2, και με τον τρόπο αυτό τον επαναπρογραμματισμό λιπογένεσης και cholesterogenesis.

Ένας αριθμός miRNAs έχουν ταυτοποιηθεί ότι συνδέονται με την ανάπτυξη του καρκίνου του προστάτη και την εξέλιξη της νόσου σε θανατηφόρες. MiR-20α αναφέρθηκε για τη ρύθμιση του πολλαπλασιασμού και την πρόοδο του κυτταρικού μέσω αναστολής του μεσοκυττάριου πρωτεΐνης συνδετίνης 43 έκφραση σε καρκίνο του προστάτη [45]. Μειωμένη έκφραση του miR-143 και 145 βρέθηκε σε ασθενείς με καρκίνο του προστάτη με μετάσταση στα οστά [46]. Επίσης, και οι δύο miR-143 και 145 μεσολαβεί επιθηλιακά-μεσεγχυματικά μετάβασης (ΕΜΤ) και κατέστειλε το μεταστατικό καρκίνο ικανότητα του προστάτη PC3 κύτταρα

in vitro

και

in vivo

[46]. MiR-203 κάτω-ρυθμίζονται μια ομάδα γονιδίων που σχετίζονται με μετάσταση και εμπόδισε οστικές μεταστάσεις στον καρκίνο του προστάτη [47]. Με την αναστολή της έκφρασης CD44, miR-34a ανέστειλε τη μετανάστευση και την εισβολή του καρκίνου του προστάτη βλαστικά κύτταρα [48]. MiR-ας-7c μειωμένη έκφραση AR και δραστηριότητα στα καρκινικά κύτταρα του προστάτη με τη στόχευση ένα ογκογόνο παράγοντα μεταγραφής, c-Myc [49]. Η ανάλυση των δειγμάτων κλινικής του όγκου που συλλέγονται από την οστική μεταστατική ευνουχισμό καρκίνο του προστάτη ανθεκτικού (CRPC) ασθενείς έδειξε ότι το παρεκκλίνουσα έκφραση /27β miR-23b θα μπορούσαν να εμπλέκονται στην εξέλιξη της αντίστασης ευνουχισμό [50]. Επιπλέον, miR-221 και 222 έχουν αποδειχθεί ότι ελέγχουν την ανάπτυξη των CRPC [12]. Στην παρούσα μελέτη, ανακάλυψε δύο νέα λιπιδίων και της χοληστερόλης αναβολισμό ρυθμίζονται miRNAs, miR-185 και 342, που μπλοκάρει την SREBP-λιπογένεση-cholesterogenesis, μειωμένη έκφραση AR, ανέστειλε ογκογενετικότητας και προκαλείται από αποπτωτικό θάνατο σε καρκινικά κύτταρα του προστάτη. Ένας συνδυασμός miR-185 και 342 δεν έδειξε την σημαντική προσθετική ή συνεργιστική δράση επί της έκφρασης γονιδίου, την ανάπτυξη, τη μετανάστευση και την εισβολή σε σύγκριση με ενιαία miRNA σε κύτταρα καρκίνου του προστάτη (δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Επιπλέον, η έκφραση της εγγενούς miR-185 ή 342 ήταν σημαντικά χαμηλό σε καρκινικά κύτταρα του προστάτη σε σύγκριση με φυσιολογικά /επιθηλιακά κύτταρα μη-καρκινικά. Περαιτέρω διερεύνηση των προφίλ έκφρασης του miR-185 και 342 σε δείγματα ανθρώπινου όγκου του προστάτη είναι δικαιολογημένη.