Abstract

κυστατίνη C πιστεύεται ότι προλαμβάνει την εξέλιξη του όγκου με αναστολή των δραστηριοτήτων μιας οικογένειας πρωτεασών κυστεΐνης λυσοσωμικής. Ωστόσο, λίγα είναι γνωστά για τον ακριβή μηχανισμό της λειτουργίας κυστατίνης C σε καρκίνο του προστάτη. Στην παρούσα μελέτη, εξετάσαμε την έκφραση του κυστατίνης C και η σύνδεσή της με μεταλλοπρωτεϊνάσες μήτρας 2 (ΜΜΡ2) και του υποδοχέα ανδρογόνων (AR) σε μια μικροσυστοιχία ιστό συγκρίνοντας καλοήθη και κακοήθη δείγματα από 448 ασθενείς που υποβλήθηκαν σε ριζική προστατεκτομή για εντοπισμένο καρκίνο του προστάτη. έκφραση κυστατίνης C ήταν σημαντικά χαμηλότερη σε δείγματα καρκίνου από ό, τι σε καλοήθεις ιστούς (ρ & lt? 0.001) και υπήρξε μια στατιστικά σημαντική αντίστροφη συσχέτιση μεταξύ της έκφρασης της κυστατίνης C και ΜΜΡ2 (r

s

2 = -0.056, p = 0,05 ). Υπήρξε μια σαφής τάση ότι οι ασθενείς με μειωμένο επίπεδο κυστατίνης C είχαν μικρότερη συνολική επιβίωση. Στοχευμένη αναστολή της κυστατίνης C χρησιμοποιώντας ειδικά siRNA είχε ως αποτέλεσμα αυξημένη ικανότητα εισβολής των κυττάρων PC3, ενώ η επαγωγή υπερέκφρασης κυστατίνης C μειώνεται σημαντικά συντελεστή εισβολή των PC3 in vitro. Η επίδραση της κυστατίνης C επί διαμορφώνοντας την εισβολή PC3 κυττάρων που προκαλείται από Erk2 αναστολέα που ειδικώς ανέστειλαν ΜΑΡΚ /Erk2 δραστηριότητα. Αυτό υποδηλώνει ότι κυστατίνη C μπορούν να επιτελέσουν κυτταρική όγκου εισβολή από τη διαμόρφωση της δραστικότητας ΜΑΡΚ /ΕΚΚ καταρράκτες. Συνεπής με ανοσοϊστοχημικά ευρήματα μας ότι οι ασθενείς με χαμηλή έκφραση του κυστατίνης C και υψηλή έκφραση του υποδοχέα ανδρογόνου (AR) τείνουν να έχουν χειρότερη συνολική επιβίωση συγκριτικά με τους ασθενείς με υψηλή έκφραση κυστατίνης C και υψηλή έκφραση AR, που προκαλείται από υπερέκφραση του AR σε κύτταρα PC3 που εκφράζουν Κυστατίνη C siRNA ενισχύεται σε μεγάλο βαθμό την ικανότητα εισβολής των κυττάρων PC3. Αυτό υποδηλώνει ότι μπορεί να υπάρχει μια στιχομυθία μεταξύ κυστατίνη C και AR-μεσολάβηση οδούς. Η μελέτη μας αποκαλύπτει ένα νέο ρόλο για την κυστατίνη C και συναφείς κυτταρικές οδούς της στον προστάτη εισβολή καρκίνου και μετάσταση

Παράθεση:. Wegiel Β, Jiborn Τ, Abrahamson M, L Helczynski, Otterbein L, Persson JL, et al. (2009) Κυστατίνη C ρυθμίζεται προς τα κάτω σε καρκίνο του προστάτη και ρυθμίζει διείσδυση των κυττάρων καρκίνου του προστάτη

μέσω

ΜΑΡΚ /ΕΚΚ και ανδρογόνων υποδοχέων Pathways. PLoS ONE 4 (11): e7953. doi: 10.1371 /journal.pone.0007953

Συντάκτης: Τσαντ Creighton, Baylor College of Medicine, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: May 17, 2009? Αποδεκτές: 29 Οκτ 2009? Δημοσιεύθηκε: 23, Νοεμβρίου, 2009

Copyright: © 2009 Wegiel et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε από επιχορηγήσεις από το σουηδικό Συμβούλιο Έρευνας (δεν χορηγούν. 20760 και 09915), η σουηδική Εταιρεία Καρκίνου (Έργα Όχι 07-0458 και 02-4573), το Ταμείο Έρευνας και ο καρκίνος Ταμείο Έρευνας του Malmö, Πανεπιστημιακό Νοσοκομείο, η Σχολή Ιατρικής, Πανεπιστήμιο Lund, Gunnar Ίδρυμα Nilssons τον καρκίνο, και το Crafoord STF, και η κυβέρνηση Υγείας Grant (ALF) και Α Ίδρυμα Oesterlund. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

ο καρκίνος του προστάτη (PCA) παραμένει η πιο κοινή και η δεύτερη πιο θανατηφόρα όγκων στους άνδρες στο δυτικό κόσμο [1]. Περίπου το ένα τρίτο των ασθενών που έλαβαν θεραπεία θα υποτροπιάσουν και καμία θεραπευτική αγωγή υπάρχει σήμερα για μεταστατική νόσο. [2] Η εξέλιξη μέσω ορμονοεξαρτώμενου να ευνουχισμό καρκίνο ανθεκτικό και μεταστατικών προστάτη είναι ελάχιστα κατανοητή. Οι διαδικασίες εισβολής και μετάστασης από τα καρκινικά κύτταρα εξαρτώνται από την ικανότητά τους να αποδομούν τις γύρω πρωτεΐνες και άλλα συστατικά ιστού. Τα πρωτεολυτικά ένζυμα και πρωτεάσες όπως κολλαγενάση και καθεψίνες είναι απαραίτητες για το σκοπό αυτό, και έτσι θα διαδραματίσουν κρίσιμους ρόλους σε πολλαπλές βαθμίδες ανάπτυξης καρκίνου και μετάσταση [3], [4]. Μεταξύ πρωτεάσες, οι μεταλλοπρωτεϊνάσες μήτρας ΜΜΡ και λυσοσωμικών καθεψίνες Β αποδόθηκαν μείζονα ρόλο στην εξέλιξη του καρκίνου του προστάτη [5] – [9] [10], [11]. Πρόσφατα, ΜΜΡ2 συνδέθηκε επίσης με μια επεμβατική φαινοτύπου των κυττάρων καρκίνου του προστάτη [12] και την έκφραση της ΜΜΡ2 σε κακοήθη προστατικό επιθήλιο αποδείχθηκε ότι είναι ένας ανεξάρτητος προγνωστικός δείκτης του καρκίνου του προστάτη ελεύθερη νόσου επιβίωση [13].

Cystatin C είναι ένας αναστολέας πρωτεάσης που εκκρίνεται κυστεΐνης που ρυθμίζει την επαναρρόφηση οστού, χημειόταξη ουδετερόφιλων, και φλεγμονή των ιστών, καθώς και αντοχή σε βακτηριακές και ιογενείς λοιμώξεις. Χρησιμεύει επίσης ως ένας ισχυρός αναστολέας της καθεψίνης Β και άλλων ανθρώπινων πρωτεασών κυστεΐνης λυσοσωμικών [14]. Κυστατίνης Ο είναι επίσης γνωστό ότι είναι ένα καλύτερο δείκτη για νεφρική βλάβη από κρεατινίνης [15], [16]. Αδρανοποιώντας δραστικότητα πρωτεάσης καθεψίνης, κυστατίνη C αναστέλλει την καρκινική κυτταρική εισβολή και τη μετάσταση [17], [18]. Οι Ανώμαλα επίπεδα του κυστατίνης C ή σύμπλεγμα καθεψίνη Β /κυστατίνη C στον ορό έχουν προταθεί ως διαγνωστικά και προγνωστικά δεικτών για τους καρκίνους του δέρματος, του παχέος εντέρου και του πνεύμονα [19]. Κυστατίνης Ο έχει προταθεί ότι παίζει σημαντικό ρόλο στην neuroendrocrine διαφοροποίηση του καρκίνου του προστάτη [20]. Πιο πρόσφατα, ο ορός κυστατίνη C έχει προταθεί ως χρήσιμος δείκτης της αυξημένης δραστηριότητας οστεοβλαστικής σχετίζεται με διφωσφονικά θεραπείες σε ασθενείς με καρκίνο του προστάτη με μετάσταση στα οστά [21]. Ωστόσο, ο ρόλος της κυστατίνης C σε εξέλιξη του καρκίνου του προστάτη και των συναφών κυτταρικής και μοριακής δίκτυα της παραμένουν να διερευνηθεί.

Πρόσφατες μελέτες έχουν δείξει ότι κατά τη διάρκεια της ογκογένεσης και της μετάστασης, διάφορα πρωτεολυτικά καταρράκτες που αποτελείται από ένζυμα όπως πρωτεάσες κυστεΐνης και MMPs ενεργούν με συγχρονισμένο τρόπο και να βοηθήσει στην ανάπτυξη του όγκου, εισβολή σε περιβάλλοντες ιστούς [10]. Καθεψίνη Β έχει εμπλακεί στην αποδόμηση της εξωκυττάριας ουσίας (ECM) είτε σε εκκρινόμενη μορφή στον εξωκυττάριο χώρο ή συνδέεται με την κυτταρική επιφάνεια [10]. Ειδικότερα, ΜΜΡ-2 και ΜΜΡ-9 έχουν προταθεί για να συνδέεται με τη μετάσταση καρκίνου του προστάτη, καθώς τα υψηλά επίπεδα αυτών των πρωτεϊνών μετρήθηκαν στο πλάσμα και στα ούρα σε ασθενείς με μεταστατική νόσο [5], [22], [23]. ΜΜΡ9 έχει επίσης μελετηθεί εντατικά και είναι εν τούτοις να διαδραματίσει σημαντικό ρόλο σε δύο σημαντικές πτυχές της εξέλιξης του όγκου, της αγγειογένεσης και αγγειογένεσης [8].

Η μεταστατική διαδικασία περιλαμβάνει τον συντονισμό των διαφόρων κυτταρικών και μεταγωγής σήματος οδούς που επιτρέπει στα καρκινικά κύτταρα να πολλαπλασιάζονται, αναδιαμορφώσει το γύρω περιβάλλον τους, εισβάλλουν στο μακρινό τόπο και να σχηματίσουν νέους όγκους. ΜΑΡΚ μονοπάτια σηματοδότησης παίζουν σημαντικό ρόλο στην πρόκληση έκκρισης πρωτεολυτικών ενζύμων τα οποία αποδομούν τη βασική μεμβράνη, ενισχύοντας την κυτταρική μετανάστευση και τη διατήρηση της ανάπτυξης των καρκινικών κυττάρων [7]. Αυξήσεις στα δραστικότητα ΜΑΡΚ έχουν παρατηρηθεί σε προχωρημένο προστάτη υποδεικνύουν ότι ένα ιδιοσυστατικά ενεργού οδού Ras μπορεί να σχετίζεται με την εξέλιξη του καρκίνου του προστάτη και τη μετάσταση [7], [24]. Είναι σημαντικό ότι, η ενεργοποίηση ΜΑΡΚ συνδέεται με την ανάπτυξη του μη εξαρτώμενου από ανδρογόνα καρκίνου του προστάτη, σήμερα συνήθως ονομάζεται ευνουχισμό ανθεκτικό καρκίνο του προστάτη (CRPC) [25], [26], [27].

υποδοχέα ανδρογόνου (AR), ένα μέλος της υπεροικογένειας των πυρηνικών υποδοχέων που ενεργοποιούνται συνδέτη, παίζει έναν κεντρικό ρόλο στην παθογένεση της πρωτογενούς και μεταστατικού καρκίνου του προστάτη [28], [29]. ενίσχυση γονιδίου AR βρίσκεται στο ένα τρίτο των προηγμένων καρκίνων του προστάτη και πιστεύεται ότι συμβάλλουν στην εξέλιξη και τη μετάσταση του καρκίνου του προστάτη [30], [31], [32], [33]. AR δεν δρα ανεξάρτητα στη ρύθμιση της ανάπτυξης του όγκου, αλλά απαιτεί αλληλεπίδραση με συν-ρυθμιστές [34]. Μεταλλάξεις στο γονίδιο ή μήνυμα του AR είναι οι λόγοι για την αυξημένη ευαισθησία των ανδρογόνων αυτών των όγκων. Τοπική αυτοκρινή παραγωγή διϋδροτεστοστερόνης και τεστοστερόνης σε κύτταρα καρκίνου του προστάτη μειώνει την επίδραση ευνουχισμό [35]. Η στιχομυθία μεταξύ του AR και άλλα μονοπάτια σηματοδότησης (π.χ. ΜΑΡΚ), καθώς και οι αλλαγές στο AR συν-ρυθμιστές [34] επιταχύνει τον συνδετήρα ανεξάρτητη ενεργοποίηση του AR. Έτσι, AR διαδραματίζει ζωτικό ρόλο και στις δύο κλινικά εντοπισμένο και προχωρημένους καρκίνους του προστάτη.

Η παρούσα μελέτη είχε ως σκοπό να αξιολογήσει την έκφραση της κυστατίνης C και κλινική σημασία της στον καρκίνο του προστάτη, και να διαφωτίσει ένα νέο ρόλο για κυστατίνη C στον προστάτη εισβολή καρκίνου. Κυστατίνης Ο συνδέεται με το πρωτεολυτικό καταρράκτη και ΜΑΡΚ /ΕΚΚ μονοπάτι μαζί με AR μπορεί να ενεργήσει κατά έναν συγχρονισμένο τρόπο για την προώθηση της ανάπτυξης του όγκου και της εισβολής σε περιβάλλοντες ιστούς. Εδώ, ιδρύσαμε για πρώτη φορά μια λειτουργική σύνδεση μεταξύ κυστατίνη C και ΜΑΡΚ-Erk σηματοδότησης και AR-μεσολάβηση οδών σε κύτταρα καρκίνου του προστάτη.

Αποτελέσματα

Ιστός Έκφραση των Cystatin C σε καρκίνο του προστάτη συνδέεται με ΜΜΡ2 ως δείκτης για της διεισδυτικότητας και Κλινικής Αποτέλεσμα

μειωμένη έκφραση mRNA C κυστατίνη έχει αναφερθεί σε διάφορους τύπους συμπαγών όγκων συμπεριλαμβανομένου του καρκίνου του μαστού, ο καρκίνος του παχέος εντέρου και νεφρικό καρκίνωμα [36], [37]. Ωστόσο, ο ειδικός ρόλος της έκφρασης πρωτεΐνης κυστατίνης C σε εξέλιξη του καρκίνου του προστάτη και η σύνδεσή της με τα κλινικά χαρακτηριστικά δεν έχει αναφερθεί. Χρησιμοποιήσαμε ένα χαρτομάντιλο-μικροσυστοιχιών (TMA) που περιέχει δείγματα από καλοήθη ιστό του προστάτη και κακοήθεις όγκους από 448 ασθενείς που υποβλήθηκαν σε ριζική προστατεκτομή για εντοπισμένο καρκίνο του προστάτη. Η έκφραση της κυστατίνης C εξετάστηκε με ανοσοϊστοχημεία. Σχεδόν όλα τα καλοήθη δείγματα έδειξαν αξιοσημείωτα υψηλή κυτταροπλασματική πρωτεΐνη έκφραση κυστατίνης C, ενώ τα συμφωνημένα προστάτη καρκινικούς ιστούς εμφανίζεται με συνέπεια ασθενέστερη ή μη ανιχνεύσιμα ανοσοχρώση (Σχήμα 1Α, Β). Η διαφορά ήταν στατιστικά σημαντική (ρ & lt? 0.001), προτείνοντας ότι η έκφραση πρωτεΐνης C κυστατίνη είναι, σε γενικές γραμμές, κάτω-ρυθμίζονται σε καρκίνο του προστάτη σε σύγκριση με καλοήθη επιθήλιο. Στη συνέχεια υποδιαιρούνται δείγματα όγκων σε δύο ομάδες με βάση Gleason βαθμών των επιμέρους βασικών βιοψίες, Gleason βαθμού 2 ή 3 (Ομάδα 1) έναντι Gleason βαθμού 4 ή 5 (Ομάδα 2) [38]. Βρήκαμε μειωμένη έκφραση κυστατίνης C σε δείγματα όγκων 61% από την ομάδα 1 σε σύγκριση με το 72% των δειγμάτων στην Ομάδα 2 (Σχήμα 1Α). Τόσο ΜΜΡ2 και ΜΜΡ-9, ειδικότερα, έχει βρεθεί ότι σχετίζονται με τη μετάσταση καρκίνου του προστάτη [13], [39]. Πρόσφατα, κυστατίνη C ταυτοποιήθηκε ως νέο υπόστρωμα για ΜΜΡ2 σε βασισμένη σε κύτταρα πρωτεομική ανάλυση, υποδεικνύοντας ότι υπάρχει μια άμεση λειτουργική σχέση μεταξύ της ΜΜΡ2 και κυστατίνη C [40]. Ως εκ τούτου, διερεύνησε μια πιθανή συσχέτιση μεταξύ της έκφρασης κυστατίνη C και την έκφραση των ΜΜΡ2 στα δείγματα ασθενών με ανοσοϊστοχημική ανάλυση του κατασκευάσματος μικροσυστοιχιών ιστού μας (TMA). Είναι ενδιαφέρον ότι, η έκφραση της πρωτεΐνης κυστατίνης C συσχετίστηκε αντίστροφα με ΜΜΡ2 στο υλικό 448 ασθενούς, η οποία ήταν στατιστικά σημαντική (ρ

s

2 = -0,056, ρ = 0,05). Ερευνήσαμε περαιτέρω το εάν η έκφραση κυστατίνη C συσχετίζεται με την κλινική έκβαση σε ασθενείς με καρκίνο του προστάτη, και διαιρείται ασθενείς σε δύο ομάδες με βάση το επίπεδο της έκφρασης κυστατίνης C: κυστατίνη C σε υψηλά επίπεδα (ένταση της χρώσης 2 ή 3) ή κυστατίνη C χαμηλή (ένταση του χρώση λιγότερο από 2) ομάδα. Εμείς δεν βρήκε καμία σημαντική διαφορά στις κλινικές παραμέτρους, συμπεριλαμβανομένων σκορ Gleason, Τ στάδιο /φάση Παθολογίας, μετάσταση ελεύθερο χρόνο, τα επίπεδα προεπεξεργασίας PSA, Βιοχημική επίπεδα υποτροπή του PSA, Βιοχημική ελεύθερο χρόνο και θετική χειρουργικά όρια μεταξύ κυστατίνη C υψηλές και κυστατίνη C χαμηλή ομάδα (Πίνακας 1 ). Στη συνέχεια διερευνήθηκε κατά πόσον κλινική έκβαση συμπεριλαμβανομένης της συνολικής επιβίωσης (OS) διέφερε μεταξύ κυστατίνη C υψηλής και χαμηλής ασθενείς κυστατίνης C. Οι ασθενείς στην κυστατίνη C υψηλού ομάδας σε 100 μήνες από τη διάγνωση είχε OS από περίπου 40% σε σύγκριση με 25% για τους ασθενείς στην κυστατίνη C χαμηλή ομάδα (p = 0,307) (Σχήμα 1 C). Παρά το γεγονός ότι δεν πέτυχε στατιστική σημαντικότητα, υπάρχει μια σαφής τάση ότι οι ασθενείς με χαμηλό επίπεδο έκφρασης κυστατίνης C είχαν χειρότερη έκβαση σε σύγκριση με εκείνους με υψηλότερα επίπεδα. Όταν αξιολογείται κατά πόσον βιοχημικής υποτροπής επιβίωση χωρίς διέφερε μεταξύ των ομάδων, δεν υπήρξε σημαντική διαφορά (p = 0,401) (Εικόνα 1D).

Α). Ανοσοϊστοχημική ανάλυση της έκφρασης κυστατίνης C σε καλοήθεις και προστάτη δείγματα. Τα τμήματα που αντιπροσωπεύουν καλοήθη, των ιστών και των όγκων του Gleason βαθμού 3 ή 5 που φαίνεται. Εκπρόσωπος εικόνες ελήφθησαν χρησιμοποιώντας ένα 40χ αντικειμενικό. ΣΙ). Το γράφημα της ποσοτικής ανάλυσης των ανοσοϊστοχημική χρώση των Cystatin C (σκορ 0-αρνητικό, 1 μέτρια, 2- ισχυρή, 3- πολύ ισχυρή) δείχνει τη σύγκριση μεταξύ 448 καλοήθεις και του καρκίνου δείγματα (κατά μέσο όρο χρώση των αντιγράφων του κάθε δείγματος). αναλύσεις τεστ rank sum η αντιστοιχισμένη Wilcoxon που χρησιμοποιήθηκαν για να εκτιμηθεί η σύγκριση μεταξύ των ομάδων. Οι μέσες τιμές των εντάσεων της χρώσης (οριζόντιες γραμμές) με μπάρες σφάλματος αντιπροσωπεύουν τα διαστήματα εμπιστοσύνης 95% για τη μέση απεικονίζεται. Τα κουτιά αντιπροσωπεύουν την κατανομή της έκφρασης κυστατίνης C στις ομάδες. Γ) Η συνολική επιβίωση σε ασθενείς με υψηλή ή χαμηλή έκφραση της κυστατίνης C σε δείγματα καρκίνου του προστάτη. πραγματοποιήθηκε ανάλυση επιβίωσης Kaplan-Meier. Δ) Η επιβίωση καμπύλες του χρόνου μέχρι την υποτροπή όπως αξιολογήθηκε ως βιοχημική υποτροπή μετριέται και με αύξηση του PSA [57] για τη χαμηλή (ένταση σκοράρει 0-1,5) και υψηλή (ένταση σκοράρει έκφρασης 2-3) κυστατίνη C.

ιστός Έκφραση των ανδρογόνων υποδοχέων είναι αντιστρόφως συνδεδεμένο με το Expression Κυστατίνη C

ενίσχυση και μεταλλάξεις του γονιδίου AR αναγνωρίζονται ως κρίσιμοι παράγοντες που σχετίζονται με την κακή πρόγνωση του καρκίνου του προστάτη. Θελήσαμε να ερευνήσουμε εάν η έκφραση κυστατίνη C σε συνδυασμό με AR μπορεί να προβλέψει το αποτέλεσμα της νόσου. Αξιολογήσαμε την έκφραση της κυστατίνης C σε ένα υποσύνολο των δειγμάτων μας TMA περιλαμβάνει 99 ασθενείς με την πιο προχωρημένη νόσο και είχαν υψηλό επίπεδο έκφρασης AR. Χωρίσαμε αυτές τις 99 ασθενείς σε δύο ομάδες: η κυστατίνη C-χαμηλής /AR-υψηλή ομάδας και κυστατίνη C-υψηλής /AR-υψηλή ομάδα (Σχήμα 2). Οι ασθενείς με επίπεδα C χαμηλή κυστατίνης και έκφραση υψηλού AR είχαν χαμηλότερη συνολική επιβίωση (40%, σε 100 μήνες) σε σύγκριση με τους ασθενείς με υψηλά κυστατίνη επίπεδα C και υψηλή έκφραση AR (60%, 100 μήνες), αν και αυτά τα αποτελέσματα δεν ήταν στατιστικά σημασία (ρ = 0.094). Αυτό δείχνει ότι οι ασθενείς που είχαν χαμηλά κυστατίνη C και υψηλή έκφραση AR τείνουν να έχουν χειρότερη έκβαση σε σύγκριση με τους ασθενείς με υψηλή κυστατίνη C και υψηλή έκφραση AR.

Η συνολική επιβίωση σε μια ομάδα 99 ασθενών με την πιο προχωρημένο καρκίνο του προστάτη (Gleason βαθμού 4-5), οι οποίες χαρακτηρίζονται από υψηλή έκφραση του AR και χωρίστηκαν σε διάφορες ομάδες με βάση τα επίπεδα της κυστατίνης C (χαμηλής έντασης σκοράρει 0-1,5 και να σκοράρει υψηλής έντασης 2-3).

η

κυστατίνη C Εκφραση σε καρκίνο του προστάτη Κυτταρικές Γραμμές

Επειδή κυστατίνη C ήταν ρυθμισμένα προς τα κάτω σε ιστούς καρκίνου του προστάτη και σχετίζεται με αυξημένη έκφραση του ΜΜΡ2 που είναι γνωστό ότι συμβάλλουν στην εισβολή και μετάσταση όγκου, θέλαμε να ερευνήσει ο ρόλος της έκφρασης κυστατίνης C σε ανάπτυξη κυττάρων καρκίνου του προστάτη, την επιβίωση και εισβολή. Εξετάσαμε έκφραση κυστατίνη C σε τρία καρκίνου του προστάτη κυτταρικές γραμμές συμπεριλαμβανομένων των κυττάρων LNCaP ανδρογόνο ευαίσθητα και ανδρογόνου αναίσθητη PC3 και DU-145 κύτταρα (Σχήμα 3). Οι συγκεντρώσεις πρωτεΐνης κυστατίνης Ο στα υπερκείμενα μετρήθηκαν με ELISA, μετά την καλλιέργεια των κυττάρων σε μέσα άνευ ορού για 24 και 48 ώρες, αντίστοιχα. Είναι ενδιαφέρον ότι, τα κύτταρα LNCaP που είναι γνωστό ότι είναι μη επεμβατική παράγονται υψηλά επίπεδα κυστατίνης C, ενώ οι επεμβατικές κυτταρικές σειρές PC3 και DU-145 έδειξε χαμηλότερα επίπεδα έκκρισης κυστατίνης C (Σχήμα 3). PC3 κύτταρα, με μέτριο επίπεδο έκφρασης κυστατίνης C επιλέχθηκαν για επακόλουθη λειτουργική μελέτες για την αξιολόγηση των επιδράσεων της αναγκαστικής υπερέκφραση και knockdown του κυστατίνης C επί PC3 κυττάρων εισβολής.

δοκιμασία ELISA των υπερκειμένων από τρία διαφορετικά κύτταρα καρκίνου του προστάτη γραμμές, οι οποίες καλλιεργήθηκαν 24 ώρες ή 48 ώρες πριν από το πείραμα διεξήχθη. Τα δεδομένα παρουσιάζονται ως μέσος όρος των τριπλών ± SD για 3 πειράματα.

Η

κάτω ρύθμιση των Cystatin C είναι Συνδέεται με την εισβολή των PC3 κύτταρα

Δεδομένου ότι τα κύτταρα PC3 είναι επεμβατικές, εκφράζουν μέτριο επίπεδο της κυστατίνης C και έχουν έλλειψη λειτουργικής AR, έτσι μπορεί να είναι ένα εξαιρετικό μοντέλο για συνδυασμένες μελέτες για κυστατίνη C και τη λειτουργία AR. Κύτταρα PC3 διαμολύνθηκαν με κυστατίνη φορέα C siRNA ή φορέα siRNA ελέγχου για 24 ώρες. Η ανάλυση ανοσοκηλιδώσεως επιβεβαίωσε ότι κυστατίνη C siRNA μπλοκάρει συγκεκριμένα την πρωτεΐνη έκφραση της κυστατίνης C στα κύτταρα PC3 (Εικόνα 4Α). Για να εξεταστεί η επίδραση της κυστατίνης Ο γκρεμίζω για τη διαμόρφωση της επεμβατική δραστηριότητα των κυττάρων PC3, in vitro δοκιμασίες επεμβατική δραστηριότητα διεξήχθησαν για να εκτιμηθεί η αναλογία των κυττάρων PC3 που εκφράζουν κυστατίνη C siRNA ή ελέγχουν siRNA που έχουν εισβάλλει μέσα Matrigel επικαλυμμένων μεμβρανών. Ένα σημαντικά υψηλότερο ποσοστό των κυττάρων PC3, παροδικά επιμολυσμένα με κυστατίνη C siRNA, μετανάστευσαν μέσω Matrigel επικαλυμμένα θαλάμων σε σύγκριση με εκείνη των κυττάρων PC3 διαμολύνθηκαν με έλεγχο siRNA (Εικόνα 4Β-C). Στη συνέχεια, θα εκτιμηθεί αν knockdown κυστατίνη C μπορεί να έχει επίδραση επί του πολλαπλασιασμού των κυττάρων καρκίνου του προστάτη. PC3 κύτταρα επιμολυσμένα με κυστατίνη C siRNA ή siRNA ελέγχου υποβλήθηκαν σε δοκιμασία ενσωμάτωσης BrdU. Ο κυτταρικός πολλαπλασιασμός αξιολογήθηκε μετά από 24 ώρες ή 48 ώρες επιμόλυνσης. Δεν παρατηρήθηκαν σημαντικές διαφορές στα ποσοστά πολλαπλασιασμού μεταξύ των κυττάρων PC3 διαμολύνθηκαν με siRNA σε C ή ελέγχου siRNA κυστατίνη παρατηρήθηκαν (δεν παρουσιάζονται τα δεδομένα), υποδεικνύοντας ότι η αναστολή της κυστατίνης C δεν είχε επίδραση επί του πολλαπλασιασμού των κυττάρων PC3. Μπορούμε επίσης να αξιολογήσει την επίδραση της κυστατίνης C για τη διανομή του κυτταρικού κύκλου. Η ανάλυση κυτταρομετρίας ροής πραγματοποιήθηκε σε κύτταρα επιμολυσμένα με κυστατίνη C siRNA ή ελέγχουν siRNA, δεν παρατηρήσαμε ότι αποσιώπηση της κυστατίνης C είχαν οποιαδήποτε σημαντική επίδραση στην κατανομή των φάσεων του κυτταρικού κύκλου σε κύτταρα PC3 (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Στη συνέχεια, θέλαμε να δοκιμάσουμε αν η αναστολή της κυστατίνης C μπορεί να έχει οποιαδήποτε επίδραση επί των επιβιώσεις των κυττάρων PC3 σε απόκριση προς την αγωγή με κυτταροτοξικό παράγοντα. PC3 κύτταρα επιμολυσμένα με siRNA σε C ή ελέγχου siRNA κυστατίνη υποβλήθηκαν σε θεραπεία με την καμπτοθεκίνη κυτταροτοξικό παράγοντα στα 10 ng /ml για να επάγει απόπτωση. Η επεξεργασία των κυττάρων PC3 με καμπτοθεκίνη επαγόμενη επιτυχώς κυτταρικό θάνατο σε κύτταρα PC3. PC3 κύτταρα επιμολυσμένα με siRNA κατά κυστατίνη C, ωστόσο, δεν έδειξε σημαντική διαφορά στην καμπτοθεκίνη απόπτωση σε σύγκριση με PC3 κύτταρα επιμολυσμένα με siRNA ελέγχου (δεν παρουσιάζονται τα δεδομένα).

Α). Ανοσοκηλίδωση της κυστατίνης C στα κύτταρα PC3 μετά από θεραπεία με έλεγχο (siCtr) και κυστατίνη C (siCys) siRNA. Β-Γ) προσδιορισμός Εισβολή σε matrigel- επικαλυμμένα Boyden θαλάμων των PC3 κυττάρων με knockdown του κυστατίνης C. αντιπροσωπευτική εικόνα των εισβάλλοντα κύτταρα φαίνεται στο (Β) και ποσοτική ανάλυση της εισβολής με μέτρηση της απορρόφησης μετά από χρώση των κυττάρων με την εισβολή κυττάρων Stain Διάλυμα περιέχον κρυσταλλικό ιώδες παρέχονται στην ανάλυση Transwell εισβολή (Chemicon, Millipore, CA) (γ) στοιχεία ± SD είναι αντιπροσωπευτικά για τουλάχιστον 3 πειράματα? * ρ & lt?. 0.01 (Student t-test)

η

Επειδή αναστολή της κυστατίνης C στα κύτταρα PC3 είχε σημαντική επίδραση στη PC3 κυττάρων εισβολή, μπορούμε επομένως αξιολόγησε κατά πόσο η υπερέκφραση του κυστατίνης C μπορεί να έχει ανασταλτικές επιδράσεις στη διεισδυτική συμπεριφορά των κυττάρων PC3. Για να προκληθεί υπερέκφραση κυστατίνης C στα κύτταρα PC3, κύτταρα PC3 διαμολύνθηκαν με φορέα έκφρασης κυστατίνη C ή με έναν κενό φορέα έκφρασης. Η σταθερή υπερέκφραση της κυστατίνης C στα κύτταρα PC3 επιτεύχθηκε μετά αντιβιοτικό επιλογής. Η υπερέκφραση του κυστατίνης C στα κύτταρα PC3 επιβεβαιώθηκε με ανοσοστύπωμα ανάλυση (Σχήμα 5Α). Όταν διερευνήθηκε η επίδραση της υπερέκφρασης του κυστατίνης C επί PC3 κυττάρων εισβολής, παρατηρήσαμε ότι ένα σημαντικά χαμηλότερο ποσοστό των κυττάρων PC3 που υπερεκφράζουν κυστατίνη C μετανάστευσαν μέσω Matrigel επικαλυμμένα θαλάμους Boyden σε σύγκριση με κύτταρα που εκφράζουν τον φορέα ελέγχου (Σχήμα 5Β-Γ). Στο σύνολό τους, τα τρέχοντα δεδομένα μας δείχνουν ένα σημαντικό ρόλο για κυστατίνη C να αναστέλλουν τον καρκίνο του προστάτη κυτταρική εισβολή.

Α) Ανοσοστύπωμα κυστατίνης C στα κύτταρα PC3 μετά από σταθερή επιμόλυνση με pcDNA3.1 και κυστατίνη πλασμίδια C-pcDNA3.1 . Σταθεροί κλώνοι καθιερώθηκαν μετά από 2 εβδομάδες επιλογής σε νεομυκίνη. Β-Γ) προσδιορισμός διήθηση των PC3 κυττάρων με υπερέκφραση του ελέγχου ή κυστατίνης C πλασμίδια. Αντιπροσωπευτικά εικόνες των κυττάρων που φαίνεται στο Β και ποσοτικοποίησης (απορρόφηση) των δεδομένων + SD από 3 ανεξάρτητα πειράματα δείχνεται στο C. * ρ & lt? 0,05 (Student t-test)

Η

Ο ρόλος του Erk2. μονοπάτι στο κυστατίνη C διεγερτών στην εισβολή

στη συνέχεια, θελήσαμε να διερευνήσουμε τους κυτταρικούς μηχανισμούς και μονοπάτια με τα οποία κυστατίνη C ασκεί την επίδρασή της στην PC3 κυττάρων εισβολής. Οι οδοί σηματοδότησης ΜΑΡΚ και μονοπάτια ΤΟΡβ έχουν δειχθεί ότι έχουν λειτουργικό δεσμό με πρωτεολυτικά ένζυμα συμπεριλαμβανομένης της καθεψίνης οικογένεια πρωτεϊνών για την προώθηση της αποδόμησης της βασικής μεμβράνης, ενισχύει κυτταρική εισβολή και διατηρεί την ανάπτυξη των κυττάρων του όγκου. Smad 2/3 πρωτεΐνες είναι τα κατάντη δράστες της TGFβ σηματοδότησης και ο στόχος των μονοπατιών /ERK MAPK, καθώς, εμείς, ως εκ τούτου ήθελε να διερευνήσει κατά πόσον κυστατίνη C μπορούν να έχουν άμεση λειτουργική σύνδεση με αυτά τα μονοπάτια σηματοδότησης. Εμείς πρώτον εξετάστηκε αν κυστατίνη C μπορεί να μεσολαβούν τις δραστηριότητες των ΜΑΡΚ και ΤΟΡβ με τη ρύθμιση της έκφρασης και φωσφορυλίωσης του Erk1 και Smad2 /2 σε κύτταρα PC3. Εξετάσαμε φωσφορυλίωση Smad2 και Erk1 /2 σε κύτταρα PC3 επιμολυσμένα με κυστατίνη C siRNA ή ελέγχου siRNA (Σχήμα 6Α). ανάλυση ανοσοκηλιδώσεως απεκάλυψε ότι παρατηρήθηκε μία αύξηση στο επίπεδο της φωσφορυλιωμένης Smad2 και Erk1 /2 σε κύτταρα PC3 επιμολυσμένα με κυστατίνη C siRNA, υποδηλώνοντας ότι και οι δύο Smad2 και Erk1 /2 μπορεί να είναι τα κατάντη δράστες αναστέλλεται από κυστατίνη C (Σχήμα 6Α).

Α). Η ανάλυση ανοσοκηλιδώσεως της Ρ-Smad2 σε κύτταρα PC-3 μετά την φίμωση του Smad2. Π.Χ). δοκιμασία Εισβολή σε κύτταρα PC-3 μετά την φίμωση του Smad2 ταυτόχρονα με knockdown του κυστατίνης C. Οι αντιπροσωπευτικές εικόνες φαίνεται στο Β και ποσοτικά αποτελέσματα 3 ανεξαρτήτων πειραμάτων παρουσιάζονται στο C. * ρ & lt? 0,05 (Student t-test). ΡΕ). Ανοσοστύπωμα με αντίσωμα έναντι φωσφορυλιωμένης (Ser383) -Elk1 και κυστατίνη C στα προϊόντα λύσης από κύτταρα PC3 διαμολύνθηκαν παροδικά με siRNA κυστατίνη C και έχασε siRNA και συν-θεραπεία με αναστολέα Erk2 (25 μΜ). Σημειώστε ότι το μπλοκ αναστολέας Εγκ2 κατάντη φωσφορυλίωση ΕΙκ1 στόχος της Εγκ2 σε κύτταρα με νοκ ντάουν της κυστατίνης C. Τα δεδομένα είναι αντιπροσωπευτικά για 2 πειράματα. Ε-Ρ). δοκιμασία Εισβολή σε κύτταρα PC-3 μετά την ταυτόχρονη αποσιώπηση της κυστατίνης C και η αναστολή της Erk2 με εκλεκτικό αναστολέα. Οι αντιπροσωπευτικές εικόνες που παρουσιάζονται στο D και ποσοτικά αποτελέσματα των 2 ανεξάρτητων πειραμάτων παρουσιάζονται στο Ε * p & lt? 0,05, # p & lt?. 0.01 (Student t-test)

Η

Για να εξετάσει λειτουργικά το ρόλο της Smad2 ενεργοποίηση σε κύτταρα PC3, ελέγξαμε αν στοχευμένες Smad2 νοκ ντάουν είχε καμία επίδραση στην καρκινικών κυττάρων εισβολής. Σχεδιάσαμε siRNA να στοχεύουν συγκεκριμένα Smad2. Αναστολή της φωσφορυλίωσης Smad2 μέσω Smad2 siRNA μεσολαβεί knockdown επιτεύχθηκε σε κύτταρα PC3 και επιβεβαιώθηκε με ανοσοστύπωμα (δεν παρουσιάζονται τα δεδομένα). Ιη vitro δοκιμασίες δραστικότητας επεμβατική αποκάλυψε ότι η αναλογία των μεταναστεύουν και εισβάλλουν PC3 κύτταρα ήταν παρόμοια σε κύτταρα PC3 επιμολυσμένα με Smad2 siRNA και σε κύτταρα PC3 διαμολύνθηκαν με έλεγχο siRNA (Σχήμα 6Β-C). Στη συνέχεια εκτελούνται ταυτόχρονα στοχευμένη knockdown του Smad2 και κυστατίνης C στα κύτταρα PC3. PC3 κύτταρα που συν-επιμολύνθηκαν με κυστατίνη C siRNA και Smad 2 siRNA ή ελέγχου siRNA εφαρμόσθηκαν περαιτέρω επί του θαλάμου εισβολή για την δοκιμασία εισβολή. Δεν υπήρχαν διαφορές στο ποσοστό εισβολής μεταξύ PC3 κύτταρα που συν-εκφράζουν κυστατίνη C siRNA και Smad 2 siRNA και τα κύτταρα PC3 συνεκφράζουν κυστατίνη C siRNA και τον έλεγχο siRNA (Σχήμα 6Β-C), υποδηλώνοντας ότι η αναστολή της Smad2 δεν είχε επιπλέον συνέπειες για διαμορφώνοντας διήθηση των PC3 κυττάρων που εκφράζουν κυστατίνη C siRNA και ότι Smad2 δεν μπορούν να συμμετέχουν στην κυστατίνη C με τη μεσολάβηση των κυττάρων όγκου εισβολή.

Επειδή μια αύξηση στο επίπεδο της φωσφορυλιωμένης Erk1 /2 παρατηρήθηκε επίσης σε κύτταρα PC3 επιμολυσμένα με κυστατίνης C siRNA στα παραπάνω πειράματα, μπορούμε επομένως ερευνήθηκε περαιτέρω εάν η ενεργοποίηση του Erk1 /2 μεσολαβεί την ανασταλτική επίδραση της κυστατίνης C επί PC3 κυττάρων εισβολή. Η θεραπεία με έναν αναστολέα ΜΕΚ (PD98059), ένας γενικός αναστολέας των ΜΑΡΚ δεν είχε καμία επίδραση στην επεμβατική συμπεριφορά των κυττάρων PC3 που εκφράζουν κυστατίνη C siRNA ή ελέγχου siRNA (δεν παρουσιάζονται τα δεδομένα). Αποφασίσαμε να αναστέλλουν εκλεκτικά τη δράση των Erk 1 ή Εγκ2.

Κατ ‘αρχάς, θα αναστέλλεται η έκφραση Erk 1 μέσω siRNA στοχευμένες νοκ ντάουν. Αναστολή της Erk 1 δεν είχε καμία επίδραση στη διήθηση των PC3 κυττάρων που εκφράζουν κυστατίνη C siRNA (δεν παρουσιάζονται τα δεδομένα), υποδεικνύοντας ότι Erk1 δεν μπορεί να συμμετέχει στην κυστατίνη C που σχετίζονται με όγκους εισβολή κυττάρων. Στη συνέχεια, θα χρησιμοποιείται εκλεκτικός αναστολέας της δραστηριότητας Erk2, το οποίο μπλοκάρει τη φωσφορυλίωση του Elk-1, ένα προς τα κάτω στόχος του Erk2, σε κύτταρα PC3 που εκφράζουν κυστατίνη C siRNA (Σχήμα 6D). Παρατηρήσαμε ότι ο αναστολέας Erk 2 ανέστειλε σημαντικά τον ρυθμό εξάπλωσης σε κύτταρα που εκφράζουν κυστατίνη C siRNA σε σύγκριση με κύτταρα που εκφράζουν ελέγχου siRNA (Σχήμα 6Ε-F). Ο αναστολέας Erk2 δεν είχε καμία επίδραση στον πολλαπλασιασμό των κυττάρων σε κύτταρα PC3 υπό τις ίδιες συνθήκες (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Αυτά τα αποτελέσματα υποδηλώνουν ότι Erk2 μπορεί να είναι ένας προς τα κάτω στόχος του κυστατίνης C. Αυτό υποδηλώνει ότι PC3 κύτταρα τα οποία έχουν χαμηλή κυστατίνη C και υψηλό επίπεδο δραστηριότητας Erk2 μπορεί να γίνει πιο επεμβατική σε σύγκριση με κύτταρα με φυσιολογικό επίπεδο κυστατίνης C και δραστικότητα Erk 2. Περαιτέρω, κυστατίνης C μπορεί να προκαλεί την εισβολή των καρκινικών κυττάρων μέσω της ΜΑΡΚ /μονοπατιών σηματοδότησης Erk2.

AR Βελτιώνει την κυτταρική διείσδυση σε απουσία κυστατίνης Ο

AR είναι ένα σημαντικό προς τα κάτω στόχος του ΜΑΡΚ /ΕΚΚ, και η αναστολή της δραστικότητας 2 Erk1 /θα οδηγήσει σε μειωμένη έκφραση του AR σε κύτταρα καρκίνου του προστάτη [41]. Η υπερέκφραση του AR σε κύτταρα PC3 έχει δειχθεί ότι επηρεάζουν την κυτταρική διείσδυση και ανάπτυξη in vitro [42]. Δεδομένου ότι έχουμε δημιουργήσει μια άμεση λειτουργική σχέση μεταξύ κυστατίνη C και δραστηριότητα Erk2, και έχουμε αποδείξει ότι οι ασθενείς του προστάτη με χαμηλά επίπεδα κυστατίνης C και ταυτόχρονη υψηλά επίπεδα AR έδειξε μια τάση προς μια χειρότερη έκβαση, σε σύγκριση με τους ασθενείς με υψηλή κυστατίνη C και υψηλή επίπεδα AR, μπορούμε επομένως θέλαμε να εκτιμηθεί η κυτταρική και μοριακή σύνδεση μεταξύ κυστατίνη C και AR. Χρησιμοποιήσαμε κύτταρα PC3 που στερούνται τη λειτουργική AR να διερευνήσει ένα ρόλο συνεργασίας μεταξύ των AR και κυστατίνη C. PC3 κύτταρα συν-επιμολύνθηκαν με φορέα έκφρασης AR μαζί με κυστατίνη διάνυσμα C siRNA ορίζεται ως «siCysC, AR» ή με έναν φορέα ελέγχου που ορίζεται ως «sictr, AR». Κατά παρόμοιο τρόπο, τα κύτταρα PC3 ήταν επίσης συν-επιμολύνθηκαν με ένα φορέα CMV και κυστατίνη C siRNA (που χαρακτηρίζονται ως «siCysC, CMV») ή CMV φορέα έκφρασης και ελέγχου siRNA ( «sictr, CMV»). Τα επιμολυσμένα κύτταρα PC3 υποβλήθηκαν στη συνέχεια για δοκιμασία εισβολή. Η υπερέκφραση του AR με ταυτόχρονη knockdown του κυστατίνης C οδήγησε σε σημαντική αύξηση του ποσοστού της εισβολής των PC3 κυττάρων σε σύγκριση με τους μάρτυρες (Σχήμα 7Α-Β). Έτσι, αυτά τα αποτελέσματα υποδηλώνουν ότι PC3 κύτταρα που στερούνται την κυστατίνη C, αλλά έχουν υψηλό επίπεδο AR μπορεί να είναι πιο επεμβατική από τα κύτταρα ελέγχου με φυσιολογικό επίπεδο κυστατίνης C και AR.

Α-Β). δοκιμασία εισβολής των κυττάρων PC3 επιμολυσμένα με τον έλεγχο του siRNA ή κατά κυστατίνη C και συνέκφραση AR. Οι εικόνες από το αντιπροσωπευτικό πείραμα παρουσιάζονται στο Α και οι ποσοτικοί απορροφήσεις της εισβολής κυττάρων (* p & lt? 0,05, κυστατίνη C siRNA έναντι του ελέγχου siRNA, # p & lt? 0,05 AR έναντι CMV, Student T-test) μετά δηλώνοντας με τηλέφωνο Stain διάλυμα που παρέχεται σε ο προσδιορισμός Transwell εισβολή (Chemicon, Millipore, CA) παρουσιάζονται στο Β Τα δεδομένα είναι αντιπροσωπευτικά για 3 ανεξάρτητα πειράματα.

η

Συζήτηση

στην παρούσα μελέτη, δείξαμε ότι

in vitro

αποσιώπηση της κυστατίνης C από συγκεκριμένες siRNA αυξημένη καρκινικών κυττάρων εισβολή σε συνεργασία με Εγκ2 και σηματοδότηση AR. Εμείς κατέρρευσε μυθιστόρημα μοριακούς μηχανισμούς με τους οποίους κυστατίνη C επηρεάζει όγκου εισβολή των κυττάρων αποδεικνύοντας ότι η έκφραση κυστατίνη C ήταν προς τα κάτω σε πρωτοπαθείς όγκους του προστάτη σε σύγκριση με καλοήθεις ιστούς σε 448 ασθενείς. Χρησιμοποιώντας ένα TMA περιλαμβάνει καλοήθεις και όγκου δείγματα από 448 ασθενείς, δείξαμε μια αντίστροφη συσχέτιση μεταξύ κυστατίνη C και της έκφρασης ΜΜΡ2. Αρκετές μελέτες έχουν δείξει με πειστικό τρόπο ότι κυστατίνη C είναι ένας σημαντικός αναστολέας της καθεψίνης Β και των κυττάρων του όγκου εισβολή [43], [44]. Καθεψίνης επιρροές Β μικροπεριβάλλον του όγκου με αποικοδόμηση της εξωκυττάριας μήτρας και με ενεργοποίηση άλλων πρωτεολυτικών ενζύμων όπως ο ενεργοποιητής προ-πλασμινογόνου τύπου ουροκινάσης (pro-υΡΑ) και μεταλλοπρωτεάσες μήτρας (MMPs), έτσι ώστε τα καρκινικά κύτταρα μπορούν ενεργώς εισβάλλουν και μετάσταση [45]. Η υπερέκφραση του κυστατίνης C έχει αποδειχθεί ότι αναστέλλει την επιθετική πιθανότητα του ανθρώπινου μελανώματος και κυτταρικές γραμμές γλοιοβλαστώματος [36], [43]. παρόν εύρημα μας από την έρευνα των κλινικών υλικών δείχνει ότι υπάρχει μια άμεση σχέση μεταξύ κυστατίνη C και εξωκυτταρική πρωτεΐνη ΜΜΡ2 μήτρας σε καρκίνο του προστάτη. Δεν έχουν ερευνήσει το ρόλο των κυστατίνης C σε διαμόρφωση των δραστηριοτήτων καθεψίνης Β σε καρκινικά κύτταρα προστάτη, ωστόσο, είναι ένα ανοικτό ενδεχόμενο λαμβάνοντας υπόψη τις παρόμοιους συσχετισμούς άλλο τύπο όγκων. Proteome υπογραφές που είναι χαρακτηριστικά της πρωτεόλυσης αποκάλυψε διάσπασης των πολλών γνωστών υποστρωμάτων ΜΜΡ-2 στο κυτταρικό επίπεδο. Πρωτεομική απόδειξη της MMP-2 επεξεργασία νέων υποστρωμάτων βρέθηκε. πρωτεΐνη κυστατίνης Ο είναι ένα από το υπόστρωμα που διασπάται με ΜΜΡ-2 [40]. Παρέχουμε περαιτέρω στοιχεία που να υποστηρίζουν μια προηγουμένως προτεινόμενο ρόλο της κυστατίνης C για την πρόληψη ογκογένεσης και καρκινικές κυτταρικές διεισδυτικότητα, πιθανώς λόγω της ικανότητάς της να αναστέλλει τη δραστηριότητα των πρωτεϊνών εξωκυτταρικής μήτρας [46], [47].

μας λειτουργική ανάλυση σε PC-3 κύτταρα κατέδειξαν περαιτέρω ότι η αναστολή της κυστατίνης C μέσω siRNA μεσολάβηση knockdown είχε ως αποτέλεσμα σημαντική αύξηση του ποσοστού των διήθηση των PC3 κυττάρων. Αυτή η παρατήρηση είναι συνεπής με προηγούμενες επίδειξη σε πρωτογενείς όγκους του προστάτη, όπου οι πιο επιθετικοί όγκοι είχαν έκφραση πολύ χαμηλά ή μη ανιχνεύσιμα κυστατίνης C. Έτσι, κυστατίνης C μπορεί να είναι λειτουργικά σημαντικό για τα κύτταρα να διατηρήσει τη φυσιολογική συμπεριφορά, η οποία είναι σε συμφωνία με παρόντα αποτελέσματα μας ότι τα κύτταρα PC3 που υπερεκφράζουν κυστατίνη C μέσω παροδικής επιμόλυνσης εμφανίζεται λιγότερο επεμβατική φαινοτύπους.

Η οδός Erk-ΜΑΡΚ είναι μια κοινός μηχανισμός σηματοδότησης για πολλαπλούς αυξητικούς παράγοντες που εμπλέκονται στην μεταστατική εξάπλωση και φαρμακευτικής αντίστασης [48]. Με τη χρήση siRNA κατά κυστατίνη C, δείξαμε ότι κυστατίνη C συσχετίστηκε αντίστροφα με την επεμβατική συμπεριφορά των κυττάρων PC3, και ότι κυστατίνη Ο ενέχεται στη ρύθμιση της δραστικότητας κινάσης Erk.