Αφηρημένο

Phellinus linteus (PL) μανιτάρι περιουσιακά αντι-όγκου. Αναφέραμε προηγουμένως ότι η θεραπεία με PL προκαλείται καλλιεργημένα ανθρώπινα κύτταρα καρκίνου του προστάτη να υφίστανται απόπτωση. Για την περαιτέρω μελέτη των μηχανισμών της PL-απόπτωση, εκτελέσαμε δοκιμασία ξενομοσχεύματος, μαζί με

in vitro

δοκιμασίες, για να αξιολογηθεί η επίδραση της PL στην γένεση και την εξέλιξη των όγκων που σχηματίζονται από τον εμβολιασμό του PC3 καρκίνου του προστάτη ή κύτταρα DU145. Μετά τον εμβολιασμό, γυμνοί ποντικοί εγχύθηκαν με PL κάθε δύο ημέρες επί 12 ημέρες. Αν και η θεραπεία PL δεν εμπόδισε το σχηματισμό των όγκων που εμβολιάστηκαν, ο ρυθμός ανάπτυξης των όγκων μετά τη θεραπεία PL ήταν δραματικά εξασθενημένη. Στη συνέχεια εξετάσαμε την επίδραση των PL για τους όγκους στο 12 ημέρες μετά τον εμβολιασμό. Μετά εμβολιασμένες όγκοι έφτασαν ένα ορισμένο μέγεθος, PL χορηγήθηκε στους ποντικούς με υποδόρια ένεση. Η ανάλυση ιστοχημεία ή ανοσοχημείας έδειξαν ότι η απόπτωση συνέβη με την ενεργοποίηση της κασπάσης 3 στους όγκους που σχηματίζονται με ενοφθαλμισμό DU145 καρκίνου του προστάτη ή PC3 κύτταρα. Τα δεδομένα ήταν σε καλή συμφωνία με εκείνη από καλλιεργημένα κύτταρα. Έτσι, in vivo μελέτη μας δείχνει ότι PL όχι μόνο είναι σε θέση να μετριάσει την ανάπτυξη του όγκου, αλλά επίσης να προκαλέσει υποχώρηση του όγκου με επαγωγή απόπτωσης

Παράθεση:. Tsuji Τ, Du W, Nishioka Τ, Chen L, D Yamamoto , Chen CY (2010) Phellinus Linteus Απόσπασμα ευαισθητοποιεί κύτταρα προχωρημένους καρκίνο του προστάτη σε απόπτωση σε αθυμικά γυμνά ποντίκια. PLoS ONE 5 (3): e9885. doi: 10.1371 /journal.pone.0009885

Επιμέλεια: Syed A. Αζίζ, Health Canada, Καναδάς

Ελήφθη: 3 Δεκεμβρίου 2009? Αποδεκτές: 11 του Φεβρουαρίου, 2010? Δημοσιεύθηκε: 31 Μάρτη 2010

Copyright: © 2010 Tsuji et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίζεται από τη χρηματοδότηση από JCRT Ίδρυμα να ΣΝΚ. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στη μελέτη, συλλογή και ανάλυση δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν ανταγωνιστικά συμφέροντα υπάρχουν

Εισαγωγή

Ο καρκίνος του προστάτη είναι μια κατεστραμμένη νόσου στους άνδρες. Αν και θεραπείες (όπως η χειρουργική επέμβαση ή ανδρογόνων) έχουν βελτιώσει το ποσοστό επιβίωσης των ασθενών, έλλειψη επιτυχίας με ορμονο-ανθεκτικό καρκίνο του προστάτη παραμένει. Οι προηγμένες όγκοι είναι συχνά ανθεκτικά σε χημειοθεραπευτικά φάρμακα. Αν και οι μηχανισμοί για την αντοχή είναι ασαφείς, έχει υποτεθεί ότι η ανάπτυξη των όγκων, όπως ο καρκίνος του προστάτη πυρίμαχα, σχετίζεται με τη συσσώρευση των γενετικών ή επιγενετικών αλλοιώσεις. Στις ασιατικές, PL είναι ένα από τα καλά εδραιωμένη φαρμακευτικά μανιτάρια που έχουν χρησιμοποιήσει για τη θεραπεία διαφόρων ανθρώπινων κακοηθειών. Μελέτες έδειξαν ότι το υδατοδιαλυτό κλάσμα PL είναι βιολογικά ενεργό, το οποίο πιθανώς είναι πολυσακχαρίτης [1] – [3]. Έχει επίσης δειχθεί ότι PL είναι σε θέση να καταστείλει τους όγκους

in vitro

είτε έμμεσα ενισχύοντας το ανοσοποιητικό σύστημα του ξενιστή, ή απευθείας με την επαγωγή απόπτωσης σε καρκινικά κύτταρα [4] – [6]. Πρόσφατα, αναφέρθηκε ότι PL είναι αξιοσημείωτα αποτελεσματικό στην αναστολή της ανάπτυξης του καρκίνου του προστάτη διαφόρων κυτταρικών γραμμών χωρίς τοξικές επιδράσεις σε φυσιολογικό προστάτη επιθηλιακά κύτταρα [7]. Από PL κατέχει τις αντι-όγκου, αντι-αγγειογενετική και ανοσοτροποποιητικές ιδιότητες, επέστησε την ευρεία συμφέροντα στην Ασία για να αναπτυχθεί για την θεραπευτική αντι-καρκίνου. Προκειμένου να αναπτυχθεί αυτό το φαρμακευτικό μανιτάρι ως αντι-προστάτη θεραπεία του καρκίνου, απαιτείται μια καλύτερη κατανόηση των υποκείμενων μοριακών μηχανισμών των λειτουργιών PL.

Ένα δυναμικό ενός φαρμάκου να επάγει απόπτωση έχει χρησιμοποιηθεί ευρέως ως μια στρατηγική για την την ανάπτυξη νέων θεραπειών του καρκίνου. Είναι γνωστό ότι η απόπτωση μπορεί να προκληθεί από μια ποικιλία εσωτερικών ή εξωτερικών σημάτων. Οι κασπάσες, μία πολύ συντηρημένη οικογένεια των πρωτεασών κυστεΐνης, είναι βασικά αποπτωτικά τελεστές σε κύτταρα και παίζουν κρίσιμους ρόλους στη ρύθμιση της απόπτωσης μέσω μιας αντίδρασης διάσπασης αλυσίδα [8], [9]. Οι κασπάσες υφίσταται ως προένζυμα στο κυτοσόλιο των κυττάρων και ενεργοποιούνται μέσω πρωτεόλυσης. Μετά ερεθίσματα κυτταρικού θανάτου, της κασπάσης 8, ως εκκινητή, προκαλεί την ενεργοποίηση του κατάντη κασπάσες ενέργειας 3 και 7, με αποτέλεσμα την διάσπαση BID και την απελευθέρωση κυτοχρώματος c [10] – [12]. Η απελευθέρωση του κυτοχρώματος c από τα μιτοχόνδρια στο κυτοσόλιο προκαλεί το σχηματισμό του αποπτωσώματος, η οποία με τη σειρά της ενεργοποιεί την εγγενή μηχανήματα αποπτωτικά. PL έχει αποδειχθεί ότι προκαλεί καρκίνο του προστάτη κύτταρα να υποστούν απόπτωση πυροδοτώντας αλληλουχίας κασπάσης [6], [7]. Περαιτέρω, χαμηλές δόσεις ντοξορουμπικίνης (ένα αντικαρκινικό φάρμακο), σε συνδυασμό με χαμηλές συγκεντρώσεις PL, έχουν μια συνεργική επίδραση στην επαγωγή της απόπτωσης σε ανθρώπινα κύτταρα καρκίνου του προστάτη [13].

Προηγουμένως, έχουμε αναφερθεί ότι PL είναι σε θέση να ευαισθητοποιεί καλλιεργημένα κύτταρα καρκίνου προστάτη σε απόπτωση, στην οποία ενεργοποιήθηκαν κασπάσες [7]. παρούσα μελέτη μας, η συνέχιση της έρευνας του ακινήτου κατά του όγκου των PL, απέδειξε περαιτέρω την ικανότητα των PL να επάγει απόπτωση σε όγκους με ενοφθαλμισμό DU145 καρκίνου του προστάτη ή PC3 κυττάρων σε γυμνά ποντίκια. Δείξαμε ότι η έγχυση PL εξασθενημένων δραματικά την γένεση των όγκων σε γυμνούς ποντικούς μετά τον εμβολιασμό. Η μελέτη μας έδειξε επίσης ότι κατά την έγχυση PL, οι σχηματίζονται όγκοι με εμβολιασμό DU145 ή κύτταρα PC3 σε γυμνά ποντίκια υποβλήθηκαν σε παλινδρόμηση, πυροδοτώντας μια αποπτωτικών διεργασιών.

Μέθοδοι

Τα κύτταρα και τα αντιδραστήρια

Phellinus Linteus

σκόνη αγοράστηκε από Panbio-Tech (Taejon, Νότια Κορέα) και διαλύεται σε νερό. Μετά από βρασμό επί 5 λεπτά, διάλυμα PL φυγοκεντρήθηκε και το υπερκείμενο συλλέχθηκε για τη μελέτη. ΫΜΕΜ (τροποποιημένο μέσο Eagle κατά Dulbecco)? αντιβιοτικά (πενικιλλίνη και στρεπτομυκίνη) και τρυψίνη-ΕϋΤΑ αγοράσθηκαν από την Invitrogen. Ανθρώπινου καρκίνου του προστάτη PC3 κύτταρα (American Type Culture Collection) καλλιεργήθηκαν σε μέσο ϋΜΕΜ συμπληρωμένο με 10% ορό εμβρύου μόσχου απενεργοποιημένο με θέρμανση, 2 mM Ε-γλουταμίνη, 100 ενώνει /ml πενικιλλίνη, 100 μg /ml στρεπτομυκίνης.

χρησιμοποιήθηκαν (Taconic) στις ηλικίες των 4-6 εβδομάδων:

ξενομοσχεύματος Δοκιμασία

Άντρας γυμνά ποντίκια (Ncr-Foxn1nu NCRNU-MM, CrTac). Ανθρώπινα κύτταρα προστάτη PC3 καρκίνου του (5 χ 106) σε 100 μΙ PBS ενοφθαλμίστηκαν στην περιοχή του δεξιού πλευρού του κάθε ποντικού. Τρία ποντίκια χρησίμευσαν ως θετικός έλεγχος. Για την αναστολή του σχηματισμού όγκου, 6 ποντίκια υποβλήθηκαν σε αγωγή με PL (30 mg /kg σε 100 μΙ PBS) αμέσως μετά τον εμβολιασμό και στη συνέχεια χορηγείται η ίδια ποσότητα PL κάθε 2 ημέρες. Ένα άλλο 3 ποντίκια υποβλήθηκαν σε αγωγή με ίση ποσότητα διαλύματος ελέγχου μανιταριού Hitachi ακολουθώντας την ίδια χρονική πορεία με εκείνη που χρησιμοποιείται για PL. Τα μεγέθη των όγκων μετρήθηκαν κάθε 4 ημέρες με ένα παχύμετρο και υπολογίστηκαν σύμφωνα με τον τύπο Tamayko [14]. Για την παρακολούθηση υποχώρηση του όγκου, αφού τα εμφυτευμένα όγκοι έφθασαν περίπου 1,0 εκατοστά σε διάμετρο, τα ποντίκια υποβλήθηκαν σε αγωγή είτε με PL (30 mg /kg) ή την ίδια ποσότητα διαλύματος μανιτάρι ελέγχου κάθε 2 ημέρες. Δέκα ημέρες αργότερα, οι ποντικοί θανατώθηκαν και οι όγκοι απομονώθηκαν για ιστοπαθολογία ή ιστοχημεία ανάλυση.

ιστοπαθολογία ή ανοσοϊστοχημεία αναλύσεις

Απομονωμένα όγκοι μονιμοποιήθηκαν σε διάλυμα ουδέτερου παραφορμαλδεΰδης 4% ρυθμισμένο με φωσφορικό (ρΗ 7.4). Τα ιστολογικά δείγματα κόπηκαν και χρωματίστηκαν με αιματοξυλίνη /ηωσίνη (Η & amp? Ε) (. Σάντα Crutz Biotec), ΤΟΥΝΕΛ ή αντίστοιχα αντισώματα

Στατιστική ανάλυση

Μέσα και οι τυπικές αποκλίσεις των αποτελεσμάτων της. τα πειράματα υπολογιστεί. Πρότυπες αποκλίσεις εμφανίζονται ως ράβδοι σφάλματος στα σχήματα. Τ test του Student χρησιμοποιήθηκε και ένα

σ

αξία των & lt? 0,05 θεωρήθηκε σημαντική

Αποτελέσματα

PL εξασθενεί DU145 ή PC3 κύτταρα να σχηματίσουν όγκους σε άτριχα ποντίκια

Μελέτες έχουν δείξει ότι PL κατέχουν μία ιδιότητα κατά του όγκου [1], [6], [7]. Έχουμε αποδείξει ότι PL όχι μόνο είναι σε θέση να ξεκινήσει απόπτωση σε διάφορες κακοήθεις κυτταρικές σειρές καρκίνου του προστάτη, αλλά επάγουν G

1 σύλληψης σε φυσιολογικά επιθηλιακά κύτταρα του προστάτη [6], [7], [13]. Για να δοκιμαστεί περαιτέρω η αντικαρκινική δράση του PL, ξενομοσχεύματος δοκιμασία χρησιμοποιήθηκε. Μετά εμβολιασμένες ανθρώπινου καρκίνου του προστάτη PC3 κύτταρα σε γυμνούς ποντικούς υποδορίως, PL ήταν ταυτοχρόνως με ένεση στα ποντίκια. Στη συνέχεια, η ίδια ποσότητα PL εγχύθηκε στους ποντικούς κάθε δύο ημέρες. Δώδεκα ημέρες αργότερα, οι φωτογραφίες των ποντικών που φέρουν όγκους λήφθηκαν (Σχ. 1Α, άνω φωτογραφία) και τα πλακίδια τοποθετημένα με ιστούς όγκων βάφτηκαν με ΗΕ (Σχ. 1Β, κάτω πίνακας). Οι όγκοι σε ποντικούς που υπέστησαν αγωγή PL ήταν πολύ μικρότερη από εκείνη στους ποντικούς ελέγχου, και έδειξε ένα σαφές σχέδιο χρώσης ΤΕ.

A. DU145 ή PC3 κύτταρα εμβολιάστηκαν υποδορίως σε γυμνούς ποντικούς. Δώδεκα ημέρες αργότερα, οι φωτογραφίες των ποντικών που φέρουν τους όγκους εμβολιάστηκαν ελήφθησαν (άνω πάνελ). Οι όγκοι απομονώθηκαν από PL αγωγή ή ποντικούς ελέγχου. Τα πλακίδια τοποθετημένα με τους ιστούς του όγκου προετοιμάστηκαν και χρωματίστηκαν με ΗΕ χρωστική (κάτω πίνακας). Β και C. Μια ομάδα 6 ποντικών ενέθηκαν με PL (30 mg /kg) σε νερό από την ημέρα 0 και στη συνέχεια χορηγείται κάθε 2 ημέρες. Μια άλλη ομάδα 3 ήταν ως τους ελέγχους. Μία εβδομάδα αργότερα, όταν η εμβολιάζεται όγκος άρχισε να σχηματιστεί, τα μεγέθη των όγκων μετρήθηκαν κάθε 4 ημέρες.

Η

Μετρήσαμε επίσης τις διαμέτρους των όγκων που εμβολιάστηκαν, μια εβδομάδα αργότερα, μετά τον εμβολιασμό, όταν όλη η ποντίκια άρχισαν να δείχνουν το πρόσημο του σχηματισμού των στερεών μαζών όγκου. Οι μετρήσεις πάρθηκαν κάθε τέσσερις ημέρες για 12 ημέρες (Εικ. 1 Β και C). Την ημέρα 12, τα βρωμίζει όγκου ελέγχου από τον εμβολιασμό δύο κυτταρικές γραμμές ήταν περίπου περισσότερο από 2 πτυχώσεις μεγαλύτερες από εκείνες που αντιμετωπίζονται από PL. Για να αποκλεισθεί η πιθανότητα τοξικότητας παρέχονται από PL, το βάρος (Εικ. 2Α) και την κατανάλωση νερού (Σχ. 2Β) των ποντικών μετρήθηκαν και συγκρίθηκαν. Το PL-αγωγή ποντικοί είχαν μία παρόμοια κατανάλωση βάρος ή νερό ως μάρτυρες, γεγονός που υποδηλώνει ότι PL δεν είχε παρενέργειες επί επεξεργασμένο ή ποντικούς. Να καθορίσει περαιτέρω εάν η θεραπεία PL είχε οποιεσδήποτε τοξικές επιδράσεις στα ποντίκια, τα ήπατα και απομονώθηκαν από από τα ζώα. Η χρώση ιστοχημεία με HE χρωστική έδειξαν ότι οι δομές του ήπατος από ποντικούς PL-αγωγή ήταν παρόμοια με εκείνη που απομονώθηκε από τα ποντίκια ελέγχου (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Αμφότερα τα συκώτια εμφανίστηκε υγιής χωρίς οποιαδήποτε ένδειξη εκφυλισμού, ίνωση, απόπτωση ή νέκρωση. Η in vivo μελέτη προτείνει ότι PL είναι σε θέση να εξασθενούν την ταχύτητα της αύξησης των εμβολιασθέντων όγκων σε γυμνά ποντίκια.

Α και Β Μετά σχηματίστηκαν τα οζίδια του όγκου, το σωματικό βάρος (Α) και την κατανάλωση νερού (Β) του κάθε ποντικού με ή χωρίς αγωγή με PL μετρήθηκαν. Οι ράβδοι σφάλματος αντιπροσωπεύουν την τυπική απόκλιση από 3-6 ποντικούς.

Η

θεραπεία PL προκαλεί την οπισθοδρόμηση αύξηση στους όγκους εμβολιάστηκαν με καρκινικά κύτταρα του προστάτη

Στη συνέχεια εξετάσαμε την επίδραση της PL για την υφιστάμενων όγκων. Όταν οι όγκοι έφθασαν εμβολιάστηκαν με το μέγεθος των 1,0 cm σε διάμετρο, PL εγχύθηκε εντός των ποντικών κάθε δύο ημέρες για σύνολο δέκα ημέρες. Οι όγκοι απομονώθηκαν και προετοιμάστηκαν για ιστοπαθολογική ή immunohistochemitry ανάλυση. Η χρώση αποκάλυψε ότι οι όγκοι απομονώνονται από PL- ή το ποντίκι ελέγχου ήταν καλά περιγεγραμμένες με συνδετικούς ιστούς (Εικ. 3Α). Ο κυτταρικός θάνατος φαίνεται να παρουσιάζονται σε όγκους PL-αγωγή από τον εμβολιασμό δύο διαφορετικών καρκίνου του προστάτη κυτταρικών γραμμών με πολλά κενοτόπια χωρίς χρώση, η οποία ήταν απούσα στους όγκους ελέγχου. Να καθορίσει περαιτέρω εάν η απόπτωση συμβαίνει σε όγκους PL-επεξεργασία, ανάλυση ανοσοϊστοχημείας χρησιμοποιώντας χρώση TNUEL (για τον εντοπισμό ρηγμάτων της έλικας DNA) πραγματοποιήθηκε (Σχ. 3Β). Τα πλακίδια από όγκους PL-αγωγή έντονα βάφονται με βαφή TUNEL, αλλά μόνο λίγα TUNEL χρώση θετικά κύτταρα ανιχνεύθηκαν σε όγκους ελέγχου. Τα ποσοστά των κυττάρων χρωματίστηκαν TUNEL θετικά μετρήθηκε στον έλεγχο και PL-αγωγή όγκων (δεν παρουσιάζονται τα δεδομένα). Περισσότερο από το 30% των κυττάρων σε PL-αγωγή όγκων είχε σπάσει κλώνου DNA και πολύ μικρό ποσοστό των κυττάρων από τους όγκους ελέγχου (περίπου 5%) χρωματίζονται θετικά. Η χρώση ανοσοϊστοχημείας με χρήση αντι-κασπάσης 3 αντίσωμα πραγματοποιήθηκε επίσης για την ανίχνευση της έκφρασης της κασπάσης 3 (Σχ. 3C). Μεγάλοι αριθμοί των κυττάρων σε PL-αγωγή όγκου που σχηματίζεται από τον εμβολιασμό των κυττάρων PC3 αντέδρασαν με το αντίσωμα. Σε σύγκριση, μόνο λίγα κύτταρα στον όγκο ελέγχου που εκφράζεται σε υψηλό επίπεδο της κασπάσης 3. Παρόμοια αποτελέσματα ελήφθησαν από τους όγκους που σχηματίζονται από τον εμβολιασμό των κυττάρων DU145 (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Έτσι, τα αποτελέσματα δείχνουν ότι ο θάνατος κυττάρου προέκυψε σε PL-αγωγή όγκος είναι μέσω απόπτωσης.

A. Οι όγκοι παρασκευάστηκαν για χρώση αιματοξυλίνης και ηωσίνης. Β και C. Τα πλακίδια τοποθετημένα με τους ιστούς του όγκου χρωματίστηκαν με παράγοντα TUNEL (Β) ή αντι-κασπάσης 3 αντίσωμα (C).

Η

Για να δοκιμαστεί περαιτέρω η ικανότητα του PL να επάγει απόπτωση, DU145 και τα κύτταρα PC3 υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με PL σε 1 mg /ml ή 2 mg /ml για 48 ώρες. ανάλυση αννεξίνης V διεξήχθησαν (Εικ. 4). Μετά από θεραπεία με PL, περίπου 15% των PL-κατεργασμένων κυττάρων υπέστησαν απόπτωση, με έναν δοσο-εξαρτώμενο τρόπο. Μια γραμμή βάσης χρώση αννεξίνης V παρατηρήθηκε στους όγκους ελέγχου. Είναι ενδιαφέρον ότι, τα κύτταρα PC3 ήταν πιο ευαίσθητα σε PL από τα κύτταρα DU145. Συνολικά, η

in vitro

δεδομένα είναι συνεπής με εκείνη που λαμβάνεται από τα πειράματα σε ζώα.

Τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε αγωγή με 1 mg /ml ή 2 mg /ml για 48 ώρες, και στη συνέχεια χρωματίζονται με Οι μπάρες σφάλματος Annexin V. αντιπροσωπεύουν την τυπική απόκλιση από 3 ανεξάρτητα πειράματα.

η

Συζήτηση

Προηγουμένως, δείξαμε ότι PL επάγει καλλιεργημένα κύτταρα καρκίνου του προστάτη να υποστούν απόπτωση [7], [13 ]. Εδώ, με τη χρήση δοκιμασίας ξενομοσχεύματος, δείξαμε ότι PL είναι ικανό να προκαλεί μια αποπτωτική απόκριση

in vivo

να εμποδίσει την ανάπτυξη των όγκων που σχηματίζονται από τον εμβολιασμό του ανθρώπινου καρκίνου του προστάτη DU145 ή κύτταρα PC3. Η ανάλυση χρώσης ιστοχημεία έδειξε ότι η πλειονότητα των κυττάρων στους όγκους που απομονώθηκαν από ποντίκια PL-αγωγή είναι αποπτωτικά, που εκδηλώνεται με θετικώς βάφτηκαν με TUNEL και αντιδρά με ένα αντίσωμα αντι-κασπάσης 3. Η εμφάνιση της απόπτωσης καταδείχθηκε επίσης σε καλλιεργημένα DU145 ή PC3 κυττάρων μετά την αγωγή με PL για 48 σε ένα δοσοεξαρτώμενο τρόπο. Έτσι, η μελέτη μας, χρησιμοποιώντας το

in vivo

καθώς και

in vitro

δοκιμασίες, inidcates ότι η θεραπεία PL ξεκινά κασπάσης καταρράκτη να επάγει απόπτωση σε καρκινικά κύτταρα του προστάτη, η οποία παρέχει μια ισχυρή ένδειξη για το δυναμικό της PL ως αντι-προστάτη θεραπεία του καρκίνου.

είναι γνωστό ότι PL είναι μη τοξική σε γενικές γραμμές [1]. Προηγουμένως, αναφέραμε ότι PL, σε υψηλές δόσεις, προκαλεί επιθηλιακά κύτταρα των πνευμόνων ελέγχου για τη σύλληψη του G

1 φάση του κυτταρικού κύκλου αναστέλλοντας τη έκφραση της κυκλίνης D

1 και την αλληλεπίδρασή της με τον κύκλο που εξαρτώνται από κινάσες κύτταρο 4 και 6 [6]. Στην τρέχουσα μελέτη μας, τα δεδομένα από ιστοπαθολογική ανάλυση αποδεικνύουν ότι η έγχυση του PL σε άτριχα ποντίκια που εμβολιάστηκαν με είτε DU145 ή προστάτη PC3 κυττάρων καρκίνου δεν έχει καμία τοξική επίδραση στα ποντίκια, που εκδηλώνεται από το ότι η θεραπεία δεν παίζει κανένα ρόλο στην κατανάλωση ανάπτυξης ή το νερό των ποντικών. Σημαντικά, τα δείγματα ήπατος από ποντικούς που έλαβαν είναι φυσιολογικά χωρίς εκφυλισμό ή ίνωση. Είναι πιθανό ότι, όπως

in vitro

πειράματα, η θεραπεία με PL προκαλεί κυτταρική οδοφράγματος ελέγχει σε φυσιολογικούς ιστούς ή όργανα, η οποία δεν είναι επιβλαβής για τα ποντίκια. Στα εμβολιασμένα όγκους, την ίδια μεταχείριση φαίνεται να είναι πολύ κυτταροτοξικά.

προγραμματισμένος κυτταρικός θάνατος είναι σημαντικός μηχανήματα εξαιρουμένων των μη φυσιολογικών ή καρκινικών κυττάρων. Ενεργοποίηση των μελών της οικογένειας κασπάσης βρίσκεται στον πυρήνα της απόπτωσης, που αντιπροσωπεύει ένα σημείο τομής των διαφόρων αποπτωτικών οδών σε διάφορους τύπους καρκινικών κυττάρων, συμπεριλαμβανομένων των κυττάρων καρκίνου του προστάτη. TNF ή Fas /CD95 υποδοχείς, μιτοχονδριακών πρωτεϊνών (όπως το κυτόχρωμα c) και γράνζυμο είναι ικανά να επάγουν κυτταρικό θάνατο μέσω της ενεργοποίησης της αλληλουχίας κασπάσης [8], [9]. Βλάβη ή στρες στο ER ή Golgi έχει αποδειχθεί ότι είναι σε θέση να προκαλέσει την απόπτωση [15], [16]. Μελέτες έχουν δείξει ότι η ξεδιπλωμένη απόκριση πρωτεΐνη ή έλλειψη ασβεστίου είναι υπεύθυνη για την ER-μεσολαβούμενη απόπτωση [15]. ER στρες έχει αποδειχθεί ότι προκαλεί την μετατόπιση ορισμένων κασπάσες στο ER ή Golgi και την εκτέλεση της απόπτωσης εκεί. Ασβεστίου που απελευθερώνεται από το ER σε περιόδους ανεπάρκειας ΑΤΡ είναι ένα σημαντικό στοιχείο στην απόπτωση που επάγεται από βλάβη ισχαιμίας-επαναιμάτωσης. Έχουμε δείξει ότι η θεραπεία PL πυροδοτεί την ενεργοποίηση της κασπάσης σε καλλιεργημένα κύτταρα καρκίνου του προστάτη [7], [13]. Μας

in vivo

μελέτη δείχνει ότι η θεραπεία PL είναι επίσης σε θέση να ξεκινήσει απόπτωση μέσω ενεργοποίησης κασπάσης 3 που είναι ο τελεστής σε κασπάσης αλυσιδωτή αντίδραση. Η έρευνα για το αν οι άλλες κασπάσες εμπλέκονται στην επαγωγή της απόπτωσης

in vivo

βρίσκεται σε εξέλιξη.

PL είναι ένα από τα καθιερωμένα φάρμακα τα μανιτάρια που έχουν ληφθεί από το στόμα ως μια κοινή υγεία προώθηση συμπλήρωμα διατροφής ή ένα πρόσθετο για τη θεραπεία κακοηθειών στην Ασία εδώ και πολλές δεκαετίες. Η εκχύλιση από υδατοδιαλυτά κλάσμα PL δείχνει μια σχετικά ομοιογενή κατανομή μοριακού βάρους με HPLC διαπερατότητας πηκτής και εκτιμάται ότι είναι περίπου 150-180 kD από το χρόνο κατακράτησης σε HPLC μοριακών δεικτών πουλλουλάνη [1]. Τα κύρια συστατικά της PL προταθεί ότι είναι διαφόρων πολυσακχαριτών [1] – [3]. Έχει επίσης δειχθεί ότι ο υδατοδιαλυτό κλάσμα PL είναι σε θέση να καταστείλει τους όγκους είτε έμμεσα ενισχύοντας το ανοσοποιητικό σύστημα του ξενιστή, ή απευθείας με την επαγωγή απόπτωσης σε καρκινικά κύτταρα [4], [5]. Ωστόσο, εξακολουθεί να είναι σαφές ποια συνθέσεις πολυσακχαρίτη σε PL κατέχουν το αντικαρκινικό αποτέλεσμα.

Εν περιλήψει, η επιτυχής χρήση των PL για τη θεραπεία του καρκίνου του προστάτη απαιτεί την πλήρη κατανόηση των μηχανισμών για το πώς PL μεσολαβεί αντι- δραστηριότητες του όγκου σε όγκους. προηγούμενη μελέτη μας έδειξε ότι PL, μέσω της ενεργοποίησης των κασπασών, είναι ικανό να επάγει απόπτωση σε καλλιεργημένα καρκινικά κύτταρα. Στην παρούσα έρευνα, χρησιμοποιώντας δοκιμασία ξενομοσχεύματος, αποδεικνύουμε περαιτέρω ότι η έγχυση PL σε γυμνά ποντίκια με όγκους που σχηματίζονται υποδόρια με εμβολιασμένες με καρκίνο του προστάτη DU145 ή κύτταρα PC3 επάγει πλειονότητα των κυττάρων όγκου εμβολιασμένου να χάσουν βιωσιμότητες τους. Έτσι, μας

in vivo

δεδομένα υποστηρίζουν την άποψη ότι PL, με τη μετάβαση σε μηχανήματα καταστολή που σχετίζονται με όγκο, μπορεί να αναπτυχθεί ως μια αποτελεσματική θεραπεία για την αντιμετώπιση κακοηθειών στον άνθρωπο, όπως πυρίμαχα καρκίνο του προστάτη.

Ευχαριστίες

Σας ευχαριστούμε Δρ Χου (Harvard Medical School, ΜΑ) για την παροχή αντιδραστηρίων για το έργο.