PLoS One: Η αλκυλίωση του Ογκοκατασταλτικής PTEN Ενεργοποιεί Akt και β-κατενίνης Σηματοδοσίας: Ένας μηχανισμός που συνδέει φλεγμονή και το οξειδωτικό στρες με τον καρκίνο

Αύγουστος 23rd, 2013 elhealth του καρκίνου άρθρα

Αφηρημένο

PTEN, ένα φωσφατιδυλοϊνοσιτολικής-3-φωσφατάση, εξυπηρετεί διττό ρόλο ως καταστολέας των όγκων και ρυθμιστής της κυτταρικής αναβολικού /καταβολική μεταβολισμό. Προσαρμογή οξειδοαναγωγικά ευαίσθητη κυστεϊνυλ θειόλης σε ΡΤΕΝ για μεταγωγή σήματος από το υπεροξείδιο του υδρογόνου μπορεί να έχουν επάνω μια ευπάθεια σε άλλους μεσολαβητές του οξειδωτικού στρες και της φλεγμονής, ιδιαίτερα αντιδραστικά είδη καρβονυλίου, οι οποίες παρατηρούνται συχνά υποπροϊόντα των υπεροξείδωσης αραχιδονικού οξέος. Χρησιμοποιώντας κύτταρα MCF7 και ΗΕΚ-293, αναφέρουμε ότι αρκετές δραστικές αλδεΰδες και κετόνες, π.χ. ηλεκτρόφιλο α, β-enals (ακρολεΐνη, 4-υδροξυ-2-εννεανάλη) και α, β-ενόνες (προσταγλανδίνη Α

2, Δ12-προσταγλανδίνη J

2 και 15-δεοξυ-Δ-12,14- προσταγλανδίνης J

2) ομοιοπολικά τροποποιήσει και να αδρανοποιήσουν την κυτταρική ΡΤΕΝ, με επακόλουθη ενεργοποίηση των PKB /Akt κινάσης? φωσφορυλίωση της Akt υποστρωμάτων? αυξημένο κυτταρικό πολλαπλασιασμό? και αυξημένη σηματοδότηση πυρηνικής β-κατενίνης. Αλκυλίωση PTEN με α, β-enals /ενόνες και την παρέμβαση συγκράτησης της κυτταρικής PKB /Akt της σηματοδότησης μπορεί να επιτείνει υπερπλασίας και νεοπλασματικές διαταραχές που σχετίζονται με τη χρόνια φλεγμονή, το οξειδωτικό στρες, ή γήρανση

Παράθεση:. Covey TM, ΕΔΕΣ Κ, Coombs GS, Virshup DM, Fitzpatrick FA (2010) αλκυλίωση της ογκοκατασταλτικό PTEN Ενεργοποιεί Akt και β-κατενίνης Σηματοδοσίας: Ένας μηχανισμός που συνδέει φλεγμονή και το οξειδωτικό στρες με τον καρκίνο. PLoS ONE 5 (10): e13545. doi: 10.1371 /journal.pone.0013545

Επιμέλεια: Marcelo Γ Bonini, Πανεπιστήμιο του Ιλινόις στο Σικάγο, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 8 Ιούλη 2010? Αποδεκτές: 30 Αύγ, 2010? Δημοσιεύθηκε: 21 Οκτ, 2010

Copyright: © 2010 Covey et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Το έργο υποστηρίχθηκε από τα Εθνικά Ινστιτούτα Ερευνών Υγείας Grant έργου R01 AI 26730 (Frank A. Fitzpatrick), Ερευνητικό Πρόγραμμα Έργων PO1 CA73992 Έργο 4 (David M. Virshup) και το Project 5 (Frank A. Fitzpatrick), και μικρή επιχορήγηση του Προγράμματος R03 MH082387 -01 (Gary S. Coombs, David M. Virshup και ο Frank A. Fitzpatrick). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Η φλεγμονή και τον καρκίνο είναι άρρηκτα συνδεδεμένη [1], [2]. φλεγμονή «σιγοκαίει» [3], που ονομάζεται επίσης παρα-φλεγμονής [4], λαμβάνει χώρα σε πολλούς τύπους προ-κακοήθεις και κακοήθεις όγκους, π.χ. ορθοκολικού αδενώματος και αδενοκαρκινώματος όπου η περιεκτικότητα των φλεγμονωδών λευκοκυττάρων και η φλεγμονώδης ένζυμο κυκλοοξυγενάση-2 (COX-2) επιρροή της προόδου, την πρόγνωση και την επιβίωση [5], [6]. Μη στεροειδή αντιφλεγμονώδη φάρμακα (ΜΣΑΦ) που αναστέλλουν την COX-2 μπορεί να αποτρέψει ορισμένες, αλλά όχι όλες, οι καρκίνοι [7]? και μερικά ΜΣΑΦ, όπως sulindac σουλφόνη, ενεργούν ανεξάρτητα από COX και προσταγλανδίνη Ε

2 (PGE

2) αναστολή [8]. Άλλα ΜΣΑΦ, π.χ. celecoxib, μπορεί να ενισχύσει παραδόξως εξέλιξης του όγκου σε APC

Min /+ ποντίκια, τα οποία το μοντέλο εντερική ογκογένεση [9]. Ενώ COX-2 και του μεταβολίτη της PGE

2 είναι αναμφίβολα σημαντική, παρα-φλεγμονή μπορεί να ενισχύσει ογκογένεση με μηχανισμούς που δεν είναι εντελώς κατανοητοί. Έμφυτο ανοσοποιητικό μηχανισμοί είναι οι πρώτοι υποψήφιοι για την έρευνα.

Συνήθως, έμφυτο ανοσοποιητικό φλεγμονή αποτελείται από μια φάση «τραυματισμό» για να εξολεθρεύει παθογόνα, και μια «θεραπεία» φάση για την επισκευή και την αναγέννηση κατεστραμμένων ιστών υποδοχής [10]. Η μετάβαση μεταξύ των φάσεων εξαρτάται από την προοδευτική εξάντληση των φλεγμονωδών μεσολαβητών και μετατροπή ορισμένων προ-φλεγμονωδών μεσολαβητών, π.χ. PGD

2, σε αντι-φλεγμονώδη μεταβολίτες, Δ12-PGJ

2 [11], [12], [13]. Στοιχεία της ίδιας της φλεγμονή θέση, π.χ. αντιδραστικά είδη οξυγόνου (ROS), λευκωματίνη, ινοβλάστες και τα ουδετερόφιλα, ενορχηστρώνουν τη μετατροπή αυτή [14], [15], [16], [17]. Για παράδειγμα, αντιδραστικά είδη οξυγόνου (ROS) προκαλούν μη ενζυματική υπεροξείδωση των απαραίτητων λιπαρών οξέων, όπως το αραχιδονικό οξύ (ΑΑ) [18]. υδροϋπεροξείδια AA μετατρέπουν εύκολα σε αντιδραστικά προϊόντα που περιέχουν μια α, β-ακόρεστο καρβονυλο [19], [20] που περιλαμβάνουν ακρολεΐνη (2-προπενάλη) [21], [22], 4-υδροξυ-2-εννεανάλη (4-ΗΝΕ) [23], και προσταγλανδίνες κυκλοπεντενόνη (cyPGs), PGA

2 και Δ12-PGJ

2 [24]. Η ομοιοπολική τροποποίηση πρωτεϊνών /β ΝΡκΒ και ΙΚΚα από αυτές τις α, β-ακόρεστες καρβονυλικές μεταβολίτες (δηλαδή πρωτεΐνη αλκυλίωση) φαίνεται να είναι ένα «διακόπτης» για να τερματίσει φλεγμονής [25]. Μετά από αυτό το προηγούμενο, υποθέσαμε ότι η αλκυλίωση μπορεί επίσης να ενεργεί ως «διακόπτη» για να ξεκινήσει την επισκευή και την αναγέννηση του ιστού που έχει πληγεί από τη φλεγμονή.

ΡΤΕΝ (φωσφατάση tensin ομόλογο στο χρωμόσωμα 10) είναι ένα φωσφατιδυλοϊνοσιτολικής-3-φωσφατάση με δύο φυσιολογικοί ρόλοι: ογκοκατασταλτικό και ρυθμιστής των αναβολικών /σηματοδότησης καταβολικές κυττάρων. Η

PTEN

γονίδιο συχνά μεταλλάσσεται ή απενεργοποιούνται σε προχωρημένους καρκίνους [26]. Χρησιμοποιώντας MCF7 και κύτταρα ΗΕΚ-293, αναφέρουμε ότι αντιδραστική α, β-ακόρεστα καρβονύλια (ακρολεΐνη, 4-ΗΝΕ, και Δ12-PGJ

2) απενεργοποιούν την πρωτεΐνη ΡΤΕΝ – όχι το γονίδιο – με αλκυλίωση. Η αδρανοποίηση του ΡΤΕΝ με α, β-ακόρεστες καρβονύλια οδηγεί σε αυξημένη σηματοδότηση Akt, ενισχυμένη σηματοδότηση πυρηνικής β-κατενίνης, και της επαυξημένης κυτταρικό πολλαπλασιασμό. Redox σηματοδότησης από PTEN μπορεί να έχουν εξελιχθεί για να ενεργοποιήσετε κύτταρα (ιστούς) για τη διαστρωμάτωση απάντησή τους στο οξειδωτικό στρες. Για παράδειγμα, η παροδική αναστολή της ΡΤΕΝ από αντιδραστικά είδη οξυγόνου ή καρβονύλ, και το αντίστοιχο σηματοδότηση μέσω Akt /ΟδΚ3β /β-κατενίνης /TCF4 /Ι.ΕΡ1 θα μπορούσαν να επωφεληθούν τον ξενιστή μέσω αυξανόμενης διάδοσης και την αναγέννηση του ιστού που έχει πληγεί από οξεία φλεγμονή ή οξειδωτικό στρες. Περιπλανώμενος και επίμονη PTEN αδρανοποίηση από τον ίδιο μοριακό μηχανισμό θα μπορούσε να ευνοήσει την εξέλιξη του όγκου και παρέχουν μια αιτιολογική σχέση μεταξύ «σιγοκαίει» της φλεγμονής και ορισμένων μορφών καρκίνου, ειδικά καρκίνου του παχέος εντέρου, όπου τόσο η PTEN και η APC καταστολείς των όγκων περιορίζουν σηματοδότησης πυρηνικής β-κατενίνης [27] .

Αποτελέσματα

Η α, β-ακόρεστες καρβονύλια ακρολεΐνη, 4-ΗΝΕ και Δ12-PGJ

2 ομοιοπολικά τροποποιούν την κυτταρική PTEN

Είμαστε εκτεθειμένοι κύτταρα MCF-7 για αντιπροσωπευτικές α, β-ακόρεστες καρβονυλικές (Εικόνα 1C) ή H

2, τότε επιλεκτικά με ετικέτα οποιεσδήποτε πρωτεΐνες που είχαν οξειδωθεί ή καρβονυλιώνεται θειόλες χρησιμοποιώντας ΝΕΜ-βιοτίνη (Σχήμα 1Α). Στη συνέχεια απορροφάται πρωτεΐνες με βιοτίνη επίτοπο επάνω σε NeutrAvidin (ΝΑ) σφαιρίδια και ταυτοποιήθηκε καρβονυλιώνεται ΡΤΕΝ με SDS-PAGE και ανοσοκηλίδωση. Τα κύτταρα MCF-7 σε κατεργασία με 10 μΜ Δ12-PGJ

2, 4-ΗΝΕ, ή ακρολεϊνης περιείχε καρβονυλιώνεται ΡΤΕΝ σε ποσότητες συγκρίσιμες με κύτταρα κατεργασμένα με 100 μΜ H

2 (Σχήμα 1Α, NA pulldown) . Η μέθοδος αυτή δεν κάνει διάκριση μεταξύ οξειδώνεται και καρβονυλιωθούν θειόλες για PTEN. Ωστόσο, ηλεκτροφόρηση υπό μη αναγωγικές συνθήκες, που ακολουθείται από κηλίδωση Western, έδειξε ότι ΡΤΕΝ μετανάστευσε ως μια διακριτή ισομορφή οφείλονται σε μία οξειδωμένη δισουλφίδιο [28], [29], το οποίο συνέβη μόνο σε κύτταρα που έλαβαν θεραπεία με 100 μΜ H

2, αλλά όχι σε κύτταρα που έλαβαν θεραπεία με α, β-ακόρεστου καρβονυλίου (Δ12-PGJ

2, 4-ΗΝΕ, ακρολεΐνη) ή 15-ΗΡΕΤΕ, ένα λιπίδιο υδροϋπεροξειδίου (Σχήμα 1Β).

(Α) Διάγραμμα της διαδικασίας για τον εντοπισμό ΡΤΕΝ με μία οξειδωμένη ή αλκυλιωμένη θειόλης στα κύτταρα που εκτίθενται σε ROS ή α, β-ακόρεστα καρβονύλια. Το αντι-ΡΤΕΝ ανοσοκηλίδος δείχνει οξειδωμένη ή καρβονυλιώνεται ΡΤΕΝ (NA Pulldown) σε σχέση με το συνολικό ΡΤΕΝ (Cell Lysate) που απομονώθηκε από κύτταρα MCF-7 σε επεξεργασία 30 min με όχημα (DMSO), 10 μΜ Δ12-PGJ

2 ή 4-ΗΝΕ έναντι 10 min με 100 μΜ H

2? μια ανοσοκηλίδα από ένα ξεχωριστό πείραμα δείχνει οξειδωμένα, καρβονυλιώνεται και συνολική ΡΤΕΝ σε κύτταρα σε αγωγή για 30 λεπτά με όχημα ή 20 μΜ ακρολεϊνη έναντι 10 min με 100 μΜ H

2. (Β) Αντι-ΡΤΕΝ ανοσοαποτύπωμα των προϊόντων της λύσης MCF-7 κυττάρων κλασματώθηκαν με SDS-PAGE υπό μη αναγωγικές συνθήκες. ΡΤΕΝ οξειδώνεται προς Cys

124-Cys

71 δισουλφιδίου εμφανίζεται ως ένα είδος που μετακινείται ταχύτερα (ΡΤΕΝ οξειδωμένη δισουλφίδιο) μόνο σε κύτταρα επεξεργασμένα με H

2. Το είδος αυτό δεν ήταν ανιχνεύσιμη σε MCF-7cells αγωγή 30 λεπτά με φορέα DMSO ή 20 μΜ κάθε Δ12-PGJ

2, 4-ΗΝΕ, ακρολεΐνη ή 15-ΗΡΕΤΕ. (C) Χημικές δομές των τυπικών α, β-ακόρεστες καρβονύλια. Ακρολεΐνη και 4-ΗΝΕ είναι α, β enals? Δ12PGJ

2 είναι ένα α, β ενόνη. Οι ηλεκτρονιόφιλη άνθρακες β συμβολίζεται με δ

+. Οι κηλίδες είναι αντιπροσωπευτικά των αποτελεσμάτων που λαμβάνονται σε τουλάχιστον τρία ανεξάρτητα πειράματα.

Cyclopenteneone PG-βιοτίνη αναλόγων είναι μοντέλο α, β-ενόνες που αλκυλιώσουν PTEN

Το θειολικό κυστεϊνυλικά στην ενεργό PTEN τοποθεσία (-HC (X

5) RT-) είναι επιρρεπής σε οξείδωση, διότι είναι ένα ισχυρό πυρηνόφιλο, pKa ~ 5. Αυτό το χαρακτηριστικό θα πρέπει επίσης να διευκολύνουν την αλκυλίωση του PTEN με α, β-ακόρεστες καρβονύλια. Χρησιμοποιήσαμε CyPG-βιοτίνη ανάλογα, τα οποία έχουν ηλεκτρόφιλες β-άνθρακα ικανή για πυρηνόφιλη προσθήκη (αντίδραση Michael), όπως χημικά μοντέλα για να ελεγχθεί αυτή η υπόθεση [30]. Αλκυλίωση οποιωνδήποτε κυτταρικών πρωτεϊνών από αυτά τα ανάλογα θα εισήγαγε μια βιοτίνη επίτοπο

de novo

(Σχήμα 2Α). PGA

1-βιοτίνη και Δ12 PGJ

2-βιοτίνη και οι δύο παραλαμβάνεται εντός κυττάρων MCF-7 και σχηματίζονται ομοιοπολικές προσαγωγές με ~ 20 πρωτεΐνες (Σχήμα 2Β). Δ12 PGJ

2-βιοτίνη (μία δι-λειτουργική διενόνη) ήταν πιο δραστικές από PGA

1-βιοτίνη (μονο-λειτουργική ενόνη), συμφωνώντας με άλλους που αναφέρθηκαν ~20-30 πρωτεϊνικούς στόχους τροποποιηθεί με cyPG-βιοτίνης σε 3Τ3 ή τα μιτοχόνδρια [31], [32]. Κατάσχεση του

de novo

βιοτινυλιωμένο κυτταρικές πρωτεΐνες για χάντρες NA, ακολουθούμενη από ανοσοαποτύπωση με αντι-PTEN αντισώματα, έδειξε ότι ΡΤΕΝ σχηματίζεται μια ομοιοπολική ένωση προσθήκης ~ 10 φορές πιο εύκολα με το Δ12-PGJ

2-βιοτίνη από με PGA

1biotin (Σχήμα 2C, λωρίδα 4 vs λωρίδα 3).

(Α) Michael αντίδραση προσθήκης μεταξύ PTEN και Δ12-PGJ αναλογική

2-βιοτίνη. Μετά την επεξεργασία των κυττάρων με cyPG-βιοτίνης, οι πρωτεΐνες με ένα

de novo

βιοτίνη επίτοπο τους απομόνωσε επάνω σε σφαιρίδια neutravidin (NA Pulldown), έπειτα κλασματοποιήθηκαν με SDS-PAGE για ανοσοκηλίδωση. (Β) Αντι-βιοτίνης ανοσοκηλίδα των πρωτεϊνών από λύματα των κυττάρων MCF-7 σε κατεργασία με DMSO (λωρίδα 1), 10 μΜ PGA

1-βιοτίνη (λωρίδα 2), και 10 μΜ Δ12PGJ

2-βιοτίνη (λωρίδα 3). Δ12-PGJ

2 βιοτίνη σχημάτισε ομοιοπολικό προϊόν προσθήκης με πρωτεΐνες ευκολότερα από PGA

1-βιοτίνη (αιχμές βελών). (C) Αντι-ΡΤΕΝ ανοσοστύπωμα κυτταρικών ΡΤΕΝ που σχηματίστηκε ομοιοπολικό προϊόν προσθήκης με cyPG-βιοτίνη (NA Pulldown) σε σχέση με το συνολικό ΡΤΕΝ (Cell Lysate) από κύτταρα MCF-7 σε κατεργασία με DMSO (διαδρομή 1), 1 ή 10 μΜ PGA

1-βιοτίνη (λωρίδες 2, 3), και 1 ή 10 μΜ PGJ

2-βιοτίνη (λωρίδες 4, 5). Οι κηλίδες είναι αντιπροσωπευτικά των αποτελεσμάτων που λαμβάνονται σε τουλάχιστον τρία ανεξάρτητα πειράματα.

Η α, β-ενόνης, Δ12-PGJ

2, παρεμβαίνει με PTEN καταστολή της Akt κινάσης

Οι αυξητικοί παράγοντες, ινσουλίνη, και άλλα ερεθίσματα έγκαιρη ΡΙ3-Κ για να κάνει PIP

3, η οποία προσλαμβάνει ΡΚΒ /Akt κινάση στην κυτταρική μεμβράνη όπου ΡϋΚ1 /2 φωσφορυλιώνει Akt Thr

308 και Akt Ser

473 υπολείμματα, αντίστοιχα [33], [34], [35]. PTEN ρυθμίζει προς τα κάτω PKB /Akt ενεργοποίηση από το μεταβολισμό PIP

3 έως PIP

2 [36]. α, β-ακόρεστες καρβονύλια που αλκυλιώσουν κυτταρική PTEN μπορεί να επηρεάσει την καταστολή της Akt κινάσης. Ένα αντιπροσωπευτικό α, β-ενόνη, Δ12-PGJ

2, προκάλεσε μια συγκέντρωση και εξαρτώμενη από το χρόνο αύξηση της φωσφο- (T

308) Akt σε κύτταρα MCF-7. Τόσο λίγο όσο περίπου 2 μΜ Δ12-PGJ

2 προκάλεσε μια ημιμέγιστη απόκριση (Σχήμα 3Α). Αυξήσεις στην κυτταρική φωσφο- (Τ

308) Akt ήταν ανιχνεύσιμα στα 10 λεπτά, μέγιστη στα 30 λεπτά, και ανθεκτικό για & gt? 120 λεπτά (Σχήμα 3Β). Δ12-PGJ

2 αυξημένο σχηματισμό φωσφο (Τ

308) Akt χωρίς να μεταβάλει το σχηματισμό της φωσφο (S

241) ΡϋΚ1 (η κινάση που φωσφορυλιώνει Τ

308 Akt), και χωρίς μεταβάλλοντας την έκφραση της πρωτεΐνης ΡΤΕΝ (Σχήμα 3C). Αυτά τα στοιχεία υποδηλώνουν ότι η Δ12-PGJ

2 παρενέβαινε με χωρητικότητα PTEN να συγκρατήσει την ενεργοποίηση της Akt κινάσης. Σύμφωνα με αυτή την ερμηνεία, συν-επεξεργασία των κυττάρων με cyPGs συν 50 μΜ LY294002, μείωσε τα επίπεδα του φωσφο- (T

308) Akt με αναστολή ΡΙ3-Κ, στην κορυφή της ΡΙ3-Κ /→ ΡϋΚ1 /2 → Akt καταρράκτη κινάσης (Σχήμα 3C, λωρίδες 3 vs 2, και 6 έναντι 5). Επιπλέον, 1 μΜ διαφόρων PGA και ισομερή PGJ, και άλλα α, β-ενόνες απευθείας ανέστειλε απομονωθεί ένζυμο ΡΤΕΝ [Πίνακας 1]. Η ηλεκτρονιόφιλη β άνθρακα cyPGs είναι απαραίτητη για την αναστολή, δεδομένου ότι ένα δομικά παρόμοια, αλλά μη ηλεκτρονιόφιλη cyPG, PGB

1, ήταν ανενεργό.

(Α) ανοσοστυπώματα του φωσφο (Τ

308 ) Akt σχέση με τη συνολική Akt σε προϊόντα λύσης από κύτταρα MCF-7 σε επεξεργασία 30 min με 0-20 μΜ Δ12-PGJ

2. Το ραβδόγραμμα δείχνει την αύξηση του φωσφο (Τ

308) Akt /ολική Akt (μέσος όρος ± s.e.m) από n≥3 ξεχωριστά πειράματα. (Β) Ανοσοστύπωμα φωσφο- (T

308) Akt σχέση με τη συνολική Akt σε προϊόντα λύσης από κύτταρα MCF-7 σε κατεργασία με 20 μΜ Δ12-PGJ

2 για 0-120 λεπτά. Το ραβδόγραμμα δείχνει την αύξηση του φωσφο (Τ

308) Akt /ολική Akt (μέσος όρος ± s.e.m) από n = 4 ξεχωριστά πειράματα. (Γ) ανοσοστυπώματα του συνολικού Akt, φωσφο (T

308) Akt, ΡΤΕΝ, φωσφο- (S

241) ΡϋΚ1 από προϊόντα λύσης των κυττάρων MCF-7 σε επεξεργασία 30 min με 20 μΜ Δ12-PGJ

2 (λωρίδα 2, 3) και 20 μΜ PGA

1 (λωρίδα 5, 6) με την παρουσία της ΡΙ3-Κ αναστολέα 50 μΜ LY294002 (λωρίδα 3, 6) ή φορέα DMSO (λωρίδα 2, 5). (D) Ανοσοστύπωμα φωσφο- (T

308) Akt σχέση με τη συνολική Akt σε προϊόντα λύσης από κύτταρα MCF-7 κατεργάζεται 4 ώρες με όχημα, οι κυκλοπεντενόνες – PGJ

2, Δ12-PGJ

2, και 15-δεοξυ-Δ12-PGJ

2, ή προδρόμου τους PGD

2. Για (Γ) και (Δ), κηλίδες είναι αντιπροσωπευτικά των αποτελεσμάτων που λαμβάνονται σε τρία ανεξάρτητα πειράματα.

πειράματα δομής δραστικότητας έδειξαν ότι διάφορα cyPGs J-series, συμπεριλαμβανομένου PGJ

2 , Δ12 PGJ

2 και 15-δεοξυ- Δ12, 14-PGJ

2, αυξημένη φωσφο- (T

308) Akt σε κύτταρα MCF-7, σε σύγκριση με όχημα ή προδρόμου τους PGD

2 (Σχήμα 3D). PGA

1 είχε μέτρια επίδραση στην Akt φωσφορυλίωση κυτταρικής (Σχήμα 3C, λωρίδα 5), το οποίο αντιστοιχεί με ασθενέστερη ομοιοπολική τροποποίηση της κυτταρικής ΡΤΕΝ (Σχήμα 2C, λωρίδα 3).

Ενεργοποιημένο φωσφο- (T

308 /S

473) Akt κινάση μπορεί να φωσφορυλιώνει διάφορα υποστρώματα πρωτεϊνών που ρυθμίζουν τον κυτταρικό πολλαπλασιασμό και τη μοίρα [35]. Η φωσφορυλίωση της Akt υποστρωμάτων με έναν επίτοπο RxRxx-φωσφο-S /T, συνέπεσε με την αύξηση της φωσφο- (T

308) Akt σε κύτταρα MCF-7 σε κατεργασία με 10 μΜ Δ12-PGJ

2 (Σχήμα 4Α). Akt ενεργοποίηση κινάσης συνέπεσε επίσης με Akt-εξαρτώμενο πολλαπλασιασμό σε MCF-7 κύτταρα σε επεξεργασία με 1-10 μΜ Δ12-PGJ

2 (Σχήμα 4Β). Αυτό το εύρημα είναι συμβατό με τα στοιχεία διφασικό δράσεις cyPGs, οπότε αυξάνουν τον πολλαπλασιασμό των καλλιεργημένων κυττάρων σε ~ 1 μΜ [37], [38], ενώ μειώνουν τον πολλαπλασιασμό ή να προκαλέσει την απόπτωση τροποποιώντας άλλους στόχους πρωτεΐνης σε -50 μΜ [39 ].

(Α) ανοσοστυπώματα του φωσφο (Τ

308) Akt, ολική Akt, και πολλά φωσφοπρωτείνες με (K /R) Χ- (Κ /Ε) -xx- (S /Τ), ένα μοτίβο αναγνωρίζεται και φωσφορυλιώνεται από την ενεργό φωσφο- (T

308) Akt, σε προϊόντα λύσης από κύτταρα MCF-7 κατεργάζεται 0 και 10 μΜ Δ12-PGJ

2. (Β) Σχετική πολλαπλασιασμό των κυττάρων MCF-7 (μέση ± sem, η = 4) υποβλήθηκε σε επεξεργασία με 0, 1, και 10 μΜ Δ12-PGJ

2 μόνο (▪), ή με την παρουσία 10 μΜ του αναστολέα IV (▪), ένας αναστολέας κινάσης Akt. (C) ανοσοστυπώματα του φωσφο (S

473) Akt, ολική Akt? φωσφο (S

9) ΟδΚ3β, συνολικής ΟδΚ3β? και β-κατενίνης και της τουμπουλίνης σε προϊόντα λύσης από κύτταρα ΗΕΚ 293 μετά τη θεραπεία για το 0,1, 3, 6 και 16 ώρες με 6 μΜ Δ12PGJ

2, 6 μΜ 4-ΗΝΕ ή 20 μΜ ακρολεΐνη. Για (Α) και (Γ), οι κηλίδες είναι αντιπροσωπευτικά των αποτελεσμάτων που λαμβάνονται σε τρία ανεξάρτητα πειράματα.

α, β-ακόρεστα καρβονύλια προκαλέσει χρονικά εξαρτώμενη συσσώρευση κυτταρικών φωσφο- (S

473) Akt κινάσης (ενεργό) → φωσφο (S

9) ΟδΚ3β (ανενεργό) → β-κατενίνης και την αύξηση των πυρηνικών β-κατενίνης σηματοδότησης

ΟδΚ3β μετατρέπει β-κατενίνης σε φωσφορομολυβδαινικής (S

33/37 /Τ

41) β-κατενίνης, η οποία απομακρύνεται γρήγορα από το πρωτεασώματος 26S [40]. ΟδΚ3β ενεργεί σε συνεννόηση με το ογκοκατασταλτικό APC. Σε κύτταρα με μεταλλαγμένη APC, ή όταν προσδέματα WNT διεγείρουν τα κύτταρα με άγριου τύπου APC, ΟδΚ3β αποτυγχάνει να φωσφορυλιώσει β-κατενίνης, η οποία του επιτρέπει να συσσωρεύονται, συγγενή με άλλους παράγοντες της πυρηνικής μεταγραφής και εκφράζουν γονίδια-στόχους του (π.χ.

c-myc

κυκλίνη D1

) [41]. PTEN μπορεί να εμποδίσει τη συσσώρευση β-κατενίνης /σηματοδότησης, ευνοώντας τη διατήρηση των ενεργών και ανενεργών ΟδΚ3β PKB /Akt κινάση σε κάποια [42], [43], αλλά δεν είναι όλα τα πειραματικά συστήματα [44], [45]. Κατά συνέπεια, αδρανοποιημένο ΡΤΕΝ πρέπει να αυξάνουν σηματοδότηση β-κατενίνης, ευνοώντας τη διατήρηση των ανενεργών φωσφο- (S

9) ΟδΚ3β και ενεργός φωσφο- (S

473) Akt κινάσης. έτσι Υποθέσαμε ότι αυτοί οι ηλεκτρονιόφιλες μεσολαβητές μπορεί να επηρεάσουν SS-κατενίνης σηματοδότηση μέσω αυτού του μηχανισμού. Για να διερευνήσουν περαιτέρω το θέμα, χρησιμοποιήσαμε κύτταρα ΗΕΚ 293 που έχουν ένα άθικτο οδός σηματοδότησης β-κατενίνης. Βρήκαμε ότι τα διάφορα α, β-ακόρεστα καρβονύλια ότι αλκυλιώνεται ΡΤΕΝ (6 μΜ Δ12 PGJ

2, 6 μΜ 4-ΗΝΕ και 20 μΜ ακρολεϊνης) όλη προκάλεσε εξαρτώμενη από το χρόνο αύξηση της φωσφο- (S

473 ) Akt (δηλαδή ενεργή κινάση Akt), με αντίστοιχη αύξηση της φωσφο (S

9) ΟδΚ3β (δηλαδή ανενεργό ΟδΚ3β) και β-κατενίνης (Σχήμα 4C). Για να προσδιοριστεί εάν α, β-ακόρεστες καρβονύλια ενισχυμένη σηματοδότηση πυρηνικής β-κατενίνης, χρησιμοποιήσαμε κύτταρα ΗΕΚ 293 γενετική μηχανική για να εκφράζουν σταθερά Wnt3A και SuperTopFlash (STF) γονίδιο αναφοράς [46]. Αυτά τα κύτταρα, που ονομάζονται κύτταρα STF3A, έτσι μυστικό Wnt3A, ένας αυτοκρινής /παρακρινής ερέθισμα για τους υποδοχείς FZD που επιβραδύνει APC εξαρτώμενη αποδόμηση της β-κατενίνης (Σχήμα 5Α). Πυρηνική β-κατενίνης σηματοδότηση σε κύτταρα STF3A είναι ανάλογη με την έκφραση της λουσιφεράσης τους (δραστηριότητα), και αποκρίνονται σε DKK1, έναν ανταγωνιστή WNT που ανέστειλαν σηματοδότηση β-κατενίνης σε κύτταρα STF3A σε εξαρτώμενο από τη συγκέντρωση τρόπο (Εικόνα 5Β).

(Α) κύτταρα STF3A φιλοξενούν μια σταθερά ενσωματωμένη διαγονιδίου που εκφράζει Wnt3A (). Όταν εκκρίνεται, Wnt3A εκμαιεύει αυτοκρινής /παρακρινής διέγερση των υποδοχέων FZL () η οποία αναστέλλει APC που εξαρτάται από τον κύκλο εργασιών της β-κατενίνης (). Αν β-κατενίνης δεν φωσφορυλιώνεται από ΟδΚ3β, μπορεί να συσσωρεύονται ως β-κατενίνης: LEF διμερές () και συνδέονται προς προαγωγούς επί ενσωματωθεί σταθερά β-κατενίνης: γονίδιο αναφοράς λουσιφεράσης (SuperTop Flash) (). Η δραστηριότητα της λουσιφεράσης σε κυτταρικά λύματα είναι ανάλογη με σηματοδότηση πυρηνικής β-κατενίνης. (Β) Τα πυρηνικά β-κατενίνης σηματοδότηση (φωταύγεια λουσιφεράσης) σε κύτταρα STF3A (2 × 10

4 κύτταρα /φρεάτιο) αναπτύχθηκαν για 24 ώρες σε μέσο που περιέχει 0, 10, ή 30 ng /ml DKK1 (μέσος όρος + SD, n = 3). DKK1, ένας ανταγωνιστής Wnt, ανέστειλε σηματοδότηση β-κατενίνης (C) Πυρηνικού β-κατενίνης σηματοδότηση σε κύτταρα STF3A (2 × 10

4 κύτταρα /φρεάτιο) αναπτύχθηκαν για 24 ώρες σε μέσο που περιέχει 20 μΜ του cyPGs? α, β-enals ή πρωτοταγών PG. Αρκετές αντιδραστικά ηλεκτρόφιλα ενισχυμένη σηματοδότηση β-κατενίνης με ~2-4 φορές. Ιστόγραμμα αντιπροσωπεύει τον μέσο όρο + SEM, η = 4.

Πολλά αντιδρώντα καρβονυλ μεταβολίτες, το καθένα με ένα ηλεκτρόφιλο α, β ενόνη ή ενάλη υποκαταστάτη, ενισχυμένη έκφραση της β-κατενίνης: γονίδιο αναφοράς λουσιφεράσης σε STF3A κύτταρα (Σχήμα 5C). δραστηριότητα λουσιφεράσης αυξήθηκε κατά ~ 4-φορές πάνω από την αρχική τιμή (p & lt? 0,01) σε κύτταρα STF3A επωάζονται με Δ12 PGJ

2 ή 4-ΗΝΕ? με ~ 3-φορές (ρ & lt? 0,01) σε κύτταρα με άλλους PGJ αναλόγων, ακρολεΐνη ή 4-ένα? και από -1.5-φορές (ρ & lt? 0,05) σε κύτταρα με PGA

2. Συνεπής με την μηχανιστική υπόθεση μας, ούτε PGB

2 ούτε MDA είχε ανιχνεύσιμη επίδραση. PGB

2 είναι ένα cyPG, αλλά ταυτομερισμό αποτρέπει τη φόρτιση μετεγκατάσταση που απαιτείται για τη δημιουργία ενός ηλεκτρόφιλο άνθρακα β, η οποία είναι απαραίτητη για την πρωτεΐνη αλκυλίωσης. MDA (β-υδροξυ-ακρολεϊνης) διαπερνά κυτταρικές μεμβράνες κακώς επειδή είναι & gt? 99% ιονισμένη σε φυσιολογικό ρΗ ~ 7,4 χρησιμοποιούνται στα πειράματά μας. Ούτε PGE

2 ούτε άλλες πρωτογενείς μεταβολίτες PG της COX-1 ή -2 είχε καμία επίδραση στην σηματοδότηση της πυρηνικής β-κατενίνης στα κύτταρα STF3A. Εφιστούμε την προσοχή στο γεγονός ότι η έκτοπη υπερέκφραση των υποδοχέων του ΕΚ σε ΗΕΚ 293 κύτταρα ήταν υποχρεωμένη να αποσπάσει οποιοδήποτε PGE

2 μεσολάβηση σηματοδότησης β-κατενίνης [47]. Η ασθενής απάντηση στην PGE

2 και άλλα PG στο σχήμα 5C μπορεί να αντανακλά τις συστατική επίπεδα του ΕΚ, FP, DP ή υποδοχείς IP στα κύτταρα STF3A ή ταχύ μεταβολισμό της ΡΟ, ή και τα δύο.

Ενισχυμένη β- κατενίνης σηματοδότηση σε κύτταρα STF3A ήταν εξαρτώμενη από τη συγκέντρωση μεταξύ 2-20 μΜ για ακρολεϊνης, 4-ΗΝΕ και Δ12 PGJ

2 (Σχήμα 6Α). Η εξάντληση των κυτταρικών GSH σε ~ 10% της βασικής γραμμής δια κατεργασίας με 100 μΜ σηματοδότηση BSO ενισχύεται β-κατενίνης, π.χ. σε κύτταρα STF3A κατεργασία με 2 και 6 μΜ Δ12 PGJ

2 (Σχήμα 6Β). Αυτό είναι σύμφωνο με το ρόλο της ανηγμένης γλουταθειόνης στο σύζευξη του αντιδραστικού μεταβολιτών, και η προστασία των ευαίσθητων πρωτεϊνών οξειδοαναγωγής από αλκυλίωση [20].

(Α) Πυρηνική β-κατενίνης σηματοδότηση (φωταύγεια λουσιφεράσης) σε κύτταρα STF3A ( 2 × 10

4 κύτταρα /φρεάτιο) αναπτύχθηκαν για 24 ώρες σε μέσο που περιέχει 0, 2, 6 και 20 μΜ καθενός από ακρολεϊνης (□), Δ12 PGJ

2 (▪) και 4-ΗΝΕ (▪). (Β) σηματοδότηση Nuclear β-κατενίνης σε κύτταρα STF3A (2 × 10

4 κύτταρα /φρεάτιο) αναπτύχθηκαν για 24 ώρες σε μέσο που περιέχει 0, 2 ή 6 μΜ Δ12 PGJ

2 μόνο (▪) ή Δ12 PGJ

2 συν 100 μΜ BSO. επίπεδα GSH μειώθηκαν κατά 79% και 88% στις 6 και 24 ώρες μετά την αγωγή κυττάρων με BSO? 92-95% των κυττάρων ήταν ακόμη βιώσιμα στις 24 ώρες. Ράβδοι αντιπροσωπεύουν τη μέση τιμή ± SEM από n≥3 ξεχωριστά πειράματα.

Συζήτηση

Το

PTEN

ογκοκατασταλτικό γονίδιο είναι συχνά μεταλλάσσεται ή απενεργοποιούνται σε προχωρημένους καρκίνους [26 ], [48]. ΡΤΕΝ είναι ένας φωσφοϊνοσιτιδίου-3-φωσφατάση που μεταβολίζει PIP

3 έως PIP

2 [36], με τον τρόπο αυτό σε αντίθεση ρύθμισης ΡΚΒ /Ακί, μια κινάση σερίνης /θρεονίνης πρωτο-ογκογονίδιο που ελέγχει αναβολική ανάπτυξη και τις προδιαγραφές της κυτταρικής μοίρας [33], [34], [35]. ΡΤΕΝ, η ίδια, ρυθμίζεται μετα-μεταφραστικά με φωσφορυλίωση [49], την ακετυλίωση [50], και αναστρέψιμη οξείδωση της καταλυτικής κυστεΐνης του

124 κατάλοιπο [28], [29]. Η οξείδωση των κυτταρικών ΡΤΕΝ μπορεί να συνεπάγεται H

2 που προέρχεται από NADPH οξειδάση [51], δισμουτάση υπεροξειδίου [52], ή ενζυμική υπεροξείδωση του αραχιδονικού οξέος (ΑΑ) από την COX-1, COX-2 ή 5-LOX [53]. Όλα αυτά τα ένζυμα είναι συνήθως υπερ-εκφράζεται και ενεργοποιείται από φλεγμονή ή νεοπλασματικό μετασχηματισμό. οξείδωση ΡΤΕΝ, και κάθε συνοδός παθοφυσιολογία, ποικίλλει ανάλογα με το βαθμό της κυτταρικής έκθεσης σε αντιδραστικά είδη οξυγόνου (ROS). Σε αυτές τις μελέτες, έχουμε αποδείξει ότι η χημεία η οποία διευκολύνει την οξείδωση του ΡΤΕΝ μπορεί επίσης να διευκολύνει την αλκυλίωση του με ηλεκτρόφιλη α, β-enals και α, β-ενόνες [19], [20].

ΡΤΕΝ επιτομή της προσαρμογής της οξειδοαναγωγικής αποκρίνονται θειόλες για κυτταρική σηματοδότηση, όπως επίσης και πιθανή ευπάθεια τους σε υποπροϊόντα του οξειδωτικού στρες και φλεγμονής. PTEN αδρανοποιείται από δύο διακριτικό οξειδοαναγωγής με τη μεσολάβηση διαδικασίες: 1) ενδο- ή δια-μοριακών σχηματισμό δισουλφιδίου από ROS και 2) θειολικό καρβονυλίωση (προσθήκη Michael) με ηλεκτρόφιλη α, β-ακόρεστες καρβονύλια (Σχήμα 1-3). Το υπεροξείδιο του υδρογόνου (H

2), ένα πρωτότυπο ROS, αναστέλλει την κυτταρική ΡΤΕΝ με απευθείας οξειδωτικό του καταλυτικού Cys

124 σε σουλφενικού ενδιάμεσο οξύ, το οποίο στη συνέχεια σχηματίζει ένα αδρανές, ενδο-μοριακή Cys

124-71 δισουλφιδίου [28], [29]. Τα δεδομένα μας δείχνουν ότι αρκετά αντιπροσωπευτική, ηλεκτρόφιλο είδος καρβονυλίου (α, β-enals και α, β-ενόνες), που μπορεί να συμβεί ενδογενώς ως παραπροϊόντα της υπεροξείδωσης των λιπιδίων κατά τη διάρκεια της φλεγμονής ή οξειδωτικού στρες, αλκυλικό και απενεργοποιούν ΡΤΕΝ. Η αδρανοποίηση του ΡΤΕΝ με διεργασίες οξειδαναγωγής μεσολάβηση προκαλεί μία αύξηση στην δραστικότητα του πρωτο-ογκογονιδίου Akt. Υπερενεργοποίηση του Akt αυξάνει τον πολλαπλασιασμό και την επιβίωση πολλών διαφορετικών μορφών καρκίνου.

Σηματοδότηση με H

2, καλύπτει ένα ευρύ παθοφυσιολογικών συνεχές [54] και ένα συγκρίσιμο ρόλο για αντιδραστικά ηλεκτρόφιλα φαίνεται εύλογη. Αντιδραστικά είδη καρβονυλίου όπως ακρολεϊνης, 4-ΗΝΕ και Δ12PGJ

2 αντιπροσωπεύουν ένα υποσύνολο των ηλεκτρονιόφιλων συνήθως παράγονται κατά τη διάρκεια του οξειδωτικού στρες και φλεγμονής. Τα ευρήματα αυτά θα μπορούσαν να προβληθούν σε ηλεκτρονιόφιλα πράκτορες λείπει ένα καρβονυλίου, αλλά περιέχουν άλλες ομάδες απόσυρσης ηλεκτρονίων, και αναφερόμαστε σε αυτούς γενικά ως «αντιδραστικά ηλεκτρόφιλα». Κατ ‘αρχάς, όπως η H

2, συμβαίνουν αντιδραστικά ηλεκτρόφιλα

in vivo

κατά τη διάρκεια της φλεγμονής και του οξειδωτικού στρες [16], [18], [19], [22]. Δεύτερον, αντιδραστικά ηλεκτρόφιλα διαμορφώνουν ομοιοπολικά άλλες πρωτεΐνες που ρυθμίζουν σημαντικές διεργασίες σηματοδότησης? δηλαδή LKB1 /STK11 [55], NFκB [56], και ΙΚΚβ. Τρίτον, H

2 και αντιδραστικά ηλεκτρόφιλα τόσο προέρχονται από συνδυασμό αυθόρμητη και ενζυματικές διαδικασίες, οι οποίες συχνά συμπίπτουν σε φλεγμονώδεις ιστούς [57]. H

2 προέρχεται από το ανιόν υπεροξειδίου, O

-, ο κύριος μεταβολίτης της οξειδάσες NADPH. Αυθόρμητη και ενζυματική αποσύνθεση μετατρέπει O

– σε H

2. Παρομοίως, αυθόρμητη και ενζυμική υπεροξείδωση των λιπιδίων δημιουργεί ακρολεϊνης και 4-ΗΝΕ [18], [57]. cyPGs προέρχονται από το λιπίδιο ενδοϋπεροξειδίου PGH

2, κύριος μεταβολίτης της COX-1 και -2. Ενζυματική και αυθόρμητη σχάση του ενδοϋπεροξειδίου ομολόγων μετατρέπει PGH

2 σε PGE

2 και PGD

2? αλβουμίνης /ορού στη συνέχεια προκαλεί αφυδάτωση τους σε PGA

2, PGJ

2, και τα ισομερή τους [14], [16], [24].

Αν και κερδοσκοπικές, φαίνεται ότι ROS και αντιδραστική ηλεκτρονιόφιλα (H

2, ακρολεΐνη, 4-ΗΝΕ, Δ12 PGJ

2) μπορεί να έχει τόσο εξελιχθεί για να παίξει διαφορετικές ρόλους στην έμφυτη ανοσία: 1) εκμηδενίζοντας παθογόνων και 2) την επίλυση της φλεγμονής. Ανάλογη με την αδρανοποίηση των ΝΡκΒ και IKKαβ, προσωρινή απενεργοποίηση του PTEN ογκοκατασταλτικό πρωτεΐνη με αλκυλίωση της, και συνακόλουθα η ενεργοποίηση της PKB /Akt κινάσης πρωτο-ογκογονίδια, μπορεί να βοηθήσει στην ομαλοποίηση μορφολογία και ιστολογία σε οξεία φλεγμονή των ιστών με την απελευθέρωση περιορισμό τους στον πολλαπλασιασμό των κυττάρων, αναβολικά ανάπτυξη και τις προδιαγραφές μοίρα [34], [35]. Στις συνήθεις περιπτώσεις επισκευής και ανάλυση θα πρέπει να βοηθήσει να τερματίσει έμφυτο ανοσοποιητικό φλεγμονή (Σχήμα 7,). Ωστόσο, αυτός ο μηχανισμός θα μπορούσε επίσης να παρέχει αναπόφευκτη κινδύνους εάν PTEN είχαν αδρανοποιηθεί errantly ή επίμονα. Επιπλέον, αντιδραστικά ηλεκτρόφιλα αδρανοποιούν επίσης άλλα αξιοσημείωτα καταστολείς των όγκων, συμπεριλαμβανομένου του p53 [30] και LKB1 /STK11 [55]. Αυτή η συνδυασμένη και παρατεταμένη αδρανοποίηση καταστολείς όγκων θα μπορούσε να συμβάλει σημαντικά στην φλεγμονή που σχετίζεται με ογκογένεση και ακολούθως παρατείνουν τον κύκλο του σχετιζόμενου με τον όγκο παρα-φλεγμονή (Σχήμα 7,). Συνολικά, τα δεδομένα και το μοντέλο μας ευθυγραμμιστεί με την παρατήρηση ότι οι όγκοι είναι πληγές που δεν επουλώνονται [58]. Σε αυτήν την κατάσταση, την εξέλιξη του όγκου μπορεί να προέρχονται εν μέρει από mal-προσαρμογή του μοριακού μηχανισμού που εξελίχθηκε για να τερματίσει και να επιλύσει έμφυτο ανοσοποιητικό φλεγμονή.

Η φλεγμονή είναι ένα κρίσιμο συστατικό της εξέλιξης του όγκου. Πολλοί καρκίνοι προκύπτουν από θέσεις μόλυνσης και χρόνιο ερεθισμό και φλεγμονή. Το μικροπεριβάλλον του όγκου, το οποίο αποτελείται κυρίως από φλεγμονώδη κύτταρα, παίζει σημαντικό ρόλο στη νεοπλαστική διαδικασία, προωθώντας τον πολλαπλασιασμό, την επιβίωση και τη μετανάστευση. Δείχνουμε εδώ ότι αντιδραστικά είδη καρβονυλίου τα οποία συνήθως παράγονται κατά τη διάρκεια της φλεγμονής ομοιοπολικά τροποποιήσει και να απενεργοποιούν ΡΤΕΝ καταστολέα όγκου. Σημαντικά, ο μηχανισμός περιγράφουμε μπορεί επίσης προεκτείνουν σε: 1) άλλα ηλεκτρόφιλο είδος που παράγεται από φλεγμονή, οξειδωτικό ή ξενοβιοτικών στρες (δηλαδή άλλες α, β- ακόρεστες αλδεϋδες και κετόνες? Αλλυλικά ή βινύλιο εποξείδια? Κινόνες, chlorhydrins, χλωραμίνες, σουλφόνες βινυλίου? Και 2) άλλα μέλη της υπερ-οικογένειας ΡΤΡ που είναι οξειδοαναγωγική ευαίσθητα. Οι μελέτες αυτές εκτείνονται κατανόηση των μηχανισμών με τους οποίους η φλεγμονή συμβάλλει στην έναρξη και εξέλιξη του καρκίνου.

Υλικά και Μέθοδοι

Υλικά

Χρόνιες ασθένειες