Αφηρημένο

Ιστορικό

Οι περισσότεροι (70%) των επιθηλιακών καρκίνων των ωοθηκών (EOCs) έχουν διαγνωστεί αργά. Οι μη επεμβατικές βιοδείκτες που διευκολύνουν την ανίχνευση της νόσου και να προβλέψει το αποτέλεσμα που απαιτείται. Τα microRNAs (miRNAs) αποτελούν μια νέα κατηγορία των βιοδεικτών. Αυτή η μελέτη ήταν για τον εντοπισμό και την επικύρωση των miRNAs πλάσμα ως βιοδείκτες στην EOC.

Μεθοδολογία /Κύρια Ευρήματα

Εμείς αξιολογούνται τα δείγματα των 360 ασθενών ΕΓΚ και 200 ​​υγιείς μάρτυρες από δύο όργανα πλάσμα. Όλα τα δείγματα ομαδοποιήθηκαν σε διαλογή, την κατάρτιση και την επικύρωση συνόλων. Εμείς σαρώνονται τα κυκλοφορούντα miRNAs πλάσμα με TaqMan πίνακα χαμηλής πυκνότητας στο σύνολο ελέγχου και προσδιορίζονται /επικυρωμένους δείκτες miRNA με τη δοκιμασία αλυσιδωτής αντίδρασης πολυμεράσης πραγματικού χρόνου στο σύνολο εκπαίδευσης. αναλύσεις λειτουργικού χαρακτηριστικού δέκτη και λογιστικής παλινδρόμησης ιδρύθηκε το διαγνωστικό πίνακα miRNA, που επιβεβαιώθηκαν στα σύνολα επικύρωσης. Βρήκαμε υψηλότερα πλάσμα miR-205 και κάτω αφήστε-7f έκφραση σε περιπτώσεις από ό, τι στους ελέγχους. MiR-205 και αφήστε-7Ρ μαζί παρείχαν υψηλό διαγνωστική ακρίβεια για την EOC, ιδιαίτερα σε ασθενείς με σταδίου Ι νόσο. Ο συνδυασμός αυτών των δύο miRNAs και υδατάνθρακα αντιγόνων-125 (CA-125) βελτίωσε περαιτέρω την ακρίβεια της ανίχνευσης. MiR-483-5p έκφραση ανυψώθηκε σε στάδια III και IV σε σύγκριση με τα στάδια Ι και II, το οποίο ήταν σύμφωνο με πρότυπο έκφρασης του σε ιστούς όγκων. Επιπλέον, τα χαμηλότερα επίπεδα ας-7f ήταν προγνωστική της κακή πρόγνωση σε ασθενείς ΕΓΚ.

Συμπεράσματα /Σημασία

Τα ευρήματά μας δείχνουν ότι το πλάσμα miR-205 και αφήστε-7f είναι βιοδείκτες για την ανίχνευση του καρκίνου των ωοθηκών ότι συμπλήρωμα CA-125? ας-7f μπορεί να είναι προγνωστική για την πρόγνωση του καρκίνου των ωοθηκών

Παράθεση:. Zheng Η Zhang L, Zhao Υ, Yang D, Τραγούδι F, Wen Y, et al. (2013) miRNAs Plasma ως διαγνωστικοί και προγνωστικοί βιοδείκτες για τον καρκίνο των ωοθηκών. PLoS ONE 8 (11): e77853. doi: 10.1371 /journal.pone.0077853

Επιμέλεια: Jörg Δ Hoheisel, Deutsches Krebsforschungszentrum, Γερμανία

Ελήφθη: 21 Ιούν του 2013? Αποδεκτές: 2 Σεπτεμβρίου, 2013? Δημοσιεύθηκε: 1 Νοέμβρη, 2013

Copyright: © 2013 Zheng et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε εν μέρει από το Εθνικό Ίδρυμα Φυσικών Επιστημών της Κίνας (επιχορηγήσεις 81.072.363), το πρόγραμμα για Changjiang μελετητές και Καινοτόμες ερευνητικής ομάδας στο Πανεπιστήμιο της Κίνας (Grant IRT1076), η Εθνική Βασικά Επιστημονικών και Τεχνολογικών Έργων (Grant 2011ZX09307-001-04) , και το Ίδρυμα της Επιτροπής Tianjin Επιστήμης και Τεχνολογίας (Grant 09ZCZDSF04700). Η τράπεζα ιστών υποστηρίζεται από το Tianjin Center και το Εθνικό Ίδρυμα των ΗΠΑ για Cancer Research κοινού. D.Y. είναι μια Οδύσσεια Fellow στο MD Anderson Κέντρο Καρκίνου, και υποστηρίζεται από την Diane Denson Tobola Κοινότητας στη ωοθηκών Cancer Research Fellowship και το The Harold C. και Mary L. Daily Κληροδότημα. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

ο καρκίνος των ωοθηκών είναι η πέμπτη κορυφαία αιτία θανάτου από καρκίνο στις γυναίκες παγκοσμίως, και επιθηλιακού καρκίνου των ωοθηκών (EOC) είναι η πιο θανατηφόρος γυναικολογικών νεοπλασμάτων [1]. Επειδή ΕΓΚ είναι συνήθως ασυμπτωματική και λίγες δοκιμές διαλογής είναι διαθέσιμες, σχεδόν το 70% των γυναικών παρουσιάζουν προχωρημένο στάδιο (στάδιο ΙΙΙ ή IV) της νόσου, με τα ποσοστά επιβίωσης 5 ετών μικρότερη του 30% [2]. Σε αντίθεση, οι ασθενείς που έχουν διαγνωστεί με νόσο σταδίου Ι έχουν ποσοστό επιβίωσης 5 ετών μέχρι και 90%, και οι ασθενείς με νόσο σταδίου ΙΙ έχουν ποσοστό επιβίωσης 5 ετών έως και 70% [3]. Ως εκ τούτου, η έγκαιρη ανίχνευση της EOC μπορεί να βελτιώσει σημαντικά κλινικά αποτελέσματα. Τα ευαίσθητα, μη επεμβατική βιοδείκτες που μπορούν να διευκολύνουν την ανίχνευση και σταδιοποίηση της νόσου και να προβλέψει θεραπευτικό αποτέλεσμα που απαιτούνται για να βελτιώσει τα ποσοστά επιβίωσης και να καθορίσει τη βέλτιστη θεραπείες.

Υδατάνθρακες αντιγόνο-125 (CA-125) είναι το πιο συχνά χρησιμοποιούμενο βιοδείκτη για ανίχνευση του καρκίνου των ωοθηκών [4], αλλά είναι αυξημένα μόνο σε περίπου 50% των EOCs σταδίου Ι και το 70% -90% των προχωρημένες περιπτώσεις [5]. Ως εκ τούτου, υπάρχει μια κρίσιμη ανάγκη για νέους βιοδείκτες που είναι πιο ευαίσθητες και ειδικές για την ανίχνευση EOC όταν χρησιμοποιούνται μόνα τους ή σε συνδυασμό με CA-125. Πρόσφατα, microRNAs (miRNAs), μια οικογένεια μικρών ρυθμιστικών RNAs, αναδείχθηκε ως το δυνατόν δείκτες πλάσματος για την ανθρώπινη ασθένεια, συμπεριλαμβανομένου του καρκίνου, λόγω της σχετικής σταθερότητας τους στην κυκλοφορία [6].

miRNAs είναι μικρά, μη που κωδικοποιούν πρωτεΐνες που ρυθμίζουν RNAs μετα-μεταγραφικά γονιδιακή έκφραση με την καταστολή ειδικών mRNAs στόχος [7], [8]. Ειδικές miRNAs κυκλοφορούν έχουν συσχετιστεί με διαφορετικούς τύπους όγκων, συμπεριλαμβανομένου του καρκίνου του πνεύμονα [9], [10], ο καρκίνος του παχέος εντέρου [11], [12], του καρκίνου του προστάτη [13], τον καρκίνο των ωοθηκών [14], [15], και του παγκρέατος καρκίνος [16], [17]. Taylor

et al.

[14] σε σύγκριση των προφίλ miRNA εξωσωμάτων που προέρχονται από όγκους που είχαν απομονωθεί από τον ορό ασθενών με καρκίνο των ωοθηκών με εκείνα από συμφωνημένα ιστούς όγκων από τους ίδιους ασθενείς. Ωστόσο, αυτές οι μελέτες ήταν περιορισμένες από το ότι έχουν μικρά μεγέθη δειγμάτων και αξιολόγηση λίγοι κλινικούς παράγοντες. Ο σκοπός αυτής της μελέτης ήταν να προσδιοριστούν και να επικυρώνει κυκλοφορούν miRNAs σε ανθρώπινο πλάσμα για χρήση ως διαγνωστικοί και προγνωστικοί βιοδείκτες στον καρκίνο των ωοθηκών. Επιδιώξαμε να συγκρίνει αυτές τις identifid miRNAs πλάσμα με CA-125, ειδικά για την αύξηση της ευαισθησίας ανίχνευσης ΕΓΚ σε ασθενείς με φυσιολογικά επίπεδα CA-125 στον ορό.

Υλικά και Μέθοδοι

Μελέτη και Πληθυσμού

Σχεδιάσαμε ένα πολλαπλών σταδίων, αναδρομική, μελέτη ασθενών-μαρτύρων ένθετη να καθορίσει εάν τα προφίλ των miRNAs ορού μπορεί να χρησιμοποιηθεί για να προβλέψει την ανάπτυξη του ΕΓΚ. Όλα τα δείγματα ομαδοποιήθηκαν σε διαλογή, την κατάρτιση, και σύνολα επικύρωσης (Εικ. 1). Ένα σύνολο 560 δειγμάτων πλάσματος (360 περιπτώσεις και 200 ​​έλεγχοι) ελήφθησαν από Tianjin Ιατρικό Πανεπιστήμιο Cancer Institute και το Νοσοκομείο (TCIH) και το Αντικαρκινικό Κέντρο της Nanjing Ιατρικό Πανεπιστήμιο μεταξύ Ιουλίου 2007 και του Ιουνίου του 2010. Οι περιπτώσεις και οι έλεγχοι ήταν καλά συμφωνημένα για την ηλικία μεταξύ τα σύνολα εκπαίδευσης και επικύρωσης. Όλοι οι ασθενείς EOC είχαν ιστοπαθολογικά διαγνωστεί με πρωτοπαθή καρκίνο των ωοθηκών. Όλοι οι ασθενείς που προσλαμβάνονται σε αυτή τη μελέτη δεν είχαν λάβει χημειοθεραπεία ή ακτινοθεραπεία πριν αντλεί το αίμα. Και όλα τα δείγματα αίματος λήφθηκαν πριν από την χειρουργική επέμβαση. Η Διεθνής Ομοσπονδία Γυναικολογίας και Μαιευτικής (FIGO) σύστημα σταδιοποίησης χρησιμοποιήθηκε στο στάδιο περιπτώσεις. Όλοι οι ασθενείς και οι έλεγχοι ήταν γενετικά άσχετη, εθνοτικής Κινέζων Χαν γυναίκες που ήταν μόνιμοι κάτοικοι της αστικής περιοχής της Tianjin και Nanjing. Έλεγχοι με καρδιαγγειακό, αναπνευστικό, πεπτικό, ουροποιητικό, αναπαραγωγικό, και ενδοκρινικές ασθένειες εξαιρέθηκαν

Εμείς χώρισε τα δείγματα σε τρεις ομάδες:. Screening, της κατάρτισης και επικύρωσης. Το σύνολο επικύρωσης περιλάμβανε δύο φάσεις για να επικυρώσετε την καλύτερη πίνακα.

Η

Τα πρωτόκολλα των μελετών εγκρίθηκαν από τις επιτροπές επανεξέτασης Tianjin και Nanjing Center. Λήφθηκε ενυπόγραφη συγκατάθεση, και όλοι οι συμμετέχοντες είχαν προσωπικά συνέντευξη από εκπαιδευμένους ερευνητές χρησιμοποιώντας ένα προ-δοκιμαστεί ερωτηματολόγιο για να λάβουν πληροφορίες σχετικά με τα δημογραφικά στοιχεία, εμμηνόρροιας και το αναπαραγωγικό ιστορικό, τον τρόπο ζωής, η έκθεση στο περιβάλλον και το οικογενειακό ιστορικό καρκίνου. Μετά τη συνέντευξη, ένα 5-ml δείγμα φλεβικού αίματος συλλέχθηκαν. Μεταξύ αυτών των περιπτώσεων, τα δείγματα ιστού ωοθήκης του όγκου 44 να ταιριάζουν ελήφθησαν από το κέντρο της Tianjin για αυτή τη μελέτη. EOC δείγματα καρκινικού ιστού και ιστών RNA λήφθηκαν από την Τράπεζα Ιστών Διευκόλυνση της TCIH, το οποίο συγκεντρώνει όλα τα στερεά ιστούς όγκων από χειρουργικές ασθενείς όταν αυτό είναι δυνατόν.

CA-125 επίπεδα δείγματα πλάσματος αποκτήθηκαν από ηλεκτρονικά ιατρικά αρχεία των τα δύο κέντρα. δεδομένων παρακολούθησης ασθενών αποκτήθηκαν, και η διάρκεια επιβίωσης υπολογίστηκε από την ημέρα της διάγνωσης μέχρι την ημερομηνία θανάτου ή την τελευταία παρακολούθηση τον Μάρτιο του 2012.

επιλογής που

Για την ανίχνευση γενικεύσιμων miRNA υπογραφές, έχουμε ομαδοποιημένα δείγματα ορού των 10 περιπτώσεις πρώιμου σταδίου (στάδιο Ι), 10 περιπτώσεις προχωρημένου σταδίου (στάδιο IIIc-IV), και 10 υγιείς μάρτυρες, αντίστοιχα, και αναλύονται αυτά τα τρία δείγματα πισίνα χρησιμοποιώντας ένα TaqMan πίνακα χαμηλής πυκνότητας (TLDA που 2.0, Applied Biosystems) διαλογή τσιπ στο στάδιο της ανακάλυψης. Η TLDA έκδοση 2.0 (Sanger miRBase V14 ανθρώπου) περιλαμβάνονται 667 ανθρώπινα miRNAs. έχουν τα δεδομένα μικροσυστοιχιών έχουν κατατεθεί στο National Center for Biotechnology Information του Gene Expression (NCBI του) Omnibus (NCBIGEO GSE50472).

Κατάρτιση Σετ

Τα miRNAs που προσδιορίζονται κατά τον έλεγχο που επικυρώθηκαν με τη χρήση ποσοτικών αντίστροφη transcription- αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης (qRT-PCR) σε μεμονωμένα δείγματα πλάσματος από 76 ασθενείς ΕΓΚ και 30 φυσιολογικούς μάρτυρες.

επικύρωσης που

Το σύνολο επικύρωσης περιελάμβανε μια διαδικασία δύο φάσεων. Ελπιδοφόρα ενώσεις από την ομάδα ελέγχου και την κατάρτιση αξιολογήθηκαν στη φάση της επικύρωσης έθεσα, το οποίο περιλαμβάνει 134 περιπτώσεις και 70 ελέγχους από Tianjin Center. Ένα χαρακτηριστικό λειτουργίας λήπτη (ROC) καμπύλη που βασίζεται σε ανάλυση αξιολόγησης του κινδύνου στη συνέχεια διεξήχθη για να προσδιοριστεί η διακριτική επίδραση των miRNAs υποψηφίου πλάσμα. Η επικύρωση φάσης ΙΙ σετ περιλαμβάνονται δείγματα των 77 περιπτώσεων ΕΓΚ και 50 φυσιολογικούς μάρτυρες ήταν από Tianjin Center και 73 περιπτώσεις EOC και 50 φυσιολογικούς μάρτυρες ήταν από Nanjing Center.

Απομόνωση RNA

Το αίμα συλλέχθηκε σε σωλήνες EDTA (BD Biosciences) και υποβάλλονται σε επεξεργασία για την απομόνωση του πλάσματος. Το αίμα φυγοκεντρήθηκε στα 1200 g σε θερμοκρασία περιβάλλοντος για 10 λεπτά, και το υπερκείμενο πλάσμα μεταφέρεται σε ένα νέο σωλήνα και αποθηκεύεται στους -80 ° C.

RNA απομονώθηκε από τα δείγματα από υγιείς δότες και ασθενείς με καρκίνο των ωοθηκών πλάσμα . Εν συντομία, 250 μΐ πλάσματος επανατήχθηκε επί πάγου και περιδινήθηκε στα 14.000 g στους 4 ° C για 10 λεπτά για να απομακρυνθεί λεμφοκύτταρα. Στη συνέχεια λύονται 200 ​​μl του υπερκείμενου με ίση ποσότητα QIAzol αντιδραστηρίου λύσης (Qiagen, Σαγκάη, Κίνα). Για πισίνες πλάσμα που χρησιμοποιείται για τον έλεγχο της ανθρώπινης υποψηφίους καρκίνο των ωοθηκών βιοδεικτών, δημιουργήσαμε το δείγμα πισίνα με το συνδυασμό 110 μl από καθένα από 10 δείγματα. Η πισίνα αναμίχθηκε με αναστροφή και στροβιλίστηκε στις 14,000 g για 10 λεπτά? 1 ml υπερκείμενο μεταφέρθηκε σε ένα νέο σωλήνα για απομόνωση RNA. Για εξομάλυνση, 5 μl 25 fmol συνθετικό

Caenorhabditis elegans

miRNA cel-miR-39 προστέθηκε σε κάθε μετουσιωμένο δείγμα. Μικρές RNA απομονώθηκε χρησιμοποιώντας miRNeasy Mini (Qiagen) ακολουθώντας το πρωτόκολλο του κατασκευαστή, εκτός του ότι το RNA εκλούεται σε 30 μΐ προθερμανθέντος ύδατος άνευ νουκλεάσης. Για την απομόνωση ολικού RNA από ιστούς όγκων των ωοθηκών, τα κατεψυγμένα δείγματα πρώτα ομογενοποιήθηκαν σε αντιδραστήριο ΤΚΙζοΙ (Invitrogen, San Diego, CA) χρησιμοποιώντας ένα Omni-Mixer ομογενοποιητή (Omni International, Kennesaw, GA). Ολικό RNA απομονώθηκε χρησιμοποιώντας την πρότυπη μέθοδο TRIZOL (Invitrogen), σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Η ποιότητα του συνολικού RNA επαληθεύτηκε με Bioanalyzer 2100 (Agilent Technologies).

Mirna Profiling

miRNA έκφραση του δείγματος πισίνας ήταν περίγραμμα χρησιμοποιώντας TLDA. Εν συντομία, το RNA μεταγράφηκε αντίστροφα χρησιμοποιώντας το κιτ αντίστροφης μεταγραφής TaqMan miRNA, και οι δοκιμασίες TaqMan miRNA πολλαπλή RT, Human πισίνα Set. Μια ποσότητα 9,16 μΐ διαλύματος RNA μεταγράφηκε πλάσματος σε 15 μΐ μίγματος RT. Οι σωλήνες επωάστηκαν στους 16 ° C για 30 λεπτά, ακολουθούμενη από 42 ° C για 30 λεπτά και 85 ° C για 5 λεπτά. Το κιτ κύριου μείγματος TaqMan προενισχυτή (Applied Biosystems) έχει ως στόχο να αυξήσει την ποσότητα του cDNA που διατίθενται για ανάλυση πριν από τη χρήση του TLDA. Το μίγμα της αντίδρασης 25 μΙ αποτελείτο από 2.5 μΙ μη αραιωμένου cDNA σε συνδυασμό με 12.5 μΙ TaqMan προενισχυτή κύριο μίγμα, 2,5 μΙ Megaplex προενισχυτή εκκινητών, και 7,5 μΙ ύδατος άνευ νουκλεάσης. Το στάδιο προ-ενίσχυσης διεξήχθη σύμφωνα με το πρωτόκολλο του κατασκευαστή. Το προϊόν αραιώνεται με προσθήκη 75 μΙ ύδατος άνευ νουκλεάσης και 9 μΙ του αραιωμένου μείγματος συνδυάστηκαν με 450 μΙ TaqMan καθολική PCR μάστερ μιξ και 441 μΙ ύδατος άνευ νουκλεάσης. Μετά τη φόρτωση των 100 μΙ εκάστου μίγματος multiplex πισίνα, η συστοιχία (TaqMan Human microRNA Array Set v2.0) φυγοκεντρήθηκε και σφραγίστηκε. Η ενίσχυση πραγματοποιήθηκε σε ένα Applied Biosystems 7900 ΗΤ θερμικό ανακυκλωτή (Applied Biosystems) χρησιμοποιώντας τις συνιστώμενες συνθήκες ποδηλασίας του κατασκευαστή. Τα δεδομένα αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας RQ Διευθυντής Λογισμικό έκδοση 1.2 και 7900 Sequence Detection System 2.4 (Applied Biosystems).

Mirna Ποσοτικοποίηση από πραγματικό χρόνο qRT-PCR

Για τον προσδιορισμό των επιπέδων των miRNAs σε δείγματα πλάσματος, εμείς χρησιμοποίησαν το σύστημα ΑΒΙ Mirt-PCR, με τους ακόλουθους όρους: 2,5 μΙ εμπλουτισμένου μικρών RNAs από δείγματα πλάσματος ή 10 ng ολικού RNA από δείγματα ιστών μεταγράφηκαν ανάστροφα χρησιμοποιώντας το κιτ TaqMan miRNA αντίστροφη μεταγραφή (Applied Biosystems) σε 7,5 μΙ αντίδρασης ρυθμιστικό με το στόχο-ειδικών εκκινητών. Οι σωλήνες επωάστηκαν στους 16 ° C για 30 λεπτά, ακολουθούμενη από 42 ° C για 30 λεπτά και 85 ° C για 5 λεπτά. Μετά τη διέγερση, μία αραίωση 1:20 χρησιμοποιήθηκε σαν το εκμαγείο για το στάδιο PCR χρησιμοποιώντας TaqMan 2 × καθολική PCR κύριο μείγμα (Applied Biosystems) σε έναν ΑΒΙ Prism 7900. Μετρήσαμε φρεάτια εις τριπλούν χρησιμοποιώντας έναν 15-μΙ τελικό όγκο αντίδρασης και την ακόλουθη συνθήκες ποδηλασίας: 10 λεπτά στους 95 ° C, που ακολουθείται από 50 κύκλους των 95 ° C για 15 δευτερόλεπτα και 60 ° C για 1 λεπτό. Οι 7900 Sequence Detection System προεπιλογές 2.4 του λογισμικού χρησιμοποιήθηκαν για να υπολογιστεί η σχετική μεταβολή στην έκφραση από το 2

-ΔΔCt μέθοδο με 95% εμπιστοσύνη.

Στατιστική Ανάλυση

Τα σχετικά επίπεδα των miRNA ποσοτικοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας το 2

-ΔΔCt μέθοδο, και τα δεδομένα αναλύθηκαν ως αρχείο καταγραφής

10 της σχετικής ποσότητας του στόχου miRNA. Η στατιστική σημαντικότητα προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας το Wilcoxon signed-rank ή

t-test

μεταξύ ασθενών και μαρτύρων. Οι καμπύλες ROC δημιουργήθηκαν για να εκτιμηθεί η διαγνωστική ακρίβεια του κάθε υποψηφίου miRNA, και η ευαισθησία και η ειδικότητα της βέλτιστο σημείο αποκοπής ορίστηκαν ως εκείνες τις αξίες που μεγιστοποιείται το εμβαδόν κάτω από την καμπύλη ROC (AUC). Μια σταδιακή μοντέλο λογιστικής παλινδρόμησης χρησιμοποιήθηκε για να επιλέξετε διαγνωστικοί δείκτες miRNA με βάση το σύνολο δεδομένων εκπαίδευσης. Η συσχέτιση μεταξύ της επιβίωσης (συνολική επιβίωση [OS] και επιβίωση χωρίς εξέλιξη [PFS]) και miRNAs πλάσμα αναλύθηκε χρησιμοποιώντας τη μέθοδο Kaplan-Meier και δοκιμασία log-rank. Μια ανάλυση παλινδρόμησης αναλογικού κινδύνου του Cox χρησιμοποιήθηκε για να προσδιοριστεί αν το πλάσμα miRNA ήταν ένας ανεξάρτητος προγνωστικός παράγοντας για την ΕΓΚ.

Χρησιμοποιήσαμε τα στατιστικά πακέτα λογισμικού SAS έκδοση 9.0 (SAS Institute, Cary, NC) και MedCalc (Mariakerke, Βέλγιο ). Τα γραφήματα δημιουργήθηκαν με GraphPad Prism 5.0 (GraphPad Software, Inc., La Jolla, CA). Όλες οι στατιστικές δοκιμασίες ήταν δύο όψεων, και

P

αξία των & lt?. 0.05 θεωρήθηκε σημαντική

Αποτελέσματα

Χαρακτηριστικά Ασθενών

Συλλέξαμε 560 δείγματα πλάσματος (360 περιπτώσεις και 200 ​​μάρτυρες) και των συναφών κλινικών και δημογραφικά δεδομένα για αυτή τη μελέτη? οι περιπτώσεις περιλαμβάνονται 179 ορώδες όγκους (49,7%), οι όγκοι 86 ενδομητριοειδές (23,9%), 33 βλεννώδες όγκοι (9,2%), 15 σαφείς κυτταρικούς όγκους (4,2%), και 47 αδενοκαρκινώματα, μη προσδιοριζόμενη αλλιώς (NOS) (13,0%) . Τα χαρακτηριστικά των συμμετεχόντων παρουσιάζονται στον Πίνακα 1 και τον Πίνακα S1. Οι κατανομές των περισσότερων παραγόντων κινδύνου ήταν γενικά παρόμοιες μεταξύ ασθενών και μαρτύρων (Πίνακας S1). Σε ασθενείς, δεν υπήρχε σημαντική διαφορά στην κατανομή των σταδίων ΦΥΓΩ, ιστολογική βαθμού, ή CA-125 επίπεδα μεταξύ των ομάδων κατάρτισης και επικύρωσης (Πίνακας 1).

Η

Mirna Screening

Χρησιμοποιώντας το τσιπ TLDA, θα προβληθεί 667 ανθρώπινα miRNAs να βρείτε τις σημαντικές διαφορές στα επίπεδα έκφρασης των miRNAs μεταξύ ασθενών και μαρτύρων. Για τη διαλογή αποτελεσματικά πολλαπλές miRNA υποψηφίων βιοδεικτών, δημιουργήσαμε τρεις πρώτες ομάδες των δειγμάτων πλάσματος που είχαν προέλθει από ασθενείς EOC έγκαιρης και προχωρημένου σταδίου και υγιείς μάρτυρες. Σε σύγκριση με την πισίνα έλεγχο, υπήρχαν 43 και 50 miRNAs που διαφορικά εκφράζονται στο πρώιμο στάδιο και την περίπτωση προχωρημένου σταδίου πισίνα, αντίστοιχα. Μεταξύ αυτών των σημαντικών miRNAs, υπήρχαν 30 miRNAs σταυρωμένα. Τριάντα διαφορικά εκφρασμένων miRNAs πλάσματος εντοπίστηκαν μεταξύ EOC ασθενών και υγιών μαρτύρων (Εικ. 2Α και Πίνακας S2).

(Α) TLDA εξέταση προέκυψε ότι 30 σημαντικές αλλαγές miRNA πλάσμα μεταξύ ασθενών και μαρτύρων. (Β) Στο σύνολο εκπαίδευσης, εντοπίσαμε 30 σημαντικές miRNAs χρήση qRT-PCR και διαπίστωσε ότι 11 υποψήφιες miRNAs εκφράστηκαν διαφορικά από το οικόπεδο ηφαίστειο. Η -log

10

P

τιμών (άξονας y) συναρτήσει του log

2 φορές αλλαγή μεταξύ των περιπτώσεων και των ελέγχων (άξονας x). Κάθε σύμβολο είναι χρωματικά κωδικοποιημένο σύμφωνα με τη μέση έκφραση του καθετήρα κατά μήκος των δύο ομάδων. Οι διακεκομμένες γραμμές οριοθετούν τα cut-offs για σημαντικά μειωτικά (αριστερά) ή ρυθμίζεται προς τα πάνω (δεξιά) miRNAs σε περιπτώσεις. Μια χάρτη θερμότητας των 11 σημαντικών miRNAs εμφανίζεται στα δεξιά. (C, D) Στη φάση επικύρωσης μου, μόνο miR-205 (C, αριστερά) και αφήστε-7f (D, αριστερά) είχαν διαφορετικά επίπεδα. Μία ανάλυση ROC έδειξε ότι οι AUCs του miR-205 και αφήστε-7ί για τη διαφοροποίηση περιπτώσεις και οι έλεγχοι ήταν 0.609 (95% CI: 0,538 – 0,677) και 0.780 (95% CI: 0,717 – 0,835)., Αντίστοιχα

miRNAs Plasma επίπεδα των ασθενών έναντι των ελέγχων στο σύνολο εκπαίδευσης

στο σύνολο εκπαίδευσης, χρησιμοποιήσαμε qRT-PCR για την ανίχνευση των προαναφερθέντων 30 σημαντικές miRNAs σε μια μελέτη ασθενών-μαρτύρων που περιελάμβανε 76 περιπτώσεις EOC και 30 υγιείς μάρτυρες. Εννέα miRNAs (miR-205, miR-200A, miR-184, miR-34a *, miR-141, miR-483-5p, miR-193b *, αφήστε-7ε *, και miR-363 *) ανιχνεύθηκαν σε υψηλότερη επίπεδα σε περιπτώσεις από ό, τι στους μάρτυρες, ενώ miR-98 και αφήστε-7ί ανιχνεύθηκαν σε χαμηλότερα επίπεδα (συνοδευόμενο από ένα οικόπεδο στο ηφαίστειο και τη θερμότητα χάρτη, Εικ. 2Β).

miRNAs Plasma επίπεδα των ασθενών σε σχέση με τους ελέγχους στον φάση επικύρωσης I Ρύθμιση

στη φάση της επικύρωσης έθεσα, τα προφίλ έκφρασης των 11 υποψήφιων miRNAs περαιτέρω αξιολογήθηκε χρησιμοποιώντας τη μέθοδο qRT-PCR σε 134 περιπτώσεις EOC και 70 ελέγχους. MiR-205 και αφήστε-7ί είχαν διαφορετικά επίπεδα έκφρασης μεταξύ των περιπτώσεων και των ελέγχων. Σε σύγκριση με το μάρτυρες, το πλάσμα επίπεδα miR-205 ήταν σημαντικά υψηλότερα (

P

= 0,012) (Εικ. 2C, αριστερό πάνελ) και αφήστε-7ί επίπεδα ήταν σημαντικά χαμηλότερα (

P

= 1,97 × 10

-10) σε EOC ασθενείς (Σχ. 2D, αριστερό πάνελ).

Μια ανάλυση ROC χρησιμοποιήθηκε για να αξιολογηθεί η ευαισθησία και η εξειδίκευση των δύο υποψήφιες δείκτες miRNA πλάσματος. Η AUC του miR-205 και αφήστε-7f ήταν 0.609 (95% CI, 0,538 έως 0,677? Ευαισθησία = 30,1%, ειδικότητα = 94,2%) (Σχήμα 2C, δεξιά πάνελ.) Και 0,780 (95% CI, 0,717 έως 0,835? ευαισθησία = 66,9%, ειδικότητα = 84,2%), αντίστοιχα (Σχ. 2D, δεξί πάνελ).

Συνδυασμός miR-205 και Ας-7ί για ΕΓΚ Διάγνωση

Ένα σταδιακό μοντέλο λογιστικής παλινδρόμησης χρησιμοποιήθηκε για την εκτίμηση της κοινής δύναμης του miR-205 και αφήστε-7f στην πρόβλεψη του κινδύνου ΕΓΚ στη φάση επικύρωσης έθεσα. MiR-205 και αφήστε-7ί ήταν αποτελεσματικά σε διακρίσεις περιπτώσεις από ελέγχους [εικ. S1 Α? logit (P = EOC) = -0,610 έως 3,075 × ας-7f + 1.532 × miR-205 χρησιμοποιήθηκε για να κατασκευαστεί η καμπύλη ROC]. Η AUC του πίνακα miRNA (ας-7f και miR-205) ήταν 0,831 (95% CI, 0,772 έως 0,880? Ευαισθησία = 62,4%, ειδικότητα = 92,9%) (Σχήμα 3Α.), Η οποία ήταν σημαντικά υψηλότερες από τις τιμές AUC της miR-205 (

P

& lt? 0.001). και αφήστε-7f (

P

= 0,008) μόνο (Εικ. S1B)

Εμείς ιδρύθηκε το miR-205 και ας-7f πίνακα στη φάση επικύρωσης Ι και επιβεβαίωσε ότι σε ανεξάρτητα δείγματα στη φάση ΙΙ. Στη φάση Ι, (Α), η AUC ήταν 0,831 (95% CI, 0,772 έως 0,880? Ευαισθησία = 62,4%, ειδικότητα = 92,9%) για τις περιπτώσεις? (Β) 0,895 (95% CI, 0,822 έως 0,967? Ευαισθησία = 77,8%, ειδικότητα = 90,0%) για τις περιπτώσεις πρώιμου σταδίου σε σχέση με τους ελέγχους? και (Γ) 0.814 (95% CI, 0,700 έως 0,929? ευαισθησία = 68,4%, ειδικότητα = 92,9%) για χαμηλή CA-125 (& lt? 35 U /ml) περιπτώσεις σε σχέση με τους ελέγχους. Στη φάση ΙΙ, (D), η AUC ήταν 0,813 (95% CI, 0,759 έως 0,860? Ευαισθησία = 71,3%, ειδικότητα = 82,0%) για τις περιπτώσεις σε σχέση με τους ελέγχους? (Ε) 0,783 (95% CI, 0,699 έως 0,853? Ευαισθησία = 70,0%, ειδικότητα = 82,0%) για τις περιπτώσεις πρώιμου σταδίου σε σχέση με τους ελέγχους? και (F) 0.726 (95% CI, 0,634 έως 0,805? ευαισθησία = 64,3%, ειδικότητα = 72,0%) για χαμηλή CA-125 (& lt? 35 U /ml). περιπτώσεις έναντι των ελέγχων

Η

ο πίνακας δύο-miRNA διακρίνονται επίσης μεταξύ των περιπτώσεων πρώιμου σταδίου (στάδιο Ι) και των ελέγχων, με μια AUC των 0,895 (95% CI, 0,822 έως 0,967? ευαισθησία = 77,8%, ειδικότητα = 90,0%, Σχήμα 3Β.). Στη φάση της επικύρωσης έθεσα, περίπου 89,3% των ασθενών ΕΓΚ είχαν CA-125 υψόμετρο, οι άλλοι ασθενείς απέτυχαν να ανιχνευθεί από την CA-125. Η διαγνωστική ακρίβεια του πίνακα miRNA αξιολογήθηκε σύμφωνα με το επίπεδο CA-125. Στο χαμηλό CA-125 (& lt? 35 /ml U) ομάδα (n = 14, 10,7% του συνόλου των περιπτώσεων, Πίνακας 1) στη φάση της επικύρωσης έθεσα, η AUC του πίνακα miRNA ήταν 0.814 (95% CI, 0,700 σε 0,929?.. ευαισθησία = 68,4%, ειδικότητα = 92,9%, Σχήμα 3C)

η επικύρωση του πίνακα miRNA στην επικύρωση Φάση II Set

ο πίνακας δύο-miRNA αξιολογήθηκε περαιτέρω η φάση επικύρωσης ΙΙ σύνολο των 250 δειγμάτων πλάσματος (150 ασθενείς ΕΓΚ και 100 υγιείς μάρτυρες). Η AUC του πίνακα miRNA ήταν 0,813 (95% CI, 0,759 έως 0,860? Ευαισθησία = 71,3%, ειδικότητα = 82,0%, Σχήμα 3D.) Σε όλη την φάση επικύρωσης δείγματα II. Η AUC ήταν 0,783 (95% CI, 0,699 έως 0,853?. Ευαισθησία = 70,0%, ειδικότητα = 82,0%, Σχήμα 3Ε) σε περιπτώσεις πρώιμου σταδίου (στάδιο Ι) και τους ελέγχους, αντίστοιχα. Η διαγνωστική ακρίβεια του πίνακα miRNA στη συνέχεια αξιολογήθηκε σύμφωνα με το επίπεδο CA-125. Στο χαμηλό CA-125 (& lt? 35 /ml U) ομάδα (n = 14, 9,3% των περιπτώσεων, Πίνακας 1) της φάσης επικύρωσης ΙΙ, η AUC του πίνακα miRNA ήταν 0.726 (95% CI, 0,634 έως 0,805? ευαισθησία = 64,3%, ειδικότητα = 72,0%, Σχ. 3F).

miRNA Plasma επίπεδα και επιβίωση

Για να καθοριστεί περαιτέρω εάν αφήσουμε-7f πλάσματος και των επιπέδων του miR-205 είναι προγνωστικά της πρόγνωσης, πραγματοποιήσαμε μια ανάλυση της OS και PFS σε όλους τους ασθενείς από τα σύνολα εκπαίδευσης και επικύρωσης. Μια ανάλυση Kaplan-Meier καμπύλες επιβίωσης δεν έδειξε σύνδεση μεταξύ let-7f ή επίπεδα miR-205 και OS (Εικ. S2). Ωστόσο, κάτω πλάσμα ας-7f έκφραση συσχετίστηκε σημαντικά με την κακή PFS σε όλους τους ασθενείς (

P

= 0,006, δοκιμασία log-rank) (Εικ. 4Α), ιδίως σε στάδιο ΙΙΙ και IV περιπτώσεις (

P

= 0,002, δοκιμασία log-rank). Μια πολυπαραγοντική ανάλυση παλινδρόμησης Cox έδειξε ότι το πλάσμα ας-7F ήταν ένας σημαντικός προγνωστικός δείκτης του ΕΓΚ σε PFS (HR = 2,07, 95% CI = 1,27 – 3,37) (Πίνακας 2).

(Α) PFS ανάλυση για όλους τους ασθενείς (n = 360) αποκάλυψε ότι τα χαμηλότερα επίπεδα ας-7f πλάσματος σχετίζονται με κακή πρόγνωση (

P

= 0,006). Οι καμπύλες επιβίωσης Kaplan-Meier στάδιο ειδικά αποκάλυψε ότι οι

P

τιμές του δοκιμασία log-rank ήταν 0,576 και 0,002 για τα στάδια Ι και ΙΙ (Β) και ΙΙΙ και IV (C), αντίστοιχα. Τα δεδομένα επιβίωσης συγκρίθηκαν χρησιμοποιώντας το τεστ log-rank, και αφήστε-7f επίπεδα έκφρασης σε ασθενείς ορίστηκαν ως υψηλά ή χαμηλά σε σχέση με το διάμεσο. NP, δεν υπάρχει εξέλιξη? P, εξέλιξη.

Η

miRNA έκφραση στο ΕΓΚ ιστών

καθοριστεί αν η έκφραση των miRNAs στο πλάσμα σε διαφορετικά στάδια συσχετίστηκε με ότι ταιριάζουν ιστούς όγκων. Εξετάσαμε 11 σημαντικές miRNAs (miR-205, miR-200A, miR-184, miR-34a *, miR-141, miR-483-5p, miR-193b *, αφήστε-7ε *, miR-363 *, ΜΙΚ 98 και αφήστε-7ί) της κατάρτισης που σε δείγματα ταιριάζουν ιστό του όγκου. Η συγκριτική ανάλυση αποκάλυψε ότι η έκφραση όγκου του miR-483-5p, αλλά να μην αφήσουμε-7F, ήταν συσχετίζεται έντονα με την έκφραση του πλάσματος (r = 0.541,

P

= 1,52 × 10

-4) (Εικ. S3A). Βρήκαμε επίσης ότι το miR-483-5p εκφράστηκε σε υψηλότερα επίπεδα στο στάδιο ΙΙΙ και IV ιστούς όγκων σε σχέση με το στάδιο Ι και ΙΙ (

P

= 0,048) (Εικ. S3b), σύμφωνα με τα επίπεδα στο πλάσμα (

P

= 0,043) (Εικ. S3C). MiR-483-5p εκφράστηκε σε υψηλότερα επίπεδα στο πλάσμα σε προχωρημένα στάδια (στάδιο ΙΙΙ και IV) από ό, τι στα πρώτα στάδια (στάδιο Ι και ΙΙ) (Εικ. S3C). Δεν άλλα επίπεδα miRNA στο πλάσμα συσχετίζονται με τα επίπεδα σε ιστούς όγκων.

Συζήτηση

EOC λογαριασμούς για κακοήθειες πιο ωοθηκών. Από την ανακάλυψη της CA-125, το 1981, πολυάριθμες μελέτες έχουν τεκμηριώσει το ρόλο της ως διαγνωστικό εργαλείο και επανάληψη σε EOC ασθενείς [18], [19]. Περίπου το 80% των ασθενών ΕΓΚ έχουν CA-125 υψόμετρο. CA-125 είναι χρήσιμη για την παρακολούθηση της νόσου, την εκτίμηση απόκριση θεραπεία και την ανίχνευση υποτροπής [20], [21]. Ωστόσο, εκτελεί κακώς στην ανίχνευση τα πρώιμα στάδια της ανάπτυξης του καρκίνου των ωοθηκών [22]. Νέες διαγνωστικών δεικτών του καρκίνου των ωοθηκών που απαιτούνται για διαλογή. Επί του παρόντος, έχουν πολλές που κυκλοφορούν miRNAs έχουν αναγνωριστεί για χρήση σε διαφορετικούς τύπους καρκίνου [13], [23], [24], [25]. Σε αυτή τη μελέτη, διαπιστώσαμε ότι αφήνω-7f και miR-205 είναι πολλά υποσχόμενη ως διαγνωστικοί και προοδευτική βιοδεικτών στην EOC.

Χρησιμοποιώντας μια αυστηρή διαδικασία επικύρωσης και ένα μοντέλο λογιστικής παλινδρόμησης, αποδείξαμε ότι το αφήνω-7f- πάνελ miR-205 miRNA είχε υψηλή ακρίβεια στη διάγνωση του ΕΓΚ, ιδιαίτερα σε ασθενείς με σταδίου Ι νόσο. Είναι σημαντικό, η οθόνη μπορεί να χρησιμοποιηθεί σε χαμηλό-CA-125 ασθενείς για τον εντοπισμό σε πρώιμο στάδιο ΕΓΚ.

ήταν ένα από τα πρώτα miRNAs θηλαστικών για να ταυτοποιηθούν Το αφήνω-7 /miR-98 οικογένεια [26]. Ας-7 είχε αρχικά παρατηρηθεί στο νηματώδη

C. elegans

[27], και τα επίπεδα έκφρασης των πολλών μελών ας-7-οικογένειας έχουν βρεθεί να μειωθεί σε διάφορους καρκίνους [28], [29], [30], [31], [32]. Ας-7f εμπλέκεται σε φυσιολογικές και παθολογικές διεργασίες, συμπεριλαμβανομένων καρκινογένεση [33]. Προηγούμενες μελέτες έχουν αποδείξει ότι δρα ως καταστολέας όγκων σε πολλούς καρκίνους, συμπεριλαμβανομένου του καρκινώματος νεφρικών κυττάρων [34], θηλώδους καρκίνου του θυρεοειδούς [35], και γαστρικού καρκίνου [36]. Η οικογένεια let-7 miRNA επιλεκτικά εκκρίνεται στο εξωκυτταρικό περιβάλλον μέσω εξωσώματα, η οποία μπορεί να είναι σημαντική στην επιτήρηση του καρκίνου. Μια μείωση στην let-7 στο εξωκυτταρικό περιβάλλον, όπως στο πλάσμα, μπορεί έτσι να δημιουργήσει μια καρκινογόνες και μετάσταση φιλικό προς το περιβάλλον. Στη μελέτη μας, διαπιστώσαμε ότι το πλάσμα ας-7f μπορεί να χρησιμοποιηθεί ως μια ανίχνευση EOC και πρόγνωση βιοδεικτών. Σε σύγκριση με υγιείς μάρτυρες, ασθενείς με καρκίνο των ωοθηκών έχουν χαμηλότερα επίπεδα στο πλάσμα ας-7f. Σε EOC ασθενείς, αυτά τα χαμηλότερα επίπεδα ήταν επίσης προγνωστικά φτωχή πρόγνωση.

MiR-205 είναι ένα εξαιρετικά συντηρημένη miRNA μεταξύ διαφορετικών ειδών, συμπεριλαμβανομένων των ανθρώπων. Η οικογένεια miR-200 (miR-200a, miR-200b, miR-200c, miR-141 και miR-429) και miR-205 είναι συχνά προς τα κάτω σε προχωρημένο καρκίνο [37]. Μελέτες έχουν δείξει ότι με τη στόχευση των μεταγραφικοί καταστολείς του Ε-καδερίνης, ZEB1 και ZEB2, η οικογένεια miR-200 εμπλέκεται στην επιθηλιακή-προς-μεσεγχυματικά μετάβασης (ΕΜΤ) και εισβολή όγκου [38]. Αυξημένη έκφραση του miR-205 έχει επίσης παρατηρηθεί σε αδενοκαρκίνωμα του ενδομητρίου [39], κεφαλής και λαιμού πλακώδους κυτταρικές σειρές καρκινώματος [40], καρκίνωμα πλακώδους κυττάρου του πνεύμονα [41], και τον καρκίνο των ωοθηκών [37]. Αντιθέτως, η μειωμένη έκφραση του miR-205 έχει αναφερθεί σε μελάνωμα [42] και καρκίνους του οισοφάγου [43], των νεφρών [44], της ουροδόχου κύστης [45], [46], του μαστού [47], και του προστάτη [48] . MiR-205 μπορεί να λειτουργεί ως ένα γονίδιο ογκογονίδιο ή ογκοκατασταλτικό, ανάλογα με κυτταρικό περιβάλλον. Στη μελέτη μας, πλάσμα miR-205 εκφράστηκε σε υψηλότερα επίπεδα σε ασθενείς ΕΓΚ από ό, τι στους υγιείς μάρτυρες. Ωστόσο, δεν υπήρχε διαφορά στην miR-205 έκφραση μεταξύ ιστών όγκου EOC και των παρακείμενων υγιών ιστών.

Η απώλεια ας-7 στον καρκίνο, σε αντίστροφη εμβρυογένεση και αποδιαφοροποίηση [49], και miR-205 ήταν αναγνωριστεί ως ισχυρό ρυθμιστή της ΕΜΤ [50]. Πρόσφατα ευρήματα έχουν συνδεθεί ας-7 με τη συντήρηση των βλαστικών κυττάρων και προτείνουν μια σύνδεση μεταξύ EMT και βλαστικών κυττάρων σχηματισμό. Η μετατροπή ενός επιθηλιακού κυττάρου σε ένα κύτταρο μεσεγχυματικού διαδραματίζει βασικό ρόλο τόσο στην εμβρυϊκή ανάπτυξη και εισβολή καρκίνου και μετάσταση. Κύτταρα που υφίστανται EMT χάσουν τα επιθηλιακά μορφολογικά χαρακτηριστικά τους, την αναδιοργάνωση του κυτταροσκελετού τους, και να αποκτήσουν ένα κινητικό φαινότυπο μέσω της επάνω και κάτω ρύθμιση πολλών μορίων, συμπεριλαμβανομένων σφιχτό και προσκολλημένη πρωτεΐνες διασταύρωση και δείκτες μεσεγχυματικών. Σε EMT καρκίνο των ωοθηκών, ας-7f και miR-205 συμμετέχουν στη διαδικασία EMT με τη ρύθμιση γονιδίων-στόχων τους [49]. Κυκλοφορούντα επίπεδα ας-7f και miR-205 μπορεί να είναι μια αντανάκλαση της διαδικασίας EMT? Έτσι, είναι σημαντικό να διερευνηθεί ο ρόλος τους στη ρύθμιση της εξωκυτταρικό περιβάλλον.

Πολλές μελέτες έχουν αποδείξει ότι κυκλοφορούν miRNAs σε δείγματα αίματος προέρχονται από ιστούς όγκων [14], φλεγμονωδών εστιών [51], βλάβη των ενδοθηλιακών κυττάρων [52 ], και η κανονική μονοπύρηνα κύτταρα περιφερικού αίματος και αιμοπετάλια [53]. Σε αυτή τη μελέτη, αναλύσαμε ωοθηκών καρκινικούς ιστούς και διαπίστωσε ότι miR-483-5p έκφραση συσχετίστηκε με τα επίπεδα στο πλάσμα. Το αποτέλεσμα αυτό υποδεικνύει ότι εξωσώματα που προέρχονται από όγκους μπορεί να εξηγήσει ένα μικρό μέρος της προέλευσης του πλάσματος miRNA. Επιπλέον, οι υψηλότερες miR-483-5p έκφραση βρέθηκε σε προχωρημένο EOC ό, τι στην πρώιμη EOC, τόσο σε ιστό όγκου και του πλάσματος. Για τις γνώσεις μας, αυτή είναι η πρώτη μελέτη για να διαπιστώσει ότι το miR-483-5p μπορεί να σχετίζεται με την εξέλιξη του καρκίνου των ωοθηκών. Πρόσφατα, ο ορός miR-483-5p αναγνωρίστηκε ως πιθανός βιολογικός δείκτης για την ανίχνευση ηπατοκυτταρικό καρκίνωμα [54].

Εν ολίγοις, εντοπίσαμε πλάσμα ας-7f και miR-205 ως πιθανούς βιοδείκτες για τη διάγνωση του καρκίνου των ωοθηκών, ιδιαίτερα για την έγκαιρη ανίχνευση του ΕΓΚ. Ας-7f μπορεί επίσης να είναι ένας προγνωστικός δείκτης του καρκίνου των ωοθηκών. έχουν κυκλοφορούντα miRNAs έχουν βρεθεί να είναι σταθερό, συγκεκριμένο και ευαίσθητο βιοδείκτες. Με βάση τα δεδομένα μας, προτείνουμε ότι οι ειδικές miRNAs που σχετίζονται με κυκλοφορία εξωσώματα είναι νωρίς δείκτες για τον καρκίνο των ωοθηκών και μπορεί να χρησιμοποιηθεί για να καθοριστεί το στάδιο, την πρόγνωση και την ανταπόκριση της θεραπείας.

Υποστήριξη Πληροφορίες

Εικόνα S1. απόδοση

διάγνωσης των miRNAs. (Α) Τα miRNAs δομήθηκαν χρησιμοποιώντας ένα μοντέλο λογιστικής παλινδρόμησης. (Β) Τα αποτελέσματα της ανάλυσης ROC έδειξε ότι το miR-205 και αφήστε-7ί πίνακα διάκριση μεταξύ των περιπτώσεων και των ελέγχων. Η AUC-ROCs του miR-205, αφήστε-7, και ο πίνακας miRNA (miR-205 και αφήστε-7ί) για τη διαφοροποίηση περιπτώσεις και οι έλεγχοι ήταν 0.780, 0.609 και 0.831, αντίστοιχα. Ο πίνακας είχε AUC = 0,831 (95% CI: 0,772 – 0,880), η οποία ήταν σημαντικά βελτιωμένα σε σχέση με τα δύο miRNAs μόνο (miR-205 [

P

& lt? 0.001] και αφήστε-7στ [

P

= 0,008])

doi: 10.1371 /journal.pone.0077853.s001

(ΔΕΘ)

Εικόνα S2.

PFS και OS όλων των ασθενών με αφήσει-7f ή το επίπεδο miR-205. Οι καμπύλες επιβίωσης Kaplan-Meier έδειξε ότι τα χαμηλά ας-7f έκφραση συσχετίστηκε με PFS (

P

= 0,006, σχ. Α), αλλά όχι με το OS (

P

= 0,589, σχ. Β) . Δεν υπήρχαν διαφορές μεταξύ του επιπέδου miR-205 και PFS (

P

= 0,969, C) ή OS (

P

= 0.576, D). Τα δεδομένα επιβίωσης συγκρίθηκαν χρησιμοποιώντας τη δοκιμασία log-rank, και αφήστε-7ί ή τα επίπεδα έκφρασης του miR-205 ορίστηκαν ως υψηλά ή χαμηλά σε σχέση με το διάμεσο. NP, δεν υπάρχει εξέλιξη?