Αφηρημένο

Η επικράτηση των όρχεων γεννητικών κυττάρων όγκων (TGCT), μια κοινή κακοήθη συμπαγή ιστό σε νέους άνδρες, έχει κάθε χρόνο αυξάνεται με ανησυχητικό ποσοστό 3%. Δεδομένου ότι η πλειοψηφία των όρχεων προέρχονται από γεννητικά κύτταρα στο στάδιο του μετασχηματισμού του αρχέγονα γεννητικά κύτταρα (PGC) σε γονοκύτταρα, η αύξηση έχει αποδοθεί σε μητρικά /εμβρυϊκά ανοίγματα σε περιβαλλοντικούς παράγοντες. Εξετάσαμε τις επιδράσεις του οιστρογόνου (διαιθυλοστιλβεστρόλη, DES), ένα αντιανδρογόνο (φλουταμίδη) ή ακτινοβολία στη συχνότητα εμφάνισης όγκων των όρχεων γεννητικών κυττάρων σε γενετικά προδιατεθειμένα 129.MOLF-L1 (L1) συγγενείς ποντικούς με έκθεσή τους σε αυτούς τους παράγοντες κατά τις ημέρες 10.5 και 11.5 της εγκυμοσύνης. Ούτε φλουταμίδη ούτε DES παράγεται από αξιοσημείωτη αύξηση των όρχεων συχνότητα εμφάνισης καρκίνου σε ηλικία 4 εβδομάδων. Σε αντίθεση, δύο δόσεις του 0,8-Gy ακτινοβολία αύξησε την συχνότητα εμφάνισης TGCT από 45% έως 100% στους απογόνους. Το ποσοστό των ποντικών με διμερείς όγκους, τα βάρη των όρχεων με TGCT, και το ποσοστό των όγκων που ήταν σαφώς τερατώματα ήταν υψηλότερα στα ακτινοβολημένα ποντίκια από ό, τι στους μάρτυρες, υποδεικνύοντας ότι η ακτινοβόληση επάγεται περισσότερο επιθετικούς όγκους ή /και περισσότερο εστίες θέσεων έναρξης σε κάθε όρχις. Αυτή η δόση ακτινοβολίας δεν διαταράσσουν σπερματογένεση, η οποία ήταν ποιοτικά από την κανονική σε όρχεις άνευ όγκου αν και μειώθηκαν σε μέγεθος. Αυτή είναι η πρώτη απόδειξη της επαγωγής του καρκίνου των όρχεων από περιβαλλοντικό παράγοντα και προτείνει ότι το αρσενικό έμβρυο των γυναικών που εκτίθενται σε ακτινοβολία σε περίπου 5-6 εβδομάδες κύησης μπορεί να έχουν αυξημένο κίνδυνο ανάπτυξης καρκίνου των όρχεων. Επιπλέον, παρέχει μια νέα εργαλείο για τη μελέτη των μοριακών και κυτταρικών γεγονότων των όρχεων παθογένεση του καρκίνου

Παράθεση:. Shetty G, Comish PB, Weng Νόμισμα, Matin Α, Meistrich ML Προκαλεί (2012) Εμβρύου έκθεση σε ακτινοβολία καρκίνο των όρχεων σε γενετική προδιάθεση ποντίκια. PLoS ONE 7 (2): e32064. doi: 10.1371 /journal.pone.0032064

Επιμέλεια: Austin John Cooney, Baylor College of Medicine, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 28 Οκτώβρη, 2011? Αποδεκτές: 19 του Ιανουαρίου, 2012? Δημοσιεύθηκε: 13 Φεβρουαρίου 2012 |

Copyright: © 2012 Shetty et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε από τη Φλωρεντία M. Thomas Καθηγητή στο Cancer Research (για να Marvin L Meistrich) και το Αντικαρκινικό Κέντρο υποστήριξης Grant CA 16672 από τα Εθνικά Ινστιτούτα Υγείας. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

οι όγκοι των όρχεων γεννητικών κυττάρων (TGCT) είναι η πιο κοινή κακοήθη όγκο στο Καυκάσιοι άνδρες ηλικίας μεταξύ 15 και 40 ετών. Ανθρώπινα TGCTs κατατάσσονται κυρίως ιστολογικά σε σεμινώματα, τα οποία μοιάζουν με τα αρχέγονα γεννητικά κύτταρα (ΡΟΟ), και μη-σεμινώματα, τα οποία είναι είτε αδιαφοροποίητο (εμβρυϊκό καρκίνωμα) ή διαφοροποιείται δείχνει εμβρυϊκά (τεράτωμα) ή εξωεμβρυονική (κρόκος sac) σχηματοποίηση [1 ]. Τα τερατώματα χαρακτηρίζονται από τη διαφοροποίηση σε ένα ευρύ φάσμα κυττάρων και ιστών τύπων. Η διάμεση ηλικία έναρξης των διαφόρων τύπων όγκου διαφέρει με σεμινώματα προκύπτουν σε περίπου 35 χρόνια, οι περισσότερες μη-σεμινώματα σε 25 χρόνια, και πιο τερατώματα και τον κρόκο σάκο όγκων σε περίπου 1,5 έτη. Ενώ προηγήθηκαν οι όγκοι εμφανίζονται στους ενήλικες με καρκίνωμα in situ (CIS), το οποίο περιέχει κύτταρα που μοιάζουν στενά γονοκύτταρα, αυτά που εμφανίζονται σε παιδιά που δεν έχουν προηγηθεί CIS [2]. Παρά τις διαφορές αυτές επιβεβαιώνουν την κοινή υποκείμενη παθογένεση αυτών των όγκων όπως παρόμοια χρωμοσωμικές εκτροπές, ενισχυμένο χρωμοσωμικές περιοχές, και η έκφραση των γονιδίων πλειοδυναμίας [3]. Όλες αυτές οι όγκοι προέρχονται από κύτταρα με χαρακτηριστικά των αρχέγονων βλαστικών κυττάρων (PGC) ή γονοκύτταρα, αν και σε διαφορετικά στάδια της ανάπτυξης αξιολογείται από την έκταση της διαγραφής του αρχικού biparental αποτύπωση ή το μεταγενέστερο καθιέρωση της πατρικής αποτύπωσης.

υπήρξε μια ετήσια αύξηση της τάξης του 3% στην επίπτωση της TGCTs σε νέους Καυκάσου άνδρες σε όλο τον κόσμο τα τελευταία 50 χρόνια [4], αλλά οι λόγοι είναι ασαφείς. Διαλεύκανση της αιτίας της αύξησης αυτής είναι σημαντική για την πιθανή πρόληψη ή την αντιστροφή της αύξησης αυτής.

Από τα όρχεων καρκινικών κυττάρων που προέρχονται από αρχέγονα γεννητικά κύτταρα (ΡΟΟ) ή γονοκύτταρα [2], η αύξηση έχει αποδοθεί σε μητρικό και εμβρύου ανοίγματα σε περιβαλλοντικούς παράγοντες, με περισσότερη προσοχή δίνεται σε ενδοκρινικοί διαταράκτες, όπως τα οιστρογόνα και αντιανδρογόνα [5], [6], [7]. Η ιονίζουσα ακτινοβολία, ένα γνωστό καρκινογόνο [8], ότι αυξάνει τη συχνότητα εμφάνισης της παιδικής ηλικίας και άλλα ενήλικα καρκίνους σε άτομα που εκτίθενται κατά τη διάρκεια της εμβρυϊκής ανάπτυξης [9], [10], έχει λάβει μικρή μελέτη. Μια μελέτη ασθενών-μαρτύρων έδειξε ότι η έκθεση στην ιονίζουσα ακτινοβολία κατά τη διάρκεια της εγκυμοσύνης αυξάνει τον κίνδυνο καρκίνου των όρχεων στους άρρενες απογόνους [11].

Το μοναδικό μοντέλο ποντικού για TGCT είναι οι αυθόρμητες τερατώματα που είχαν αρχικά παρατηρήθηκαν σε 129 /Sv ποντικούς [12]. Φαίνονται πιο παρόμοια με τις βρεφική TGCTs σε ανθρώπινα επειδή γεννητικά κύτταρα αναπτύσσονται ταχέως σε όγκους μετά τη γέννηση. Ωστόσο, όπως όλα τα ανθρώπινα είδη TGCT, τα τερατώματα ποντίκι προέρχονται επίσης από τις ΡΟΟ ή γονοκύτταρα. Επιπλέον, ελαττώματα στα ίδια γονίδια, kit-συνδέτη (KITL) και Dmrt1, αυξάνουν δραματικά τη συχνότητα εμφάνισης τεράτωμα σε ποντικούς [13], [14] και συνδέονται με ή προδιαθέτουν τους ανθρώπους στον ενήλικο TGCTs [15], [16 ]. Αυτά τα παραδείγματα δείχνουν ότι το μοντέλο αυτό τεράτωμα ποντίκι μπορεί να είναι σχετικές με τα ενήλικα μορφές καρκίνου στον άνθρωπο όρχεων, καθώς, αν και υπάρχουν επιφυλάξεις για μια τέτοια προέκταση [1].

Στα 129 /Sv ποντίκια, περίπου 3- 10% να αναπτύξουν αυθόρμητη TGCTs. έχουν συγγενή ποντίκια σε 129 φόντο αναπτυχθεί? αυτά που περιέχουν το σύνολο των χρωμοσωμάτων 19 προέρχεται από το στέλεχος Molf έχουν επίπτωση 80% TGCTs [17] και εκείνες που μεταφέρουν τα τμήματα του χρωμοσώματος 19 απεικόνιση ποικίλα επίπεδα εμφάνιση όγκου [18], [19]. Στην παρούσα μελέτη, χρησιμοποιήσαμε το 129.MOLF-L1 (L1) συγγενείς στέλεχος, με μια αναφερόμενη συχνότητα εμφάνισης 30% του TGCTs, να μεγιστοποιηθεί η ισχύς της μελέτης. Χρησιμοποιήσαμε αυτό το μοντέλο ποντικού για να ελεγχθεί η επίδραση των οιστρογόνων, αντιανδρογόνο και την έκθεση σε ακτινοβολία ιονίζουσας επί TGCT επίπτωση. Ανοίγματα έγιναν σε Ε10.5 και 11,5 που είναι ακριβώς μετά τα αρχέγονα γεννητικά κύτταρα (ΡΟΟ) αποικίζουν το εμβρυϊκό γονάδων, και υποβάλλονται σε εκτεταμένες επιγενετικές αλλαγές που καταστέλλουν τις δυνατότητές τους να επιστρέψουν σε μια πολυδύναμη κατάσταση και να δεσμευτεί να γεννητικών ανάπτυξη των κυττάρων [20 ].

Αποτελέσματα

Εμείς εξέτασε τις επιδράσεις της θεραπείας με οιστρογόνα (διαιθυλοστιλβεστρόλη, DES), ένα αντιανδρογόνο (flutamide), ή ακτινοβολία σχετικά με τη συχνότητα των TGCT σε ένα ζωικό μοντέλο. Έχουμε εκτεθεί έγκυος L1 θηλυκά στους παράγοντες κατά ημέρα 10.5 και 11.5 της εγκυμοσύνης.

Δεν υπήρχε καμία επίδραση από φλουταμίδη, DES ή ακτινοβολία στο αναπαραγωγικό ικανότητα των φραγμάτων (Πίνακας 1). Αυτό επιβεβαιώθηκε από τους παρόμοια ποσοστά των ποντικών που παράγουν απογόνους μετά από επιτυχή ζευγάρωμα και των συγκρίσιμων μεγεθών σκουπίδια στα επεξεργασμένα και των αντίστοιχων φράγματα ελέγχου.

Όρχεις συλλέχθηκαν από το αρσενικό απόγονο και πολλοί από αυτούς που περιέχονται ορατούς όγκους (Σχήμα 1Α και Β). Η ιστολογική εξέταση επιβεβαίωσε ότι οι περισσότερες από αυτές ήταν τερατώματα με ιστούς από πολλαπλά δερματικά προέλευση, αλλά μερικές περιείχε μόνο νευροεπιθηλιακών κυττάρων (Σχήμα 1C και D). Flutamide δεν αύξησε σημαντικά τη συχνότητα εμφάνισης της συνολικής TGCTs (30% του όρχεων είχαν όγκους έναντι 21% στον έλεγχο). Ωστόσο, το έκανε λίγο να αυξήσει τη συχνότητα των TGCTs που επιβεβαιώθηκαν να είναι τερατώματα από την παρουσία των τύπων πολλαπλών δερματικών κυττάρων προέλευσης (24% των όρχεων έναντι 14% στον έλεγχο,

P

= 0,04) (Πίνακας 2 ).

μορφολογία των όρχεων παρουσιάζει διμερή (Α) και μονομερούς (Β) TGCTs από ακτινοβολημένα ποντίκια. Σημειώστε ότι ο όρχις χωρίς TGCT μετά

ενδομήτρια

έκθεση σε ακτινοβολία (Β) είναι μικρότερο από το κανονικό χωρίς θεραπεία όρχεις από ένα 4-εβδομάδων ποντικού (ένθετο στο Β). τμήματα όρχεων που δείχνει τεράτωμα περιέχουν ιστούς προφανώς από πολλαπλές δερματική προελεύσεις που προσδιορίζονται από τη μορφολογία (C), και TGCT περιέχουν μόνο νευροεπιθηλιακών κυττάρων (ΝΕ) (D). CA: χόνδρου? BM: μυελού των οστών? MS: μυών, EEP: ενδοδερμικά επιθήλιο. ST: σπερματικών σωληναρίων? BV: αιμοφόρων αγγείων. Τμήματα από όρχεις του 4-εβδομάδων ακτινοβολημένα (Ε) και contol (F) ποντικούς χωρίς TGCT δείχνει ποιοτικώς φυσιολογική σπερματογένεση. Bar: 0.5 cm σε Α & amp? Β, και 50 μm σε C-F.

Η

Η

Η δόση του DES δόθηκε ήταν αποτελεσματική στην δρουν στο έμβρυο, όπως προκαλείται κρυψορχία στο 16% των όρχεων. Ωστόσο, δεν υπήρχε καμία ένδειξη ότι προκάλεσε καρκίνο (μόνο 3 από 24 όρχεων που αναλύθηκαν περιείχαν TGCTs). Παρόμοια, σε μια μελέτη που περιλαμβάνει αγωγή των εγκύων 129 ποντίκια, μια δόση αιθινυλοιστραδιόλης ότι η αυξημένη κρυψορχία στους απογόνους δεν προκάλεσε σημαντική αλλαγή στη συχνότητα εμφάνισης τερατώματα [21].

Σε αντίθεση, η ακτινοβόληση των αρσενικών κατά τη διάρκεια της εμβρυϊκής ανάπτυξης με δύο δόσεις, η κάθε μία από 0,8 Gy, οδήγησε σε TGCTs στο 80% των όρχεων (σε σύγκριση με 28% στον έλεγχο) και στο 100% του ανδρικού απογόνων (Πίνακας 2). Οι αριθμοί των ποντικών με μονομερείς και διμερείς όγκων σε όλες τις ομάδες ήταν διωνυμική κατανομή, επιβεβαιώνοντας μια προηγούμενη έκθεση ότι η εμφάνιση ενός όγκου σε κάθε όρχι ήταν ένα ανεξάρτητο γεγονός [18]. Τα βάρη των όρχεων με TGCTs και το ποσοστό των όγκων που επιβεβαιώθηκαν τερατώματα ήταν υψηλότερα στα ακτινοβολημένα ποντίκια από ό, τι στους μάρτυρες, υποδεικνύοντας ότι η ακτινοβόληση επάγεται περισσότερο επιθετικούς όγκους ή /και περισσότερο εστίες θέσεων έναρξης σε κάθε όρχι.

Οι δύο δόσεις ακτινοβολίας 0,8 Gy δεν διαταράσσουν σπερματογένεση, η οποία ήταν ποιοτικά από την κανονική σε όρχεις που δεν περιείχαν τεράτωμα (Σχήμα 1 Ε και F). Ωστόσο, αυτά τα άνευ όγκου όρχεων από ακτινοβολημένα ποντίκια είχαν μειωμένη βάρη σε σύγκριση με εκείνες από τους ελέγχους (Πίνακας 2), υποδηλώνοντας ότι η ακτινοβολία είχε προκαλέσει κάποια απώλεια ή αναστολή του πολλαπλασιασμού των ΡΟΟ και /ή σωματικά κύτταρα.

Συζήτηση

στην παρούσα μελέτη κατηγορηματικά αποδείξει ότι εμβρυϊκή έκθεση σε ακτινοβολία κατά τη διάρκεια Ε10.5-Ε11.5 προκαλεί καρκίνους των όρχεων γεννητικών κυττάρων, τα περισσότερα από τα οποία δείχνουν τις πολλαπλές δερματική προέλευση τυπικό της τερατώματα, σε ένα γενετικά ευαίσθητο μοντέλο ποντικού. Αυτή είναι η πρώτη επίδειξη της επαγωγής του καρκίνου των όρχεων από περιβαλλοντικό παράγοντα όταν εκτεθεί κατά την εμβρυϊκή περίοδο. Περαιτέρω χαρακτηρισμός του μοντέλου για να προσδιοριστεί η βέλτιστη χρόνο έκθεσης ή χρονικά διαστήματα, το δόσης-απόκρισης, καθώς και τις συνέπειες για λιγότερο ευαίσθητα στελέχη του ποντικιού είναι απαραίτητη για να ξεκινήσει μηχανιστικές μελέτες και εκτίμηση του κινδύνου.

Η εύρεση ότι η ακτινοβολία αυξήθηκε δραματικά το συχνότητα εμφάνισης καρκίνου των όρχεων σε ποντίκια προσφέρει ένα νέο εργαλείο για την διερεύνηση του μηχανισμού με τον οποίο οι ΡΟΟ επανέλθει σε πολυδύναμα εμβρυϊκά κύτταρα. Όταν ΡΟΟ ποντίκι φτάσει στο γονάδων σε Ε10.5, είναι δυνητικά πολυδύναμα. Ωστόσο, από την ημέρα 15.5, είναι γονοκύτταρα και έχουν κατασταλεί η έκφραση των γονιδίων πλειοδυναμίας (

Oct4, Nanog

,

Sox2

), υποβληθεί σε διακοπή του κυτταρικού κύκλου, εκφράζουν τα γονίδια των γεννητικών κυττάρων (

Nanos3, Dazl, Dnd1, MVH

) [22], [23], και έχουν δεσμευθεί να το γεννητικών κυττάρων αυτο-ανανέωσης και της διαφοροποίησης της οδού [12]. Μεταξύ ημέρες Ε10.5 & amp? 11.5 υφίστανται επιγενετικές μεταβολές που περιλαμβάνουν τόσο την παγκόσμια απομεθυλίωση DNA που περιλαμβάνει μονόκλωνες θραύσεις (SSB,) και την ενεργοποίηση της οδού επιδιόρθωσης βάσης εκτομή με χρωματίνη εντοπισμό των πρωτεϊνών που εμπλέκονται, καθώς και χρωματίνης αναδιαμόρφωση απώλειας και αντικατάσταση των ιστονών και των αλλαγών σε τροποποιήσεις τους [24]. Η ιονίζουσα ακτινοβολία η ίδια προκαλεί μεγαλύτερο αριθμό των SSB, και παράγει κατεστραμμένα βάσεις. Αυτή η ακτινοβολία που προκαλείται από βλάβη μπορεί να διαταράξει οδών που περιλαμβάνουν ενδογενείς SSB, και την επισκευή βάσης εκτομή ρύθμιση αυτή επιγενετικές μετασχηματισμού σηματοδότησης και επιτρέπουν στα κύτταρα να διατηρούν πλειοδυναμία τα εμβρυικά βλαστικά κύτταρα που μοιάζουν με τα οποία στη συνέχεια αποτελούν τα TGCTs.

Προηγουμένως γενετικές αλλοιώσεις σε γεννητικά κύτταρα, συμπεριλαμβανομένου του

ter

μετάλλαξη στο

Dnd1

γονίδιο [25], η απώλεια του

Dmrt1

[14], ή απώλεια

PTEN

[26] που έχει παραχθεί υψηλή συχνότητα εμφάνισης TGCTs (ιδιαίτερα τερατώματα) σε ποντικούς. Ανάλυση των αλλαγών στην έκφραση αυτών των γονιδίων ή γονιδιακών προϊόντων σε ΡΟΟ και γονοκύτταρα εμβρύων ακτινοβοληθέντων ποντικών θα μπορούσε να διευκρινιστεί ο μηχανισμός με τον οποίο δρα ακτινοβολία για την επαγωγή των όγκων.

Αν και η παρέκταση των τερατώματα σε ποντίκια για να το σποραδικές όρχεων όγκων σε νεαρά ανθρώπινα αρσενικά ενήλικα εξακολουθεί να είναι αμφισβητήσιμη, τα παρόντα αποτελέσματα για

στη μήτρα

ακτινοβόληση των ποντικιών δείχνουν ότι το αρσενικό έμβρυο των γυναικών που εκτίθενται σε ακτινοβολία σε περίπου 5-6 εβδομάδες της εγκυμοσύνης μπορεί να είναι σε αυξημένο κίνδυνο ανάπτυξης καρκίνου των όρχεων. Cohort μελέτες είναι απίθανο να είναι σε θέση να ελέγξετε αν υπάρχει σχέση μεταξύ των εν λόγω έκθεσης και του καρκίνου των όρχεων, δεδομένου δόσεις ακτίνων Χ σε διαγνωστικές διαδικασίες έχουν πτωτική [9], ο αριθμός των εγκύων γυναικών σε πληθυσμούς που εκτίθενται σε ακτινοβολία είναι μικρά [10] , είναι πιθανό ένας περιορισμένος αναπτυξιακό παράθυρο της ευαισθησίας, η συχνότητα εμφάνισης καρκίνου των όρχεων σε άνθρωπο είναι χαμηλή, και αρκετές δεκαετίες μεσολαβήσει μεταξύ της έκθεσης και της εμφάνισης των όγκων. Παρ ‘όλα αυτά, υπάρχει μία αναφορά ότι υπάρχει συσχετισμός μεταξύ έκθεσης σε ακτινοβολία της μητέρας ιοντίζουσα κατά τη διάρκεια της εγκυμοσύνης και του καρκίνου των όρχεων στους απογόνους τους [11]. Η γνώση που έχει αποκτηθεί σχετικά με τους μηχανισμούς της ιονίζουσας ακτινοβολίας καρκίνου των όρχεων που προκαλείται στα ποντίκια μπορεί να χρησιμοποιηθεί για τον εντοπισμό άλλων περιβαλλοντικών ή παράγοντες του τρόπου ζωής που μπορεί να προκαλέσει παρόμοια ζημιά σε εμβρυϊκά βλαστικά κύτταρα και είναι υπεύθυνη για τις τρέχουσες αυξήσεις των όρχεων συχνότητα εμφάνισης καρκίνου στους άνδρες.

Υλικά και Μέθοδοι

Ποντίκια και αναπαραγωγής

Ένα περιγράφηκε πρόσφατα καθαρές, συγγενών στέλεχος ποντικού, 129.MOLF-L1 [19], που αναφέρεται ως χρησιμοποιήθηκε L1. Αυτά προέρχονται από διασταυρώσεις μεταξύ του στελέχους 129 (129S1 /SvImJ) και Molf /Ei συγγενείς ποντικοί του

Mus m. molossinus

υποείδη του ποντικιού. Για να δημιουργήσετε L1 ποντίκια 129 consomic ποντίκια με ποντίκια Molf-CHR19 αναδιασταυρώθηκαν έως 129, η επιλογή για ένα 7,6 Mb περιοχή από το χρωμόσωμα Molf 19, και στη συνέχεια έκανε ομόζυγα για Molf προερχόμενων περιοχή δια διασταυρώσεως των απογόνων. Περίπου το 30% των αρσενικών L1 έχουν αναφερθεί να αναπτύξουν αυθόρμητη όρχεων όγκους και τα γονίδια Molf συμβάλλουν σε αυτή την υψηλή συχνότητα εμφάνισης όγκου δεν είναι ακόμη γνωστές. [19]

χρονομετρημένα ζευγαρώματα διεξήχθησαν με τα ζεύγη των ποντικών L1. Έγκυες γυναίκες τις ημέρες 10.5 και 11.5 της εγκυμοσύνης τους υποβλήθηκαν σε θεραπεία με δύο ημερήσιες δόσεις των χημικών ή φυσικού παράγοντα όπως περιγράφεται παρακάτω. Σε ορισμένες περιπτώσεις, τα θηλυκά χρησιμοποιήθηκαν για ένα δεύτερο ή τρίτο γύρο των θεραπειών κατά τη διάρκεια διαδοχικών κυήσεων με περίοδο αναμονής σε λίγες εβδομάδες μεταξύ των κυήσεων. Σε τέτοιες περιπτώσεις πολλαπλών θεραπειών, οι έγκυες γυναίκες έλαβαν είτε το ίδιο παράγοντα ή που έλαβαν θεραπεία ελέγχου σε κάθε εγκυμοσύνη.

Όλες οι πειραματικές διαδικασίες εγκρίθηκαν από τη Φροντίδα των Ζώων και Χρήση Επιτροπή MD Anderson Cancer Center Θεσμική με τον εγκεκριμένο αριθμό πρωτοκόλλου οι 110712631 και 110712632. Όλες οι εγκαταστάσεις για τα ζώα στέγαση καταχωρηθεί από την USDA και διαπιστευμένη από την αμερικανική Ένωση για την Διαπίστευση του Εργαστηρίου φροντίδα των ζώων.

Θεραπείες

Flutamide.

Flutamide (Sigma Aldrich, St. Louis, ΜΟ), διαλύθηκε σε σησαμέλαιο /απόλυτη αιθανόλη (1:01), δόθηκε υποδορίως ως 2 δόσεις των 40 mg /kg. Αυτή η δόση έχει αποδειχθεί να εμποδίσει δράση των ανδρογόνων στα αρσενικά ποντίκια [27] και είναι υψηλότερη από την ανθρώπινη ημερήσια κλινική δόση από το στόμα ~ 10 mg /kg.

Diethylstilbestrol (DES).

DES (Sigma Aldrich, St. Louis, ΜΟ), διαλύθηκε σε αραβοσιτέλαιο, χορηγήθηκε υποδορίως ως δύο δόσεις των 5 μg /kg. Έλεγχος εγκυμονούντα ποντίκια έλαβαν μόνο το όχημα. Με βάση την προηγούμενη έκθεση [28], πραγματοποιήσαμε αρχικά πειράματα με δύο δόσεις των 20 μg /kg, αλλά μείωσε τη δόση μετά από πολλές από τις έγκυες γυναίκες απέτυχε να παραδώσει απογόνους.

Ακτινοβολία.

έγκυος θηλυκά ποντίκια L1 ακτινοβολούνται με Co ακτινοβολία

60-γάμμα (Eldorado 8 μονάδα ακτινοβολίας, Ατομικής Ενέργειας του Καναδά ΕΠΕ, Οτάβα, Καναδάς). Ένα μέγιστο 3 μη αναισθητοποιημένα ποντίκια σε μια στιγμή τοποθετήθηκαν σε ένα αεριζόμενο κουτί μεθακρυλικό (4,1 cm × 11,7 εκατοστά Χ 8,2 εκατοστά) σε βάση από τουλάχιστον 13 εκατοστών από πεπιεσμένο ξύλο, σε απόσταση 80 cm από την πηγή ακτινοβολίας. Με ένα μέγεθος πεδίο 20 χ 20 cm, μια δόση 0,8 Gy ακτινοβολίας σε ολόκληρο το σώμα χορηγήθηκε σε 10-11 π.μ. στις ημέρες 10.5 και 11.5 της εγκυμοσύνης σε ένα ρυθμό δόσης περίπου 70 cGy /min. Τα φράγματα L1 ελέγχου από την ίδια αποικία αναπαραγωγής δεν έλαβε καμία από αυτές τις θεραπείες ή τους χειρισμούς και την αρσενικούς απογόνους από αυτά τα ποντίκια αναλύθηκαν ταυτόχρονα με εκείνες των επεξεργασμένων αυτά.

Ανάλυση

Το

στη μήτρα

εκτεθειμένα και ελέγχουν αρσενικό απόγονο στο φλουταμίδη βραχίονα υποβλήθηκαν σε ευθανασία σε ηλικία 4-5 εβδομάδων? τα εκτεθειμένα και ελέγχου αρσενικά στην ακτινοβολία και τα χέρια DES υποβλήθηκαν σε ευθανασία σε ηλικία 4 εβδομάδων. Αυτή τη φορά επελέγη επειδή οι όγκοι σε ποντικούς L1 οπτικά παρατηρούνται σε αυτές τις ηλικίες [19]. Οι όρχεις εξετάστηκαν για την παρουσία όγκων με οπτική παρατήρηση και στη συνέχεια σταθεροποιήθηκαν σε διάλυμα Bouin για ιστολογική εξέταση. Καθώς ορισμένες μικροί όγκοι δεν ήταν εμφανείς από οπτική εξέταση όλοι οι όγκοι ταυτοποιήθηκαν με την ανάλυση των αιματοξυλίνη και τομές 5 μm-ηωσίνη-χρωματίζονται. Όγκοι με ιστούς από πολλαπλούς τύπους δερματική αναγνωρίστηκαν ως τερατώματα. Κάθε φορά, η αρχική ενότητα όρχεων περιείχε μόνο τα καρκινικά κύτταρα νευροπεπιθηλιακά, τα τεμάχια εκ νέου τομές για τον εντοπισμό ή τον αποκλεισμό της παρουσίας άλλων καρκινικών τύπων ιστών σε άλλες περιοχές.

Στατιστική Ανάλυση

Τα στοιχεία παρουσιάζονται ως μέση ± SEM. Η σημασία των διαφορών μεταξύ των βαρών των όρχεων από τα ποντίκια της ίδιας ηλικίας αξιολογήθηκε από έναν φοιτητή του

t-test

. Η σημασία των διαφορών στη συχνότητα των TGCTs μεταξύ θεραπεία και τον έλεγχο ποντίκια προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας το Chi-square test.

Ευχαριστίες

Σας ευχαριστούμε Walter Pagel (MD Anderson Κέντρο Καρκίνου) για την συντακτική βοήθεια .