Αφηρημένο

καρκίνο του ήπατος ή ηπατοκυτταρικό καρκίνωμα είναι μία από τις κύριες αιτίες των θανάτων που σχετίζονται με τον καρκίνο . Οι συμβατικές χημειοθεραπείες περιορίζονται από την ανάπτυξη αντοχής φαρμάκου και διάφορες παρενέργειες. Λόγω της μη τοξικότητα και ισχυρή biopharmacological δραστηριότητα, μεταβολίτες που προέρχονται από τα μανιτάρια έχουν λάβει περισσότερη προσοχή στη θεραπεία του καρκίνου. προηγούμενες μελέτες μας έχουν δείξει τις αντικαρκινικές δράσεις συμπλόκων πολυσακχαρίτη-πρωτεΐνης που προέρχεται από το

Pleurotus

μανιτάρια. Ο σκοπός αυτής της μελέτης ήταν να διερευνήσει την υποκείμενη μοριακό μηχανισμό της αντικαρκινικής δραστικότητας ενός εκχυλίσματος ζεστού νερού που περιέχει ένα σύμπλεγμα πολυσακχαρίτη-πρωτεΐνης που απομονώνεται από

Pleurotus pulmonarius

(ΡΡ) σε καρκινικά κύτταρα του ήπατος. Τα αποτελέσματά μας έδειξαν ότι η έκθεση των κυττάρων καρκίνου του ήπατος στην ΡΡ όχι μόνο μείωσε σημαντικά το

in vitro

τον πολλαπλασιασμό των καρκινικών κυττάρων και εισβολή, αλλά επίσης ενίσχυσε τη ναρκωτικά ευαισθησία στο χημειοθεραπευτικό φάρμακο Cisplatin. Τόσο από του στόματος χορήγηση και ενδοπεριτοναϊκή ένεση ΡΡ ανέστειλε σημαντικά την ανάπτυξη του όγκου σε ξενομόσχευμα BALB /c γυμνά ποντίκια. PP προκάλεσε μια αξιοσημείωτη καταστολή του μονοπατιού σηματοδότησης ΡΙ3Κ /ΑΚΤ σε καρκινικά κύτταρα του ήπατος

in vitro

και

in vivo

, και η υπερέκφραση του ιδιοσυστατικά ενεργή μορφή της ΑΚΤ, Myr-ΑΚΤ, κατήργησε αυτό επίδραση και η ανέστειλε πολλαπλασιασμό και την εισβολή από ΡΡ. Τόσο κηλίδα Western και τα αποτελέσματα ELISA έδειξαν ότι PP-αγωγή του καρκίνου ηπατικά κύτταρα είχαν μειωμένη έκφραση και έκκριση του αγγειακού ενδοθηλιακού αυξητικού παράγοντα (VEGF). Η προσθήκη της ανασυνδυασμένης ανθρώπινης VEGF εξασθενημένο τα ανασταλτικά αποτελέσματα της ΡΡ επί ΡΙ3Κ /ΑΚΤ οδού και των φαινοτύπων του καρκίνου. Τα αποτελέσματά μας έδειξαν ότι PP κατέστειλε τον πολλαπλασιασμό, την εισβολή, και η αντοχή στα φάρμακα καρκινικών κυττάρων του ήπατος

in vitro

και

in vivo

, διαμεσολαβείται από την αναστολή της αυτοκρινούς VEGF-επαγόμενη ΡΙ3Κ /ΑΚΤ σηματοδότηση μονοπάτι. Αυτή η μελέτη προτείνει την πιθανή θεραπευτική επίπτωση του ΡΡ στη θεραπεία του ανθρώπινου καρκίνου του ήπατος

Παράθεση:. Xu W, Huang JJ-h, Cheung PCK (2012) Απόσπασμα του

Pleurotus pulmonarius

Καταστέλλει ήπατος Καρκίνος ανάπτυξη και εξέλιξη μέσω της αναστολής του VEGF-Induced ΡΙ3Κ /ΑΚΤ μονοπάτι σηματοδότησης. PLoS ONE 7 (3): e34406. doi: 10.1371 /journal.pone.0034406

Επιμέλεια: Ιωσήφ Alan Bauer, Ίδρυμα Bauer Έρευνας, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 8, Νοεμβρίου, 2011? Δεκτές: 1 Μάρ 2012? Δημοσιεύθηκε: 28 Μαρτίου 2012

Copyright: © 2012 Xu et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Οι συγγραφείς δεν έχουν καμία υποστήριξη ή χρηματοδότηση για να αναφέρετε

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

ο καρκίνος του ήπατος είναι ο πέμπτος συχνότερος καρκίνος και η τρίτη κύρια αιτία όλων των θανάτων από καρκίνο που σχετίζονται με τον κόσμο [1] – [3]. Δυστυχώς, το συνολικό ποσοστό ανταπόκρισης του καρκίνου του ήπατος σε θεραπεία δεν είναι ικανοποιητική, κυρίως λόγω της καθυστερημένης διάγνωσης και κακή αποτελεσματικότητα των θεραπειών, ειδικά η αντίσταση σε χημειοθεραπευτικά φάρμακα και μετάσταση σε άλλα [4] όργανα. Οι εναλλαγές των πολλαπλών μονοπατιών κυτταρικής σηματοδότησης παρατηρήθηκαν συχνά σε ένα ευρύ φάσμα ανθρώπινων καρκίνων, συμπεριλαμβανομένου του καρκίνου του ήπατος, στην οποία η αλληλουχία ΡΤΕΝ /ΡΙ3Κ /ΑΚΤ σηματοδότησης έχει αναφερθεί ότι παίζουν κρίσιμο ρόλο στη ρύθμιση των κακοήθων συμπεριφορών που συμπεριλαμβάνουν τον πολλαπλασιασμό, επιβίωση και εισβολή [5], [6]. Οι αναδυόμενες αποδείξεις έδειξαν ότι μονοπάτι ΡΙ3Κ /ΑΚΤ μπορεί να ρυθμίζεται με αυτοκρινή τρόπο από διάφορους παράγοντες ανάπτυξης, όπως ινσουλίνη αυξητικός παράγοντας (IGF) και ο αγγειακός ενδοθηλιακός αυξητικός παράγοντας (VEGF) [7], [8].

Φυσικές φυτοχημικών και των μεταβολιτών από τα φυτά που λαμβάνουν αυξανόμενης προσοχής για φαρμακολογικές επιδράσεις τους στη θεραπεία και την πρόληψη του καρκίνου λόγω της χαμηλής τοξικότητάς τους και των πιθανών βιολογική δραστηριότητα [9]. Τόσο

in vitro

και

in vivo

μελέτες έχουν δείξει ότι αυτά τα βιοδραστικά φυσικά προϊόντα μπορούν να αναστείλουν την έναρξη, προαγωγή και εξέλιξη της καρκινογένεσης παρεμβαίνοντας τα μονοπάτια σηματοδότησης σε ανθρώπινα καρκινικά κύτταρα και η κατανάλωση τους έχει να γίνει μια πολλά υποσχόμενη chemopreventive και χημειοθεραπευτικών στρατηγική κατά των καρκίνων [10], [11]. Μεταξύ αυτών, είναι βρώσιμα μανιτάρια γνωστό ότι είναι μια πλούσια πηγή αντικαρκινικών παραγόντων, με πολυσακχαρίτες τους και σύμπλοκα πολυσακχαρίτη-πρωτεΐνης είναι οι πλέον αποτελεσματικές αυτές [12], [13]. Πολυάριθμες μελέτες έχουν καταδείξει το

in vitro

και

in vivo

αντικαρκινική δραστηριότητα των πολυσακχαριτών που απομονώνονται από τα βρώσιμα μανιτάρια, όπως

Lentinula edodes

,

Agaricus Blazei

και

Phellinus linteus

εναντίον διαφορετικών ανθρώπινων καρκινικών κυττάρων [14] – [18]. Μια πρόσφατη μελέτη έδειξε ότι ακατέργαστο εκχύλισμα του πολυσακχαρίτη από

Phellinus linteus

ανέστειλε την φωσφορυλίωση της ΑΚΤ σε καρκινικά κύτταρα του μαστού [19]. Ακατέργαστο εκχύλισμα από τους πολυσακχαρίτες που υπάρχουν στο

Ganoderma lucidum

βρέθηκε να έχει αντι-μεταστατικές επιδράσεις μέσω της διαμόρφωσης του μονοπατιού PI3K /AKT [20].

Πρόσφατα, υπάρχουν πολλά

in vitro

μελέτες που καταδεικνύουν την αντιοξειδωτική και αντι-πολλαπλασιαστική επίδραση των ακατέργαστων εκχυλισμάτων των πολυσακχαριτών και των συμπλοκών πολυσακχαρίτη-πρωτεΐνης από το

Pleurotus

μανιτάρι γένος σε διαφορετικά ανθρώπινα καρκινικά κύτταρα [2] – [25]. Η αντιοξειδωτική δράση της πολλά φυσικά προϊόντα έχει επίσης προταθεί να συμβάλει στην αντικαρκινική δράση τους [26] – [28]. Με βάση την αντιοξειδωτική μελέτη της συλλογής είδη μανιταριών στο εργαστήριο μας, ένα δραστικό πολυσακχαρίτη και πρωτεΐνη συγκρότημα απομονώνεται από μανιτάρι

Pleurotus pulmonarius

, κωδικοποιούνται ως PP, υποβλήθηκε σε διαλογή για δυνητικούς αντικαρκινικό παράγοντα λόγω της σημαντικής αντιοξειδωτική δράση της ( Μη δημοσιευθέντα δεδομένα) στην παρούσα μελέτη. Αυτά τα ενδιαφέροντα προκαταρκτικά ευρήματα μας έχουν οδηγήσει στην διερεύνηση των υποκείμενων μοριακών μηχανισμών της αντι-καρκινογόνο δράση με την οποία PP ασκείται σε δύο ανθρώπινα καρκινικά κύτταρα του ήπατος, Huh7 και Hep3B. Αυτά τα αποτελέσματα κατέδειξαν για πρώτη φορά ότι η αναστολή του VEGF /ΡΙ3Κ /ΑΚΤ καταρράκτη μεσολαβεί ο

in vitro

και

in vivo

κατασταλτικά αποτελέσματα του ΡΡ στην ανάπτυξη και εξέλιξη του ανθρώπινου καρκίνου του ήπατος κύτταρα. Η χημειοευαισθητοποίηση καρκινικών κυττάρων του ήπατος προς θεραπευτικό φάρμακο σισπλατίνη ενισχύθηκε επίσης με κατεργασία ΡΡ. Στην παρούσα μελέτη, το θεραπευτικό δυναμικό του ΡΡ στη θεραπεία του ανθρώπινου ηπατοκυτταρικού καρκινώματος εμπλεκόταν.

Αποτελέσματα

In vitro

αντι-πολλαπλασιαστική επίδραση του ΡΡ επί καρκίνο του ήπατος κύτταρα

για να προσδιοριστεί η ανασταλτική επίδραση του ΡΡ σε καρκινικά κύτταρα του ήπατος, αξιολογήσαμε πρώτα την ανάπτυξη και τη βιωσιμότητα των καρκινικών κυτταρικών γραμμών τέσσερα ήπατος (Huh7, Hep3B, HepG2 και SMMC-7721), με κατεργασία του ΡΡ με τη χρήση ΜΤΤ χημική δοκιμή. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι ΡΡ άσκησαν σημαντική ανασταλτική επίδραση στην Huh7, Hep3B, HepG2 και SMMC-7721 κύτταρα σε δόση και το χρόνο εξαρτώμενο τρόπο (Εικ. 1Α). Αυτό το εύρημα επιβεβαιώθηκε περαιτέρω με δοκιμασία αποικίας σχηματισμός (Εικ. 1Β). Η ανάλυση κυτταρομετρίας ροής έδειξε ότι η θεραπεία του καρκίνου του ήπατος κυττάρων ΡΡ προκάλεσε συσσώρευση των κυττάρων στις φάσεις G2 (αύξηση από 12,42 ± 0,25 να 19,66 ± 1,12 σε Huh7 και από 13.30 ± 1,04 να 20,38 ± 1,11 σε Hep3B) (Πίνακας 1) . Επιπλέον, σύμφωνα με την ελαφρώς αυξημένο πληθυσμό υπο-G1 στο PP-κατεργασμένα κύτταρα (Πίνακας 1), οι σημαντικές δείκτες απόπτωσης, που διασπάται caspase3 και διασπάται Πολυ πολυμεράσης (ADP-ριβόζη) (PARP) έχουν up-ρυθμίζεται PP-επεξεργασμένα κύτταρα , γεγονός που υποδηλώνει την επίδραση της προ-αποπτωτικών ΡΡ επί καρκινικών κυττάρων του ήπατος μπορεί να είναι κασπάσης με τη μεσολάβηση. κηλίδα Western έδειξε μία εξαρτώμενη από τη δόση μείωση στην έκφραση της κυκλίνης Β1, μια σημαντική πρωτεΐνη του G2 σημείου ελέγχου, στις δύο καρκίνο του ήπατος κύτταρα, υποδηλώνοντας ότι ΡΡ επαγόμενη φάση G2 διακοπή του κυτταρικού κύκλου μπορεί να διαμεσολαβείται από την κάτω-ρυθμιζόμενη έκφραση της κυκλίνης Β1 (Εικ. 1 C). Εν τω μεταξύ, για να αποκλείσει την πιθανότητα ότι η αντικαρκινική δράση του συμπλόκου πολυσακχαρίτη-πρωτεΐνης που απομονώνεται από

Pleurotus pulmonarius

είναι μη ειδικές, σύνθετες πολυσακχαρίτη-πρωτεΐνης που απομονώθηκε από ένα άλλο Pleurotus

μανιτάρι, Pleurotus κονδύλους regium

(PTR) εφαρμόστηκε ως έλεγχο, υποδηλώνοντας έτσι την ειδική δράση του ΡΡ (Εικ. S1).

Α. ΜΤΤ δοκιμασία ελήφθη για την εκτίμηση της καρκίνο του ήπατος κυττάρων (Huh7, Hep3B, HepG2 και SMMC-7721) βιωσιμότητα μετά την επεξεργασία με διαφορετικές συγκεντρώσεις του ΡΡ (0, 25, 50, 100, 200 ή 400 μg /ml αντίστοιχα) για έως 96 hr. Τα δεδομένα είναι μέσα (μπαρ, SD) τριών ανεξάρτητων πειραμάτων. B. Η δοκιμασία αποικίας σχηματισμός επέδειξε μια δοσοεξαρτώμενη μείωση στον πολλαπλασιασμό των καρκινικών κυττάρων του ήπατος (Huh7, Hep3B, HepG2 και SMMC-7721), όταν η έκθεση σε ΡΡ. Γ κηλίδος Western διεξήχθη και παρατηρήθηκε μία εξαρτώμενη από τη δόση μείωση της έκφρασης κυκλίνης Β1. Η ακτίνη περιλήφθηκε ως έλεγχος φόρτωσης.

Η

Από την άλλη πλευρά, PP εξετάστηκε για κυτοτοξικά αποτελέσματα έναντι των φυσιολογικών κυττάρων του ήπατος WRL-68 με τη χρήση ΜΤΤ δοκιμασία και δοκιμασία σχηματισμού αποικίας. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι το φυσιολογικό ήπαρ κυττάρου WRL-68 είναι πιο ανθεκτικά στην ΡΡ από καρκίνο του ήπατος κύτταρα, γεγονός που υποδηλώνει την εκλεκτική κυτταροτοξικότητα των ΡΡ σε καρκινικά κύτταρα και το δυναμικό της για να αναπτυχθεί ως αντικαρκινικοί παράγοντες (Εικ. S2). Για να διερευνηθεί περαιτέρω η πιθανή εμπλοκή του ΡΡ στην θεραπεία ανθρώπινων καρκίνων, επεκτείναμε μελέτες μας σε άλλους τύπους καρκίνου. Τα αποτελέσματα έδειξαν μία σημαντική μειωμένο συντελεστή πολλαπλασιασμού με δοσο-εξαρτώμενο τρόπο κατά την κατεργασία ΡΡ σε ανθρώπινες καρκινικές κυτταρικές γραμμές από του μαστού (T47D), του πνεύμονα (Α549), στομάχου (AGS), και του προστάτη (DU145) (Εικ. S3).

Επίδραση του ΡΡ στην αναστολή της έκφρασης του VEGF και αδρανοποίηση των ΡΙ3Κ /ΑΚΤ οδού

κηλίδα Western έδειξε ότι η θεραπεία του ΡΡ μειωμένη κυρίως πρωτεΐνη εκφράσεις της φωσφο-ΑΚΤ (ΑΚΤ-ρ), το ενεργοποιημένο μορφή ΑΚΤ, και κατάντη στόχοι της, συμπεριλαμβανομένων φωσφο-ΟδΚ3β (ρ-ΟδΚ3β), Survivin, Bcl-xL με δοσο-εξαρτώμενο τρόπο, αλλά όχι εκείνη της Βαχ και συνολικό επίπεδο της ΑΚΤ και ΟδΚ3β και στα δύο καρκίνο του ήπατος κύτταρα (Σχ. 2Α). Επιπλέον, σύμφωνα με την ελαφρώς αυξημένο πληθυσμό υπο-G1 στο PP-κατεργασμένα κύτταρα (Πίνακας 1), οι σημαντικές δείκτες απόπτωσης, που διασπάται caspase3 και διασπάται Πολυ πολυμεράσης (ADP-ριβόζη) (PARP) έχουν up-ρυθμίζεται PP-επεξεργασμένα κύτταρα , γεγονός που υποδηλώνει την προ-αποπτωτικών επίδραση του ΡΡ σε καρκινικά κύτταρα του ήπατος μπορεί να κασπάσης με τη μεσολάβηση. Εν τω μεταξύ, η Ν-cadherin και βιμεντίνης, που μπορεί να ευθύνεται για την αναστροφή της μεταβάσεως επιθηλίου-μεσεγχύματος (ΕΜΤ), ήταν ρυθμισμένα προς τα κάτω σε κύτταρα ΡΡ-αγωγή (Σχ. 2Α). Αντίθετα, το επίπεδο έκφρασης της φωσφο-ΕΚΚ (ρ-ΕΚΚ), ένα άλλο σημαντικό μονοπάτι σηματοδότησης που εμπλέκονται στη ρύθμιση των καρκινικών κυττάρων, δεν μεταβλήθηκε σημαντικά με την θεραπεία ΡΡ, υποδηλώνοντας την εξειδίκευση στην ρύθμιση του μονοπατιού ΡΙ3Κ /ΑΚΤ από ΡΡ (Σχ. 2Α ). κύτταρα Huh7 παροδικά επιμολυσμένα με το πλασμίδιο ΑΚΤ αποκάλυψε με συνέπεια ένα καταργείται ανασταλτική δράση όταν η έκθεση σε ΡΡ όπως υποδεικνύεται με τη δοκιμασία ΜΤΤ (Εικ. 2Β) και ανάλυση κηλίδος western (Σχ. 2C). επιβεβαίωσε τα ευρήματα αυτά, εξάλλου, ότι PI3K /AKT οδό σηματοδότησης θα μπορούσε να συμβάλει στις αντικαρκινικές επιδράσεις του ΡΡ σε καρκινικά κύτταρα του ήπατος.

Α. Huh7 και Hep3B κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με διαφορετικές συγκεντρώσεις του ΡΡ (0, 50 ή 100 μg /ml) και λύση των κυττάρων συλλέχθηκαν σε 48 ώρες για ανάλυση στυπώματος western. θεραπεία ΡΡ ασκείται μια σημαντική μείωση στα επίπεδα έκφρασης της ρ-ΑΚΤ και κατάντη στόχοι της, συμπεριλαμβανομένων ρ-GSK-3β, Bcl-XL, και survivin. Ωστόσο, PP δεν επηρέασε εκφράσεις π-ERK και ΡΤΕΝ αλλά έκφραση VEGF μειώθηκε σε PP-επεξεργασμένα κύτταρα. Τα πειράματα επαναλήφθηκαν 3 φορές. κύτταρα Β Huh7 επιμολύνθηκαν με ΑΚΤ υπερεκφράζουν φορέα ή τον έλεγχο των φορέων, στη συνέχεια κατεργάζεται με ΡΡ (50 μg /ml) και η βιωσιμότητα των κυττάρων μετρήθηκε με ΜΤΤ σε 72 ώρες. Τα αποτελέσματα αποκάλυψαν μια καταργείται ανασταλτική επίδραση σε κύτταρα επιμολυσμένα ΑΚΤ σε σύγκριση με το μάρτυρα. Τα δεδομένα δίδονται ως ποσοστό των μη επεξεργασμένων κυττάρων ως έλεγχος που είχε τεθεί στο 100%. Τα δεδομένα είναι μέσα ± SD τριών ανεξαρτήτων πειραμάτων. κύτταρα C. Huh7 επιμολύνθηκαν με φορέα ΑΚΤ υπερεκφράζουν ή τον φορέα ελέγχου και στη συνέχεια κατεργάζεται με ΡΡ. Κυτταρόλυμα συλλέχθηκε και εφαρμόστηκε σε στύπωμα western. Σημαντικές διαφορές μεταξύ των PP-επεξεργασμένα και μη επεξεργασμένα κύτταρα αναλύθηκαν στατιστικά με ANOVA (τεστ πολλαπλής σύγκρισης του Tukey? *,

P

& lt? 0,01? **

P

& lt? 0.001).

Επίδραση του ΡΡ στην αναστολή του VEGF έκκρισης και αδρανοποίηση των ΡΙ3Κ /ΑΚΤ οδού

είναι ενδιαφέρον να βρούμε ότι ΡΡ μείωσε την έκφραση του VEGF που είναι ένας σημαντικός παράγοντας ανάπτυξης που εμπλέκονται στην πολλαπλασιασμό και εισβολή ανθρώπινων καρκινικών [29]. Έχει καλά τεκμηριωμένο ότι μονοπάτι ΡΙ3Κ /ΑΚΤ ενεργοποιείται σε απόκριση προς διάφορους παράγοντες ανάπτυξης [30]. Δεδομένου ότι τα αποτελέσματά μας Western Blot έδειξε μειωμένη πρωτεΐνη εκφράσεις του ρ-ΑΚΤ και VEGF αλλά όχι φωσφατάση και tensin ομόλογο (ΡΤΕΝ), ένα ανάντη πρωτεΐνη ΑΚΤ (Εικ. 2Α), είναι πολύ πιθανό ότι PP ρυθμίζει μονοπάτι ΡΙ3Κ /ΑΚΤ μέσω μιας VEGF με μεσολάβηση αυτοκρινή τρόπο. Είναι ενδιαφέρον ότι, τα δεδομένα ELISA επέδειξε μια καταστολή της έκκρισης VEGF με δοσο-εξαρτώμενο τρόπο κατά την κατεργασία ΡΡ σε κύτταρα Huh7 και Hep3B (Εικ. 3Α). Το πιο σημαντικό, η προσθήκη ανασυνδυασμένου ανθρώπινου VEGF (rhVEGF) σε 0,6 ng /ml, η συγκέντρωση μειώνεται κατά ΡΡ σε σύγκριση με τα μη επεξεργασμένα ομάδας σε 72 ώρες χρονικό σημείο, εξασθένησε την ανασταλτική επίδραση της ΡΡ επί του πολλαπλασιασμού των κυττάρων (Σχ. 3Β) και ΡΙ3Κ /ΑΚΤ οδού σήματος (Εικ. 3C). Αυτά τα δεδομένα υποδεικνύουν ότι η αδρανοποίηση της ΡΙ3Κ μονοπατιού /ΑΚΤ με ΡΡ μπορεί να προκαλείται από την αναστολή του VEGF με αυτοκρινή τρόπο.

A. Επιδράσεις της ΡΡ στην έκκριση του VEGF σε κύτταρα Huh7 και Hep3B. Αφού τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με ΡΡ με διάφορες συγκεντρώσεις (0, 50 ή 100 μg /ml) για 48 ώρες, το εμπλουτισμένο μέσο συλλέχθηκαν και επίπεδο VEGF στο ρυθμισμένο μέσο προσδιορίστηκε με ένα ανθρώπινο VEGF ELISA Kit. Το αποτέλεσμα επέδειξε καταστολή της έκκρισης VEGF με δοσο-εξαρτώμενο τρόπο κατά την κατεργασία ΡΡ. δοκιμασία Β ΜΤΤ διεξήχθη για να αξιολογηθεί ο πολλαπλασιασμός όταν η έκθεση σε ΡΡ (50 μg /ml) σε παρουσία ή απουσία rhVEGF (0,6 ng /ml) για 72 ώρες σε κύτταρα Huh7. κύτταρα C. Huh7 υποβλήθηκαν σε αγωγή με ΡΡ (50 μg /ml) μόνο ή τον συνδυασμό με rhVEGF (0,6 ng /ml), και κυτταρικό λύμα συλλέχθηκε και εφαρμόστηκε σε στύπωμα western. Τα δεδομένα εκφράζονται ως μέση τιμή ± SD. Σημαντικές διαφορές μεταξύ των PP-επεξεργασμένα και μη επεξεργασμένα κύτταρα αναλύθηκαν στατιστικά με ANOVA (τεστ πολλαπλής σύγκρισης του Tukey? *,

P

& lt? 0,01? **

P

& lt? 0.001).

Επίδραση του PP για την ενίσχυση της χημειοευαισθησία του καρκίνου του ήπατος κυττάρων στη σισπλατίνη

Ένα μεγάλο σώμα της στοιχεία έδειξε ότι ΡΙ3Κ οδός /AKT συμβάλλει κριτικά με ανθεκτικότητα στα φάρμακα στον καρκίνο του ανθρώπου [31] και αδρανοποίηση του PI3K /AKT από ΡΡ θα μπορούσε να οδηγήσει στην εναλλαγή της ευαισθησίας του φαρμάκου στα καρκινικά κύτταρα του ήπατος. Από την δοκιμασία σχηματισμού αποικίας, σισπλατίνη (DDP) στους 5 μΜ ή 10 μΜ μειώθηκαν μόνο ελαφρά τη βιωσιμότητα των κυττάρων, ενώ ένα σημαντικό συνεργιστικό αποτέλεσμα επί του σχηματισμού αποικιών σε Huh7 και Hep3B κυττάρων παρατηρήθηκε όταν DDP συνδυάστηκε με μια χαμηλή συγκέντρωση του ΡΡ (25 μg /ml) (Σχ. 4Α), γεγονός που υποδηλώνει ότι ΡΡ θα μπορούσε να είναι ένας ευαισθητοποιητής για το χημειοθεραπευτικό φάρμακο. Η επιμόλυνση του πλασμιδίου ΑΚΤ (Εικ. 4Β) και προσθήκη της rhVEGF (0,6 ng /ml) (Εικ. 4C) κατέληξαν σε καταργηθεί ευαισθητοποίηση, υποστηρίζοντας περαιτέρω τον ζωτικό ρόλο της ΑΚΤ οδού και VEGF έπαιξε στη ρύθμιση του καρκίνου του ήπατος κυττάρων με ΡΡ .

Α. Huh7 και Hep3B κυττάρων υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με DDP (μέχρι 10 μΜ), ΡΡ (25 μg /ml), ή του συνδυασμού και στη συνέχεια διεξήχθη δοκιμασία σχηματισμού αποικίας. κύτταρα Β Huh7 επιμολύνθηκαν με ΑΚΤ υπερεκφράζουν φορέα ή τον έλεγχο των φορέων, στη συνέχεια κατεργάζεται με χαμηλή δοσολογία του ΡΡ (25 μg /ml), DPP (5 μΜ), ή τον συνδυασμό για 72 ώρες και το κύτταρο βιωσιμότητα μετρήθηκε με ανάλυση ΜΤΤ . δοκιμασία C. ΜΤΤ διεξήχθη για να αξιολογηθεί ο πολλαπλασιασμός όταν η έκθεση σε χαμηλές δόσεις ΡΡ (25 μg /ml), DDP (5 μΜ) μόνο του ή ο συνδυασμός, με την απουσία ή παρουσία rhVEGF για 72 hr σε κύτταρα Huh7. Η προσθήκη rhVEGF (0,6 ng /ml) οδήγησε σε καταργηθεί ευαισθητοποίηση. Τα δεδομένα δίδονται ως ποσοστό των μη επεξεργασμένων ελέγχων που ορίζεται σε 100%, με μέση τιμή ± SD από τουλάχιστον τρία ανεξάρτητα πειράματα. Σημαντικές διαφορές μεταξύ των PP-επεξεργασμένα και μη επεξεργασμένα κύτταρα αναλύθηκαν στατιστικά με ANOVA (τεστ πολλαπλής σύγκρισης του Tukey? *,

P

& lt? 0,01? **

P

& lt? 0.001).

PP μειώνει την επεμβατική δυναμικό των καρκινικών κυττάρων του ήπατος

Χρησιμοποιώντας δοκιμασία εισβολή θάλαμο, βρέθηκε ότι ΡΡ σε χαμηλή δόση (50 μg /ml) που δεν είχε σημαντικές επιπτώσεις στο κύτταρο πολλαπλασιασμό σε 24 χρονικό σημείο ώρες μειώθηκε αισθητά την ικανότητα εισβολής των κυττάρων Huh7 και Hep3B (Εικ. 5Α). Είναι ενδιαφέρον ότι η ανασταλτική δράση του ΡΡ στην εισβολή του Huh7 εξασθένισε από υπερέκφραση ιδιοσυστατικά ενεργοποιημένης ΑΚΤ (Εικ. 5Β) και προσθήκη της rhVEGF (Εικ. 5C), καταδεικνύοντας περαιτέρω την εμπλοκή του VEGF /ΡΙ3Κ /ΑΚΤ καταρράκτη στη ρύθμιση της καρκίνο του ήπατος κύτταρα από ΡΡ. Επιπλέον, μία δοσο-εξαρτώμενη μειωμένα επίπεδα έκφρασης του Ν-καδερίνης και βιμεντίνης, τα σημαντικά κατασκευαστές για κυτταρική μετανάστευση και εισβολή, σημειώθηκε σε ανάλυση στυπώματος Western φαίνεται στο Σχ. 2Α, υποστηρίζοντας την παρατηρούμενη ανασταλτική δράση του ΡΡ στην εισβολής των καρκινικών κυττάρων του ήπατος.

Α. δοκιμασία Boyden θάλαμο χρησιμοποιήθηκε για να προσδιοριστεί η ικανότητα εισβολής των κυττάρων Huh7 και Hep3B κατά την επεξεργασία με τον έλεγχο ή ΡΡ (50 μg /ml) PP για 24 ώρες. PP κατέστειλε σημαντικά τον καρκίνο του ήπατος εισβολή των κυττάρων. Δεξιός πίνακας έδειξε την ποσοτικοποίηση με εμβάπτιση των θαλάμων σε 1% SDS και μετρώντας την απορρόφηση του διαλύματος στα 570 nm. Ο μέσος όρος των προσδιορισμών εις τριπλούν για κάθε συνθήκη πειράματος υπολογίστηκε και οι τιμές ομαλοποιήθηκαν προς τα μη επεξεργασμένα κύτταρα. κύτταρα B. Η Huh7 επιμολυσμένα με ΑΚΤ υπερεκφράζουν φορέα, ή τον έλεγχο των φορέων υποβλήθηκαν σε αγωγή με ΡΡ, και το κύτταρο διεισδυτικότητα ελέγχθηκε. Δεξιός πίνακας δείχνει την ποσοτικοποίηση. κύτταρα C. Huh7 υποβλήθηκαν σε αγωγή με ΡΡ απουσία ή παρουσία 0,6 ng /ml rhVEGF, και προσδιορίστηκε η επεμβατική δυναμικό. Δεξιός πίνακας δείχνει την ποσοτικοποίηση. Τα δεδομένα εκφράζονται ως μέση τιμή ± SD. Σημαντικές διαφορές μεταξύ των PP-επεξεργασμένα και μη επεξεργασμένα κύτταρα αναλύθηκαν στατιστικά με ANOVA (τεστ πολλαπλής σύγκρισης του Tukey? *,

P

& lt? 0,01? **

P

& lt? 0.001).

PP καταστέλλει σημαντικά ανθρώπινα ηπατικά την ανάπτυξη των καρκινικών ξενομοσχευμάτων σε γυμνά ποντίκια

Λαμβάνοντας υπόψη τα παραπάνω

in vitro

αποτελέσματα δείχνουν ότι PP μείωσε τον πολλαπλασιασμό των καρκινικών κυττάρων του ήπατος, θα είναι ζωτικής σημασίας για να αξιολογηθεί κατά πόσον ΡΡ θα μπορούσε να αναστείλει την γένεσιν όγκων του καρκίνου του ήπατος κυττάρων

in vivo

. Πρώτον, γυμνά ποντίκια με καθιερωμένες s.c ξενομοσχεύματος όγκου από κύτταρα Huh7 χρησιμοποιήθηκε και αγωγή είτε με χορήγηση από του στόματος ή ενδοπεριτοναϊκή (ί.ρ.) ένεση του ΡΡ. Τόσο η στοματική σίτιση και ip ένεση του ΡΡ σημαντικά (ρ & lt? 0.001) εξασθενημένη την ανάπτυξη του όγκου (Σχήμα 6Α). Αν και η επίδραση από του στόματος χορήγηση (λόγος αναστολής -82%) ήταν λιγότερο έντονη σε σύγκριση με έγχυση ip (αναλογία αναστολής -99% ).

Α. Καμπύλες ανάπτυξης και αντιπροσωπευτικές φωτογραφίες γυμνών ποντικών που έλαβαν θεραπεία με ε.π. (αριστερός πίνακας) ή από του στόματος χορήγηση (δεξί πάνελ) του ΡΡ με τον έλεγχο οχήματος (νερό). Σημείο αντιπροσωπεύει το μέσο μέγεθος όγκου με την εξίσωση V = (μήκος Χ πλάτος

2) /2. B. Οι όγκοι συλλέχθηκαν από νερό επεξεργασμένο ή PP-ποντίκια με αγωγή μονιμοποιήθηκαν, ενσωματωμένο, τεμαχίστηκαν, και εφαρμόστηκε σε Ki-67 ανοσοϊστοχημική χρώση και ποσοτικοποίηση. Ο αριθμός των θετικώς χρωματισμένων πυρήνων σε ένα ελάχιστο έξι τυχαία επιλεγμένα πεδία από αντιπροσωπευτικές τομές όγκου διαιρεμένο με τον συνολικό αριθμό των κυττάρων παρουσιάζεται στον δεξιό πίνακα. C. Η ιστούς όγκων συλλέχθηκαν για western blot. Τα δεδομένα εκφράζονται ως μέση τιμή ± SD. Σημαντικές διαφορές μεταξύ των PP-επεξεργασμένα και μη επεξεργασμένα κύτταρα αναλύθηκαν στατιστικά με ANOVA (τεστ πολλαπλής σύγκρισης του Tukey? *,

P

& lt? 0,01? **

P

& lt? 0.001).

xenograftes Tumor συγκομίζονται από τις τέσσερις ομάδες ποντικών υποβλήθηκαν σε ανοσοϊστοχημική και ανάλυση στυπώματος western. Ένα σημαντικά χαμηλότερο ποσοστό των Ki-67-θετικά κύτταρα που βρίσκονται στην ομάδα PP-σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου (Σχ. 6Β) πρότεινε ότι η ανασταλτική δράση του ΡΡ μπορεί να οφείλεται σε μειωμένο πολλαπλασιασμό των κυττάρων. Η εναλλαγή της έκφρασης πρωτεΐνης στα PP-αγωγή ξενομοσχεύματος ζώα, συμπεριλαμβανομένου ενός κάτω-ρυθμιζόμενη έκφραση του ρ-ΑΚΤ, Ρ-ΟδΚ3β, Bcl-xL, και ένα επάνω ρυθμισμένη έκφραση διασπασμένης κασπάσης-3 σε αυτές

in vivo

πειράματα (Σχ. 6C) ήταν σύμφωνα με αυτά

in vitro μελέτες

(Εικ. 2Α).

Επιπλέον, υπάρχουν προφανείς παρενέργειες ή αλλαγές παρατηρήθηκαν συγκρίνοντας τα ιστολογικά χαρακτηριστικά του εσωτερικά όργανα, συμπεριλαμβανομένων του ήπατος, των πνευμόνων και των νεφρών (σχ. 7Α) και το σωματικό βάρος των ζώων (Εικ. 7Β) στις ομάδες θεραπείας και ελέγχου, γεγονός που υποδηλώνει την ασφάλεια και την κλινική επίπτωση ΡΡ ως αντικαρκινικός παράγοντας.

Α. Αιματοξυλίνη και ηωσίνη (Η &? Ε) χρώση του πνεύμονα, του ήπατος, των νεφρών από τις τέσσερις υποδεικνύονται ομάδες ποντικών. βάρος Β Σώματος (γραμμάρια) των ποντικών που έλαβαν θεραπεία με PP και ελέγχου.

Η

Συζήτηση

Στη μελέτη αυτή έδειξε ότι PP, ένα εκχύλισμα ζεστό νερό που περιέχει ένα σύνθετο πολυσακχαρίτη-πρωτεΐνης απομονωμένος από

Pleurotus pulmonarius

ανέστειλε την ανάπτυξη και εξέλιξη του καρκίνου του ήπατος κυττάρων

in vitro

και

in vivo

. Τέτοια αντικαρκινικά αποτελέσματα είναι μέσω της αναστολής του VEGF με μεσολάβηση αυτοκρινής ρύθμιση της ΡΙ3Κ μονοπατιού /ΑΚΤ. Η σημασία αυτών των ευρημάτων συζητείται παρακάτω.

Καταρχάς, αποδείξαμε ότι η αγωγή των ΡΡ μειωμένη ογκογονικότητα των κυττάρων καρκίνου του ήπατος στο γυμνό μοντέλο ποντικού ξενομοσχεύματος χωρίς οποιαδήποτε προφανή παρενέργεια. Παρά την πρόοδο στην χημειοθεραπευτικά κατά τα τελευταία χρόνια, η χημειοθεραπεία συνεχίζει να συνδέεται με σοβαρές παρενέργειες, όπως η νεφροτοξικότητα, ναυτία, απώλεια μαλλιών, ερεθισμό του δέρματος, αναιμία, στειρότητα [32], [33]. Ως εκ τούτου, φυσικά αντικαρκινικές ενώσεις που υπάρχουν στο ανθρώπινο δίαιτες έχουν σημαντική συνέπεια της χημειοθεραπείας και χημειοπροφύλαξη, ειδικά για εκείνους με χαμηλή τοξικότητα και υψηλή ισχύ, όπως η ρεσβερατρόλη [34] και πολυφαινόλες τσαγιού [35]. Πιο ενδιαφέρον, το

Pleurotus pulmonarius

εκχυλίσματα σώμα φρούτα έχουν αναφερθεί στην καθυστέρηση της εξέλιξης της χημικής προκαλείται από ηπατοκυτταρικό καρκίνωμα σε ποντίκια CBA [36]. Σε αυτή τη μελέτη, διαπιστώσαμε ότι και οι δύο ένεση ί.ρ και από του στόματος χορήγηση του ΡΡ ανέστειλε σημαντικά την ανάπτυξη του όγκου. Το συγκριτικά λιγότερο έντονη αναστολή όγκου παρατηρήθηκε σε από του στόματος χορήγηση του ΡΡ μπορεί να οφείλεται σε φαρμακοκινητικές περιορισμούς και εντερική αποικοδόμηση των ενώσεων [37]. Δεν βρέθηκαν σημαντικές διαφορές συγκρίνοντας την ιστολογία του πνεύμονα, του ήπατος, των νεφρών και του σωματικού βάρους στους PP-αγωγή και τον έλεγχο ποντίκια, υποδηλώνοντας ότι δεν υπήρχε παρατηρήσιμη αρνητική επίδραση στην υγεία των ποντικών που υπέστησαν αγωγή με ΡΡ. Οι αξιοσημείωτες αντικαρκινικές ιδιότητες και χαμηλή τοξικότητα στα ζώα στηρίξει την σκοπιμότητα της PP για τη θεραπεία του ανθρώπινου καρκίνου του ήπατος.

Δεύτερον, τα παρόντα αποτελέσματα έδειξαν ότι PP ανέστειλε το ρυθμό πολλαπλασιασμού των καρκινικών κυττάρων του ήπατος, και αυτό το αποτέλεσμα μπορεί να είναι μέσω G2 διακοπή του κυτταρικού κύκλου. Είναι ενδιαφέρον ότι, εκτός από την G2 φάση, οι ταυτόχρονες συσσωρεύσεις σε φάση S παρατηρήθηκαν, οι πιθανές μοριακοί μηχανισμοί απαιτούν περαιτέρω έρευνα. Επιπλέον, τα δεδομένα μας έδειξαν ότι ΡΡ αύξησε σημαντικά την ευαισθησία φαρμάκου του καρκίνου του ήπατος κυττάρων σε σισπλατίνη (Εικ. 4). Παρά την πρόσφατη πρόοδο στην ανάπτυξη των χημειοθεραπείες κατά τις τελευταίες δεκαετίες, οι περισσότεροι ασθενείς τελικά υποτροπίασαν μετά τη θεραπεία, πράγμα που σημαίνει ότι οι όγκοι απέκτησαν μηχανισμούς αντοχής φαρμάκου, η οποία αποφασιστικά συνέβαλε στην υψηλή θνησιμότητα από καρκίνο του ήπατος [38]. Προκειμένου να ξεπεραστούν χημειοαντίσταση, χημειοευαισθητοποίηση η οποία βασίζεται στο συνδυασμό ενός άλλου φαρμάκου με ρύθμιση ενός ή περισσοτέρων μηχανισμοί αντίστασης έχει ληφθεί ως μία ελκυστική στρατηγική, ιδιαίτερα η συμμετοχή του φυσικού υφιστάμενων ενώσεων [39]. Είναι ενδιαφέρον ότι, ένας μεγάλος όγκος στοιχείων αναδύεται για να υποδείξει ότι διάφορα μονοπάτια σηματοδότησης είναι κρίσιμο ρόλο στην πρόκληση επίκτητη ανθεκτικότητα σε χημειοθεραπευτικά φάρμακα στον καρκίνο του ανθρώπου, συμπεριλαμβανομένης της ΡΙ3Κ /ΑΚΤ, MEK /ERK, JNK και μονοπάτια ΑΜΡΚ [40], [41]. Η αναστολή των PI3K οδού /AKT από φαρμακολογική προσέγγιση θα μπορούσε να οδηγήσει στην αποκατάσταση της ευαισθησίας των ναρκωτικών [42], [43]. Από την άποψη αυτή, η απενεργοποίηση της ΡΙ3Κ /ΑΚΤ από ΡΡ (Εικ. 2 και 3) πρότεινε ότι η έκθεση σε ΡΡ θα μπορούσε να ενισχύσει την ευαισθησία του φαρμάκου του καρκίνου του ήπατος κυττάρων. Επιπλέον, το γεγονός ότι PP-επαγόμενη μειορύθμιση των Bcl-xL και Surviven (Εικ. 2Α), και τα δύο από τα οποία είναι σημαντικά διαμορφωτές της αντοχής πολυ-φαρμάκου, έδειξε περαιτέρω το πολλά υποσχόμενο ρόλο του ΡΡ ως χημειοευαισθητοποιητή.

ένα ακόμα εντυπωσιακό θα πρέπει να αντιμετωπιστεί είναι ότι η θεραπεία PP οδήγησε σε μειωμένη διεισδυτικότητα του καρκίνου του ήπατος κυττάρων (Εικ. 5Α), το οποίο υποστηρίζεται περαιτέρω από τη μειωμένη πρωτεΐνη εκφράσεις του Ν-καδερίνης και βιμεντίνη σε PP-επεξεργασμένα κύτταρα (Εικ. 2Α ). Είχε αναφερθεί ότι η Ν-καντερίνη είναι ζωτικής σημασίας για τον όγκο αγγεία αλληλεπιδράσεις, εξαγγείωση και μεταστατική διάδοση [44], [45] και βιμεντίνης χρησιμοποιείται ευρέως ως ένας δείκτης που αντιπροσωπεύουν το επιθηλιακό να μεσεγχυματικά μετάβαση (ΕΜΤ) [46], [ ,,,0],47]. EMT είναι ένα πρόγραμμα δια-διαφοροποίησης που απαιτούνται για τη μορφογένεση των ιστών κατά τη διάρκεια της εμβρυϊκής ανάπτυξης. Ωστόσο, μπορεί να προκαλέσει αρνητικά ίνωση οργάνων και την προώθηση της προόδου καρκινώματος μέσω μιας ποικιλίας μηχανισμών, αποκτώντας επεμβατική και μεταστατικές ιδιότητες [48] – [50]. Η έρευνα του αναστολέα EMT έχει ανοίξει νέες πόρτες για τον έλεγχο των μεταστάσεων που συμβάλλει αποφασιστικά στο υψηλό ποσοστό θνησιμότητας από καρκίνο του ήπατος [51]. Ως εκ τούτου, τα παρόντα ευρήματα στα ανασταλτικά αποτελέσματα του ΡΡ στην επεμβατική δυναμικό των καρκινικών κυττάρων του ήπατος έχουν κλινική επίπτωση στη θεραπεία του καρκίνου του ήπατος.

Εκτός από τη λειτουργική μελέτη, διαλεύκανση των μηχανισμών είναι ζωτικής σημασίας για την κατανόηση της ΡΡ ως δυνητικός αντικαρκινικός παράγοντας. Δεδομένου ότι η συστατική ενεργοποίηση του καταρράκτη ΡΙ3Κ /ΑΚΤ σηματοδότηση συχνά παρατηρείται σε ανθρώπινα φαινοτύπους καρκίνου και κρίσιμα σχετίζονται με τον πολλαπλασιασμό των καρκινικών κυττάρων, την επιβίωση, την εισβολή και την αγγειογένεση, η αναστολή της ΡΙ3Κ οδού /ΑΚΤ έχει γίνει μια ελκυστική προσέγγιση για τη θεραπεία του καρκίνου του ήπατος [52] , [53]. Οι αναστολείς ΑΚΤ έχουν αναφερθεί ότι καταστέλλουν την ανάπτυξη του όγκου στο ήπαρ, υποδηλώνοντας την ορθολογική για στόχευση της οδού ΡΙ3Κ /ΑΚΤ σε αυτή τη νόσο. Ωστόσο, η απασχόληση του αναστολέα ΑΚΤ συνδέεται με απρόσμενες παρενέργειες [54].

Cordyceps militaris

, ένα φαρμακευτικό μανιτάρι, αναφέρθηκε ότι επάγει τη σύλληψη του κυτταρικού κύκλου και της απόπτωσης μέσω αδρανοποίησης της PI3K μονοπατιού /ΑΚΤ στον καρκίνο του μαστού [55]. Επίσης, από του στόματος χορήγηση ενός κλάσματος πολυφαινολικών απομονώνεται από πράσινο τσάι αναστέλλει σημαντικά την ανάπτυξη του καρκίνου του προστάτη και τη μετάσταση μέσω μονοπατιού ΡΙ3Κ /ΑΚΤ σε διαγονιδιακά αδενοκαρκίνωμα του μοντέλου ποντικού [56]. Είναι ενδιαφέρον, αποτέλεσμα μας έδειξε ότι PP κάτω ρυθμισμένη την έκφραση της ρ-ΑΚΤ, την ενεργό μορφή του ΡΙ3Κ /ΑΚΤ, σε ένα δοσοεξαρτώμενο τρόπο, σύμφωνα με το αποτέλεσμα της λειτουργικής μελέτης. Επιπλέον, τα αποτελέσματα των παράλληλα πειράματα με επιμόλυνση του πλασμιδίου ΑΚΤ απεικονίζεται με συνέπεια μια καταργείται ανασταλτική δράση του ΡΡ, επιβεβαιώνοντας περαιτέρω την εμπλοκή των ΡΙ3Κ /Akt καταρράκτη (Σχ. 2Β και 2C) σηματοδότησης .Η απελευθέρωση των ΡΙ3Κ μονοπατιού /ΑΚΤ σημαντικά συνέβαλε η ανάπτυξη ηπατοκυτταρικού καρκινώματος [57]. Εξατομικευμένες προσεγγίσεις βασίζονται σε μια βελτίωση της μοριακής ταξινόμησης του HCC, έχουν ληφθεί ως πιθανές στρατηγικές για την κλινική θεραπεία της HCC [58]. Εν τω μεταξύ, ο προσδιορισμός των αντιδραστηρίων που αλληλεπιδρούν με οδούς που συμβάλλουν στην HCC σηματοδότησης μπορεί να οδηγήσει στην ανάπτυξη εξατομικευμένων θεραπειών για τους ασθενείς, και με τον τρόπο αυτό τη μεγιστοποίηση της αποτελεσματικότητας και του κόστους παροχών [59]. Η μελέτη αυτή παρέχει μια νέα δυνητική θεραπευτική επιλογή για τους ασθενείς που παρουσιάζονται με συστατική ενεργοποίηση της PI3K /AKT. Από την άλλη πλευρά, αν και δεν παρατηρήθηκαν εμφανή εναλλαγές στο μονοπάτι ERK όταν η έκθεση στην ΡΡ, η επίδραση του ΡΡ σε άλλες οδούς σηματοδότησης δικαιολογεί περαιτέρω διερεύνηση.

Με ενδιαφέροντα τρόπο, βρέθηκε ότι ο VEGF ήταν ρυθμισμένα προς τα κάτω τόσο έκφραση πρωτεΐνης και τα επίπεδα έκκρισης κατά την κατεργασία ΡΡ. Επιπλέον, η διέγερση των κυττάρων με rhVEGF στο μέσο καλλιέργειας εξασθένησε την ανασταλτική επίδραση της ΡΡ επί ΑΚΤ οδού και τον καρκίνο φαινοτύπους (Εικ. 3). Carcinogenesis είναι μια διαδικασία πολλαπλών βημάτων που προκαλείται από πολλούς παράγοντες ανάπτυξης καθώς και στην ανάπτυξη του πλακούντα παράγοντα (PIGF), που προέρχεται από αιμοπετάλια αυξητικός παράγοντας (PDGF), και αγγειακού ενδοθηλιακού αυξητικού παράγοντα (VEGF) [60]. Στο μικροπεριβάλλον του όγκου, οι διάφοροι αυξητικοί παράγοντες ελέγχουν όχι μόνο τα καρκινικά κύτταρα, αλλά και η στρωματικά αυτοκρινή και παρακρινή τρόπο [61], [62]. Ο VEGF είναι ένας από τους βασικούς παράγοντες που ευθύνονται για την αγγειογένεση η οποία ελέγχει το σχηματισμό νέων αιμοφόρων αγγείων από υπάρχοντα αγγειακό σύστημα, και διαδραματίζει σημαντικό ρόλο στην ανάπτυξη του όγκου, εισβολή και μετάσταση [63], [64]. Υπάρχουν μελέτες έδειξαν ότι το εκχύλισμα του

Phellinus linteus

θα μπορούσε να καταστείλει σημαντικά την αγγειογένεση μέσω της προς τα κάτω ρύθμιση της έκκρισης VEGF με στοχοθέτηση ΑΚΤ στον καρκίνο του μαστού ή μέσω Wnt σηματοδοτικό μονοπάτι /β-κατενίνης στον καρκίνο του παχέος εντέρου [65], [ ,,,0],66]. Αντι-αγγειογόνες θεραπεία βασίζεται στην αναστολή της υποδοχέα /VEGF VEGF πιστεύεται ότι είναι ισχυρό κλινικό στρατηγική στη θεραπεία του καρκίνου, ειδικότερα για τον καρκίνο του ήπατος, που είναι μια ιδιαίτερα αγγειακό όγκο [67], [68] .Η ανασταλτική επίδραση της ΡΡ επί VEGF προτείνει τα αντι-αγγειογενετική δραστηριότητα του ΡΡ και πιθανή εμπλοκή του σε αντι-αγγειογενετική θεραπεία. Σε αυτή τη μελέτη, τα νέα ευρήματα που σχετίζονται με την αναστολή του VEGF /PI3K /AKT καταρράκτη στα καρκινικά κύτταρα του ήπατος από τη θεραπεία PP παρέχει γνώσεις σχετικά με τους μοριακούς μηχανισμούς για την υποστήριξη πιθανή κλινική εφαρμογή της.

Εν κατακλείδι, PP, ένα

Pleurotus

μανιτάρι σύμπλεγμα πολυσακχαρίτη-πρωτεΐνης, έχει τόσο

in vitro

και

in vivo

αντικαρκινική δραστικότητα εναντίον του καρκίνου του ήπατος κύτταρα μέσω της αναστολής της εκκρίσεως VEGF με μεσολάβηση αυτοκρινής ρύθμιση της ΡΙ3Κ /AKT σηματοδότησης. Περαιτέρω μελέτες σχετικά με την αντικαρκινική δράση του

Pleurotus

μανιτάρι συγκρότημα πολυσακχαρίτη-πρωτεΐνης σε καρκίνους βλαστικών καρκίνο του ήπατος θα πρέπει να διενεργείται με την αξιολόγηση πιθανή εφαρμογή της στην θεραπεία και την πρόληψη του καρκίνου.

Υλικά και Μέθοδοι

Παρασκευή και χαρακτηρισμός του μανιταριού ζεστό νερό εκχύλισμα

βρώσιμα μανιτάρια (

Pleurotus pulmonarius

) αγοράστηκε από το τοπικό σούπερ μάρκετ και τα είδη θετικά ταυτοποιείται με βάση την μορφολογία του. Όλες οι χειρουργικές επεμβάσεις πραγματοποιήθηκε υπό αναισθησία πεντοβαρβιτάλης νατρίου, και όλες οι προσπάθειες έγιναν για να ελαχιστοποιήσουν την ταλαιπωρία.