Αφηρημένο

Ιστορικό

Το σάλιο (από του στόματος υγρά) είναι μια αναδυόμενη Βιορευστομηχανική έτοιμη για ανίχνευση των κλινικών ασθενειών. Αν και το σκεπτικό για ασθένειες εφαρμογές από το στόμα (π.χ. καρκίνο του στόματος) είναι διαισθητική, η λογική και η σχέση μεταξύ των συστηματικών νόσων και βιοδείκτες σάλιο είναι ασαφείς.

Μεθοδολογία /Κύρια Ευρήματα

Σε αυτή τη μελέτη, χρησιμοποιήσαμε μοντέλα ποντικών του μελανώματος και μη μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα και συγκρίθηκαν τα προφίλ μεταγραφικό βιοδείκτη ποντικών που φέρουν όγκους με εκείνα των ποντικών ελέγχου. ανάλυση μικροσυστοιχιών έδειξαν ότι transcriptomes σιελογόνων ήταν σημαντικά μεταβληθεί σε ποντίκια έναντι ελέγχων που φέρουν όγκο. Σημαντική επικάλυψη μεταξύ transcriptomes των όγκων του ποντικιού, ορό, στους σιελογόνους αδένες και το σάλιο δείχνει ότι σιελογόνων βιοδείκτες έχουν πολλαπλές προελεύσεις. Επιπλέον, έχουμε προσδιορίσει ότι η έκφραση των δύο ομάδων σημαντικά μεταβληθεί παραγόντων μεταγραφής (ΤΡ) RUNX1, Mlxipl, Trim30 και Egr1, Tbx1, Nr1d1 σε ιστό σιελογόνων αδένων των ποντικών με μελάνωμα που φέρουν μπορεί ενδεχομένως να είναι υπεύθυνη για 82,6% του επάνω ρυθμισμένη γονιδιακής έκφρασης και 62,5% της έκφρασης του γονιδίου ρυθμίζεται προς τα κάτω, αντίστοιχα, στο σάλιο ποντικών με μελάνωμα που φέρουν. Δείξαμε επίσης ότι η έκτοπη παραγωγή του αυξητικού παράγοντα νεύρων (NGF) στον ιστό του όγκου μελανώματος ως όγκους απελευθερώνεται μεσολαβητής μπορεί να επάγει την έκφραση του TF Egr-1 στο σιελογόνο αδένα.

Συμπεράσματα

στο σύνολό τους, τα δεδομένα μας υποστηρίζουν το συμπέρασμα ότι κατά την ανάπτυξη συστηματικής νόσου, μπορεί να συμβεί σημαντικές αλλαγές στο προφίλ των σιελογόνων βιοδεικτών. Αν και η προέλευση των ασθενειών που προκαλούνται από βιοδείκτες σιέλου μπορεί να είναι τόσο συστηματική και τοπική, η διέγερση των σιελογόνων αδένων από μεσολαβητές που απελευθερώνονται από απομακρυσμένους όγκους παίζει σημαντικό ρόλο στη ρύθμιση των σιελογόνων παρένθετη προφίλ βιοδεικτών

Παράθεση:. Gao K, Zhou Η, Zhang L, Lee JW, Zhou Q, Χου S, et al. (2009) Συστημική Νόσος-Induced σιελογόνων βιοδεικτών προφίλ σε μοντέλα ποντικών του μελανώματος και μη-μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα. PLoS ONE 4 (6): e5875. doi: 10.1371 /journal.pone.0005875

Επιμέλεια: Benjamin Rich, του Χάρβαρντ Ινστιτούτο Ιατρικής, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 5 Γενάρη, 2009? Αποδεκτές: 16 Μάη 2009? Δημοσιεύθηκε: 11 Ιουνίου, 2009

Copyright: © 2009 Gao et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτή η μελέτη υποστηρίχθηκε από ΝΙΗ χορηγεί RO1 DE017170 και R21 CA126733 να DTW Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα.

Εισαγωγή

το σάλιο φιλοξενεί ένα ευρύ φάσμα των πρωτεϊνών /πεπτιδίων, νουκλεϊκών οξέων, ηλεκτρολύτες, και τις ορμόνες που προέρχονται από πολλαπλές τοπικές και συστημικές πηγές. Οι βιοχημικές και φυσικοχημικές ιδιότητες του σάλιου υποστηρίζουν σημαντικές λειτουργίες του στην στοματική υγεία, όπως η πέψη των τροφίμων, αντιβακτηριακή δράση, και διατήρηση της ακεραιότητας των δοντιών [1], [2]. Για παράδειγμα, η ξηροστομία είναι μια προφορική ασθένεια που προκαλείται από μια δυσλειτουργία των σιελογόνων αδένων, που συνοδεύεται από μειωμένη ή απούσα την έκκριση του σάλιου και είναι η αιτία της αχαλίνωτης τερηδόνα και βλεννογονίτιδα.

διαγνωστικά, μια σειρά από ευρήματα στο τελευταία δεκαετία έχουν ωθήσει ενδιαφέρον για τη χρήση του σάλιου ως πηγή βιοδεικτών. Το διαλυτό θραύσμα του c-erbB-2 ήταν ανιχνεύσιμη στο σάλιο των ασθενών με καρκίνο του μαστού, αλλά όχι σε υγιείς μάρτυρες ή σε ασθενείς που φέρουν καλοήθεις όγκους [3]. Επίπεδα των ορμονών (π.χ. κορτιζόλη, οξυτοκίνη) και φάρμακα (π.χ. σισπλατίνη, νικοτίνη, μεθαδόνη) στο σάλιο αντανακλούν τη συγκέντρωσή τους στον ορό [4], [5], [6]. Το 2004 το σάλιο με βάση την ανίχνευση του ιού HIV εγκρίθηκε από την αμερικανική Υπηρεσία Τροφίμων και Φαρμάκων (FDA).

Μια σημαντική ώθηση στην επιστημονική θεμελίωση και των υποδομών των ερευνητικών διαγνωστικών σιελογόνων ήρθε πριν από έξι χρόνια, όταν το Εθνικό Ινστιτούτο Οδοντιατρικής & amp ? Κρανιοπροσωπική Ερευνών (NIDCR) έκανε μια σημαντική επένδυση προς την ανάπτυξη της χρήσης του σάλιου ως διαγνωστικό εργαλείο. Το σάλιο έχει γίνει από τότε ένα Βιορευστομηχανική που είναι έτοιμη για την μεταφραστική και κλινικές εφαρμογές. Αξιοσημείωτη είναι η ωρίμανση του proteome σιελογόνων, η πρώτη εφαρμογή στη διαγνωστική εργαλειοθήκη για τη διάγνωση σάλιο που βασίζονται. Γνωρίζουμε πλέον ότι υπάρχουν 1166 πρωτεϊνών στο ανθρώπινο σάλιο, τα καθήκοντα των οποίων κυμαίνονται από διαρθρωτικές δεσμευτική για τη συμμετοχή σε διάφορες βιολογικές διαδικασίες [7]. Ένα δεύτερο διαγνωστικό πόρων στο σάλιο έκτοτε αναδείχθηκε, το μεταγραφικό σιέλου. Χρησιμοποιώντας την σιελογόνους μεταγραφικό ως διαγνωστικό εργαλείο, ένα σύνολο 185 mRNAs προσδιορίστηκε ως «κανονική πυρήνας σιελογόνους μεταγραφές» (NSCT) [8]. Επιπλέον, το μεταγραφικό σιελογόνους έχει αποδειχθεί ότι είναι κλινικά διακρίσεις για ανίχνευση καρκίνο του στόματος και το σύνδρομο Sjögren (SS). Ο συνδυασμός των επτά σιελογόνων μεταγραφές βιοδείκτες (

IL8, IL1B, DUSP1, ΗΑ3, OAZ1, S100P, και SAT

) μπορούν να χρησιμοποιηθούν για τη διάκριση μεταξύ της σάλιο των ασθενών με από του στόματος καρκίνωμα πλακωδών κυττάρων (OSCC) και της έλεγχοι με 91% ευαισθησία και ειδικότητα [9]? ενώ πέντε σιελογόνων πρωτεομική δείκτες (M2BP, CD59, καταλάση, MRP-14 και Profilin) ​​δείχνουν συλλογικά μια ευαισθησία 93% και ειδικότητα αντίστοιχα για την ανίχνευση του καρκίνου του στόματος, χρησιμοποιώντας το σάλιο [10]. Μια άλλη μελέτη έδειξε ότι το 27 mRNAs και 16 πεπτίδια σε δείγματα σιέλου των ασθενών SS ήταν σημαντικά ανάντη ή προς τα κάτω ρυθμισμένα [11]. Η τεχνολογία των σιελογόνων μεταγραφικό έχει πρόσφατα προχωρήσει σε επίπεδο εξόνιο με την ικανότητα να προφίλ συνολικά το μεταγραφικό σιελογόνους χρησιμοποιώντας ένα εξόνιο-based τεχνολογία [12].

Υπάρχουν πολλά πλεονεκτήματα στη χρήση σάλιο σαν κλινικό διαγνωστικό Βιορευστομηχανική . Η συλλογή των δειγμάτων είναι απλή, μη επεμβατική και προκαλεί λίγο άγχος από την πλευρά των ασθενών. Η χρήση του σάλιου προσφέρει επίσης μια οικονομικά αποδοτική προσέγγιση για οθόνες μεγάλης κλίμακας [6].

Η χρήση του σάλιου για την ανίχνευση των νόσων του στόματος έχει επιβεβαιωθεί, αλλά η χρήση του για τη συστηματική νόσος είναι σε μεγάλο βαθμό ασαφής. Ενώ οι εκθέσεις έχουν περιγράψει την ανίχνευση βιοδεικτών συστημικών καρκίνου στο σάλιο (π.χ. γ-ERB2 σε ασθενείς με καρκίνο του μαστού), οι μηχανισμοί που διέπουν αυτό το φαινόμενο παραμένουν αναπόδεικτα. Ο στόχος αυτής της μελέτης ήταν να διερευνήσει τα επιστημονικά στοιχεία και να παρέχουν ένα σκεπτικό για τη χρήση του σάλιου για ανίχνευση συστηματική νόσο. Χρησιμοποιήσαμε συγγενή μοντέλα όγκου ποντικού να αναπτύξουν όγκους απομακρυσμένο από τη στοματική κοιλότητα και να χρησιμοποιηθεί το σιελογόνο μεταγραφικό ως προφίλ βιοδεικτών ανάγνωσης (Εικ. 1). Το μεταγραφικό σιελογόνων έχει επικυρωθεί ως επιστημονικά αξιόπιστη και τεκμηριωμένη πηγή βιοδείκτη στο σάλιο [8], [9], [11], [12], [13], [14], [15], [16], [17 ], η οποία επιτρέπει την υψηλή απόδοση αναλύσεις και αναγνώσεως αναγκαία για τις μελέτες

ποντίκια (είτε C57BL /6 ποντικούς ή ποντικούς DBA /2) διαιρέθηκαν τυχαία σε δύο ομάδες ως εξής: α. ομάδα ελέγχου (ποντίκια ελέγχου ) και την ομάδα του όγκου (όγκους ποντίκια) (15 ζώα ανά ομάδα). PBS εγχύθηκε σε ποντικούς ελέγχου, ενώ τα ποντίκια στην ομάδα όγκου ενέθηκαν με καρκινικά κύτταρα. Οι όγκοι εγκατάσταση πήρε περίπου 3 εβδομάδες. ιστούς σάλιο, σιελογόνων αδένων, του ορού και του όγκου συλλέχθηκαν από το κάθε ποντίκι. Πέντε ποντικοί κάθε συνενώθηκαν σε μία ομάδα και υποβάλλονται σε επεξεργασία στο προφίλ μεταγραφικό τους από τις μικροσυστοιχίες έκφρασης.

Η

Αποτελέσματα

Σημαντικές ασθένεια που προκαλείται από διαφορές μεταξύ των προφίλ των σιελογόνων μεταγραφικό βιοδείκτη σε φέροντα όγκο και ποντίκια ελέγχου

για να εκτιμηθεί κατά πόσον οι αλλαγές στο προφίλ των σιελογόνων μεταγραφικό βιοδείκτη μετά την ανάπτυξη ενός απομακρυσμένου όγκου, πραγματοποιήσαμε ανάλυση μικροσυστοιχιών να συγκρίνουν τα προφίλ μεταγραφικό βιοδείκτη στο σάλιο των ποντικών ελέγχου (τρεις ομάδες, 5 ποντίκια σε κάθε ομάδα) με φέροντα όγκο (μελάνωμα ή πνεύμονα) ποντικούς (τρεις ομάδες, 5 ποντίκια σε κάθε ομάδα) (Εικ. 1). Είναι απαραίτητο να έχουμε πέντε ποντίκια σε κάθε ομάδα όγκου ή ελέγχου, προκειμένου να συγκεντρώσουν επαρκή σάλιο για απομόνωση RNA. κριτήρια επιλογής των βιοδεικτών ορίστηκαν ως φορές μεταβολής & gt? 2 και

P

& lt? 0,05. Ταυτοποιήσαμε 152 σημαντικά επάνω ρυθμισμένη γνωστά γονίδια και 359 σημαντικά κάτω ρυθμισμένα γνωστά γονίδια (Σχ. 2Α, ο Πίνακας S3 και S4) στο σάλιο ποντικών με μελάνωμα που φέρουν σε σύγκριση με συγκριτικούς ποντικούς. Ομοίως, βρήκαμε 290 σημαντικά επάνω ρυθμισμένη μεταγραφές και 784 σημαντικά κάτω-ρυθμίζονται μεταγραφές (Σχ. 2Β, .Sτον πίνακα S5 και S6) στο σάλιο του πνεύμονα ποντικών καρκίνο φέρουν σε σύγκριση με τους ποντικούς ελέγχου.

Μια ανάλυση

, Σύμπλεγμα 152 έως ρυθμίζονται γνωστά γονίδια (που αντιπροσωπεύουν 225 probsets, το αριστερό πάνελ) και 359 κάτω-ρυθμίζονται γνωστά γονίδια (που αντιπροσωπεύουν 403 probsets, ο δεξιός πίνακας) διαφορικά εκφράζονται στο σάλιο των ποντικών με μελάνωμα έναντι του ελέγχου ποντίκια (P-value & lt? 0,05? πάσο αλλαγή ≥2). Τα προφίλ έκφρασης τυποποιήθηκαν να έχουν μηδενική μέση τιμή και την τυπική απόκλιση της μονάδας. Κόκκινο και πράσινο αντιπροσωπεύουν υψηλά και χαμηλά επίπεδα έκφρασης μετά την τυποποίηση, αντίστοιχα.

Β

, ανάλυση Σύμπλεγμα 290 έως ρυθμιζόμενα και 784 κάτω-ρυθμίζονται probesets διαφορικά εκφράζονται στο σάλιο των ποντικών καρκινώματος πνεύμονα εναντίον ποντίκια ελέγχου (P-value & lt? 0,05? Πάσο αλλαγή ≥2).

C

και

D

, Συρροή διαφοροποιημένη έκφραση των γονιδίων μεταξύ του μοντέλου μελανώματος και το μοντέλο καρκίνου του πνεύμονα.

C

, αλληλεπικάλυψη των 225 πάνω ρυθμισμένα γονίδια στο μοντέλο μελανώματος και 290 ρυθμισμένα προς τα πάνω γονίδια στο μοντέλο καρκίνου του πνεύμονα.

D

, η επικάλυψη των 403 κάτω-ρυθμιζόμενα γονίδια στο μοντέλο μελανώματος και 784 κάτω-ρυθμιζόμενα γονίδια στο μοντέλο καρκίνου του πνεύμονα.

Η

επικαλύπτονται επίσης την έκφραση του γονιδίου διαφοροποιημένη στο σάλιο του μελανώματος ποντικών με εκείνη των ποντικών με καρκίνο του πνεύμονα. Συγκρίνοντας τα επάνω ρυθμισμένη ή κάτω-ρυθμιζόμενα γονίδια σιελογόνων σε δύο μοντέλα, αντίστοιχα, βρήκαμε 11 πάνω ρυθμισμένα (Σχ. 2C) και 17 ρυθμισμένα προς τα κάτω (Σχ. 2D) υφίστανται μεταγραφές στα δύο μοντέλα. Ωστόσο, λαμβάνοντας υπόψη τις διαφορετικές γενετικό υπόβαθρο και καρκινικές κυτταρικές σειρές στις δύο λειτουργίες του ποντικιού, δεν είναι έκπληξη το γεγονός ότι μόνο ένα κλάσμα των συνολικών μεταβληθεί γονιδίων επικαλύπτονται (4,8% (11/225) ή 3,8% (11/290) up-ρυθμίζονται γονιδίων στο μοντέλο μελανώματος ή μοντέλο καρκίνου του πνεύμονα, αντίστοιχα?. 4,2% (17/403) ή 2,1% (17/784) κάτω-ρυθμίζονται μεταγραφές στα δύο μοντέλα, αντίστοιχα)

Πολλαπλές πηγές συμβάλλουν στον όγκο επαγόμενη σιελογόνων προφίλ mRNA αλλοίωση

Για να εξεταστούν οι πιθανές πηγές που συμβάλλουν στις μεταβολές των σιελογόνων μεταγραφικό σε ποντίκια σε απόκριση σε συστηματική νόσο, θα φιλτράρεται η έκφραση προφίλ δεδομένων από τα ποντίκια με μελάνωμα που φέρουν (όγκου, ορού, των σιελογόνων αδένων και το σάλιο) για να επιλέξετε «παρών» mRNA με ένα

P

αξία & lt? 0.001 και μια τιμή έντασης & gt? 200. Στο μοντέλο μελανώματος, 20175, 5493, 19904, και 306 μεταγραφές εντοπίστηκαν στον όγκο, ορό, των σιελογόνων αδένων και το σάλιο, αντίστοιχα (Σχ. 3Α). Μετά από επικάλυψη όλες τις παρούσες γονίδια από όγκο, ορό, των σιελογόνων αδένων και το σάλιο, το Σχ. 3Β έδειξε ότι από τα 306 μεταγραφές που υπάρχουν στο σάλιο, 67,6% είναι επίσης παρούσες στον ιστό μελανώματος όγκου, 51,6% είναι επίσης παρούσες στον ορό και 69,6% είναι επίσης παρούσα σε σιελογόνων αδένων. Αυτά τα δεδομένα υποδεικνύουν ότι η προέλευση της παρούσας μεταγραφικό στο σάλιο μπορεί να σχετίζεται με διάφορα διαμερίσματα σε ολόκληρο το σώμα που αποτελεί εντελώς ~75.2% των 306 σιελογόνων μεταγραφές. Επιπλέον, το 24,8% των 306 μεταγραφές δεν συμπίπτουν με τα γονίδια στον όγκο, των σιελογόνων αδένων και ορό, γεγονός που υποδηλώνει ότι μπορεί να προέρχονται από τη στοματική κοιλότητα.

Μια

, Συρροή μεταγραφές παρουσιάσει στο σάλιο, σιελογόνων αδένων, του ορού και του όγκου στα ποντίκια με μελάνωμα που φέρουν.

Β

, Από τις 306 μεταγραφές σιέλου, 69,6% ήταν παρόντες σε σιελογόνων αδένων, 51,6% υπάρχει στον ορό, 67,6% παρούσα σε όγκο (μελάνωμα), και 24,8% μπορεί να προέρχονται από τη στοματική κοιλότητα (τοπικό).

η αλλαγμένη έκφραση των μεταγραφικών παραγόντων (ΤΡ) σε σιελογόνους αδένες των ποντικών με μελάνωμα που φέρουν συσχετίζεται με μεταβολές της γονιδιακής έκφρασης του παράγοντα μεσολάβηση αλλαγμένη μεταγραφή στο ποντίκι σάλιο

από το μεταγραφικό σιελογόνων σαφώς αλλάζει με σε φέροντα όγκο έναντι ποντικών ελέγχου, υποθέσαμε ότι οι όγκοι συμπεριφέρονται σαν ενδοκρινή όργανα κατά το ότι εκκρίνουν μεσολαβητές (ορμόνες, λεμφοκίνες, κυτοκίνες), τα οποία μπορούν να επηρεάσουν την δραστικότητα του ΤΡ σε σιελογόνους αδένες και έτσι να επάγουν τα πάνω ή προς τα κάτω ρύθμιση της μετεγγραφής επίπεδα στο σάλιο.

Αν και τα δύο πρότυπα καρκίνου του ποντικού σε αυτή τη μελέτη είναι καλά εδραιωμένη [34], [35], το μοντέλο ποντικού μελανώματος προσομοιώνει ανθρώπινου μελανώματος καλύτερα από μοντέλο καρκίνου του πνεύμονα θεωρητικά και παθολογικά επειδή τόσο ανθρώπινου μελανώματος και αυτό το μελάνωμα ποντικιού συμβεί υποδορίως. Συνεπώς, χρησιμοποιήσαμε την μελανώματος που φέρουν C57BL /6 ποντίκια, ως μοντέλο εργασίας για τη δοκιμή υπόθεσή μας.

πρώτα σύγκριση των προφίλ γονιδιακής έκφρασης των σιελογόνων αδένων ιστών σε μελάνωμα που φέρουν ποντίκια με ποντίκια ελέγχου και προσδιόρισε λίστα 46 σημαντικά πάνω ρυθμισμένα TFs (πάσο αλλαγή & gt? 2 και

P

& lt? 0,05) (Πίνακας S1). Στη συνέχεια υπολογίζεται τους συντελεστές συσχέτισης μεταξύ των προφίλ έκφρασης αυτών των σημαντικά μεταβληθεί TFs και τα διαφορικά εκφραζόμενα γονίδια (τόσο πάνω και κάτω ρυθμιζόμενη) στο σάλιο των ποντικών με μελάνωμα που φέρουν. Οι TFs στη συνέχεια κατατάσσονται με τον αριθμό των εξαιρετικά συν-εκφράζονται γονίδια των οποίων η συσχέτιση με την έκφραση TF είναι & gt? 0,5. Τα 6 επάνω ρυθμισμένη TFs με υψηλότερη κατάταξη ήταν RUNX1 (που σχετίζονται runt παράγοντα μεταγραφής 1), MLXIPL (musculus MLX αλληλεπιδρά με πρωτεΐνη παρόμοια) και TRIM30 (τριμερής πρωτεΐνη μοτίβο 30) για ρυθμισμένη προς τα πάνω γονίδια των σιελογόνων και Egr1 (Early αυξητικού παράγοντα-1), Tbx1 (T-box 1) και Nr1d1 (πυρηνικό υποδοχέα musculus υποοικογένεια 1, ομάδα Δ, μέλος 1) για την προς τα κάτω ρύθμιση των γονιδίων των σιελογόνων (Εικ. 4Α, E, F).

Μια

, Τα 6 ΤΡ (

RUNX1, Trim30, Mlxipl, Egr1, Nr1d1, TBX1

) εκφράζονται σημαντικά υψηλότερη στην σιελογόνων αδένων των ποντικών με μελάνωμα που φέρουν vs. ποντικούς ελέγχου (Ρ & lt? 0,05, Πίνακας S1).

B

, τα επίπεδα έκφρασης του mRNA αυτών των 6 ΤΡ (

RUNX1, Trim30, Mlxipl, Egr1, Nr1d1, TBX1

) στην σιελογόνων αδένων των ποντικών με μελάνωμα vs. ότι φυσιολογικών ποντικών επικυρωθεί από qRCR . Η οριζόντια διακεκομμένη γραμμή δείχνει τα επίπεδα της γονιδιακής έκφρασης σε ποντικούς ελέγχου, το οποίο αυθαίρετα ορίζεται σε 1. Οι στήλες αντιπροσωπεύουν τα επίπεδα γονιδιακής έκφρασης στην σιελογόνων αδένων των ποντικών με μελάνωμα σε σχέση με τα ποντίκια ελέγχου. Τα πειράματα πραγματοποιήθηκαν εις τριπλούν? μπαρ, SD.

C

, τα επίπεδα έκφρασης των πέντε TFs (RUNX1, Mlxipl, Egr1, Nr1d1, και TBX1) στους σιελογόνους αδένες τους ιστούς των ποντικών ελέγχου και ποντίκια μελάνωμα μετρήθηκαν με ανοσοαποτύπωση. (C1, C2, C3 και Τ1, Τ2, Τ3 είναι τα ίδια παρτίδα ιστών που χρησιμοποιείται στη δοκιμασία microarray). Σημειώστε ότι η εμπορική αντισώματος δεν ήταν διαθέσιμη για ποντικού Trim30.

D

, σχετικά επίπεδα έκφρασης της πρωτεΐνης από τα παραπάνω πέντε TFs στο μελάνωμα ποντικούς εναντίον ποντίκια ελέγχου. ένταση του σήματος του κηλίδα στο Σχήμα 4

C

ποσοτικά με το λογισμικό J εικόνας (ΝΙΗ). Η οριζόντια διακεκομμένη γραμμή δείχνει τα επίπεδα έκφρασης αυτών των 5 ΤΡ σε ποντικούς ελέγχου, το οποίο αυθαίρετα ορίζεται σε 1. Στήλες δείχνουν ότι τα σχετικά επίπεδα πρωτεΐνης των 5 ΤΡ σε ποντικούς που φέρουν όγκο σε σύγκριση με τους ποντικούς ελέγχου? μπαρ, SD.

E

και

F

, Η έκφραση της 6ης TFs (

RUNX1, Trim30, Mlxipl, Egr1, Nr1d1, TBX1

) στην σιελογόνων αδένων των ποντικών μελανώματος συσχετίστηκαν με διαφοροποιημένη έκφραση γονιδίου στο σάλιο ποντίκι. Τρία από αυτά (RUNX1, Trim30 και

Mlxipl

) μπορεί να είναι δυνητικά υπεύθυνος για 180, 35 και 16 των up-ρυθμίζονται μεταγραφές σιελογόνων σε ποντίκια μελάνωμα (

P

& lt? 0.05), αντίστοιχα , ενώ τα άλλα TFs 3 (

Egr1, Tbx1 και Nr1d1

) είναι δυνητικά συσχετίζονται με 119, 116 και 77 ρυθμισμένα προς τα κάτω μεταγραφές σιαλογόνων (

P

& lt? 0,05).

G

, Η έκφραση των 3 ΤΡ (RUNX1, Trim30 και Mlxipl) εντελώς συσχετίζεται με 82,6% ((180 + 5 + 1) /225 = 82,6%) επάνω ρυθμισμένη έκφραση γονιδίου σε σάλιο ποντικού μελανώματος από επικαλυπτόμενες όλα τα γονίδια σιελογόνων οι οποίες συσχετίζονται με αυτά τα 3 TFs από το Σχ. 4

E

.

Η

, η έκφραση των άλλων 3 TFs (Egr1, TBX1 και Nr1d1) εντελώς συσχετίζονται με 62,5% ((119 + 58 + 2 + 73) /403 = 62,5%) κάτω-ρυθμιζόμενη γονιδιακή έκφραση στο σάλιο ποντικών με μελάνωμα από επικαλυπτόμενα όλα σιελογόνους γονίδια τα οποία συσχετίζονται με αυτά τα 3 TFs από το Σχ. 4

F

.

Η

Στη συνέχεια, τα τροποποιημένα πρότυπα έκφρασης αυτών των TFs σιελογόνων αδένων επικυρώθηκαν τόσο στο επίπεδο της μεταγραφής και πρωτεϊνών από qPCR και ανοσοαποτύπωση. Το Σχήμα 4

B

δείχνει ότι τα επίπεδα του mRNA των έξι TFs αυξήθηκε από 3- έως 16- φορές στους σιελογόνους αδένες των ποντικών με μελάνωμα που φέρουν σε σύγκριση με συγκριτικούς ποντικούς. Ανοσοκηλίδωση ανίχνευση χρησιμοποιώντας 5 εμπορικώς διαθέσιμα TFs αντισώματα ποντικού απεκάλυψε 1,5 έως 3,5 φορές υψηλότερα επίπεδα έκφρασης από αυτά TFs στους σιελογόνους αδένες των ποντικών με μελάνωμα που φέρουν ό, τι σε ποντικούς ελέγχου (Σχήμα 4

C και 4D

). Στη συνέχεια, το Σχήμα 4

Ε και F

δείχνουν ότι οι πιο πάνω 6 TFs συνδέθηκαν με μια σειρά διαφοροποιημένων γονιδιακή έκφραση στο σάλιο ποντικού. Μετά επικάλυψη των συνδεδεμένων γονιδίων κάθε TF, μπορεί να φανεί ότι οι αλλαγμένες δραστηριότητες των τριών ΤΡ (RUNX1, MLXIPL και TRIM30) μπορεί να είναι δυνητικά υπεύθυνη για το 83% των πάνω ρυθμισμένα mRNAs στο σάλιο (Εικ. 4

G

), ενώ οι συλλογικές μεταβληθεί δραστηριότητες Egr1, Tbx1 και Nr1d1 μπορεί ενδεχομένως να ευθύνονται για το 63% του κάτω-ρυθμιζόμενη έκφραση των mRNA των σιελογόνων (Εικ. 4

η

).

το Egr-1 μονοπάτι σήματος και ανίχνευση του παράγοντα ανάπτυξης νεύρου (NGF) σε ιστό όγκου μελανώματος και

ορού

Για να διερευνηθεί κατά πόσο οι ανέπτυξαν όγκους μπορεί να μεσολαβήσει την αλλαγμένη έκφραση TFs στους σιελογόνους αδένες των ποντικών που φέρουν όγκο, εξετάσαμε την οδό σήματος NGF /Egr1 επειδή Egr1 ταυτοποιήθηκε ως πάνω ρυθμισμένα TF στο σιελογόνων αδένων των ποντικών με μελάνωμα όγκου. Είναι γνωστό ότι το Egr-1 είναι ένα TF στον NGF μονοπάτι [18] σηματοδότησης, [19] (εικ. 5Α). Ως εκ τούτου, υποθέτουμε ότι ο NGF εκκρίνεται στην κυκλοφορία από το μελάνωμα, κυκλοφορεί στο σιελογόνο αδένα όπου ενεργοποιεί τον καταρράκτη σηματοδότησης μεσολάβηση υποδοχέα οδηγεί σε Egr-1 προς τα πάνω ρύθμιση και επαγωγή των ειδικών γονιδίων μεταγραφής και μετάφρασης πρωτεΐνης. Το Σχήμα 5Β δείχνει ότι ο NGF παράγεται σε ιστό μελανώματος σε σημαντικά υψηλότερα επίπεδα από ό, τι σε κανονικό δέρμα (

P

& lt? 0.001). Το Σχήμα 5C δείχνει ότι ο NGF είναι επίσης σημαντικά υψηλότερη στον ορό των ποντικών με μελάνωμα που φέρουν σε σύγκριση με τα ποντίκια ελέγχου (

P

& lt? 0,05). Συλλογικά τα δεδομένα αυτά υποδηλώνουν ότι το μελάνωμα μπορεί να παράγει NGF και είναι αυτό εκκρίνεται στην κυκλοφορία του αίματος. Μετά την επίτευξη των σιελογόνων αδένων, τα αυξημένα επίπεδα του NGF στο αίμα θα μπορούσε στη συνέχεια διεγείρουν την αυξημένη έκφραση του ΤΡ όπως Egr-1 που οδηγεί σε προφίλ έκφρασης και την πρωτεΐνη αλλαγμένο γονίδιο στο σάλιο ποντικών με μελάνωμα που φέρουν.

Μια

, Ένα μονοπάτι που περιλαμβάνουν τον παράγοντα μεταγραφής Egr1. νευρικού αυξητικού παράγοντα (NGF) μπορεί να είναι ένας παράγοντας ανάντη του Egr1.

Β

, έκφραση του NGF σε ποντίκια δέρματος και το μελάνωμα ιστούς μετρήθηκαν με ELISA. Οι στήλες είναι απόλυτες μέσες τιμές συγκέντρωσης NGF σε ιστούς από πέντε ποντίκια μελάνωμα. ***

P

& lt? 0.001.

C

, Έκφραση του NGF στον ορό των ποντικών ελέγχου και ποντίκια όγκου. Οι στήλες είναι απόλυτες μέσες τιμές συγκέντρωσης NGF σε ορό από πέντε ποντικούς ελέγχου και πέντε ποντίκια μελάνωμα. Bar, SD. **

P

& lt? 0,05

Η

Συζήτηση

Οι μελέτες έχουν δείξει τις δυνατότητες για τη χρήση του σάλιου ως διαγνωστικό Βιορευστομηχανική στη μεταγραφική και κλινικές εφαρμογές. Ως ένα βιολογικό δείγμα, το σάλιο είναι φθηνό και εύκολα προσβάσιμο από μη επεμβατικά μέσα. Η ολοκληρωμένη βάση γνώσεων της διαγνωστικής σύνθεσης του σάλιου προσφέρει μια πολύτιμη και κατατοπιστική πόρων για την ανακάλυψη βιοδεικτών (www.skb.ucla.edu). Εξαιρετικά διακριτική σιελογόνων βιοδεικτών για δύο ασθένειες του στόματος: έχουν καρκίνο του στόματος και του συνδρόμου Sjögren έχουν προσδιοριστεί και επικυρωθεί [9], [11]. Ωστόσο, η σχέση μεταξύ των συστηματικών νόσων και βιοδείκτες σάλιο είναι ακόμα ασαφής. Σε αυτή τη μελέτη, χρησιμοποιήσαμε μοντέλα ποντικών του καρκίνου να καθοριστεί αν τα προφίλ των σιελογόνων βιοδείκτη που επηρεάζονται από την ανάπτυξη περιφερική νόσο. Τα στοιχεία μας έδειξαν ότι οι σιελογόνοι προφίλ μεταγραφικό μεταβάλλονται σημαντικά σε ποντίκια που φέρουν έναν από τους δύο όγκους: μελάνωμα και καρκίνωμα πνεύμονα (Εικ. 2). Κάθε όγκου τύπου συνδέθηκε με ένα διαφορετικό προφίλ σιέλου μεταγραφικό. Επιπλέον, η ανάλυση μας παραγωγής NGF και ο TF Egr1 δείχνουν ότι η παραγωγή των αυξητικών παραγόντων στον ιστό του όγκου αντιπροσωπεύει ένα μηχανισμό με τον οποίο ένα μακρινό όγκος μπορεί να αλλάξει το μεταγραφικό του σιελογόνου αδένα και ως εκ τούτου το σάλιο. Τα ευρήματα αυτά δείχνουν επίσης ότι οι σιελογόνοι αδένες μπορεί να διαδραματίσει καίριο ρόλο στη διαμεσολάβηση του όγκου που προκαλείται από αλλαγές στο σάλιο προφίλ μεταγραφικό βιοδείκτη. Εκτός από την παρουσίαση ότι η ασθένεια που προκαλείται κυκλοφορούν βιοδείκτες μπορούν να βρουν το δρόμο τους μέσα στο σάλιο, τα ευρήματα αυτά υποδηλώνουν ότι η ασθένεια που προκαλείται από σιελογόνων αδένων παρένθετη βιοδείκτες μπορεί να έχουν διαγνωστική αξία για την ανίχνευση ή παρακολούθηση των συστηματικών νοσημάτων.

Από μας πρώτη έκθεση σχετικά με την μεταγραφικό σιελογόνους [8], [9], έχουμε εξετάζει την προέλευση του mRNA σιέλου, το οποίο φαίνεται να είναι διαφορετικό από τα mRNAs που βρέθηκαν σε άλλα σωματικά υγρά. Τα νουκλεϊκά οξέα στον ορό ασθενών με καρκίνο που πιστεύεται ότι ρίξει απευθείας από τις καρκινικά κύτταρα ή να απελευθερωθεί ως αποτέλεσμα της κυτταρικής λύσης σε περίπτωση βλάβης οργάνων, ενώ τα νουκλεϊκά οξέα στα ούρα μπορεί να προέρχεται από mRNA αίμα ή DNA [20], [21 ]. Σε μια μελέτη του ανθρώπινου σιέλου, μεταγραφές στο μεταγραφικό σιελογόνους μπορεί να ανιχνευθεί σε όλες τις πηγές του σάλιου, συμπεριλαμβανομένης της παρωτίδας, υπογνάθιους και υπογλώσσια αδένες, από ρωγμές των ούλων και υγρά από το στόμα επιθηλιακά κύτταρα [16]. Έχει πρόσφατα καταδειχθεί ότι η πλειοψηφία των mRNAs στο μεταγραφικό σιελογόνους έχει AU-πλούσιες στοιχείο (ARE) σε 3’UTR τους το οποίο προσδίδει σταθερότητα δια συμπλοκοποιήσεως με ARE-δεσμευτικές πρωτεΐνες [17]. Στην παρούσα μελέτη, συγκρίναμε τις transcriptomes του όγκου, ορό, στους σιελογόνους αδένες και το σάλιο και βρήκε το μεταγραφικό σιελογόνων σε ποντίκια που φέρουν όγκους πολύ επικαλύπτονται σε μεγάλο βαθμό με τις transcriptomes του σιελογόνου αδένα, του ορού και του όγκου. Αυτές οι αναλύσεις υποδεικνύουν ότι μπορεί να υπάρχουν πολλαπλές ρίζες του mRNA των σιελογόνων ή /και ότι μια σύνθετη συστημική σχέση μπορεί να υπάρχει μεταξύ της στοματικής κοιλότητας και της συστημικής υγεία.

Ερευνήσαμε πιθανούς μηχανισμούς με τους οποίους τα ακραία όγκοι μεσολαβούν αλλαγές στην σιελογόνους βιοδείκτη προφίλ σε ποντικούς που φέρουν όγκο. Προηγούμενες μελέτες έχουν δείξει ότι η συστημικές ασθένειες ή θεραπείες μπορεί να επηρεάσουν τη λειτουργία του σιελογόνων αδένων με αποτέλεσμα αλλαγές στη σύνθεση του σάλιου [22], [23], [24]. Σιελογόνων επίπεδα νατρίου και πρωτεΐνης αυξημένα μετά την ιντερλευκίνη-2 (IL-2) θεραπεία σε ασθενείς. Μία μελέτη χρησιμοποιώντας ένα μοντέλο ποντικού έδειξε επίσης ότι τα επίπεδα φλεγμονωδών παραγόντων όπως IL-1 βήτα αυξήθηκε στο σάλιο μετά απομακρυσμένες φλεγμονής στο σώμα [24]. Καθώς το σιελογόνο αδένα είναι η κύρια πηγή του σάλιου, υποθέσαμε ότι οι σιελογόνοι αδένες μπορεί να είναι υπεύθυνη για σάλιο ειδικές αλλοιώσεις βιοδείκτη που σχετίζονται με την περιφερική όγκους. Δεδομένου ότι το πείραμά μας διεξήχθη εις τριπλούν, η Bayesian μέθοδος μπορεί να εφαρμοστεί. Ωστόσο, αυτή η μέθοδος απαιτεί συγκεκριμένο μοντέλο παραδοχές για τα δεδομένα. Τέλος, η κονσόλα Έκφραση (Affymetrix, Inc.) και Dchip (https://biosun1.harvard.edu/complab/dchip/), το λογισμικό εφαρμόστηκαν στην παρούσα μελέτη. Για το μοντέλο μελανώματος συγγενικό, εντοπίσαμε 46 TFs είναι σημαντικά πάνω ρυθμισμένα στους σιελογόνους αδένες των ποντικών με μελάνωμα που φέρουν το οποίο μπορεί να οδηγήσει σε άμεση επαγωγή ή καταστολή της έκφρασης του γονιδίου. Οι σχετικές αλλαγές πλάσια της έκφρασης TF όπως Egr1 και Nr1d1 είναι διαφορετικά μεταξύ των επιπέδων mRNA και τα επίπεδα της πρωτεΐνης, η οποία μπορεί να αντανακλά μεταφραστική τροποποίηση ή αποικοδόμηση του πρωτεασώματος [25]. Στη συνέχεια διαπιστώθηκε ότι αυτά αλλαγμένη έκφραση του ΤΡ συνδέεται με το μελάνωμα επαγόμενη μεταγραφικό στο σάλιο. Βρήκαμε ότι περίπου το 83% των σημαντικά up-ρυθμίζονται οι μεταγραφές στο σάλιο μπορεί να εξηγηθεί από τρεις TFs (RUNX1, Trim30 και Mlxipl) (Εικ. 4G) και 63% από τα σημαντικά κάτω-ρυθμίζονται μεταγραφές των σιελογόνων μπορεί να εξηγηθεί με άλλα τρία TFs (Egr1, TBX1 και Nr1d1) (Εικ. 4Η). Συλλογικά τα ευρήματα αυτά μας επιτρέπουν να συμπεράνουμε ότι οι σιελογόνοι αδένες εξυπηρετούν μια προηγουμένως παραγνωρισμένη ρόλο ως όργανο παρακολούθησης συστηματική νόσο επάγοντας συγκεκριμένες ασθένειες TFs και αλλάζοντας την έκφραση συγκεκριμένων γονιδίων και τη μετάφραση των αντίστοιχων πρωτεϊνών. Αυτά τα αλλαγμένα mRNAs σιελογόνους και πρωτεΐνες είναι ασθένεια που σχετίζεται με βιοδείκτες υποκατάστατο που εκκρίνονται σε αδενικό υγρά και να εισέλθουν στην στοματική κοιλότητα ως ολόκληρα σάλιο.

Δεδομένου ότι η επαγωγή της έκφρασης TFs στους σιελογόνους αδένες εμφανίστηκαν σε ποντικούς με ένα περιφερικό όγκο , υποθέσαμε περαιτέρω υπάρχουν ογκο-ειδικών μεσολαβητών που μπορεί να επηρεάσει την τροποποιημένη έκφραση TG στους σιελογόνους αδένες. Είναι γνωστό ότι οι όγκοι εκφράζουν εκτοπικά μεσολαβητές που έχουν συστημικές επιδράσεις στην άπω όργανα και να διευκολύνουν τη μετάσταση των καρκινικών κυττάρων [26], [27]. Τα μελανώματα είναι γνωστό ότι εκτοπικά ρητή ΤΟΡ-β [28], ενώ οι όγκοι του πνεύμονα εκτοπικά ρητή γοναδοτροπίνες και άλλες ορμόνες [29], [30]. Ερευνήσαμε αν ένα τέτοιο σηματοδοτικό μονοπάτι μπορεί σχετίζονται με μία από τις προσδιοριζόμενες ΤΡ που μπορεί να είναι υπεύθυνη για την επαγωγή ή καταστολή της μεταγραφικό σιελογόνων στο μοντέλο μελανώματος ποντικού. Πράγματι, ο NGF είναι γνωστό ότι διεγείρει την έκφραση του TF Egr-1 μέσω ενός καλά μελετηθεί οδό σηματοδότησης (Εικ. 5Α). Χρησιμοποιώντας μία δοκιμασία ELISA NGF, παρατηρήσαμε ότι η συγκέντρωση του NGF σε ιστό μελανώματος και τον ορό είναι σημαντικά υψηλότερη από ό, τι στους ιστούς ομόλογό ελέγχου (Εικ. 5Β, C). Αυτά τα δεδομένα υποδηλώνουν μία βιολογική σενάριο και λογική κατά την οποία η ανάπτυξη όγκου ποντικού εκκρίνει NGF στην κυκλοφορία, όπου κυκλοφορεί στο αίμα για τους σιελογόνους αδένες και δεσμεύεται στους υποδοχείς του NGF που εκφράζεται από τους σιελογόνους κυψελοειδή κύτταρα, ενεργοποιώντας μία οδό σηματοδότησης που οδηγεί στην προς τα πάνω ρύθμιση του Egr-1 mRNA και τα επίπεδα πρωτεΐνης. Θα πρέπει να σημειωθεί ότι τα κύτταρα μελανώματος που προέρχονται από μελανοκύτταρα, τα οποία μεταναστεύουν από το νευρικό κρημνό κατά την εμβρυϊκή ανάπτυξη. NGF μπορεί να διεγείρει τον πολλαπλασιασμό και τη μετάσταση των κυττάρων μελανώματος [31]. Από την άλλη πλευρά, NGF και του υποδοχέα της (TrkA IR και TrkC IR) έχουν βρεθεί στο σιελογόνο αδένα [32], [33]. Ως εκ τούτου, είναι λογικό να προτείνουμε ότι ο NGF που εκκρίνεται από όγκου μελανώματος μεταφέρθηκε μέσω του αίματος και συνδέεται με ομώνυμων υποδοχέων του στο σιελογόνο αδένα, με τελικό αποτέλεσμα τη διέγερση της πολλαπλής έκφρασης TFs συμπεριλαμβανομένων Egr-1 (Σχ. 6).

οι

μεσολαβητών όπως NGF που εκκρίνεται από απομακρυσμένο όγκους μεταφέρονται σε σιελογόνων αδένων μέσω του αίματος για την τόνωση της έκφρασης TFs και μεταβάλλουν σιελογόνους προφίλ mRNA.

η

Μετρήσαμε επίσης τα επίπεδα του NGF στο προϊόν λύσης του όγκου του πνεύμονα ποντικού μοντέλο καρκίνου. Ενώ NGF ήταν ανιχνεύσιμη, ήταν σε σημαντικά χαμηλότερο επίπεδο από το προϊόν λύσης όγκου μελανώματος (20.9 ± 4.3 pg /mg σε όγκου πνεύμονα έναντι 75,73 ± 24 pg /mg σε ιστό μελανώματος, Ρ & lt? 0,05, τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Επιπλέον, μόνο το 11 επάνω ρυθμισμένη και 17 ρυθμισμένα προς τα κάτω μεταγραφήματα επικαλύπτονται όταν συγκρίναμε το προφίλ mRNA των σιελογόνων του μοντέλου μελανώματος με το μοντέλο καρκίνου του πνεύμονα (225 ρυθμισμένα προς τα πάνω ή προς τα κάτω 403-ρυθμιζόμενων γονιδίων στο μοντέλο μελανώματος έναντι 290 up-ρύθμιση ή 784 ​​ρυθμισμένα προς τα κάτω μεταγραφές στο μοντέλο καρκίνου του πνεύμονα, αντίστοιχα, το Σχ. 2C και D). Και 2 από αυτά 17 επικαλύπτεται κάτω-ρυθμιζόμενα γονίδια συσχετίστηκαν με την έκφραση Egr1 (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Συλλογικά αυτά τα δεδομένα μας επιτρέπουν να συμπεράνουμε ότι το μελάνωμα που προέρχονται από NGF είναι ένας δυνητικά σημαντικός μεσολαβητής στην αρνητική ρύθμιση των συγκεκριμένων μεταγραφικό σιελογόνων μόνο στα ποντίκια με μελάνωμα που φέρουν.

Αν και η έκθεσή μας δεν αποδεικνύει πλήρως τη μηχανιστική σύνδεση μεταξύ συστημικών ανάπτυξη της ασθένειας και των σιελογόνων αλλαγές βιοδεικτών, δεν αρχίζουν να ζωγραφίσει την εικόνα για την έννοια που υπάρχουν συστημικά δίκτυα στο σώμα μας, η οποία επιτρέπει την επικοινωνία μεταξύ του απομακρυσμένου ασθένειες και τους σιελογόνους αδένες. Σήματα που μεταδίδονται μέσω αυτών των δικτύων μπορεί να προκαλέσει σχετικές οδούς σηματοδότησης που οδηγούν σε αλλαγμένη γονιδιακή έκφραση και τη μετάφραση της πρωτεΐνης και ως εκ τούτου παράγουν ασθένεια που προκαλείται από τα προφίλ των σιελογόνων βιοδείκτη. Υποθέτουμε ότι τέτοιες transcriptomes αδένα-προκαλούμενη ασθένεια που προκαλείται από τους σιελογόνους και τα προϊόντα μεταφράσεως μπορεί να χρησιμεύσει ως πολύτιμη δείκτες της έναρξης ή /και της εξέλιξης της νόσου. Ως εκ τούτου, ο σιελογόνων αδένων μπορεί να θεωρηθεί ως μια ενεργητική παρακολούθηση οργάνων συστημικές ασθένειες και σάλιο μπορεί να διερευνηθεί ως ασθένεια-ανακλαστική Βιορευστομηχανική βιοδεικτών εμπλουτισμένο. Η τοπική παραγωγή και έκκριση σιέλου από ένα μόνο ανατομική πηγή (οι σιελογόνοι αδένες), και το γεγονός ότι μπορεί να αξιοποιηθεί απλά και μη επεμβατική, καθώς και με σχετικά μικρή ενόχληση για τους ασθενείς, να παρέχει ένα ισχυρό κίνητρο για τη συνέχιση της έρευνας της Salvia ως πιθανό διαγνωστικό δείκτη των συστημικών ασθενειών.

Υλικά και Μέθοδοι

Ζώα

έξι έως οκτώ εβδομάδων ηλικίας DBA /2 ποντικοί και C57BL /6 ποντίκια ήταν αγοράστηκαν από το Jackson Laboratory (Bar Harbor, μΕ) και στεγάζεται στο Τμήμα εργαστηριακών ζώων Ιατρικής (DLAM) στο Πανεπιστήμιο της Καλιφόρνιας στο Λος Άντζελες. Τα πειραματικά πρωτόκολλα εγκρίθηκαν από την Επιτροπή της Καγκελαρίας ζώων Έρευνας (ARC) στο Πανεπιστήμιο της Καλιφόρνιας στο Λος Άντζελες (UCLA).

Οι κυτταρικές σειρές

ποντικού κυτταρικές σειρές KLN-205 και Β16-F1 ελήφθησαν από την American Type Culture Collection (ATCC). KLN-205 είναι μια κυτταρική γραμμή μη-μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα (NSCLC) καθιερώθηκε αρχικά σε ποντικούς DBA /2. Τα κύτταρα καλλιεργήθηκαν σε ΜΕΜ (GIBCO). Και Β16-Ρ1, ένα C57BL /6 που προέρχεται από κυτταρική σειρά μελανώματος, διατηρήθηκε σε ϋΜΕΜ (GIBCO) [34]. Όλα τα κύτταρα διατηρήθηκαν σε ατμόσφαιρα 5% CO2 στους 37 ° C.

In vivo μοντέλα όγκου

μοντέλο μελανώματος ποντικού προκλήθηκε με υποδόρια (sc) ένεση 1 × 10

5 Β16-Ρ1 κύτταρα σε 0,1 ml PBS σε πλευρό του ποντικούς C57BL /6 στην κάτω δεξιά. Το μοντέλο καρκίνου του πνεύμονα ιδρύθηκε από s.c. ένεση 2 × 10

5 KLN-205 κυττάρων σε ποντίκια DBA /2 [34], [35]. Τα ζώα ελέγχου ενέθηκαν μόνο με PBS. Εγκατεστημένων όγκων παρατηρήθηκαν μετά από 2-3 εβδομάδες (Εικ. 1).

Συλλογή σιέλου ποντικού, του αίματος και του όγκου των ιστών

Όταν οι όγκοι έφθασαν 15 mm σε διάμετρο σάλιο συλλέχθηκε και τα ποντίκια ήταν θυσιαστεί. Ήπια αναισθησία προκλήθηκε με ενδομυϊκή ένεση (ΙΜ) 1 υΐ /kg σωματικού βάρους ενός διαλύματος που περιέχει 60 mg /ml κεταμίνη (Phoenix Scientific, St. Joseph, ΜΟ) και 8 mg /ml ξυλαζίνης (Phoenix Scientific). Οι ποντικοί εγχύθηκαν υποδορίως με πιλοκαρπίνη (0,05 mg πιλοκαρπίνης /100 g σωματικού βάρους) μεταξύ των αυτιών να διεγερμένη έκκριση σάλιου. Το σάλιο ελήφθη από τη στοματική κοιλότητα με μικροπιπέττα και τοποθετήθηκε αμέσως σε προ-ψύξη 1.5 ml, σωλήνες μικροφυγοκέντρισης.