Αφηρημένο

Οι αδενοϊοί (διαφημίσεις), ιδιαίτερα HAdV-5, έχουν γενετικά εξοπλισμένο με δυνατότητες αναπαραγωγής όγκου περιορίζεται να ενεργοποιήσετε εφαρμογές στην ογκολυτική θεραπεία του καρκίνου. Τέτοια ογκολυτική αδενοϊοί έγιναν καλά ανεκτές σε ασθενείς με καρκίνο, αλλά πρέπει να ενισχυθεί η αποτελεσματικότητα κατά του όγκου τους. Σε αυτό το πλαίσιο, θα πρέπει να θεωρείται ότι τα καρκινικά κύτταρα, που εξαρτώνται από ιστό προέλευσής τους, μπορεί να διαφέρουν ουσιωδώς από τα φυσιολογικά κύτταρα ξενιστή στον οποίο διαφημίσεις προσαρμόζονται από πολύπλοκες αλληλεπιδράσεις ιού-ξενιστή. Κατά συνέπεια, ιική αποτελεσματικότητα αντιγραφή, διαδραματίζει καθοριστικό ρόλο ογκολυτικής δραστηριότητας, μπορεί να είναι μη ικανοποιητικός σε καρκινικά κύτταρα. Ως εκ τούτου, έχουμε αναλύσει τόσο την κινητική αντιγραφής του HAdV-5 και το μεταγραφικό που προκαλούνται από ιούς σε ανθρώπινα βρογχικά επιθηλιακά κύτταρα (HBEC) σε σύγκριση με καρκινικά κύτταρα. Αυτή είναι η πρώτη έκθεση σχετικά με το γονιδίωμα-ευρεία προφίλ έκφρασης των διαφημίσεων στη μητρική κύτταρα-ξενιστές τους. Βρήκαμε ότι η έκφραση Ε1Α και εμφάνιση της αντιγραφής ιικού γονιδιώματος είναι πιο γρήγορη στην HBEC και καθυστερήσει σημαντικά σε κύτταρα μελανώματος. Σε κύτταρα καρκινώματος πλακωδών κυττάρων του πνεύμονα, παρατηρήσαμε ενδιάμεσο HAdV-5 κινητική αντιγραφής. Λοιμώδη παραγωγή σωματιδίων, η μετάδοση του ιού και λυτική δράση των HAdV-5 εξασθένησαν σε κύτταρα μελανώματος σε σχέση με HBEC. Έκφραση χαρακτηριστικών κατά την έναρξη της αντιγραφής του ιικού γονιδιώματος απεκάλυψε ότι HAdV-5 που επάγεται τους ισχυρότερους αλλαγές στην κυτταρική μεταγραφικό σε HBEC, ακολουθούμενη από καρκίνο του πνεύμονα και κύτταρα μελανώματος. Ταυτοποιήσαμε εξέχοντα ρύθμιση των γονιδίων που εμπλέκονται στο μεταβολισμό του DNA του κυτταρικού κύκλου και, αντιγραφή και συσκευασία σε HBEC, η οποία είναι σε συμφωνία με την ανάγκη να επάγει την φάση S για την αντιγραφή του ιού. Εντυπωσιακά, σε κύτταρα μελανώματος HAdV-5 προκάλεσε αντίθετες ρύθμιση των εν λόγω γονιδίων και, σε αντίθεση με τα κύτταρα καρκίνου του πνεύμονα, καμία επαγωγή αδύναμη φάση S ανιχνεύθηκε κατά τη χρήση της E2F υποκινητή ως ρεπόρτερ. Τα αποτελέσματά μας παρέχουν ένα σκεπτικό για τη βελτίωση ογκολυτικής αδενοϊούς, είτε μέσω της προσαρμογής του ιογενής λοίμωξη να στοχεύουν τα καρκινικά κύτταρα ή διαμορφώνοντας τις λειτουργίες των κυττάρων του όγκου να υποστηρίξουν καλύτερα την αντιγραφή του ιού

Παράθεση:. Dorer DE, Holtrup F, Fellenberg Κ, Kaufmann JK , Engelhardt S, Hoheisel JD, et al. (2011) Αναπαραγωγή και προκαλούνται από ιούς μεταγραφικό των HAdV-5 στην κανονική υποδοχής κύτταρα σε σχέση με τα κύτταρα του καρκίνου – Διαφορές σημασία για αδενοϊό ογκόλυσης. PLoS ONE 6 (11): e27934. doi: 10.1371 /journal.pone.0027934

Επιμέλεια: Maciej Σ Lesniak, Το Πανεπιστήμιο του Σικάγο, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 28 Ιούνη του 2011? Αποδεκτές: 28 Οκτωβρίου 2011? Δημοσιεύθηκε: 30 Νοέμβρη 2011

Copyright: © 2011 Dorer et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε από το Helmholtz Association of National Κέντρα Ερευνών (Helmholtz Πανεπιστημίου Ομάδα Grant), το Πρόγραμμα Τειχών της γερμανικής Cancer Research Center (DKFZ, Deutsches Krebsforschungszentrum) και με υποτροφίες από το Helmholtz Διεθνές Graduate School για την Έρευνα του Καρκίνου στο DED, FH, και JKK. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

οι αδενοϊοί (Ads) αναδύονται θεραπευτικές του καρκίνου με βάση την ισχύ τους να μολύνουν και τον καρκίνο λύουν κύτταρα, μια διαδικασία που ονομάζεται ιογενής ογκόλυσης [1], [2]. Αυτή η αγωγή διαθέτει ένα μοναδικό αποτέλεσμα ενίσχυσης όπως μολυσμένα κύτταρα όγκου παράγουν ιούς απογόνους που εξαπλώνονται λοίμωξη στον όγκο. Ένα επιπλέον πλεονέκτημα είναι ότι ο τρόπος δράσης του ογκολυτικού διαφημίσεων διαφέρει από συμβατικές θεραπείες, στις οποίες τα καρκινικά κύτταρα συχνά αναπτύσσουν αντίσταση. Περιορισμός της αντιγραφής του ιού στα κύτταρα του όγκου είναι ουσιαστικά απαιτείται για την εφαρμογή των διαφημίσεων στη θεραπεία του καρκίνου. Σε αυτό το πλαίσιο, η εκτεταμένη γνώση της δομής διαφήμισης, η οργάνωση του γονιδιώματος και του κύκλου αναπαραγωγής σε συνδυασμό με τις τεχνολογίες για τη μηχανική Ad διευκολύνει την ορθολογική ανάπτυξη της ογκολυτικού Αγγελίες [2], [3]. Πράγματι, ογκολυτικοί ιοί με εξαιρετική εκλεκτικότητα όγκου έχουν κατασκευαστεί με βάση την στενά συνδεδεμένη HAdV-2 και HAdV-5. Αυτό επιτυγχάνεται είτε με μετάλλαξη γονιδιακών λειτουργιών, που συμπληρώνονται σε καρκινικά κύτταρα, αλλά όχι σε φυσιολογικά κύτταρα, ή με στόχο την έκφραση των βασικών ιικών γονιδίων σε κύτταρα όγκου [1], [2], [4]. Αρκετές κλινικές μελέτες έχουν δείξει ότι οι εν λόγω μηχανικής διαφημίσεις είναι καλά ανεκτή σε ασθενείς, αλλά ότι η θεραπευτική δραστικότητα τους χρειάζεται βελτίωση [5], [6]. Στο πλαίσιο αυτό, η ευκαιρία για την ορθολογική μηχανική των διαφημίσεων είναι και πάλι ένα βασικό πλεονέκτημα, δεδομένου ότι διευκολύνει την ανάπτυξη προηγμένων ογκολυτικού παραγόντων. Αντίστοιχα, μελέτες για τη βελτίωση καταχώρηση διαφήμισης σε καρκινικά κύτταρα ή να εισάγετε θεραπευτικών γονιδίων σε ογκολυτικού διαφημίσεις έχουν αναφερθεί [2], [7], [8].

αδενοϊό ογκόλυσης απαιτεί αποτελεσματική αντιγραφή διαφημίσεων σε στοχευμένες καρκινικά κύτταρα. Προηγούμενη εργασία στο πεδίο δεν έχει δεόντως υπόψη ότι τα καρκινικά κύτταρα, που εξαρτώνται από τον ιστό προέλευσης, μπορεί να διαφέρουν ουσιωδώς από τα φυσιολογικά κύτταρα υποδοχής διαφημίσεων. Έτσι, ο ιός δεν συναντάμε το κυτταρικό περιβάλλον είναι προσαρμοσμένο να από πλήρη αλληλεπιδράσεις κυττάρου-ξενιστή του ιού. Κατά συνέπεια, η αναπαραγωγή διαφήμισης, κυτταρική λύση και η εξάπλωση μπορεί να είναι αναντίστοιχο. Συγκεκριμένα, HAdV-2 και -5 είναι εξελικτική προσαρμοσμένο να αντιγραφεί σε επιθηλιακά κύτταρα του αναπνευστικού συστήματος [9], αλλά αναπτύσσονται για τη θεραπεία μιας ευρείας ποικιλίας των όγκων-στόχων. Πράγματι, οι μεταλλάξεις του HAdV-5 που αυξάνουν την αντιγραφή του ιού και την εξάπλωση σε καρκινικά κύτταρα έχουν αναφερθεί [10] – [12]. Ένα παράδειγμα είναι η διαγραφή του

E1B19K

, το οποίο έχει αντι-αποπτωτική δραστικότητα. Διαγραφή του

E1B19K

έχει οδηγήσει σε έντονα αυξημένη αντιγραφή HAdV-5 και ογκόλυσης στα καρκινικά κύτταρα του πνεύμονα. Ωστόσο, μειωμένη αντιγραφή έχει αναφερθεί σε καρκινικά κύτταρα που προέρχονται από άλλους ιστούς συμπεριλαμβανομένων των κυττάρων του μελανώματος [11], [13] – [15]. Αυτές οι παρατηρήσεις και πάλι το σημείο στο κυτταρικό τύπο εξάρτηση των αλληλεπιδράσεων κυττάρου Ad-ξενιστή και, κατά συνέπεια, την αποτελεσματικότητα αντιγραφής Ad: Διαφορές στον προγραμματισμό απόπτωση μεταξύ φυσιολογικών και καρκινικών κυττάρων, αλλά και μεταξύ διαφορετικών καρκινικών κυττάρων πιο πιθανό να προκαλέσει τη διαφορετική permissivity να

E1B19K

-deleted HAdV-5.

Όπως υποχρεωτικά ενδοκυτταρικά παράσιτα διαφημίσεις εξαρτώνται από την παραγωγή κυτταρικής ενέργειας και βιοσύνθεσης μηχανημάτων. Στην πραγματικότητα, οι διαφημίσεις έχουν εφαρμοστεί ποικίλα και περίπλοκα μοριακοί μηχανισμοί για τη δημιουργία συνθηκών στο κύτταρο-ξενιστή που εξασφαλίζουν την αποτελεσματική αναπαραγωγή του ιού. Αυτά είναι καλύτερα μελετημένα για HAdV-2 και -5 ([16], [17] και παραπομπές εκεί). Αντίστοιχα, τα προϊόντα της πρώιμης έκφρασης ιικού γονιδίου – εκτός από την παροχή πρωτεϊνών που απαιτούνται για την αντιγραφή του γονιδιώματος του ιού – χειριστεί το κυτταρικό περιβάλλον για να υποστηρίξει την αντιγραφή του ιού μέσω πολλαπλών μηχανισμών, ιδίως με την άμεση και έμμεση ρύθμιση της κυτταρικής μεταγραφής ([17] – [19] και παραπομπές εκεί). Το πρώτο ιικό γονίδιο που εκφράζεται κατά τη διάρκεια της λοίμωξης είναι Ad Ε1Α, το οποίο κωδικοποιεί μία οικογένεια πρωτεϊνών που προκύπτουν από εναλλακτικό μάτισμα. Ε1Α πρωτεΐνες επάγουν την έκφραση του περαιτέρω γονιδίων πρώιμης Ad και να χειριστούν μεταγραφή κυτταρικών γονιδίων άμεσα ή έμμεσα [20], [21]. Το μεγαλύτερο πρωτεΐνη Ε1Α (13S) περιέχει ένα ισχυρό τομέα διενεργοποίησης που επάγει μεταγραφή όταν Ε1Α αλληλεπιδρά με πρωτεΐνες σύνδεσης DNA. Αμφότερες οι πρωτεΐνες 13S και 12S Ε1Α δεσμεύονται με pRb, με αποτέλεσμα την απελευθέρωση του E2F μεταγραφικών παραγόντων από pRb-E2F συγκροτήματα. Οι E2F πρωτεΐνες να ενεργοποιήσουν τη μεταγραφή ιικών και κυτταρικών γονιδίων μέσω θέσεις E2F-δέσμευσης ([17], [19], [22], [23] και παραπομπές εκεί). E2Fs ευρέως επάγουν κυτταρικά γονίδια που εμπλέκονται στη φάση S του κυτταρικού κύκλου, τα οποία επίσης απαιτούνται για αντιγραφή του γονιδιώματος του Ad. Περαιτέρω μεταγραφικές δραστηριότητες των πρωτεϊνών Ε1Α διαμεσολαβείται από την αλληλεπίδραση με ένα πάνελ κυτταρικών παραγόντων που αναστέλλουν ή ενεργοποιούν τη μεταγραφή, για παράδειγμα ακετυλάσες ιστόνης ([17] και παραπομπές εκεί). Μια άλλη αγγελία πρώιμη πρωτεΐνη, Ε1Β55Κ, περιέχει ένα ισχυρό τομέα καταστολής της μεταγραφής. Με τη δέσμευση στην περιοχή διενεργοποίησης του ρ53 μεταβαίνει λειτουργικά ρ53 από ένα ενεργοποιητή μεταγραφής σε ένα καταστολέα [24]. Επιπλέον, Ε1Β55Κ μαζί με Ε4οτί6 σκανδάλη αποικοδόμησης της ρ53 [25]. Το προκύπτον κλεισίματος του p53-απόκρισης προ-αποπτωτικών γονιδίων εξουδετερώνει την επαγωγή απόπτωσης που προκλήθηκε από ανώμαλη διέγερση του κυτταρικού κύκλου από Ε1Α.

Η εξαιρετική γνώση της μόλυνσης Ad έχει αποκτηθεί από εκτεταμένες μελέτες που ήταν κυρίως εκτελείται με HAdV-2 ή -5 σε HeLa και άλλων καρκινικών κυττάρων και επικεντρώθηκε σε μεμονωμένα γονίδια Ad [17]. Έτσι, η μόλυνση Ad στο κανονικό περιβάλλον της φυσικής κύτταρα ξενιστή, π.χ. πρωτογενή επιθηλιακά κύτταρα του αναπνευστικού συστήματος για HAdV-5, έχει σπάνια μελετηθεί (οι περισσότερες από αυτές τις μελέτες ανέλυσαν την εκλεκτικότητα του ογκολυτικού Διαφημίσεις, βλέπε συζήτηση). Σημειώστε ότι τα κύτταρα HeLa διαφέρουν από τα φυσιολογικά κύτταρα ξενιστές διαφημίσεων, καθώς είναι από καρκίνο του τραχήλου της μήτρας προέλευσης και έχουν εκτεταμένα ανακαλλιεργήθηκαν. Επιπλέον, περιέχουν γονίδια του ανθρώπινου ιού των θηλωμάτων που επηρεάζουν τις λειτουργίες των κυττάρων σημαντικό για την αντιγραφή διαφημίσεων. Μελέτες που διερευνούν το πώς τα μεμονωμένα γονίδια του Ad επηρεάζουν κυτταρικές λειτουργίες δεν θεωρούν ότι το περίπλοκο δίκτυο αλληλεπιδράσεων ιού-ξενιστή κατά τη διάρκεια της λοίμωξης από τον ιό. Από αυτή την άποψη, η τεχνολογία των μικροσυστοιχιών αποτελεί ένα ισχυρό εργαλείο για την γονιδίωμα-ευρεία παρακολούθηση της επαναπρογραμματιστούν έκφρασης κυτταρικού γονιδίου κατά τη διάρκεια της λοίμωξης διαφημίσεων. Πράγματι, προηγούμενες μελέτες μικροσυστοιχίας έχουν αποκαλύψει ότι HAdV-2 και -5 λοιμώξεις στόχευση πολλαπλών κυτταρικών οδών [26] – [30]. Αυτές οι μελέτες έχουν διεξαχθεί με κύτταρα HeLa και πρωτογενείς ινοβλάστες. Πώς λοιμώξεις διαφήμισης διαμορφώνει γονιδιώματος σε επίπεδο γονιδιακής έκφρασης των φυσικών κυττάρων-ξενιστών τους δεν έχει μελετηθεί μέχρι σήμερα. Κατά συνέπεια, μια συγκριτική ανάλυση του Ad-επαγόμενης έκφρασης των γονιδίων των καρκινικών κυττάρων έναντι μητρική κύτταρα-ξενιστές διαφήμισης, το οποίο παρουσιάζει ενδιαφέρον για την ανάπτυξη της ογκολυτικού διαφημίσεις, δεν είναι διαθέσιμες μέχρι σήμερα.

Σε αυτή τη μελέτη, ως εκ τούτου διερευνηθούν πώς μόλυνση διαφήμισης των καρκινικών κυττάρων διαφέρει από τη μόλυνση διαφήμισης των φυσιολογικών κυττάρων του ξενιστή. Για το σκοπό αυτό, πραγματοποιήθηκε μια συγκριτική ανάλυση των HAdV-5 κινητική αντιγραφής και λυτική δραστικότητα σε πρωτογενή βρογχικά επιθηλιακά κύτταρα, πνευμονικά κύτταρα πλακώδους καρκινώματος και κύτταρα μελανώματος. Επιλέξαμε αυτό το σύνολο των κυττάρων, δεδομένου ότι αντιπροσωπεύουν φυσιολογικά κύτταρα HAdV-5 ξενιστή, τα κύτταρα των όγκων που προέρχονται από HAdV-5 κύτταρα ξενιστές και τα καρκινικά κύτταρα που προέρχονται από ένα άσχετο τύπο κυττάρων, αντίστοιχα. Εμείς μεταγενέστερα γονιδιώματος σε επίπεδο προφίλ έκφρασης του HAdV-5 μόλυνση σε φυσιολογικά βρογχικά επιθηλιακά κύτταρα και κύτταρα όγκου. Τον τύπο του κυττάρου που εξαρτάται από διαφορές στις HAdV-5-προκαλούμενη κυτταρικής transcriptomes αξιολογήθηκαν με βιοπληροφορική ανάλυση.

Αποτελέσματα

Η λυτική δραστικότητα και η αποτελεσματικότητα αντιγραφής του HAdV-5 σε φυσιολογικά ανθρώπινα βρογχικά επιθηλιακά κύτταρα και τον καρκίνο κύτταρα

πρώτα εκτιμηθεί κατά πόσον η αποδοτικότητα του HAdV-5 εξάπλωση εξαρτώμενη κυτταρική λύση και την αναπαραγωγή διαφέρουν μεταξύ φυσικής HAdV-5 κύτταρα ξενιστές και τα καρκινικά κύτταρα. Πρωτογενή ανθρώπινα βρογχικά επιθηλιακά κύτταρα (HBECs) χρησιμοποιήθηκαν στη μελέτη μας, καθώς αντιπροσωπεύουν στενότερα τα εγγενή HAdV-5 κύτταρα ξενιστές του αναπνευστικού επιθηλίου. Αυτοί συγκρίθηκαν με καρκινικά κύτταρα πνεύμονα SK-MES-1, SW900 (τόσο καρκίνωμα πλακωδών κυττάρων), και Α549 (αδενοκαρκίνωμα), για κύτταρα μελανώματος SK-MEL-28 και Mel624, και σε περαιτέρω ανθρώπινα πρωτογενή φυσιολογικά κύτταρα, δηλαδή ινοβλάστες και κερατινοκύτταρα . Σε μια δοκιμασία κυτταροτοξικότητας, παρατηρήσαμε ότι η εξάπλωση-εξαρτώμενη κυτταρική λύση από HAdV-5 ήταν παρόμοια αποτελεσματικό στην HBECs, SW900 και κύτταρα Α549, αλλά εξασθενημένος σε SK-MES-1 κύτταρα και ακόμη περισσότερο στις δύο κυτταρικές σειρές μελανώματος (Εικ. 1Α ). Η κυτταροτοξικότητα του HAdV-5 για κερατινοκύτταρα ήταν παρόμοιο με HBECs, ενώ δεν παρατηρήθηκε θανάτωση των κυττάρων για πρωτογενείς ινοβλάστες κατά τη στιγμή της μέτρησης. Αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν σαφώς ότι λυτική δραστικότητα του HAdV-5 είναι κυτταρικό τύπο-εξαρτώμενη και μπορεί να μειωθεί έντονα σε καρκινικά κύτταρα σε σύγκριση με HBECs. Αξίζει να σημειωθεί, μειωμένη λυτική δραστικότητα του HAdV-5 σε SK-MEL-28 κύτταρα και Mel624 δεν μπορεί να αποδοθεί σε αναποτελεσματική ιική σύνδεση κυττάρου και τη θέση, επειδή αυτά τα κύτταρα έδειξαν ισχυρή έκφραση του CAR υποδοχέα HAdV-5 (Σχ. S1) και ήταν ακόμη πιο επιρρεπείς σε μεταγωγή από ένα ελλειμματικό αναπαραγωγής HAdV-5 φορέα από HBECs, Α549 και SW900 κύτταρα (Πίνακας S1). Αυτό αποτελεί σαφή ένδειξη ότι μειώνεται λυτική δράση των HAdV-5 σε κύτταρα μελανώματος καθορίζεται σε ένα βήμα μετά την έναρξη της αντιγραφής του ιού. Σε αντίθεση, οι ινοβλάστες δεν είχαν έκφραση CAR και ήταν δύσκολο για την μεταγωγή. Καθώς τα κύτταρα βάφτηκαν 8 ημέρες μετά τη μόλυνση, η οποία επιτρέπει για πολλούς γύρους αντιγραφής του ιού, τα αποτελέσματα της δοκιμασίας κυτταροτοξικότητας δείχνουν διαφορές στην αποτελεσματικότητα του HAdV-5 αναδιπλασιασμό και εξάπλωση μεταξύ κυττάρων μελανώματος και HBEC. Ως εκ τούτου, έχουμε την επόμενη σύγκριση αναδιπλασιασμό HAdV-5 σε HBECs, SW900 και SK-MEL-28 πιο άμεσα με ποσοτικοποίηση της παραγωγής μολυσματικών σωματιδίων ιού κατά τη διάρκεια ενός γύρου αντιγραφής (Εικ. 1Β). Infectious παραγωγή σωματιδίων ιού με HBECs ήταν η πρώτη αύξηση στο ιικό γονιδίωμα και mRNA ίνα αντίγραφα λαμβάνει χώρα σε 8 ή 12 hpi, εξαρτάται από το δότη, και μολυσματικές παραγωγή σωματιδίων φθάνει ένα πλατώ κατά 48 hpi. Αυτό ακολουθείται από μια αποτελεσματική εξάπλωση του ιού στην κυτταρική μονοστιβάδα, όπως παρατηρείται από την κυτταροτοξικότητα δοκιμασία μετά τη χαμηλή μόλυνση τίτλο. Γονιδίωμα-ευρύ προφίλ έκφρασης του HAdV-5 μολυσμένα HBECs κατά την έναρξη της αντιγραφής ιϊκού γονιδιώματος, όταν αναμένονται σημαντικές τροποποιήσεις στο κύτταρο ξενιστή με νωρίς ιικών γονιδίων, αποκάλυψε μια σημαντική αύξηση στην έκφραση για 424 και μια μείωση για 519 από 18631 αξιολογήθηκε γονίδια. Έτσι γονίδιο καταστολή ήταν προεξέχων σε αυτό το χρονικό σημείο, ακόμη και αν θεωρηθεί ότι είναι πιο δύσκολο να ανιχνευθεί από την επαγωγή του γονιδίου λόγω της ημίσειας ζωής του mRNA που υπάρχει πριν από την μόλυνση. Γονίδια που εμπλέκονται στον κυτταρικό κύκλο, την αντιγραφή του DNA, την οργάνωση της χρωματίνης και νουκλεοτιδίων μεταβολισμό είχαν συσσωρευτεί στο ρυθμισμένη προς τα πάνω πληθυσμό γονίδιο. Αυτό περιελάμβανε

E2F-2

, παρουσιάζοντας τη μεγαλύτερη αύξηση στην έκφραση του mRNA (11,5 φορές),

CCNE1

και

CCNE2

(κυκλίνη Ε1 και Ε2? 7.9- και 6.2 φορές σε),

RRM2

(ριβονουκλεοτιδικής αναγωγάσης M2? 5,2 φορές),

cdc25A

(3,5 φορές),

MCM2

,

7

και

10

(3, 3.3- και 3.3-φορές),

EXO1

(εξωνουκλεάσης 1? 3,1 φορές),

RFC3

και

4

(συντελεστής C3 αντιγραφή και 4? 2.8- και 2.1-φορές),

PCNA

(πυρηνικό αντιγόνο πολλαπλασιαζόμενων κυττάρων? 2,2 φορές) και αρκετές ιστόνης, παράγοντας συναρμολόγηση χρωματίνη και γονίδια κεντρομερές. Αυτά τα αποτελέσματα είναι σε συμφωνία με προηγούμενες μελέτες οι οποίες έχουν καθοριστεί, αν και σε άλλους τύπους κυττάρων, ότι η S επαγωγή φάση σε κύτταρα Ad-μολύνονται απαιτείται για την αντιγραφή του ιού για να προχωρήσει. Ο αριθμός των γονιδίων και τα ποσοστά επαγωγής που αναφέρουμε μπορεί να είναι ακόμη υποτιμάται, καθώς δεν συγχρονίσει HBECs πριν από τη μόλυνση, ώστε να καταστεί δυνατή η έγκυρη σύγκριση καρκινικά κύτταρα. Γονίδια με δραστηριότητα στην διαφοροποίηση, αρνητική ρύθμιση του πολλαπλασιασμού (συμπεριλαμβανομένων των

CDKN1A

? -2.9 Και

CDKN2B

? -2,73) Κυτταρικό θάνατο, και ρύθμιση συσσωρεύτηκαν στον πληθυσμό καταπιεσμένη γονίδιο (ισχυρότερη καταστολή ήταν για παραθυρεοειδούς ορμόνης που μοιάζει με ορμόνη, 16,1 φορές). Αξίζει να σημειωθεί, δεν προσδιορίζουν τη συσσώρευση των γονιδίων που εμπλέκονται στην ανοσία στην απορυθμίζεται γονιδιακή δεξαμενή.

Λοίμωξη

HAdV-5 έχει σπανίως μελετηθεί σε φυσιολογικά επιθηλιακά κύτταρα του αναπνευστικού συστήματος πριν. Αρκετές μελέτες ογκολυτικού διαφημίσεις έχουν σχέση κυρίως αναπνευστικά επιθηλιακά κύτταρα με κύτταρα όγκου σε κυτταροτοξικότητα και μολυσματικές δοκιμασίες παραγωγής σωματιδίων με σκοπό την αξιολόγηση της επιλεκτικότητας και αποτελεσματικότητας των μεταλλάξεων του ιού του [32] – [39]. Αυτές οι μελέτες έχουν δείξει ότι η παραγωγή μολυσματικού HAdV-5 σωματίδια σε πρωτογενή επιθηλιακά κύτταρα του αναπνευστικού συστήματος είναι αποτελεσματική και αιχμές γύρω 48 ώρες ρ.ί. [37], [39], η οποία είναι σε συμφωνία με τα αποτελέσματα μας.

Προηγούμενες μελέτες σχετικά προφίλ εκφράσεως της λοίμωξης Ad διεξαχθεί με κύτταρα HeLa και ανθρώπινες ινοβλάστες. Για τα κύτταρα HeLa, μόλυνση HAdV-2 σε ΜΟΙ 100 αναφέρθηκε για τη ρύθμιση 76, 60, ή 382 γονίδια πάνω από 1,5 φορές σε 6 ώρες, 10 ώρες ή 20 hpi, αντίστοιχα (12.000 αναλύθηκαν σε 6 ώρες, 7.500 γονίδια στα 10 h και 20 h) [26], [28]. Μια άλλη μελέτη διαπίστωσε 75 4.600 γονίδια που ρυθμίζονται περισσότερο από διπλάσια από HAdV-5 σε 24 ώρες μετά τη μόλυνση από HeLa κύτταρα [40]. Είτε ο χαμηλότερος αριθμός των ρυθμιζόμενων γονιδίων σε σύγκριση με HBECs στη μελέτη μας οφείλεται στην μεταμόρφωση των κυττάρων HeLa είναι δύσκολο να κριθεί λόγω των διαφορών στη μεθοδολογία. Από αυτή την άποψη, η μελέτη μας έδειξε ένα χαμηλότερο αριθμό γονιδίων που ρυθμίζονται και για τις δύο κυτταρικές σειρές καρκίνου του πνεύμονα και μελανώματος σε άμεση σύγκριση με HBECs (βλέπε παρακάτω). γονίδια φάση S έχουν αναφερθεί ότι επάγονται από μόλυνση Ad σε κύτταρα HeLa, συμπεριλαμβανομένων

cdc25A

(1.8 σε 10 ώρες),

UNG

(1,6) και τα γονίδια ιστόνης [28], το οποίο βρήκαμε επίσης, σε HBECs. Οι επικαλύψεις βρίσκονται επίσης στα μειωτικά γονίδια:

MYC

(-1,9 έναντι -2,4 στην HBEC)?

THBS1

(θρομβοσπονδίνης-1? -2,6 Έναντι -9,4 στην HBEC)?