Αφηρημένο

Νεφρική καρκίνωμα του ασθενούς (RCC) είναι η πιο θανατηφόρα από ουρολογικές κακοήθειες . Μεταστατική νόσος επηρεάζει το ένα τρίτο των ασθενών κατά τη διάγνωση με μια περαιτέρω τρίτη ανάπτυξη μεταστατικής νόσου μετά extirpative χειρουργική επέμβαση. Ετερογένεια στην κλινική πορεία εξασφαλίζει την πρόβλεψη μετάσταση είναι εξαιρετικά δύσκολη, παρά τη συνήθη χρήση των προγνωστικών κλινικο-παθολογικών παραμέτρων σε διαστρωμάτωση κινδύνου. Με μεγαλύτερη κατανόηση των οδών που εμπλέκονται στην παθογένεση της νόσου, ένας αριθμός βιολογικών δεικτών έχουν δείξει να έχουν προγνωστική σημασία, συμπεριλαμβανομένων Ki67, p53, υποδοχέας του αγγειακού ενδοθηλιακού αυξητικού παράγοντα 1 (VEGFR1) και πρόσδεμα D (VEGFD), σαλιγκάρι και γυμνοσάλιαγκα. Προηγούμενη ανάλυση οδός υπήρξε από μελέτη του πρωτογενούς όγκου, με λίγη προσοχή στα μεταστατικών όγκων που αποτελούν το επίκεντρο της μοριακής στοχευμένων θεραπειών. Ως εκ τούτου, σε αυτή τη μελέτη ενός μικροσυστοιχιών ιστό από 177 ασθενείς με πρωτοπαθή νεφρική όγκου, νεφρική θρόμβου φλέβα του όγκου και /ή μετάστασης RCC έχει δημιουργηθεί και χρησιμοποιηθεί με αυτοματοποιημένο Ποσοτικής Ανάλυσης (AQUA) του ανοσοφθορισμού για να μελετήσει την προγνωστική σημασία αυτών των δεικτών σε τοπικό επίπεδο προχωρημένη και μεταστατική νόσο. Επιπλέον, αυτή η επέτρεψε αξιολόγηση της διαφορικής έκφρασης πρωτεϊνών μεταξύ των πρωτογενών όγκων, η νεφρική φλέβα θρόμβους του όγκου και των μεταστάσεων. Τα αποτελέσματα δείχνουν ότι κλινικο-παθολογική παράμετροι παραμένουν οι πιο σημαντικοί προγνωστικοί καρκίνου ειδικών επιβίωση? Ωστόσο, η υψηλή VEGFR1 ή VEGFD μπορεί να προβλέψει κακή καρκίνο συγκεκριμένες επιβίωσης για μονοπαραγοντική ανάλυση για τοπικά προχωρημένη και μεταστατική νόσο. Υπήρχε σημαντικά μεγαλύτερη έκφραση της Ki67, p53, VEGFR1, Slug και ΣΑΛΙΓΚΆΡΙ στις μεταστάσεις σε σχέση με τις πρωτογενείς όγκους και νεφρική θρόμβων φλέβα όγκου. Με την εξαίρεση της ρ53, αυτές οι διαφορές στην έκφραση της πρωτεΐνης δεν έχει δειχθεί προηγουμένως σε RCC. Αυτό επιβεβαιώνει τη σημασία του πολλαπλασιασμού, της αγγειογένεσης και επιθηλιακών να μεσεγχυματικά μετάβαση στην παθογένεση και τη μετάσταση του RCC. Είναι σημαντικό, το έργο αυτό αναδεικνύει την ανάγκη για περαιτέρω ανάλυση μονοπατιού των μεταστατικών όγκων για την υπέρβαση της αντίστασης στα φάρμακα και την ανάπτυξη νέων θεραπειών

Παράθεση:. Laird Α, O’Mahony FC, Nanda J, Riddick ΑΚΕ, O’Donnell Μ, Harrison DJ, et al. (2013) διαφορική έκφραση των προγνωστικών πρωτεομικής Μαρκαδόροι στην Πρωτοβάθμια όγκου, Φλεβική όγκου θρόμβου και Μεταστατικό νεφρικό ιστό Cancer Cell και Συσχέτιση με τα αποτελέσματα των ασθενών. PLoS ONE 8 (4): e60483. doi: 10.1371 /journal.pone.0060483

Επιμέλεια: Bin He, Baylor College of Medicine, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 31 Δεκ του 2012? Αποδεκτές: 26 Φεβρουαρίου 2013? Δημοσιεύθηκε: 5η του Απριλίου 2013

Copyright: © 2013 Laird et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Το έργο του συγγραφέα AL χρηματοδοτείται από το βασιλικό Κολέγιο Χειρουργών της εμπιστοσύνης του Εδιμβούργου Ρόμπερτσον, The Melville εμπιστοσύνη για τη φροντίδα και τη θεραπεία του καρκίνου και του Συμβουλίου Ιατρικής Έρευνας της Σκωτίας Κλινική Φαρμακολογία και το πρόγραμμα Παθολογία. Το έργο των δημιουργών FCO, JN, ACPR, DJH και GDS που αναφέρονται παραπάνω χρηματοδοτείται από τον επικεφαλής επιστήμονας του Office, χορηγεί αριθμό ETM37, και υποστηρίζεται από Chief Scientist Χρηματοδοτείται Επιστημών της Σκωτίας και της Υγείας Cancer Research UK Πειραματικό Cancer Medicine Centre. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

καρκίνο νεφρών (RCC) αντιπροσωπεύει το 2,5% όλων των ενήλικων μορφών καρκίνου, αλλά είναι η πιο θανατηφόρα όλων των ουρολογικών κακοηθειών. Το ένα τρίτο των ασθενών RCC παρούσης με μεταστατική νόσο (mRCC). Ενώ extirpative χειρουργική προορίζεται να είναι θεραπευτική σε εκείνους με εντοπισμένη νόσο, ένα επιπλέον 30-40% αναπτύσσει τελικά απομακρυσμένες μεταστάσεις [1], [2], [3]. Προς το παρόν, δεν μπορούμε να προβλέψουμε με ακρίβεια τους ασθενείς οι οποίοι θα υποτροπιάζουν, λόγω της εξαιρετικά μεταβλητή φυσική ιστορία της νόσου.

Μετά την χειρουργική επέμβαση, ένας αριθμός των προγνωστικών νομογράμματα έχουν προταθεί για την πρόβλεψη υποτροπή της νόσου. Αυτές συνήθως περιλαμβάνουν TNM στάσης και βαθμού Fuhrman καθώς και δείκτες αίμα κατάσταση απόδοσης και ορού (αιμοσφαιρίνη, ασβέστιο, γαλακτική αφυδρογονάση, τα αιμοπετάλια, τα ουδετερόφιλα και τα C-αντιδρώσα πρωτεΐνη), σε μεγαλύτερο ή μικρότερο βαθμό [4], [5], [6 ], [7]. Αυτές οι μεταβλητές κλινικο-παθολογικές χρησιμοποιείται ευρέως στην κλινική πρακτική για την στρωματοποίηση του κινδύνου υποτροπής και τον προγραμματισμό συνέχειας. Παρά το γεγονός αυτό, κανένα από αυτά τα μοντέλα είναι 100% ακριβείς. Σε μία προσπάθεια να βελτιωθεί η διαστρωμάτωση του κινδύνου του ασθενούς, και την καλύτερη πρόβλεψη υποτροπής της νόσου και σχετίζεται θνησιμότητα, πολλοί έχουν ερευνήσει το ρόλο των προγνωστικών βιοδεικτών [8], [9]. Οι δείκτες EMT, Slug και σαλιγκαριών, έχει αναφερθεί ότι έχουν προβλεπτική και προγνωστική σημασία σε RCC [10], [11]. Ωστόσο, κυρίως, Klatte

et al

διεξήγαγε μια κομψή μελέτη των βασικών πρωτεϊνών στο RCC παθογένεια χρησιμοποιώντας την τεχνική TMA να δείξει Ki67, p53, αγγειακό υποδοχέα ενδοθηλιακού αυξητικού παράγοντα 1 (VEGFR1) και του αγγειακού ενδοθηλιακού αυξητικού παράγοντα συνδέτη D (VEGFD) συσχετίστηκαν με τη νόσο επιβίωση χωρίς (DFS) σε εντοπισμένες RCC [12]. Αυτή η ομάδα των δεικτών σε συνδυασμό, ήταν σε θέση να προβλέψουν καλύτερα DFS σε σύγκριση με το πρότυπο μεταβλητές. Μια προγνωστική νομόγραμμα κατασκευάσθηκε συνδυάζοντας αυτούς τους δείκτες με τις μεταβλητές κλινικο- παθολογικών για πρώτη φορά εμφανίζουν μια βελτιωμένη προγνωστική ακρίβεια. Παρ ‘όλα αυτά, η συστηματική χρησιμοποίηση αυτών των δεικτών στην κλινική δεν έχει εγκριθεί.

Μια καλύτερη κατανόηση της μοριακής βάσης της RCC δεν έχει μόνο προηγμένο ανακάλυψη βιοδεικτών, αλλά προχώρησε και η θεραπεία του μεταστατικού RCC (mRCC) με την ανάπτυξη των στοχευμένων μοριακών θεραπειών. Η πιο σημαντική ανακάλυψη ήταν η ταυτοποίηση των μεταλλάξεων στο γονίδιο νοη Hippel-Lindau (VHL) σε κληρονομική διαυγοκυτταρικό RCC (ccRCC) και έως τα δύο τρίτα των σποραδικές περιπτώσεις [13]. Αυτό οδηγεί σε ενεργοποίηση του μονοπατιού υποξία και την επακόλουθη πάνω ρύθμιση που σχετίζεται υποξία μορίων δηλ αγγειακού ενδοθηλιακού αυξητικού παράγοντες (VEGF) και προερχόμενος από αιμοπετάλια παράγοντες ανάπτυξης. Αυτές οι ανακαλύψεις οδήγησαν στην κλινική χρήση του μονοκλωνικού αντισώματος VEGF (bevacizumab) και αναστολείς πολλαπλών-στόχων της τυροσίνης κινάσης (sunitinib και sorafenib) σε mRCC. Επιπλέον, η κατανόηση του ρόλου του στόχου της ραπαμυκίνης στα θηλαστικά (mTOR) οδού σε RCC προκάλεσε την κλινική χρήση της mTOR αναστολείς, temsirolimus και everolimus. Παρά τη σημαντική βελτίωση στην αποτελεσματικότητα σε σύγκριση με τις ανοσοθεραπείες, το προηγούμενο πρότυπο χρυσού για θεραπεία της mRCC, αντίσταση σε αυτά τα μοριακά θεραπειών παραμένει ένα σημαντικό πρόβλημα [14], [15], [16].

Ένα μεγάλο μέρος της γνώσης αυτής της μοριακής βάσης του RCC έχει αποκαλυφθεί μέσω της μελέτης του πρωτογενούς νεφρικής όγκου, με ελάχιστη ανάλυση των διαφορών μεταξύ του πρωτογενούς όγκου και των μεταστάσεων. Πρόσφατα, Gerlinger

κ.ά.

ανέφεραν ότι η γενετική υπογραφή του πρωτογενούς όγκου μπορεί να μην αντικατοπτρίζουν εκείνο του μετάσταση [17], ωστόσο υπάρχει μικρή μελέτη αυτών των διαφορών σε επίπεδο πρωτεΐνης. Lee

et al

έχουν αναφέρει αυξημένη Bcl-2 έκφρασης [18] και Schultz

et al

έδειξαν μεγαλύτερη έκφραση της ρΑΚΤ, PS6, 4EBP1 και cmyc και χαμηλότερη έκφραση της ΡΤΕΝ στο μεταστατικό RCC σε σύγκριση με πρωτογενείς όγκους [19]. Είναι πιθανό ότι το κλειδί για την κατανόηση αντίσταση και την ανάπτυξη πιο αποτελεσματικών θεραπειών, είναι μια σε βάθος μελέτη των μεταστατικών όγκων, όπως ο στόχος της θεραπείας είναι η μείωση του μεταστατικού φορτίου όγκου. Επιπλέον, πρωτογενή όγκο RCC έχει μια προτίμηση για τη συμμετοχή του φλεβικού συστήματος (νεφρική φλέβα, κάτω κοίλη φλέβα και δεξιός κόλπος), αυτό το φλεβικό θρόμβο όγκου (VTT) είναι δυνητικά μια μέση λύση μεταξύ του φαινοτύπου του πρωτογενούς και μεταστατικού όγκου.

η ανοσοϊστοχημεία (IHC) είναι ένα βασικό εργαλείο στη μοριακή παθολογία χρησιμοποιηθεί για να βοηθήσει τη διάγνωση και την πρόγνωση σε RCC. Ωστόσο, IHC είναι υποκειμενική και μόνο ημι-ποσοτική. Η ανάπτυξη της αυτοματοποιημένης ανάλυσης Ποσοτική (AQUA) του ανοσοφθορισμού επιτρέπει την ακριβή και ευαίσθητη in situ εντοπισμός της πρωτεΐνης και τον ποσοτικό προσδιορισμό, το οποίο έχουμε εξευγενισμένα για χρήση σε RCC [11]. Εν συντομία, αυτό περιλαμβάνει χρώση ανοσοφθορισμού για την πρωτεΐνη-στόχο και να δημιουργήσει ένα επιθηλιακό μάσκα του όγκου, επιτρέποντας τη διαφοροποίηση του όγκου από το στρώμα, και υπο-εντοπισμός του στο κυτταρόπλασμα και πυρήνες. Υπάρχει μετέπειτα ψηφιακή λήψη εικόνας, και αυτοματοποιημένη ανάλυση των εικόνων για να δώσει τη συνεχή βαθμολογίες για την έκφραση του στόχου. Η τεχνική αυτή επιτρέπει μεγαλύτερη αντικειμενικότητα και ακρίβεια των πρωτεϊνών ποσοτικοποίηση και πρόγνωση προσφέρονται από Klatte και οι συνεργάτες του. Σε αυτή τη μελέτη έχουμε ως στόχο να χρησιμοποιήσει AQUA immunoflurescence να εκτιμηθεί η διαφορική έκφραση πρωτεϊνών των αναφερθέντων προγνωστικών δεικτών σε πρωτογενή όγκο, VTT και μεταστάσεων σε RCC και να καθορίσει προγνωστική το ρόλο τους στην τοπικά προχωρημένο και /ή μεταστατικό πρωτογενές καρκίνωμα νεφρικών κυττάρων.

ασθενείς και Μέθοδοι

Πληθυσμός μελέτης

Οι ασθενείς που είχαν πρωτογενή καρκίνωμα νεφρικών κυττάρων και /ή νεφρική φλέβα ή κατώτερη θρόμβου κοίλη φλέβα και /ή μακρινό RCC μεταστάσεις κατά τη στιγμή της χειρουργικής επέμβασης ή σε μεταγενέστερη ημερομηνία εντοπίστηκαν από μελλοντικά καταρτίζονται βάση δεδομένων. Φορμόλη σταθερά ενσωματωμένα σε παραφίνη δείγματα όγκου (FFPE) εντοπίστηκαν από 177 από αυτούς τους ασθενείς που υποβλήθηκαν σε ριζική νεφρεκτομή μεταξύ 1983 και 2010, στο Τμήμα Ουρολογίας, Εδιμβούργο. Όπου είναι δυνατόν, γραπτή συγκατάθεση αποκτήθηκε κατά τη χρήση του πλεονάζοντος ιστού για διαγνωστικές απαίτηση και τη σχετική ανώνυμα δεδομένα του ασθενούς. Ηθικά άδεια να χρησιμοποιεί αυτά τα αρχειοθετημένα ιστούς χορηγήθηκε από την Περιφερειακή Επιτροπή Δεοντολογίας Lothian (08 /S1101 /41 και 10 /S1402 /33). Ηθικές έγκριση 08 /S1101 /41 επιτρέπει τη διανομή των δειγμάτων FFPE και συνδέονται συνδέονται ανώνυμα δεδομένα από το αρχείο Παθολογίας για την έρευνα χωρίς τη συγκατάθεσή καθώς συλλέχθηκαν για διαγνωστικούς σκοπούς πριν από τον Σεπτέμβριο του 2006. Η διαγνωστική οδό για αυτά τα δείγματα ιστού έχει πλέον ολοκληρωθεί και τα αρχειοθετημένα δείγματα είναι πλεονασματική σε αυτή τη διαδικασία. Πρόσθετες ιστού από μετά το 2006 συλλέχθηκαν και κυκλοφόρησε για χρήση σύμφωνα με την ηθική έγκριση 10 /S1402 /33, η οποία είναι Ερευνών Tissue Bank δεοντολογικές εγκρίσεις που κατέχει η SAHSC Bioresource για λογαριασμό της NHS Lothian. Η έγκριση αυτή εφαρμόζει τις αρχές της «δήλωσης θέσης σε διαγνωστικές αρχεία απελευθέρωση των ιστών για την έρευνα« κοινή δήλωση από το Human Tissue Authority (HTA) και την Εθνική Υπηρεσία Έρευνας Ηθικής (NES) τον Ιούλιο του 2009 με τη χρήση των εν λόγω δειγμάτων. Όλα παθολογική στάσης αναφέρθηκε με τη χρήση της κατάταξης TNM 2002 [20]. Εάν τα αίτια του θανάτου του δεν ήταν διαθέσιμα σε κλινικές σημειώσεις αυτές ελήφθησαν από το Γενικό Ληξιαρχείο της Σκωτίας.

Ιστός μικροσυστοιχιών (TMA) Κατασκευή

Αυτά τα δείγματα ιστού χρησιμοποιήθηκαν για την κατασκευή ενός ΤΜΑ [21 ]. Ένα ελάχιστο τριών αντιπροσωπευτικών πυρήνες επανάληψη, 0,6 mm σε διάμετρο, από πρωτοπαθή όγκο του κάθε ασθενούς, VTT και μεταστάσεις ελήφθησαν μετά την αναθεώρηση και τη σήμανση της αιματοξυλίνη και ηωσίνη χρωματισμένο διαφάνειες και μπλοκ από παθολογοανατόμο Συμβούλου. Η επαρκής ιστός δεν ήταν διαθέσιμη από όλες τις πρωτογενείς όγκους και μεταστάσεις. Συνολικά, το 1980 πυρήνες ελήφθησαν και διανεμήθηκαν πάνω από 12 διαφάνειες από τους 177 ασθενείς που εκπροσωπούν 163 πρωτοπαθείς όγκους, 103 VTTs και 69 μεταστάσεις. Αυτό περιελάμβανε 29 ασθενείς με μόνο πρωτογενείς όγκους? 79 με συμφωνημένα πρωτογενή και VTTs? 24 με συμφωνημένα πρωτογενείς όγκους, VTTs και μεταστάσεις? 31 με συμφωνημένα πρωτοπαθείς όγκους και μεταστάσεις και 14 ασθενείς με απαράμιλλη μεταστάσεις μόνο. ​​

ανοσοφθορισμού

διαφάνειες TMA ήταν de-κερωμένο σε ξυλόλιο και στη συνέχεια ενυδατώνεται σε αραιά διαδοχικά διαλύματα αιθανόλης. Αντιγόνο ανάκτηση διεξήχθη από θέρμανση των διαφανειών σε μια χύτρα ταχύτητας για 5 λεπτά σε Tris-EDTA ρΗ 9,0 ή κιτρικό νάτριο ρΗ 6,0. Η ενδογενής δράση υπεροξειδάσης αποκλείσθηκε με επεξεργασία των διαφανειών σε υπεροξείδιο του υδρογόνου 3% επί 10 λεπτά και η μη ειδική πρόσδεση μειώνεται με επώαση σε μπλοκ πρωτεΐνη χωρίς ορό (Dako, X0909) για 10 λεπτά. Τα πλακίδια επωάστηκαν με το πρωτογενές αντίσωμα-στόχο, για την πρωτεΐνη του ενδιαφέροντος, για 1 ώρα σε θερμοκρασία δωματίου. Οι πρωτογενείς αντισώματα λεπτομερώς στον πίνακα 1. Στη συνέχεια, οι πλάκες επωάστηκαν όλη τη νύκτα στους 4 ° C με τα κατάλληλα αντισώματα να καθορίσει τη μάσκα του όγκου. Αυτά ήταν παν-cadherin (Cell σηματοδότηση, 4068, 1:100) όταν χρησιμοποιείτε ένα πρωτεύον αντίσωμα κουνελιού ή ένα συνδυασμό των παν-cadherin (Sigma-Aldrich, C1821, 1:750) και CK5 /6/8/18 (Novocastro, 6003168, 1:100) όταν χρησιμοποιείτε ένα πρωτεύον αντίσωμα ποντικού [11]. Οι πλάκες στη συνέχεια επωάστηκαν για 1,5 ώρες με Alexa Fluor 555 αντίσωμα συζευγμένο (Invitrogen A21422 και A21428, 1:25) και υπεροξειδάση αρμορακίας-δεξτράνης διακοσμημένα-πολυμερές ραχοκοκαλιάς αντίσωμα (EnVision, Dako). Τα πλακίδια στη συνέχεια επωάστηκαν για 10 λεπτά με Cy5-τυραμιδίου (HistoRx, AQUAntiplex σωλήνας F, δύο παρα δέκα), το οποίο ενεργοποίησε το υπεροξειδάσης κοχλιαρίας και επέτρεψε την οπτικοποίηση του πρωτογενούς αντισώματος. ΫΑΡΙ (4 ‘, 6-διαμιδινο-2-φαινυλινδόλιο, Invitrogen, P36931) αντιχρωστική χρησιμοποιήθηκε για την οπτικοποίηση των πυρήνων. Ένα αντιπροσωπευτικό πυρήνας φαίνεται στο σχήμα 1.

πυρήνας Αντιπροσωπευτικά TMA δείχνει πράσινη χρώση κυτταροπλασματική με ένα συνδυασμό κυτοκερατίνης και pancadherin (Α), μπλε πυρηνική χρώση με ϋΑΡΙ (Β), χρώση κόκκινο-στόχο (C, σε αυτό περίπτωση VEGFR1) και όλα τα τρία διαμερίσματα σε συνδυασμό (D). Ποσοτική εκτίμηση και το διαμέρισμα εντοπισμός της έκφρασης στόχου μετράται με τον υπολογισμό του ποσού της έντασης pixel στόχου διαιρούμενη με την περιοχή του διαμερίσματος και κανονικοποιημένο για το χρόνο έκθεσης.

Η

Automated Ποσοτικής Ανάλυσης

μονοχρωματικές εικόνες του κάθε πυρήνα TMA συνελήφθησαν σε 20 × στόχο χρησιμοποιώντας ένα Olympus AX-51 επιφθορισμού μικροσκόπιο (Olympus, Pennsylvania, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής). Εάν το επιθήλιο που αποτελείται λιγότερο από το 5% του συνολικού εμβαδού του πυρήνα, ο πυρήνας αποκλείστηκε από την ανάλυση. ψηφιακές εικόνες υψηλής ανάλυσης αναλύθηκαν με το λογισμικό AQUAnalysis (HistoRx, Conneticut, USA), για να προσδιοριστεί η έκφραση της πρωτεΐνης-στόχου συνολικά και στις κυτταροπλασματικές και πυρηνικά διαμερίσματα υπολογίζοντας το άθροισμα της έντασης pixel στόχου διαιρούμενη με την περιοχή του διαμερίσματος και κανονικοποιημένο για χρόνο έκθεσης .

Στατιστική Ανάλυση

Κατάλληλο διαμέρισμα AQUA αποτελέσματα ομαλοποιήθηκαν με μεσαίο κεντράρισμα για κάθε TMA να επιτρέψει μεταξύ TMA συγκρίσεις και, στη συνέχεια, η μέση βαθμολογία των ιστών που λαμβάνονται από την επανάληψη πυρήνες. X-πλακιδίων χρησιμοποιήθηκε για τον προσδιορισμό της αποκοπής για τον καθορισμό έκφραση υψηλών και χαμηλών πρωτεϊνών στον πρωτογενή όγκο, για ανάλυση Kaplan Meier [22]. Του καρκίνου συγκεκριμένες επιβίωση (CSS) προσδιορίστηκε με ανάλυση Kaplan Meier και οι συγκρίσεις γίνονται από δοκιμασία log-rank. Προγνωστική σημασία της έκφρασης της πρωτεΐνης και κλινικο-παθολογικών παραγόντων για CSS προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας Cox μονοπαραγοντική και πολυπαραγοντική ανάλυση παλινδρόμησης. Συσχέτιση της έκφρασης της πρωτεΐνης με το πρότυπο παθολογικοί παράγοντες εκτιμήθηκε με ανάλυση Pearson συσχέτιση. Διαφορική έκφραση πρωτεΐνης μεταξύ του πρωτογενούς όγκου, η νεφρική φλέβα θρόμβου όγκου και μεταστατικό ιστός αξιολογήθηκε χρησιμοποιώντας το Mann-Whitney test. Η στατιστική ανάλυση πραγματοποιήθηκε με τη χρήση PAWS έκδοση 18.0 (SPSS Inc., Chicago, IL, USA), σ & lt? 0,05 λήφθηκε για να δείξει τη σημασία

Αποτελέσματα

Οι κλινικο-παθολογικές χαρακτηριστικά που συνδέονται με το. πρωτοβάθμια RCC ασθενών παρουσιάζονται στον πίνακα 2. η μέση ηλικία των ασθενών ήταν 64 έτη και η αναλογία ανδρών-γυναικών ήταν 1.5:1. Δεν υπήρχε σημαντική διαφορά στην πλευρικότητα των όγκων και το μέσο μέγεθος όγκου ήταν 8,7 εκατοστά (εύρος: 1,5 έως 16 cm). Η πλειονότητα των όγκων (n = 138? 88%) ήταν ιστολογικά σαφής κύτταρο, ενώ 14 (9,8%) ήταν θηλώδη και το υπόλοιπο ήταν άλλα σπανιότερα υποτύπους. Οι περισσότερες περιπτώσεις ήταν παθολογικό στάδιο T3b (n = 107, 73,4%). 29 (15,8%) περιπτώσεις ήταν παθολογικά κόμβο θετικά κατά τη στιγμή της νεφρεκτομή και 13 (7,1%) ασθενείς είχαν επιβεβαιώσει μεταστάσεις κατά την αρχική διάγνωση.

Η

Ki67 και η έκφραση p53 δεν είχε εντοπιστεί πάνω από τα επίπεδα υποβάθρου στο 35,8% (n = 59) και 1,2% (n = 2) των πρωτογενών Συντονιστικά Κέντρα Διάσωσης αντίστοιχα. Διαφορετικά έκφραση πρωτεΐνης των άλλων δεικτών ταυτοποιήθηκε σε όλους τους όγκους. Αξιολόγηση της σχέσης μεταξύ της έκφρασης της πρωτεΐνης στον πρωτογενή όγκο και την τυπική παθολογικές παράμετροι αποκάλυψε αυξημένη έκφραση ΣΑΛΙΓΚΑΡΙΟΥ συσχετίζεται με προχωρημένο στάδιο παθολογική όγκου (ρ = 0,001) και την αύξηση της διαμέτρου μέγιστο του όγκου (ρ = 0,048). Υψηλή VEGFR1 και VEGFD σχετίστηκαν με μη καθαρά υποτύπου κυττάρων (ρ = 0,017 και ρ = 0,018 αντίστοιχα).

Επιπλέον, η υψηλή VEGFR1 στην πλήρη μάσκα όγκου, αλλά όχι στην εντοπισμένη κυτταροπλασματικό διαμέρισμα, συσχετίστηκε με κόμβος θετική νόσο (p = 0.005). Δεν υπήρχαν άλλες σημαντικές συσχετίσεις μεταξύ αξιολογημένο έκφραση της πρωτεΐνης και τυποποιημένες μεταβλητές κλινικο-παθολογικές.

Η αξιολόγηση της διαφορικής έκφρασης πρωτεϊνών μεταξύ του πρωτογενούς όγκου, VTT και οι μεταστάσεις έδειξε καμία σημαντική διαφορά μεταξύ του πρωτογενούς όγκου και VTT αλλά σημαντικά αυξημένο έκφραση στα μεταστάσεις σε σύγκριση με τον πρωτογενή και VTT για Ki67, p53, VEGFR1, σαλιγκάρι και γυμνοσάλιαγκα (Σχήματα 2, 3, 4, 5, 6). Ακριβή στοιχεία επιβίωσης ήταν διαθέσιμα για 132 ασθενείς. Ο μέσος χρόνος παρακολούθησης ήταν 58 μήνες. Η ιστολογική υποομάδα δεν επηρέασε σημαντικά CSS σε ανάλυση Kaplan Meier? Ωστόσο, το στάδιο παθολογικές όγκου (στάδιο ΡΤ), Fuhrman βαθμός και ο κόμβος θετική νόσο κατά τη διάγνωση έκανε την πρόβλεψη CSS (σχήματα 7, 8, 9, 10). Επιβίωση ανάλυση των δεικτών πρωτεομικής αποκάλυψε υψηλή VEGFR1 και VEGFD να συνδέεται με σημαντικά χαμηλότερη CSS (σχήματα 11 & amp? 12). Δεν υπήρχε σημαντική διαφορά στο CSS με Ki67, p53, σαλιγκάρι και το επίπεδο έκφρασης Slug. Διάμεση, προέβλεψε 5 και 10 ετών επιβίωσης για τις παθολογικές μεταβλητές και πρωτεομική δείκτες αναλύονται στους πίνακες 3 και 4 αντίστοιχα.

Σημαντικά αυξημένη έκφραση της πυρηνικής Κί67 φαίνεται στα μεταστάσεις σε σύγκριση με το VTT και πρωτογενούς όγκου, αλλά όχι διαφορά στην έκφραση μεταξύ του πρωτογενούς όγκου και το VTT.

η

σημαντικά αυξημένη έκφραση της πυρηνικής ρ53 δείχνονται στα μεταστάσεις σε σύγκριση με το VTT και πρωτογενούς όγκου, αλλά καμία διαφορά στην έκφραση μεταξύ του πρωτογενούς όγκου και το VTT.

σημαντικά αυξημένη έκφραση της κυτταροπλασματικής VEGFR1 φαίνεται στις μεταστάσεις σε σύγκριση με το VTT και πρωτοπαθούς όγκου, αλλά καμία διαφορά στην έκφραση μεταξύ του πρωτογενούς όγκου και της VTT.

η

σημαντικά αυξημένη έκφραση των πυρηνικών ΣΑΛΙΓΚΆΡΙ φαίνεται στις μεταστάσεις σε σύγκριση με το VTT και πρωτοπαθούς όγκου, αλλά καμία διαφορά στην έκφραση μεταξύ του πρωτογενούς όγκου και της VTT.

η

σημαντικά αυξημένη έκφραση των πυρηνικών Slug φαίνεται στις μεταστάσεις σε σύγκριση με το VTT και πρωτογενούς όγκου, αλλά καμία διαφορά στην έκφραση μεταξύ του πρωτογενούς όγκου και το VTT.

η

δεν παρατηρήθηκε σημαντική διαφορά στο CSS παρουσιάζεται μεταξύ διαυγοκυτταρικό (n = 111) και θηλώδη RCC (η = 11) όγκων.

Η

CSS ήταν στατιστικά διαφορετική βάση τις παθολογικές το στάδιο του όγκου σε ανάλυση Kaplan Meier. 122 ασθενείς συμπεριλήφθηκαν σε αυτή την ανάλυση (7 pT στάδιο 1, 13 pT στάδιο 2, 99 στάδιο pT 3 και 3 pT στάδιο 4), άλλοι αποκλείστηκαν λόγω ελλιπών στοιχείων παρακολούθησης ή παθολογίας. Αυτό δείχνει φτωχότερες CSS με επιδείνωση των παθολογικών το στάδιο του όγκου κατά τη διάγνωση.

Η

Αυτό δείχνει στατιστικά διαφορετικά CSS βασίζονται σε βαθμό Fuhrman. 89 ασθενείς συμπεριλήφθηκαν σε αυτή την ανάλυση (1 βαθμός 1, 35 βαθμού 2, 38 βαθμού 3 και 15 βαθμού 4), άλλοι αποκλείστηκαν λόγω ελλιπών στοιχείων παρακολούθησης ή παθολογίας. Υπάρχει φτωχότερες CSS για το βαθμό 1, με δυσδιάκριτες CSS για το βαθμό 3 και 4, και το πιο ευνοϊκό CSS για βαθμού 2.

Η

Θετική κατάσταση κόμβο κατά τη διάγνωση έχει σημαντικά χειρότερη από ό, τι CSS κόμβο αρνητική νόσο.

έκφραση υψηλής VEGFR1 στον πρωτογενή όγκο σχετίζεται με σημαντικά χειρότερη από ό, τι CSS χαμηλή έκφραση VEGFR1.

η

έκφραση υψηλής VEGFD στον πρωτογενή όγκο σχετίζεται με σημαντικά χειρότερη CSS από τα χαμηλά VEGFD έκφρασης.

Απλή αναζήτηση

οι μεταβλητές που ήταν σημαντικές σε ανάλυση Kaplan Meier αξιολογήθηκαν με πολυπαραγοντική ανάλυση παλινδρόμησης Cox, και οι κλινικές μεταβλητές της ποιότητας και του κόμβου κατάσταση Fuhrman παρέμεινε σημαντικός, ενώ το στάδιο pT , VEGFR1 και VEGFD δεν ήταν ανεξάρτητη προγνωστική (Πίνακας 5).

Η

Συζήτηση

Αυτή η νέα μελέτη έδειξε σημαντικά αυξημένη έκφραση του Ki67, p53, VEGFR1, γυμνοσάλιαγκα και σαλιγκάρι RCC μεταστάσεις , σε σύγκριση με τον πρωτογενή όγκο και του φλεβικού θρόμβου όγκου. Επιπλέον, πρωτογενή έκφραση όγκου του VEGFR1 και VEGFD μπορεί να χρησιμοποιηθεί για να προβλέψει σημαντικές διαφορές στον καρκίνο συγκεκριμένες επιβίωση σε προχωρημένο νεφροκυτταρικό καρκίνωμα. Ενώ VEGFR1 και VEGFD ήταν σημαντικές για την μονοπαραγοντική ανάλυση, δεν θα μπορούσε να αποδειχθεί ανώτερη ανεξάρτητη προγνωστική σημασία αυτών των δεικτών πάνω πρότυπο κλινικο-παθολογικών παραμέτρων σε πολυπαραγοντική ανάλυση.

Για τις γνώσεις μας, αυτή είναι η μεγαλύτερη αναφερόμενη σειρά της πρωτοβάθμιας και μεταστατικό RCC δείγματα που χρησιμοποιούνται για την κατασκευή ενός ΤΜΑ για συγκριτική ανάλυση πρωτεϊνών, και είναι η μόνη μελέτη για την αξιολόγηση της VTT σε μοριακό επίπεδο. Επιπλέον, η χρήση του AQUA ανοσοφθορισμού επιτρέπει περισσότερο ακριβή και αντικειμενική ποσοτικοποίηση πρωτεϊνών, μια βελτίωση σε σχέση με άλλες δημοσιευμένες εργασίες μελετώντας την έκφραση της πρωτεΐνης χρησιμοποιώντας την τεχνική TMA. Ωστόσο, αναγνωρίζουμε αυτό το μοναδικό και δύσκολο να αποκτήσει ιστού που εξακολουθεί να αντιπροσωπεύει μια μικρή ομάδα. Αυτό μπορεί να οδηγήσει σε πληκτρολογήσετε λάθη II, ως αποτέλεσμα μιας μικρής ισχύος μελέτη. Ειδικότερα, αυτό μπορεί να εμπόδισαν σημαντικές διαφορές μεταξύ της έκφρασης πρωτογενούς όγκου και πρωτεΐνη VTT να ανιχνευθεί και το δυναμικό υποεκτίμηση της προγνωστικής σημασίας αυτών των δεικτών και γνωστές παθολογικές προγνωστικούς δείκτες, ειδικά σε πολυπαραγοντική ανάλυση. Οι δείκτες που επιλέχθηκαν με βάση τεκμηριωθεί προηγουμένως προγνωστική σημασία, που εμπλέκουν τη σημασία τους στην RCC παθογένεια, ωστόσο, θα είναι σημαντικό στο μέλλον να εκτελέσει μια μεγάλης κλίμακας αμερόληπτη εκτίμηση των πρωτεϊνών για να εκτιμηθεί το μέγεθος της διαφοράς μεταξύ της πρωτοβάθμιας και μεταστατικό RCC. Παρ ‘όλα αυτά, σημαντικές διαφορές σε πρωτεΐνη έκφραση των βασικών δεικτών μεταξύ του πρωτογενούς όγκου και μετάσταση έχουν δειχθεί για πρώτη φορά.

Η διαφορά στην έκφραση Κί67 μεταξύ πρωτογενών και μεταστατικών βλαβών έχει μελετηθεί σε έναν αριθμό καρκίνων συμπεριλαμβανομένου του μαστού , του παχέος εντέρου, του γαστρεντερικού στρωματικό (GIST) και καρκίνου της ουροδόχου κύστης, με αντικρουόμενα αποτελέσματα. Σε μαστού και του παχέος εντέρου, υψηλότερη έκφραση Ki67 σε πρωτογενείς όγκους σε σύγκριση με κομβικά και ηπατικές μεταστάσεις αντίστοιχα, δείχθηκε [23], [24], [25], [26]. Ωστόσο, σε GIST και της ουροδόχου κύστης όγκων, όπως επίσης και άλλες μελέτες του στήθους και του παχέος καρκίνωμα, το αντίστροφο ή καμία διαφορά στην έκφραση έχει δειχθεί [27], [28], [29], [30]. Τα αποτελέσματα της παρούσας μελέτης έδειξαν μια σημαντική αύξηση στην έκφραση Ki67 σε μεταστατικό ιστό RCC έναντι πρωτογενούς και VTT RCC, υποδηλώνοντας επάνω ρύθμιση του πολλαπλασιασμού, η οποία δεν έχει αναφερθεί προηγουμένως. Άλλοι, ωστόσο, έχουν διερευνηθεί διαφορικής έκφρασης p53 στην πρωτοβάθμια και μεταστατικό RCC [31], [32], [33]. Λόγω του εκτεταμένου ημίσειας ζωής της μεταλλαγμένης ρ53 σε σύγκριση με την άγριου τύπου ρ53, μεταλλαγμένη μάλλον παρά άγριου τύπου ρ53 ανιχνεύεται με ανοσοϊστοχημεία [33]. Η εργασία μας έχει επιβεβαιώσει την αυξημένη έκφραση του μεταλλαγμένου ρ53 σε μεταστατικό RCC προηγουμένως δείξει, εμπλέκοντας αδρανοποίηση του p53 σε εξέλιξη της νόσου.

Αυτή η μελέτη απέδειξε επίσης για πρώτη φορά, η αυξημένη έκφραση του VEGFR1 στο μεταστατικό σύγκριση με τις πρωτογενείς και VTT RCC ιστού. Ο VEGF είναι μια σημαντική πρωτεΐνη σηματοδότησης που εμπλέκονται στην αγγειογένεση και λεμφαγγειογένεση [34], βασικές διεργασίες στην ανάπτυξη και διάδοση του καρκίνου? χαρακτηριστικά του καρκίνου [35]. Η επάνω ρύθμιση του VEGF μέσω της επαγωγής της οδού υποξία με μετάλλαξη του γονιδίου VHL είναι αποδεκτό στην παθογένεση της ccRCC και έχει οδηγήσει στην επιτυχημένη ανάπτυξη μοριακών θεραπειών για τη θεραπεία της RCC. Ωστόσο, η διαφορική VEGF και της έκφρασης VEGFR στην πρωτοβάθμια και μεταστατικό RCC δεν έχει προηγουμένως μελετηθεί, παρά τις μεταστάσεις RCC είναι ο στόχος των αναστολέων VEGF. Αυξημένη VEGF (αντί VEGFR) Τα επίπεδα mRNA παρατηρήθηκαν στο ηπατικών μεταστάσεων σε σύγκριση με πρωτογενή ορθοκολικό όγκους [36], ενώ καμία διαφορά στην πρωτεΐνη έκφραση του VEGF ή VEGFR1 σε μελάνωμα και μεταστάσεις ζεύγη έχει αναφερθεί [37]. Τα αποτελέσματά μας επιβεβαίωσαν αυξημένη έκφραση του VEGFR1 στο μεταστατικό RCC, εμπλέκοντας τη ρύθμιση της αγγειογένεσης και λεμφαγγειογένεσης, και την υποστήριξη της χρήσης του VEGF στοχευμένες θεραπείες σε μεταστατική νόσο.

Ενεργοποίηση εισβολή και τη μετάσταση είναι ένα άλλο χαρακτηριστικό γνώρισμα του καρκίνου [35] και επιθηλιακών σε μεσεγχυματικά μετάβασης (EMT) πιστεύεται ότι είναι μια σημαντική διαδικασία αυτή, στην οποία αντιστρέφεται μια φυσιολογική αναπτυξιακή διαδικασία. Sarcomatoid de-διαφοροποίηση παρατηρείται σε RCC [38], [39], και αυτό μπορεί να είναι ένα φαινοτυπικό παράδειγμα του ΕΜΤ παρατηρηθεί από τον παθολογοανατόμο. Έχουμε δείξει σημαντικά μεγαλύτερη έκφραση τόσο του γυμνοσάλιαγκα και πρωτεΐνες ΣΑΛΙΓΚΑΡΙΟΥ σε μεταστατικό RCC σε σύγκριση με τις πρωτογενείς όγκους, καθώς και μια συσχέτιση μεταξύ αυξημένης έκφρασης σαλιγκάρι και την αύξηση του μεγέθους του όγκου και την προώθηση στάδιο ΡΤ. Αυτό υποστηρίζει την ανάπτυξη ενός φαινοτύπου EMT σε μοριακό επίπεδο σε RCC παθογένεια.

Το έργο αυτό μέχρι στιγμής έχει υποδείξει βασικές πρωτεΐνες μπορεί να είναι σημαντική στην παθογένεση του RCC και εμφανίζονται σημαντικές διαφορές στην έκφραση της πρωτεΐνης στην πρωτοβάθμια και VTT RCC σε σύγκριση με τις μεταστατικές αποθέσεις. Υποθέσαμε ότι η VTT θα είναι μια ενδιάμεση διαδικασία μεταξύ της πρωτοβάθμιας και μεταστάσεις, αλλά δεν ήταν σε θέση να αποδείξει αυτό με τις πρωτεΐνες αξιολογηθεί. Αυτό μπορεί να είναι ως αποτέλεσμα ενός αριθμού παραγόντων. Πρώτον, όπως υποδείχθηκαν προηγουμένως αυτό παραμένει ένα σχετικά μικρό κοόρτη, και ως τέτοιες μπορούν να είναι μικρής ισχύος. Είναι μια πιθανότητα ότι οι πρωτεΐνες που μελετήθηκαν δεν είναι το κλειδί για την επεμβατική επέκταση του πρωτογενούς σε VTT. Ωστόσο, θα περίμενε κανείς διαισθητικά δείκτες του πολλαπλασιασμού, της αγγειογένεσης και EMT να συμμετέχουν σε μια τέτοια διαδικασία. Τέλος, πρέπει να δεχτούμε ότι ένας όγκος που μεταναστεύει, προσαρμόζει και μεγαλώνει σε ένα νέο περιβάλλον είναι διαφορετικό από έναν όγκο που εισβάλλει σε τοπικό επίπεδο, και ότι η VTT μπορεί να είναι πιο αντιπροσωπευτικά της επέκτασης του πρωτοπαθούς όγκου.

Όπως καθώς και διαφορική έκφραση πρωτεϊνών, έχουμε ως στόχο να εκτιμηθεί η προγνωστική σημασία αυτών των δεικτών σε προχωρημένο RCC. Βρήκαμε πρότυπο παθολογικοί παράγοντες παραμένουν οι πιο σημαντικές μεταβλητές στην πρόβλεψη του καρκίνου συγκεκριμένες επιβίωσης. Κομβικό νόσου κατά την παρουσίαση έχει αποδειχθεί ότι είναι προγνωστική τόσο διαφορετικά εντοπισμένη ασθένεια και μεταστατική νόσο ανεξάρτητα από άλλους προγνωστικούς παράγοντες [40], [41], [42]. Έχουμε επιβεβαιώσει τη σημασία αυτής της παθολογικής εύρημα στην παρούσα μελέτη, όπου θετική κομβικό συμμετοχή έχει τη μεγαλύτερη αναλογία κινδύνου (2.7) σε πολυπαραγοντική ανάλυση για CSS.

Fuhrman βαθμού βρέθηκε επίσης να είναι σημαντική για την μονοπαραγοντική και πολυπαραγοντική ανάλυση. Fuhrman βαθμού με βάση την αξιολόγηση της πυρηνικής ασφάλειας, της πυρηνικής πλειομορφία και πυρηνισκικός ανάδειξη [43] και ενώ προγνωστική σημασία της στο θηλώδες και χρωμόφοβο RCC συζητείται [44], έχει σαφώς αποδειχθεί ότι είναι σημαντικό για ccRCC [43], [ ,,,0],45], [46], [47]. Στην ανάλυσή μας, Fuhrman βαθμού 1 είχαν τη χειρότερη πρόγνωση και αυτό είναι πιθανό να οφείλεται στο μικρό μέγεθος του δείγματος, ενώ βαθμού 2 η ασθένεια είχε σημαντικά παρατεταμένη CSS σε σύγκριση με βαθμού 3 και 4, οι οποίες ήταν δυσδιάκριτες. Το συγκρίσιμο CSS του ασθενούς με Fuhrman βαθμού 3 και 4 της νόσου μπορεί να είναι το αποτέλεσμα άλλων παραγόντων σύγχυσης? Ωστόσο, αυτή τη στιγμή υπάρχει ανησυχία σχετικά με ενδο- και δια-παθολόγος μεταβλητότητα αναφοράς της ποιότητας Fuhrman [44], η οποία έχει οδηγήσει στη Διεθνή Εταιρεία Ουρολογικής Παθολογίας (ISUP) συνιστώντας την αντικατάσταση ταξινόμησης Fuhrman με το σύστημα ISUP πυρηνισκικός ταξινόμησης, που βασίζεται αποκλειστικά στην πυρηνισκικός μέγεθος όπως περιγράφεται στο Fuhrman, αλλά χωρίς τους σύγχυσης και σύγχυση θέματα των πυρηνικών μέγεθος και το σχήμα.

Παθολογική το στάδιο του όγκου ήταν σημαντική για την ανάλυση Kaplan Meier αλλά όχι πολυπαραγοντική ανάλυση. Το μικρό μέγεθος του δείγματος των σταδίων, εκτός από ρΤ3, και η υψηλή φύση του κινδύνου του ομάδα, που επιλέγεται λόγω της εμπλοκής της νεφρικής φλέβας ή /και ταυτόχρονη ή επακόλουθη μεταστάσεις, εμπόδισαν την αναγνώριση του προγνωστικού ρόλου του σταδίου του όγκου προσδιορίζεται με σαφήνεια εντοπισμένη νόσο [4 ], [37], [45], [46]. Το μικρό μέγεθος του δείγματος των μη διαυγοκυτταρικό RCC μπορεί επίσης να είχε αποτρέψει οποιαδήποτε σημαντική διαφορά στο CSS που έχει προσδιοριστεί με βάση τις ιστολογικές υποτύπου (πιθανότατα τύπος σφάλματος II), αν και υπήρχε μια σαφής τάση μείωσης CSS με ccRCC.

Η προγνωστική σημασία της έκφρασης Κί67 και p53 έχει ευρέως μελετηθεί σε RCC. Ο δείκτης πολλαπλασιασμού, Ki67, έχει αποδειχθεί ότι συνδέεται με υψηλότερα πυρηνικού βαθμού και χειρότερη πρόγνωση σε εντοπισμένες ccRCC [12] και mRCC [48]. Ωστόσο, άλλες μελέτες σε εντοπισμένες RCC έχουν αποτύχει να αποδείξουν την ανεξάρτητη προγνωστική σημασία της Ki67, σε μεγάλο βαθμό λόγω της στενής σύνδεσής του με το βαθμό του όγκου και το στάδιο [49], [50]. Η μελέτη μας τοπικά προχωρημένο και μεταστατικό RCC, αν και δείχνει μια τάση χειρότερη πρόγνωση σε υψηλότερη έκφραση Ki67, απέτυχαν να αποδείξουν κάποια σημαντική διαφορά στο CSS με βάση την έκφραση Κί67. Ομοίως, η προγνωστική σημασία της ρ53 σε RCC επίσης συζητηθεί [32], [50], [51], [52], [53], [54], [55], [56], και ομάδα μας καμία διαφορά σε CSS παρατηρήθηκε μεταξύ υψηλής και χαμηλής έκφρασης. μελέτες έκφρασης γονιδίων σε RCC έχουν δείξει EMT υπογραφή να σχετίζεται με χειρότερη πρόγνωση [57], [58]. Παρά τις διαπιστώσεις αυτές, ποσοτική εκτίμηση των σαλιγκάρι και γυμνοσάλιαγκα, βασικές πρωτεΐνες σε EMT, απέτυχε να δείξει κάποια σημαντική διαφορά στο CSS.

έκφραση VEGF έχει επίσης διερευνηθεί σε RCC από άλλους και βρέθηκε να είναι προγνωστικό. Ειδικότερα, VEGFR1 έχει βρεθεί να σχετίζεται με χειρότερη έκβαση σε εντοπισμένες RCC [12], και η μελέτη μας έχει επιβεβαιώσει ότι πρόκειται για μονοπαραγοντική ανάλυση σε προχωρημένο στάδιο της νόσου. Άλλοι έχουν προτείνει χαμηλά VEGFD να σχετίζεται με χειρότερη πρόγνωση [1], [12], ωστόσο έχουμε δει το αντίστροφο σε προχωρημένη νόσο με φτωχότερη έκβαση συνδέονται με υψηλότερες VEGFD στον πρωτογενή όγκο και προτείνουμε αυτό είναι πιθανό να είναι το αποτέλεσμα του up ρύθμιση της λεμφαγγειογένεσης. Ωστόσο, η απώλεια της σημασίας αυτών των δεικτών σε πολυπαραγοντική ανάλυση μπορεί να είναι ως αποτέλεσμα της πολύ ρόλο του VEGF σε λεμφαγγειογένεση συζητηθεί.