Αφηρημένο

Ιστορικό

Για να διαπιστωθεί, χαρακτηρίζουν και διαλεύκανση πιθανούς μηχανισμούς αντοχής που αποκτήθηκαν μπλεομυκίνη (BLM) με τη χρήση ανθρώπινων καρκινικών κυτταρικών σειρών. Επτά BLM-ανθεκτικές κυτταρικές γραμμές καθιερώθηκαν με έκθεση σε κλιμάκωση BLM συγκεντρώσεις για μια περίοδο 16-24 μηνών. IC

50 τιμές και κυτταρικές χρόνους διπλασιασμού ποσοτικοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας δοκιμασία κυτταροτοξικότητας πραγματικό χρόνο. COMET και γ-Η2ΑΧ δοκιμασίες, ανάλυση κυτταρικού κύκλου, και η αξιολόγηση της απόπτωσης διερευνώνται περαιτέρω οι μηχανισμοί του BLM αντίστασης σε αυτές τις κυτταρικές γραμμές.

Αποτελέσματα

Σε σύγκριση με τη γονική κυτταρικές σειρές, προσδιορισμοί κυτταροτοξικότητας σε πραγματικό χρόνο αποκάλυψε 7 έως 49 φορές μεγαλύτερο IC

50 και μέση διπλασιασμό αύξηση του χρόνου 147% (εύρος 64% -352 %) σε BLM ανθεκτικά υπο-κλώνοι (ρ P P P P & lt? 0,05 για σύγκριση μεταξύ ανθεκτικών και γονική κυτταρική σειρά μετά από BLM θεραπεία. Λιγότερο απόπτωση των κυττάρων βρέθηκε σε τρεις (ΕΔ

0.05, NCCIT

1.5, και Η322Μ

2,5) από τις τέσσερις BLM-ανθεκτικές γραμμές, σε σύγκριση με τη γονική γραμμές τους.

Η

Συζήτηση

Σε αυτή τη μελέτη, έχουμε δημιουργήσει με επιτυχία επτά BLM ανθεκτικών ανθρώπινων καρκινικών κυτταρικών γραμμών από εμπορικά διαθέσιμες κυτταρικές γραμμές καρκίνου των διαφόρων οργάνων προελεύσεων (πνεύμονα, όρχεων, του μαστού, των νεφρών, καθώς και το κεντρικό νευρικό σύστημα). Μετά την ξαφνική οξεία, βραχυπρόθεσμη έκθεση σε BLM, αυτές οι BLM-ανθεκτική υπο-κλώνους παρουσίασαν λιγότερες βλάβες του DNA, είχαν μεγαλύτερους χρόνους διπλασιασμού, είχαν χαμηλότερο ποσοστό των κυττάρων σε G2 /M σύλληψη και είχαν μειωμένη απόπτωση, σε σύγκριση με τους περισσότερους BLM-ευαίσθητο γονικές κυτταρικές σειρές. κυτταρικές γραμμές BLM ανθεκτικές αναπτύχθηκαν με προοδευτική αύξηση της επώασης BLM συγκέντρωση για μια παρατεταμένη περίοδο 16-24 μηνών. Προηγούμενες μελέτες μπορεί να χρησιμοποιηθούν παρόμοιες μεθόδους στην καλλιέργεια BLM ανθεκτική υπο-κλώνους. Ωστόσο, μερικά από αυτά έφθασε στο υψηλό επίπεδο BLM-αντίστασης που παρατηρείται σε αυτήν την μελέτη (το οποίο ήταν 7 έως 49 φορές αύξηση στην IC

50 μεταξύ ανθεκτικών και γονικής υπο-κλώνους, σε σύγκριση με μια φορές αύξηση 3-20 σε μια άλλη μελέτη [15]). Επιπλέον, μέσω της ανάλυσης της βλάβης που προκαλείται από BLM-DNA, τη διανομή του κυτταρικού κύκλου, και τα ποσοστά της απόπτωσης, αρκετές υποθετικές μηχανισμοί BLM αντοχής /ευαισθησίας αξιολογήθηκαν.

BLM είναι γνωστό ότι προκαλεί επεκταθεί G2 /M σύλληψη ή /και την κυτταρική απόπτωση [9] σε BLM ευαίσθητα κύτταρα. Αυτό μπορεί να προκαλείται από ATM /ΑΤΚ [26,27], τα ανοδικά πρωτεΐνες ενός επιδιόρθωση του DNA και οδού σηματοδότησης που ενεργοποιεί G2 /M σύλληψης ή κυτταρικής απόπτωσης μέσω μιας σειράς κατάντη προϊόντων γονιδίων όπως Chk1 /2, CDC 25 [28 ], p53 και p21

WAF1 /Cip1, όπου οι δύο τελευταίες είναι κρίσιμες για τη διατήρηση της G2 /M του κύκλου σύλληψης [29]. Επιπλέον, ιστόνη Η2ΑΧ βρέθηκε να είναι απαραίτητη για την ενεργοποίηση του σημείου ελέγχου G2 /M [30].

Comet και τα αποτελέσματα γ-Η2ΑΧ απεκάλυψε λιγότερη BLM προκαλούμενη βλάβη του DNA στα ανθεκτικές γραμμές, γεγονός που υποδηλώνει ότι τα ανθεκτικά υπο-κλώνους μπορεί να έχουν αυξημένη ικανότητα για την πρόληψη ή /και τη μείωση των βλαβών του DNA που προκαλείται από BLM. Αυτό μπορεί να οφείλεται σε μειωμένη κυτταρική πρόσληψη του BLM, και /ή ενισχυμένη BLM εξάλειψη /αποτοξίνωση, που προκαλείται από υποδοχείς της κυτταρικής επιφάνειας ή μεταφορείς [31], αντιοξειδωτικά μόρια /ένζυμα που μειώνουν BLM δημιουργείται ROS [11,32]? ή ένζυμα που αδρανοποιούν BLM [33,34]. Μελλοντικές μελέτες θα πρέπει να μελετήσει περαιτέρω αυτούς τους μηχανισμούς.

Σε αυτή τη μελέτη, BLM αντίσταση οδήγησε επίσης σε λιγότερο G2 /M σύλληψη και την κυτταρική απόπτωση, σύμφωνα με τα αποτελέσματα από μια προηγούμενη μελέτη σε μια ενιαία γραμμή BLM-ανθεκτική [11] . Η ελαφρά αύξηση στην G2 /M σύλληψης στη βασική γραμμή (πριν από την υψηλή δόση BLM θεραπεία) για τις εν λόγω BLM ανθεκτικών υπο-κλώνους μπορεί να εξηγηθεί από χρόνια έκθεση σε BLM. Το γεγονός ότι η BLM-ανθεκτικά κύτταρα ήταν σε θέση να πολλαπλασιάζονται σε BLM συγκέντρωση που δεν ήταν βιώσιμες για γονικές σειρές τους υποδηλώνει ότι η διαφυγή του μπλοκαρίσματος του κυτταρικού κύκλου θα μπορούσε να είναι ένας άλλος μηχανισμός ανθεκτικότητας. Στο σύνολό τους, τα αποτελέσματά μας δείχνουν ότι BLM ανθεκτικά κύτταρα μπορεί να έχουν αποκτήσει αυξημένη ικανότητα για την πρόληψη /μείωση της βλάβης του DNA που προκαλούνται από BLM. Αυτό με τη σειρά του, μπορεί να οδηγήσει σε μειωμένο G2 /M σύλληψη και απόπτωση.

Μια σταδιακή δόση κλιμακούμενη μέθοδος για BLM ανάπτυξη αντοχής μπορεί να οδηγήσει σε μια σχέση δόσης-απόκρισης μεταξύ BLM συγκεντρώσεις συντήρησης, IC

50 τιμές και οι χρόνοι διπλασιασμού παρατηρήθηκαν σε ACHN

0, AHCN

0,1 και AHCN

0.25 κύτταρα. Ωστόσο, μέχρι τα ευρήματα αυτά επιβεβαιώθηκαν σε άλλα σύνολα υπο-κλώνους, αυτό θα παραμείνει ένα ενδιαφέρον εύρημα που χρήζει επικύρωσης.

Μετά την αφαίρεση συγκεντρώσεις BLM συντήρησης από τις επτά ανθεκτική υπο-κλώνους, υπήρξε μερική αντιστροφή της IC

50 αξίες και ο χρόνος διπλασιασμού σε τρεις από τις επτά κυτταρικές σειρές. Η απουσία της αναστρεψιμότητας στις άλλες τέσσερις κυτταρικές σειρές θα μπορούσε να είναι το αποτέλεσμα των ατομικών διαφορών κυτταρική γραμμή, ή ίσως αυτές οι κυτταρικές σειρές χρειάζονται πλέον διαλείμματα από την BLM έκθεση για την ανάπτυξη και πάλι BLM ευαισθησία.