Αφηρημένο

Ιστορικό

Ο καρκίνος του προστάτη (ΚΓΠ) είναι η δεύτερη κύρια αιτία θανάτου από καρκίνο στις αμερικανικές άνδρες. Θεραπεία στέρησης ανδρογόνων είναι αρχικά αποτελεσματική στη θεραπεία ΚΑΠ, αλλά CaP επαναλαμβάνεται παρά επίπεδα ευνουχισμού των κυκλοφορούντων ανδρογόνων. Συνεχίζεται η έκφραση του υποδοχέα ανδρογόνων (AR) και συνδέτες του έχει συνδεθεί με τον ευνουχισμό επαναλαμβανόμενες ανάπτυξης της ΚΓΠ.

Κύρια εύρεση

Στην έκθεση αυτή, η εξαρτώμενη από συνδετήρα κυρίαρχο-αρνητικό ARΔ142-337 (ARΔTR) εκφράστηκε στο κελί και όγκου μοντέλα CWR-R1 ευνουχισμός επαναλαμβανόμενες για τη διαλεύκανση του ρόλου της σηματοδότησης AR. Έκφραση ARΔTR μειωμένη ανάπτυξη του όγκου CWR-R1 με την παρουσία και απουσία εξωγενούς τεστοστερόνης (Τ) και βελτίωσε την επιβίωση στην παρουσία εξωγενούς Τ Υπήρξε απόδειξη για αρνητική επιλογή ARΔTR διαγονιδίου σε ποντικούς Τ-θεραπεία. φασματομετρία μάζας αποκάλυψαν επίπεδα ευνουχισμού επαναλαμβανόμενες CaP διυδροτεστοστερόνη (DHT) αρκεί για να ενεργοποιήσετε AR και ARΔTR. Εν απουσία εξωγενούς τεστοστερόνης, CWR-R1-ARΔTR και ελέγχου κύτταρα εμφάνισαν μεταβληθεί προφίλ ανδρογόνων που εμπλέκονται επιθηλιακά κύτταρα CaP ως πηγή ενδοογκική AR συνδετήρων.

Συμπέρασμα

Η μελέτη παρέχει

in vivo

ενδείξεις ότι η ενεργοποίηση της σηματοδότησης AR από ενδοογκική AR συνδέτες απαιτείται για ευνουχισμό επαναλαμβανόμενες ανάπτυξης ΚΓΠ και επιθηλιακά κύτταρα CaP παράγουν επαρκείς δραστικά ανδρογόνα για κάλυμμα υποτροπή κατά τη διάρκεια της θεραπεία στέρησης ανδρογόνων. Στόχευση intracrine Τ και σύνθεσης DHT θα πρέπει να παρέχει ένα μηχανισμό για την αναστολή AR και την ανάπτυξη του ευνουχισμού επαναλαμβανόμενες CaP

Παράθεση:. Τίτος ΜΑ, Zeithaml Β, Kantor Β, Λι Χ, Haack Κ, Moore DT, et al. (2012) Κυρίαρχο-Αρνητική ανδρογόνων υποδοχέων Αναστολή της intracrine ανδρογονοεξαρτώμενων ανάπτυξη του ευνουχισμού-Περιοδική καρκίνο του προστάτη. PLoS ONE 7 (1): e30192. doi: 10.1371 /journal.pone.0030192

Επιμέλεια: Shree Ram Singh, Εθνικό Ινστιτούτο Καρκίνου, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 14 Σεπ 2011? Αποδεκτές: 15η Δεκεμβρίου του 2011? Δημοσιεύθηκε: 17 Ιανουαρίου 2012

Copyright: © 2012 Titus et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Το έργο υποστηρίχθηκε από PO1-CA77739 και 2RO1 DK058702-10 από το Εθνικό Ινστιτούτο Καρκίνου και το Εθνικό Ινστιτούτο Καρκίνου Κέντρο Καρκίνου Επιχορηγήσεις Στήριξη CA016156 και CA034026 στο Roswell Park Cancer Institute και το Πανεπιστήμιο της Βόρειας Καρολίνας, αντιστοίχως, των ΗΠΑ Δημόσιας Υγείας Υπηρεσία Χορηγιών HD16910 από το Εθνικό Ινστιτούτο Υγείας του παιδιού και Ανθρώπινης Ανάπτυξης, Εθνικό Ινστιτούτο Υγείας (NIH), και το Τμήμα του Καρκίνου του Προγράμματος Έρευνας άμυνας του προστάτη W81XWH-10-1-0273. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

ο καρκίνος του προστάτη (ΚΓΠ) είναι η πιο κοινή μορφή καρκίνου του δέρματος μη διαγνωστεί στην αμερικανική άνδρες. Παρά την έγκαιρη ανίχνευση και τη βελτίωση της θεραπείας, οι περισσότεροι από 33.000 θάνατοι αναμένονται το 2011 [1]. Για δεκαετίες, θεραπεία στέρησης ανδρογόνων ήταν η προτιμώμενη θεραπεία για τοπικά προχωρημένο ή μεταστατικό καπάκι. Θεραπεία στέρησης ανδρογόνων είναι αποτελεσματική αρχικά, αλλά υφέσεις είναι προσωρινές. ΚΓΠ, η οποία επαναλαμβάνεται απαντά ανεπαρκώς σε περισσότερες θεραπείες και σχεδόν όλοι οι άνθρωποι υποκύπτουν στην ασθένεια. Ένας μοριακός ρόλος για τον υποδοχέα ανδρογόνων (AR) κατά τη μετάβαση στην ευνουχισμό επαναλαμβανόμενες CaP υποστηρίζεται από τη συνεχή έκφραση του AR [2] – [4] και ανδρογόνα ρυθμιζόμενα γονίδια [5]

Πολλοί μηχανισμοί. συμβάλλουν στην AR διενεργοποίηση παρά επίπεδα ευνουχισμού των κυκλοφορούντων όρχεων ανδρογόνων (επανεξετάζονται από Feldman [6]). Ωστόσο, άλλες μελέτες συμπεριλαμβανομένης της δικής μας έδειξαν ότι ο ευνουχισμός επαναλαμβανόμενες CaP διατηρεί τα επίπεδα ιστού του διυδροτεστοστερόνη (DHT) αρκεί για να ενεργοποιήσει AR [4], [7] – [9]. τεστοστερόνης Επίμονη ιστού (Τ) και DHT κατά τη διάρκεια της θεραπείας στέρησης ανδρογόνων μπορεί να προέρχονται από επινεφριδίων ανδρογόνα, όπως η δεϋδροεπιανδροστερόνη (DHEA) και ανδροστενεδιόνη [7], από ανδροστανοδιόλη δια της πλαγίας οδού οδό σύνθεσης DHT [10], [11] και /ή

de novo

παραγωγής από τη χοληστερόλη [12]. Σε ευνουχισμός επαναλαμβανόμενες Cap, AR διεγείρει την εξαρτώμενη από ανδρογόνο έκφραση του ειδικού προστατικού αντιγόνου και την πρωτεάση διαμεμβράνης, σερίνη 2-v-ETS ιός ερυθροβλάστωση E26 ογκογονιδίου ομόλογο, TMPRSS2:ERG [13]. Μια πρόσφατη έκθεση κατέδειξε ότι το 70% των ανδρών με ευνουχισμό επαναλαμβανόμενες CaP απάντησε σε οξικό αμπιρατερόνη, έναν 17α-υδροξυλάση /λυάση (CYP17A1) αναστολέα της βιοσύνθεσης ανδρογόνων κυτοχρώματος P450. Η αντικαρκινική δράση της οξικής αμπιρατερόνης σε κλινικές μελέτες δείχνουν ότι η αναστολή του κυτοχρώματος Ρ450 17α-υδροξυλάση /λυάση (CYP17A1) μειώνεται συνδέτη-ενεργοποιημένη σηματοδότηση AR σε ευνουχισμό επαναλαμβανόμενες CaP [14].

κύτταρα CWR-R1 που χρησιμοποιείται στην η παρούσα μελέτη προέρχονται από τον ευνουχισμό επαναλαμβανόμενες CWR22 ξενομόσχευμα [15], εκφράζουν την AR-H874Y μεταλλαγμένο [16] και πολλαπλασιάζονται σε μια ανδρογόνο στερηθεί περιβάλλον. AR αποτελείται από ένα NH

2-τερματικό πεδίο μετενεργοποίησης, ένα δεσμευτικό κεντρικό DNA τομέα, και έναν τομέα καρβοξυλ-τερματικό δέσμευσης συνδέτη (LBD) [17]. AR είναι πλήρους μήκους σε κύτταρα CWR-R1 που προέρχεται από το ανθρώπινο προστάτη ξενομόσχευμα καρκίνου του CWR22, αλλά είναι ευαίσθητο σε πρωτεολυτική αποικοδόμηση κατά την εκχύλιση σε μια σημαντική μορφή ~ 80 kDa [18]. AR μεταγραφική δραστηριότητα προκαλείται από τις λειτουργίες ενεργοποίησης στο NH

2-τερματικό και LBD. Μια μοναδική ιδιότητα του AR είναι ότι τα Τ ή DHT προκαλούν μια

2- και καρβοξυ-τερματικό (/C N) αλληλεπίδραση ΝΗ [19] που προκαλείται από το NH

2-τερματικό FXXLF μοτίβο [20] που επιβραδύνει συνδέτη διαστάσεως και την υποβάθμιση του AR. Ένας ρόλος του NH

2-τερματικό τομέα στη ρύθμιση των γονιδίων [21] – [24] έχει επίσης αναφερθεί για τη μη γονιδιωματικών σηματοδότηση AR [25]

Στην παρούσα μελέτη, CWR-R1. κύτταρα με γενετική μηχανική χρησιμοποιώντας φακοϊό ώστε να υπερεκφράζουν τον ανθρώπινο AR με μια διαγραφή του NH

2-τερματικά υπολείμματα 142 έως 337 ενεργοποίηση που καταλήγει σε ένα μεταγραφικά ανενεργή κυρίαρχο αρνητικό AR. Το ανθρώπινο διαγραφή AR μεταλλαγμένη ARΔ142-337 (ARΔTR) δεσμεύεται με συνδέτη με υψηλή συγγένεια αλλά είναι μεταγραφικά αδρανής σε απουσία ή παρουσία ανδρογόνων [26]. Ο μηχανισμός της κυρίαρχης αρνητικής δραστηριότητα είναι ετεροδιμερισμό με ενδογενή AR για την πρόληψη μετενεργοποίηση γονιδίων στόχων [27]. Τα αποτελέσματα υποδεικνύουν ότι η εντός του όγκου Τ και σύνθεσης DHT προκαλεί εξαρτάται κυρίαρχα αρνητικά ARΔTR αναστολή AR ανάπτυξης του όγκου CWR-R1. Το προφίλ των ανδρογόνων ΔTR μεταγωγή όγκους CWR-R1 απουσία Τ υποστηρίζουν την υπόθεση ότι τα επιθηλιακά κύτταρα CaP παράγουν συνδετήρες AR σε ένα μοντέλο ποντικού με χαμηλά έως μη ανιχνεύσιμα επινεφριδίων ανδρογόνων.

Αποτελέσματα

ARΔTR αναστέλλει AR τρανσενεργοποίηση και τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων CWR-R1

Η επίδραση της intracrine σύνθεση ανδρογόνων και ARΔTR αναστολή της ενδογενούς ανάπτυξης AR και τον ευνουχισμό επαναλαμβανόμενες ΚΓΠ προσδιορίστηκε στα κύτταρα CWR-R1 που προέρχεται από τον ευνουχισμό επαναλαμβανόμενες CWR22 ανθρώπινη CaP ξενομοσχεύματος. κύτταρα CWR-R1 μετάγονται με φακοϊό εκφράζουν ARΔTR ή LacZ υπό τον έλεγχο του υποκινητή CMV έδειξε υψηλή έκφραση (Εικ. 1). Η αποτελεσματικότητα του ARΔTR αναστολής της AR μεταγραφική δραστικότητα προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας MMTV-Luc επιμολύνθηκε σε φακοϊό-μεταδιηγερμένα κύτταρα CWR-R1 με την απουσία και παρουσία 0.1 ηΜ DHT επειδή το γονίδιο αντιγόνου λουσιφεράσης ειδικού προστατικού είναι μόνο ασθενώς ενεργοποιούνται από ενδογενείς AR [10], [21], [28]. Η προσθήκη 0,1 ηΜ DHT LacZ-μεταδιηγερμένα κύτταρα CWR-R1 αυξημένη δραστικότητα λουσιφεράσης κατά 3 φορές (Εικ. 2). Υπό τις ίδιες συνθήκες, η δραστικότητα λουσιφεράσης σε ARΔTR-μεταδιηγερμένα κύτταρα CWR-R1 ήταν χαμηλή, με ή χωρίς 0,1 ηΜ DHT, μια συγκέντρωση των ανδρογόνων που διεγείρει το μέγιστο γονίδια ανδρογόνο ρυθμίζονται σε κύτταρα CWR-R1 [29]. Τα αποτελέσματα δείχνουν μια κυρίαρχη αρνητική επίδραση της ARΔTR στην ενδογενή μετενεργοποίησης AR του MMTV-Luc απουσία και παρουσία του DHT.

ανάλυση στυπώματος Western των προϊόντων λύσης πρωτεΐνης CWR-R1 (20 μg) έδειξαν ότι η ενδογενής AR (Μ

r 110 kDa, λωρίδες 1-2) ανιχνεύεται τόσο ARΔTR και LacZ μεταχθέντα κύτταρα CWR-R1 χρησιμοποιώντας πολυκλωνικό αντίσωμα κατσίκας AR. LacZ (Μ

r 60,5 kDa, λωρίδα 1) έκφραση παρατηρείται μόνο σε LacZ-μεταδιηγερμένα κύτταρα CWR-R1 χρησιμοποιώντας LacZ κουνελιού πολυκλωνικό αντίσωμα και ARΔTR (Μ

r 84 kDa, λωρίδα 2) έκφραση ανιχνεύεται χρησιμοποιώντας AR κατσίκα πολυκλωνικό αντίσωμα σε ARΔTR-μεταδιηγερμένα κύτταρα CWR-R1. Η ενδογενής β-ακτίνης ανιχνεύθηκε χρησιμοποιώντας β-ακτίνης AC-15 μονοκλωνικό αντίσωμα ποντικού (Μ

r 43 kDa, λωρίδες 1 και 2) και υπηρέτησε ως έλεγχος φόρτωσης τόσο για ARΔTR και LacZ-μεταδιηγερμένα κύτταρα CWR-R1.

κύτταρα CWR-R1 επιμολύνθηκαν παροδικά με τον ανταποκριτή MMTV-λουσιφεράσης και προσδιορίστηκαν για δραστηριότητα λουσιφεράσης με την παρουσία και απουσία του DHT. Με την παρουσία 0.1 ηΜ DHT, κύτταρα CWR-R1 που εκφράζουν το διαγονίδιο LacZ έδειξε μια αύξηση στην MMTV-δραστικότητας ανταποκριτή λουσιφεράσης σε σύγκριση με κύτταρα ελέγχου χωρίς DHT. Έκφραση ARΔTR μειωμένη δραστικότητα ανταποκριτή MMTV-λουσιφεράσης υπό την απουσία ή παρουσία 0,1 ηΜ DHT σε σύγκριση με LacZ-μεταδιηγερμένα κύτταρα ελέγχου. Στήλες αντιπροσωπεύουν μέσες λουσιφεράσης δραστηριότητα σε σχετικές μονάδες φωτός από 3 ανεξάρτητα πειράματα? ράβδοι ± τυπική απόκλιση.

Η

Αναστολή της ενδογενούς μετενεργοποίησης AR από ARΔTR απουσία προστιθέμενης DHT εγείρει την πιθανότητα ότι η ενδογενής AR συνδέτες που επάγεται ARΔTR διμερισμό [30] και ετεροδιμερισμό μεταξύ ARΔTR και πλήρους μήκους ενδογενές AR [31]. Υγρή χρωματογραφία διαδοχική ανάλυση φασματομετρίας μάζας έδειξε 3,38 ± 0,26 fmol T /εκατομμύριο κύτταρα (n = 4) και 1,84 ± 0,16 fmol DHT /εκατομμύριο κύτταρα (η = 4) (Εικ. 3). Από AR διμερισμό και DNA δέσμευσης είναι ανδρογόνο-εξαρτώμενη [30], τα αποτελέσματα έδειξαν ότι ανασταλτική δράση ARΔTR μπορεί να χρησιμεύσει ως υποκατάστατο δείκτη για ενδοκυτταρική ενεργός ανδρογόνα.

DHT μετρήθηκε σε κύτταρα CWR-R1 που καλλιεργούνται χωρίς συμπληρώματα μέσων ή εξωγενείς Τ χρησιμοποιώντας υγρή χρωματογραφία διαδοχικής φασματομετρίας μάζας. Αντιπροσωπευτικά χρωματογράφημα της DHT (αριστερό πάνελ, DHT κορυφή στα 7.26 λεπτά) χρησιμοποιώντας 10 εκατομμύρια κύτταρα CWR-R1 (n = 4). Η μέση συγκέντρωση του DHT ήταν 1,84 ± 0,16 fmol /εκατομμύριο κύτταρα CWR-R1. Έλεγχος βαθμονομητή χρωματογράφημα DHT πρότυπο κορυφής δείχνει σε 7,29 min (δεξί πάνελ).

Η

Η επίδραση της ARΔTR επί της έκφρασης γονιδίου Nkx3.1 εξαρτώμενων από ανδρογόνα [32] αξιολογήθηκε περαιτέρω να χαρακτηρίσει την ανασταλτική δράση της ARΔTR για σηματοδότηση AR. Η προσθήκη του DHT μειωμένα επίπεδα πρωτεΐνης Nkx3.1 σε ARΔTR-μεταδιηγερμένα κύτταρα CWR-R1 (Εικ. 4), αλλά αυξήθηκε πρωτεΐνη Nkx3.1 σε LacZ-μεταδιηγερμένα κύτταρα ελέγχου CWR-R1. Η προσθήκη DHT αυξημένο κυτταρικό πολλαπλασιασμό CWR-R1-LacZ, αλλά δεν υπήρξε καμία αύξηση στην ARΔTR μεταγωγή του κυτταρικού πολλαπλασιασμού CWR-R1. Σε απουσία προστιθέμενης DHT, τόσο LacZ- και ARΔTR-μεταδιηγερμένα κύτταρα CWR-R1 εμφάνισε ελάχιστο πολλαπλασιασμό (Εικ. 5).

ανάλυση ανοσοστυπώματος των CWR-R1 προϊόντα λύσης πρωτεΐνης κυττάρου (20μg) προσδιορίστηκε Nkx3.1 έκφραση πρωτεΐνης χρησιμοποιώντας πολυκλωνικό αντίσωμα κατσίκας με την παρουσία ή απουσία 1.0 ηΜ DHT. Nkx3.1 (

r 35,5 kDa Μ) πρωτεΐνη ήταν αυξημένη σε LacZ-μεταδιηγερμένα κύτταρα CWR-R1 με την προσθήκη της DHT (λωρίδες 1 και 2). ARΔTR-μεταδιηγερμένα κύτταρα CWR-R1 εμφάνισε μειωμένη έκφραση πρωτεΐνης Nkx3.1 παρουσία DHT (λωρίδες 3 και 4). Η ενδογενής β-ακτίνης (Μ

R 43 kDa) χρησιμοποιήθηκε ως έλεγχος φόρτωσης (διαδρομές 1-4).

Η

Ο πολλαπλασιασμός των κυττάρων προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας ΧΤΤ

δοκιμασίας R και παρακολούθηση της απορρόφησης στα 490 /690 nm εις τριπλούν από την ημέρα 1 έως την ημέρα 8 (μέσος όρος ± τυπική απόκλιση). κύτταρα CWR-R1 εκφράζουν ARΔTR (στερεό διαμάντι και μαύρη γραμμή) ή LacZ (στερεά τετράγωνο και γκρι γραμμή) διαγονιδίου απουσία 0.1 ηΜ DHT έδειξαν παρόμοιες καμπύλες ανάπτυξης (άνω πάνελ). Με την παρουσία 0.1 ηΜ DHT, ARΔTR μεταγωγή της κυτταρικής ανάπτυξης CWR-R1 μειώθηκε σε σύγκριση με LacZ-μεταδιηγερμένα κύτταρα ελέγχου CWR-R1 (κάτω πλαίσιο).

Η

ARΔTR αναστέλλει την ανάπτυξη του όγκου CWR-R1

LacZ ή ARΔTR μεταγωγή κύτταρα ένεση σε γυμνά ποντίκια για να δημιουργήσει CWR-R1 όγκους να αξιολογήσει τον αντίκτυπο των ARΔTR στην αύξηση του όγκου και της ενδογενούς σηματοδότησης AR. ρυθμοί ανάπτυξης όγκου τροποποιήθηκαν με έκφραση ARΔTR. Μια αυστηρή μικτών μοντέλων στατιστικής ανάλυσης που θεωρείται τροχιές όγκο ατομική όγκου κατέδειξε σημαντικές διαφορές μεταξύ των 4 ομάδων (Εικ. 6). Ο ρυθμός αύξησης των ελέγχων LacZ διέφερε με εξωγενή Τ (ρ = 0,04) (Σχ. 6Α και 6Β), η οποία υποδεικνύεται διαφορετικά μάρτυρες που απαιτούνται για τις δύο πειραματικές ομάδες ARΔTR. ARΔTR μειωμένα ποσοστά ανάπτυξης όγκου σε σύγκριση με τους μάρτυρες, ένα αποτέλεσμα που ήταν παρόμοιο χωρίς (p = 0.01) ή με εξωγενή T (p = 0,0004) (Εικ. 6C και 6D). Τα αποτελέσματα ήταν παρόμοια όταν η ανάπτυξη του όγκου αξιολογήθηκε χρησιμοποιώντας δύο πρόσθετες παραμέτρους. LacZ και LacZ + Τ ελέγχων διέφερε από κλίση (p = 0.01) και ο χρόνος διπλασιασμού (p = 0,02), η οποία επιβεβαίωσε την ανάγκη για διαφορετικούς ελέγχους για κάθε ARΔTR πειραματική ομάδα. Τ συμπληρώματα για τη βελτιστοποίηση της λειτουργίας ARΔTR μειωμένη ανάπτυξη του όγκου σε σύγκριση με τους μάρτυρες με κλίση (p = 0,004) και του χρόνου διπλασιασμού (p = 0,0007). Χωρίς συμπληρώματα Τ, κλίση ανάπτυξη του όγκου (ρ = 0.07) και ο χρόνος διπλασιασμού (p = 0.37) ήταν παρόμοια. Επιθεώρηση των μεμονωμένων τροχιών όγκου και πραγματικού όγκοι του όγκου προτείνει ότι η επίδραση του ARΔTR ήταν ένας συνδυασμός της επιβράδυνσης του ρυθμού ανάπτυξης και καθυστερώντας την έναρξη της ανάπτυξης του όγκου, και ότι αυτή η επίδραση εμφανίσθηκε πιο συχνά όταν παρέχεται εξωγενής Τ για να ενισχύσει την επίδραση της ARΔTR (Σχ. 6Ε).

οι όγκοι μετρήθηκαν χρησιμοποιώντας ψηφιακό παχύμετρο και όγκοι υπολογίζονται από την ημέρα 14 έως την ημέρα 160 μετά τον εμβολιασμό κυττάρων CWR-R1. Οι όγκοι των όγκων, LacZ (A, n = 22), LacZ + T (B, n = 21), ARΔTR (C, η = 21) ή ARΔTR + T (D, n = 21), παρουσιάζονται από την ημέρα 21 όταν η ανάπτυξη ξεκίνησε μέσα από την ημέρα 96, πέραν του οποίου παρέμεινε μόνο 1 ποντίκι σε κάθε ομάδα. Μικτή μοντελοποίηση στατιστική ανάλυση έδειξε μία στατιστικά σημαντική διαφορά μεταξύ των 4 ομάδων. ARΔTR μεταγωγή του όγκου ρυθμούς ανάπτυξης CWR-R1 μειώθηκαν σε σύγκριση με LacZ ελέγχει απουσία (ρ = 0,01, πίνακας Α vs. C) ή παρουσία (p = 0,0004, πίνακας C έναντι D) του Τ (Ε) προβλεπόμενη μέση όγκοι του όγκου CWR-R1 (cm

3), συναρτήσει του χρόνου της πρώτης συγκομιδής του όγκου για την LacZ + Τ (ανοιχτά τετράγωνα), LacZ (ανοικτά διαμάντια), ARΔTR + T (συμπαγείς κύκλοι) και ARΔTR (ανοιχτοί κύκλοι) ομάδες . ARΔTR εκφράζουν CWR-R1 όγκους (κύκλοι) εμφανίζουν μειωμένη ρυθμούς ανάπτυξης σε σχέση με LacZ μεταγωγή κύτταρα ελέγχου CWR-R1.

Η

ARΔTR που προκαλείται από τις αλλαγές στο ρυθμό ανάπτυξης του όγκου που επλήγησαν επίσης το χρόνο της ευθανασίας καθορίζεται από μέγεθος του όγκου άνω των 1,5 εκατοστών

3 (Σχήμα 7, Kaplan-Meier οικόπεδο?. πίνακα 1, Συνδεθείτε ανάλυση rank, p = 0,009). διαστήματα εμπιστοσύνης 95% για τον μέσο χρόνο στην ευθανασία σε ημέρες και το εύρος για κάθε ομάδα ήταν LacZ (71, 68-84 ημέρες), LacZ + Τ (63, 57-68 ημέρες), ARΔTR (75, 68 έως 89 ημέρες) και ARΔTR + Τ (89, 68 έως 105 ημέρες). ARΔTR αύξησε το χρόνο για να φιλοξενήσει διάμεσος ευθανασία κατά 36% με την παρουσία του εξωγενούς Τ, αλλά είχε μικρή επίδραση χωρίς εξωγενή Τ μέσος χρόνος για την ευθανασία αυξήθηκε κατά 5% σε απουσία εξωγενούς Τ, μια διαφορά η οποία δεν ήταν στατιστικά σημαντική.

Ημέρα της ευθανασίας βασίστηκε σε 1,5 εκατοστά

3 μέγεθος όγκου για ποντίκια στο LacZ + Τ (διακεκομμένη γραμμή, n = 21), LacZ (διακεκομμένη γραμμή, n = 22), ARΔTR (συνεχής γραμμή, n = 21) ή ARΔTR + Τ (διακεκομμένη γραμμή, n = 21) ομάδες. Ο διάμεσος χρόνος επιβίωσης διέφεραν σε ομάδες που έλαβαν εξωγενή Τ (διακεκομμένη γραμμή εναντίον διακεκομμένη γραμμή, p = 0.008), αλλά όχι σε ομάδες χωρίς Τ (συνεχής γραμμή εναντίον διακεκομμένη γραμμή, p = 0.34).

Η

αρνητική επιλογή ARΔTR σε CWR-R1 όγκων

Ο παρόμοια χρόνος για ευθανασία με βάση το μέγεθος του όγκου μεταξύ CWR-R1-ARΔTR και LacZ ποντίκια απουσία ανδρογόνων πρότειναν ότι τα κύτταρα ARΔTR επιλέξτε κατά έκφραση ARΔTR . Για να ελεγχθεί αυτό, ο αριθμός αντιγράφων του φορέα και έκφραση πρωτεΐνης ARΔTR και LacZ προσδιορίστηκαν σε όγκους CWR-R1. ARΔTR ή LacZ αριθμούς διάνυσμα αντίγραφο και πρωτεΐνης έκφραση προσδιορίστηκαν σε μεταγωγή κύτταρα CWR-R1 πριν από τον εμβολιασμό και κατά το χρόνο της συγκομιδής του όγκου. ARΔTR ή LacZ αριθμός αντιγράφων του φορέα ανά κύτταρο μετράται σε CWR-R1-μεταδιηγερμένα κύτταρα πριν από τον εμβολιασμό με βάση την PCR ενίσχυση του ιού της ηπατίτιδας Woodchuck μετα-μεταγραφικό στοιχείο ρυθμιστής ήταν 5.46 και 4.53, αντίστοιχα. Μέσος όρος (± τυπική απόκλιση) αριθμός αντιγράφων του φορέα ανά κύτταρο για ARΔTR και LacZ-μεταχθέντα όγκους CWR-R1 κατά το χρόνο της συγκομιδής ήταν 0.49 ± 0.58 για ARΔTR + Τ και 2,58 ± 1,68 για ARΔTR (p = 0.001), και 3,10 ± 1,77 για LacZ + T και 3,48 ± 1,45 για LacZ (ρ = 0,4) (Εικ. 8).

αριθμός αντιγράφων του φορέα ανά κύτταρο καθορίστηκε χρησιμοποιώντας ποσοτική PCR του ιού της ηπατίτιδας Woodchuck μετα-μεταγραφικό στοιχείο ρυθμιστή. Ο μέσος αριθμός αντιγράφων του φορέα ανά κύτταρο είναι 0,49 ± 0,58 για ARΔTR + T, 2,58 ± 1,68 για ARΔTR, 3.10 ± 1.77 για LacZ + T και 3,48 ± 1,45 για όγκους LacZ. Μια στατιστικά σημαντική μείωση του αριθμού αντιγράφων του φορέα ανά κύτταρο παρατηρήθηκε για ARΔTR + T vs όγκους ARΔTR (p = 0.001), αλλά όχι LacZ + T έναντι LacZ (ρ = 0.4) όγκους.

Η

Για να χαρακτηριστεί περαιτέρω η επίδραση της ARΔTR επί αριθμού αντιγράφων φορέα, αναλογίες αριθμού αντιγράφων του φορέα ανά κύτταρο σε κύτταρα CWR-R1 υπολογίστηκαν κατά τη στιγμή της συγκομιδής του όγκου και κατά τη χρονική στιγμή πριν από τον ενοφθαλμισμό CWR-R1 κυττάρων για ARΔTR και LacZ όγκων με την παρουσία και απουσία Τ Στατιστική ανάλυση των διάμεσος αριθμός αντιγράφων του φορέα ανά κύτταρο αναλογίες όγκου για ARΔTR και LacZ φορείς έκφρασης έδειξαν ότι η έκφραση ARΔTR κασέτα φορέα επελέγη έναντι (ρ = 0,006, σχ. 9Α). Ένα παρόμοιο στατιστικό αποτέλεσμα ελήφθη στο μέσο αριθμό αντιγράφων του φορέα ανά κύτταρο αναλογία όγκου για ARΔTR και LacZ φορείς έκφρασης παρουσία Τ (ρ & lt? 0,0001, Σχήμα 9Β).. Συνολικά, ARΔTR-μεταδιηγερμένα κύτταρα CWR-R1 με την παρουσία ή απουσία εξωγενούς Τ επιλέγονται έναντι του φορέα ARΔTR σύγκριση με τους ελέγχους διάνυσμα LacZ.

Οι αναλογίες για το (Α) και ARΔTR LacZ, και (Β) ARΔTR + Τ και LacZ + Τ υπολογίστηκαν χρησιμοποιώντας τον αριθμό αντιγράφων του φορέα που μετράται κατά τη στιγμή της συγκομιδής του όγκου έναντι του αριθμού αντιγράφων του φορέα που μετράται πριν από τον εμβολιασμό. Ατομική αριθμού αντιγράφων φορέα όγκου ανά αναλογία των κυττάρων από κάθε ομάδα εκπροσωπείται χρήση ανοικτών κύκλους. Ο διάμεσος αριθμός αναλογία φορέα αντιγραφής (στερεό κύκλος) προσδιορίσθηκε σε ARΔTR (0,43), LacZ (0,64), ARΔTR + T (0.05), και LacZ + T (0.6) όγκους. Το διαγονίδιο ARΔTR επελέγη έναντι απουσία (p = 0,006) και παρουσία (ρ & lt? 0.0001) του εξωγενούς Τ σε σύγκριση με LacZ ελέγχει

Η

Η αλλαγμένη διάμεσος ARΔTR και LacZ αριθμός αντιγράφων του φορέα ανά κύτταρο όγκου. αναλογίες προτεινόμενες μειωμένη έκφραση πρωτεΐνης ARΔTR σύγκριση με τους ελέγχους LacZ. Συγκομιδής CWR-R1 όγκων με επαρκείς ποσότητες ιστού (79 όγκοι) για την ανάλυση των ενδογενών AR και εξέφρασε ARΔTR ή LacZ πρωτεΐνη αναλύθηκαν σε ανοσοστυπώματα. Η έκφραση του ενδογενούς AR και ARΔTR πρωτεΐνη αποδείχθηκε σε pTK989-ARΔTR μεταδιηγερμένα κύτταρα CWR-R1 πριν από την υποδόριο εμβολιασμό. ARΔTR-μεταδιηγερμένα CWR-R1 όγκων παρουσία Τ (Σχ. 10Α), που εκφράζεται ενδογενής AR σε όλες τις 22 CWR-R1-ARΔTR + Τ όγκους, αν και AR πρωτεΐνη ήταν χαμηλά έως μη ανιχνεύσιμα σε 3 δείγματα (δείγματα 21-23). Σε αντίθεση, ARΔTR πρωτεΐνη ήταν αμελητέα ή απούσα σε όλους τους όγκους CWR-R1-ARΔTR παρουσία συμπληρωμάτων Τ.

ανάλυση κηλίδος Western διεξήχθη χρησιμοποιώντας προϊόντα λύσης πρωτεΐνης που απομονώθηκε από CWR-R1 όγκοι συλλέγονται κατά τον χρόνο του όγκου συγκομιδή. Η έκφραση του όγκου CWR-R1 του ενδογενούς AR (Μ

r 110 kDa), και μετάγονται ARΔTR (ARΔ142-337, Μ

r 84 kDa) και LacZ (Μ

r 60,5 kDa) πρωτεΐνη αξιολογήθηκαν. (Α) ανοσοστυπώματα του AR και ARΔTR παρουσία Τ (αριθμοί όγκου 2-23) ή (Β) απουσία Τ (αριθμοί όγκου 24-29, 31-35, 38, 39, 43 και 44). (C) ανοσοστυπώματα του LacZ (Μ

r 60,5 kDa) πρωτεΐνη με T (αριθμοί όγκου 47-68) ή χωρίς Τ (αριθμοί όγκου 69 έως 91) και σε κενό ελέγχους φορέα (αριθμοί όγκου 92-95). LacZ εκφράστηκε σε όλα εκτός από ένα από 42 όγκων CWR-R1. LacZ πρωτεΐνη που εκφράζεται σε pTK1027 μεταδιηγερμένα κύτταρα CWR-R1 πριν την υποδόριο εμβολιασμό σε ποντικούς χρησιμοποιήθηκε για τον έλεγχο. κύτταρα ΗΕΚ-293Τ χρησιμοποιήθηκαν ως αρνητικοί μάρτυρες και ο έλεγχος φόρτωσης για LacZ ανοσοστυπώματα ήταν αφυδρογονάση της 6-φωσφορικής (GADPH, Μ

r 36 kDa).

Η

Σε περίπτωση απουσίας του συμπληρωματικού Τ, πρωτεΐνη AR επέμενε σε 10 από 15 CWR-R1-ARΔTR όγκους (αριθμοί όγκου 28, 29, 31, 32, 34, 35, 38, 39, 43 και 44), και ενδογενών AR δεν ανιχνεύθηκε σε 5 όγκους που επίσης δεν εκφράζουν ARΔTR (δείγματα 24-27 και 33) (Σχ. 10Β). CWR-R1-ARΔTR όγκους 32 και 35 χωρίς το συμπλήρωμα Τ εκφράζεται AR αλλά όχι ARΔTR. ARΔTR συν-εκφράζεται σε 8 CWR-R1 όγκους (αριθμοί όγκου 28, 29, 31, 34, 38, 39, 43 και 44).

Σε αντίθεση, LacZ πρωτεΐνη εκφράστηκε σε όλους τους όγκους εκτός όγκων 72 εν απουσία και παρουσία του Τ (Σχ. 10C). Αδειάστε όγκοι φορέα ελέγχου CWR-R1 με T (δείγματα 92 και 93) και χωρίς Τ (δείγματα 94 και 95) και τα κύτταρα 293Τ δεν εκφράζουν LacZ ή ARΔTR πρωτεΐνη. Η συνεπής έκφραση του LacZ πρωτεΐνη αντιστοιχούσε με τον αριθμό αντιγράφων του φορέα που υπολογίζεται LacZ μεταγωγή όγκων.

Τα αποτελέσματα υποδηλώνουν αρνητική επιλογή ARΔTR δεν περιορίζεται σε CWR-R1-ARΔTR όγκους πολλαπλασιάζονται σε ποντίκια με συμπληρωματικό T. Σε ARΔTR -transduced όγκους χωρίς συμπληρωματικό Τ, επιλογή ARΔTR ήταν λιγότερο πιθανόν λόγω της χαμηλής Τ ορό ή /και να μεταβληθεί βιοσύνθεση intracrine Τ.

intracrine σύνθεση δραστικών ανδρογόνων σε ευνουχισμό επαναλαμβανόμενες CaP

Η απουσία CYP17A1 σε επινεφρίδια ποντικού [33] παρέχει ένα μοντέλο για να ελέγξετε αν ο ευνουχισμός επαναλαμβανόμενες CaP παράγει intracrine ανδρογόνα. Γενιά των όγκων CWR-R1-ARΔTR έδωσε την ευκαιρία να ερευνήσει την επίδραση του AR σηματοδότησης για intracrine ενεργό ανδρογόνων βιοσύνθεση. Η ανάπτυξη του όγκου παρόμοια CWR-R1-ARΔTR, όγκου φορές και πλαγιές με και χωρίς Τ, και οι μετρήσεις της DHT διπλασιασμό σε κύτταρα CWR-R1 πρότεινε ότι CWR-R1 όγκοι παράγονται δραστικά ανδρογόνα απουσία κυκλοφορούντων Τ

Για να εντοπιστούν πιθανές διαφορές στην ανδρογόνων προφίλ μεταξύ CWR-R1-ARΔTR και οι όγκοι LacZ, Τ, DHT, ανδροστενεδιόνη και ανδροστερόνη μετρήθηκαν με τη χρήση υγρής χρωματογραφίας διαδοχικής φασματομετρίας μάζας. επίπεδα ιστού του 0.32 ηΜ DHT (p = 0.59) και 0.05 ηΜ ανδροστερόνη (p = 0.23) που μετράται κατά το χρόνο της συγκομιδής του όγκου ήταν παρόμοια σε ARΔTR και LacZ μεταγωγή όγκους (Πίνακας 2) και επαρκή για την ενεργοποίηση ενδογενών AR και ARΔTR (βλέπε

in vitro

αποτελέσματα? Εικ. 2). Επιπλέον, 3.25 ηΜ Τ σε όγκους LacZ ήταν παρόμοια με τα επίπεδα Τ σε ευνουχισμό επαναλαμβανόμενες CaP [4], [9], που ήταν επαρκής για να ενεργοποιήσει την ενδογενή AR-H874Y [29]. Ωστόσο, σε όγκους CWR-R1-ARΔTR, τα επίπεδα Τ ήταν ~ 4-φορές μικρότερη από LacZ όγκων, η οποία πρότεινε μεταβολή στη βιοσύνθεση Τ από την κυρίαρχη αρνητική AR. Μειωμένη βιοσύνθεση Τ σε ARΔTR μεταγωγή όγκους CWR-R1 συσχετίζεται με τη συσσώρευση των ~ 1 ηΜ ανδροστενεδιόνη, ένα ανδρογόνο προάγγελος T. Σε αντίθεση, CWR-R1-LacZ όγκοι περιείχαν 1,05 ηΜ ανδροστενοδιόνης. Η ποσοτικοποίηση των πρόδρομων ουσιών 5α-μειωμένη και ακόρεστων ανδρογόνων στο ARΔTR και LacZ μεταγωγή όγκους CWR-R1 πρότεινε intracrine βιοσύνθεση των ανδρογόνων συνέβαλαν στην AR-εξαρτώμενη ευνουχισμό επαναλαμβανόμενες ανάπτυξης της ΚΓΠ.

Η

Συζήτηση

μελέτες σε αυτή την έκθεση βασίζονται στην παραδοχή ότι ένα κυρίαρχο αρνητικό μορφή AR με τη διαγραφή του NH

2-τερματικό τομέα διενεργοποίησης απαιτεί ανδρογόνων για διμερισμό [30] και η αναστολή της μεταγραφικής δραστηριότητας του πλήρους μήκους AR [27] . Δείξαμε ότι η σταθερή έκφραση της κυρίαρχης αρνητικής ARΔTR αναστέλλει την ενδογενή AR-H874Y μεταγραφική δραστηριότητα και επιβραδύνει ή καθυστερεί την ανάπτυξη του όγκου CWR-R1 με την απουσία και την παρουσία του συμπληρωματικού Τ Κυρίαρχο δραστικότητα αρνητική ARΔTR επίσης υποδεικνύεται από τη μείωση Nkx3.1 πρωτεΐνη και η δραστηριότητα αναφοράς της λουσιφεράσης με την παρουσία του DHT.

τα αποτελέσματα της μελέτης έδειξαν δύο επιπλέον σημαντικά ευρήματα. Πρώτον, υπήρχε ουσιαστικά 100% αρνητική επιλογή έναντι του κυρίαρχου αρνητικού μορφή AR διάρκεια ευνουχισμού επαναλαμβανόμενες ανάπτυξης όγκου CWR-R1 παρουσία συμπληρωματικού T. Αυτό αντιπαραβάλλεται σχεδόν 100% κατακράτηση του γονιδίου ελέγχου LacZ. Τόσο κυρίαρχο αρνητικό ARΔTR και LacZ είχαν ενσωματωθεί στο γονιδίωμα χρησιμοποιώντας φακοϊού έκφραση και επιλογή των κυττάρων πριν από τον ενοφθαλμισμό των κυττάρων και την ανάπτυξη του όγκου. Δεύτερον, περίπου το 50% αποκλεισμό των κυρίαρχων αρνητικών AR συνέβησαν σε όγκους CWR-R1-ARΔTR πολλαπλασιάζονται απουσία συμπληρωματικού T. Τα αποτελέσματα αυτά, σε συνδυασμό με τις μετρήσεις φασματομετρίας μάζας των Τ και DHT σε καλλιεργημένα κύτταρα CWR-R1, παρέχουν αποδείξεις για τη σύνθεση intracrine των ενεργών ανδρογόνα που απαιτούνται για την AR σηματοδότησης στο καπάκι. Επιλεκτική απώλεια μιας κυρίαρχης αρνητικής AR καταδεικνύει τη γενετική μεταβλητότητα των κυττάρων CaP ευνουχισμού επαναλαμβανόμενες να μεγιστοποιήσουν σηματοδότησης AR.

intracrine σύνθεση των ανδρογόνων στον ευνουχισμό επαναλαμβανόμενες CaP

Η αναστολή της λουσιφεράσης δραστηριότητας CWR- R1 κύτταρα με κυρίαρχη αρνητική ARΔTR απουσία εξωγενούς Τ προτεινόμενες ενδοκυτταρική σύνθεση του Τ Αυτό υποστηρίχθηκε από μετρήσεις φασματομετρίας μάζας των Τ και DHT σε κύτταρα CWR-R1. Τα ευρήματά μας συμφωνούν με προηγούμενες ενδείξεις ότι ανδρογόνων-πεινασμένο κύτταρα LNCaP συνθέσουν ανδρογόνα από

14C-οξικό επισημανθεί χοληστερόλης [34]. κύτταρα CaP μεταβάλλουν τον μεταβολισμό και την επεξεργασία για την υποστήριξη των ανδρογόνων βιοσύνθεσης [35] χοληστερόλη. Intracrine βιοσύνθεση ανδροστενεδιόνη, DHEA και Τ καταδείχθηκε επίσης σε CWR-R1 και PC-3 κύτταρα, και εμπλέκονται δραστηριότητα CYP17A1 στο AR θετικά και αρνητικά κύτταρα CaP [36]. Σε κλινικά δείγματα, χοληστερόλη και ανδρογόνων βιοσυνθετικά ένζυμα up-ρυθμίζεται ευνουχισμός επαναλαμβανόμενες CaP [12], [37], [38].

Στους όγκους CWR-R1-LacZ, ενδοογκική επίπεδα Τ και DHT ήταν επαρκείς για την ενεργοποίηση AR-H874Y και την προώθηση της ανάπτυξης του όγκου. Η ενδονεοπλασματική επίπεδα DHT σε ARΔTR και LacZ μεταγωγή όγκοι ήταν παρόμοια. Ωστόσο, σε ARΔTR μεταγωγή όγκους ξενομοσχεύματος CWR-R1, τα επίπεδα Τ ήταν χαμηλότερα και τα επίπεδα ανδροστενοδιόνης ήταν μεγαλύτερες από όγκους CWR-R1-LacZ. Χαμηλότερα επίπεδα Τ στον όγκο CWR-R1-ARΔTR πρότεινε ότι κυρίαρχο αρνητικό ARΔTR επιλέγονται έναντι κυττάρων που εκφράζουν aldo-κετο αναγωγάσης 1C3, ένα ένζυμο που μειώνει ανδροστενεδιόνη σε Τ σε ευνουχισμό επαναλαμβανόμενες καπάκι, ή αύξησε την οξείδωση του Τ σε ανδροστενεδιόνη από NAD

+ εξαρτώμενη [39]. Μειώθηκε η μετατροπή της ανδροστενεδιόνης σε Τ θα μετατοπίσει το προφίλ ενδοκυτταρικό συνδέτη προς την ενεργοποίηση των μεταλλαγμένων AR-H874Y από άγριου τύπου AR LBD σε ARΔTR. Intracrine μεταβολισμό της χοληστερόλης σε δραστικά ανδρογόνα θα μπορούσε να εξηγήσει την αρχική ευαισθησία του ευνουχισμού επαναλαμβανόμενων CaP σε αγωγή με οξικό αμπιρατερόνη [14].

AR-H874Y ενδογενούς στα κύτταρα CWR-R1 διατηρεί υψηλή συγγένεια Τ και DHT πρόσδεσης παρόμοιες με άγριου τύπου AR. Ωστόσο, η μετάλλαξη H874Y σταθεροποιεί την δομή του πυρήνα LBD, έτσι ώστε το Τ είναι τόσο αποτελεσματικό όσο DHT στην προώθηση μεταγραφική δραστηριότητα [29]. Η δομή σταθεροποιητικές επιδράσεις της H874Y είναι επαρκείς για να ξεπεραστούν οι επιβλαβείς επιπτώσεις της απώλειας των μεταλλάξεων λειτουργίας που προκαλούν έλλειψης ευαισθησίας στα ανδρογόνα [40]. Η ισοδύναμη δραστικότητα των Τ και DHT με AR-H874Y υποδηλώνει ότι intracrine σύνθεση του Τ θα προωθήσει LacZ μεταγωγή ανάπτυξη του όγκου CWR-R1. Η ενδοκυτταρική μετατροπή της ανδροστενεδιόνης σε Τ θα μπορούσε να έχει σημαντική επίδραση επί της μεταγραφής AR-H874Y σε σχέση προς άγριου τύπου AR [29]. Αυξημένη έκφραση του P160 στεροειδών συνενεργοποιητές υποδοχέα σε ευνουχισμό επαναλαμβανόμενες CaP [41], [42] συνέβαλε στην υπερευαισθητοποίηση.

αναλογίες T:DHT σε LacZ- και ARΔTR-μεταχθέντα όγκους CWR-R1 ήταν παρόμοιες με εκείνες του ευνουχισμός επαναλαμβανόμενες CaP [4], [9], [43]. Προηγούμενες μελέτες χρησιμοποιώντας κλινικά δείγματα καταδείξει μειωμένη 5α-ρεδουκτάσης-2 ισοένζυμο mRNA [44] και την πρωτεΐνη [45] έκφραση σε ευνουχισμό επαναλαμβανόμενες CaP που ήταν εν μέρει λόγω της απώλειας του εκκρινόμενου παράγοντα στρωματικών κυττάρων σηματοδότηση [44], [46]. CWR-R1 όγκοι μπορεί επίσης να έχουν μειωμένη δραστικότητα 5α-ρεδουκτάσης-2. Τα παρόμοια επίπεδα DHT σε LacZ και ARΔTR όγκων υποδεικνύουν ότι βιοσύνθεση DHT εξαρτάται από ανδροστενεδιόνη αντί Τ, αφού ανδροστενεδιόνη είναι ένα καλύτερο υπόστρωμα για 5α-ρεδουκτάσης-1 από T [47]. Η μετατόπιση προς μετατροπή της ανδροστενεδιόνης σε ανδροστανοδιόνη [45] από 5α-ρεδουκτάσης-1 και περαιτέρω μεταβολισμό για να DHT με δεσμευμένο NADPH μεμβράνη εξαρτώμενη 17β-υδροξυστεροειδούς αφυδρογονάσης-15 [48] μπορεί να εξηγήσει γιατί οι άνδρες με ευνουχισμό επαναλαμβανόμενες ΚΓΠ και υψηλά επίπεδα ανδροστενεδιόνης βασικής γραμμής επέζησαν περισσότερο όταν έλαβαν θεραπεία με κετοκοναζόλη [49]. τα επίπεδα DHT παραμένουν παρόμοια ακόμη και αν οι αναλογίες T:androstenedione στην LacZ και ARΔTR όγκοι αντιστρέφεται. Τα χαμηλά και τα επίπεδα DHT παρόμοια (~ 10

-11) μετράται σε LacZ και ARΔTR-μεταχθέντα CWR-R1 όγκοι μπορεί να είναι η βέλτιστη συγκέντρωση εντός του όγκου για πολλαπλασιασμό CWR-R1 κυττάρου [42] και AR-H874Y συντονίζονται DNA αδειοδότησης αντιγραφής [ ,,,0],50].

Αρνητική επιλογή για την ενίσχυση της δραστηριότητας AR

η δράση αναστολής αναπτύξεως της ARΔTR περιπλέκονται από το γεγονός ότι το διαγονίδιο ARΔTR αρνητικά επιλεγεί κατά τη διάρκεια της ανάπτυξης του όγκου CWR-R1 πιο αποτελεσματικά στο παρουσία του συμπληρωματικού T. η έκφραση του διαγονιδίου ARΔTR χάθηκε σε όλες τις 22 ARΔTR + Τ όγκων με το χρόνο της συγκομιδής, ενώ το διαγονίδιο ARΔTR διατηρήθηκε σε -50% των όγκων με την απουσία του συμπληρωματικού Τ ο μέσος όγκος του όγκου ήταν μεγαλύτερη από ARΔTR + Τ όγκους, η οποία μπορεί να σχετίζεται με μια μερική αλλαγή από Τ σε ανδροστενοδιόνη βιοσύνθεση από τους όγκους αυτούς. Παρά το γεγονός ότι η χρονική στιγμή της αρνητικής επιλογής έναντι του διαγονιδίου ARΔTR δεν ελέγχονται αυστηρά, προκαταρκτικές μελέτες πρότειναν απώλεια του διαγονιδίου εμφανίστηκε περίπου 10 ημέρες μετά τον εμβολιασμό των καρκινικών κυττάρων κατά την ημέρα 23.

Αρνητική επιλογή του διαγονιδίου ARΔTR υποστηρίχθηκε από το μειώθηκαν γονιδίωμα αριθμός αντιγράφων του φορέα, τόσο ARΔTR και LacZ-μεταχθέντα όγκους CWR-R1 απουσία ή παρουσία εξωγενούς Τ απώλεια της έκφρασης του διαγονιδίου έχει δειχθεί ότι συμβαίνουν 10 έως 15 ημέρες αφού τα κύτταρα μεταδιεγείρονται λεντοϊού εμβρυϊκά καρκίνωμα [51]. Η καθυστέρηση στην ανάπτυξη του όγκου ARΔTR + Τ υποστηρίζεται επιλογή έναντι του διαγονιδίου μετά από 10 ημέρες στο μοντέλο CWR-R1. Θα μπορούσε να υποστηριχθεί ότι η απώλεια του διαγονιδίου προέκυψε από τη διαφυγή φορέα από ποικιλοχρωμία ή /και εκδηλώσεις εξαφάνιση. Από την άλλη πλευρά, τυχαίες γονιδίου ή χρωμοσωμική διαγραφή και διαγονιδίου σίγηση [51] δεν υποστηρίχθηκαν, καθώς δεν υπήρχε σχεδόν πλήρης συγκράτηση του διαγονιδίου LacZ ελέγχου στους όγκους CWR-R1.

Πρόσφατες μελέτες έχουν δείξει ότι η CWR -R1 κύτταρα, καθώς και τα γονικά ξενομοσχεύματα CWR22 καπάκι, περιέχουν αρμόδιες ρετροϊοί αντιγραφής πανομοιότυπος με τον ιό που σχετίζονται ξενοτροπικών λευχαιμίας ποντικού (XMRV) βρέθηκαν σε ανθρώπινα κύτταρα CaP [52], [53]. XMRV εξελίχθηκε με ανασυνδυασμό μεταξύ δύο ενδογενών ρετροϊών σε γυμνούς ποντικούς που φέρουν ξενομοσχεύματα CWR22 [52], [53].