Αφηρημένο

Η κυκλίνη Β1, μια μιτωτική κυκλίνη, έχει εμπλακεί σε malignances. Ωστόσο, η συμβολή της στην παχέος εισβολή καρκίνου και μετάσταση δεν είναι ακόμη πλήρως κατανοητή. Εδώ, δείξαμε ότι η εισβολή και η μετάσταση του καρκίνου του παχέος εντέρου ρυθμίζεται από κυκλίνη Β1. Η υπερέκφραση Κυκλίνης Β1 παρατηρήθηκε σε ορθοκολικό καρκινικούς ιστούς, αλλά αυτή η αυξημένη έκφραση αρνητικά σχετίζεται με μετάσταση λεμφαδένα, μακρινό στάδιο μετάσταση, και το στάδιο ΤΝΜ. Η ανάλυση επιβίωσης Kaplan-Meier απέδειξε ότι η χαμηλή έκφραση Β1 Κυκλίνη συσχετίστηκε με κακή συνολική επιβίωση των ασθενών με καρκίνο του παχέος εντέρου. Η αναστολή της κυκλίνης Β1 σε καρκίνο του παχέος εντέρου κύτταρα ενίσχυσε την κυτταρική μετανάστευση και εισβολή τριών διαφορετικών ορθοκολικού καρκίνου κυτταρικές γραμμές. Στη μελέτη της πιθανός μηχανισμός με τον οποίο Κυκλίνη Β1 καταστέλλει την εισβολή ορθοκολικό καρκίνο και μετάσταση, παρατηρήσαμε ότι η καταστολή της Κυκλίνης Β1 μείωσε την έκφραση της πρωτεΐνης επίπεδο Ε-καδερίνης. Τα ευρήματά μας υποδηλώνουν ότι η κυκλίνη Β1 θα μπορούσε να καταστείλει την εισβολή και τη μετάσταση του καρκίνου του παχέος εντέρου κυττάρων μέσω της ρύθμισης της έκφρασης E-cadherin, η οποία επιτρέπει την ανάπτυξη των πιθανών στρατηγικών παρέμβασης για καρκίνο του παχέος εντέρου

Παράθεση:. Fang Y, Liang Χ, Jiang W, Li J, Xu J, Cai Χ (2015) κυκλίνης Β1 Καταστέλλει καρκίνο του παχέος εντέρου εισβολή και Μετάσταση με τη ρύθμιση E-cadherin. PLoS ONE 10 (5): e0126875. doi: 10.1371 /journal.pone.0126875

Ακαδημαϊκό Επιμέλεια: Xin Yuan-Γκουάν, το Πανεπιστήμιο του Χονγκ Κονγκ, την Κίνα

Ελήφθη: 18 Γενάρη του 2015? Αποδεκτές: 8 Απριλίου, 2015? Δημοσιεύθηκε: 11 Μαΐου 2015

Copyright: © 2015 Fang et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα: Όλα τα σχετικά δεδομένα είναι εντός του Υποστηρίζοντας αρχεία πληροφοριών του χαρτιού και

Χρηματοδότηση:. η εργασία αυτή χρηματοδοτήθηκε από τα Διεθνή σχέδια επιστημονικής και τεχνολογικής συνεργασίας της Κίνας (https://www.istcp.org.cn/) (Grant Νο . 2012DFA30410 να Ξιουτζούν Cai), και το National Science τεχνολογίας Υποστήριξη σχέδιο Έργα της Κίνας (https://www.most.gov.cn/) (Grant Νο 2012BAI14B06 να Ξιουτζούν Cai)

Αντικρουόμενα συμφέροντα: οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα.

Εισαγωγή

Παρά την αυξημένη γενική ευαισθητοποίηση, καρκίνο του παχέος εντέρου παραμένει μία από τις τρεις κύριες αιτίες θνησιμότητας κακοήθειας που σχετίζονται με όλο τον κόσμο [1]. Η πλειονότητα των ασθενών ορθοκολικού καρκίνου σε πρώιμο στάδιο (στάδιο TNM Ι και II) μπορεί να αντιμετωπιστεί αποτελεσματικά με χειρουργική εκτομή και τα ποσοστά επιβίωσης 5 ετών για τους καρκίνους πρώιμο στάδιο είναι έως και 95% (στάδιο I) και 60-80 % (στάδιο ΙΙ), αντίστοιχα. Ωστόσο, οι περισσότεροι ασθενείς με μεταστατικό ορθοκολικό καρκίνο σε προχωρημένο στάδιο (στάδιο TNM III και IV) είναι συνήθως ανθεκτικοί σε υπάρχουσες θεραπείες και να έχουν μια αρκετά φτωχή πρόγνωση δεδομένου ότι τα ποσοστά επιβίωσης 5 ετών μειωθεί δραματικά σε ποσοστό 35% με τη συμμετοχή λεμφαδένων (στάδιο ΙΙΙ ) και σε 10% όταν η νόσος έχει εξαπλωθεί σε απομακρυσμένα όργανα (στάδιο IV) [2-5]. Έτσι, ο σχηματισμός μετάστασης είναι η αποφασιστική και το πιο θανατηφόρο συμβάν κατά τη διάρκεια αυτής της πορείας της νόσου. Στην πραγματικότητα, η μετάσταση όγκου είναι μια πολύπλοκη βιολογική διεργασία που εμπλέκει πρωτογενούς αγγειογένεση όγκου, καρκινικού κυττάρου εισβολή, την αγγειακή /λεμφικό ενδαγγείωση, μακρινό εξαγγείωση όργανο-στόχο, και την ανάπτυξη των κυττάρων εισέβαλαν στις ξένες μικροπεριβάλλον για να σχηματίσουν μεταστατικούς αποικισμό [6-8]. Παρά το γεγονός ότι απορύθμιση των οδών σηματοδότησης και δυσλειτουργία πολλών μορίων έχουν ταυτοποιηθεί σε μετάσταση καρκίνου, δεν μπορούν να εξηγήσουν πλήρως το φαινόμενο της μετάστασης καρκίνου του παχέος εντέρου [2]. Έτσι, είναι πολύ σημαντικό να αποκαλύψει το βιολογικό μηχανισμών που διέπουν τη μετάσταση σε καρκίνο του παχέος εντέρου και να διατυπώσει τις στρατηγικές για να παρέμβει σε αυτή τη διαδικασία.

Τα επιθηλιακά-μεσεγχυματικά μετάβασης (EMT) είναι γνωστή ως μια κρίσιμη μηχανισμός του παχέος μετάσταση του καρκίνου και ένας βασικός ρυθμιστής του σχηματισμού μακρινό όργανο [9-11]. Κατά τη διαδικασία της ΕΜΤ, επιθήλιο προερχόμενα κύτταρα όγκου απώλεια της κυτταρικής προσκόλλησης και την πολικότητα, και το κέρδος των μεταναστευτικών και επεμβατική ιδιότητες, με αποτέλεσμα την δυνατότητα κύτταρα όγκου να διεισδύουν περιβάλλοντες ιστούς, και αδειοδότηση έτσι αυτά τα κύτταρα να υφίστανται μετάσταση σε μακρινές ιστούς [9, 12 ]. Στο μοριακό επίπεδο, η Ε-καντερίνη είναι η καλύτερη χαρακτηρισμένη μοριακό δείκτη του EMT. Η απώλεια της έκφρασης Ε-καδερίνης είναι γνωστό ως το πιο κυρίαρχο χαρακτηριστικό γνώρισμα του ΕΜΤ [13-15]. E-cadherin, που κωδικοποιείται από το γονίδιο Cdh1 που βρίσκεται στο χρωμόσωμα 16q22 [16], είναι μια διαμεμβρανική γλυκοπρωτεΐνη περιορίζεται σε επιθηλιακά κύτταρα και είναι κυρίως υπεύθυνη για μεσοκυττάρια κόμβους προσκόλληση [17]. Πολλοί παράγοντες μεταγραφής, όπως σαλιγκάρι, ZEB1, ZEB2, FOXC2, Slug, και Twist έχει αποδειχθεί ότι άμεσα ή έμμεσα προκαλούν την καταστολή της δραστηριότητας προαγωγού Ε-cadherin [18-21]. Εκτός αυτού, η απώλεια ή η μείωση της έκφρασης Ε-καδερίνης βρέθηκε να επιτρέπουν ή να επιταχύνουν την εισβολή και τη μετάσταση, και ως εκ τούτου προταθεί ως μια πιθανή προγνωστικός παράγοντας σε καρκίνο του παχέος εντέρου [22-25].

Κυκλίνης Β1, αντιστοιχίζονται με τα ανθρώπινα χρωμόσωμα 5q12, είναι γνωστό ως μιτωτική κυκλίνη λόγω του βασικού ρόλου της στην διαμόρφωση G2 /M φάση εξέλιξη του κυτταρικού κύκλου, και συμμετέχει στην ανάπτυξη των κυττάρων, τη διαφοροποίηση, την απόπτωση, και μετάσταση σε διάφορους τύπους καρκίνου [26-29]. Μέχρι στιγμής, η αυξημένη έκφραση της κυκλίνης Β1 έχει αναφερθεί στο στήθος, τον προστάτη, του οισοφάγου, του πνεύμονα, του παχέος εντέρου, και γαστρικούς καρκίνους [30-36]. Σε προηγούμενη μελέτη μας βρήκαμε επίσης υπερέκφραση Κυκλίνης Β1 προωθείται πολλαπλασιασμό των κυττάρων και την ανάπτυξη του όγκου σε ανθρώπινο καρκίνο του παχέος εντέρου [37]. Ωστόσο, η απουσία των προγνωστικών συνάφεια ή ευνοϊκή πρόγνωση Κυκλίνης Β1 παρατηρήθηκε επίσης σε καρκίνο του παχέος εντέρου, του λεμφώματος και του παγκρέατος νευροενδοκρινούς όγκου [35, 38, 39]. Αυτές οι διαφορές δείχνουν περαιτέρω μελέτη να είναι αναγκαία.

Σε αυτή τη μελέτη, να διευκρινίσει εάν και πώς Κυκλίνης Β1 ασχολείται με την εισβολή κυττάρων και τη μετάσταση σε καρκίνο του παχέος εντέρου, μπορούμε αρχικά αξιολογήθηκε έκφραση Β1 κυκλίνης σε 150 ζεύγη ορθοκολικό καρκίνο και να συνδυαστούν γειτονικά μη-όγκου του παχέος ιστούς, στη συνέχεια αναλύεται ο συσχετισμός της με κλινικοπαθολογοανατομικές χαρακτηριστικά. Είναι ενδιαφέρον, βρήκαμε ότι η υπερέκφραση της κυκλίνης Β1 σε καρκίνο του παχέος εντέρου σχετίστηκε αρνητικά με μετάσταση λεμφαδένα, απομακρυσμένη μετάσταση, στάδια ΤΝΜ, και κακή επιβίωση. Η μελέτη μας έδειξε επίσης αναστολή της κυκλίνης Β1 κατέστειλε την έκφραση της Ε-καδερίνης, και στη συνέχεια οδήγησε στην επαγωγή της μετανάστευσης και εισβολής του καρκίνου του παχέος εντέρου κυττάρων. Τα ευρήματα αυτά δεν είναι μόνο συνεργάτης κυκλίνης Β1 με μετάσταση στον καρκίνο του παχέος εντέρου, αλλά και να παρέχει έναν υποσχόμενο στόχο για τη θεραπεία των ασθενών με προχωρημένο στάδιο καρκίνου του παχέος εντέρου.

Υλικά και Μέθοδοι

Ασθενείς και δείγματα

οιδηματώδης και συμφωνημένα παρακείμενο φυσιολογικό παχέος ιστούς ελήφθησαν από 150 ασθενείς που υποβλήθηκαν σε χειρουργική επέμβαση στο Sir Run Run Shaw Νοσοκομείο, Ιατρική Σχολή, Πανεπιστήμιο Zhejiang (Hangzhou, Κίνα), από τον Απρίλιο του 2005 και τον Ιούνιο του 2009. ειδικότερα, δίπλα φυσιολογικούς ιστούς λήφθηκαν & gt? 5 cm πλευρικά από την άκρη του καρκινικού περιοχής. Κανένας από αυτούς τους ασθενείς είχαν υποβληθεί σε χημειοθεραπεία ή ακτινοθεραπεία πριν από τη λειτουργία. Η παρούσα μελέτη εγκρίθηκε από την Επιτροπή Δεοντολογίας Sir Run Run Shaw Νοσοκομείο Έρευνας και όλα τα δείγματα ελήφθησαν με τη γραπτή συγκατάθεση (S1 Σχήμα). Όλα τα δείγματα καταψύχθηκαν αμέσως σε υγρό άζωτο μετά από χειρουργική εκτομή και αποθηκεύτηκε στους -80 ° C μέχρι την εκχύλιση του RNA.

Οι κλινικές πληροφορίες από αυτούς τους ασθενείς, συμπεριλαμβανομένης της ηλικίας, του φύλου, την κατάσταση διαφοροποίησης, τοποθεσία του όγκου, το μέγεθος του όγκου, μετάσταση λεμφαδένα , μακρινή μετάσταση, και το στάδιο TNM, συλλέγεται και φαίνεται στον πίνακα S1. Οι ασθενείς παρακολουθήθηκαν μία φορά κάθε 3 μήνες για τουλάχιστον 5 χρόνια μετά την επέμβαση. Όλοι οι ασθενείς είχαν έρθει σε επαφή μέσω τηλεφώνου ή ερωτηματολόγιο γράμματα για να ελέγξετε από την κατάσταση της υγείας τους. Ο θάνατος των ασθενών διαπιστώθηκε από την έκθεση από την οικογένειά τους.

εκχύλιση RNA και ποσοτική PCR πραγματικού χρόνου

Το συνολικό RNA εξήχθη χρησιμοποιώντας το αντιδραστήριο ΤΚΙζοΙ (Invitrogen) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. cDNA συντέθηκε από ολικό RNA 2 ug χρησιμοποιώντας κιτ αντιδραστηρίου PrimeScript RT (Takara) και ενισχύθηκαν με SYBR πρόμιγμα Εχ Taq (Takara) επί ABI σύστημα 7500HT (ΑΒΙ). Το αστάρι Κυκλίνης Β1 έδειξε προηγουμένως [37]. GAPDH χρησιμοποιήθηκε ως εσωτερικός έλεγχος. Σχετική ποσοτικοποίηση της έκφρασης mRNA υπολογίστηκε με την 2

-ΔCT ή 2

-ΔΔCT μέθοδο.

Κυτταρική καλλιέργεια και επιμόλυνση

Το ανθρώπινο καρκίνο του παχέος εντέρου κυτταρικές σειρές p53

+ /+ HCT116, ρ53

– /- HCT116, και SW480 ελήφθησαν από την American Type Culture Collection. p53

+ /+ HCT116 και ρ53

– /- κύτταρα HCT116 καλλιεργήθηκαν σε πλήρες 5Α μέσο McCoy (Gibco). Τα κύτταρα SW480 καλλιεργήθηκαν σε RPMI 1640 συμπληρωμένο με 10% FBS (Gibco). Όλες οι τρεις κυτταρικές σειρές καλλιεργήθηκαν σε υγροποιημένο θάλαμο με 5% CO

2 στους 37 ° C.

siRNA έναντι κυκλίνης Β1 και siRNA αρνητικού ελέγχου συντέθηκαν με bioneer. Τα κύτταρα επιμολύνθηκαν παροδικά με siRNA χρησιμοποιώντας βασιζόμενα σε λιπίδια αντιδραστήρια διαμόλυνσης DharmaFECT1 (Dharmacon) σύμφωνα με το πρωτόκολλο του κατασκευαστή. Το επίπεδο της αποτελεσματικότητας επιμόλυνσης και διαμόλυνση Κυκλίνης Β1 siRNA προσδιορίστηκε προηγουμένως [37].

Η μετανάστευση των κυττάρων δοκιμασία

24h μετά την επιμόλυνση, 1 × 10

5 αντιμετωπίζονται τα καρκινικά κύτταρα σε 200 μλ του μέσου χωρίς ορό προστέθηκαν στο άνω τμήμα του Transwells (8-μm μέγεθος πόρων? Costar). Οι κάτω θάλαμοι πληρώθηκαν με μέσο συμπληρωμένο με 10% FBS και επωάζονται στους 37 ° C /5% CO

2 έως ότου ο χρόνος ανίχνευσης (24h για ρ53

+ /+ HCT116, 36Η για ρ53

– /- HCT116, και 36 ώρες για SW480, αντίστοιχα). Τα κύτταρα στην κάτω πλευρά της μεμβράνης μονιμοποιήθηκαν, χρωματίσθηκαν με 0,1% κρυσταλλικό ιώδες και μετρήθηκαν (πέντε ανεξάρτητες μικροσκοπικά πεδία σε 20-πλάσια μεγέθυνση). Δοκιμασίες εκτελέστηκε εις διπλούν και επαναλήφθηκαν τρεις ανεξάρτητες φορές.

Κυττάρων εισβολή

δοκιμασία

Ένα μέγεθος πόρων 24 φρεατίων transwell πλάκα (8-μm επικαλυμμένα με Matrigel (BD Biosciences) χρησιμοποιήθηκε για να μετρηθεί κύτταρο ικανότητα εισβολής. 24h μετά την επιμόλυνση, 1 × 10

5 κύτταρα επαναιωρήθηκαν σε μέσο άνευ ορού και προστέθηκαν στον ανώτερο θάλαμο. το μέσο συμπληρώθηκε με 10% FBS χρησιμοποιήθηκε ως χημειοελκυστικό στον κάτω θάλαμο πριν από την εξέταση. Τα κύτταρα επωάστηκαν στους 37 ° C για τον υποδεικνυόμενο χρόνο (30h για ρ53

+ /+ HCT116, 42H για ρ53

– /- HCT116, και 48 ώρες για SW480, αντίστοιχα). Τα κύτταρα στην ανώτερη επιφάνεια ξύστηκαν με μπατονέτες και έπλυνε, ενώ τα εισέβαλαν κύτταρα στην κάτω επιφάνεια σταθεροποιήθηκαν, χρωματίστηκαν με 0.1% κρυσταλλικό ιώδες για 1 ώρα, και ποσοτικά με τον καθορισμό του αριθμού των κυττάρων σε πέντε randmonly επιλέγονται οπτικά πεδία Δοκιμασίες διεξήχθη εις διπλούν και επαναλήφθηκαν τρεις ανεξάρτητες φορές.

Western blot ανάλυση

τα κύτταρα συλλέχθηκαν και λύθηκαν σε ρυθμιστικό RIPA που περιέχει αναστολέα πρωτεάσης (Pierce). Η συγκέντρωση πρωτεΐνης προσδιορίστηκε με κιτ δοκιμασίας BCA, και ίση ποσότητα πρωτεΐνης ηλεκτροφορήθηκαν σε 10% δωδεκυλοθειϊκού νατρίου-πολυακρυλαμιδίου και μεταφέρθηκαν σε membrances διφθοριούχου πολυβινυλιδενίου (PVDF, Millipore). Μετά από αποκλεισμό για μη ειδική δέσμευση, η μεμβράνη επωάστηκε με ειδικά πρωτογενή αντισώματα έναντι κυκλίνης Β1 (1: 2000? Epitomics), Ε-καδερίνης (1: 1000? Abcam) και GAPDH (1: 2000? Santa Cruz) όλη τη νύκτα στους 4 ° C, και στη συνέχεια πλένονται τρεις φορές με Tris ρυθμιστικό αλατούχο διάλυμα και Tween 20, ακολούθησαν επωάζονται με τα δευτερεύοντα αντισώματα συζευγμένα με υπεροξειδάση κατάλληλο χρένου (HRP, Dawen Biotec) για 1 ώρα σε θερμοκρασία δωματίου. Η έκφραση της πρωτεΐνης τελικά ορατό χρησιμοποιώντας βελτιωμένη ανίχνευση χημειοφωταύγειας (ECL, Biological Industries). Εντάσεις των σημάτων έκφρασης πρωτεΐνης ποσοτικοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας πυκνομετρική ανάλυση με Ποσότητα Ένα λογισμικό (Bio-Rad), και οι προκύπτουσες τιμές της πρωτεΐνης κανονικοποιήθηκαν προς τις αντίστοιχες ελέγχους φόρτωσης.

Ανοσοϊστοχημεία

Anti αντίσωμα -Ε-καδερίνης (Epitomics) χρησιμοποιήθηκε για IHC χρώση των όγκων ξενομοσχεύματος. IHC διεξήχθη όπως περιγράφηκε προηγουμένως [37].

Στατιστική ανάλυση

Η στατιστική ανάλυση πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας SPSS βασική έκδοση 21.0 (SPSS Inc) και GraphPad Prism 5 (GraphPad Software). Διαφορά μεταξύ των ομάδων σε δείγματα ιστών εκτιμήθηκε από το μη παραμετρικό Mann-Whitney

U

δοκιμή. Σχετική ποσοτικοποίηση της έκφρασης Β1 κυκλίνης υπολογίστηκε με την 2

-ΔCT ή 2

-ΔΔCT μέθοδο (ΔΟΙ = κυκλίνης Β1 (CT) -GAPDH (CT)? ΔΔCT = ΔCt (όγκου) – ΔΟΙ (Κανονική)) τα, και τα δεδομένα παρουσιάζονται ως μέσος όρος ± SEM. Kaplan-Meier και log-rank τεστ χρησιμοποιήθηκαν για την αξιολόγηση του ασθενούς συνολική επιβίωση (OS) και να δημιουργήσει καμπύλες επιβίωσης με βάση τα υψηλά και χαμηλά επίπεδα κυκλίνης Β1 (όπως ορίζεται από την καμπύλη ROC). Η ανάλυση μονοπαραγοντική και πολυπαραγοντική επιβίωση διεξήχθησαν με το μοντέλο παλινδρόμησης Cox. Όλα τα in vitro πειράματα διεξήχθησαν εις διπλούν και επαναλήφθηκαν τρεις φορές. Για την in vitro και in vivo πειράματα σε ζώα, διαφορά μεταξύ δύο ομάδων εκτιμήθηκε χρησιμοποιώντας του σπουδαστή

t-test

, και τα δεδομένα παρουσιάζονται ως μέση τιμή ± SD. Αξία του

P

& lt? 0,05 θεωρήθηκε στατιστικά σημαντική.

Αποτελέσματα

Η κυκλίνη Β1 υπερέκφραση συσχετίζεται αρνητικά με λεμφαδένων matastasis, μακρινή μετάσταση και προχωρημένο στάδιο ΤΝΜ στην ανθρώπινη παχέος καρκινικούς ιστούς

Για να προσδιορίσει το δυνητικό ρόλο της κυκλίνης Β1 σε ορθοκολικό καρκίνο μετάστασης, εξετάσαμε αρχικά την έκφραση της κυκλίνης Β1 σε 150 ζεύγη του παχέος εντέρου και συμφωνημένα γειτονικά μη-όγκου του παχέος ιστούς χρησιμοποιώντας qRT-PCR. Η κυκλίνη Β1 mRNA υπερεκφράστηκε σε 139/150 (92,7%) ζεύγη, με μέση αυξημένη αλλαγή φορές από 5,30 σε καρκινικούς ιστούς. Βρήκαμε επίσης ότι η σχετική μέση έκφραση της κυκλίνης Β1 ήταν πολύ χαμηλότερη σε ασθενείς με λεμφαδένα μετάσταση από ότι σε ασθενείς χωρίς μετάσταση (

P

= 0,011) (Εικόνα 1Β). Σε ασθενείς με μακρινή μετάσταση, το επίπεδο της κυκλίνης Β1 ήταν επίσης σημαντικά χαμηλότερη από ότι σε ασθενείς χωρίς μακρινή μετάσταση (

P

= 0,021) (σχήμα 1Γ). Όπως φαίνεται στον Πίνακα 1, η ένωση μεταξύ του επιπέδου Β1 κυκλίνης και κλινικοπαθολογικών χαρακτηριστικά έδειξαν την έκφραση της κυκλίνης Β1 συσχετίζεται αρνητικά με μετάσταση λεμφαδένα, απομακρυσμένη μετάσταση, και προχωρημένο στάδιο ΤΝΜ (

P

= 0,007) (Σχ 1D ) σε ασθενείς με καρκίνο του παχέος εντέρου. Ωστόσο, δεν υπάρχει σημαντική συσχέτιση ανάμεσα στην έκφραση Β1 κυκλίνης και άλλα κλινικοπαθολογοανατομικές χαρακτηριστικά, όπως η ηλικία του ασθενούς, το φύλο, την περιοχή του όγκου, το μέγεθος του όγκου και τη διαφοροποίηση (όλα

P

& gt? 0,05). Επιπλέον, επιβεβαίωσε επίσης το επίπεδο της πρωτεΐνης της κυκλίνης Β1 σε 30 κλινικά δείγματα ιστών, συμπεριλαμβανομένων και 10 φυσιολογικούς ιστούς παχέος εντέρου, 10 ορθοκολικού καρκίνου ιστούς χωρίς μετάσταση, και 10 καρκινικούς ιστούς με μετάσταση από κηλίδα western. Έχουμε λάβει συνεπή αποτέλεσμα με το αποτέλεσμα επίπεδο RNA. πρωτεΐνη κυκλίνη Β1 υπερεκφράζεται σε ορθοκολικό καρκίνο ιστούς χωρίς μετάσταση, σε σύγκριση με τις κανονικές του παχέως ιστούς (

P

= 5.51 × 10

-5), ενώ το επίπεδο της πρωτεΐνης Β1 κυκλίνης μειώθηκε σημαντικά σε ορθοκολικό καρκίνο με ιστούς μετάσταση, σε σύγκριση με εκείνους χωρίς μετάσταση (

P

= 0,012) (Σχήμα 1 Ε). Αυτά τα δεδομένα αποκαλύπτουν ότι η έκφραση Β1 Κυκλίνης συσχετίστηκε αντίστροφα με ορθοκολικό μετάσταση καρκίνου.

έκφραση (Α) Κυκλίνη Β1 mRNA ελέγχθηκε με τη χρήση qRT-PCR σε 150 ζεύγη ανθρώπινου ορθοκολικού καρκίνου και ιστών παρακείμενες μη ογκογόνους ιστούς. Μεταβολές στην έκφραση εμφανίζεται ως διαγράμματα διασποράς, με τον Υ-άξονας δείχνει την έκφραση Β1 κυκλίνης. Η έκφρασή του κανονικοποιήθηκε προς το επίπεδο έκφρασης GAPDH σε κάθε δείγμα. Τα δεδομένα παρουσιάζονται ως μέσος όρος ± SEM. ***

P & lt?

0.001. (Β) ανάλυση qRT-PCR της έκφρασης Β1 κυκλίνης σε ασθενείς με ορθοκολικό καρκίνο με ή χωρίς μετάσταση λεμφαδένα. Τα δεδομένα αντιπροσωπεύονται ως 2

-ΔΔCT (όγκου /φυσιολογικό). *

P

& lt? 0.05. (Γ) Στατιστική ανάλυση της σχετικής επίπεδο έκφρασης Β1 κυκλίνης σε ορθοκολικό καρκίνο ιστούς με ή χωρίς μακρινή μετάσταση. Τα δεδομένα παρουσιάζονται ως μέσος όρος ± SEM. *

P

& lt? 0.05. (Δ) την αξιολόγηση του σχετικού επιπέδου έκφρασης κυκλίνης Β1 σε ορθοκολικό καρκίνο ιστούς του σταδίου ΤΝΜ I, II, III, και IV. Τα δεδομένα παρουσιάζονται ως μέσος όρος ± SEM. *

P

& lt? 0,05? **

P

& lt? 0,01? NS, δεν είναι σημαντική. (Ε) επικύρωση Western blot της πρωτεΐνης Β1 επίπεδο κυκλίνης σε φυσιολογικούς ιστούς παχέος (Ν) και του παχέος καρκινικούς ιστούς (CA) με μετάσταση (Μ +) και χωρίς (Μ-). GAPDH εφαρμόστηκε για την εξομάλυνση. Σχετική ένταση της πρωτεΐνης Β1 Κυκλίνης δείχθηκε στα ακόλουθα διαγράμματα bar. Τα δεδομένα παρουσιάζονται ως μέση τιμή ± SD. ***

P

& lt? 0.001. *

P

& lt? 0.05.

Η

έκφραση Β1 κυκλίνης συνδέεται αρνητικά με μειωμένη επιβίωση στον καρκίνο του παχέος εντέρου

Για την αξιολόγηση της προγνωστικής δυναμικό της κυκλίνης Β1 σε καρκίνο του παχέος εντέρου, αναλύσαμε τη συσχέτιση μεταξύ κυκλίνης Β1 έκφρασης και της διάρκειας επιβίωσης χρησιμοποιώντας ανάλυση Kaplan-Meier με δοκιμασία log-rank. Αρχικά καταγράφεται το χαρακτηριστικό λειτουργίας λήπτη (ROC) καμπύλη για κυκλίνη Β1 (Σχήμα 2Α). Σύμφωνα με τη μέγιστη δείκτη Youden, η βέλτιστη τιμή αποκοπής για έκφραση Β1 Κυκλίνη ήταν 3,33 φορές σε όγκο /μη-όγκου. Στη συνέχεια, οι 150 ασθενείς με καρκίνο του παχέος εντέρου χωρίστηκαν σε δύο ομάδες: Ομάδα έκφραση Β1 υψηλού κυκλίνη (n = 88) ότι η κυκλίνη αναλογία έκφραση Β1 ≥ 3,33, και η ομάδα έκφραση Β1 χαμηλή κυκλίνη (n = 62), ότι αναλογία έκφραση Β1 Κυκλίνης & lt? 3,33, ανάλογα με το επίπεδο αποκοπής (Σχήμα 2Β). Ανάλυση Kaplan-Meier εκτίμηση αποκάλυψε μια συσχέτιση μεταξύ του επιπέδου έκφρασης Β1 κυκλίνης και η συνολική διάρκεια της επιβίωσης. Οι ασθενείς με χαμηλά επίπεδα της κυκλίνης Β1 είχε προφανώς χαμηλότερο ποσοστό επιβίωσης από εκείνες με υψηλό επίπεδο έκφρασης Β1 κυκλίνης (

P

= 0,002) (Σχήμα 2C).

(Α) Η βέλτιστο επίπεδο αποκοπής κυκλίνης Β1 σχετική έκφραση προσδιορίστηκε με βάση το μεγαλύτερο ευαισθησίας και εξειδίκευσης από τον δέκτη που λειτουργούν ανάλυση χαρακτηριστικής καμπύλης (ROC) για τη συνολική επιβίωση. Η περιοχή κάτω από την καμπύλη (AUC) της ROC ήταν 0,90. (Β) Σύμφωνα με τη βέλτιστη τιμή αποκοπής (3,33 φορές), 150 ασθενείς με καρκίνο του παχέος εντέρου χωρίστηκαν σε δύο ομάδες: ≥ 3,33 θεωρήθηκαν ως ομάδα έκφραση αυξημένα κυκλίνη Β1 (n = 88)? & Lt? 3.33 θεωρήθηκαν ως μία ομάδα έκφραση χαμηλής κυκλίνη Β1 (n = 62). ανάλυση επιβίωσης (C) Kaplan-Meier, σύμφωνα με την έκφραση Β1 κυκλίνης σε ασθενείς με καρκίνο του παχέος εντέρου (δοκιμασία log-rank). (D) Σωρευτική συνολική καμπύλες επιβίωσης των ασθενών με υψηλά ή χαμηλά επίπεδα έκφρασης της κυκλίνης Β1 από πολυπαραγοντική ανάλυση.

Η

Για να καθοριστεί εάν η έκφραση της κυκλίνης Β1 είναι ένας ανεξάρτητος δείκτης της συνολικής survical για τους ασθενείς με καρκίνο του παχέος εντέρου, η πρώτη μας χρησιμοποιείται ένα μονομεταβλητό μοντέλο αναλογικού κινδύνου του Cox παλινδρόμησης για την εκτίμηση της ατομική αναλογία κινδύνου για όλες τις κλινικοπαθολογοανατομικών χαρακτηριστικά. Τα αποτελέσματα αποκάλυψαν ότι η συνολική επιβίωση ήταν significally σχετίζονται με το επίπεδο κυκλίνης Β1 έκφρασης (RR = 2.062? 95% CI, 1,273 έως 3,340? Ρ = 0,003) και άλλες τέσσερις παράμετροι (μέγεθος του όγκου, μετάσταση λεμφαδένα, απομακρυσμένη μετάσταση, και το στάδιο ΤΝΜ ? όλα

P

& lt? 0,05). Ωστόσο, στην πολυμεταβλητή ανάλυση, ο αναλογικών κινδύνων μοντέλο Cox συμπεριλαμβανομένων έκφραση κυκλίνης Β1, το μέγεθος του όγκου, λέμφο μετάσταση στους λεμφαδένες, και μακρινή μετάσταση, τα οποία προσδιορίζονται το μέγεθος του όγκου, μετάσταση λεμφαδένα και μακρινή μετάσταση ως τους ανεξάρτητους προγνωστικούς δείκτες για το συνολικό ποσοστό επιβίωσης των ασθενών με καρκίνο του παχέος εντέρου (HR: 0,564, P = 0,022? HR: 0,205, P = 2,0 × 10

-8? HR: 0,148, P = 1,0 × 10

-6, αντίστοιχα), αλλά δεν κυκλίνης έκφραση Β1 (ρ = 0,45) (Εικ 2Δ). Οι στατιστικές τιμές της έκφρασης Β1 κυκλίνης και άλλα κλινικοπαθολογοανατομικές χαρακτηριστικά προερχόμενα από το μοντέλο παλινδρόμησης αναλογικού κινδύνου του Cox έδειξε στον Πίνακα 2.

Η

Καταστολή της κυκλίνης Β1 διευκόλυνε τη μεταναστευτική ικανότητα σε διάφορες καρκίνο του παχέος εντέρου κύτταρα

Οι παραπάνω παρατηρήσεις μας ώθησε να διερευνήσει τις δυνατότητες βιολογική λειτουργία της κυκλίνης Β1 απορρύθμισης στις παχέος εξέλιξης του καρκίνου. Η ικανότητα ενός καρκινικού κυττάρου να υποστεί μετανάστευση επέτρεψε να αλλάξει τη θέση μέσα στους ιστούς, και η διαδικασία αυτή επιτρέπει στα κύτταρα του όγκου να φύγει από πρωτογενή όγκο τους [40]. Έτσι, αξιολόγησε την επίδραση της κυκλίνης Β1 για τη μετανάστευση σε καρκίνο του παχέος εντέρου κύτταρα χρησιμοποιώντας δοκιμασία Transwell. Τρεις ορθοκολικού καρκίνου κυτταρικές γραμμές, ρ53

+ /+ HCT116, ρ53

– /- HCT116, και SW480 επιμολύνθηκαν με ειδικές Κυκλίνη Β1 siRNA ή siRNA αρνητικού μάρτυρα, αντίστοιχα, όπως αναφέρθηκε προηγουμένως. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι η αναστολή της κυκλίνης Β1 ενισχυμένη σε περίοπτη θέση τη μεταναστευτική ικανότητα των κυττάρων p53

+ /+ HCT116 κατά 127% (p = 1,45 × 10

-5) (Σχήμα 3Α). Ομοίως, η ικανότητα μετανάστευσης των ρ53

– /- HCT116 επίσης αξιοσημείωτα αυξήθηκε κατά 193% (ρ = 3,30 × 10

-8) (σχήμα 3Β) μετά την καταστολή της έκφρασης Β1 κυκλίνης. Επιπλέον, η δραστηριότητα της μετανάστευσης στην Κυκλίνη Β1 siRNA επιμολυσμένα κύτταρα SW480 αυξήθηκαν σημαντικά κατά 155% (ρ = 2,85 × 10

-6) (Εικ 3C), σε σύγκριση με τα κύτταρα ελέγχου. Αυτά τα δεδομένα υποδεικνύουν Κυκλίνη Β1 ασκεί μια λειτουργία μετανάστευση καταστολής σε ανθρώπινα κύτταρα καρκίνου του παχέος εντέρου και αυτή η επίδραση είναι ανεξάρτητη από τον κυτταρικό τύπο.

(Α, Β, C) Transwell δοκιμασίες μετανάστευσης των ρ53

+ /+ HCT116 , ρ53

– /- HCT116, και SW480 κύτταρα διεξήχθησαν μετά την επιμόλυνση με την Κυκλίνη Β1 siRNA ή αρνητικό μάρτυρα, αντίστοιχα. Εκπρόσωπος εικόνες της δοκιμασίας μετανάστευσης έδειξαν. Σε όλες τις ομάδες, τα αποτελέσματα είναι αντιπροσωπευτικά τουλάχιστον τριών ανεξάρτητων πειραμάτων. NC, siRNA αρνητικό μάρτυρα. Τα δεδομένα αντιπροσωπεύουν το μέσο όρο τριών ανεξάρτητων πειραμάτων ± SD. ***

P & lt?

0.001

Η

Νοκ ντάουν της κυκλίνης Β1 προωθεί καρκίνο του παχέος εντέρου κυττάρων εισβολής

κυττάρων εισβολή είναι ένα εγγενές κυτταρική διαδικασία κατά την οποία τα κύτταρα ανταποκρίνονται σε εξωκυττάρια. ερεθίσματα να κινηθεί μέσω και αποικοδομούν την εξωκυτταρική μήτρα (ECM). Στον καρκίνο, η κυτταρική εισβολή επιτρέπει στα καρκινικά κύτταρα να αποκτήσουν την ικανότητα να εισέλθουν λεμφικό και /ή τα αιμοφόρα αγγεία για τη διάδοση μέσα στην κυκλοφορία, που ακολουθείται από εισβολή σε απομακρυσμένα όργανα για τη μεταστατική ανάπτυξη [8, 40]. Για τη διερεύνηση της πιθανής επίδρασης της κυκλίνης Β1 σε κυτταρικές εισβολή σε κύτταρα καρκίνου του παχέος εντέρου, χρησιμοποιήσαμε τη δοκιμασία εισβολής σε Matrigel για ανίχνευση. Βρήκαμε ότι η εξάντληση των Κυκλίνης Β1 οδήγησε σε 1,82 φορές και 1,72 φορές αύξηση στον αριθμό των εισβάλλοντα κύτταρα τόσο ρ53

+ /+ HCT116 και ρ53

– /- κύτταρα HCT116 (p = 6.88 × 10

-6? p = 6.70 × 10

-6, αντίστοιχα) (Σχήμα 4Α και 4Β). Ομοίως, η αναστολή της κυκλίνης Β1 αύξησε επίσης τη δραστηριότητα εισβολή SW480 κυττάρων με 4,47 φορές (ρ = 2,07 × 10

-7) (σχήμα 4Γ). Συλλογικά, αυτά τα αποτελέσματα προτείνουν Κυκλίνη Β1 αναστέλλει την εισβολή του καρκίνου του παχέος εντέρου κυττάρων.

(Α, Β, C) Η επίδραση της Κυκλίνης Β1 στην κυτταρική εισβολή ανιχνεύθηκε σε τρία ορθοκολικό καρκίνο κυτταρικές γραμμές, ρ53

+ /+ HCT116, p53

– /- HCT116, και τα κύτταρα SW480, χρησιμοποιώντας Transwell δοκιμασίες θάλαμο. Οι θάλαμοι επικαλύφθηκαν με Matrigel, η οποία λειτουργεί ως εξωκυττάρια μήτρα κύτταρο. Αντιπροσωπευτικά εικόνες εισέβαλε κύτταρα εμφανίζονται. Τα δεδομένα είναι αντιπροσωπευτικά τριών ανεξάρτητων πειραμάτων. Οι ράβδοι σφάλματος αντιπροσωπεύουν SD. ***

P & lt?.

0.001

Η

Η αναστολή της κυκλίνης Β1 μειώνει το επίπεδο Ε-καδερίνης σε καρκίνο του παχέος εντέρου κυτταρικές σειρές

Δεδομένου ότι κυκλίνης Β1 συσχετίζεται αρνητικά με ενισχυμένη παχέος μετανάστευση των καρκινικών κυττάρων και την εισβολή, εξετάσαμε αν η EMT είναι ένα υποκείμενο μηχανισμό. Δυσλειτουργία του Ε-καδερίνης έχει θεωρηθεί ότι είναι ο κύριος κρίσιμο μόριο σε ΕΜΤ-μεσολάβηση των καρκινικών κυττάρων της μετάστασης. Εδώ, ερευνήσαμε το ρόλο της κυκλίνης Β1 στη ρύθμιση της έκφρασης Ε-καδερίνης στις παραπάνω τρεις ορθοκολικού καρκίνου κυτταρικές γραμμές. Σχήμα 5Α και 5Β και οι δύο έδειξαν ότι η κυκλίνη Β1 siRNA επιμόλυνση σε ρ53

+ /+ HCT116 και ρ53

– /- HCT116 μειώθηκε έντονα επίπεδο έκφρασης πρωτεΐνης Ε-καδερίνης, αντίστοιχα (ρ = 0.038? Ρ = 0,011, αντίστοιχα) . Επίσης, σε Κυκλίνη Β1 siRNA επεξεργασμένα SW480 κύτταρα, η έκφραση της πρωτεΐνης Ε-καδερίνης ήταν προφανώς μειωμένη σε σύγκριση με την έκφραση σε κύτταρα αρνητικού ελέγχου-επιμολυσμένα (p = 0.0006) (Σχήμα 5C). Τα δεδομένα μας δείχνουν ότι η κυκλίνη Β1-διαμεσολαβούμενη αναστολή της κυτταρικής εισβολής μπορεί να συμβεί μέσω ρύθμιση της έκφρασης Ε-καδερίνης.

(Α, Β, C) 72 ώρες μετά την επιμόλυνση με 50 ηΜ Κυκλίνης Β1 siRNA ή siRNA αρνητικού ελέγχου, ο ενδογενή επίπεδα πρωτεΐνης Ε-καδερίνης και Κυκλίνη Β1 σε ρ53

+ /+ HCT116, ρ53

– /- HCT116, και τα κύτταρα SW480, αναλύθηκαν με κηλίδωση Western και ποσοτικοποιούνται. Μπαρ δείχνουν τα σχετικά επίπεδα πρωτεΐνης που κανονικοποιούνται για GAPDH. Τα δεδομένα αντιπροσωπεύουν το μέσο όρο τριών ανεξάρτητων πειραμάτων ± SD. *

P & lt?

0,05? ***

P & lt?.

0.001

Η

Η αναστολή της κυκλίνης Β1 ρυθμίζει αρνητικά την έκφραση Ε-καδχερίνη in vivo

Για να προσδιορίσετε αν κυκλίνης Β1 μεταβάλλει την έκφραση Ε-καδερίνης in vivo, αξιολογήσαμε την έκφραση Ε-καδερίνης και κατά τα προηγούμενα μοντέλα ξενομοσχεύματος όγκου μας [37] με ανοσοϊστοχημική χρώση. Όπως φαίνεται στο Σχ 6Α, επίπεδο Ε-καδερίνης μειώθηκε σημαντικά σε Κυκλίνη Β1-καταστολής p53 όγκους

+ /+ HCT116, σε σύγκριση με τα Β1 μη καταστολής όγκων ελέγχου κυκλίνη. Παρομοίως, πρωτεΐνη Ε-καδερίνης επίσης προφανώς προς τα κάτω σε Κυκλίνη Β1-καταστολή SW480 όγκων, σε σύγκριση με τους όγκους ελέγχου (Σχήμα 6Β). Τα δεδομένα αυτά υποδεικνύουν περαιτέρω την επίδραση της Κυκλίνης Β1 επί της έκφρασης Ε-καδερίνης

(Α) Εικόνες (χ200? Χ400). Αντιπροσωπεύει ανοσοϊστοχημική χρώση Ε-καδερίνης σε ρ53

+ /+ όγκους HCT116 που εκφράζουν Κυκλίνη Β1 shRNA ή φορέα ελέγχου. (Β) αντιπροσωπεύουν τις εικόνες (x200? Χ400). Της Ε-καδερίνης σε όγκους SW480 που εκφράζουν κυκλίνης Β1 shRNA ή φορέα ελέγχου

Η

Συζήτηση

Οι κυριότερες αιτίες του παχέος θνησιμότητα σχετιζόμενη με τον καρκίνο οφείλονται στις επιπλοκές που προκύπτουν από την μετάσταση. Σύμφωνα με τις στατιστικές του καρκίνου, περίπου το 60% των ασθενών με καρκίνο του παχέος αναμένεται να αναπτυχθούν μετάσταση. Αν και έχουν αρκετές approachs για θεραπεία έχουν αναπτυχθεί πρόσφατα για τον ορθοκολικό καρκίνο, ασθενείς με προχωρημένο ή μεταστατικό καρκίνο του παχέος εντέρου εξακολουθούν να έχουν κακή πρόγνωση. Σε αυτή τη μελέτη, δείξαμε ότι κυκλίνης Β1 καταστέλλεται παχέος εισβολή καρκίνου και μετάσταση μέσω της ρύθμισης της έκφρασης Ε-καδερίνης.

Η ρύθμιση της ομαλής εξέλιξης του κυτταρικού κύκλου είναι απαραίτητη για τα κύτταρα να διατηρούν την γονιδιωματική ακεραιότητα που είναι ζωτικής σημασίας για την επιβίωση των κυττάρων και ελέγχονται πολλαπλασιασμό. Οι κυκλίνες είναι μία οικογένεια πρωτεϊνών που διαφέρουν στα επίπεδα έκφρασης τους κατά τη διάρκεια του κυτταρικού κύκλου για την ενεργοποίηση ειδικών εξαρτώμενες από κυκλίνη κινάσες τους που απαιτούνται για την εξέλιξη διαμέσου του κυτταρικού κύκλου. Μεταξύ αυτών, η κυκλίνη Β1 είναι υψίστης ενδιαφέρον, διότι είχε αρχικά πίστευαν ότι η κυκλίνη Β1 ελεγχόμενη G2-M σημείο ελέγχου φάση και ρυθμίζεται το σωστό έναρξη της μίτωσης, οι οποίες είναι αμφότερες απαραίτητες για τη σύνθεση DNA και τον κυτταρικό πολλαπλασιασμό. Συσσωρευμένες αποδείξεις έχουν δείξει ότι η κυκλίνη Β1 υπερεκφράζεται στον καρκίνο του μαστού, του οισοφάγου καρκίνωμα πλακώδους κυττάρου, καρκίνο του πνεύμονα, γαστρικό καρκίνο, καρκίνο στο ήπαρ, και άλλων καρκινικών κυττάρων [31, 32, 41-43]. Στατιστική στοιχεία έδειχναν ότι κυκλίνης Β1 που σχετίζονται με κακοήθεια του όγκου. Επιπλέον, η υπερέκφραση της κυκλίνης Β1 έχει ταυτοποιηθεί ως μια πολλά υποσχόμενη προγνωστικός παράγοντας σε ασθενείς με ηπατοκυτταρικό καρκίνο, μη-μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα, και κεφαλής-λαιμού καρκίνωμα πλακώδους κυττάρου [32, 34, 43]. Ωστόσο, Chae et al. [44] ανέφεραν ότι η έκφραση Β1 κυκλίνης δεν είχε καμία επίδραση στην επιβίωση των ασθενών με καρκίνο του μαστού. Bjorck et al. [38] ανέφεραν ότι οι ασθενείς με οζώδες λέμφωμα εκφράζουν υψηλότερο επίπεδο της κυκλίνης Β1 έδειξε καλύτερα αποτελέσματα μετά από χημειοθεραπεία, σε σύγκριση με ασθενείς που εκφράζουν χαμηλότερο επίπεδο της κυκλίνης Β1. Αυτά τα ασύμφωνα ευρήματα μπορεί να εξηγηθεί από την ανόμοια πρότυπο έκφρασης Κυκλίνης Β1 σε διαφορετικούς τύπους όγκων. Έχουμε διαπιστώσει προηγουμένως ότι η κυκλίνη Β1 βρέθηκε να υπερεκφράζεται και σημαντικές για τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων και την ανάπτυξη του όγκου μέσω προώθηση πρόοδο του κυτταρικού κύκλου και /ή τη μείωση της απόπτωσης σε κύτταρα καρκίνου του παχέος εντέρου [37]. Ωστόσο, ο ρόλος και ο μηχανισμός της κυκλίνης Β1 σε ορθοκολικό μετάσταση καρκίνου δεν έχει μελετηθεί καλά.

Σε αυτή τη μελέτη, βρήκαμε επίπεδο έκφρασης Β1 κυκλίνης σε ορθοκολικό καρκίνο ιστούς ήταν επίσης υψηλότερη από ότι σε nomal ιστούς σε ένα μεγάλο πάνελ 150 ασθενείς, σε συμφωνία με προηγούμενα δεδομένα μας. Ωστόσο, η κυκλίνη Β1 υπερέκφραση σχετίστηκε αρνητικά με την επιθετική κλινικοπαθολογικά χαρακτηριστικά, όπως μετάσταση λεμφαδένα, απομακρυσμένη μετάσταση, και το στάδιο ΤΝΜ. Οι ασθενείς που είχαν χαμηλή έκφραση της κυκλίνης Β1 ήταν αξιοσημείωτα κακή συνολική επιβίωση συγκριτικά με τους ασθενείς που είχαν υψηλή έκφραση κυκλίνης Β1. Η μονοπαραγοντική ανάλυση έδειξε ότι κυκλίνης Β1 ήταν ένας προγνωστικός δείκτης για τη συνολική επιβίωση σε ασθενείς με καρκίνο του παχέος εντέρου, αν και πολυπαραγοντική ανάλυση έδειξε Cylcin Β1 δεν ήταν ανεξάρτητος προγνωστικός παράγοντας. Λαμβανόμενα μαζί, αυτά τα αποτελέσματα έδειξαν σαφώς ότι το χαμηλό επίπεδο Β1 κυκλίνη συνδέεται με κακή πρόγνωση και δυσμενή κλινική έκβαση του ορθοκολικού καρκίνου. Ωστόσο, τα αποτελέσματά μας δεν είναι σε συμφωνία με τις άλλες δύο μελέτες [35, 45]. Heike et al. έδειξε κυκλίνης Β1 υπερέκφραση δεν ήταν ούτε συνδέονται με ιστοπαθολογικά χαρακτηριστικά του όγκου ούτε κακή πρόγνωση σε καρκίνο του παχέος εντέρου, ενώ Jia-Qing et al. αποκάλυψε κυκλίνης Β1 υπερέκφραση εντάθηκε κατά τη διάρκεια της καρκινογένεσης, αλλά υποχώρησαν κατά τη διάρκεια της εισβολής, και στη συνέχεια αυξήθηκε και πάλι κατά τη διάρκεια της μετάστασης σε καρκίνο του παχέος εντέρου.

Για να υποστηρίξει περαιτέρω την αντίληψή μας, το ρόλο και το μηχανισμό της κυκλίνης Β1 σε μετάσταση εντοπίστηκαν σε διάφορες καρκίνο του παχέος εντέρου κυττάρων μοντέλα, p53

+ /+ HCT116, p53

– /- HCT116 και SW480. Έχουμε στοιχεία που αποδεικνύουν ότι knockdown έκφρασης κυκλίνης Β1 επάγεται περισσότερα κύτταρα να διεισδύσουν μέσα από την Matrigel και transwell membrance και στις τρεις κυτταρικές σειρές καρκίνου, αποδεικνύοντας ότι η κυκλίνη Β1 καταστέλλει ορθοκολικό καρκίνο μετάστασης ρυθμίζοντας αρνητικά τη μετανάστευση των κυττάρων και εισβολή. EMT είχε ενοχοποιηθεί ως το βασικό βήμα στην εξέλιξη των όγκων προς εισβολή και μετάσταση [9]. Ε-καδερίνη ήταν γνωστό μόριο προσκόλλησης κυττάρου-κυττάρου, η οποία σχηματίζεται επιθηλιακά προσκολλημένα κόμβους και μεσεγγύηση CTNNB1. Στις αλλαγές EMT, η καταστολή της Ε-καδερίνης είναι ένα κρίσιμο βήμα κατά την διάρκεια της εξέλιξης των πολλών καρκίνων, συμπεριλαμβανομένου του καρκίνου του παχέος [15, 46]. Θα είναι ιδιαίτερης σημασίας για τη διερεύνηση του υποκείμενου μηχανισμού που οδηγούν σε καταστολή της Ε-καδερίνης. Παρά τα πολλά μόρια έχουν ταυτοποιηθεί για να ρυθμίζει έκφραση Ε-καδερίνης [17, 47, 48], περισσότερες μελέτες χρειάζονται ακόμη για να φωτιστούν οι σημαντικά μόρια σηματοδότησης για τη ρύθμιση της Ε-καδερίνης. Εδώ, δείξαμε ότι η κυκλίνη Β1 συμμετείχε στην ρύθμιση της έκφρασης Ε-καδερίνης. Η αναστολή της κυκλίνης Β1 μειωτικά πρωτεΐνη Ε-καδερίνης σε p53

+ /+ HCT116, p53

– κύτταρα HCT116, και SW480 – /. Επιπλέον, in vivo δοκιμασίες ξενομοσχεύματος έδειξε επίσης επίπεδο Ε-καδερίνης ήταν σημαντικά μειώθηκε στην Κυκλίνη Β1-καταστολής p53

+ /+ HCT116 και όγκους SW480, σε σύγκριση με τις αντίστοιχες όγκους ελέγχου.