καρκίνους

Αφηρημένο

Σκοπός

Colon ανεπάρκεια σε αναντιστοιχία επισκευή (MMR) μπορεί να εμφανίζουν μειωμένη έκφραση του γονιδίου επιδιόρθωσης του DNA,

MRE11

, ως συνέπεια της συρρίκνωσης της Τ

11 μονονουκλεοτίδιο οδού. Αυτή η μελέτη διερεύνησε την κατάσταση MRE11 και η σύνδεσή της με την πρόγνωση, την επιβίωση και την απάντηση του φαρμάκου σε ασθενείς με σταδίου ΙΙΙ καρκίνο του παχέος εντέρου.

Ασθενείς και Μέθοδοι

Καρκίνο και του Ομίλου Λευχαιμία Β 89803 (Alliance) με τυχαία επιλογή 1264 ασθενείς με σταδίου ΙΙΙ καρκίνο του παχέος εντέρου σε μετεγχειρητική εφόδου εβδομαδιαία επικουρική 5-φθοριοουρακίλη /λευκοβορίνη (FU /LV) ή ιρινοτεκάνη + FU /LV (IFL), με 8 χρόνια παρακολούθησης. Όγκοι από αυτούς τους ασθενείς αναλύθηκαν για να προσδιοριστεί η σταθερότητα ενός Τ

11 οδού στο

MRE11

γονίδιο. Το πρωτεύον καταληκτικό σημείο ήταν η συνολική επιβίωση (OS), και ένα δευτερεύον καταληκτικό σημείο ήταν η ελεύθερη νόσου επιβίωση (DFS). Μη αναλογικών κινδύνων εξετάστηκαν χρησιμοποιώντας εξαρτώμενη από το χρόνο συμμεταβλητές Cox αναλύσεις.

Αποτελέσματα

625 περιπτώσεις όγκων που εξετάστηκαν, 70 (11,2%) παρουσίασαν συρρίκνωση σε Τ

11 συστήματος σε ένα ή και τα δύο

MRE11

αλληλόμορφα και, συνεπώς, προβλέπεται ότι θα είναι ανεπαρκή σε MRE11 (dMRE11). Σε αναλύσεις συγκεντρωτικά θεραπείας, οι ασθενείς dMRE11 έδειξε αρχικά μειώνεται DFS και OS, αλλά βελτιώνεται μακροπρόθεσμα DFS και OS σε σύγκριση με τους ασθενείς με ανέπαφο MRE11 Τ

11 οδό. Στην υποομάδα των ασθενών dMRE11 θεραπεία με IFL, μια ανεξήγητη πρόωρη αύξηση της θνησιμότητας, αλλά καλύτερη μακροπρόθεσμη DFS από IFL-ασθενείς που έλαβαν pMRE11 παρατηρήθηκε.

Συμπεράσματα

Η ανάλυση αυτού του σχετικά μικρού αριθμού των ασθενών και των γεγονότων έδειξε ότι ο δείκτης dMRE11 προβλέπει καλύτερη ανεξάρτητη πρόγνωση της θεραπείας σε μακροχρόνια. Σε αναλύσεις υποομάδας, οι ασθενείς dMRE11 θεραπεία με ιρινοτεκάνη παρουσίασαν ανεξήγητη βραχυχρόνια θνησιμότητα. κατάσταση MRE11 εύκολα δοκιμάζεται και μπορεί συνεπώς να αποδειχθεί ένας χρήσιμος προγνωστικός δείκτης, με την προϋπόθεση ότι τα αποτελέσματα που αναφέρονται εδώ για ένα σχετικά μικρό αριθμό ασθενών μπορούν να γενικευτούν σε ανεξάρτητες αναλύσεις του μεγαλύτερου αριθμού δειγμάτων.

Trial Registration

ClinicalTrials.gov NCT00003835

Παράθεση: Pavelitz Τ, Renfro L, Foster NR, Caracol Α, Welsch P, Λάος VV, et al. (2014) MRE11-Ανεπάρκεια σχετίζονται με το βελτιωμένο Long-Term Επιβίωση ελεύθερη νόσου και τη συνολική επιβίωση σε μια υποομάδα του τρίτου σταδίου καρκίνου του παχέος εντέρου Οι ασθενείς σε τυχαιοποιημένες CALGB 89803 Δίκη. PLoS ONE 9 (10): e108483. doi: 10.1371 /journal.pone.0108483

Επιμέλεια: Pierlorenzo Pallante, Ινστιτούτο Πειραματικής Ενδοκρινολογίας και Ογκολογίας Γ Salvatore »(IEOS), Ιταλία

Ελήφθη: 26 του Μαρτίου, 2014? Αποδεκτές: 19 Αύγ 2014? Δημοσιεύθηκε: 13 Οκτωβρίου 2014

Copyright: © 2014 Pavelitz et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα:. Η συγγραφείς επιβεβαιώνουν ότι όλα τα δεδομένα που διέπουν τα ευρήματα είναι πλήρως διαθέσιμα χωρίς περιορισμούς. Όλα τα σχετικά δεδομένα είναι εντός του χαρτιού

Χρηματοδότηση:. Η έρευνα ανέφεραν εδώ υποστηρίχθηκε από το Εθνικό Ινστιτούτο Υγείας του Εθνικού Ινστιτούτου Καρκίνου P01 CA077852 (ΔΟΓ, PSR, RJM, NM)? και ΝΙΗ F31 GM073318 και HHMI MedIntoGrad Μελετητής βραβεία (AC). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Καρκίνος του παχέος εντέρου (CRC) είναι η τρίτη πιο κοινή μορφή καρκίνου, και η δεύτερη συνηθέστερη αιτία θανάτου από καρκίνο σχετίζονται στις ΗΠΑ, μετά τον καρκίνο του πνεύμονα [1]. Θα υπάρξει μια κατ ‘εκτίμηση 143.000 νέες περιπτώσεις στις ΗΠΑ το 2013, και πάνω από 51.000 θανάτους λόγω καρκίνου αυτού. Είναι σημαντικό να προσδιοριστούν δείκτες που αναφέρουν την πρόγνωση της νόσου.

Όπως πολλές άλλες μορφές καρκίνου, CRC χαρακτηρίζεται από ελλείψεις σε οδούς επιδιόρθωσης του DNA που μπορούν να επηρεάσουν την εξέλιξη του όγκου, την απάντησή της στην χημειοθεραπεία και την επιβίωση σε βραχυπρόθεσμα και μακροπρόθεσμα [2]. Περίπου το 15% των σποραδικών CRC και τα περισσότερα κληρονομική CRC χαρακτηρίζονται από ανεπάρκεια επιδιόρθωσης αταίριαστων βάσεων (MMR-D), η οποία είναι επίσης κοινά σε άλλους καρκίνους, συμπεριλαμβανομένου του ενδομητρίου και γαστρικών όγκων [3] – [5]. MMR-D CRC αναγνωρίζονται ως ξεχωριστή παθολογική και κλινική υποκατηγορία, με την καλύτερη μακροπρόθεσμη πρόγνωση, αλλά ενδεχομένως περιορισμένη ανταπόκριση με το πρότυπο επικουρική χημειοθεραπεία που αποτελείται από 5-φθοριοουρακίλη (FU) και λευκοβορίνη (LV) [2], [6], [ ,,,0],7].

Ελλιπή MMR ανυψώνει την σωματική ρυθμός μετάλλαξης και αποσταθεροποιεί απλή ακολουθία επαναλαμβάνεται, ή μικροδορυφόρων, η οποία με τη σειρά της μπορεί να επηρεάσει την αλληλουχία του γονιδίου και γονιδιακών λειτουργιών [8]. Ελλιπή MMR θα μπορούσαν να επηρεάσουν την πρόγνωση, άμεσα ή έμμεσα, με μεταβολή της λειτουργίας του άλλου γονιδίου ή γονιδίων. Μια συνέπεια της ανεπαρκούς MMR είναι συστολή του Τ

11 οδού στο ιντρόνιο 4 του

MRE11

γονίδιο, το οποίο είναι εμφανές σε πάνω από το 60% της MMR-D CRC [9] – [11]. Το T

11 πολυπυριμιδινικής οδού προάγει το σχηματισμό σχοινί με θηλειά στο μάτισμα του εξονίου 4 στο εξόνιο 5 της μεταγραφής MRE11. Συστολή της εν λόγω οδού εξασθενίζει ματίσματος, με αποτέλεσμα το εξόνιο παρακάμπτοντας και τη σύνθεση ενός mRNA που φέρει ένα κωδικόνιο στοπ out-of-πλαισίου. Αυτό το mRNA κωδικοποιεί ένα περικομμένο πολυπεπτίδιο MRE11, με δυνητικά κυρίαρχη αρνητική επίδραση στη λειτουργία της κανονικής πρωτεΐνης [12]. Το καθεστώς του

MRE11

Τ

11 σωλήνα μπορεί εύκολα να προσδιοριστεί από την τυπική κλινική δοκιμασία που χρησιμοποιήθηκε για να καθοριστεί το καθεστώς MMR με βάση την αστάθεια των ουδέτερων δεικτών μικροδορυφορικού [13].

MRE11- ανεπάρκεια μπορεί να επηρεάσουν τόσο κλωνική εξέλιξη εντός ενός όγκου, καθώς και θεραπευτική ανταπόκριση. MRE11 σχηματίζει ένα συστατικό του εντόνως διατηρημένη MRE11 σύμπλοκο /RAD50, η οποία είναι απαραίτητη για το DNA διπλό σκέλος επισκευή διακοπή που προκαλείται από τόσο ομόλογο ανασυνδυασμό και μη ομόλογες άκρο συναρμογής, για τη συντήρηση του τελομερούς, και για τη σηματοδότηση σε απόκριση σε βλάβη του DNA [14 ] – [18]. MRE11 μπορεί ιδίως να επηρεάζουν την απάντηση για την τοποϊσομεράση 1 δηλητήρια, τα οποία λειτουργούν με την παγίδευση του συνήθως παροδική ομοιοπολικό δεσμό που τοποϊσομεράση 1 φόρμες με DNA για να χαλαρώσετε supercoiling. Αυτή η κατηγορία φαρμάκων περιλαμβάνει τη φυσική ένωση καμπτοθεκίνης, και τα παράγωγα της ιρινοτεκάνη και τοποτεκάνη. MRE11 είναι εντόνως διατηρημένη, και γενετική ανάλυση στο ζυμομύκητα,

S. cerevisiae

, έχει δείξει ότι MRE11 ανεπάρκεια προκαλεί ακραία ευαισθησία σε καμπτοθεκίνη [19]. In vitro, καθαρισμένη ανασυνδυασμένη MRE11 /RAD50 μπορεί να διασπάσει τον δεσμό τυροσυλ-DNA σχηματίζεται με ομοιοπολική τοποϊσομεράσης 1 και εκτομή του άκρου του DNA για την επισκευή [20]. Επιπλέον, μια περιορισμένη μελέτη των πέντε κυτταρικών σειρών CRC διαπίστωσε ότι εκείνοι που ήταν MRE11 /RAD50 ανεπάρκεια ήταν πιο ευαίσθητα σε ιρινοτεκάνη [21], αλλά δεν διαπιστώσει αν ιρινοτεκάνη αντίσταση θα μπορούσε να αποκατασταθεί με τη συμπλήρωση του MRE11 /RAD50-ανεπάρκειας /.

Οι παρατηρήσεις συνοψίζονται παραπάνω οδηγούν σε δύο υποθέσεις. Πρώτον, MRE11 ανεπάρκεια μπορεί να είναι ένας χρήσιμος δείκτης για την πρόγνωση του όγκου? και το δεύτερο, ότι MRE11 ανεπάρκεια (dMRE11) όγκοι μπορεί να ανταποκρίνονται καλύτερα στη θεραπεία με τοποϊσομεράσης 1 δηλητήρια από MRE11-καλά (pMRE11) όγκους. Οι δυνατότητες αυτές είχαν ιδιαίτερο ενδιαφέρον λόγω της ετοιμότητας με την οποία το καθεστώς MRE11 μπορούν να προσδιοριστούν κατά τη διάρκεια τυπική κλινική μοριακό προφίλ [13].

Η χρησιμότητα των ιρινοτεκάνη έχει αξιολογηθεί για την επικουρική θεραπεία του σταδίου III CRC σε δύο βραχίονα καρκίνο και λευχαιμία Ομάδα Β (CALGB) 89803 κλινική δοκιμή, η οποία σε σύγκριση με DFS και OS σε ασθενείς που έλαβαν θεραπεία με FU /LV μόνο του ή σε συνδυασμό με ιρινοτεκάνη. Καμία διαφορά στο λειτουργικό σύστημα ή DFS αναφέρθηκε σε γενικές γραμμές, αλλά οι ασθενείς με όγκους MMR-D παρουσίασαν κάπως βελτιωθεί και να επεκταθεί DFS εάν η θεραπεία που περιλαμβάνονται ιρινοτεκάνη [22]. Ως εκ τούτου, η δίκη αυτή παρέχεται πληροφοριακό δείγματα για εξέταση του ζητήματος από το αν το καθεστώς MRE11 συσχετίζονται με DFS, OS, ή με την απάντηση σε ιρινοτεκάνη. Προκειμένου να διαπιστωθεί αν το καθεστώς MRE11 προβλέπει DFS, OS, ή απάντηση σε IFL, αναλύσαμε την κατάσταση MRE11 σε 625 δείγματα όγκων από τους ασθενείς στην κλινική δοκιμή CALGB 89803, τόσο συνολικά όσο και με αγωγή με θεραπεία FU /LV με ή χωρίς ιρινοτεκάνη, ενώ αντιπροσωπεύοντας το δυναμικό των σχέσεων με τα άλλα χαρακτηριστικά των ασθενών, συμπεριλαμβανομένων MMR

Υλικά και Μέθοδοι

Το πρωτόκολλο για αυτή τη δοκιμή και την υποστήριξη κατάλογος CONSORT είναι διαθέσιμα ως υποστηρικτικές πληροφορίες.? βλέπε πρωτόκολλο S1 και πίνακας ελέγχου S1.

πληθυσμός Μελέτη

Οι ασθενείς σε αυτή τη μελέτη οι συμμετέχοντες στην NCI-χορηγία καρκίνο και λευχαιμία Ομάδα Β (CALGB) επικουρική δοκιμαστική θεραπεία για το στάδιο ΙΙΙ καρκίνο του παχέος εντέρου συγκρίνοντας θεραπεία με το εβδομαδιαίο σχήμα Roswell Park του 5-φθοριοουρακίλη (FU) και λευκοβορίνη (FU /LV) με το εβδομαδιαίο σχήμα βλωμού της ιρινοτεκάνης, FU, και λευκοβορίνη (CALGB 89803? [23]). Συνολικά 1264 ασθενείς είχαν προσληφθεί από τον Απρίλιο του 1999, και τον Απρίλιο του 2001. Όλοι οι ασθενείς υποβλήθηκαν σε πλήρη χειρουργική εκτομή και άρχισε χημειοθεραπεία μεταξύ μετεγχειρητικές ημέρες 21 έως 56. Οι ασθενείς τυχαιοποιήθηκαν από υπολογιστή σε δύο σκέλη θεραπείας, 629 ασθενείς με FU συν LV και 635 ασθενείς με την ιρινοτεκάνη συν FU συν LV (Σχήμα 1). Το κύριο καταληκτικό σημείο της μελέτης ήταν η συνολική επιβίωση (OS). Ελεύθερη νόσου επιβίωση (DFS) ήταν ένα δευτερεύον καταληκτικό σημείο. Συνέχεια συνελήφθη τον Μάρτιο του 2008.

Περίγραμμα CALGB 89803 τυχαιοποιημένη μελέτη που δημιουργούνται τα 625 δείγματα που ελέγχθηκαν.

Η

Δήλωση Ηθικής

Η μελέτη ήταν εγκρίθηκαν από το Διοικητικό κριτική Mayo Clinic θεσμικές και την Κεντρική Καρκίνος Ομάδα Θεραπεία Βορρά (τώρα μέρος της Συμμαχίας για τις κλινικές δοκιμές στην Ογκολογία). πρωτόκολλο CALGB 89803 εξετάστηκε από την επιτροπή δεοντολογίας του κάθε συμμετέχοντος κέντρου. Όλοι οι ασθενείς έδωσαν γραπτή συγκατάθεση πριν από τη συμμετοχή.

δομή Δίκη και την οργάνωση

Αυτή η δίκη διεξήχθη από CALGB με τη συμμετοχή από την κεντρική ομάδα θεραπεία του καρκίνου του Βορρά, του National Cancer Institute of Canada Clinical Trials Group, Eastern Cooperative Oncology Group, Southwest Oncology Group, και η Μονάδα υποστήριξης Δοκιμές Καρκίνος Εθνικό Ινστιτούτο Καρκίνου. Το πρωτόκολλο και ο κατάλογος των συμμετεχόντων περιοχές είναι διαθέσιμα ως συμπληρωματική πληροφορία. Το διοικητικό συμβούλιο παρακολούθησης της ασφάλειας των δεδομένων CALGB επανεξεταστεί δεδομένων ασφάλειας δύο φορές το χρόνο και τα δεδομένα αποτελεσματικότητας κατά διαστήματα το πρωτόκολλο που ορίζεται σύμφωνα με τις πολιτικές CALGB. Η CALGB Στατιστική Κέντρο του Πανεπιστημίου Duke στο Durham, NC, διατήρησε την κλινική και εργαστηριακή βάση δεδομένων.

Θεραπεία

Μετά την κεντρική καταχώριση, είναι επιλέξιμες οι ασθενείς τυχαιοποιήθηκαν (από τον υπολογιστή, χρησιμοποιώντας μια τυχαιοποιημένη σταθερού μπλοκ σχεδιασμού) για να λάβετε FU /LV ή FU /LV σε συνδυασμό με ιρινοτεκάνη (IFL). Η θεραπεία έχει περιγραφεί προηγουμένως λεπτομερώς [24]. Εν συντομία, η ομάδα FU /LV έλαβαν το δοσολογικό σχήμα Roswell Park, που αποτελείται από εβδομαδιαίες LV 500 mg /m

2 ενδοφλεβίως σε διάστημα 2 ωρών, με ένα εφ ‘άπαξ FU 500 mg /m

2 με ενδοφλέβια ένεση 1 ώρα μετά την έναρξη της LV, για 6 συνεχόμενες εβδομάδες, ακολουθούμενη από ένα υπόλοιπο 2 εβδομάδων, για τέσσερις κύκλους (32 εβδομάδες). Η ομάδα IFL έλαβε εβδομαδιαία ιρινοτεκάνη 125 mg /m

2 άνω των 90 λεπτών, που ακολουθείται αμέσως από ενδοφλέβιες ενέσεις εφόδου της LV 20 mg /m

2, τότε FU 500 mg /m

2, για 4 συνεχόμενες εβδομάδες, ακολουθούμενη με υπόλοιπο 2 εβδομάδων, για πέντε κύκλους (30 εβδομάδες).

DNA εξόρυξη

το DNA που εξάγεται από αρχειοθετούνται ιστό του όγκου παραφίνη-ενσωματωμένες φορμόλη καθορίζεται από επώαση η παραφίνη εξάγεται, ενυδατωμένοι ιστού σε 50 mM Tris HCl (ρΗ 8,5) με 0,5% Tween 20 και 20 mg /ml πρωτεϊνάσης Κ επί 3 ώρες στους 55 ° C? ή με επώαση του ιστού σε Instagene (BioRad, Hercules, CA) και 30 mg /ml πρωτεϊνάσης Κ επί 3 ώρες στους 55 ° C. Μετά την επώαση, το δείγμα στη συνέχεια επωάστηκε στους 95 ° C για 9 λεπτά, στροβιλίστηκαν για λίγο, και στη συνέχεια υποβάλλεται σε φυγοκέντρηση για να ιζηματοποιηθούν τα αχώνευτος υλικό ή το Instagene, αντίστοιχα. Το εκχυλισμένο DNA κατόπιν δειγματίστηκε και φυλάχθηκε στους -20 ° C μέχρι να χρειαστούν για τις δοκιμασίες που βασίζονται στην PCR.

Προσδιορισμός

MRE11

και

RAD50

μήκη μονονουκλεοτίδιο οδού

μήκος μονονουκλεοτίδιο οδού προσδιορίσθηκε με PCR ενίσχυση και ανάλυση αλληλουχίας του DNA, χρησιμοποιώντας μια καθιερωμένη προσέγγιση που χρησιμοποιείται ευρέως για τον χαρακτηρισμό της ετερογένειας στην οδούς μονονουκλεοτίδιο χαρακτηριστικό του MMR με ανεπάρκεια του παχέος εντέρου, του στομάχου και του ενδομητρίου όγκων, και όχι εμφανής σε φυσιολογικό ιστό ή MMR δείγματα -proficient όγκου (π.χ. [9] – [11], [25]). Η δοκιμασία περιλαμβάνει την ενίσχυση PCR της περιοχής που φέρει μονονουκλεοτίδιο σωλήνα, που ακολουθείται από ανάλυση αλληλουχίας DNA. Η ίδια απλή διαδικασία χρησιμοποιείται για την εκτίμηση της αστάθειας μικροδορυφορικού διαγνωστικών της αναντιστοιχίας ανεπάρκεια επισκευής.

Ένα σύνολο 625 δειγμάτων που παράγεται DNA κατάλληλο για την ανάλυση της περιοχής του

MRE11

ιντρόνιο 4 που περιέχει το Τ

11 οδού, 320 από την /βραχίονα μελέτη FU LV και 305 από το βραχίονα IFL (Σχήμα 1).

Nested PCR εκκινητές χρησιμοποιήθηκαν για να ενισχυθεί μια περιοχή που περιέχει το μονονουκλεοτίδιο οδό ενδιαφέροντος σε MRE11 ιντρόνιο 4. MRE11 ενίσχυση ήταν με πρώτο γύρο εκκινητές, MRE11 × 1F, 5′-GTGGTCATATGCCAATGTAGATTATGC-3 ‘, και MRE11 × 1 R, 5′-CCCTGTGGGATCGTCATGATTGCC-3′, παρήγαγε ένα προϊόν 211 bp? και με δεύτερο γύρο εκκινητές, MRE11 × 2F, 5’-GGAGGAGAATCTTAGGGAAAACAGC-3 ‘, και MRE11 × 2R, 5′-GATTGCCATGAATACTAAACACTGG-3’, παρήγαγε ένα προϊόν 139 bp. MRE11 αλληλουχήθηκε τόσο προς τα εμπρός και να αντιστρέψει τις κατευθύνσεις με το δεύτερο γύρο εκκινητών PCR.

Κατάσταση RAD50 προσδιορίστηκε για 34 CRCs με συσπάσεις στο

MRE11

. Η ενίσχυση ήταν με τον πρώτο γύρο εκκινητές R50 × 1F, 5′-CTCCCAGTTCATTACTCAGC-3 ‘, και R50 × 1 R, 5′-GACAGGGCATACCAGCT-3′, παρήγαγε ένα προϊόν 326 bp? και με το δεύτερο γύρο εκκινητές R50 × 2F, 5’-GCTAACAGACGAAAACCAG-3 ‘, και R50 × 2R, 5′-CATACCAGCTCAGAGTCC-3′, παρήγαγε ένα προϊόν 301 bp. RAD50 αλληλουχήθηκε σε αντίστροφο προσανατολισμό με τον εκκινητή 5’-CATACCAGCTCAGAGTCC-3 ‘.

κατάσταση MRE11 και το καθεστώς RAD50 προσδιορίστηκαν με οπτική επιθεώρηση χαράξεις από αυτοματοποιημένη αλληλούχιση τόσο στην κατεύθυνση προς τα εμπρός και αντίστροφη από τους ερευνητές γνώριζαν την κατάσταση MMR , η οποία είχε προσδιοριστεί ανεξάρτητα [22], [26]. Τα αποτελέσματα παρουσιάζονται στους Πίνακες 1 και 2.

Η

Προσδιορισμός του MMR κατάσταση

MMR κατάσταση των δειγμάτων όγκου είχε προηγουμένως καθοριστεί από την IHC, συμπληρώνεται σε ορισμένες περιπτώσεις, από την ανάλυση των μικροδορυφορικών σταθερότητα με τη χρήση των δεικτών του πίνακα Bethesda [22], [26]. MMR κατάσταση ενός υποσυνόλου δειγμάτων επιβεβαιώθηκε ανεξάρτητα με τυφλό ανάλυση με PCR ενίσχυση και ανάλυση αλληλουχίας 5 μικροδορυφορικών δεικτών (Promega, Madison, WI). Τα δείγματα ταξινομήθηκαν ως MMR-D εάν 3 ή περισσότερους δείκτες παρουσίασαν αστάθεια.

Στατιστικές μέθοδοι

Ο στόχος αυτής της μελέτης ήταν να καθορίσει αν το καθεστώς MRE11 όγκου συνδεόταν με την έκβαση για ασθενείς με σταδίου ΙΙΙ καρκίνο του παχέος εντέρου αγωγή είτε με FU /LV μόνο του ή σε συνδυασμό με ιρινοτεκάνη. Οι κοινές πρωτεύοντα καταληκτικά σημεία ήταν OS, το οποίο μετράται από την είσοδο στην κλινική δοκιμή μέχρι θανάτου από οποιαδήποτε αιτία? και DFS, το οποίο μετράται από την έναρξη της μελέτης έως ότου αποδειχθεί η εξέλιξη της νόσου ή θανάτου από οποιαδήποτε αιτία. OS και διανομές DFS εκτιμήθηκαν συνολικά και στις κατηγορίες που ορίζονται από MRE11 και θεραπεία, χρησιμοποιώντας μεθοδολογία Kaplan-Meier. Οι διαφορές στο λειτουργικό σύστημα και DFS μεταξύ των ομάδων εξετάστηκαν χρησιμοποιώντας το τεστ log-rank. Τα αποτελέσματα της MRE11 σε OS και DFS αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας αναλογικών κινδύνων κατά Cox μοντέλα. Όταν η Cox υπόθεση αναλογικών κινδύνων ήταν σημαντικά παραβιάζονται σύμφωνα με τη μέθοδο του Grambsch και Therneau [27], οι συντελεστές χρονικά μεταβαλλόμενο εισήχθησαν μέσω αυτοματοποιημένων επιλογή ενός ή περισσότερων σημεία αποκοπής πάνω στον άξονα του χρόνου, η οποία με τη σειρά της ικανοποίησε βέλτιστα την υπόθεση αναλογικών κινδύνων σε μια μόδα τμηματικά [28]. Η πιθανή προβλεπτική ικανότητα των MRE11 εξερευνήθηκε μέσω αμφίδρομης αλληλεπίδρασης με το χέρι θεραπείας, και μέσω της μερικής αλληλεπιδράσεις όταν η επίδραση της MRE11 διαμορφώθηκε ως εξαρτώμενη από το χρόνο. Αλληλεπιδράσεις που ήταν και οι δύο στατιστικά σημαντική (p & lt? 0,01) και ερμηνεύσιμη κλινική συσχέτιση ήταν υποχρεωμένοι να συνάπτουν ουσιαστικές προβλεπτική ικανότητα των MRE11. μοντέλα πολυμεταβλητών Cox χρησιμοποιήθηκαν για να μελετηθεί το αποτέλεσμα MRE11 ενώ ελέγχεται για τη θεραπεία και κλινικοπαθολογική παράγοντες όπως η ηλικία, το φύλο, την τοποθεσία του όγκου, κατάσταση συμπεριφοράς, τον αριθμό των θετικών λεμφαδένων, το στάδιο του όγκου, και βαθμού όγκου. Πιθανές αλληλεπιδράσεις MRE11 με και προσαρμογές με MMR, KRAS και BRAF επίσης διερευνηθεί. Για τους σκοπούς της παρούσας ανάλυσης, παρακολούθησης περιορίστηκε σε 8 χρόνια. Όλες οι στατιστικές αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν από τους στατιστικολόγους της Συμμαχίας.

Αποτελέσματα

Προσδιορισμός των MRE11 κατάσταση

όγκων DNA κατάλληλο για ενίσχυση PCR εξήχθη από ένα σύνολο 625 CRC δείγματα, 320 από ο /LV ομάδα FU και 305 από την ομάδα ILV (Consort Διάγραμμα, Εικόνα 1). Τα 625 δείγματα αντιπροσωπεύουν το 49% των 1264 ασθενών που συμμετείχαν στις CALGB 89803 [23]. Η περιοχή του

MRE11

ιντρόνιο 4 που περιέχει το Τ

11 οδού ενισχύθηκε και προσδιορίστηκε η αλληλουχία (Σχήμα 2Α), χρησιμοποιώντας μια καθιερωμένη δοκιμασία (π.χ. [9] – [11], [25]). Παραδείγματα δείχνουν ακολουθίες από ένα δείγμα ελέγχου με ομοιόμορφο Τ

11 εκτάσεις στα δύο αλληλόμορφα, και δειγμάτων στα οποία και τα δύο αλληλόμορφα πραγματοποιείται 10 nt εκτάσεις, ή εκτάσεις που κυμαίνονται από 10-11 ή 9-11 nt (Σχήμα 2Β). μήκος Tract ετερογένεια δεν ήταν ένα PCR ή αλληλούχιση τεχνουργήματος, καθώς το μήκος ετερογένεια δεν ήταν εμφανής σε DNA από τα φυσιολογικά κύτταρα, και είναι πανομοιότυπα μήκη συστήματος ήταν συμπεραίνεται από καθορισμό αλληλουχίας ενός μοναδικού δείγματος και στις δύο κατευθύνσεις (δεν φαίνεται). Ετερογένεια θα μπορούσε να αντανακλά την παρουσία πολλαπλών υπο-πληθυσμοί κλώνων εντός του όγκου.

(Α) Διάγραμμα της

MRE11

εσώνιο 4 /εξόνιο 5 διασταύρωση, που δείχνει την Τ

11 συστήματος σε ιντρόνιο 4, πλευρική αλληλουχία και εναύσματα. Συστολή του Τ

11 σωλήνα παρεμποδίζει το στάδιο σχηματισμού lariat σε ματίσματος mRNA και οδηγεί σε παράκαμψη του εξωνίου 5. Το προκύπτον μεταλλαγμένο mRNA κωδικοποιεί ένα περικομμένο πολυπεπτίδιο MRE11 με δυνητικά κυρίαρχη αρνητική επίδραση επί της λειτουργίας των πρωτεϊνών [12]. MRE11 είναι απαραίτητη για τη βιωσιμότητα του κυττάρου, και η

MRE11

μεταλλάξεις που συμβαίνουν σε MMR-D CRC δεν είναι null αλληλόμορφα αλλά μειώνουν την έκφραση και δράση της πρωτεΐνης MRE11. ίχνη (Β) Ακολουθία της περιοχής του

MRE11

ιντρόνιο 4 που φέρει την Τ

11 σωλήνα σε τέσσερα δείγματα όγκων. Μήκη των εκτάσεων στο nt που φαίνεται στα αριστερά

Η

Θήκες βαθμολογήθηκαν με βάση τον αριθμό των νουκλεοτιδίων που χάνεται από συστολή:. Ένα 11 nt σωλήνα βαθμολογήθηκε με 0? ένα 10-11 nt οδού ως 1? εκτάσεις 9-11 nt ως 2? και εκτάσεις 10 nt (λόγω της απώλειας 1 nt σε κάθε αλλήλιο) ως 2. Ένα σύνολο 555 περιπτώσεις (89%) πραγματοποιείται ένα ακέραιο Τ

11 οδού (βαθμός 0)? ενώ 70 περιπτώσεις (11%) είχαν συστολές 1-6 nt σε μήκος (1 nt, η = 36? 2 nt, n = 26? 3 nt, η = 6? 4 nt, η = 1? και 6 nt, n = 1). Η συνολική συχνότητα

MRE11

T

11 συσπάσεις ήταν 11%, συγκρίσιμη ότι αναφερθεί σε άλλες αναλύσεις δειγμάτων CRC [9] – [11], [25]. Περίπου ίσοι αριθμοί των περιπτώσεων παρουσίασαν συσπάσεις 1 nt (36 περιπτώσεις, 5,8%) ή 2 ή περισσότερα nt (34 περιπτώσεις, 5,8%). Λόγω της ανισορροπίας των περιπτώσεων χωρίς συστολές έναντι κάθε συστολή, και το μικρό αριθμό των περιπτώσεων σε κάθε κατηγορία συστολή, ορίσαμε μια διχοτομική

MRE11

T μεταβλητή

11 σωλήνα: υπάρχουν συσπάσεις ή MRE11 καλά (pMRE11 , 555 περιπτώσεις) σε σχέση με οποιαδήποτε συρρίκνωση ή MRE11 ανεπάρκεια (dMRE11, 70 περιπτώσεις). Χρησιμοποιώντας αυτό το διαχωρίστηκαν μεταξύ τους κατάταξη,

MRE11

Τ

11 οδού κατάσταση συστολής βρέθηκε να σχετίζεται σημαντικά με την περιοχή του όγκου, η ιστολογική βαθμό, MMR κατάσταση, και BRAF, KRAS, και την κατάσταση μετάλλαξης Ρ53 (Πίνακας 2).

Προσδιορισμός του RAD50 κατάσταση

σε ορισμένα MMR-D CRC, ένα εξονικό A

9 οδού στο

RAD50

γονίδιο αποσταθεροποιηθεί, προκαλώντας μια μετάλλαξη μετατόπισης πλαισίου και τη σύνθεση μιας κομμένης πρωτεΐνης [29]. Σε μια διερευνητική ανάλυση, αποφασίσαμε αυτή τη συχνότητα μεταξύ ΟΝΑ όγκων που προέρχονται από 34 CRCs με συσπάσεις στο

MRE11

(18 περιπτώσεις με τα αποτελέσματα MRE11 1, και 16, με τα αποτελέσματα του 2). Η

RAD50

A

9 οδού ήταν ασταθής σε 11/34 περιπτώσεις (3 με σκορ MRE11 των 1, 8 και με τα αποτελέσματα του 2) ή το 32% του ΚΕΣ αναλύονται, παρόμοια με τη συχνότητα των 40% έχουν αναφερθεί στο παρελθόν [11].

Προσδιορισμός του MMR κατάσταση

MMR κατάσταση όλων των δειγμάτων CALGB 89.803 είχαν προηγουμένως καθοριστεί από την IHC, γονιδιωματικής αλληλουχίας με τους δείκτες του πίνακα Bethesda, ή και τα δύο [26]. Η ανάλυση που ταξινομούνται MMR ως ακέραια (MMR-I) στο 86% των δειγμάτων, καθώς και ανεπάρκεια (MMR-D) σε 14% (Πίνακας 1). Αστάθεια του

MRE11

Τ

11 σωλήνα συνδέθηκε έντονα με τον τρόπο αυτό την ανεπάρκεια MMR καθορίζεται: 79% των dMRE11 CRCs ήταν MMR-D, και 21% MMR-I (δοκιμή chi-τετράγωνο, σ & lt? 0,0001 ?. πίνακα 2)

σε μια διερευνητική ανάλυση, το καθεστώς MMR ήταν ξεχωριστά προσδιορίζονται με PCR και αλληλούχιση του Πανεπιστημίου της Ουάσιγκτον (UW) κλινικές διαγνωστικές εγκατάσταση, τη χρήση αποκλειστικά εμπορικών εκκινητές (Promega) που ανακρίνουν διαφορετικά ουδέτερο και μη -πολυμορφική δείκτες από τους δείκτες του πίνακα Bethesda. Ένα σύνολο 83 CRCs αναλύθηκαν, περιλαμβανομένων 63 από τα δείγματα 70 dMRE11. Από αυτούς, το 50 CRC ταξινομήθηκαν ως MMR-D από CALGB και 56 από το UW (chi-τετράγωνο τεστ, σ & lt? 0.0001).

Η αστάθεια στο

MRE11

Τ

11 σωλήνα και το

RAD50

A

9 οδού προβλέπεται να συσχετίζονται με MMR-D. Για να πάρετε μια αίσθηση του κατά πόσον οι διάφορες δοκιμασίες που χρησιμοποιούνται από CALGB και UW μπορεί να υπερ-καταμέτρηση ή υπο-μετράνε όγκους MMR-D, ρωτήσαμε αν η 9 CRC ταξινομούνται ως MMR-Ι από τους προσδιορισμούς CALGB αλλά ως MMR-D από το UW δοκιμασία ήταν dMRE11 ή pMRE11. Όλα αυτά ήταν dMRE11, και δύο από αυτούς ήταν επίσης dRAD50. Αυτό αυξάνει την πιθανότητα ότι το

MRE11

Τ

11 σωλήνα μπορεί να χρήσιμο περιλαμβάνεται μεταξύ των δεικτών για τον προσδιορισμό της κατάστασης MMR.

κατάσταση του όγκου MRE11 είναι σημαντικά προγνωστικές για DFS και OS

Η σχέση μεταξύ της κατάστασης MRE11 και DFS και OS προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας δεδομένα που συλλαμβάνονται από τις 10 Μαρτίου 2008 αντιπροσωπεύει μια μέση παρακολούθηση της & gt? 6,0 χρόνια. Η μονοπαραγοντική ανάλυση της OS και DFS που βασίζεται αποκλειστικά στην MRE11 κατάσταση των 625 CRCs προσδιορίστηκαν, ανεξάρτητα από χημειοθεραπευτική αγωγή, έδειξε ότι οι ασθενείς dMRE11 δεν παρουσίασε σημαντική βελτίωση στο λειτουργικό σύστημα (HR 0,98? 95% CI, 0,64 έως 1,51) ή DFS (HR 0,80? 95% CI, 0,52 έως 1.21) σε σχέση με τους ασθενείς pMRE11. Ωστόσο, Kaplan-Meier οικόπεδα του OS και DFS από το καθεστώς MRE11 (Σχήμα 3) αποκάλυψε μια πιθανή παραβίαση της υπόθεσης των αναλογικών κινδύνων, με τις δύο καμπύλες που διέρχονται κατά τη διάρκεια της περιόδου παρακολούθησης για κάθε παράμετρο. Μη αναλογικότητας από στατιστικά στοιχεία, με την μηδενική υπόθεση των αναλογικών κινδύνων απέρριψε τόσο για DFS (p = 0,0038) και OS (p = 0,0005)

(Α) Επιβίωση ελεύθερη νόσου για dMRE11 (n = 70.? εκδηλώσεις = 24)? ποσοστό 5-yr: 67% (95% CI: 56-79%) έναντι pMRE11 (n = 555? εκδηλώσεις = 240)? ποσοστό 5-yr: 59% (95% CI: 55-63%). (Β) Η συνολική επιβίωση για dMRE11 (n = = 70? Εκδηλώσεις = 23)? ποσοστό 5-yr: 68% (95% CI: 58-80%) έναντι pMRE11 (n = 555? εκδηλώσεις = 194)? ποσοστό 5-yr: 71% (95% CI: 67-75%).

Η

Για να επιλύσετε αυτό παραβίαση των υποθέσεων μοντελοποίησης Cox, μια τμηματικά αναλογικό μοντέλο κινδύνου κατασκευάστηκε για κάθε παράμετρο (DFS και OS), με αποτέλεσμα εξαρτάται από το χρόνο συντελεστών (HR) για την κατάσταση MRE11, ως ακολούθως. Πρώτον, ένα αυτοματοποιημένο αλγόριθμο αναζήτηση μέσω ενός πλέγματος των χρονικών σημείων {t

1 = 0,1 χρόνια, t

2 = 0,2 χρόνια, …, t

79 = 7.9 χρόνος} χρησιμοποιήθηκε για τον προσδιορισμό του σημείο αποκοπής t * για τις οποίες η αναλογική παραδοχή κίνδυνοι ήταν βέλτιστο ικανοποιημένος εκατέρωθεν του σημείο αποκοπής? Συγκεκριμένα, t * ορίζεται ως η τιμή του t αποδίδοντας το μεγαλύτερο μεγιστοποίηση καταγραφής μερική πιθανότητα ανάμεσα σε μοντέλα Cox περιέχει ξεχωριστές επιδράσεις MRE11 (HR) για τα δύο χρονικά διαστήματα που ορίζονται από το t. Τμηματικά αναλογικότητας στη συνέχεια δοκιμάστηκε και επιβεβαιώθηκε στα τελικά μοντέλα για το OS και DFS, την παραγωγή των τελικών (μονοδιάστατες) μοντέλα για MRE11. Τα ίδια σημεία αποκοπής και οι συντελεστές του χρόνου που εξαρτώνται χρησιμοποιήθηκαν σε μεταγενέστερες αλληλεπίδραση και πολυμεταβλητή μοντέλα Cox.

Η βέλτιστη cut-σημείο που αναφέρεται για το OS ήταν 3,4 χρόνια. Πριν από 3,4 χρόνια, οι ασθενείς dMRE11 βιώνουν πολύ χειρότερες OS σε σχέση με τους ασθενείς pMRE11 (HR = 10,95, 95% CI: 6,83 – 17,55, p & lt? 0,0001), ενώ μετά από 3,4 χρόνια dMRE11 συνδέεται με βελτιωμένη OS (HR = 0,09, 95% CI: 0,02 και 0,37 p = 0,0008), ανεξάρτητα από βραχίονα θεραπείας. Η περικοπή-σημείο που αναφέρεται για την DFS ήταν 3,3 χρόνια. Πριν από 3,3 χρόνια, dMRE11 συνδέθηκε με χειρότερα αποτελέσματα (HR = 7,02, 95% CI: 4,49 – 10,99, p & lt? 0,0001), ενώ μετά από 3,3 χρόνια DFS είναι βελτιωμένη σε σχέση με τους ασθενείς pMRE11 (HR = 0,07, 95% CI: 0,02 έως 0.30, ρ = 0.0002). κατάσταση MRE11 παρέμεινε σημαντική συνολική όταν ρυθμιστεί για κλινικές μεταβλητές /όγκου (ηλικία, φύλο, αριθμός θετικούς λεμφαδένες, το στάδιο του όγκου, το βαθμό και το site του πρωτογενούς όγκου).

Σε σχέση με άλλους βιοδείκτες ασθενή, MRE11 είναι από κοινού σημαντικά σε πολυπαραγοντική μοντέλα με KRAS (OS και DFS), BRAF (OS και DFS), και την κατάσταση μετάλλαξης Ρ53 (OS μόνο). Επιπλέον, MRE11 παραμένει ένα σημαντικό προγνωστικό παράγοντα τόσο για OS (p & lt? 0.0001) και DFS (p & lt? 0,0001) μετά την προσαρμογή για MMR, ενώ MMR δεν είναι σημαντική σε αυτά τα μοντέλα (DFS p = 0,799? OS p = 0,647). Δεν παρατηρήθηκαν σημαντικές αλληλεπιδράσεις μεταξύ MRE11 και βιοδείκτες.

Η μονοπαραγοντική ανάλυση για την κατάσταση RAD50 δεν έδειξε σημαντική σχέση με το OS ή DFS. μοντέλα συμμεταβλητή προσαρμοσμένο για RAD50 δεν πραγματοποιήθηκαν λόγω του περιορισμένου μεγέθους του δείγματος (n = 34) και μικρός αριθμός των γεγονότων.

Η αξιολόγηση της κατάστασης MRE11 όγκου ως προγνωστική του οφέλους από IFL και FU /LV

κατάσταση MRE11 αξιολογήθηκε ως δυνητικό όφελος προγνωστικός δείκτης από IFL μέσω μερικής αλληλεπιδράσεις με την αγωγή, τμηματικά Cox (μη αναλογικών κινδύνων) μοντέλα για την DFS και OS. Οι Kaplan-Meier οικόπεδα για την επίδραση MRE11 που παρουσίασε σκέλος θεραπείας στην εικόνα 4Α, ενώ τα οικόπεδα για την αντίστοιχη επίδραση της θεραπείας παρουσίασε η κατάσταση MRE11 στην Εικόνα 4Β. Ενώ ορισμένες διαφορές στην επίδραση της θεραπείας ανάλογα με την κατάσταση MRE11 είναι εμφανή, η αλληλεπίδραση θεραπεία-by-MRE11 δεν ήταν σημαντική είτε τελικό σημείο. Μεταξύ των ασθενών ιρινοτεκάνη-αγωγή (Εικόνα 4Α, δεξιά), ωστόσο, οι ασθενείς dMRE11 παρουσίασαν χειρότερη DFS από τους ασθενείς pMRE11 κατά το πρώτο έτος της παρακολούθησης (με βάση ένα υποσύνολο-επιλεγμένο cut-σημείο? P & lt? 0,0001), αλλά βελτιωμένα αποτελέσματα στη συνέχεια (ρ = 0.004). Ομοίως, οι ασθενείς dMRE11 είχαν αυξημένο κίνδυνο θανάτου για τα πρώτα 3,5 χρόνια της παρακολούθησης σε σχέση με τους ασθενείς pMRE11 (p & lt? 0,0001), και μειωμένο κίνδυνο μετέπειτα (p = 0,011). Αυτές οι σχέσεις παρέμειναν σημαντικές όταν προσαρμοστεί για την ηλικία, το φύλο, κομβικών κατάσταση, το στάδιο του όγκου, το βαθμό, και θέση του πρωτογενούς όγκου, αλλά αυτή η ανάλυση υποομάδας μεταξύ των ασθενών IFL-θεραπεία θα πρέπει να θεωρούνται ως διερευνητικές δεδομένου του μικρού μεγέθους του δείγματος και μη σημαντικότητας των επεξεργασία-by-MRE11 αλληλεπίδραση

(Α) Top:. επιβίωση ελεύθερη νόσου για dMRE11 εναντίον pMRE11 αντιμετωπίζονται με FU /LV [n = 320? dMRE11 n = 31? εκδηλώσεις = 11? ποσοστό 5-yr: 67% (95% CI: 52-86%)? pMRE11 n = 289? εκδηλώσεις = 122? ποσοστό 5-yr: 61% (95% CI: 56-67%)] ή με IFL [n = 305? dMRE11 n = 39? εκδηλώσεις = 13? ποσοστό 5-yr: 67% (95% CI: 53-83%)? pMRE11 n = 266? εκδηλώσεις = 118? ποσοστό 5-yr: 57% (95% CI: 51-63%)]. Κάτω: Η συνολική επιβίωση για dMRE11 εναντίον pMRE11, αντιμετωπίζονται με FU /LV [n = 320? dMRE11 n = 31? εκδηλώσεις = 10? ποσοστό 5-yr: 70% (95% CI: 55-89%)? pMRE11 n = 289? εκδηλώσεις = 98)? ποσοστό 5-yr: 73% (95% CI: 68-79%)] ή με IFL [n = 305? dMRE11 n = 39? εκδηλώσεις = 13? ποσοστό 5-yr: 67% (95% CI: 53-83%)? pMRE11 n = 266? εκδηλώσεις = 96? ποσοστό 5-yr: 69% (95% CI: 63-75%)]. (Β) Top: ελεύθερη νόσου επιβίωση για IFL εναντίον FU /LV αντιμετωπίζονται dMRE11 [n = 70? IFL n = 39? εκδηλώσεις = 13? ποσοστό 5-yr: 67% (95% CI: 53-83%)? FU /LV n = 31? εκδηλώσεις = 11? ποσοστό 5-yr: 67% (95% CI: 52-86%)] ή pMRE11 (n = 555? IFL n = 266? εκδηλώσεις = 118? ποσοστό 5-yr: 57% (95% CI: 51-63% ? FU /LV n = 289? εκδηλώσεις = 122? ποσοστό 5-yr: 61% (95% CI: 56-67%)] Κάτω:. Η συνολική επιβίωση για IFL εναντίον FU /LV-αγωγή dMRE11 [n = 70? IFL n = 39? εκδηλώσεις = 13? ποσοστό 5-yr: 67% (95% CI: 53-83%)? FU /LV n = 31? εκδηλώσεις = 10? 5-yr ποσοστό: 70% (95% CI: 55 έως 89%) ή pMRE11 [(n = 555? IFL n = 266? εκδηλώσεις = 96? ποσοστό 5-yr: 69% (95% CI: 63-75%)? FU /LV n = 289? εκδηλώσεις = 98 ? 5-yr ποσοστό:. 73% (95% CI: 68-79%)]

Η

Συζήτηση

Αυτή η ανάλυση των επεξεργασμένων αποτελεσμάτων σε μία ομάδα του σταδίου ΙΙΙ ασθενείς CRC θεραπεία με FU /LV ή IFL έδειξαν ότι, μετά τον έλεγχο για την απροσδόκητη μη αναλογικών κινδύνων, την κατάσταση MRE11 είναι σημαντικά προγνωστικό τόσο για DFS και OS, και παραμένει σημαντικό όταν ρυθμίζεται για κλινικοπαθολογική μεταβλητές και δημοσίευσε σημαντικές δείκτες, όπως το MMR, KRAS, BRAF, και p53. Επιπλέον, μετά την προσαρμογή για το MMR, MRE11 παραμένει ένας σημαντικός προγνωστικός δείκτης, ενώ το αντίστροφο δεν είναι αλήθεια. Σε μια διερευνητική ανάλυση υποομάδων, κατάσταση MRE11 συνδέθηκε με τις διαφορές στο λειτουργικό σύστημα και DFS μεταξύ των ασθενών που έλαβαν θεραπεία με IFL. Το τελευταίο εύρημα είναι κλινικά ενδιαφέρουσα, αλλά βασίζεται σε ένα σχετικά μικρό αριθμό ασθενών, και θα μπορούσε να διερευνηθεί περαιτέρω σε μελέτες συμμετείχε μεγαλύτερος αριθμός ασθενών. Ο αντίκτυπος στην απάντηση θα μπορούσε καλύτερα να αξιολογηθούν σε μια μελέτη του σταδίου IV ασθενείς με μετρήσιμη μεταστατική νόσο, αν και έχει δείξει σε πολλές περιπτώσεις ότι τα αποτελέσματα των θεραπειών κατά των όγκων διαφέρουν μεταξύ σταδίου III και IV σταδίου της νόσου.

κατάσταση MMR είχε προηγουμένως δειχθεί ότι είναι τόσο ένας προγνωστικός δείκτης [2], [6], [7] και προγνωστικός δείκτης της απόκρισης σε σχέση με IFL FU /LV [22]. Υπό το φως της ισχυρής συσχέτισης μεταξύ dMRE11 και MMR-D κατάστασης σημειωθεί εδώ, δεν είναι έκπληξη το γεγονός ότι τα προγνωστικά και προγνωστικά μοντέλα για τους δύο δείκτες παράλληλα το ένα το άλλο. Ωστόσο, στην πολυπαραγοντική προγνωστική μοντέλα για DFS ή OS που περιέχουν και τους δύο δείκτες, MRE11 αλλά δεν MMR κατάσταση παρέμεινε εξαιρετικά στατιστικά σημαντική κατά τη διάρκεια τόσο νωρίς και αργά χρονικές περιόδους. Έτσι, η σημασία της κατάστασης MRE11 δεν αντικατοπτρίζει την εξάρτησή της από το καθεστώς MMR.

Θα πρέπει να σημειωθεί ότι οι ασθενείς dMRE11 θεραπεία με IFL παρουσίασαν καλύτερη μακροπρόθεσμη DFS από τους ασθενείς pMRE11 στο ίδιο σκέλος θεραπείας, αν και οι ασθενείς dMRE11 είχε μια ανεξήγητη αυξημένη θνησιμότητα στην πρώτα 2 έτη μετά τη θεραπεία. Δεν υπήρχε σχέση μεταξύ φτωχή αρχική απόκριση και κλινικούς παράγοντες όπως η ηλικία, το φύλο ή κομβικά κατάστασης. Η θεραπεία με ιρινοτεκάνη επεκταθεί με την πάροδο μόνο 30 εβδομάδες, ενώ η διαφορά στην απόκριση δεν είχε γίνει εμφανές αργότερα (Σχήμα 4), τόσο νωρίς τοξικότητα σχετιζόμενη με τη θεραπεία από μόνη της είναι απίθανο να εξηγηθεί αυτή η διαφορά.

Η ανάλυση της λειτουργίας MRE11 στην απάντηση στην ιρινοτεκάνη πραγματοποιήθηκε με βάση τα αποτελέσματα των βασικών μηχανιστικών μελετών που δείχνουν ότι MRE11 /RAD50 συνεισφέρει στην αποκατάσταση της βλάβης του DNA που προκαλείται από τοποϊσομεράσης 1 δηλητήρια [19], [20]. Η τοποϊσομεράση 1 δηλητήρια (όπως ιρινοτεκάνη) και της τοποϊσομεράσης 2 δηλητήρια (όπως η ετοποσίδη) και οι δύο προάγουν τον σχηματισμό προϊόντων προσθήκης πρωτεΐνης-DNA, το οποίο είναι κυτταροτοξικά αν δεν επισκευαστεί. Μερικά εικόνα της σημαντικής βραχυχρόνια θνησιμότητα μεταξύ των ασθενών που έλαβαν θεραπεία με dMRE11 ιρινοτεκάνη μπορεί να παρέχονται από τις μελέτες των ποντικών με ανεπάρκεια στο ένζυμο TDP2, η οποία επισκευές βλάβη που προκαλείται από την τοποϊσομεράση 2 δηλητήρια [30].