Αφηρημένο

Το ακρυλαμίδιο, μία πιθανή καρκινογόνο για τον άνθρωπο, σχηματίζεται σε ορισμένα τρόφιμα πλούσια σε υδατάνθρακες σε επεξεργασία σε υψηλή θερμοκρασία. Αξιολογήσαμε εάν η πρόσληψη μέσω ακρυλαμίδιο, σε δόσεις (0.5, 1.0 ή 2.0 mg διατροφή /kg) αντανακλώντας ανώτερα επίπεδα βρέθηκαν σε ανθρώπινα τρόφιμα, διαμορφωμένο ογκογένεση του παχέος εντέρου σε δύο μοντέλα τρωκτικών. Αρσενικοί αρουραίοι F344 τυχαιοποιήθηκαν να λάβουν δίαιτες χωρίς (μάρτυρας) ή με ακρυλαμίδιο. 2-εβδομάδες αργότερα, οι αρουραίοι σε κάθε ομάδα έλαβε δύο εβδομαδιαία υποδόρια ενέσεις είτε αζοξυμεθάνιο (ΑΟΜ) ή φυσιολογικό ορό, και σκοτώθηκαν 20 εβδομάδες μετά τις ενέσεις? κόλον αξιολογήθηκαν για όγκους. Άρρεν αθυμικά γυμνά (

ηυ /ηυ

) ποντικούς φέροντες ΗΤ-29 αδενοκαρκινώματος κόλου ανθρώπου κύτταρα προερχόμενα ξενομοσχευμάτων όγκου έλαβαν δίαιτες χωρίς (μάρτυρας) ή με ακρυλαμίδιο? ανάπτυξη του όγκου παρακολουθήθηκε και τα ποντίκια θανατώθηκαν 4 εβδομάδες αργότερα. Στη μελέτη F344 αρουραίο, δεν παρατηρήθηκαν όγκοι βρέθηκαν στις παχύ έντερο των φυσιολογικό ορό αρουραίων. Ωστόσο, η συχνότητα εμφάνισης όγκου κόλου ήταν 54,2% και 66,7% στον έλεγχο και οι /kg ακρυλαμιδίου-αγωγή ομάδες ΑΟΜ με έγχυση 2 mg, αντίστοιχα. Ενώ πολλαπλότητα όγκου ήταν παρόμοια σε όλες τις ομάδες διατροφή, το μέγεθος του όγκου και το φορτίο ήταν υψηλότερες στην ομάδα kg 2 mg /ακρυλαμιδίου σε σύγκριση με τον έλεγχο ΑΟΜ. Αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν ότι το ακρυλαμίδιο από μόνη της δεν είναι μια «πλήρης καρκινογόνος», αλλά ενεργεί ως «συν-καρκινογόνο» από επιδεινώνοντας τις επιπτώσεις του ΑΟΜ. Το γυμνό ποντίκι μελέτη έδειξε καμία διαφορά στην ανάπτυξη των ανθρώπινων καρκινικών ξενομοσχευμάτων κόλον μεταξύ ακρυλαμιδίου αγωγή και τον έλεγχο ποντίκια, γεγονός που υποδηλώνει ότι το ακρυλαμίδιο δεν βοηθά στην εξέλιξη των εγκατεστημένων όγκων. Ως εκ τούτου, στα τρόφιμα ακρυλαμιδίου σε επίπεδα συγκρίσιμα με εκείνα που βρέθηκαν σε ανθρώπινα τρόφιμα δεν είναι ούτε μια ανεξάρτητη καρκινογόνο ούτε προάγει την ανάπτυξη όγκων του παχέος εντέρου. Ωστόσο, τα αποτελέσματά μας χαρακτηρίζουν ένα δυνητικό κίνδυνο του ακρυλαμιδίου ως άνω και κάτω τελεία συν-καρκινογόνο σε συνεργασία με γνωστούς και ενδεχομένως άλλα εμπνευστές του περιβάλλοντος όγκου /υποστηρικτές

Παράθεση:. Raju J, Roberts J, Sondagar C, Kapal Κ, Αζίζ Α.Ε., Caldwell D, et al. (2013) Αμελητέα καρκίνου του παχέος εντέρου Κίνδυνος από τροφιμογενείς ακρυλαμίδιο έκθεσης σε αρσενικούς αρουραίους F344 και Γυμνό (

nu /nu

) Ποντίκια-Bearing Ανθρωπίνων Colon Ξενομοσχεύματα όγκου. PLoS ONE 8 (9): e73916. doi: 10.1371 /journal.pone.0073916

Επιμέλεια: Jun Sun, του Πανεπιστημίου Rush Medical Center, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 6 Μάη του 2013? Αποδεκτές: 23, Ιουλίου 2013? Δημοσιεύθηκε: 5 Σεπτέμβρη του 2013

Copyright: © 2013 Raju et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Οικονομική ενίσχυση για την έρευνα αυτή δόθηκε από το σχέδιο διαχείρισης Χημικών Προϊόντων, Health Canada, την κυβέρνηση του Καναδά. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Η ανακάλυψη του ακρυλαμιδίου, μια κατηγορία 2Α πιθανή καρκινογόνο για τον άνθρωπο [1] και καρκινογόνο τρωκτικών [2-5], στο δημοφιλές και γρήγορα τρόφιμα [6] έχει εγείρει ανησυχίες για τη δημόσια υγεία [7]. Τα υψηλά επίπεδα ακρυλαμιδίου που σχηματίζεται στα τρόφιμα υποβάλλονται σε επεξεργασία σε υψηλές θερμοκρασίες (ψήσιμο και τηγάνισμα) μέσω της αντίδρασης Maillard μεταξύ της αμινομάδας της ασπαραγίνης και της καρβονυλομάδας αναγωγικών σακχάρων [8]. Τρόφιμα, όπως τηγανητές πατάτες, πατατάκια και τορτίγιας, ψητά φαγητά, δημητριακά πρωινού και καβουρδισμένου καφέ περιέχουν ακρυλαμίδιο σε μέρη ανά εκατομμύριο συγκεντρώσεις [9-13]. Μια πρόσφατη μελέτη διαπίστωσε ότι οι μη θηλάζουν τα βρέφη ηλικίας 6-12 μηνών εκτέθηκαν σε ακρυλαμίδιο από τα εμπορικά τρόφιμα με τη μέση ακρυλαμίδιο επίπεδο αποφασισμένος να είναι 73 μg /kg στο προϊόν του τύπου σε σκόνη και 10,5 μg /L σε πόσιμο προϊόντος [14]. Μόλις βρώση από τον άνθρωπο, το ακρυλαμίδιο και εποξείδιο μεταβολίτης glycidamide του μπορεί να συνδεθεί με την αιμοσφαιρίνη και το DNA για να σχηματίσουν προϊόντα προσθήκης, και μπορούν να αλληλεπιδράσουν με άλλες πρωτεΐνες στο κυτταρικό επίπεδο [15]. Η αναγνώριση τοξικοκινητική, απόκριση στη δόση και την επικινδυνότητα του ακρυλαμιδίου έχουν κομψά αναθεωρηθεί από Shipp et al. (2006) [15]. Η βιβλιογραφία είναι γεμάτη με τα πειραματικά δεδομένα που υποστηρίζουν τον χαρακτηρισμό του κινδύνου του ακρυλαμιδίου ως καρκινογόνος, genotoxin και νευροτοξίνη.

Σε μια μελέτη του τρωκτικού 2 ετών που έγιναν σύμφωνα με την Κατευθυντήρια Οδηγία Ελέγχου OECD-451, ακρυλαμίδιο (που χορηγείται στο πόσιμο νερό ) αύξησε τη συχνότητα εμφάνισης όγκου εντός του θυρεοειδούς αδένα και της στοματικής κοιλότητας και στα δύο φύλα, καθώς και τον αδένα του μαστού στις γυναίκες, και οι όρχεις στα αρσενικά [4]. Μελέτες σε διάφορα μοντέλα ποντικών του δέρματος και του καρκίνου του πνεύμονα έδειξαν ότι το ακρυλαμίδιο θα μπορούσαν να δράσουν τόσο ανεξάρτητα ως εκκινητή όγκου ή εξάρτηση από έναν παράγοντα προαγωγής για καρκινογόνο δράση της, ανάλογα με την επιλογή του ζωικού μοντέλου και της οδού χορήγησης [2,3]. Σε μια μελέτη τρωκτικό διάρκειας ζωής, ακρυλαμίδιο (σε πόσιμο νερό) αύξησε τη συχνότητα εμφάνισης όγκου εντός του αδένα του μαστού στις γυναίκες και στους όρχεις αδένας στα αρσενικά [5]. Σε μια μελέτη της Συρίας χάμστερ, τοξικότητα ακρυλαμιδίου που προκαλείται (χορηγείται μέσω του πόσιμου νερού), που προκαλούνται διαταραχές των περιφερικών νεύρων, hematotoxicity και τοξικότητα για τους όρχεις [16]. Η βιοδοκιμασία 2 ετών καρκίνο [4] και η μελέτη καρκινογένεσης διάρκειας ζωής [5] έδωσαν σπερματικού δεδομένα που περιγράφουν την καρκινογένεση του ακρυλαμιδίου και του παχέος εντέρου δεν αναγνωρίστηκε ως ένα όργανο-στόχο για τη δράση του ακρυλαμιδίου του. Η πρόσφατα δημοσιευμένη σε βάθος τοξικολογική αξιολόγηση του ακρυλαμιδίου από το Εθνικό Πρόγραμμα Τοξικολογίας του Υπουργείου Υγείας και Ανθρωπίνων Υπηρεσιών των Ηνωμένων Πολιτειών επιβεβαίωσε αυτά τα συμπεράσματα [17]. Στην έκθεσή τους, το στομάχι των αρσενικών και θηλυκών ποντικών B6C3F1 ταυτοποιήθηκε ως επιπλέον στόχος του ακρυλαμιδίου στις μελέτες 2-χρόνια καρκινογένεσης (ακρυλαμίδιο χορηγείται στο πόσιμο νερό σε 0,0875, 0,175, 0,35 ή 0,70 mm /kg σωματικού βάρους), με σαφείς ενδείξεις εμφάνισης δοσοεξαρτώμενη του προστομάχου πλακωδών κυττάρων θηλώματος ή καρκίνωμα [17]. Ευρήματα από δύο επιδημιολογικές μελέτες πρότειναν ότι δεν υπάρχει συσχέτιση μεταξύ διατροφικών ακρυλαμιδίου και τον κίνδυνο εμφάνισης καρκίνου του παχέος εντέρου στις γυναίκες [18] ή οι άνδρες [19]. Σε αντίθεση με αυτές τις επιδημιολογικές και άλλες πειραματικές αποδείξεις, Zhang (2009) ανέφεραν σε μια μελέτη που διεξήχθη με αρσενικούς αρουραίους Sprague-Dawley, αντιμετωπίζοντας την πρόκληση καρκίνου του παχέος εντέρου φυσιολογικών κρυπτών εστίες (ACF, θεωρούμενη του παχέος εντέρου προκαρκινικές αλλοιώσεις) και σχηματισμό όγκων με ε.π. έκθεση σε ακρυλαμίδιο σε δόση 10 mg /kg βάρους σώματος που χορηγείται 5 ημέρες την εβδομάδα για μια περίοδο 8 εβδομάδων [20]. Έχει αναφερθεί ότι ο αριθμός των ακρυλαμιδίου που προκαλείται ACF κόλου και όγκων ήταν σημαντικά υψηλότερα στους αρουραίους στις αραβοσιτέλαιο δίαιτες συμπληρωμένες 10% σε σύγκριση με αυτές της βασικής δίαιτας [20]. Σε μια άλλη μελέτη, οι αρουραίοι τρέφονται δίαιτες συμπληρωμένο με 10% ελαιόλαδο και 10% ιχθυέλαιο έδειξαν μειωμένο σχηματισμό ακρυλαμιδίου ACF επαγόμενη σε σύγκριση με εκείνες των βασικών δίαιτες [21]. Αυτές οι δύο μελέτες εμπλέκουν ακρυλαμίδιο ως ανεξάρτητη καρκινογόνο παχέος εντέρου, ιδιαίτερα στην απουσία οποιουδήποτε γνωστού καρκινογόνου που χρησιμοποιείται στο πρωτόκολλο τους [20,21]. Για την αντιμετώπιση είτε διατροφικές ακρυλαμιδίου σε δόσεις γνωστό ότι προκαλούν πολλαπλούς όγκους σε τρωκτικά θα αύξανε τον κίνδυνο καρκίνου του παχέος εντέρου, εμείς προηγουμένως διεξήγαγε μια βραχυπρόθεσμη βιοδοκιμασία (σχεδιασμός μελέτη 8 εβδομάδων) χρησιμοποιώντας το αζοξυμεθάνιο (ΑΟΜ) επαγόμενη τρωκτικών ACF παχέος εντέρου, όπως ένα παρένθετης βιοδείκτη [22]. Έχουμε αναφερθεί ότι τα διαιτητικά ακρυλαμιδίου (5 έως 50 mg /kg δίαιτας) δεν αύξησε το σχηματισμό ACF σε σύγκριση με τον μάρτυρα (χωρίς ακρυλαμίδιο στη δίαιτα) είτε χαμηλής ή υψηλής περιεκτικότητας σε λιπαρά δίαιτα σχήματα? Ωστόσο, μια τάση για την αύξηση της ACF παρατηρήθηκε στη χαμηλότερη δόση που ελέγχθηκε (5 mg ανά kg ακρυλαμίδιο δίαιτα) [22]. Οι ακριβείς τρόποι δράσης του ακρυλαμιδίου στο πολυσταδιακή διεργασία καρκινογένεσης, ως εκκινητή όγκου, προαγωγός ή συν-καρκινογόνο, παραμένουν ασαφείς από αυτές τις μελέτες. Επιπλέον, το πεδίο εφαρμογής της τα αποτελέσματα της έκθεσης χαμηλή και χρόνια από του στόματος ακρυλαμίδιο, ειδικά σε επίπεδα που αντανακλούν αυτά που βρίσκονται σε ανθρώπινα τρόφιμα, είναι ασαφής. Οι δόσεις του ακρυλαμιδίου που χρησιμοποιούνται στις περισσότερες μελέτες σε ζώα είναι σημαντικά υψηλότερες από εκείνες στις οποίες εκτίθενται οι άνθρωποι μέσω της δίαιτας. Έτσι, ο κύριος στόχος της παρούσας μελέτης ήταν να αξιολογήσει εάν ακρυλαμιδίου στη διατροφή, σε δόσεις που αντικατοπτρίζει τα υψηλότερα ανθρώπινα επίπεδα έκθεσης, προκαλεί καμία καρκινογένεση του παχέος εντέρου, χρησιμοποιώντας δύο καθιερωμένα ζωικά μοντέλα. Διαιτητικά ακρυλαμίδιο δεν ανεξάρτητα κινήσει σχηματισμό όγκων του παχέος εντέρου σε αρουραίους F344? Ωστόσο, όταν χορηγείται μαζί με ΑΟΜ, άνω και κάτω τελεία ειδικό καρκινογόνο, ακρυλαμίδιο (2 mg /kg δίαιτας) αύξησε το μέγεθος των όγκων του παχέος εντέρου που υποδηλώνει συν-καρκινογόνο δράση στο κόλον. Επιπλέον, διατροφικές ακρυλαμιδίου δεν επιδεινώσουν την ανάπτυξη των ξενομοσχευμάτων ανθρώπινου όγκου κόλου σε γυμνά (

nu /nu

) ποντίκια.

Μέθοδοι

Δήλωση Ηθικής

το ζώο πειραματικό πρωτόκολλο της μελέτης εγκρίθηκε από την Οτάβα Επιτροπή Φροντίδας Υγείας των ζώων του Καναδά (ACC Νο 2010-015), και τα ζώα φροντίζονται σύμφωνα με τις κατευθυντήριες γραμμές του Συμβουλίου καναδική για τη φροντίδα των ζώων.

ζώα , την κτηνοτροφία και δίαιτες

οι αρσενικοί αρουραίοι F344 και γυμνό (

nu /nu

) ποντίκια, απογαλακτίζονται σε μια ημι-συνθετικό διατροφής [23], είχαν αγοραστεί από τον Charles River Laboratories (Κεμπέκ, Καναδάς ). Κατά την άφιξη στο χώρο στέγασης των ζώων μας, όλα τα ζώα εγκλιματίστηκαν για 1 εβδομάδα σε εργαστηριακές συνθήκες. Η θερμοκρασία και η σχετική υγρασία ελέγχονταν στους 22 ° C και 55%, αντίστοιχα, με μια /σκότους 12 ωρών φωτός 12 ώρες. Τα ζώα είχαν ελεύθερη πρόσβαση σε πειραματικές δίαιτες και πόσιμο νερό

κατά βούληση

. Δίαιτες ελήφθησαν από Research Δίαιτες, Inc. (New Brunswick, New Jersey, USA) υπό μορφή σκόνης και βασίστηκαν σε ΑΙΝ-93g ημι-συνθετικά τύπου τροποποιηθεί ώστε να περιέχει 7% αραβοσιτέλαιο [23]. Ακρυλαμίδιο (≥ 99% καθαρό? Sigma Chemical Co., Missouri, USA) σε δόσεις των 0,5 mg, 1,0 mg και mg ανά kg τροφής 2.0 αναμίχθηκε με δίαιτες χρησιμοποιώντας ένα ανάμεικτη Hobart και στη συνέχεια κατασκευάζεται σε πέλετ χρησιμοποιώντας μία πρέσα σύμπηξη (θερμοκρασία δεν ξεπέρασε ποτέ τους 35 ° C) σε εγκατάσταση παρασκευή διατροφή μας. Η δίαιτα χωρίς καμία προσθήκη ακρυλαμιδίου (0 mg) εκπροσωπεί βασική δίαιτα. Δίαιτες φυλάχθηκαν στο σκοτάδι στους 4 ° C μέχρι τη χρήση. Οι δίαιτες ήταν αναπληρώνονται και την κατανάλωση τροφής μετρήθηκε σε εβδομαδιαία βάση. Οι αρουραίοι παρακολουθήθηκαν καθημερινά και τα σωματικά βάρη τους καταγράφηκαν δύο φορές την εβδομάδα. Τα ζώα θανατώθηκαν με αφαίμαξη υπό αναισθησία με ισοφλουράνιο πριν από τη συγκέντρωση όγκοι και τα όργανα. Το ειδικό πειραματικό σχεδιασμό για τις δύο μελέτες που χρησιμοποιούν αρουραίους F344 και γυμνούς ποντικούς φαίνονται στο Σχήμα 1.

Οι αριθμοί σε κουτιά απεικονίζουν το χρόνο (σε εβδομάδες) μετά τα ζώα έφτασαν στο χώρο στέγασης μας. Και στις δύο μελέτες, μία περίοδο εγκλιματισμού μίας εβδομάδας διατηρήθηκε πριν από συγκεκριμένες επεμβάσεις. Δίαιτες βασίστηκαν σε ΑΙΝ-93g ημι-συνθετικά σκεύασμα και οι τέσσερις πειραματικές δίαιτες διέφεραν μεταξύ τους ως προς το επίπεδο του ακρυλαμιδίου προστίθενται: 0 (μάρτυρας), 0,5, 1,0 και 2,0 mg /kg τροφής. Όλα τα ζώα παρέμειναν στις αντίστοιχες πειραματικές δίαιτες μέχρι τη νεκροψία.

Η

Πειραματικός σχεδιασμός και όγκου υπολογισμούς

μελέτης F344 αρουραίους.

Οι αρσενικοί αρουραίοι F344 (ηλικίας 7 εβδομάδων) τυχαιοποιήθηκαν σε μία από τις τέσσερις πειραματικές δίαιτες. Μετά από 2 εβδομάδες, οι αρουραίοι σε κάθε ομάδα δίαιτα είχαν υποδιαιρείται να λάβουν s.c. ενέσεις είτε ΑΟΜ (Sigma Chemical Co., Missouri, USA? 15 mg /kg σωματικού βάρους? n = 24 αρουραίοι /ομάδα δίαιτα) ή φυσιολογικού ορού (0.2 ml /αρουραίο? n = 8 αρουραίοι /ομάδα δίαιτα) μία φορά την εβδομάδα για 2 εβδομάδες (βλέπε σχήμα 1). Όλοι οι αρουραίοι από τις πειραματικές δίαιτες για 20 εβδομάδες μετά τις ενέσεις ΑΟΜ /αλατούχο διάλυμα, μετά την οποία σκοτώθηκαν. Άνω και κάτω τελεία αποκόπηκαν, ξεπλένονται με παγωμένο PBS, και σχισμή ανοικτή κατά το μήκος από τον πρωκτό προς το τυφλό έντερο σε μια κρύα πλάκα. Μακροσκοπικές αλλοιώσεις και οι όγκοι αξιολογήθηκαν για το μέγεθος και τη θέση κατά μήκος του παχέος εντέρου, αποκόπηκαν και καταψύχθηκαν ταχέως σε RNA

αργότερα

™ σταθεροποιητικό παράγοντα (Life Technologies, Grand Island, Νέα Υόρκη, ΗΠΑ) σε υγρό N

2 για μοριακή ανάλυση ή αποθηκεύονται σε 10% ρυθμισμένη φορμαλίνη για παθολογία. Τμήματα (1 cm) του άπω και εγγύς τμήματα των κόλον αποκόπηκαν και σταθεροποιήθηκαν με επίπεδη μεταξύ διηθητικών χαρτιών σε 10% ρυθμισμένη φορμαλίνη για παθολογία? το υπόλοιπο των άνω και κάτω τελείες (άπω και εγγύς ξεχωριστά) ξύστηκαν με γυάλινες διαφάνειες για τη συλλογή του στρώματος του βλεννογόνου και καταψύχθηκαν ταχέως σε υγρό N

2 για μελλοντική ανάλυση. παράμετροι Colon όγκος που προέρχεται από τα δεδομένα του μεγέθους του όγκου και της θέσης καταγράφονται κατά τη στιγμή της νεκροψίας περιλαμβάνουν: (α) εμφάνιση όγκου (ποσοστό των συνολικών ζώων με όγκους)? (Β) τον αριθμό των όγκων (μέσος αριθμός των όγκων ανά αρουραίο που φέρει όγκο)? (Γ) μέσο μέγεθος του όγκου (mm

2) ανά ομάδα? και (δ) του φορτίου του όγκου (μέσος όρος της συνολικής έκτασης του όγκου ανά όγκο που φέρουν αρουραίος), όπως περιγράφεται από 24.

Γυμνό μελέτη του ποντικιού (ηυ /ηυ).

Άντρας αθυμικά γυμνά (

ηυ /ηυ

) ποντίκια (ηλικίας 6 εβδομάδων) στεγάστηκαν σε μια εγκατάσταση απομόνωσης Level-ΙΙ και διατηρήθηκε κάτω από στείρες συνθήκες. Μια εβδομάδα μετά εγκλιματισμό, τα ποντίκια ενέθηκαν υποδορίως στην δεξιά κνήμη με ΗΤ-29 κύτταρα ανθρώπινου αδενοκαρκινώματος κόλου (2 × 10

6 κύτταρα) εναιωρήθηκαν σε 100 μΙ ελεύθερο ορού του McCoy 5Α media (Hyclone Laboratories Inc., South Logan, Utah, USA). Μετά από 3 εβδομάδες, οι ποντικοί τυχαιοποιήθηκαν σε μία από τις 4 πειραματικές δίαιτες (n = 12 ποντίκια /ομάδα δίαιτα) (βλέπε Σχήμα 1). Τα ποντίκια ψηλάφηση δύο φορές την εβδομάδα και όγκου ξενομοσχεύματα μετρήσεις καταγράφηκαν ανεξάρτητα από δύο τεχνικούς. Τέσσερις εβδομάδες αργότερα, τα ποντίκια έχασαν τη ζωή τους? τα ξενομοσχεύματα όγκων ζυγίστηκαν και είτε αποθηκεύεται σε 10% ρυθμισμένη φορμαλίνη για παθολογία μαζί με un-εμπλέκονται περιβάλλοντα ιστό ή κουμπωτά καταψύχθηκαν σε υγρό Ν

2 για μοριακή ανάλυση. Οι μετρήσεις του όγκου καταγράφηκαν για 5 χρονικές περιόδους, αρχίζοντας από την εβδομάδα οι δίαιτες ακρυλαμιδίου εισήχθησαν μέχρι νεκροψία. Ο όγκος του όγκου υπολογίστηκε χρησιμοποιώντας τον τύπο 0,5236 × L

1 (L

2)

2, όπου το L

1 και L

2 είναι οι διάμετροι κάθε όγκου στο μεγαλύτερο και μικρότερο σημεία , αντίστοιχα. Η ανάπτυξη του όγκου υπολογίζεται ως η μεταβολή στο μέγεθος του όγκου ανά εβδομάδα (αναπαρίσταται ως επί τοις εκατό) που αρχίζει κατά την εισαγωγή των πειραματικών τροφών (3 εβδομάδες μετά την ένεση με κύτταρα) για ένα σύνολο 4 εβδομάδων.

Tumor παθολογία

φορμαλίνη όγκους σταθερό κόλον (μαζί με τα παρακείμενα κανονικής εμφανίζεται βλεννογόνο) από τους αρουραίους F344 ΑΟΜ με έγχυση και τα ξενομοσχεύματα όγκου από γυμνούς ποντικούς εμπεδώθηκαν σε παραφίνη, χωρισμένο σε 5 μm, και χρωματίστηκαν με αιματοξυλίνη και ηωσίνη (Η &? Ε) για την παθολογική ταξινόμηση. Colon όγκους από τους αρουραίους F344 ταξινομήθηκαν σύμφωνα με Whiteley et al. (1996) [25], και οι ξενομοσχεύματα όγκου κόλου από γυμνά ποντίκια ταξινομήθηκαν σύμφωνα με το σχήμα της ΠΟΥ για όγκους του παχέος εντέρου και του ορθού [26]. Στο γυμνό μελέτη ποντικού, εκτός από τις ξενομοσχεύματος όγκους από κάθε ποντικό, άλλα όργανα (εγκέφαλος, συκώτι, πνεύμονα, και το βουβωνικό λεμφαδένα) συλλέχθηκαν και εξετάστηκαν μικροσκοπικά για μεταστάσεις.

Ανοσοϊστοχημική ποσοτικοποίηση του πολλαπλασιασμού και απόπτωση

Μη προετοιμασμένο τομές (πάχους 5 μm) των ξενομοσχευμάτων κόλον από τα γυμνά ποντίκια χρησιμοποιήθηκαν για όλες τις ανοσοϊστοχημικές ανιχνεύσεις. Για τον πολλαπλασιασμό, οι τομές πρώτα υποβλήθηκαν σε ανάκτηση αντιγόνου με θέρμανση σε 10 mmol ρυθμιστικού διαλύματος κιτρικού νατρίου /L σε φούρνο μικροκυμάτων επί 2,5 λεπτά. Το πυρηνικό αντιγόνο μονοκλωνικό ποντικού αντι-πολλαπλασιαστικά κυττάρων (PCNA)? Σε αραίωση 1 (Cat # M0879 DakoCytomation, Carpinteria, CA, USA).: 10000 χρησιμοποιήθηκε ως το πρωτογενές αντίσωμα. Η EnVision ™ + System (Cat. # K4007, DakoCytomation, Carpinteria, CA, USA), χρησιμοποιώντας ένα δευτερεύον αντίσωμα αντι-ποντικού συζευγμένο με υπεροξειδάση αρμορακίας και επακόλουθη ανίχνευση με διαμινοβενζιδίνη, χρησιμοποιήθηκε σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Για την απόπτωση, η ApopTag® Plus υπεροξειδάσης σε Situ Apoptosis Kit (Cat # S7101?. Chemicon Inc., Canada) χρησιμοποιήθηκε σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Αυτό το τερματικό δεοξυνουκλεοτιδυλοτρανσφεράσης dUTP nick τέλος επισήμανση (ΤΟΥΝΕΛ) μέθοδος δοκιμασίας που βασίζεται ανιχνεύει πρώιμη απόπτωση μέσω του κατακερματισμού του DNA από ενζυματική επισήμανση της ελεύθερης άκρα 3′-ΟΗ με τροποποιημένα νουκλεοτίδια. Εν συντομία, οι τομές υποβλήθηκαν σε ένα ένζυμο πέψη των πρωτεϊνών για τη σβέση της ενδογενούς υπεροξειδάσης, που ακολουθείται από εφαρμογή ενός ρυθμιστικού εξισορρόπησης και επώαση με το ένζυμο TdT, πριν από τη διακοπή της αντίδρασης με την προσθήκη αντι-διγοξιγενίνης ρυθμιστικό σύζευξης. Αυτό ακολουθήθηκε από επώαση των τμημάτων του υποστρώματος υπεροξειδάσης και αντικηλίδωση χρήση πράσινου μεθυλίου.

Για τον προσδιορισμό του δείκτη επισήμανση των μιτωτικών κυττάρων (PCNA-θετική) και τα αποπτωτικά κύτταρα (TUNEL θετικά), δέκα καλά προσανατολισμένη πεδία αξιολογήθηκαν ανά τμήμα ξενομόσχευμα παχέος εντέρου. Ο δείκτης σήμανσης PCNA /απόπτωση υπολογίστηκε χρησιμοποιώντας το λογισμικό Northern Eclipse Έκδοση 7.0 (Empix Imaging, Inc., Mississauga, ON, Καναδάς). Μια αναλογία των μιτωτικών /αποπτωτικών κυττάρων ανά τμήμα υπολογίστηκε.

Στατιστική ανάλυση

Τα στοιχεία αναλύθηκαν με μονόδρομη ANOVA χρησιμοποιώντας SigmaStat® 3,1 λογισμικού (Systat Software Inc., Point Richmond, Καλιφόρνια, ΗΠΑ). Σε όλες τις στατιστικές δοκιμές,

σ

& lt? 0.05 θεωρήθηκε σημαντική.

Αποτελέσματα

μελέτη σε αρουραίους F344

Γενικές παρατηρήσεις.

Το βάρος του σώματος (μέση τιμή ± SEM) των αρουραίων κατά την έναρξη της πείραμα (κατά το χρόνο της πρώτης ένεσης) ήταν 228,8 ± 5,5 g και 225,7 ± 3,6 g αλμυρών και ΑΟΜ ομάδες, αντίστοιχα. Δεν παρατηρήθηκαν σημαντικές διαφορές στην αύξηση του σωματικού βάρους μεταξύ του ελέγχου (0 mg ακρυλαμίδιο) και αρουραίους ακρυλαμιδίου αγωγή βρέθηκαν σε είτε φυσιολογικό ορό ή ομάδες ΑΟΜ (Σχήμα 2). Τελική σωματικά βάρη των αρουραίων δεν διέφεραν σημαντικά μεταξύ των διαφόρων ομάδων δίαιτα σε saline- ή ΑΟΜ αρουραίοι με ένεση (Πίνακας 1). Δεν παρατηρήθηκαν διαφορές για το ήπαρ και τη σπλήνα βάρη (που υπολογίζεται ως g ανά kg σωματικού βάρους) μεταξύ των ομάδων που έλαβαν ακρυλαμιδίου και των αντίστοιχων ελέγχων τους είτε saline- ή ΑΟΜ-αγωγή ομάδες (Πίνακας 1). Η κατανάλωση τροφής υπολογίστηκε ως μέσες τιμές (g ανά kg σωματικού βάρους ανά ημέρα), και δεν ήταν διαφορετική μεταξύ ελέγχου και ακρυλαμιδίου αρουραίους που έλαβαν είτε αλατούχο διάλυμα ή ομάδες ΑΟΜ (Πίνακας 1). Με βάση την καταγεγραμμένη κατανάλωση τροφής για κάθε μεμονωμένο διαιτητικές ομάδα στις υποστεί αγωγή με αλατόνερο αρουραίους, η πρόσληψη ακρυλαμιδίου για συγκεντρώσεις 0,5, 1 και 2 mg ακρυλαμίδιο ανά kg τροφής που χρησιμοποιείται στη μελέτη μας υπολογίστηκαν ως 0.017, 0.035 και 0.070 mg ακρυλαμιδίου ανά kg σωματικού βάρους ανά ημέρα, αντίστοιχα. Μια παρόμοια τάση παρατηρήθηκε στους αρουραίους ΑΟΜ-αγωγή, με την υπολογισμένη πρόσληψη 0.018, 0.036 και 0.072 mg ακρυλαμίδιο ανά kg σωματικού βάρους ανά ημέρα για τις συγκεντρώσεις 0,5, 1 και 2 mg ανά kg ακρυλαμίδιο δίαιτα, αντίστοιχα.

το σωματικό βάρος (μέση τιμή ± SE, ζ) την εβδομάδα αρουραίων F344 ένεση με (α) αλατούχο διάλυμα ή (β) ΑΟΜ και υποβλήθηκε σε επεξεργασία με ακρυλαμίδιο σε 0 (μάρτυρας), 0,5, 1,0 και 2,0 mg /kg τροφής.

Η ελέγχου

ακρυλαμίδιο

Η

0,5 mg /kg

1,0 mg /kg

2,0 mg /kg

φυσιολογικό ορό αρουραίους (

n

= 8 /ομάδα) Φορέας Weight459.5 ± 7.9483.9 ± 7.4469.5 ± 9.8465.6 ± 5.9 (ζ) Liver3.14 ± 0.043.19 0.053.13 ± ± 0.033.08 ± 0,06 (g /100g BW) Spleen0.173 ± 0.0020.182 ± 0.0040.180 ± 0.0030.181 ± 0,002 (g /100g BW) Τρόφιμα intake35.4 ± 0.234.8 ± 0.134.7 ± 0.235.2 ± 0,1 (g /kg σωματικού βάρους /ημέρα ) αρουραίους ΑΟΜ-ένεση (

n

= 24 /ομάδα) Φορέας Weight424.4 ± 5.7440.3 ± 7.5436.0 ± 5.9436.2 ± 5.9 (ζ) Liver2.79 ± 0.032.80 0.062.77 ± ± 0.052.75 ± 0,04 (g /100g BW) Spleen0.216 ± 0.0230.215 ± 0.0230.187 ± 0.0030.189 ± 0,003 (g /100g BW) intake36.3 Τροφίμων ± 0.535.8 ± 0.435.9 ± 0.435. 5 ± 0,4 (g /kg σωματικού βάρους /ημέρα) Πίνακας 1. και όργανα του σώματος βάρη saline- και ΑΟΜ-ένεση ποντίκια που τρέφονται οι δίαιτες με ή χωρίς ακρυλαμιδίου για 24 εβδομάδες.

α, β

CSV Λήψη CSV

Ανεξάρτητα από την διαιτητική θεραπεία, κανένας από τους αρουραίους εμφάνισαν σημεία τοξικότητας, δυσφορία ή ανωμαλίες συμπεριφοράς μέχρι 18 εβδομάδες μετά-ΑΟΜ /ένεση φυσιολογικού ορού. Ωστόσο, ενέσεις σε 19 εβδομάδες μετά-ΑΟΜ /αλατούχο διάλυμα, περισσότερο από το 30% των ΑΟΜ-αρουραίοι με ένεση είχε αίμα στα κόπρανα τους, ενώ κανένας από τους φυσιολογικό ορό αρουραίοι είχαν τέτοια σημεία. Κατά τη σύγκριση αυτή την επίδραση (τοις εκατό των αρουραίων με αίμα στα κόπρανα /ομάδα τους) σε διατροφικές ομάδες, η μόνη αξιοσημείωτη παρατήρηση ήταν ότι περισσότερο ΑΟΜ αρουραίοι με ένεση στην υψηλότερη δόση του ακρυλαμιδίου (2 mg /kg δίαιτας) είχε αίμα στα κόπρανα τους ( 41,7%) σε σύγκριση με τον έλεγχο (29,2%) και τις άλλες δύο ομάδες δόσεων των 0,5 και 1 mg /kg (25,0% και 29,2%, αντίστοιχα). Ως εκ τούτου, η μελέτη τερματίστηκε στις 20 εβδομάδες, 6 εβδομάδες πριν από την αρχικά προτεινόμενη ώρα.

δεδομένα όγκου.

Στο τέλος των 20 εβδομάδων μετά την ένεση-ΑΟΜ /φυσιολογικό ορό, κανένας από το φυσιολογικό ορό -εγχυθέντα αρουραίους ούτε στις δίαιτες ελέγχου ή ακρυλαμίδιο είχαν αναπτύξει όγκους κόλου (Πίνακας 2). Μια συχνότητα εμφάνισης όγκου κόλου από 54,17% παρατηρήθηκε στα ΑΟΜ αρουραίοι με ένεση στην δίαιτα ελέγχου. Δεν παρατηρήθηκαν σημαντικές διαφορές στη συχνότητα των όγκων μεταξύ του ελέγχου και των ομάδων ακρυλαμιδίου-αγωγή (

σ

= 0.695). Tumor πολλαπλότητα ήταν παρόμοια μεταξύ των διαφόρων διατροφικών ομάδων. Ωστόσο, το μέσο μέγεθος των όγκων ανά αρουραίο και το φορτίο του όγκου (συνολική έκταση του όγκου ανά φέρει όγκο αρουραίου) ήταν σημαντικά υψηλότερο (

ρ

& lt? 0,05) στην ομάδα υψηλότερης δόσης ακρυλαμίδιο από 2 mg /kg δίαιτας σε σύγκριση με τον έλεγχο. Καμία διαφορά στο μέγεθος του όγκου και το βάρος σημειώθηκε στις άλλες δύο ομάδες ακρυλαμιδίου της δίαιτας 0,5 mg /kg (

σ

= 0.933,

σ

= 0,959, αντίστοιχα) και 1 mg /kg τροφής (

σ

= 0.978,

σ

= 0,741, αντίστοιχα).

Η ελέγχου

ακρυλαμίδιο

Η

0,5 mg /kg

1,0 mg /kg

2,0 mg /kg

φυσιολογικό ορό αρουραίους

Η

Η

Σύνολο αρουραίους

8

8

8

8

όγκων που φέρουν αρουραίους

0

0

0

0

όγκου συχνότητα

β

0

0

0

0

ΑΟΜ-ένεση ratsTotal rats24242424Tumor φέρουν rats13141216Tumor συχνότητα

b54.1758.3350.0066.67Total Tumors22191625Tumor πολλαπλότητα

c1.69 ± 0.321.36 0.181.33 ± ± ± 0.141.56 0.24Tumor μέγεθος

C ( mm

2) 10,68 ± 1.856.91 ± 1.1613.68 ± 4.0425.18 ± 8,34 * όγκων βάρος

c, d (mm

2) 19.27 ± 3.928.75 ± 2.7417.93 ± 3.1135.52 ± 9,96 * Πίνακας 2. παράμετροι Colon του όγκου των saline- και ΑΟΜ-ένεση ποντίκια που τρέφονται οι δίαιτες με ή χωρίς ακρυλαμιδίου για 24 εβδομάδες.

α

CSV Λήψη CSV

στο πλαίσιο ταξινόμησης που προτείνεται από Whiteley et al. (1996) [25], οι όγκοι του κόλου στα ΑΟΜ αρουραίοι με ένεση μειώθηκε στις ακόλουθες κατηγορίες: (α) σωληνοειδές αδένωμα (ΤΑ), στο οποίο τουλάχιστον το 75% της μάζας αποτελείται από καλά διαφοροποιημένο σωληναρίων? (Β) αδενοκαρκίνωμα (AC) -2 εισβάλλουν σε Υποβλέννιο? (Γ) AC-3 που αντιπροσωπεύει βλεννώδες τύπου βλάβη εισβάλλουν σε υποβλεννογόνιο? (Δ) AC-4 που εκπροσωπούν βλεννώδες βλάβη εισβάλλουν στο χιτώνα του μυϊκού? και (ε) AC-5 να αντιπροσωπεύει βλεννώδες βλάβη εισβάλλουν στην ορογόνο (Σχήμα 3). Στον έλεγχο (ΑΟΜ και μόνο, όχι ακρυλαμίδιο) ομάδα, το 80% των βλαβών ήταν αδενώματα (τύπος TA) και 20% ήταν αδενοκαρκινώματα (AC-2 τύπου). Μια παρόμοια τάση παρατηρήθηκε στην ομάδα χαμηλότερης ακρυλαμίδιο (0,5 mg δίαιτα /kg) εκτός του ότι τα αδενοκαρκινώματα ήταν του βλεννώδους τύπου (AC-3) (Σχήμα 3). Μόνο το 55% και 44% αδενώματα βρέθηκαν στο μέσο (δίαιτα 1 mg /kg) και υψηλή (2 mg /kg δίαιτας) ομάδες ακρυλαμίδιο, αντίστοιχα, ενώ το υπόλοιπο που εμπίπτουν αδενοκαρκινώματα με πιο προηγμένες βλεννώδες χαρακτηριστικά (AC-4 και AC- 5) (Σχήμα 3).

Ένας από τους πέντε τύπους όγκου παρατηρήθηκαν σε παχύ έντερο. Tubular αδένωμα (ΤΑ) παρουσιάζεται στον πίνακα (α), με δυσπλαστικά σωληνάρια που σχηματίζει την polypoid αδενώματος (μαύρο βέλος) και μη νεοπλασματικές αδένων στο μίσχο του όγκου (κόκκινο βέλος). Αδενοκαρκίνωμα με εισβολή στο υποβλεννογόνο (AC-2) παρουσιάζεται στον πίνακα (β), που χαρακτηρίζει νεοπλασματική αδενικές δομές (μαύρο βέλος) σε υποβλεννογόνο με μια σαφή μυϊκό βλεννογόνο (μαύρο ντόνατ) και σκιρώδης φλεγμονώδη απόκριση του όγκου (κόκκινο βέλος). Βλεννώδες αδενοκαρκίνωμα με εισβολή στο υποβλεννογόνο (AC-3) δείχνεται στο πάνελ (γ), που χαρακτηρίζεται από τα καρκινικά κύτταρα που σχηματίζουν αδενικές δομές (κόκκινο βέλος) σε υποβλεννογόνο με μια σαφή μυϊκό βλεννογόνο (μαύρο ντόνατ) και κύτταρα σφραγιστικά δακτύλιος διαστέλλεται με βλεννίνης ( μαύρο βέλος). Βλεννώδες αδενοκαρκίνωμα εισβάλλουν muscularis χιτώνα (AC-4) δείχνεται στον πίνακα (d), που χαρακτηρίζεται από τα καρκινικά κύτταρα εισβάλλουν muscularis χιτώνα (μαύρο βέλος) και αντικαθιστώντας φυσιολογικού βλεννογόνου (μαύρο ντόνατ) και μια άθικτη ορογόνο (κόκκινο βέλος). Βλεννώδες αδενοκαρκίνωμα εισβάλλουν ορογόνο (AC-5) παρουσιάζεται στον πίνακα (ε), με κύτταρα όγκου σε αγγειακές δομές στο χιτώνα muscularis (μαύρο βέλος), των βλεννογόνων και συντρίμμια σε διατατική αδένα όγκου (μαύρο ντόνατ), και ένα ορογόνο (κόκκινο βέλος) . τύπο όγκου ως ποσοστό σε κάθε ομάδα δίαιτα απεικονίζεται στον πίνακα (στ).

Η

Επιπλέον όγκων του παχέος εντέρου, παρατηρήσαμε όγκους του λεπτού εντέρου (δωδεκαδάκτυλο, νήστιδα ή ο ειλεός) στην AOM- αρουραίοι με ένεση με συχνότητα 12,5% στην ομάδα ελέγχου, και 20,8%, 25,0% και 8,3% στην 0.5 mg /kg, 1,0 mg /kg και 2,0 mg /kg ακρυλαμιδίου /ομάδες δίαιτα, αντίστοιχα.

Γυμνό (ηυ /ηυ) ποντίκι μελέτη

Γενικές παρατηρήσεις.

Δεν υπάρχουν διαφορές στην αύξηση του σωματικού βάρους μεταξύ ελέγχου (0 mg /kg ακρυλαμιδίου /διατροφή) και οι τρεις ομάδες ακρυλαμιδίου βρέθηκαν (Σχήμα 4). Οι ποντικοί φάνηκαν υγιή χωρίς εμφανή σημάδια τοξικότητας, δυσφορία ή ανωμαλίες συμπεριφοράς τόσο κατά το στάδιο του όγκου-σχηματισμός (3 πρώτες εβδομάδες μετά την έγχυση των καρκινικών κυττάρων) και η φάση ακρυλαμίδιο μητέρες. Η κατανάλωση τροφής δεν διέφερε μεταξύ του ελέγχου και ποντίκια ακρυλαμιδίου-θεραπεία, και ανεξάρτητα από τις διατροφικές θεραπείες καταγράφηκε ως 12,30 ± 0,52 g /kg σωματικού βάρους /ημέρα. Η πρόσληψη ακρυλαμιδίου για δόσεις των 0,5, 1 και 2 mg ανά kg ακρυλαμίδιο δίαιτα που χρησιμοποιήθηκαν στη μελέτη ποντίκια υπολογίστηκαν ως 0.006, 0.012 και 0.025 mg ακρυλαμίδιο ανά kg σωματικού βάρους ανά ημέρα, αντίστοιχα.

βάρη σώματος ( σημαίνουν ± SE, ζ) γυμνών (

ηυ /ηυ

) ποντικούς ένεση με ΗΤ-29 ανθρώπινα κύτταρα καρκίνου του παχέος εντέρου σε επεξεργασία με ακρυλαμίδιο σε 0 (μάρτυρας), 0,5, 1,0 και 2,0 mg /kg τροφής.

δεδομένα ξενομοσχεύματος όγκου.

Τρεις εβδομάδες μετά ΗΤ-29 κύτταρα αδενοκαρκινώματος ανθρώπινου κόλου ενέθηκαν στην δεξιά περιοχή στελέχους γυμνών ποντικών, υποδόρια μάζες εμφανίστηκε στο σημείο της ένεσης σε όλες εκτός από 4 ποντίκια . Οι μάζες ήταν διακριτά, σταθερή, χειροπιαστή, και αισθάνθηκε εντοπίζεται στην υποδόρια περιοχή. Το 4 ποντικοί που δεν έχουν ψηλαφητές ξενομοσχεύματα όγκου αποκλείστηκαν από τη μελέτη. Το υπόλοιπο των ποντικών έλαβαν είτε τον έλεγχο ή σε μία από τις τρεις πειραματικές δίαιτες (0.5, 1.0 και 2.0 mg ακρυλαμιδίου /kg δίαιτας) για ένα σύνολο 4 εβδομάδων.

Κατά τον τερματισμό, όλα τα ξενομοσχεύματα όγκου φάνηκε να έχει άθικτο δέρμα εκτός από δύο ποντίκια (από μία στις 0,5 και 1,0 mg ακρυλαμιδίου kg /ομάδες δίαιτας) που είχε εστιακό έλκη στα ξενομοσχεύματα όγκου. Ένα ποντίκι από το 1,0 mg ακρυλαμιδίου /kg ομάδα δίαιτα είχε μια μεγεθυμένη λεμφαδένα (βουβωνικοί), χωρίς μετάσταση όταν παρατηρείται ιστολογικά. Δεν υπήρχαν διαφορές στην ανάπτυξη νεοπλασίας μεταξύ του ελέγχου και των ομάδων που έλαβαν ακρυλαμιδίου σε οποιοδήποτε από τα 4 χρονικά σημεία (αρχίζοντας μία εβδομάδα μετά την έναρξη της δίαιτας ακρυλαμίδιο), και σε νεκροψία (Σχήμα 5). Το υγρό βάρος των όγκων κατά τη νεκροψία ήταν παρόμοια μεταξύ των ομάδων δίαιτα, χωρίς μεταβολή ακρυλαμίδιο που σχετίζονται με (Σχήμα 5).

Επίδραση των διατροφικών ακρυλαμιδίου σε 0 (μάρτυρας), 0,5, 1,0 και 2,0 mg /kg τροφής για την ανάπτυξη (μέση ± SE,%) φαίνονται στον πίνακα (α) και το υγρό βάρος (μέση τιμή ± SE, ζ) φαίνονται στον πίνακα (β) του ΗΤ-29 ανθρώπινα ξενομοσχεύματα όγκου κόλου σε γυμνά (

ηυ /ηυ

) ποντικούς. Η ανάπτυξη του όγκου υπολογίστηκε με βάση τον όγκο του κάθε όγκου καταγράφονται σε διαφορετικά χρονικά σημεία από την έναρξη των δίαιτες ακρυλαμιδίου μέχρι την νεκροψία, και τα υγρά βάρη καταγράφηκαν κατά τη νεκροψία

Η

Η &?. Ε τμήματα όλων των σταθερών αξιολογήθηκαν ξενομοσχεύματα όγκου. Η μορφολογία των όγκων ήταν πολύ παρόμοια μεταξύ των 4 διατροφικές ομάδες. Σταθερά, όλοι οι όγκοι είχαν σαφώς οριοθετημένες, μη εγκαψιδιωμένο, πυκνά κυτταρικά μάζες των καρκινικών κυττάρων που είχαν χωριστεί σε μεταβλητά μέγεθος λόβια με πρόστιμο ινοαγγειακού στρώμα (Σχήμα 6). Μεγάλες περιοχές νέκρωσης εντός μαζών ήταν ένα σταθερό χαρακτηριστικό, με την περιφέρεια των όγκων διαποτισμένο από ένα μικτό πληθυσμό λευκοκυττάρων. Κάτω από το μικροσκόπιο, σε χαμηλή αντικειμενική, οι όγκοι εμφανίστηκαν στερεά και χωρίς αδενική διαφοροποίηση? σε υψηλό στόχο, περιστασιακά σε συχνές μικρές lumens συνέβη ανάμεσα στα καρκινικά κύτταρα. Τα κύτταρα είχαν μια υψηλή αναλογία πυρήνα /κυτταροπλασματική, σημειώνονται anisokaryosis (διακύμανση στην διάμετρο του πυρήνα), και πυκνά χρωματίστηκαν χρωματίνης με μεγάλες μονές ή πολλαπλές πυρηνίσκους. Η μιτωτική κύτταρα, συμπεριλαμβανομένων άτυπων αυτά, ήταν συχνές. Πολυπύρηνα κύτταρα ήταν ένα κοινό χαρακτηριστικό. Γκρι βλέννα ήταν παρόν στο κυτταρόπλασμα είτε ως μικρά εγκλείσματα ή ήταν τόσο ογκώδες ώστε να προκαλέσουν πυρηνική συμπίεσης (κύτταρα σφραγίδα-ring).

Σταθερή ΗΤ-29 ανθρώπινων καρκινικών ξενομοσχευμάτων του παχέος εντέρου από το γυμνό (

nu /nu

) ποντίκια τομές των 5 μm. Πίνακας (α) δείχνει ένα αντιπροσωπευτικό H & amp? Το τμήμα Ε των ξενομοσχευμάτων όγκου ως ένα τυπικό αδιαφοροποίητο καρκίνωμα με βιώσιμο στερεά φύλλα των καρκινικών κυττάρων (περιοχή χαρακτηρίζεται από μαύρη διακεκομμένη γραμμή) και σαφώς οριοθετημένες περιθώριο υποδόριο (κόκκινο βέλος)? βασικά χαρακτηριστικά περιλαμβάνουν γκρι κυτταρόπλασμα διάτασης των καρκινικών κυττάρων (μαύρο βέλος) και η νεκρωτική περιοχή (μαύρο ντόνατ). Αντιπροσωπευτικά ανοσοϊστοχημική χρώση του PCNA δείχνεται στο πάνελ (β) με πολλαπλασιαζόμενα κύτταρα θεωρείται ως σκούρο καφέ χρώση κυττάρων. χρώση TUNEL δείχνεται στο πάνελ (γ) με αποπτωτικά κύτταρα παρατηρήθηκαν ως σκοτεινά σημεία (κόκκινο βέλος). Το ραβδόγραμμα στον πίνακα (d) δείχνει την αναλογία των δεικτών (μέση ± SE) των πολλαπλασιαζόμενων κυττάρων (PCNA-θετικών) και αποπτωτικά (TUNEL θετικά) για κάθε δίαιτα: ακρυλαμιδίου σε 0 (μάρτυρας), 0.5, 1.0 και 2.0 mg /kg δίαιτα.

Η

Ανοσοϊστοχημεία αναλύσεις για τον προσδιορισμό μιτωτικής (PCNA-σημασμένο) και αποπτωτικών μετρήσεις κυττάρων πραγματοποιήθηκαν σε μη χρωματισμένα τμήματα των ξενομοσχευμάτων όγκου (Σχήμα 6). Μία αναλογία των δεικτών σήμανσης μιτωτικών και αποπτωτικών κυττάρων υπολογίστηκαν για κάθε ξενομοσχεύματα όγκου? δεν υπήρξαν αλλαγές σε αυτή την αναλογία μεταξύ του ελέγχου και ομάδες ακρυλαμιδίου-αγωγή (Σχήμα 6).

Συζήτηση

Το ακρυλαμίδιο είναι γνωστό ότι προκαλεί όγκους σε πολλαπλά όργανα σε βιολογικές δοκιμασίες τρωκτικών [1,2,4 ]. Ωστόσο, σε αυτές τις μελέτες, το κόλον δεν ήταν ταυτοποιήθηκε ως ένα όργανο-στόχο για την καρκινογόνο δράση του ακρυλαμιδίου. Δύο ανθρώπινες επιδημιολογικές μελέτες απέτυχαν να παρατηρήσουν οποιαδήποτε σχέση μεταξύ της πρόσληψης ακρυλαμιδίου και του κινδύνου ανάπτυξης καρκίνου του παχέος εντέρου [18,19], με μια επανάληψη αυτού του σημείου από μια πρόσφατη μελέτη μετα-ανάλυση [27]. Σε αντίθεση με αυτά τα ευρήματα και εκείνων των πειραμάτων καρκινογένεσης, μια μελέτη που διεξήχθη σε αρουραίους Sprague-Dawley ανέφερε ότι ε.π. έκθεση σε ακρυλαμίδιο (10 mg /kg σωματικού βάρους 5 ημέρες την εβδομάδα για 8 εβδομάδες) που επάγεται ACF κόλου και του σχηματισμού όγκου [20]. Επιπλέον, σε σύγκριση με αρουραίους σε μια βασική δίαιτα, εκείνοι που είχαν τραφεί δίαιτες συμπληρωμένο με 10% αραβοσιτέλαιο και 10% βόειο λίπος είχε περισσότερα, και εκείνοι που τροφοδοτείται δίαιτες συμπληρωμένο με 10% ελαιόλαδο και 10% ιχθυέλαιο είχαν λιγότερες ακρυλαμίδιο επαγόμενη ACF κόλον [21], με τη χρήση μιας δόσης ακρυλαμιδίου παρόμοιο με αυτό που αναφέρθηκε νωρίτερα [20]. Οι μελέτες του Zhang (2009) και Xichun (2009) προτείνουν ότι το ακρυλαμίδιο μπορεί να εμπλέκεται σε μια άμεση καρκινογόνο δράση στο κόλον και ότι οι ακρυλαμίδιο επαγόμενη αλλοιώσεις του παχέος εντέρου είναι επιδεκτικά ρύθμισης της ανάπτυξης από διαιτητικών λιπιδίων [20,21].