Abstract

Ιστορικό

καρκίνο του πνεύμονα, υΡΑ, υποδοχέα της (uPAR), και οι αναστολείς ΡΑΙ-1 και ΡΑΙ-2 της οικογένειας ενεργοποιητή πλασμινογόνου αλληλεπιδρούν με ΜΜΡ-2 και ΜΜΡ-9 της οικογένειας ΜΜΡ για την προώθηση της εξέλιξης του καρκίνου. Ωστόσο, παραμένει απροσδιόριστο το οποίο από αυτούς τους δείκτες παίζει τον πιο σημαντικό ρόλο και μπορεί να είναι το πιο χρήσιμο δείκτη για τη διαστρωμάτωση του ασθενείς από τον κίνδυνο.

Μέθοδοι

Θα προσδιορίζεται η ατομική προγνωστική αξία αυτών των 6 δείκτες αναλύοντας μια κοόρτη παραγωγή με 98 μη μικροκυτταρικό ασθενείς με καρκίνο του πνεύμονα με ανοσοϊστοχημική χρώση. Η συσχέτιση μεταξύ των επιπέδων έκφρασης IHC αυτών των δεικτών και της νόσου πρόγνωση ερευνήθηκε, και μία ανοσοϊστοχημική πάνελ για προγνωστικούς πρόβλεψη στη συνέχεια παράγονται μέσω της ανάλυσης προγνωστικό μοντέλο. Η αξία της ανοσοϊστοχημική πίνακα στη συνέχεια επαληθεύονται από μια ομάδα επικύρωσης με τους ασθενείς με καρκίνο του πνεύμονα 91

Αποτελέσματα

Στην παραγωγή ομάδα, ΡΑΙ-2 είναι το πιο ισχυρό προγνωστικό παράγοντα (HR = 2,30.?

P

= 0,001), ακολουθούμενη από την MMP-9 (HR = 2,09?

P

= 0.019) σύμφωνα με πολυπαραγοντική ανάλυση. Κατά το συνδυασμό ΡΑΙ-2 και ΜΜΡ-9, το πιο δυσμενής προγνωστική ομάδα (χαμηλά υψηλά επίπεδα έκφρασης ΜΜΡ-9 IHC ΡΑΙ-2 και) έδειξε 6.40 φορές αυξημένο κίνδυνο κακή πρόγνωση σε σύγκριση με την πιο ευνοϊκή προγνωστική ομάδα (υψηλή ΡΑΙ -2 και τα χαμηλά επίπεδα έκφρασης ΜΜΡ-9 IHC). ΡΑΙ-2 και ΜΜΡ-9 IHC πίνακα θα μπορούσε να προσδιορίσει με μεγαλύτερη ακρίβεια τους ασθενείς υψηλού κινδύνου και στις δύο προέλευση και την επικύρωση ομάδα.

Συμπεράσματα

Εμείς αποκάλυψε ΡΑΙ-2 ως το πιο ισχυρό προγνωστικό δείκτη μεταξύ ΠΑ και ΜΜΡ οικογένειας πρωτεασών, ακόμη και μετά την εξέταση στενές σχέσεις τους με το άλλο. Με τη χρησιμοποίηση ενός συνδυασμού ΡΑΙ-2 και ΜΜΡ-9, πιο ακριβείς προγνωστικές πληροφορίες από την απλή χρήση και μόνο παθολογικό στάδιο μπορεί να ληφθεί για τους ασθενείς με καρκίνο του πνεύμονα

Παράθεση:. Su CY, Liu YP, Yang CJ, Lin YF , Χίου J, Chi LH, et al. (2015) Αναστολέας του Ενεργοποιητή Πλασμινογόνου-2 διαδραματίζει ηγετικό ρόλο μεταξύ Πρόγνωσης πρωτεάσης Οικογένειες με μη-μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα. PLoS ONE 10 (7): e0133411. doi: 10.1371 /journal.pone.0133411

Επιμέλεια: Ιωσήφ Najbauer, Πανεπιστήμιο του Πετς Ιατρική Σχολή, ΟΥΓΓΑΡΙΑ

Ελήφθη: 12 Φλεβάρη 2015? Αποδεκτές: 26 Ιούνη 2015? Δημοσιεύθηκε: 31 Ιουλίου 2015

Copyright: © 2015 Su et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα: Όλα τα σχετικά δεδομένα είναι εντός του Υποστηρίζοντας αρχεία πληροφοριών του χαρτιού και

χρηματοδότηση:.. Οι συγγραφείς δεν έχουν καμία υποστήριξη ή χρηματοδότηση για να αναφέρετε

Αντικρουόμενα συμφέροντα:. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν αντικρουόμενα συμφέροντα

Εισαγωγή

ο καρκίνος του πνεύμονα παραμένει η πιο κυρίαρχη αιτία θανάτου από καρκίνο σχετίζονται παρά τις προόδους σε στρατηγικές θεραπείας [1]. διαχείρισης στάδιο με βάση γενικά χρησιμοποιείται ως οδηγός για να αποφασίσει ποιοι ασθενείς θα πρέπει να λαμβάνουν χειρουργική επέμβαση, χημειοθεραπεία, ή ακτινοθεραπεία ή στοχευμένη θεραπεία [2]. Ωστόσο, διαφορετική πρόγνωση δεν παρατηρήθηκε συχνά παρατηρήθηκε σε ασθενείς εντός του ίδιου σταδίου. Αν και έγιναν συστάσεις παράγοντες υψηλού κινδύνου όπως πτωχά διαφοροποιημένους όγκους και αγγειακή ή υπεζωκότα συμμετοχής που πρέπει να χρησιμοποιούνται ως πρόσθετα δείκτες για την πιο επιθετική θεραπεία, αυτοί οι παράγοντες κινδύνου μόνη της δεν είναι ακόμη αρκετά για να διαστρωμάτωση με ακρίβεια τους ασθενείς με κίνδυνο [3,4]. Ως εκ τούτου, πιο μυθιστόρημα προγνωστικούς δείκτες πρόβλεψης χρειάζονται επειγόντως για να κατευθύνει τις θεραπευτικές διαδικασίες λήψης αποφάσεων. Πρόσφατα, μελέτες που συγκρίνουν και να συνδυάσουν δείκτες του καρκίνου ρυθμιστικές οδούς, όπως οι οδοί έλεγχο του πολλαπλασιασμού του όγκου [5] και της επιθηλιακής-μεσεγχυματικής μετάβασης [6], με στόχο τη δημιουργία μεγαλύτερης προγνωστικής αποτελεσματικότητα για τον εντοπισμό ασθενών υψηλού κινδύνου έχουν λάβει αυξανόμενη προσοχή .

σε καρκίνο του πνεύμονα, η υψηλή συχνότητα των τοπικών επιθετικότητα και μεταστατική συμπεριφορά είναι μια από τις κύριες αιτίες της θνησιμότητας του καρκίνου που σχετίζονται και μπορεί να οδηγήσει σε αποτυχία της θεραπείας [7]. Εξωκυττάριας ουσίας (ECM) υποβάθμιση είναι ένα από τα πιο κρίσιμα βήματα που εμπλέκονται στην τοπική εισβολή και μακρινή μετάσταση [8]. Ο ενεργοποιητής πλασμινογόνου (ΡΑ) και το οικογενειακό μεταλλοπρωτεϊνάσης μήτρας οικογένεια (ΜΜΡ) είναι δύο πολύ γνωστές οικογένειες πρωτεασών που παίζουν ουσιώδη ρόλο στην αποικοδόμηση ECM κατά τη διάρκεια της εξέλιξης του καρκίνου [9,10], και τα μέλη τους έχουν αναφερθεί ότι είναι χρήσιμοι προγνωστικοί δείκτες σε καρκίνος του πνεύμονα. Τα υψηλά επίπεδα έκφρασης του ενεργοποιητή πλασμινογόνου τύπου ουροκινάσης (υΡΑ), υποδοχέα της (uPAR), και αναστολέα ενεργοποιητή πλασμινογόνου τύπου 1 (ΡΑΙ-1) στην ΠΑ οικογένεια και μήτρα μεταλλοπρωτεϊνάσης 2 (ΜΜΡ-2) και μεταλλοπρωτεϊνάσης μήτρας 9 (MMP- 9) στην οικογένεια των ΜΜΡ έχουν συσχετισθεί με κακή πρόγνωση και οι δυσμενείς κλινικοπαθολογικών παραμέτρων [11-18]. Αντίθετα, οι ασθενείς με υψηλά πλασμινογόνου αναστολέα του ενεργοποιητή τύπου 2 (ΡΑΙ-2) επίπεδα έκφρασης τείνουν να έχουν μια ευνοϊκή πρόγνωση [19-21]. Παρά το γεγονός ότι σε μερικούς τύπους καρκίνου όπως του ενδομητρίου και του παχέος εντέρου, η έκφραση υψηλού ΡΑΙ-2 συνδέθηκε με φτωχή πρόγνωση [22,23], υψηλή έκφραση ΡΑΙ-2 επίσης δειχθεί ότι συσχετίζεται με καλύτερη πρόγνωση σε καρκίνο του μαστού και των ωοθηκών [24, 25].

Επιπλέον ενεργεί μόνη της, μόρια στις οικογένειες ΡΑ και ΜΜΡ αλληλεπιδρούν επίσης με το άλλο για να διαμορφώσουν περαιτέρω τη διαδικασία της αποικοδόμησης ECM σε ένα περίπλοκο τρόπο (S1 Εικ). Η πλασμίνη, ο οποίος ενεργοποιείται από πλασμινογόνο με τη σύνδεση του υΡΑ στην uPAR, μπορεί να υποβαθμίσει το ECM, άμεσα ή έμμεσα, μέσω της πρωτεολυτικής ενεργοποίησης ΜΜΡ-2 και ΜΜΡ-9 [26]. Όταν είτε ΡΑΙ-1 ή ΡΑΙ-2 είναι παρόν, η ικανότητα των υΡΑ να ενεργοποιεί πλασμίνη αναστέλλεται, και με τη σειρά του, την αποδόμηση της ECM αναστέλλεται επίσης. Ωστόσο, υΡΑ-ΡΑΙ-1 σύμπλοκα έχουν επίσης αναφερθεί ότι αυξάνει το επίπεδο έκφρασης ΜΜΡ-2 και ΜΜΡ-9 μέσω κατάντη μονοπάτι σηματοδότησης [27], ενώ το σύμπλοκο υΡΑ-ΡΑΙ-2 έχει αποδειχθεί ότι διευκολύνει την κάθαρση της υΡΑ χωρίς ενεργοποίηση κατάντη σηματοδότησης [28]. Επιπλέον, η ΜΜΡ-9 μπορεί να ενισχύσει δραστικότητα υΡΑ ρυθμίζοντας πρωτεάση νεξίνη-1 διάσπασης [29]. Αυτοί οι δείκτες σχηματίζουν ένα πολύπλοκο δίκτυο που ρυθμίζει την ισορροπία της αποικοδόμησης ECM στο μικροπεριβάλλον του όγκου.

Ως εκ τούτου, ο προσδιορισμός των σημαντικότερων δεικτών εντός του δικτύου σηματοδοσίας για προγνωστικούς και θεραπευτικούς απόφαση θα αυξήσει την κλινική αξία. Αντί να εστιάζουν σε ένα μόνο δείκτη, το κύριο ενδιαφέρον μας σε αυτή τη μελέτη ήταν να αξιολογηθεί και να συγκριθεί η προγνωστική αξία των δεικτών στις οικογένειες PA και MMP και να αξιολογήσουν τις συνδυασμένες επιπτώσεις τους. Μετά ανοσοϊστοχημική χρώση των κλινικών μη μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα (NSCLC) δείγματα για τον προσδιορισμό των επιπέδων έκφρασης των συστατικών αυτού του δικτύου, μια προσέγγιση τριών βημάτων χρησιμοποιήθηκε για την ενσωμάτωση των προγνωστικών τιμών των υΡΑ, uPAR, ΡΑΙ-1, PAI- 2, ΜΜΡ-2 και ΜΜΡ-9. Επαληθεύσαμε πρώτα την αντιστοιχία μεταξύ αυτών των δεικτών και 6 στη συνέχεια διεξάγεται μια πολυετή αξιολόγηση δείκτη, σύμφωνα με την οποία εντοπίσαμε ΡΑΙ-2 ως δείκτη με τη μεγαλύτερη προγνωστική αξία και ΜΜΡ-9 ως η δεύτερη πιο ισχυρό προγνωστικό δείκτη. Τέλος, ένα πρακτικό πάνελ IHC αποτελείται από ΡΑΙ-2 και ΜΜΡ-9 δημιουργήθηκε για βελτιωμένη προγνωστική χρησιμότητα.

Υλικά και Μέθοδοι

Δήλωση Ηθικής και ασθενείς

Η μελέτη ήταν πραγματοποιείται με την έγκριση των Institutional Review Boards και με την άδεια από τις επιτροπές δεοντολογίας του οικείου θεσμικού οργάνου (KMUH-IRB-20110286), επιτροπή δεοντολογίας της Kaohsiung Ιατρικού Πανεπιστημίου Chung-Ho Memorial Hospital. Δεν επιγνώσει συναίνεση ήταν αναγκαία διότι τα δεδομένα αναλύθηκαν ανώνυμα. θεραπείες Δεν ασθενών είχαν τροποποιηθεί για τους σκοπούς της παρούσας μελέτης.

Ένα σύνολο των 98 ασθενών με NSCLC, συμπεριλαμβανομένων 61 περιπτώσεις αδενοκαρκινώματος, 31 περιπτώσεις πλακώδες καρκίνωμα, και 6 περιπτώσεις μεγάλων καρκίνωμα, από Kaohsiung Ιατρική Πανεπιστημιακό Νοσοκομείο της Ταϊβάν 1991-2007 ήταν εγγεγραμμένοι ως παράγωγο ομάδα (Πίνακας S1). Όλοι οι ασθενείς έλαβαν τυποποιημένα πρωτόκολλα θεραπείας, σύμφωνα με τις κατευθυντήριες γραμμές του νοσοκομείου. Οι ασθενείς με λειτουργική φάση Ι-ΙΙΙ NSCLC υποβλήθηκαν σε λοβεκτομή ή πνευμονεκτομή με μεσοθωρακίου λεμφαδενεκτομή. Οι ασθενείς με χειρουργικά εξαιρέσιμων σταδίου ΙΙ και ΙΙΙ NSCLC υποβλήθηκαν σε θεραπεία με μετεγχειρητική επικουρική βάση την πλατίνα χημειοθεραπεία. Οι ασθενείς με μη εγχειρήσιμο, τοπικά προχωρημένο ή μεταστατικό νόσο έλαβαν χημειοθεραπεία με ή χωρίς ακτινοθεραπεία. Εκπρόσωπος πυρήνες 1-mm-διαμέτρου από κάθε όγκου με μορφολογικά χαρακτηριστικά που ήταν χαρακτηριστικές της διάγνωσης ελήφθησαν από φορμόλη σταθερά ενσωματωμένα σε παραφίνη ιστό για να δημιουργήσει μια μικροσυστοιχία ιστού (TMA). Η συνολική επιβίωση (OS) και την ελεύθερη νόσου επιβίωση (DFS) ορίστηκαν ως τα χρονικά διαστήματα από τον αρχικό χρόνο θεραπείας μέχρι το θάνατο ή έως την υποτροπή, μετάσταση, ή θάνατο, αντίστοιχα. Όλες οι περιπτώσεις οργανώθηκαν σύμφωνα με την αμερικανική μεικτής επιτροπής σχετικά με το εγχειρίδιο του καρκίνου στάσης, και οι ιστολογικές μορφές καρκίνου έχουν ταξινομηθεί σύμφωνα με τα κριτήρια της κατάταξης της Παγκόσμιας Οργάνωσης Υγείας. Ένα άλλο μη-μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα TMA με 91 περιπτώσεις αγοράστηκε από SuperBioChips (CC5 και CCA4, SuperBioChips Laboratories, Σεούλ, Κορέα) ως ομάδα επικύρωσης (S1 πίνακα).

Η ανοσοϊστοχημική (IHC) χρώση και ερμηνεία

χρώση IHC για υΡΑ, uPAR, ΡΑΙ-1, ΡΑΙ-2, ΜΜΡ-2 και ΜΜΡ-9 διεξήχθη επί σειριακές τομές 5-μικρομέτρων πάχους ιστός κόβεται από το μικροσυστοιχία ιστού (ΤΜΑ). Πριν από χρώση για την TMA της παραγωγή και ομάδα επικύρωσης, δοκιμάσαμε και τιτλοποιηθεί το πρωτογενές αντίσωμα σε μια δοκιμή-TMA το οποίο περιέχει 6 φυσιολογικούς ιστούς των πνευμόνων και 6 NSCLC ιστού. Μια κατάσταση χρώσης που μπορούμε να διακρίνουν την ένταση χρώσης μεταξύ των περιπτώσεων θεωρήθηκε ως κατάλληλη κατάσταση χρώση. Μετά τον προσδιορισμό της κατάστασης χρώση για όλους τους δείκτες, χρώση IHC πραγματοποιήθηκε με τη χρήση ενός αυτοματοποιημένου ανοσοκηλιδωτή (Ventana Discovery ΧΤ Autostainer, Ventana, USA) για υΡΑ, uPAR, ΡΑΙ-1, ΡΑΙ-2 και ΜΜΡ-9. Τα πλακίδια χρωματίστηκαν με αντι ΡΑΙ-1-αντίσωμα πολυκλωνικό κουνελιού (SC-8979, δύο παρα δέκα? Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA), ένα αντι-ΡΑΙ-2 αντίσωμα κουνελιού πολυκλωνικό (16035-1-AP, 1 : 50? Proteintech, Σικάγο, ΗΠΑ), ένα αντι-υΡΑ πολύκλωνο αντίσωμα κουνελιού (SC-14019, 1:50? Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA), ένα αντι-uPAR πολύκλωνο αντίσωμα κουνελιού (GTX100466, 1: 750? GeneTex, Taipei, Ταϊβάν) και ένα αντίσωμα πολυκλωνικό κουνελιού αντι-ΜΜΡ-9 (# 2270, 1:50? Cell Signaling Technology, Danvers, ΜΑ, USA). Εγχειρίδιο χρώση IHC διεξήχθη για ΜΜΡ-2. Εν συντομία, τα πλακίδια υποβλήθηκαν σε θέρμανση προκαλούμενη ανάκτηση αντιγόνου για 10 λεπτά με ρυθμιστικό ϋΑΚΟ ανάκτηση αντιγόνου (ρΗ 6) και επωάστηκε στους 4 ° C όλη τη νύχτα με αντι-ΜΜΡ-2 αντίσωμα κουνελιού πολυκλωνικό (10.373 με 2-ΑΡ, 1: 50? Proteintech, Chicago, USA) και στη συνέχεια οπτικοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας ένα 3, 3′-διαμινοβενζιδίνη (DAB) κιτ υποστρώματος υπεροξειδάσης (Vector Laboratories, USA). Αρνητικός έλεγχος πραγματοποιήθηκε με την αντικατάσταση του πρωτογενούς αντισώματος με ένα πολυκλωνικό IgG κουνελιού ελέγχου ισοτύπου (ab27478, 1: 100? Abcam, Cambridge, UK). (S2 Εικ)

χρώση IHC είχε ανεξάρτητα αναλύθηκε με 2 παθολόγους (Chia -Yi Su και Michael Χσιάο), οι οποίοι δεν γνώριζαν την έκβαση του ασθενούς. Έχουμε προσαρμόσει τις μεθόδους βαθμολόγησης IHC από προηγούμενες μελέτες για τη δημιουργία ενός ενιαίου κριτήρια βαθμολόγησης IHC για όλες τις 6 δείκτες. Όπως και το σύστημα βαθμολόγησης που χρησιμοποιείται από προηγούμενες έρευνες επικεντρώθηκαν στην οικογένεια PA [20] και ΜΜΡ-2 και ΜΜΡ-9 [17], και η κυτταροπλασματική ένταση χρώσης και το ποσοστό (0-100%) των κυττάρων του όγκου χρωματίστηκαν καταγράφηκαν σε παρούσα μελέτη . Η ένταση χρώσης βαθμολογήθηκε χρησιμοποιώντας μια κλίμακα τεσσάρων βαθμίδων: 0, αρνητική? 1+, αδύναμη? 2+, μέτρια? 3+, ισχυρή. Υψηλό επίπεδο έκφρασης IHC ορίστηκε ως η ένταση χρώσης του 2+ ή 3+ σε περισσότερο από το 25% των κυττάρων του όγκου, και οι άλλες περιπτώσεις θεωρείται ότι έχει χαμηλά επίπεδα έκφρασης IHC (S3 Εικ).

Στατιστική ανάλυση

Η στατιστική ανάλυση πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας το λογισμικό SPSS 17.0 (SPSS, USA). Οι συσχετισμοί για το επίπεδο έκφρασης IHC όλων των 6 δείκτες αξιολογήθηκαν χρησιμοποιώντας ανάλυση βαθμό συσχέτισης Spearman του. Τα ποσοστά επιβίωσης υπολογίστηκαν χρησιμοποιώντας την ανάλυση επιβίωσης Kaplan-Meier και μονοπαραγοντική και πολυπαραγοντική παλινδρόμησης Cox αναλύσεις. Για την ανάλυση με πολλαπλές συγκρίσεις, Benjamini και Hochberg ποσοστό εσφαλμένης ανακάλυψη (FDR) διορθωμένου

χρησιμοποιήθηκε P

αξία και το FDR-διορθωμένη

P

τιμή ≤ 0,05 θεωρήθηκε σημαντική [30] . Για την ανάλυση προγνωστικό μοντέλο, ένα πιο πολύπλοκο μοντέλο δημιουργήθηκε με την προσθήκη κάθε διαδοχική δείκτη στην πρώην προγνωστικό μοντέλο για να προσδιοριστεί αν η προστιθέμενη δείκτης βελτίωσε σημαντικά την προγνωστική πρόβλεψη. Η διαφορά μεταξύ των μοντέλων συγκρίθηκε επίσης με την περιοχή κάτω από την καμπύλη (AUC) του ROC (δέκτης λειτουργική χαρακτηριστική) καμπύλη, την ευαισθησία, και ειδικότητα. Για όλες τις αναλύσεις, ένα

P

αξία & lt?. 0,05 θεωρήθηκε ως στατιστικά σημαντική

Αποτελέσματα

Επαλήθευση της συσχέτισης μεταξύ των επιπέδων έκφρασης IHC υΡΑ, uPAR, PAI- 1, ΡΑΙ-2, ΜΜΡ-2 και ΜΜΡ-9 σε NSCLC

Κατ ‘αρχάς, προκειμένου να ελέγξει αν υπάρχουν σημαντικές συσχετίσεις μεταξύ της κατάστασης έκφρασης IHC υΡΑ, uPAR, ΡΑΙ-1, ΡΑΙ-2 , ΜΜΡ-2 και ΜΜΡ-9, ανάλυση rank συσχέτιση Spearman που εκτελέσθηκε σε παραγωγή ομάδα μας. Τα αποτελέσματα προσδιορίζονται σημαντικές συσχετίσεις (

P

& lt? 0,01) μεταξύ των επιπέδων έκφρασης ΡΑΙ-1 και υΡΑ και uPAR IHC (ρ = 0,616 και 0,431, αντίστοιχα), μεταξύ των επιπέδων έκφρασης υΡΑ και uPAR IHC (ρ = 0,571) , μεταξύ ΜΜΡ-9 και υΡΑ και uPAR επίπεδα έκφρασης IHC (ρ = 0,354 και 0,322, αντίστοιχα), καθώς και μεταξύ των ΜΜΡ-2 και υΡΑ IHC επίπεδα έκφρασης (ρ = 0.261). Μια σημαντική αντίστροφη συσχέτιση παρατηρήθηκε μεταξύ των επιπέδων έκφρασης IHC του ΡΑΙ-2 και υΡΑ (ρ = -0,246?

P

= 0.015), και το επίπεδο έκφρασης ΡΑΙ-2 IHC έτειναν επίσης να συσχετίζεται αρνητικά με τα επίπεδα έκφρασης IHC άλλων δεικτών (Πίνακας 1). Οι εικόνες IHC δείχνεται στο Σχήμα 1Α αντιπροσωπεύουν σειριακές τομές του πνεύμονα αδενοκαρκίνωμα με χαμηλή ένταση ΡΑΙ-2 χρώσης και υψηλή ένταση χρώσης των 5 από τους άλλους δείκτες.

Η

(α) έναν εκπρόσωπο του πνεύμονα αδενοκαρκίνωμα με χαμηλό επίπεδο έκφρασης IHC του ΡΑΙ-2 και τα υψηλά επίπεδα έκφρασης IHC του ΡΑΙ-1, υΡΑ, uPAR, ΜΜΡ-2 και ΜΜΡ-9, όπως ανιχνεύεται με IHC. Οι φωτογραφίες ελήφθησαν σε μεγέθυνση 400 ×. Κλίμακα μπάρες αντιπροσωπεύουν 100 μm. (Β) Kaplan-Meier για τη συνολική επιβίωση σε σχέση με το ΡΑΙ-1, ΡΑΙ-2, υΡΑ, uPAR, ΜΜΡ-2, και τα επίπεδα έκφρασης ΜΜΡ-9 IHC σε NSCLC. Χαμηλό επίπεδο έκφρασης IHC του ΡΑΙ-2 ήταν σημαντικά σχετίζεται με μικρότερη συνολική επιβίωση (

P

& lt? 0.001), όπως ήταν τα υψηλά επίπεδα έκφρασης IHC του ΡΑΙ-1, υΡΑ, ΜΜΡ-2 και ΜΜΡ-9 (

P

= 0.015,

P

= 0,031,

P

= 0,041,

P

= 0,037, αντίστοιχα). (C) κατά Kaplan-Meier για της ελεύθερης νόσου επιβίωση σε σχέση με ΡΑΙ-1, ΡΑΙ-2, υΡΑ, uPAR, ΜΜΡ-2, και τα επίπεδα έκφρασης της ΜΜΡ-9 IHC σε NSCLC. Χαμηλό επίπεδο έκφρασης IHC του ΡΑΙ-2 ήταν σημαντικά σχετίζεται με μικρότερη ελεύθερη νόσου επιβίωση (

P

& lt? 0.001)? υψηλά επίπεδα έκφρασης IHC του ΡΑΙ-1, υΡΑ, και MMP-9 και σχετίζεται σημαντικά με μικρότερη επιβίωση ελεύθερη νόσου (

P

= 0.019,

P

= 0,017,

P

= 0,021, αντίστοιχα).

η

Προσδιορισμός του μεγαλύτερου προγνωστική σημασία του ΡΑΙ-2 και ΜΜΡ-9 στους δείκτες της οικογένειας PA και MMP

Για να καθοριστεί το ατομικό προγνωστική δύναμη αυτών των 6 δείκτες, αξιολογήσαμε για πρώτη φορά την συσχέτιση μεταξύ των επιπέδων έκφρασης τους IHC και την έκβαση των ασθενών με ανάλυση επιβίωσης Kaplan-Meier στην ομάδα παραγωγή. επίπεδο έκφρασης χαμηλή ΡΑΙ-2 IHC συσχετίστηκε σημαντικά με κακή πρόγνωση (

P

& lt? 0,001 τόσο για τη συνολική επιβίωση (OS) και την ελεύθερη νόσου επιβίωση (DFS)) (εικ 1Β και 1C). Υψηλό επίπεδο έκφρασης IHC του ΡΑΙ-1, υΡΑ, και ΜΜΡ-9 συσχετίζεται επίσης με κακή πρόγνωση. IHC επίπεδο έκφρασης υψηλής MMP-2 σχετίζεται με μια δυσμενή OS, αλλά δεν συνδέθηκε με DFS. Το επίπεδο έκφρασης του uPAR IHC δεν συσχετιζόταν με είτε OS ή DFS. Εκτός αυτού, μέσω κλινικοπαθολογοανατομικές ανάλυση, μια σημαντική συσχέτιση μεταξύ του χαμηλού επιπέδου έκφρασης IHC ΡΑΙ-2 και υψηλότερα παθολογική στάδιο (

P

= 0.027) βρέθηκε (S1 πίνακα και S4 σχήμα). Αντιθέτως, υψηλά επίπεδα έκφρασης IHC άλλων δεικτών έτειναν να έχουν μια συσχέτιση με υψηλότερα παθολογική στάδιο. Οι συσχετίσεις μεταξύ κάθε δείκτη και άλλων κλινικοπαθολογικών χαρακτηριστικά συνοψίζονται στον Πίνακα S1.

Λόγω της σημαντικής συσχέτιση μεταξύ κάθε δείκτη στην ανάλυση συσχέτισης, μια πολυπαραγοντική ανάλυση διεξήχθη για να προσδιοριστεί η αντίστοιχη προγνωστική ρόλους τους (Πίνακας 2). Για DFS, χαμηλό IHC επίπεδο έκφρασης ΡΑΙ-2 (αναλογία κινδύνου [HR] = 2,30? 95% διάστημα εμπιστοσύνης [CI] = 1,40 – 3,79?

P

= 0,001), υψηλό επίπεδο έκφρασης της ΜΜΡ-9 IHC ( HR = 2,09? 95% CI = 1,13 – 3,88?

P

= 0,019), καθώς και ένα υψηλότερο παθολογικό στάδιο (HR = 3,44? 95% CI = 2,03 – 5,84?

P

& lt? 0.001) παρέμεινε ανεξάρτητα σχετίζεται με δυσμενή πρόγνωση. Όσον αφορά OS, μόνο επίπεδο έκφρασης ΡΑΙ-2 IHC (HR = 2,52? 95% CI = 1,50 – 4,22?

P

& lt? 0.001) και παθολογικές στάδιο (HR = 4,14? 95% CI = 2.39- 7,16?

P

& lt? 0.001) διατήρησε σημαντική επιρροή. Μετά από ψευδείς αποκοπή διόρθωση ανακάλυψη για πολλαπλές δοκιμές, ΡΑΙ-2 (

P

= 0,01) και MMP-9 (

P

= 0.05) είχε ακόμη προγνωστική σημασία στο DFS. Αυτά τα αποτελέσματα έδειξαν ότι ΡΑΙ-2 έχει την ηγετική προγνωστική αξία και MMP-9 είναι το δεύτερο πιο σημαντικό προγνωστικό δείκτη μεταξύ πολλών δεικτών στις οικογένειες PA και MMP.

Η

Δημιουργία ενός πίνακα IHC περιλαμβάνει ΡΑΙ-2 και ΜΜΡ-9 για ακριβέστερη προγνωστική πρόβλεψη σε ασθενείς με NSCLC

Με βάση τα αποτελέσματα ότι ΡΑΙ-2 είχε τη μεγαλύτερη προγνωστική αξία και ότι η ΜΜΡ-9 ήταν το δεύτερο ισχυρότερο προγνωστικό δείκτη στην πολυμεταβλητή ανάλυση, ένας προγνωστικός ανάλυση μοντέλο, ανάλυση επιβίωσης, και η καμπύλη ROC για τον έλεγχο της περιοχής κάτω από την καμπύλη (AUC), την ευαισθησία, την εξειδίκευση και διεξήχθησαν για να εξεταστεί η καταλληλότητα του συνδυασμού ΡΑΙ-2 και ΜΜΡ-9 ως πίνακας IHC. Στην ανάλυση προγνωστικό μοντέλο (S3 πίνακας), προσθέτοντας ΡΑΙ-2 και ΜΜΡ-9 με την παθολογική μεταβλητή στάδιο είχε ως αποτέλεσμα την υψηλότερη προγνωστική ισχύ για DFS, ακόμη προσθέτοντας περισσότεροι δείκτες δεν βελτίωσε περαιτέρω την προβλεπτική ικανότητα. Μέσω συνδυασμού ΡΑΙ-2 και ΜΜΡ-9 ως πίνακας IHC, οι ασθενείς θα μπορούσαν να διαχωριστούν σε τρεις ομάδες. Οι ασθενείς με υψηλό ΡΑΙ-2 και τα χαμηλά επίπεδα έκφρασης ΜΜΡ-9 είχε την πιο ευνοϊκή πρόγνωση, και οι ασθενείς με χαμηλά ΡΑΙ-2 και τα υψηλά επίπεδα έκφρασης ΜΜΡ-9 είχε την πιο δυσμενή πρόγνωση (

P

& lt? 0,001 για τόσο OS και DFS) (Σχήμα 2Α). Στην καμπύλη ROC, αύξηση της περιοχής κάτω από την καμπύλη (AUC) παρατηρήθηκε σε ελεύθερη νόσου επιβίωση μετά τον συνδυασμό ΡΑΙ-2 και ΜΜΡ-9 ως ένα πάνελ (σχήμα 2Α και S4 Πίνακα). Ο χάρτης θερμότητας εμφανίζονται τα επίπεδα έκφρασης IHC του ΡΑΙ-2 και ΜΜΡ-9 σε μεμονωμένους ασθενείς συγκεντρωμένοι από το καθεστώς τελικού σημείου επιβίωσης (Σχήμα 2Α). Οι ασθενείς που ήταν νεκρά κατά την τελικό σημείο έτειναν να έχουν χαμηλή ΡΑΙ-2 και τα υψηλά επίπεδα έκφρασης IHC ΜΜΡ-9. Επιπλέον, η σωρευτική επίδραση προγνωστική του ΡΑΙ-2 και ΜΜΡ-9 ερευνήθηκε επίσης. Σε σύγκριση με την πιο ευνοϊκή προγνωστική ομάδα (υψηλά χαμηλά επίπεδα έκφρασης της ΜΜΡ-9 IHC ΡΑΙ-2 και), η πιο αρνητική προγνωστική ομάδα (χαμηλά υψηλά επίπεδα έκφρασης της ΜΜΡ-9 IHC ΡΑΙ-2 και) έδειξε 6.40 φορές (95% CI = 2,64 έως 15,52?

P

& lt? 0.001) αυξημένος κίνδυνος κακή πρόγνωση μετά από προσαρμογή για παθολογικές στάδιο (Πίνακας 3). Σχήμα 2Β δείχνουν αντιπροσωπευτικά παραδείγματα της χρήσης του πάνελ ΡΑΙ-2 και ΜΜΡ-9 σε δείγματα IHC NSCLC. Ασθενής 1, που είχα αδενοκαρκίνωμα σκηνή με υψηλή ΡΑΙ-2 και τα χαμηλά επίπεδα έκφρασης της ΜΜΡ-9 IHC, ήταν ζωντανός στην τελική παρακολούθηση. Σε αντίθεση, ο ασθενής 2 είχε αδενοκαρκίνωμα σταδίου IV με χαμηλή ΡΑΙ-2 και τα υψηλά επίπεδα έκφρασης IHC MMP-9 και πέθανε δύο μήνες μετά τη θεραπεία άρχισε. Ασθενής 3 και ο ασθενής 4 ήταν τόσο διαγνωστεί με αδενοκαρκίνωμα σταδίου ΙΙΙ. Ασθενής 3 είχε υψηλή ΡΑΙ-2 και τα χαμηλά επίπεδα έκφρασης IHC ΜΜΡ-9 και ήταν ζωντανός και δεν είχε υποτροπή του όγκου στην τελική παρακολούθηση. Σε αντίθεση, ο ασθενής 4, ο οποίος είχε χαμηλή ΡΑΙ-2 και τα υψηλά επίπεδα έκφρασης της ΜΜΡ-9 IHC, έμπειρο επανεμφάνιση του όγκου μέσα σε 9 μήνες και πέθανε 14 μήνες μετά τη θεραπεία άρχισε.

(Α) οικόπεδα Kaplan-Meier και ROC καμπύλη της συνολικής επιβίωσης και ελεύθερη νόσου επιβίωση για το συνδυασμό της ΡΑΙ-2 και MMP-9 ως πίνακα IHC. Οι ασθενείς με υψηλό ΡΑΙ-2 και τα χαμηλά επίπεδα έκφρασης της ΜΜΡ-9 IHC είχε την πιο ευνοϊκή πρόγνωση, ενώ οι ασθενείς με χαμηλή ΡΑΙ-2 και τα υψηλά επίπεδα έκφρασης της ΜΜΡ-9 IHC είχε την πιο δυσμενή πρόγνωση (

P

& lt? 0,001 και για τις δύο OS και DFS). Αύξηση της περιοχής κάτω από την καμπύλη (AUC) του ROC παρατηρήθηκε μετά συνδυάζοντας ΡΑΙ-2 και ΜΜΡ-9 σε ομάδα, ελεύθερη νόσου επιβίωση. Στο χάρτη της θερμότητας συγκεντρωμένα από την κατάσταση επιβίωσης τελικού σημείου, οι ασθενείς που ήταν νεκροί στο τελικό σημείο έτειναν να έχουν χαμηλή ΡΑΙ-2 και το υψηλό επίπεδο έκφρασης της ΜΜΡ-9 IHC. (Β) Αντιπροσωπευτικές εικόνες της χρήσης του ΡΑΙ-2 και ΜΜΡ-9 πάνελ IHC σε κλινικά δείγματα NSCLC. Ασθενής 1 είχε αδενοκαρκίνωμα σταδίου Ι με υψηλή ΡΑΙ-2 και τα χαμηλά επίπεδα έκφρασης IHC MMP-9 και ήταν ζωντανός στην τελική παρακολούθηση. Σε αντίθεση, ο ασθενής 2 είχε αδενοκαρκίνωμα σταδίου IV με χαμηλή ΡΑΙ-2 και τα υψηλά επίπεδα έκφρασης IHC MMP-9 και πέθανε δύο μήνες μετά τη θεραπεία άρχισε. Οι ασθενείς 3 και 4 και οι δύο διαγνωστεί με αδενοκαρκίνωμα σταδίου ΙΙΙ. Ασθενής 3, οι οποίοι είχαν υψηλή ΡΑΙ-2 και τα χαμηλά επίπεδα έκφρασης της ΜΜΡ-9 IHC, ήταν ζωντανός και δεν είχε καμία επανεμφάνιση του όγκου στο στάδιο της τελικής παρακολούθηση? ασθενής 4, ο οποίος είχε χαμηλή ΡΑΙ-2 και τα υψηλά επίπεδα έκφρασης της ΜΜΡ-9 IHC, έμπειρο επανεμφάνιση του όγκου μέσα σε 9 μήνες και πέθανε 14 μήνες μετά τη θεραπεία άρχισε. Οι φωτογραφίες ελήφθησαν σε μεγέθυνση 400 ×. Κλίμακα μπάρες αντιπροσωπεύουν 100 μm. (C) οικόπεδα Kaplan-Meier και η καμπύλη ROC της συνολικής επιβίωσης στην ομάδα επικύρωσης έδειξε ότι οι ασθενείς με χαμηλά επίπεδα έκφρασης ΡΑΙ-2 IHC (

P

= 0,002) ή υψηλό επίπεδο έκφρασης της ΜΜΡ-9 IHC (

P

= 0.035) είχαν κακή συνολική επιβίωση. Όταν στρωματοποιημένη κατά ΡΑΙ-2 και ΜΜΡ-9 πάνελ IHC, οι ασθενείς της ομάδας υψηλού κινδύνου είχαν χαμηλή ΡΑΙ-2 και τα υψηλά επίπεδα έκφρασης της ΜΜΡ-9 IHC και ασθενείς χαμηλού ομάδα κινδύνου είχαν υψηλή ΡΑΙ-2 και το χαμηλό επίπεδο έκφρασης της ΜΜΡ-9 IHC (

P

& lt? 0.001). Αύξηση της περιοχής κάτω από την καμπύλη (AUC) του ROC παρατηρήθηκε μετά συνδυάζοντας ΡΑΙ-2 και ΜΜΡ-9 ως ένα πάνελ. Ο χάρτης θερμότητας έδειξε ότι οι ασθενείς που είχαν πεθάνει στο τελικό σημείο έτειναν να έχουν χαμηλή ΡΑΙ-2 και το υψηλό επίπεδο έκφρασης της ΜΜΡ-9 IHC.

Η

Επιβεβαίωση της προγνωστική αξία της IHC πίνακας περιλαμβάνει ΡΑΙ-2 και ΜΜΡ-9 σε επικύρωση ομάδα

Για να επικυρώσετε την προγνωστική δύναμη του πίνακα IHC περιλαμβάνει ΡΑΙ-2 και ΜΜΡ-9 ανακαλύφθηκε στην παραγωγή ομάδα μας, πραγματοποιήσαμε περαιτέρω την ανάλυση επιβίωσης και ROC ανάλυση καμπύλης σε μία ομάδα επικύρωσης με 91 ασθενείς με NSCLC. Στην ανάλυση επιβίωσης Kaplan-Meier, οι ασθενείς με επίπεδο έκφρασης IHC χαμηλής ΡΑΙ-2 είχε κακή πρόγνωση, και οι ασθενείς με υψηλό επίπεδο έκφρασης IHC ΜΜΡ-9 είχε μια κακή πρόγνωση (Σχήμα 2C). Κατά το συνδυασμό ΡΑΙ-2 και ΜΜΡ-9 ως πίνακας IHC, ασθενείς με υψηλά ΡΑΙ-2 και τα χαμηλά επίπεδα έκφρασης ΜΜΡ-9 IHC είχε την καλύτερη πρόγνωση, και οι ασθενείς με χαμηλά ΡΑΙ-2 και τα υψηλά επίπεδα έκφρασης ΜΜΡ-9 IHC είχε την χειρότερο αποτέλεσμα (

P

= 0,001). Αύξηση της περιοχής κάτω από την καμπύλη (AUC) του ROC Σημειώθηκε επίσης μετά τον συνδυασμό ΡΑΙ-2 και ΜΜΡ-9 ως ένα πάνελ (Σχ 2C και S4 Πίνακα). Όπως φαίνεται στον χάρτη θερμότητας (Σχήμα 2C), οι ασθενείς που ήταν νεκρά κατά την τελικό σημείο έτειναν να έχουν χαμηλή ΡΑΙ-2 και τα υψηλά επίπεδα έκφρασης IHC ΜΜΡ-9. Ως εκ τούτου, ο ΡΑΙ-2 και ΜΜΡ-9 IHC πάνελ εντοπίσαμε από δείκτες των οικογενειών ΡΑ και ΜΜΡ θα μπορούσαν να χρησιμοποιούνται για τη διαστρωμάτωση των ασθενών με καρκίνο του πνεύμονα από τον κίνδυνο και την επιλογή ασθενών για πιο επιθετική θεραπεία.

Συζήτηση

για τις γνώσεις μας, αυτή είναι η πρώτη μελέτη για την ενσωμάτωση των οικογενειών PA και MMP χρησιμοποιώντας ανάλυση IHC στον καρκίνο του πνεύμονα. Παρέχουμε μια νέα αντίληψη ότι ΡΑΙ-2 είναι το πιο ισχυρό προγνωστικό δείκτη για τους δείκτες στις οικογένειες PA και ΜΜΡ και, το πιο σημαντικό, ΡΑΙ-2 παρέμεινε κορυφαία προγνωστική της ρόλο, ακόμη και μετά τη λήψη στενή σχέση της με άλλες οικογενειακές δείκτες PA και MMP υπόψη . Η έρευνα σχετικά με τα δύο οικογένειες PA και MMP αποκάλυψε ότι είναι ένα κατάλληλο μοντέλο για την εξέταση προγνωστική αξία από αξιολόγηση πολλαπλών δείκτη (Πίνακας S5) [26-29]. Όσον αφορά το επίπεδο της διασύνδεσης σηματοδοτικό μονοπάτι, μια πρόσφατη μελέτη παρέχει πληροφορίες σχετικά με τις αντίστοιχες συνεισφορές του κάθε μέλους της οικογένειας PA σε επιθηλιακά κύτταρα των αεραγωγών [31]. Δεσμευμένο σε μεμβράνη uPAR (muPAR) θεωρείται το βασικό μόριο, διότι είναι το μόνο μέλος της οικογένειας ΠΑ φαίνεται να επιταχύνει τη μετανάστευση των κυττάρων

in vitro

. Σε σύγκριση, τα δεδομένα μας IHC δεν έδειξαν συσχέτιση μεταξύ του επιπέδου έκφρασης uPAR IHC και την πρόγνωση των ασθενών. Η διαφορά αυτή μπορεί να προκύψει από διάφορους παράγοντες. Πρώτον, ο περιορισμός της προηγούμενης μελέτης ήταν ότι η υπερέκφραση του κάθε δείκτη δεν μπορεί να μιμηθεί με ακρίβεια το συντονισμένο δίκτυο σηματοδότησης

in vivo

[31]. Παρά το γεγονός ότι τα δεδομένα μας δεν μπορεί να είναι σε θέση να αποδείξει τη σχέση αιτίου και αιτιατού μεταξύ αυτών των δεικτών, που αντανακλούν άμεσα την προγνωστική ρόλο του κάθε δείκτη στην κλινική ασθενείς στους οποίους οι εν λόγω δείκτες συνεκφράζονται και αλληλεπιδρούν μεταξύ τους. Επιπλέον, η έκφραση του ECM ενζύμων αποικοδόμησης που σχετίζονται, όπως οι οικογένειες ΡΑ και ΜΜΡ, μπορεί επίσης να ρυθμίζεται από κύτταρα που σχετίζονται με όγκους στρωματικών [32]. Χρησιμοποιώντας μια μικροσυστοιχία ιστού (ΤΜΑ), αποδείξαμε την προγνωστική αξία αυτών των δεικτών με την εξέταση τόσο τα καρκινικά κύτταρα και το μικροπεριβάλλον τους. Ανίχνευση PA οικογένεια δείκτες επιπέδου από εκχύλιση των ιστών με ένζυμο-συνδεδεμένη ανοσορροφητική δοκιμασία (ELISA) επίσης μια συχνά χρησιμοποιούμενη μέθοδος για την ανάλυση τους ρόλους τους στον καρκίνο του πνεύμονα (S6 Πίνακας) [33-37]. Παρά το γεγονός ότι ELISA θα μπορούσαν με μεγαλύτερη ακρίβεια την ποσοτικοποίηση των επιπέδων έκφρασης αυτών των δεικτών, τα δείγματα όγκου δεν μπορεί να αποτελείται εξ ολοκλήρου από ιστό του όγκου οφείλεται στο ότι δεν είναι σε θέση να δουν τη μορφολογία του ιστού. Σε αντίθεση, IHC ανάλυσης που χρησιμοποιούνται στην παρούσα μελέτη θα μπορούσε πιο αποφύγετε αυτόν τον περιορισμό με την παρατηρήσουμε άμεσα την έκφραση in situ. Αυτό μπορεί να εξηγήσει ότι η προγνωστική σημασία των δεικτών οικογένεια ΡΑ δεν παρατηρήθηκε σε προηγούμενη μελέτη χρησιμοποιώντας ELISA [33], αλλά παρατηρήθηκε στη μελέτη μας, χρησιμοποιώντας ανάλυση IHC. Ως εκ τούτου, τα αποτελέσματά μας παρέχουν μια συμπληρωματική εικόνα των ρόλων των μελών της οικογένειας PA και MMP στον καρκίνο του πνεύμονα.

Τα στοιχεία μας αποκαλύπτουν ότι ΡΑΙ-2 παίζει ηγετικό ρόλο στην ΡΑΙ-1, ΡΑΙ-2, υΡΑ, uPAR , ΜΜΡ-2 και ΜΜΡ-9. Ωστόσο, λίγες μελέτες έχουν εστιάσει στην παθοφυσιολογική λειτουργία του ΡΑΙ-2 σε καρκίνο. ΡΑΙ-2 υπερέκφραση αναφέρθηκε για τη μείωση μετάσταση σε μοντέλα ξένου μοσχεύματος και να μειώσει το επίπεδο των υΡΑ και της μετανάστευσης

in vitro

[38,39]. Έχει πρόσφατα αποδειχθεί ότι η χαμηλή συγγένεια σύνδεσης του ΡΑΙ-2 για ενδοκυτταρικά υποδοχείς διευκολύνει την κάθαρση του υΡΑ χωρίς επίκλησης γεγονότα κατάντη σηματοδότησης, παρέχοντας μια πιθανή εξήγηση για την ανασταλτική ρόλο του ΡΑΙ-2 σε πρόοδο του καρκίνου [28,40]. Η φυσιολογική λειτουργία του ΡΑΙ-2 μπορεί να παρέχουν περαιτέρω ενδείξεις σχετικά με το ρόλο της στην εξέλιξη του καρκίνου. Ως μια πρωτεΐνη που εκφράζεται σε κατάσταση στρες, όπως η φλεγμονή και μόλυνση [41], αυξημένο επίπεδο ΡΑΙ-2 στο πλάσμα βρέθηκε σε ασθενείς με σήψη ή λευχαιμία, και το επίπεδο έκφρασης αυξήθηκε κατά τη διάρκεια της δραστικής ή υποτροπή της νόσου και ήταν μη ανιχνεύσιμη σε ύφεση [42, 43]. Στην παρούσα μελέτη, αναλύσαμε επίσης το επίπεδο πλάσματος ΡΑΙ-2 σε NSCLC ασθενείς με καρκίνο του πνεύμονα μέσω ELISA (S5 σχήμα). Το εύρημα έδειξαν αυξημένα επίπεδα ΡΑΙ-2 στο πλάσμα σε ασθενείς με καρκίνο του πνεύμονα σε σύγκριση με το φυσιολογικό έλεγχο. Είναι ενδιαφέρον ότι, μια πρόσφατη έρευνα έδειξε ότι ΡΑΙ-2, η οποία είναι ικανή να αναστείλει υΡΑ μεσολάβηση μετανάστευση των καρκινικών κυττάρων και εισβολή εκκρίνεται από την ίδια καρκινικά κύτταρα σε μικροσωματίδια, όχι από κύτταρα-ξενιστές [44]. Στο σύνολό τους, ένας μηχανισμός μπορεί να προταθεί ότι το αυξημένο επίπεδο ΡΑΙ-2 στο πλάσμα σε ασθενείς με καρκίνο του πνεύμονα αντανακλά ΡΑΙ-2 θετικά μικροσωματιδίων σε κυκλοφορία που εκκρίνονται από τα καρκινικά κύτταρα. Και περαιτέρω έρευνα είναι σαφώς απαιτείται για να προσδιοριστεί αν το επίπεδο του ΡΑΙ-2 στο πλάσμα θα μπορούσε να χρησιμοποιηθεί ως υποκατάστατο για την κατάσταση της νόσου σε ασθενείς με καρκίνο του πνεύμονα.

Αν και ο λειτουργικός ρόλος του ΡΑΙ-2 μένει να κατανοηθεί πλήρως, με τη λήψη πλεονέκτημα της ανασταλτικής λειτουργίας του, ΡΑΙ-2 έχει διερευνηθεί ως φορέας στόχευσης υΡΑ σε στοχευμένες άλφα ραδιοανοσοθεραπεία για διάφορους τύπους καρκίνου [45]. Στη μελέτη μας, η αξιολόγηση του επιπέδου έκφρασης των μελών της οικογένειας PA και MMP με ανάλυση IHC έδειξαν παρέχεται μια πιθανή μέθοδο για να επιλέξετε ασθενείς με υψηλό υΡΑ επίπεδο έκφρασης και το επίπεδο έκφρασης χαμηλή ΡΑΙ-2, οι οποίοι μπορούν να λάβουν ένα μεγαλύτερο όφελος από ΡΑΙ-2- στοχευμένη θεραπεία. Επιπλέον, η αποτυχία του ευρέος φάσματος αναστολείς ΜΜΡ σε κλινικές δοκιμές της θεραπείας του καρκίνου έχει οδηγήσει στην ανάπτυξη εκλεκτικών αναστολέων ΜΜΡ [46], και οι αναστολείς που στοχεύουν ΜΜΡ-9 έχουν καταδειχθεί ως πιθανές θεραπείες για τον καρκίνο [47]. Κατά συνέπεια, η κλινική χρησιμότητα του ΡΑΙ-2 και ΜΜΡ-9 ως προγνωστικοί δείκτες προσδιορίζονται στη μελέτη μας προτείνει περαιτέρω το δυναμικό τους για θεραπευτική εφαρμογή σε NSCLC.

Συμπερασματικά, λαμβάνοντας υπόψη δείκτες από τις οικογένειες πρωτεάσης ΡΑ και ΜΜΡ η οποία είναι κρίσιμη στη ρύθμιση της προόδου των όγκων, η μελέτη μας αποκαλύπτει τη μεγαλύτερη προγνωστική σημασία του ΡΑΙ-2 μεταξύ των υΡΑ, uPAR, ΡΑΙ-1 και ΡΑΙ-2 στην οικογένεια ΡΑ και ΜΜΡ-2 και ΜΜΡ-9 στην οικογένεια των ΜΜΡ. Με προτεραιότητα την προγνωστική δύναμη του κάθε δείκτη, δημιουργήσαμε ένα πάνελ IHC αποτελείται από ΡΑΙ-2 και ΜΜΡ-9, το οποίο παρέχει μεγαλύτερη προγνωστική αξία από την παθολογική στάδιο ή ένα μόνο δείκτη μόνον. Ενσωμάτωση των προγνωστικών τιμών των δεικτών από τις οικογένειές πρωτεάσης καθορίζεται στην παρούσα μελέτη θα επιτρέψει την εφαρμογή τους στο κλινικό περιβάλλον για την πρόβλεψη της έκβασης των ασθενών και τον καθορισμό κατεύθυνσης της θεραπείας στον καρκίνο του πνεύμονα.

Υποστήριξη Πληροφορίες

S1 Υλικά και μεθόδους. επίπεδα του ΡΑΙ-2 και ΜΜΡ-9 ELISAs.

πλάσμα ανιχνεύθηκαν από εμπορικές ΡΑΙ-2 (LS-F5568, διάρκεια ζωής Biosciences, USA) και ΜΜΡ-9 (ab100610, Abcam, Cambridge, UK) κιτ ELISA. Τα δείγματα των 36 ασθενών με NSCLC και 6 φυσιολογικών μαρτύρων πλάσματος ελήφθησαν από Kaohsiung Ιατρικό Πανεπιστημιακό Νοσοκομείο της Ταϊβάν

doi:. 10.1371 /journal.pone.0133411.s001

(DOCX)

S1 Εικ. Η οικογένεια ΡΑ και την οικογένεια των ΜΜΡ αλληλεπιδρούν μεταξύ τους και σχηματίζουν ένα πολύπλοκο δίκτυο που ρυθμίζει αποικοδόμηση ECM.

(Α και Β) Τόσο ΡΑΙ-1 και ΡΑΙ-2 αναστέλλουν την πρωτεολυτική ικανότητα των υΡΑ και με τη σειρά αναστέλλουν το σχηματισμό της πλασμίνης , το οποίο μπορεί να υποβαθμίσει την ECM μόνο του ή μέσω της ενεργοποίησης της ΜΜΡ-2 και ΜΜΡ-9. Επιπλέον, η ΜΜΡ-9 μπορεί να ενισχύσει δραστικότητα υΡΑ, υποβαθμίζοντας πρωτεάση νεξίνη-1. (Α) Το σύμπλεγμα υΡΑ-ΡΑΙ-1 μπορεί να αυξήσει περαιτέρω την έκφραση των ΜΜΡ-2 και ΜΜΡ-9 μέσω κατάντη σηματοδότησης. (Β) Ωστόσο, η UPA-ΡΑΙ-2 συγκρότημα διευκολύνει την εκκαθάριση των υΡΑ χωρίς να αυξάνεται MMP-2 και MMP-9 έκφρασης μέσω κατάντη σηματοδότησης

doi:. 10.1371 /journal.pone.0133411.s002

(ΔΕΘ )

S2 Εικ.