Αφηρημένο

μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα (SCLC) είναι εξαιρετικά επιθετική και χαρακτηρίζεται από κακοήθη μετάσταση. Περίπου το 90% των ασθενών πεθαίνουν λόγω της εκτεταμένης μετάσταση. Η εξωκυτταρική μήτρα (ECM) είναι ένα φυσικό εμπόδιο που μπορεί να αποτρέψει την κυτταρική εισβολή και τη μετάσταση. Ως εκ τούτου, η υποβάθμιση της ECM πρέπει να γίνει προκειμένου να προκύψει εκτεταμένη μετάσταση. Ένα ντισιντεγκρίνης και μεταλλοπρωτεάση (ADAM) είναι μία πρωτεάση πολλαπλών επικρατειών που παίζει σημαντικό ρόλο στην ογκογένεση, καθώς επίσης και του όγκου ανάπτυξης, εισβολή και μετάσταση. Ωστόσο, έχουν υπάρξει λίγες αναφορές σχετικά με την έκφραση και το ρόλο των Adams το SCLC. Στην παρούσα μελέτη, η έκφραση και ο ρόλος των Adams το SCLC πολλαπλασιασμό, εισβολή και μετάσταση διερευνήθηκε. Ένα σύνολο 150 δειγμάτων SCLC ιστού εξετάστηκαν με ανοσοϊστοχημεία για έκφραση ADAMs. ADAM-12 βρέθηκε να εκφράζεται άφθονα σε% δείγματα 72,67 και άλλα ADAMs βρέθηκαν να εκφράζονται σε 10% έως 40% των δειγμάτων. ADAM-12 επιπέδων στον ορό και στα ούρα, από 70 ασθενείς με SCLC και 40 φυσιολογικούς ελέγχους, μετρήθηκαν επίσης χρησιμοποιώντας ELISA. ADAM-12 έκφραση ήταν σημαντικά υψηλότερη σε SCLC ασθενείς σε σχέση με υγιείς μάρτυρες και σε ασθενείς με εκτεταμένη νόσο σε σύγκριση με εκείνους με πιο περιορισμένη ασθένεια. Αποσιώπηση της έκφρασης του ADAM-12 σε κύτταρα H1688 μέσω της χρήσης ειδικών siRNA μειωθεί σημαντικά τον κυτταρικό πολλαπλασιασμό, την εισβολή και τη μετάσταση. Συμπληρώνοντας την έκφραση ADAM-12-L ή -S σε Η345 κύτταρα, σημαντικά ενισχυμένη κυτταρικό πολλαπλασιασμό, εισβολή και μετάσταση. Τα ζωικά μοντέλα με μεταστατικό μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα, επίσης, παρουσίασαν αυξημένη έκφραση του ADAM-12, μαζί με βελτιωμένη εισβολή και τη μετάσταση. Εν συντομία, ADAM-12 είναι ένας ανεξάρτητος προγνωστικός παράγοντας και διαγνωστικό δείκτη, και συμμετέχει στον πολλαπλασιασμό, την εισβολή και τη μετάσταση του SCLC

Παράθεση:. Shao S, Li Ζ, Gao W, Yu G, Liu D , Pan F (2014) ADAM-12 ως διαγνωστικός δείκτης για τη διάδοση των πυρηνικών όπλων, τη μετανάστευση και την εισβολή σε ασθενείς με μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα. PLoS ONE 9 (1): e85936. doi: 10.1371 /journal.pone.0085936

Επιμέλεια: Pan-Chyr Γιανγκ, Εθνικό Πανεπιστήμιο της Ταϊβάν, Ταϊβάν

Ελήφθη: 20 Σεπτεμβρίου 2013? Αποδεκτές: 3 Δεκεμβρίου 2013? Δημοσιεύθηκε: 21 Ιανουαρίου, 2014

Copyright: © 2014 Shao et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε από το Εθνικό Ίδρυμα Φυσικών Επιστημών της Κίνας (81302017). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

μικροκυτταρικού καρκίνου του πνεύμονα (SCLC) είναι η πιο κακοήθης όλων των καρκίνων του πνεύμονα. Το ποσοστό πενταετούς επιβίωσης είναι μόνο 3-8%, λόγω της ευρείας μετάσταση κατά την πρώιμη φάση και υποτροπές που συμβαίνουν όταν η αντίσταση στις θεραπείες αναπτύσσει [1]. Προηγουμένως, η αποδόμηση της εξωκυττάριας ουσίας (ECM) έχει το επίκεντρο των μελετών για την εισβολή και τη μετάσταση του SCLC [2], [3]. Οι μεταλλοπρωτεϊνάσες μήτρας (MMPs) έχουν ανιχνευθεί σε SCLC, και τα υψηλά επίπεδα έκφρασης της ΜΜΡ-11 και -14 έχουν ταυτοποιηθεί ως ανεξάρτητος αρνητικός προγνωστικοί παράγοντες σε SCLC [4]. Οι αναστολείς των MMPs έχουν χρησιμοποιηθεί κλινικά για ασθενείς με SCLC, αλλά αποδείχθηκε ότι είναι αναποτελεσματική και δεν βελτίωσε το ποσοστό πενταετούς επιβίωσης των ασθενών [5]. Αυτό υποδηλώνει ότι η αποικοδόμηση της ECM είναι μια σύνθετη διαδικασία και ότι πρωτεάσες, εκτός από MMPs, θα πρέπει να μελετηθεί για να προσδιοριστεί εάν και άλλοι παράγοντες παίζουν ρόλο στην SCLC.

Α ντισιντεγκρίνης και μεταλλοπρωτεάση (ADAM) ανήκει στην πρωτεάση οικογένεια. ADAMs μπορεί να υποβαθμίσει ECM και να ρίξει τα προδρόμους δεσμευμένη σε μεμβράνη που ρυθμίζουν κυττάρου-κυττάρου και των αλληλεπιδράσεων κυττάρου-μήτρας [6]. ADAMs χωρίζονται σε δύο ομάδες: μεμβράνη αγκυροβολημένα ADAM και εκκρίνεται τύπου ADAM. Εκκρίνεται τύπου ADAM περιέχει μοτίβα θρομβοσπονδίνης και καλείται επίσης αποδομίνη και Μεταλλοπρωτεάσης με θρομβοσπονδίνη Μοτίβα (ADAMTS). Ανταμς και ADAMTS μπορεί να υποβαθμίσει την ECM και να ρίξει τις πρόδρομες ουσίες, προωθώντας έτσι την εισβολή και τη μετάσταση. Αυξημένη έκφραση του Adams and ADAMTS έχει ανιχνευθεί σε πολλές όγκους. ADAM-8, -12, -15 και -28 είναι εντόνως εκφρασμένα σε μη μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα [7], [8], [9], [10], ADAM-9, -12, -17 και -23 είναι εντόνως εκφρασμένη σε καρκίνο του μαστού [11], [12], [13], [14] και ADAM-9, -12 και -17 είναι εντόνως εκφρασμένη σε καρκίνο του ήπατος [15], [16], [17]. ADAMTS4 και ADAMTS5 έχουν αναφερθεί ότι εμπλέκονται στη μεταστατική διαδικασία με διάσπαση brevican σε γλοιοβλαστώματα [18]. Είναι ενδιαφέρον, πλήρους μήκους ADAMTS1 βρέθηκε να προωθήσει εισβολή και τη μετάσταση χύνοντας δέσμευσης ηπαρίνης επιδερμικού αυξητικού παράγοντα (ΗΒ-ΕΟΡ) και αμφιρεγουλίνη, ωστόσο, το θραύσμα ADAMTS1 εμφανίζεται ένα αντι-μεταστατική λειτουργία [19]. SCLC είναι έντονα επιθετικό όγκο. Περίπου το 90% των ασθενών πεθαίνουν ως αποτέλεσμα των εκτεταμένων μεταστάσεων. Ως εκ τούτου, είναι απαραίτητο να προσδιοριστεί ένας διαγνωστικός δείκτης, και ένας προγνωστικός παράγοντας για να αξιολογηθεί SCLC ασθενείς. Επί του παρόντος, δεν υπάρχει αποτελεσματική διαγνωστικός δείκτης για SCLC. Υπήρξαν λίγες μελέτες που εξετάζουν τον ρόλο της έκφρασης Adams το SCLC, με την εξαίρεση του ADAM-15 [8]. Με βάση την ενδεχόμενη σημασία του ρόλου των Adams το προαγωγή του πολλαπλασιασμού, της μετάστασης και της αγγειογένεσης, εμείς προσπάθησε να εκτιμήσει τα επίπεδα έκφρασης των Adams and σχέση τους με την κλινική πρόγνωση σε SCLC, προκειμένου να προσδιορίσει ένα αποτελεσματικό διαγνωστικό δείκτη.

στην παρούσα μελέτη, διαπιστώσαμε ότι η έκφραση του ADAM-12 ήταν υψηλότερη σε μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα σε σχέση με άλλες ADAMs μέσω ανοσοϊστοχημεία (IHC). Μονοπαραγοντική και πολυπαραγοντική ανάλυση επιβίωσης έδειξε ότι ADAM-12 ήταν ένας ανεξάρτητος προγνωστικός παράγοντας για SCLC ασθενείς. Το επίπεδο έκφρασης του ADAM-12 στον ορό και στα ούρα ήταν υψηλότερη σε ασθενείς με SCLC σύγκριση με υγιείς μάρτυρες, καθώς και σε ασθενείς με εκτεταμένη νόσο σε σύγκριση με εκείνους με περιορισμένη ασθένεια. Ζωικά μοντέλα καταδεικνύουν υψηλό μετάσταση του SCLC επίσης είχαν αυξημένη έκφραση του ADAM-12 και ενισχυμένη εισβολή και μετάσταση. Τα αποτελέσματά μας υποστήριξε το συμπέρασμα ότι η υψηλή παρουσιάζονται ADAM-12 ως ανεξάρτητος παράγοντας πρόγνωση και διαγνωστικό δείκτη συμμετείχε στον πολλαπλασιασμό, την εισβολή και τη μετάσταση σε ασθενείς με SCLC.

Υλικά και Μέθοδοι

Ασθενείς και κυττάρων γραμμές

δείγματα καρκινικού ιστού φορμόλη-σταθερή από 150 ασθενείς που πάσχουν από μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα ελήφθησαν από Binzhou Ιατρικό Πανεπιστημιακό Νοσοκομείο, την Κίνα, μεταξύ Ιανουαρίου 2008 και Δεκεμβρίου 2011. από τα δείγματα ιστών, 140 λήφθηκαν μέσω βιοψίας και 10 ελήφθησαν κατά τη διάρκεια της χειρουργικής επέμβασης. Βασικές πληροφορίες για τον ασθενή ελήφθη από τα αρχεία των ασθενών και φαίνεται στον Πίνακα 1.

Η

Φρέσκα δείγματα ορού και ούρων ελήφθησαν από 70 ασθενείς με SCLC από ογκολογικό τμήμα σε Binzhou Medical University Hospital, Κίνα (48 άνδρες και 22 γυναίκες με μέσο όρο ηλικίας 52,3 ± 11,3 χρόνια). Συνολικά 45 ασθενείς είχαν εκτεταμένη νόσο ορίζεται ως ασθένεια που έχει εξαπλωθεί στον αντίπλευρο πνεύμονα ή ότι έχει απομακρυσμένες μεταστάσεις) και 25 ασθενείς είχαν περιορισμένη ασθένεια ορίζεται ως ασθένεια που περιορίζεται σε ένα πνεύμονα, το μεσοθωράκιο, και /ή οι περιφερειακές λεμφαδένες . Όλοι οι ασθενείς υπέγραψε οικειοθελώς την ενημερωμένη συγκατάθεση. Όλοι οι ασθενείς είχαν διαγνωστεί με SCLC από παθολογική δείγματα βιοψίας και είχε υποβληθεί σε χημειοθεραπεία και ακτινοθεραπεία. Συνολικά 40 υγιείς εθελοντές (20 άνδρες και 20 γυναίκες με μέσο όρο ηλικίας 38,7 ± 12,1 χρόνια) μελετήθηκαν επίσης. Υγιείς μάρτυρες δεν είχαν κανένα μη φυσιολογικές αλλαγές στο αίμα, το συκώτι, την καρδιά, τους πνεύμονες ή τα νεφρά λειτουργίες. Η μελέτη αυτή εγκρίθηκε από την Επιτροπή Ιατρικής Δεοντολογίας των Binzhou Ιατρικό Πανεπιστήμιο, Κίνα (Αριθμός Άδειας: BY2010008).

κυτταρικές σειρές ανθρώπινου SCLC, συμπεριλαμβανομένων H1688, Η446 και Η345, αγοράστηκαν από την Σαγκάη τηλέφωνα της Βιβλιοθήκης του κινεζικού Ακαδημία Επιστημών. Τα κύτταρα καλλιεργήθηκαν σε 1640 συμπληρωμένο με 10% ορό εμβρύου μόσχου, 100 U /ml πενικιλλίνη και 100 μg /ml στρεπτομυκίνη.

Ανοσοϊστοχημεία

Τα δείγματα εγκλεισμένοι σε παραφίνη αποκηρώθηκαν σε διμεθυλοβενζόλιο και ενυδατωμένο σε κλίση αλκοόλ. Τα τμήματα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία σύμφωνα με τα ακόλουθα πρωτόκολλα: Η ενδογενής υπεροξειδάση αφαιρέθηκε (επώαση σε 3% Η

2O

2 για 30 λεπτά), το αντιγόνο ανακτάται (περίπου 95 ° C για 45 λεπτά), μπλοκάροντας με 10% ορό κατσίκας (σε θερμοκρασία δωματίου για 30 λεπτά), πρωτογενές αντίσωμα ολονύκτια επώαση στους 4 ° C, συζευγμένο με HRP δεύτερα αντισώματα από επώαση για 30 λεπτά στους 37 ° C, αντίδραση χρώματος DAB, χρώση αιματοξυλίνης, διαφοροποίηση, αφυδάτωση και τη διαφάνεια. Η αραίωση των πρωτογενών αντισωμάτων ήταν 1:50 για ADAM-8, ADAM-10, ADAM-11 (Santa Cruz Biotechnology, Dallas, TX, USA), 1:200 για ADAM-12 (Abgent, Suzhou, Κίνα), ADAM- 15 και ADAM-17 (R &? D Systems, Minneapolis, ΜΝ, USA). Δύο παθολόγους που αγνοούσαν την κλινική διάγνωση πραγματοποιείται τις βαθμολογίες χρώσης. Σε περίπτωση που αμφισβητείται αποτέλεσμα, επιτεύχθηκε συμφωνία από συζήτηση. Ένα σύστημα βαθμολόγησης ημι-ποσοτική χρησιμοποιήθηκε στο βαθμό των δειγμάτων σύμφωνα με το ποσοστό των θετικών χρώσης: βαθμός 0 (αρνητική), βαθμός 1 (ασθενές θετικό, θετική έκφραση ήταν μικρότερη από 10%), βαθμού 2 (μέτρια θετική, θετική έκφραση ήταν μεταξύ 10% και 60%) και βαθμού 3 (ισχυρή θετική, θετική έκφραση ήταν μεγαλύτερη από 60%) [20].

ELISA

ο ορός και το πρώτο ούρα της ημέρας (μέσα ρεύμα) ελήφθησαν από ασθενείς με SCLC, φυγοκεντρήθηκαν (1000 g, 30 min) για να συλλεχθεί το υπερκείμενο και αποθηκεύτηκε στους -80 ° C [21]. Τα επίπεδα του ADAM-12 στον ορό και τα ούρα μετρήθηκαν χρησιμοποιώντας ένα ειδικό kit ADAM-12 ELISA (R &? D Systems). Ένας όγκος 50 μΐ 2-φορές αραιωμένα δείγματα προστέθηκε σε πλάκα 96-φρεατίων καλύπτονται με ADAM-12 ειδικό μονοκλωνικό αντίσωμα και επωάστηκαν για 2 ώρες σε θερμοκρασία δωματίου. Μετά από αναρρόφηση και έκπλυση κάθε φρεατίου τέσσερις φορές, 200 μΙ ADAM-12 σύζευγμα προστέθηκε και τα φρεάτια επωάστηκαν για 2 ώρες σε θερμοκρασία δωματίου. Κάθε φρεάτιο πλύθηκε επιπλέον τέσσερις φορές για να απομακρυνθεί το απομένον υγρό και 200 ​​μΙ διαλύματος υποστρώματος προστέθηκαν σε κάθε φρεάτιο και τα φρεάτια επωάστηκαν για 30 λεπτά στο σκοτάδι. ρυθμιστικό Σταματήστε προστέθηκε για τερματισμό της αντίδρασης και η ένταση απορρόφηση μετρήθηκε στα 450 nm.

Μικρά παρεμβολή RNA (siRNA) θεραπεία

siRNAs για γονίδια στόχους συντέθηκαν και τροποποιημένα (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA). Η αλληλουχία του siRNA που στοχεύει ADAM-12 ήταν 5 ‘GGA AGA ΕΕΜ GAU GAA Ουυ Γ.Ο.Σ. 3’ [22] και το σκαρφάλωμα siRNA ήταν 5 ‘UUC UCC GAA CGU GUC ACG UTT 3’. κύτταρα H1688 καλλιεργήθηκαν σε τρυβλία 6 φρεατίων και επιμολύνθηκαν με 75 pmol siRNA και 7,5 μΙ Lipofectamine 2000 (Invitrogen) προστέθηκε σε κάθε καλά όταν η πυκνότητα των κυττάρων ήταν περίπου 30% -50%. Μετά από 4 ώρες, το Opti-media αντικαταστάθηκε από κανονικό μέσο και οι πρωτεΐνες συλλέχθηκαν σε 48 ώρες μετά την επέμβαση.

Η επιμόλυνση του ADAM-12-L και ADAM-12-S σε κύτταρα Η345

Η345 κύτταρα επιμολύνθηκαν παροδικά με φορείς έκφρασης ADAM-12-L και ADAM-12-S (πλασμίδια pcDNA3.1 που περιέχει ανθρώπινη όλα μήκους cDNA του ADAM-12-L ή -S ήταν δώρα από Ulla M. Wewer στο Πανεπιστήμιο της Κοπεγχάγης ) χρησιμοποιώντας Lipofectamine 2000 (Invitrogen). Τα κύτταρα επιμολύνθηκαν με ADAM-12-L ονομάστηκαν Η345-L και τα κύτταρα επιμολύνθηκαν με ADAM-12-S ονομάστηκαν Η345-S.

Real Time PCR

Το ολικό RNA εκχυλίστηκε χρησιμοποιώντας ένα ΤπζοΙ Kit (Takara, Dalian, Κίνα). cDNA παρασκευάστηκε χρησιμοποιώντας ένα κιτ σύνθεσης cDNA (Thermo Scientific, Waltham, ΜΑ, USA). Real-time PCR πραγματοποιήθηκε με SYBR Green (Thermo Scientific). Οι εκκινητές των γονιδίων στόχων ήταν ως εξής:

F: 5′-GCAGTTTCACGGAAACCCAC-3 ‘,

R: 5′-ACACGTGCTGAGACTGACTG-3′ για ADAM-12?

F: 5′-TCCTGTGTCTTCTTGCTGCC-3 ‘,

R: 5′-GCGCACACACCTTAGTTTTTC-3 »για ADAM-12-L?

F: 5′-CCACCCATTCCATCTCCATC-3′

R: 5′-TTCTGCAAACCCTCAAACC-3’for ADAM-12-S

F: 5′-GAGCACAGAGCCTCGCCTTT-3 ‘

R: 5′-CGCGGCGATATCATCATCCA-3′ για βήτα-ακτίνη.

κηλίδωση Western

τα κύτταρα λύθηκαν με SDS ρυθμιστικό διάλυμα λύσης που περιέχει ένα μίγμα αναστολέα πρωτεάσης. Τα ποσοτικά πρωτεΐνες διαχωρίστηκαν με ηλεκτροφόρηση SDS-PAGE και οι πρωτεΐνες μεταφέρθηκαν πάνω σε μέλη NC. Το μέλος μπλοκαρίστηκε με 5% αποβουτυρωμένο γάλα για 1 ώρα με ελαφρά ανακίνηση και επωάστηκαν με πρωτεύοντα αντισώματα όλη τη νύχτα στους 4 ° C (1:500 για ADAM-12, Abgent, Suzhou, Κίνα? 1: 3000 για βήτα-ακτίνη, Cell Signaling Technology, Inc. Danvers, ΜΑ, USA), μετά επωάστηκαν με συζευγμένο με HRP δεύτερα αντισώματα για 40 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου. ζώνες ανοσοαποτύπωμα έγιναν ορατές χρησιμοποιώντας το σύστημα ECL (Millipore, Billerica, ΜΑ, USA) και φιλμ ακτίνων Χ.

Transwell πειράματα

Transwell πειράματα διεξήχθησαν σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή (BD, Franklin Lakes, NJ, USA). Το Matrigel αραιώθηκε με μέσο ελεύθερο ορού (1: 2). Ένας όγκος 60 μΐ γέλης απλώθηκε εντός του άνω θαλάμου και στερεοποιήθηκε με επώαση στους 37 ° C για 3 ώρες. 1 × 10

4 κύτταρα τοποθετήθηκαν εντός του θαλάμου, διηθείται εντός του κατώτερου θαλάμου και εισάγεται εντός του ορού. Στη συνέχεια, τα κύτταρα χρωματίστηκαν χρησιμοποιώντας Giemsa Dye, και ο αριθμός των κυττάρων σε 3 τομείς μετρήθηκε υπό μικροσκόπιο φωτός.

κυτταρικού κύκλου ανάλυση

Τα κύτταρα στερήθηκαν για 24 ώρες με απόσυρση ορού. H1688 και Η345 κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία. Τα κύτταρα συλλέχθηκαν, σταθεροποιήθηκαν και επωάστηκαν με RNase Α (Thermo Scientific) για 30 λεπτά στους 4 ° C. Στη συνέχεια, τα κύτταρα στη συνέχεια επωάστηκαν με ιωδιούχο προπίδιο (Sigma-Aldrich, St. Louis, ΜΟ, USA) για 30 λεπτά. περιεχόμενο DNA ανιχνεύθηκε μέσω κυτταρομετρίας ροής [23].

Τα πειράματα σε ζώα

H1688 κύτταρα (ένα κλασσικό μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα γραμμή κυττάρων) καλλιεργήθηκαν σε 1640 και 10

6 κύτταρα ήταν χορηγήθηκε υποδορίως σε γυμνούς ποντικούς. Το μέγεθος του όγκου παρακολουθήθηκε κάθε εβδομάδα. Όταν η διάμετρος του όγκου έφθασε περίπου 1 cm, οι ποντικοί υποβλήθηκαν σε ευθανασία υπό αναισθησία και οι όγκοι αποκόπηκαν. Αποκομμένα όγκοι (που ονομάζεται γονικά κύτταρα) κόπηκαν στο μισό. Το ένα μισό αποθηκεύθηκε στους -80 ° C, και η άλλη κόπηκε σε κομμάτια, πέψη (0,25% θρυψίνη επώαση για 15 λεπτά) και διηθήθηκε. Φιλτραρισμένο κύτταρα καλλιεργήθηκαν πάλι σε κανονικό μέσο. Τρεις ημέρες αργότερα, τα κύτταρα ενέθηκαν σε ανοσοανεπαρκή ποντίκια μέσω της φλέβας της ουράς. Δέκα εβδομάδες αργότερα, οι ποντικοί υποβλήθηκαν σε ευθανασία υπό αναισθησία. Από τους 10 ποντικούς οι οποίοι εγχύθηκαν, 5 ποντίκια είχαν ορατούς όγκους (διαμέτρου & gt? 0,5 ​​cm) στην κοιλιακή χώρα πνεύμονα και το ήπαρ και το άλλο 5 ποντίκια δεν είχαν ορατούς όγκους. Σε σύγκριση με όγκους που προκύπτουν από την υποδόρια ένεση, οι όγκοι που προκύπτουν από την ένεση στην ουραία φλέβα είχαν υψηλότερα επίπεδα διήθηση και εισβολή [24]. Έτσι, ένας πολύ μεταστατικός ζωικό μοντέλο μετάστασης Προσομοίωση του όγκου σε ασθενείς με επιτυχία κατασκευάστηκε. Η Επιτροπή Ιατρικής Δεοντολογίας των Binzhou Ιατρικού Πανεπιστημίου ενέκρινε την εν λόγω μελέτη (Αριθμός Άδειας: BY2013001).

Η στατιστική ανάλυση

Όλα τα δεδομένα αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας το λογισμικό SPSS 17.0. Η μέθοδος Kaplan-Meier και δοκιμασία log-rank χρησιμοποιήθηκαν για να εκτιμηθεί η μονοπαραγοντική ποσοστό επιβίωσης. παλινδρόμησης Cox χρησιμοποιήθηκε για να εκτελέσει την πολυπαραγοντική ανάλυση επιβίωσης. Μια ανάλυση καμπύλης δέκτης λειτουργούν χαρακτηριστικά (ROC) διεξήχθη για να αξιολογηθεί η αποκοπής για επίπεδα ADAM-12 στον ορό και στα ούρα σε ασθενείς με SCLC και υγιείς εθελοντές. Η περιοχή κάτω από την καμπύλη (AUC) και ρ-τιμές αξιολογήθηκαν. Οι διαφορές έκφραση μεταξύ των διαφόρων ομάδων αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας ζεύγη

t

δοκιμής.

P

& lt?

0.05

θεωρήθηκε στατιστικά σημαντική

Αποτελέσματα

Η έκφραση των Adams το SCLC δείγματα από την IHC

Η έκφραση του ADAM-8,. – 10, -11, -12, -15 και -17 αξιολογήθηκε με IHC σε 150 δείγματα SCLC. Το επίπεδο της θετικής έκφρασης (βαθμολογίες των βαθμών 2 και 3) του ADAM-8, -10, -11, -15 και -17 ήταν 31.33% (47/150), 34,66% (52/150), 19,33% (29 /150), 39.33% (59/150) και 10% (15/150), αντιστοίχως (Σχήμα S1). Η θετική έκφραση ADAM-12 ήταν το υψηλότερο στο 72,67% (109/150) και την ισχυρή θετική έκφραση (βαθμός 3) του ADAM-12 ήταν σημαντικά μεγαλύτερη σε σχέση με το άλλο ADAMS (

P

& lt? 0.001 ). Όπως φαίνεται στο Σχήμα 1, βρήκαμε ότι ADAM-12 εκφράστηκε σε SCLC και βρισκόταν στο κυτταρόπλασμα, αλλά όχι τον πυρήνα. HE χρώση έδειξε ότι ο τύπος ιστού του όγκου είχε τυπικό SCLC κλινικοπαθολογοανατομικές χαρακτηριστικά (μεγαλύτερα πυρήνες και σχεδόν καθόλου κυτταρόπλασμα). Δείγματα ιστών που επωάστηκαν όλη τη νύκτα με PBS, αντί του πρωτογενούς αντισώματος, χρησιμοποιήθηκαν ως αρνητικοί έλεγχοι. ADAM-12 εκφράστηκε σημαντικά περισσότερο σε δείγματα ιστού SCLC σε σύγκριση με την έκφραση άλλων ADAMS (

P

& lt? 0.001) που υποδεικνύει ότι ADAM-12 μπορεί να παίζει ένα σημαντικό ρόλο στη διαδικασία πολλαπλασιασμού, εισβολή και μετάσταση σε SCLC.

ADAM-12 ανιχνεύθηκε σε μικρό ιστό καρκίνου του πνεύμονα με χρώση ανοσοϊστοχημείας. Η αναλογία αραίωσης του πρωτογενούς αντισώματος ήταν 1: 200 για ADAM-12. (A) κανονικό ιστό των πνευμόνων? (Β) η χρώση σε SCLC ιστό? (C) Αρνητικός έλεγχος (επωάστηκαν με PBS αντί του πρωτογενούς αντισώματος όλη τη νύκτα στους 4 ° C)? (D) Χρώση για ADAM-12 στο SCLC ιστό.

Η

ADAM-12 είναι ένας ανεξάρτητος προγνωστικός παράγοντας σε ασθενείς με SCLC

Από το ADAM-12 ήταν ιδιαίτερα εκφράζεται σε SCLC, ερευνήσαμε η σχέση μεταξύ ADAM-12 και την πρόγνωση της νόσου. Όλοι οι ασθενείς είχαν δεχθεί συστηματική θεραπεία και 15 150 ασθενείς ήταν ακόμη εν ζωή τον Ιανουάριο του 2013 (ημερομηνία λήξης της μελέτης). Ο μέσος χρόνος επιβίωσης των ασθενών ήταν 12,59 μήνες και το ποσοστό επιβίωσης 2-ετών ήταν 16%. Σύμφωνα με τις βαθμολογίες χρώσης IHC, εκείνοι με τους βαθμούς 0 και 1 θεωρήθηκαν στην ομάδα αρνητικού και εκείνων με τους βαθμούς 2 και 3 θεωρήθηκαν στην θετική ομάδα. μονοπαραγοντική ανάλυση επιβίωσης έδειξε ότι οι σημαντικές κλινικές παράγοντες που επηρέασαν την επιβίωση ήταν εκτεταμένη νόσο (

P

& lt? 0.001). Ούτε το κάπνισμα (

P

= 0,882), το φύλο (

P

= 0.396) ήταν ένας σημαντικός προγνωστικός παράγοντας, ούτε ήταν τα επίπεδα του ADAM-8 (

P

= 0,903), ADAM-10 (

P

= 0.075), ADAM-11 (

P

= 0.317), ADAM-15 (

P

= 0,349) ή ADAM-17 (

P

= 0,427). Ωστόσο, ADAM-12 (

P

= 0.022) ήταν ένας σημαντικός αρνητικός προγνωστικός παράγοντας (Σχήμα 2). ανάλυση Πολυμεταβλητή επιβίωση διεξήχθη για να αξιολογηθεί η προγνωστική επίδραση διαφόρων παραγόντων. Τα αποτελέσματα ήταν σύμφωνα με την ανάλυση μονοπαραγοντική επιβίωση. Κλινικό στάδιο (

P

= 0,001, HR = 2,003, 95% CI: 1,330 – 3,015) και το επίπεδο του ADAM-12 έκφρασης (

P

= 0.049, HR = 0,443, 95% CI : 0,197 – 0,995) ήταν σημαντικά ανεξάρτητοι προγνωστικοί παράγοντες (Πίνακας 2) και ADAM-12 συνδέθηκε στενά με το κλινικό στάδιο (

P

& lt? 0.001). Κλινικά χαρακτηριστικά των ασθενών που ήταν θετικοί για ADAM-12 σε σύγκριση με αυτούς που ήταν αρνητικοί για ADAM-12, προκειμένου να αποσαφηνίσει περαιτέρω το ρόλο του ADAM-12 ως ανεξάρτητος προγνωστικός παράγοντας σε SCLC. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι η παθολογική φάση ήταν στατιστικά σημαντική (

P

= 0.037), ενώ άλλοι παράγοντες όπως η ηλικία (& lt? 65 σε σύγκριση με ≥ 65,

P

= 0,325), το φύλο (

P

= 0,975), το κάπνισμα (

P

= 0,743) και ο όγκος μεγέθους (

P

= 0,511) δεν ήταν σημαντικές.

ασθενής χρόνος επιβίωσης που λαμβάνεται με παρακολούθηση. μονοπαραγοντική ανάλυση επιβίωσης διεξήχθη για να αξιολογηθεί κατά πόσον ADAM-8, -10, -11, -12, -15 και -17 θα μπορούσαν να θεωρηθούν ως ανεξάρτητες προγνωστικούς παράγοντες. Το αποτέλεσμα έδειξε ADAM-12 να είναι ανεξάρτητο και ανασταλτικό παράγοντα (

P

= 0.022).

Η

ορού και ούρων ADAM-12 επίπεδα σε ασθενείς με SCLC

χρώση IHC αποδειχθεί ADAM-12 να είναι ιδιαίτερα εκφράζονται σε εκκρίσεις βλέννας, εκτός από SCLC κύτταρα (Σχήμα 3Α). Στη συνέχεια προκύπτει ότι ADAM-12 πιθανόν εκκρίνεται στο αίμα και απεκκρίνονται μέσω των ούρων. Έτσι, ερευνήσαμε τα επίπεδα του ADAM-12 στον ορό και στα ούρα των ασθενών SCLC. Ορός και ούρων από 70 ασθενείς με SCLC και 40 υγιείς εθελοντές συλλέχθηκαν, φυγοκεντρήθηκαν και αποθηκεύτηκαν στους -80 ° C. Ένα κιτ ELISA χρησιμοποιήθηκε για να ανιχνευθεί η έκφραση του ADAM-12. Οι καμπύλες ROC απέδωσε ένα υψηλότερο AUC του 0,899 (

P

& lt? 0.001, 95% CI: 0,842 να 0.956) για 346 pg /ml σε ADAM-12 επίπεδα ορού από ασθενείς με SCLC (Σχήμα 3Β) από ό, τι κανονικά συγκριτικά (α AUC του 0.847 για 105 pg /ml), και ένα υψηλότερο AUC του 0,979 (

P

& lt? 0.001, 95% CI: 0,959 να 0,999) για 258 pg /ml στα ούρα ADAM-12 επίπεδο από SCLC ασθενείς (Σχήμα 3C) από το κανονικό μάρτυρες (α AUC του 0.869 για 92 pg /ml). Το επίπεδο στον ορό ADAM-12 ήταν σημαντικά υψηλότερη σε SCLC ασθενείς σε σχέση με υγιείς εθελοντές (502 ± 234

vs

180 ± 92 pg /ml,

P

& lt? 0.001) και σε εκείνους με εκτενή ασθένεια σε σύγκριση με εκείνους με περιορισμένη νόσο (586 ± 205

vs

317 ± 185 pg /ml) (Σχήμα 3D). Το ADAM 12 επίπεδα ούρων ήταν συνεπείς με το επίπεδο στον ορό και ήταν υψηλότερη σε ασθενείς με SCLC ό, τι σε υγιείς εθελοντές (404 ± 247

vs

128 ± 50 pg /ml) και σε ασθενείς με εκτεταμένη νόσο σε σύγκριση με τους ασθενείς με περιορισμένη νόσος (477 ± 201

vs

303 ± 152 pg /ml) (Σχήμα 3Ε). Αυτό δείχνει ότι οι ADAM-12 επιπέδων στον ορό και στα ούρα συσχετίστηκε με SCLC εξέλιξη και ότι ADAM-12 μπορεί να θεωρηθεί ότι είναι ένας διαγνωστικός δείκτης για SCLC ασθένεια από την έκφραση του ADAM-12 αυξήθηκε με την ανάπτυξη και την εξέλιξη της νόσου.

χρώση (Α) ADAM-12 ήταν έντονα θετικό σε εκκρίσεις βλέννας (η περιοχή που υποδεικνύεται από το βέλος). (B, C) καμπύλη ROC Ένα διεξήχθη για να αξιολογηθεί η cut-off για ασθενείς με SCLC και υγιείς εθελοντές? ROC = χαρακτηριστικά λειτουργίας δέκτη. Τα επίπεδα έκφρασης του ADAM-12 στον ορό και στα ούρα από SCLC ασθενών και υγιών μαρτύρων (D, E) ανιχνεύθηκαν χρησιμοποιώντας ένα κιτ ELISA. **

P

& lt? 0,01, SCLC ασθενείς

vs

φυσιολογικούς μάρτυρες, SCLC ασθενείς με εκτεταμένη νόσο

vs

περιορισμένη νόσο

Η

ADAM-12 πληγείσα μετάσταση και τον πολλαπλασιασμό σε H1688 κύτταρα

Όπως φαίνεται Σχ. 1, 2 και 3, ADAM-12 είναι ένας ανεξάρτητος προγνωστικός παράγοντας που θα μπορούσε να είναι χρήσιμο ως διαγνωστικός δείκτης σε SCLC. Εμείς στη συνέχεια διερευνηθεί ο ρόλος του ADAM-12 στον πολλαπλασιασμό, την εισβολή και τη μετάσταση σε SCLC. Πρώτον, ανιχνεύσαμε την έκφραση ADAM-12 σε κυτταρικές γραμμές μικροκυτταρικού καρκίνου του πνεύμονα (H1688, Η446 και Η345) και διαπίστωσε ότι ADAM-12 ήταν περισσότερο εντόνως εκφρασμένο σε H1688 και Η446 κυττάρων σε σύγκριση με την κυτταρική γραμμή Η345 (Σχήμα 4Α). Σε μια μελέτη για τον καρκίνο του μαστού, ADAM-12 αναφέρεται ότι έχει δύο μορφές μεταγραφής (μεμβράνη-αγκυροβολημένη ADAM-12-L και εκκρίνεται τύπου ADAM-12-S) που παίζουν διαφορετικούς ρόλους [22]. Λόγω της ομοιότητας ακολουθίας, διαφορετικά siRNAs που στοχεύουν ADAM-12-L και ADAM-12-S, αντίστοιχα, δεν θα μπορούσε να σχεδιαστεί έτσι siRNA χρησιμοποιήθηκε για τη στόχευση ADAM-12. Η έκφραση του ADAM-12 μειώθηκε σημαντικά κατά τη συγκεκριμένη ομάδα siRNA σε σχέση με τον μη επεξεργασμένο και τα κωδικοποιημένα ομάδες siRNA (Σχήμα 4Β). Όταν υπήρχε παρεμβολή στην έκφραση ADAM-12 σε H1688 κυττάρων, τα κύτταρα που επάγονται από τον ορό διήθηση της μεμβράνης θάλαμος ήταν σημαντικά μειωμένες (Σχήμα 4C) και το κυτταρικό κύκλο συνελήφθη στη φάση G0-G1 (Εικόνα 4D). Roy

κ.ά.

ανέφεραν ότι ADAM-12-L προωθείται κυτταρικό πολλαπλασιασμό και ότι ADAM-12-S προωθούνται κυτταρική μετανάστευση στον καρκίνο του μαστού [22]. Στην έρευνά μας, κυτταρικό πολλαπλασιασμό και μετανάστευση ήταν σημαντικά ανέστειλε μετά την φίμωση την έκφραση ADAM-12 με ειδική siRNA στην κυτταρική σειρά H1688, αποδεικνύοντας ότι ADAM-12 συνδέεται με τον κυτταρικό πολλαπλασιασμό, την εισβολή και τη μετάσταση. Να αποσαφηνίσει τους ρόλους της ADAM-12-L και -S στον κυτταρικό πολλαπλασιασμό και τη μετανάστευση, ένα πείραμα σχεδιάστηκε και διενεργείται που περιγράφεται παρακάτω.

(Α) Η έκφραση του ADAM-12 ήταν υψηλότερη σε H1688 και τα κύτταρα Η446 σε σύγκριση με Η345 κύτταρα με κηλίδωση Western. (Β) Η έκφραση του mRNA και της πρωτεΐνης του ADAM-12 ήταν σημαντικά μειωμένη όταν ADAM-12 έκφρασης σίγησε από ένα ειδικό siRNA που στοχεύει ADAM-12 (ADAM-12i) σε σύγκριση με μη επεξεργασμένα (Mock) και ομελέτα siRNA (NCI) σε H1688 κύτταρα **

P

& lt? 0,01. (C) Τα κύτταρα που προκαλείται από τη μεμβράνη θάλαμο φιλτραρίσματος του ορού ήταν σημαντικά μειωμένη στην ομάδα ADAM-12i σε σύγκριση με τις ομάδες Mock και ΝΚΜ στα H1688 κύτταρα, **

P

& lt? 0,01. (Δ) Το κυτταρικό κύκλο ήταν σημαντικά συνελήφθη στη φάση G0-G1 στην ομάδα ADAM-12θ. Mock: μη επεξεργασμένα κύτταρα? NCI: τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με μπερδεμένο siRNA. ADAM-12i:. Τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με siRNA που στοχεύει ADAM-12

Η

ADAM-12-L προάγει πολλαπλασιασμό και ADAM-12-S προάγει εισβολή

Όπως φαίνεται Σχήμα 4, όταν η έκφραση ADAM-12 σίγησε, κυτταρικό πολλαπλασιασμό και μετανάστευση ανεστάλη σημαντικά σε H1688 κύτταρα. ADAM-12 έκφραση ήταν χαμηλότερη σε κύτταρα Η345 σε σύγκριση με H1688 και τα κύτταρα Η446 (Σχήμα 3Α). κύτταρα Η345 στην συνέχεια επιμολύνθηκαν παροδικά με τον φορέα έκφρασης του ADAM-12-L (Η345-L) ή -S (Η345-S). Η αποτελεσματικότητα επιμόλυνσης αξιολογήθηκε με PCR πραγματικού χρόνου δεδομένου ότι δεν υπήρχε ειδικό αντίσωμα στόχευσης ADAM-12-L ή -S. Η έκφραση του mRNA του ADAM-12-L και -S αυξήθηκαν σημαντικά μετά την επιμόλυνση (Σχήμα 5Α). Δεν υπήρχε σημαντική διαφορά μεταξύ των κυττάρων Η345-L που επάγεται από διήθηση μέσω της μεμβράνης θαλάμου και εικονικές (κανονικός έλεγχος) ή αρνητικούς μάρτυρες (pcDNA3.1). Ωστόσο, τα αντιφατικά αποτελέσματα σε κύτταρα Η345-S. Μετά από επιμόλυνση με ADAM-12-S, Η345 κυττάρων που επάγεται από τον ορό διήθηση μέσω της μεμβράνης θαλάμου ήταν σημαντικά αυξημένα, υποδεικνύοντας ότι ADAM-12-S, δεν ADAM-12-L, παίζει σημαντικό ρόλο στην SCLC εισβολή και μετάσταση (σχήμα 5Β ). Εν τω μεταξύ, η ανάλυση κυτταρικού κύκλου έδειξε ότι Η345-Ε κυττάρων τέθηκε σε φάσεις S, αλλά ότι τα κύτταρα Η345-S δεν ήταν σημαντικά διαφορετικές σε σύγκριση με κύτταρα αρνητικού ελέγχου (Σχήμα 5C). Αυτό έδειξε ότι ADAM-12-L θα μπορούσε να προωθήσει τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων και ADAM-12-S θα μπορούσε να προωθήσει κυτταρική εισβολή και τη μετάσταση, η οποία είναι σύμφωνη με αποτέλεσμα Roopali του [22].

(Α) Οι εκφράσεις του mRNA της ADAM- 12-L και -S ανιχνεύθηκαν με πραγματικού χρόνου PCR σε κύτταρα Η345 επιμολυσμένα με τον φορέα έκφρασης του ADAM-12-L και -S, **

P

& lt? 0,01. Mock: χωρίς θεραπεία ομάδα? pcDNA3.1: αρνητική ομάδα. 12-L: επιμολυσμένα με pcDNA3.1-ADAM-12-L? 12-S: επιμολυσμένα με pcDNA3.1-ADAM-12-S. (Β) Τα κύτταρα που προκαλείται από την μεμβράνη θάλαμο διήθησης δεν ήταν σημαντικά διαφορετικές στα κύτταρα Η345 επιμολυσμένα με pcDNA3.1-ADAM-12-L (που ονομάζεται Η345-L), ωστόσο τα κύτταρα ήταν σημαντικά αυξημένα σε κύτταρα Η345 επιμολυσμένα με pcDNA3. 1-ADAM-12-S (που ονομάζεται Η345-S), *

P

& lt? 0,05. (C) ADAM-12-L επαγόμενα κύτταρα για να πάει από το G0-G1 φάση στην S φάση, αλλά ADAM-12-S δεν επηρέασε τον κυτταρικό πολλαπλασιασμό σε κύτταρα Η345.

Η

Η έκφραση του ADAM-12 αυξήθηκε όταν εισβολή και μετάσταση όγκου ενισχύθηκε

Προηγούμενη έρευνα [22] είχε αναφέρει ότι ADAM-12-L προωθείται πολλαπλασιασμό των κυττάρων και ADAM-12-S προωθείται κύτταρο εισβολή και τη μετάσταση σε ένα ζωικό μοντέλο? επιβεβαιώσαμε αυτό το συμπέρασμα σε κυτταρικό επίπεδο. Ωστόσο, δεν υπήρξαν αναφορές για το αν η έκφραση του ADAM-12 είναι αυξημένη όταν εισβολή όγκου και η μετάσταση είναι ενισχυμένη. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 3, ADAM-12 επίπεδα στον ορό και στα ούρα ήταν σημαντικά αυξημένες σε ασθενείς με εκτεταμένη νόσο σε σύγκριση με εκείνους με περιορισμένη ασθένεια, προτείνοντας ότι η έκφραση του ADAM-12 αυξάνεται με την ανάπτυξη της νόσου. Για να επιβεβαιωθεί αυτό το συμπέρασμα, ο πολύ μεταστατικός μετάσταση ζωικό μοντέλο προσομοίωσης όγκου κατασκευάστηκε όπως περιγράφεται στις μεθόδους (Σχήμα 6Α). Υπήρξε μια μεγαλύτερη μεταβολή στην μορφολογία των μεταστατικών κυττάρων σε σύγκριση με τα πατρικά κύτταρα από αυτό το μοντέλο. Μεταστατικό μέγεθος κυψέλης ήταν μικρότερο, ο λεκές κυτόπλασμα ήταν shoaled, η πυρηνική χρώση ήταν βαθύνει, η πυκνότητα των κυττάρων αραιώνονται και το κύτταρο συμπαγής εξασθενημένο (Σχήμα 6Β). Η έκφραση του ADAM-12 ανιχνεύθηκε σε γονικών και μεταστατικά κύτταρα. Η έκφραση του mRNA του ADAM-12-L δεν ήταν διαφορετική μεταξύ των γονικών και μεταστατικά κύτταρα, αλλά ADAM-12-S mRNA ήταν σημαντικά υψηλότερη στα μεταστατικά κύτταρα (Σχήμα 6C). Αυτό δείχνει ότι ADAM-12-S, δεν ADAM-12-L, παίζει σημαντικό ρόλο στην εισβολή και τη μετάσταση. Η πρωτεΐνη ADAM-12 ανιχνεύθηκε με IHC και στύπωμα Western. Το αποτέλεσμα έδειξε ότι ADAM-12 ήταν προφανώς υψηλότερο σε μεταστατικά κύτταρα σε σύγκριση με γονικά κύτταρα (Σχήμα 6D).

(Α) Ένα εξαιρετικά μεταστατικό ζωικό μοντέλο κατασκευάστηκε, 1 × 10

6 κύτταρα χορηγήθηκαν υποδόρια και οι υποδόριοι όγκοι (γονικά κύτταρα) ενέθηκαν σε γυμνά ποντίκια μέσω της φλέβας της ουράς για να σχηματίσουν μεταστατικούς όγκους (μεταστατικών κυττάρων). (Β) μορφολογικές διαφορές παρατηρήθηκαν μεταξύ των γονικών κυττάρων και μεταστατικά κύτταρα μέσω αιματοξυλίνη και χρώση ηωσίνης (ΗΕ). Σε σύγκριση με τα γονικά κύτταρα, μεταστατικά κύτταρα ήταν μικρότερα, είχε shoaled χρώση κυτταρόπλασμα, βαθύτερη πυρηνική χρώση, λεπτότερο πυκνότητα κυττάρων και ασθενέστερη συμπαγή κυττάρων. (Γ) Δεν υπήρχε διαφορά στην έκφραση του mRNA ADAM-12-L μεταξύ των γονικών και μεταστατικά κύτταρα, ωστόσο ADAM-12-S mRNA ήταν σημαντικά υψηλότερη σε μεταστατικά κύτταρα, *

P

& lt? 0.05. (Δ) της έκφρασης της πρωτεΐνης ADAM-12 ήταν σημαντικά αυξημένη στα μεταστατικά κύτταρα με IHC και κηλίδωση Western. P1-P5 δείχνει τις πέντε υποδόριων όγκων και M1-M5 δείχνει τις πέντε μεταστατικούς όγκους.

Η

Συζήτηση

Υπάρχουν περισσότερα από 30 ADAMs που ανήκουν στην οικογένεια των μεταλλοπρωτεϊνασών. Αλληλεπιδρούν με ιντεγκρίνες να μεσολαβήσουν κυττάρου-κυττάρου και των αλληλεπιδράσεων κυττάρου-εξωκυτταρικής μήτρας [25], να ρίξει ένα μεγάλο αριθμό διαμεμβρανικών πρωτεϊνών, υποβαθμίζουν την ECM και ενεργοποιούν οδούς Notch και EGFR να προωθήσει τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων, εισβολή και μετάσταση [6].

Τα κύρια χαρακτηριστικά του SCLC είναι ταχεία και εκτεταμένη ανάπτυξη μετάσταση στο αρχικό στάδιο. Επί του παρόντος, δεν υπάρχει αποτελεσματική διαγνωστικός δείκτης για να βοηθήσει στη διάγνωση του SCLC, ιδιαίτερα κατά την αρχική φάση. Αυτή η μελέτη σχεδιάστηκε για να αξιολογήσει την έκφραση του Adams το SCLC και προκειμένου να βρεθεί ένα χρήσιμο διαγνωστικό δείκτη. Μέχρι τώρα, μόνο η έκφραση ADAM-15 είχαν εντοπιστεί και η έκφραση των άλλων ADAMs είχε μόνο σπανίως αναφερθεί σε μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα [8]. Στην έρευνά μας, εντοπίσαμε ADAM-8, -10, -11, -12 και -17 και διαπίστωσε ότι ADAM-12 ήταν περισσότερο εντόνως εκφρασμένο σε σύγκριση με άλλες Adams το SCLC κλινικά δείγματα.

ADAM-12 είναι εντόνως εκφρασμένο σε πολλές καρκίνους συμπεριλαμβανομένου του καρκίνου του μαστού [12], [14], [26], ο καρκίνος του ήπατος [16], ο καρκίνος του στομάχου [26], [27], καρκίνος του παχέος εντέρου [26] και του καρκίνου του νευρικού συστήματος [28]. Στην παρούσα μελέτη, μονοπαραγοντική και πολυπαραγοντική ανάλυση επιβίωσης έδειξε ότι ADAM-12 είναι πιθανό ένας ανεξάρτητος προγνωστικός παράγοντας δείχνει φτωχότερη επιβίωση σε ασθενείς με SCLC. Αν και ADAM-12 υπερεκφράζεται σε πολλούς όγκους, ADAM-12 ως ειδική διαγνωστικός δείκτης έχει χρησιμοποιηθεί μόνο για τον καρκίνο του μαστού [22].