Αφηρημένο

Το

PSA-Cre? PTEN-ΙοχΡ /ΙοχΡ

μοντέλο καρκίνου του προστάτη ποντίκι εμφανίζει σαφώς καθορισμένα στάδια της υπερπλασίας και του καρκίνου. Εδώ, τα αρχικά στάδια της ανάπτυξης υπερπλασίας που μελετήθηκαν. Ανοσοϊστοχημική χρώση έδειξε ότι οι συσσωρευμένες pAkt

+ υπερπλαστικών κυττάρων υπερεκφράζουν αυλού Ck8 επιθηλιακών δείκτη κυττάρου και δεικτών των επιθηλιακών κυττάρων δείκτες προγονικών κυττάρων CK19 και Sca-1, αλλά όχι βασικό. Με προφίλ έκφρασης εντοπίσαμε μυθιστόρημα δείκτες υπερπλασίας των κυττάρων, συμπεριλαμβανομένων των Tacstd2 και Clu. Περαιτέρω δείξαμε ότι σε νεαρή ηλικία προστάτες των στοχευμένων

PTEN

knockout ποντίκια που περιέχονται στο αυλού επιθηλιακό στρώμα κυττάρων ενιαίο pAkt

+ κύτταρα, τα οποία υπερεκφράζεται Ck8, Sca-1, Tacstd2 και Clu? βασικά επιθηλιακά κύτταρα ήταν πάντα pAkt

-. Είναι σημαντικό, στο αυλού επιθηλιακό στρώμα κυττάρων του φυσιολογικού προστάτη που ανιχνεύθηκαν σπάνιες Clu

+ Tacstd2

+ Sca-1

+ προγονικά κύτταρα. Αυτά τα νέα κύτταρα είναι υποψήφιος καρκινικά κύτταρα έναρξης στο

PTEN

knockout ποντικών. Αξιοσημείωτα, όλα τα επιθηλιακά κύτταρα του αυλού στην εγγύς περιοχή της κανονικής προστάτες Clu

+ Tacstd2

+ Sca-1

+. Ωστόσο, το

PSA-Cre? PTEN-ΙοχΡ /ΙοχΡ

ποντίκια, το εγγύς προστάτη δεν περιέχει υπερπλασίας εστίες. Μικρές υπερπλαστικών εστίες σε προστάτες του

PSA-Cre? PTEN-ΙοχΡ /+

ποντίκια βρέθηκε σε μεγάλη ηλικία, έδειξε πλήρη

PTEN

αδρανοποίηση και ένα προφίλ προγονικών δείκτη. Τέλος, παρουσιάζουμε ένα νέο μοντέλο ανάπτυξης του προστάτη και της ανανέωσης, συμπεριλαμβανομένης της συγκεκριμένης γενεαλογίας του επιθηλίου του αυλού προγονικά κύτταρα. Προτείνεται η

PTEN

ανεπάρκεια προκαλεί μια μετατόπιση στην ισορροπία της διαφοροποίησης σε πολλαπλασιασμό στα κύτταρα αυτά

Παράθεση:. Korsten Η Ziel-van der Made Α, Ma Χ, van der Kwast T, Trapman J (2009) Συσσωρευμένα προγονικά κύτταρα στο κινητό Layer επιθηλίου του αυλού είναι υποψήφια Tumor Cells Εκκίνηση σε ένα

PTEN

Knockout Mouse Καρκίνος του προστάτη μοντέλο. PLoS ONE 4 (5): e5662. doi: 10.1371 /journal.pone.0005662

Συντάκτης: Stefan Wölfl, Universität Heidelberg, Γερμανία

Ελήφθη: 4 του Φλεβάρη 2009? Αποδεκτές: 28 του Απρίλη του 2009? Δημοσιεύθηκε: May 22, 2009

Copyright: © 2009 Korsten et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτή η μελέτη υποστηρίχθηκε από μια επιχορήγηση από το ολλανδικό Αντικαρκινική Εταιρεία KWF (αριθμός Grant: EMCR 2006 – 3592, www.kwfkankerbestrijding.nl). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

ο καρκίνος του προστάτη είναι η πιο κοινή όγκων στους άνδρες σε χώρες με δυτικό τρόπο ζωής, και μια σημαντική αιτία θνησιμότητας σχετίζονται με τον καρκίνο [1]. Πλήρεις

ΡΤΕΝ

αδρανοποίηση βρίσκεται σε ~ 20% των πρωτογενών όγκων του προστάτη και σε ποσοστό μέχρι 60% των μεταστάσεων του καρκίνου του προστάτη [2]. Η αδρανοποίηση ενός

ΡΤΕΝ

αλληλόμορφο είναι ακόμα πιο κοινή. Μεγάλη συχνότητα

ΡΤΕΝ

αδρανοποίηση βρίσκεται και στον καρκίνο του ενδομητρίου και σε γλοιοβλάστωμα [3]. μεταλλάξεις βλαστικής του

PTEN

είναι η αιτία της νόσου Cowden και το σύνδρομο Ββηηβγβη-Ζοηβηβ, οι οποίες χαρακτηρίζονται από αμαρτωμάτων και προδιάθεση για μαστού και θυρεοειδούς [2], [3].

PTEN εξουδετερώνει φωσφοϊνοσιτιδίου-3-κινάσης (ΡΙ3Κ) σηματοδότησης με την εξισορρόπηση φωσφατιδυλινοσιτόλη (4,5) -φωσφορικό (ΡΙΡ2) και φωσφατιδυλινοσιτόλη (3,4,5) -φωσφορικό (ΡΙΡ3) επίπεδα στο κύτταρο [2] – [4]. συσσώρευση ΡΙΡ3 οδηγεί σε φωσφορυλίωση του κατάντη στόχων, συμπεριλαμβανομένης της ΑΚΤ. Κατά συνέπεια οι δραστηριότητες της περαιτέρω κατάντη τελεστών διαμορφωμένα και βιολογικές λειτουργίες των κυττάρων, συμπεριλαμβανομένου του πολλαπλασιασμού, της απόπτωσης, το μέγεθος του κυττάρου, την πολικότητα, το μεταβολισμό, την προσκόλληση, η μετανάστευση και η αγγειογένεση αλλάζονται [3] – [6]. Πυρηνική ΡΤΕΝ θα μπορούσαν να παίξουν ρόλο στη διατήρηση της σταθερότητας γονιδιωματική [7]. Επιπλέον, έχει πρόσφατα περιγραφεί ότι ΡΤΕΝ μπορεί να ελέγξει βλαστοκυττάρων αυτο-ανανέωση [6], [8], [9].

Πλήρης

ΡΤΕΝ

αδρανοποίηση σε ποντικούς είναι εμβρυϊκά θανατηφόρα.

PTEN +/-

ποντίκια είναι βιώσιμα, αλλά να αναπτύξει αρκετές υπερπλασίας και των δυσπλαστικών βλαβών σε διάφορα όργανα [10], [11]. Υπό τον όρο

PTEN

μοντέλα knockout ποντικών επιβεβαίωσε ότι

PTEN

αδρανοποίηση παίζει σημαντικό ρόλο στην ανάπτυξη του καρκίνου και την εξέλιξη του όγκου. Ποντίκια με προστατικό ειδικό

PTEN

αδρανοποίηση αναπτύσσουν υπερπλασία, mPIN και τελικά καρκίνο του προστάτη [12] – [15].

Όπως αναγνωρίστηκε για πρώτη φορά για αιμοποιητικά κύτταρα, είναι πλέον γενικά αποδεκτό ότι όλους τους ιστούς περιέχουν σπάνια ιστο-ειδικά βλαστικά κύτταρα τα οποία είναι ικανά να αυτο-ανανέωσης και της διαφοροποίησης μέσω ασύμμετρης κυτταρικής διαίρεσης [16], [17]. Αυτά τα κύτταρα είναι απαραίτητη όχι μόνο για την οργανογένεση κατά την ανάπτυξη, αλλά και για την ανανέωση του ιστού στον ενήλικα είδη. Όπως φαίνεται καθαρά σε διάφορους τύπους λευχαιμίας, όγκων μπορεί να αναπτύξει με τροποποίηση αιμοποιητικών αρχέγονων κυττάρων ή, εναλλακτικά, από πολυδύναμα ή γράμμωσης ειδικά προγεννητικά κύτταρα τα οποία έχουν αποκτήσει βλαστικών κυττάρων που μοιάζουν με τα χαρακτηριστικά [18]. Αν και λιγότερο σαφής, ο ίδιος μηχανισμός έχει προταθεί για την ανάπτυξη των συμπαγών όγκων, συμπεριλαμβανομένου του καρκίνου του προστάτη. Σύμφωνα με το μοντέλο των βλαστικών κυττάρων, κάθε όγκου περιέχει ένα μικρό αριθμό των κυττάρων με ιδιότητες που σχετίζονται με φυσιολογικών αρχέγονων κυττάρων, τα οποία είναι απαραίτητα για τη συντήρηση του όγκου [16], [19] – [21]. Συμπληρωματικά προς τη θεωρία βλαστικών κυττάρων του όγκου, η κλωνική μοντέλο εξέλιξης προτείνει ότι οι όγκοι μπορούν να αναπτυχθούν με την επέκταση της δεσπόζουσας κλώνων [22] – [24].

Μελέτη της ανάπτυξης του όγκου σε μοντέλα ποντικών με καρκίνο του προστάτη μπορεί να συμβάλει στην κατανόηση ανθρώπινου καρκίνου του προστάτη. Στο φυσιολογικό ανθρώπινο και ποντικού προστάτη, τα βλαστικά κύτταρα και τα πολυδύναμα προγονικά κύτταρα, ή κύτταρα ενίσχυσης-διακίνησης, προτείνονται να είναι παρόντες στη βασική στοιβάδα επιθηλιακού κυττάρου [21], [25] – [27]. Επιπλέον, σε ποντίκια, η εγγύς περιοχή του προστάτη έχει υποδειχθεί ως μία πιθανή θέση κύτταρο στελέχους /προγονικών [28] – [30]. Μέχρι στιγμής, οι γνώσεις μας για τα πρώτα βήματα στην ανάπτυξη του όγκου σε μοντέλα ποντικών με καρκίνο του προστάτη είναι περιορισμένη. Στο

Probasin (PB) -Cre

Induced

PTEN

μοντέλο νοκ-άουτ,

PTEN

αδρανοποίηση σε p63

+ βλαστικών πληθυσμού /προγονικών κυττάρων στη βασική επιθηλιακών κυττάρων στρώμα έχει υποτεθεί [31]. Σε ένα ειδικό προστατικό

Trp53 /Rb

νοκ-άουτ το μοντέλο, έχουν αυλού /νευροενδοκρινείς προγονικά κύτταρα στο εγγύς προστάτη υποδεικνύεται ως πιθανά καρκινικά κύτταρα έναρξη [32].

Στην παρούσα μελέτη διερευνήσαμε πρώιμα στάδια της ανάπτυξης του όγκου του προστάτη σε ένα διαφορετικό στοχευμένες

PTEN

αδρανοποίηση μοντέλο, που βασίζεται στο

PSA-Cre

έκφρασης. Προηγουμένως, περιγράψαμε ότι σε αυτό το μοντέλο σαφώς καθορισμένα στάδια της υπερπλασίας του προστάτη και του καρκίνου μπορούν να διακριθούν [13]. Εδώ δείξαμε ότι υπερπλαστικών κυττάρων σε

ΡΤΕΝ

knockout ποντικών έχουν ένα φαινότυπο επιθηλίου του αυλού προγονικών κυττάρων, συμπεριλαμβανομένων των υπερέκφραση Ck8, CK19 και Sca-1. Με την έκφραση εντοπίστηκαν προφίλ μυθιστόρημα δείκτες υπερπλασίας των κυττάρων. Η πρώτη υπερπλαστική pAkt

+ κύτταρα σε προστάτες των νέων

ΡΤΕΝ

knockout ποντίκια βρέθηκαν στην αυλική στρώμα επιθηλιακών κυττάρων. Σημαντικά, μπορούμε επίσης να εντοπίζονται σε χαμηλή συχνότητα νέα γράμμωσης-ειδικά προγονικά κύτταρα του επιθηλίου του αυλού κυτταρικό στρώμα της κανονικής προστάτη. Αυτά τα κύτταρα θα μπορούσαν να αντιπροσωπεύουν νωρίτερα Πασιφανείς αυλού ενδιάμεση /κύτταρα ενίσχυσης-διακίνησης [33], [34]. Τα ευρήματά μας υποδεικνύουν ότι

ΡΤΕΝ

αδρανοποίηση σε αυτό το μοντέλο ποντικού οδηγεί σε συσσώρευση των νέων προσδιορίζονται επιθηλίου του αυλού προγονικών κυττάρων με μια δραστική αλλαγή της ισορροπίας διαφοροποίησης /πολλαπλασιασμού αυτών των κυττάρων. Αν και όλα τα κύτταρα στο αυλού στρώμα επιθηλιακών κυττάρων στην εγγύς προστάτη έδειξαν έκφραση των νέων γράμμωσης-ειδικούς δείκτες, υπερπλασίας εστίες δεν ανέπτυξαν από αυτή την περιοχή του προστάτη.

Αποτελέσματα

κύτταρα Υπερπλαστικοί σε προστάτες της PSA-Cre? PTEN-ΙοχΡ /ΙοχΡ ποντίκια έχουν ένα φαινότυπο του αυλού των επιθηλιακών κυττάρων και εκφράζουν δείκτες κυττάρων του επιθηλίου προγονικών

Προηγουμένως, περιγράψαμε την ανάπτυξη καρκίνου του προστάτη σε

PSA-Cre? ΡΤΕΝ-ΙοχΡ /ΙοχΡ

ποντικούς [13]. Σε προστάτες 4-5 μήνες (4-5μ) παλαιά

PSA-Cre? PTEN-ΙοχΡ /ΙοχΡ

ποντίκια υπερπλασίας επιθηλιακά κύτταρα υπερεκφράζουν φωσφο-Akt (pAkt) και οι επιθηλίου του αυλού δείκτες κερατίνες 8/18 (Ck8 /18). Η υπερπλαστική κύτταρα ήταν αρνητικά για τα βασικά επιθηλιακά δείκτες κυτοκερατίνες 5/14 (CK5 /14). Ο υποδοχέας ανδρογόνων (AR) εκφράστηκε σε ίσα επίπεδα στο φυσιολογικό και υπερπλασίας προστάτη [13]

Στην παρούσα μελέτη μας χαρακτηρίζεται από QPCR και ανοσοϊστοχημεία υπερπλασίας του προστάτη κύτταρα του

PSA-Cre?. PTEN-ΙοχΡ /ΙοχΡ

ποντίκια. Πρώτον, η έκφραση του επιπλέον προγονικών, βασική και αυλού δείκτες επιθηλιακών κυττάρων αναλύθηκε σε 2m και σε 4-5μ. Σε αυτές τις ηλικίες προστάτες του

PSA-Cre? PTEN-ΙοχΡ ΙοχΡ

ποντίκια /είναι για ~ 70% και & gt? 90% υπερπλασίας, αντίστοιχα (Σχήμα S1 Α). Έκφραση του

Probasin

και

Nkx3.1

, δείκτες διαφοροποιημένων κυττάρων του αυλού, ήταν πολύ χαμηλότερη σε υπερπλασίας προστάτη, αλλά

Ck8

ήταν υψηλότερη εκφράζεται σε αυτούς τους ιστούς. Χαμηλή έκφραση των βασικών δεικτών επιθηλιακών κυττάρων

CK5

και

εντοπίστηκε ρ63

. Είναι ενδιαφέρον ότι, η έκφραση του δείκτη επιθηλιακών προγονικών κυττάρων

CK19

[35], [36] ήταν υψηλή σε υπερπλαστικούς προστάτες.

Nkx3.1

,

Ck8

,

CK19

και

δεδομένα έκφρασης p63

mRNA επιβεβαιώθηκαν με ανοσοϊστοχημεία σε κανονικές και υπερπλασίας προστάτη (4-5μ) (Σχήμα S1B-S1I). χρώση Πυρηνική Nkx3.1 παρατηρήθηκε σε επιθηλιακά κύτταρα αυλού της κανονικής προστάτη, αλλά πυρήνες των υπερπλαστικών κυττάρων ήταν σχεδόν θετικά (Σχήμα S1B-S1c). Μια αμυδρή χρώση Ck8 παρατηρήθηκε στην κορυφαία πλευρά του αυλού των επιθηλιακών κυττάρων σε κανονικό προστάτη, ενώ σε υπερπλασίας προστάτη του

PSA-Cre? PTEN-ΙοχΡ /ΙοχΡ

ποντίκια Ck8 υπερεκφράζεται (Σχήμα S1D-S1E). Σημαντικά, CK19 σαφώς υψηλότερη εκφράζεται σε υπερπλαστικά κύτταρα από ό, τι σε κανονικό προστάτη επιθηλιακά κύτταρα (Σχ. S1F-S1G). Υπερπλασίας των κυττάρων ήταν αρνητικά για το βασικό επιθηλιακών p63 κυτταρικό δείκτη, αλλά μια προφανής φυσιολογική p63

+ βασική στιβάδα επιθηλιακών κυττάρων ήταν παρόντες κάτω από ένα πολυστρωματικό υπερπλαστικών κυττάρων (Σχήμα S1H-S1I). Από αυτά τα δεδομένα συμπεραίνουμε ότι

PTEN

αδρανοποίηση σε προστάτες του

PSA-Cre? PTEN-ΙοχΡ /ΙοχΡ

ποντίκια ως αποτέλεσμα τη συσσώρευση των υπερπλαστικών κυττάρων με τα χαρακτηριστικά του αυλού προγονικών κυττάρων (Nkx3.1

+/- Ck8

+ CK19

+ p63

-)

η έκφραση των χαρακτηριστικών προσδιορίζει νέα γονίδια με υψηλή έκφραση σε υπερπλαστικό επιθήλιο του προστάτη

η έκφραση των χαρακτηριστικών έγινε. για τον εντοπισμό νέων γονιδίων που εκφράζονται διαφορικά σε υπερπλασίας προστάτη του

PSA-Cre? ΙοχΡ

ποντίκια PTEN-ΙοχΡ /(4-5μ). Ανάλυση Κύριων Συνιστωσών (PCA) και χωρίς επίβλεψη ιεραρχική ομαδοποίηση (Εικόνα 1Α και 1Β) του cDNA δεδομένων συστοιχία έδειξαν μια σαφή προφίλ διαφορική γονιδιακή έκφραση μεταξύ υπερπλασίας προστάτη και φυσιολογικό προστάτη.

(Α) ανάλυση κύριο συστατικό (PCA) της γονιδιακής έκφρασης σε φυσιολογικό προστάτη (μπλε κύκλοι) και υπερπλαστικών προστατών του

PSA-Cre? ΡΤΕΝ-ΙοχΡ /ΙοχΡ

ποντίκια (κόκκινοι κύκλοι) σε 4-5μ. (Β) Ανεξέλεγκτη ιεραρχική συσταδοποίηση των προφίλ γονιδιακής έκφρασης των πέντε κανονικές προστάτη (ΝΡ) και πέντε υπερπλαστικών προστατών (ΗΡ). Το πράσινο υποδεικνύει χαμηλότερη έκφραση του γονιδίου και το κόκκινο δείχνει υψηλότερη έκφραση. (Γ) Οι είκοσι γονίδια με τη μεγαλύτερη διαφορική έκφραση σε HP σε σύγκριση με NP όπως προσδιορίζεται με υπολογισμό της διαφοράς στο μέσο επίπεδο έκφρασης. (D) Σημασία Ανάλυση των μικροσυστοιχιών (SAM) των ίδιων δειγμάτων όπως παρουσιάζεται στο C. Σημειώστε ότι με ανάλυση SAM ουσιαστικά ταυτόσημη γονίδια ταυτοποιήθηκαν ως με υπολογισμό της διαφοράς στο μέσο επίπεδο έκφρασης. ανάλυση (Ε) QPCR από τα πέντε γονίδια με την υψηλότερη έκφραση σε HP σε σύγκριση με ΝΡ και

Sca-1

. Κάθε υποομάδα αποτελείται από πέντε δείγματα του προστάτη. Τα επίπεδα έκφρασης σε υπερπλασίας προστάτη των 2m και 4-5μ ποντίκια ηλικίας και προστάτες των αδερφών ελέγχου εμφανίζεται ως μέσο επίπεδο έκφρασης +/- SE σε σχέση με το

Hprt

έκφρασης. (F-Μ) Ανοσοϊστοχημική ανάλυση των νέων δεικτών υπερπλαστικών κυττάρων σε ΝΡ και της HP

PSA-Cre? PTEN-ΙοχΡ /ΙοχΡ

ποντίκια (4-5μ). (F) Tacstd2 NP, (G) Tacstd2 HP, (H) Clu ΝΡ, (Ι) Clu HP, (J) Ppp1r1b NP, (Κ) Ppp1r1b HP, (L) Sca-1 ΝΡ και (Μ) Sca-1 HP.

Η

Για την αναγνώριση των γονιδίων κατά προτίμηση εκφράζεται σε υπερπλασίας των κυττάρων του προστάτη, οι διαφορές στη μέση επίπεδα έκφρασης υπολογίστηκαν. Ο πρόγονος του ποντικιού /βλαστικών κυττάρων δείκτη

Sca-1

ήταν ένας από τους κορυφαίους είκοσι γονίδια με την υψηλότερη έκφραση σε υπερπλασίας προστάτη (Σχήμα 1C)?

CK19

ήταν στο top πενήντα διαφορικά εκφραζόμενα γονίδια (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Γονίδια που παρουσίασαν υψηλή έκφραση σε υπερπλασίας προστάτη από τον υπολογισμό των διαφορών στις μέσες επίπεδο έκφρασης (Σχήμα 1C), όπως

Expi, Wfdc2, Tacstd2 (Trop2), Clu, Ppp1r1b

,

Sca-1

και

CK19

, βρέθηκαν επίσης υπερεκφράζεται Σημασία Ανάλυση Microarray (SAM) (Σχήμα 1 D). Τα πλήρη ονόματα των κορυφαίων είκοσι υπερεκφράζεται γονίδια που παρατίθενται στον Πίνακα S1. Μια πιο εκτεταμένη λίστα όλων σημαντικά ρυθμίζεται προς τα πάνω ή προς τα κάτω ρυθμισμένη γονίδια που προσδιορίζονται από την ανάλυση SAM παρέχεται στον Πίνακα S2. Σημειώστε ότι

CK19

είναι στην κορυφή είκοσι από απορυθμίζεται γονιδίων.

Τα προφίλ έκφρασης των πέντε γονίδια με την υψηλότερη υπερέκφραση σε υπερπλασίας προστάτη των στοχευμένων

PTEN

ποντίκια knockout,

Expi, Wfdc2, Tacstd2, Clu

και

Ppp1r1b

(σχήμα 1Γ), και

Sca-1

, επιβεβαιώθηκαν από QPCR σε προστάτες του

PTEN

knockout ποντίκια και σε κανονικό προστάτη σε 2m και στα 4-5μ (Σχήμα 1Ε). QPCR έδειξε ότι η έκφραση του

Expi

και

Tacstd2

στο

PSA-Cre? PTEN-ΙοχΡ /ΙοχΡ

ποντίκια ήταν ήδη υψηλή σε 2m?

Clu

και

Sca-1

έδειξε ένα σταδιακά αυξανόμενο επίπεδο έκφρασης. Ωστόσο, για

Wfdc2

και

Ppp1r1b

η απότομη αύξηση στην έκφραση παρατηρήθηκε σε εντελώς υπερπλασίας προστάτη (4-5μ).

Στη συνέχεια, η έκφραση των δεικτών για τους οποίους τα κατάλληλα αντισώματα ήταν διαθέσιμα, Tacstd2, Clu, Ppp1r1b και Sca-1, μελετήθηκε με ανοσοϊστοχημεία σε φυσιολογικούς και υπερπλαστικών προστατών (Σχήμα 1 F-1Μ). Tacstd2 ανοσοϊστοχημεία έδειξε χρώση μεμβράνης σε υπερπλαστικό ιστούς, σε συμφωνία με γνωστή θέση του ως διαμεμβρανική πρωτεΐνη [37]. Clu ήταν κυρίως παρούσα στο κυτταρόπλασμα των υπερπλαστικών κυττάρων. Όπως είχε προβλεφθεί από τα δεδομένα QPCR, το πρότυπο έκφρασης του Ppp1r1b σε υπερπλαστικών κυττάρων ήταν περισσότερο ετερογενής. Σε συμφωνία με την χρώση CK19 (Σχήμα S1), χρώση Sca-1 έδειξε ότι υπερπλασίας κύτταρα έχουν φαινότυπο προγονικών κυττάρων

Τα γονίδια με χαμηλότερη έκφραση σε υπερπλασίας προστάτη του

PSA-Cre?. PTEN-ΙοχΡ /ΙοχΡ

ποντικοί επίσης προσδιορίζονται και οι δύο με υπολογισμό της διαφοράς σε μέσο επίπεδο έκφρασης και από την SAM (Σχήμα 1C και 1D). Τα προφίλ έκφρασης των γονιδίων με τη χαμηλότερη έκφραση σε υπερπλασίας προστάτη,

Hs3st3b1, Ccdc16, Mcoln2, C1r

και

ΜΤ1

(σχήμα 1Γ), επιβεβαιώθηκαν από QPCR (Εικόνα S2). Έκφραση όλων των γονιδίων που ήταν ήδη χαμηλό σε υπερπλασίας προστάτη σε 2m σε

PSA-Cre?. PTEN-ΙοχΡ /ΙοχΡ

ποντίκια

Αρχικό pAkt

+ υπερπλαστικών κυττάρων του αυλού στρώμα επιθηλιακών κυττάρων σε προστάτες της PSA-Cre? PTEN-ΙοχΡ /ΙοχΡ ποντίκια εκφράζουν Clu, Tacstd2 και Sca-1

Για να συλλέξετε πληροφορίες του υποψηφίου όγκου έναρξη κύτταρα, εξετάσαμε λεπτομερώς την πρώιμη ανάπτυξη της υπερπλασίας του προστάτη σε του

PSA-Cre? PTEN-ΙοχΡ /ΙοχΡ

ποντίκια, που ξεκινά στις 4-5 εβδομάδες (4-5w). Προστάτες των ποντικιών άγριου τύπου σε 4-5w ήταν το μισό μέγεθος από εκείνες του ενήλικα ποντίκια (2m και 4-5μ) (Εικόνα 2Α). Σε αντίθεση με τα βάρη του προστάτη των ηλικιωμένων ποντικών (2m και 4-5μ), βάρη προστάτη των νέων

PSA-Cre? ΡΤΕΝ-ΙοχΡ /ΙοχΡ

ποντίκια (4-5w) δεν ήταν διαφορετικές από κουτάβια αναφοράς (Σχήμα 2Α ). Στο 4-5μ τα βάρη του προστάτη του

PSA-Cre?. PTEN-ΙοχΡ /ΙοχΡ

ποντίκια ήταν περίπου 3 φορές υψηλότερες από εκείνες των ελέγχων, που προκαλείται από την αύξηση του αριθμού και του μεγέθους των υπερπλαστικών κυττάρων

(Α) βάρη του προστάτη (μέσος όρος +/- SE) των ποντικών άγριου τύπου και

PSA-Cre? PTEN-ΙοχΡ /ΙοχΡ

ποντίκια σε 4-5w, 2m και 4-5μ. (Β) χρώση pAkt υπερπλαστικών εστιών /κυττάρων στο επιθηλιακό στρώμα αυλού κύτταρο ενός προστάτη ενός 4-5w παλαιών

PSA-Cre? ΡΤΕΝ-ΙοχΡ /ΙοχΡ

ποντίκι. Οι μεγεθύνσεις των τριών αναφέρεται περιοχές φαίνεται στο Β1, Β2 και Β3. αιχμές βελών σε Β1 και Β2 δείχνουν μόνο

+ κύτταρα pAkt. Φωσφο-Ακί χρώση προστάτες 2Μ (C) και 4-5μ (D) παλαιά

PSA-Cre? ΡΤΕΝ-ΙοχΡ /ΙοχΡ

ποντίκια δείχνει ότι αντίστοιχα -70% και 100% των αυλού επιθηλιακών κυττάρων ήταν pAkt

+. (Ε) Διαδοχική ολισθήσεις ενός προστάτη ενός 4-5w παλαιών

PSA-Cre? ΡΤΕΝ-ΙοχΡ /ΙοχΡ

ποντίκι χρωματίστηκαν για Clu, Tacstd2 και Sca-1 δείχνει συνέκφραση αυτών των δεικτών σε ένα μικρό υπερπλαστικό εστίαση. Ανοσοφθορισμού διπλό χρώσεις επιβεβαίωσε συν-εντοπισμό του (F) Tacstd2 και pAkt, (G) Clu και pAkt και (Ι) Ck8 και pAkt. (H) pAkt

+ κύτταρα δεν παρατηρήθηκαν στο p63

+ βασική στιβάδα επιθηλιακών κυττάρων.

Η

φωσφο-Akt έκφραση χρησιμοποιήθηκε ως δείκτης του

PTEN

αδρανοποίηση για να απεικονίσει τα πρώτα αρνητικά κύτταρα PTEN. Στο 4-5w, διάσπαρτα σε όλα λοβούς του προστάτη, μόνο pAkt

+ υπερπλασίας των κυττάρων και των μικρών pAkt

+ εστίες εντοπίστηκαν (Εικόνα 2Β). Σημαντικά, όλα pAkt

+ κυττάρων ήταν αποκλειστικά παρόντα στο αυλού στρώμα επιθηλιακών κυττάρων και όχι στη βασική στοιβάδα επιθηλιακών κυττάρων. Στο 2m και 4-5μ ~ 70% και σχεδόν το 100% των επιθηλιακών κυττάρων του αυλού έδειξε κηλίδωση pAkt μεμβράνη, αντίστοιχα (Σχήμα 2C και 2D). Τα βασικά επιθηλιακά κύτταρα παρέμειναν pAkt αρνητική. Sca-1 και η νέα υπερπλαστικών κυττάρων δεικτών Clu και Tacstd2 εκφράστηκαν επίσης στο αρχικό υπερπλαστικό εστίες (Σχήμα 2Ε), αλλά η έκφραση Ppp1r1b δεν μπορούσε ακόμη να ανιχνευθεί σε υπερπλαστικά κύτταρα σε 4-5w (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται).

να επιτρέπει την ακριβή χαρακτηρισμό του αρχικού υπερπλαστικών> + κύτταρα pAkt

+ κύτταρα pAkt έδειξε έκφραση Clu και Tacstd2. Επιπλέον, όλες pAkt

+ κύτταρα υπερεκφράζεται Ck8 και ήταν αρνητικά για την βασική επιθηλιακών ρ63 δείκτης κυττάρων. Το εύρημα αυτό υποδηλώνει έντονα ότι η πρώτη pAkt

+ κύτταρα, τα οποία παρατηρήθηκαν αποκλειστικά στη αυλού επιθηλιακό στρώμα, είναι ταυτόσημη με την πλειοψηφία της συσσώρευσης υπερπλαστικών κυττάρων με φαινότυπο επιθηλιακών αρχέγονων κυττάρων σε 4-5μ.

PSA-Cre? PTEN-ΙοχΡ /+ ποντίκια αναπτύσσουν υπερπλαστική εστίες με το ίδιο προφίλ δείκτη όπως υπερπλαστικών εστίες σε προστάτες της PSA-Cre? PTEN-ΙοχΡ /ΙοχΡ ποντίκια

Προηγουμένως, ανέφερε ότι ετερόζυγο

PSA -Cre? PTEN-ΙοχΡ /+

ποντίκια δεν αναπτύσσουν όγκους του προστάτη, αλλά ότι μπορούν να αναπτύξουν υπερπλασίας εστίες σε μεγαλύτερη ηλικία [13]. Η διαθεσιμότητα των νέων δεικτών υπερπλαστικών κυττάρων επέτρεψε μια πιο ακριβή μελέτη της ανάπτυξης υπερπλασίας σε αυτά τα ποντίκια. CLU χρώση προστάτες του

PSA-Cre? PTEN-ΙοχΡ /+

ποντίκια έδειξαν ότι ήδη στο 4-5μ μερικές μικρές υπερπλασίας εστίες μπορούσε να ανιχνευθεί (Σχήμα S3). Στο 7-8m ο αριθμός των υπερπλαστικών εστιών ήταν ακόμα πολύ χαμηλά, αλλά μια σαφής αύξηση των υπερπλαστικών εστιών ανιχνεύθηκε σε παλαιότερα ποντίκια (& gt? 11m). Clu

+ υπερπλαστικών εστίες δεν παρατηρήθηκαν σε προστάτες του κουτάβια αναφοράς (δεδομένα δεν παρουσιάζονται)

Είναι ενδιαφέρον, όπως και σε προστάτες των νέων

PSA-Cre?. ΡΤΕΝ-ΙοχΡ ΙοχΡ

ποντίκια /υπερπλαστική Clu

+ εστίες

PSA-Cre? ΡΤΕΝ-ΙοχΡ /+

ποντικούς (Σχήμα 3Α) έδειξε pAkt υπερέκφραση (Σχήμα 3Β). Σύμφωνα με αυτή την παρατήρηση χρώσης ΡΤΕΝ ήταν αρνητική σε αυτές τις εστίες (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται), υποδεικνύοντας ότι η δεύτερη

ΡΤΕΝ

αλληλόμορφο αδρανοποιήθηκε στο pAkt

+ υπερπλαστικών κυττάρων. Υπερπλασίας των κυττάρων σε

PSA-Cre? PTEN-ΙοχΡ /+

ποντίκια ήταν επίσης Tacstd2 και Sca-1 θετικά (Σχήμα 3C και 3D). Έτσι, υπερπλαστικών κυττάρων σε προστάτες του

PSA-Cre? PTEN-ΙοχΡ /+

ποντίκια είχαν ένα πανομοιότυπο προφίλ έκφρασης όπως υπερπλασίας εστίες σε νεαρούς

PSA-Cre? PTEN-ΙοχΡ /ΙοχΡ

ποντίκια.

Διαδοχική τμήματα ενός υπερπλαστικών εστίασης στον προστάτη ενός

PSA-Cre? ΡΤΕΝ-ΙοχΡ /+ ποντικό

βάφτηκαν για το (Β) pAkt και των δεικτών υπερπλαστικών κυττάρων (Α) Clu, (C) Tacstd2 και (Δ) Sca-1 με ανοσοϊστοχημεία.

η

Ενιαίου Clu

+ Tacstd2

+ Sca-1

+ επιθηλιακά προγονικά κύτταρα είναι παρόντα στο επιθηλιακό αυλού κυτταρικό στρώμα της κανονικής προστάτη

στη συνέχεια, ερευνήσαμε αν δείκτες υπερπλασίας των κυττάρων εκφράστηκαν σε κανονικό προστάτη σε διαφορετικές ηλικίες. Είναι ενδιαφέρον ότι, κατά 4-5w ενιαία Clu

+ Tacstd2

+ Sca-1

+ κύτταρα ανιχνεύθηκαν στην αυλική επιθηλιακό στρώμα κυττάρων του φυσιολογικού προστάτη (Σχήμα 4Α-4C). Μερικά βασικά επιθηλιακά κύτταρα χρωματίστηκαν θετικά για Tacstd2 και Sca-1, ωστόσο, Clu

+ κύτταρα ουδέποτε παρατηρήθηκε στο βασικό επιθηλιακό στρώμα. Η παρουσία του Clu

+ Tacstd2

+ Sca-1

+ κύτταρα στο αυλού επιθηλιακό στρώμα κυττάρων του φυσιολογικού προστάτη ποντικού υποδηλώνει ότι αυτά τα κύτταρα έχουν προηγουμένως δεν έχει ακόμη προσδιοριστεί γράμμωσης ειδικά προγεννητικά κύτταρα των αυλού επιθηλιακών κυττάρων . Είναι δελεαστικό να υποθέσουμε ότι στο

PTEN

ποντίκια knockout υπερπλασίας του προστάτη κύτταρα με παρόμοια χαρακτηριστικά με αυτά τα προγονικά κύτταρα προέρχονται από τα κύτταρα αυτά. Αυτή η υπόθεση είναι σύμφωνη με την παρατήρηση ότι pAkt

+ υπερπλαστικών κύτταρα βρέθηκαν αποκλειστικά στο αυλού επιθηλιακό στρώμα κυττάρων (Σχήμα 2Β, 2Η, και 2I).

χρώση (Α) Clu ενός κανονικού προστάτη ενός 4-5w παλιό ποντίκι. Διάσπαρτα σε όλο το λοβό του προστάτη, παρατηρήθηκαν μόνο

+ κύτταρα Clu στην αυλική στρώμα επιθηλιακών κυττάρων. Μια επισκόπηση ενός ολόκληρου λοβού του προστάτη και μεγαλύτερες μεγεθύνσεις τρεις υποδεικνύεται περιοχές δείχνονται. Τα βέλη δείχνουν θετικά κύτταρα. (Β) Tacstd2

+ και (C) Sca-1

+ κύτταρα στο αυλού επιθηλιακό στρώμα κυττάρων του αναπτυσσόμενου προστάτη (4-5w). (D) Clu χρώση ενός ενήλικα φυσιολογικό προστάτη (4-5μ) έδειξε σπάνιες Clu

+ κύτταρα στο αυλού στρώμα επιθηλιακών κυττάρων. (D1) Μεγαλύτερη μεγέθυνση του υποδεδειγμένου περιοχής (D). (Ε-ϋ) ανοσοφθορισμού διπλή χρώση του Clu

+ και Tacstd2

+ κύτταρα στο αυλού επιθηλιακό στρώμα κυττάρων του φυσιολογικού προστάτη. Στην κανονική προστάτες Clu

+ και Tacstd2

+ κυττάρων ήταν αρνητικά για pAkt (E, F), υπερεκφράζεται Ck8 (G, H) και δεν εκφράζουν ρ63 (I, J).

Η

Για να εκτιμηθεί η συχνότητα του Clu

+ Tacstd2

+ Sca-1

+ επιθηλιακών προγονικών κυττάρων σε διαφορετικές ηλικίες, προστάτες από την ανάπτυξη (4-5w) και από ενήλικα (4-5μ) ποντίκια βάφτηκαν για την έκφραση Clu. Στο 4-5w 1/250, ενώ στην 4-5μ 1 /25.000 του αυλού των επιθηλιακών κυττάρων ήταν Clu

+, αντίστοιχα (Σχήμα 4Α και 4D), υποδεικνύοντας ότι σε αναπτυσσόμενες προστάτες του αριθμού των γράμμωσης ειδικά προγεννητικά κύτταρα είναι πολύ υψηλότερη από ό, τι σε πλήρως ώριμο προστάτη. Η παρουσία του Clu

+ Tacstd2

+ Sca-1

+ αυλού προγονικά κύτταρα σε φυσιολογικά ενήλικα προστάτες κάνει αυτά τα κύτταρα των υποψηφίων από τα οποία αναπτύσσουν υπερπλαστική εστίες στο

PSA-Cre? PTEN-ΙοχΡ /+

ποντίκια, λόγω της απενεργοποίησης του δεύτερου

PTEN

αλληλόμορφο.

Clu

+ Tacstd2

+ επιθηλίου του αυλού προγονικών κυττάρων σε νεαρά φυσιολογικό προστάτη (4-5w) ήταν ακόμη χαρακτηρίζεται από μελέτες συν-εντοπισμού. pAkt υπερέκφραση σε Clu

+

+ κύτταρα Tacstd2 στην αυλική επιθηλιακό στρώμα κυττάρων του φυσιολογικού προστάτη δεν παρατηρήθηκε ποτέ (Σχήμα 4Ε-4F). Ωστόσο, όπως και υπερπλαστικών κυττάρων σε

PSA-Cre? ΡΤΕΝ-ΙοχΡ /ΙοχΡ

ποντίκια, Clu

+ Tacstd2

+ κύτταρα στο αυλού επιθηλιακό στρώμα κυττάρων του φυσιολογικού προστάτη υπερεκφρασμένης Ck8 (Σχήμα 4G-4Η ). + Κύτταρα Clu

βρέθηκαν αποκλειστικά στο αυλού στρώμα επιθηλιακών κυττάρων, ενώ Tacstd2

+ κύτταρα ήταν παρόντα τόσο στο αυλού και της βασικής επιθηλιακό στρώμα κυττάρων (Σχήμα 4G-4J, και το σχήμα S4). Πρόσφατα, υψηλή έκφραση Tacstd2 έχει εντοπισθεί σε βασικά επιθηλιακά κύτταρα του εγγύς του προστάτη, αλλά όχι σε βασικά επιθηλιακά κύτταρα στον πιο απομακρυσμένο προστάτη [38].

Υπερπλαστικοί εστίες δεν αναπτύσσουν από επιθηλιακά κύτταρα στο εγγύς

προστάτη

Η εγγύς περιοχή του προστάτη ποντικού έχει προταθεί ως στελέχους /προγονικών κυττάρων κόγχη [28] – [30]. Μία σχηματική όψη των εγγύς και άπω τμήματα ενός λοβού του προστάτη ποντικού δείχνεται στο Σχήμα 5Α. Μελετήσαμε τις ιδιότητες των επιθηλιακών κυττάρων στο εγγύς προστάτη σε περισσότερες λεπτομέρειες στο

PSA-Cre?. ΡΤΕΝ-ΙοχΡ /ΙοχΡ

ποντικούς και σε φυσιολογικά νεογνά

(Α) Σχηματική εικόνα ενός λοβού του προστάτη ποντικού υποδεικνύει την ουρήθρα, το εγγύς και το άπω περιοχή του προστάτη. (Β) Heamatoxylin χρώση ηωσίνης ενός διαμήκους τοποθετημένο λοβού του προστάτη ποντικού. Μεγεθύνσεις του περιφερικού (Β1) και του εγγύς (Β2) του προστάτη, όπως υποδεικνύεται στο Β, έδειξε μια διαφορά στη μορφολογία των επιθηλιακών κυττάρων του αυλού στο εγγύς και το άπω προστάτη. Ανάλυση (Ο-Ε) Ανοσοϊστοχημική του αυλού των επιθηλιακών κυττάρων στην εγγύς περιοχή ενός φυσιολογικού προστάτη ποντικού. (C) ρ63? (D) Ck8 και χρώση (Ε) Sca-1. Οι διακεκομμένες γραμμές δείχνουν την απότομη μετάβαση του επιθηλίου του εγγύς προς το άπω προστάτη.

Η

Όπως οπτικοποιούνται σε διαμήκεις τομές φυσιολογικού λοβών του προστάτη, του αυλού των επιθηλιακών κυττάρων στην εγγύς προστάτη είναι πιο συμπαγής με λιγότερο κυτταρόπλασμα από αυλική κυττάρων σε περιφερικά τμήματα του προστάτη (Σχήμα 5Β). Όπως και στο περιφερικό του προστάτη, στο εγγύς προστάτη ένα ρ63

+ βασική στιβάδα επιθηλιακών κυττάρων ήταν παρούσα κάτω από τα επιθηλιακά κύτταρα του αυλού (Σχήμα 5C). Είναι ενδιαφέρον ότι, όλες οι αυλού των επιθηλιακών κυττάρων στην εγγύς προστάτη υπερεκφράζεται Ck8 (Σχήμα 5D), όπως παρατηρείται σε σπάνιες γράμμωσης-ειδικά αυλού προγονικά κύτταρα στην περιφερική προστάτη και σε υπερπλαστικά κύτταρα σε

PSA-Cre? ΡΤΕΝ-ΙοχΡ /ΙοχΡ

ποντίκια. Sca-1 επίσης εκφράζεται σε υψηλά εγγύς κύτταρα (Σχήμα 5Ε), επιβεβαιώνοντας ότι τα επιθηλιακά κύτταρα του αυλού στο πλησίον του προστάτη έχουν μια αυλού φαινότυπο των προγονικών κυττάρων. Όπως υποδεικνύεται από την διακεκομμένη γραμμή (Σχήμα 5C-5Ε), υπάρχει μια απότομη μετάβαση από επιθηλιακά κύτταρα με εγγύς χαρακτηριστικά σε κύτταρα με ιδιότητες περισσότερο άπω αυλού των επιθηλιακών κυττάρων.

Στη συνέχεια, προφίλ έκφρασης του εγγύς και άπω περιοχές του φυσιολογικών ενήλικων προστάτη πραγματοποιήθηκε (Σχήμα 6Α). Εντυπωσιακά,

Ppp1r1b

,

Clu

,

Wfdc2

και

Tacstd2

ήταν μεταξύ των γονιδίων με την υψηλότερη έκφραση στο εγγύς προστάτη. δεδομένα συστοιχία Έκφραση επιβεβαιώθηκαν με QPCR (Σχήμα 6Β). Όπως περιγράφηκε παραπάνω, οι δείκτες αυτοί ήταν επίσης υπερεκφράζονται σε συσσωρευμένη υπερπλασίας του προστάτη κύτταρα του

PSA-Cre? ΡΤΕΝ-ΙοχΡ /ΙοχΡ

ποντικούς (Σχήμα 1) και σε σπάνιες αυλού προγονικά κύτταρα στο περιφερικό προστάτη (Σχήμα 4). Ανοσοϊστοχημεία έδειξε υψηλή έκφραση Clu, Tacstd2 και Ppp1r1b στα επιθηλιακά κύτταρα του αυλού του εγγύς προστάτη (Σχήμα 6C-6Ε). Τα δεδομένα συστοιχία cDNA επιβεβαίωσε υψηλή έκφραση του αυλού προγονικών κυττάρων δεικτών Ck8 και Sca-1 στο εγγύς προστάτη (δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Συμπερασματικά, ένας συσχετισμός ανιχνεύθηκε μεταξύ του προφίλ δείκτη σε υπερπλαστικούς προστάτες του

PSA-Cre?. ΡΤΕΝ-ΙοχΡ /ΙοχΡ

ποντίκια, σπάνια γράμμωσης ειδικά προγεννητικά κύτταρα στο περιφερικό προστάτη και του εγγύς του αυλού των επιθηλιακών κυττάρων

(Α) Εκφραση προφίλ του εγγύς και άπω του προστάτη περιοχή ενός φυσιολογικού προστάτη ποντικού (4-5μ) δείχνει ότι τα γονίδια που εκφράζονται σε υψηλό υπερπλαστικών προστατών του

PSA-Cre? ΡΤΕΝ-ΙοχΡ /ΙοχΡ

ποντίκια είναι μεταξύ των δέκα γονιδίων με την υψηλότερη έκφραση σε δύο εγγύς προστάτες, σε σύγκριση με δύο άπω προστάτες. (Β) ανάλυση των δεικτών QPCR υπερπλασίας με υψηλή έκφραση στο εγγύς προστάτη. (Ο-Ε) Ανοσοϊστοχημική ανάλυση επιβεβαιώνει υψηλή έκφραση δεικτών υπερπλαστικών κυττάρων στο αυλού επιθηλιακό στρώμα κυττάρων του εγγύς περιοχή του κανονικού προστάτη. χρώσης (C) Clu ενός κανονικού λοβού του προστάτη, (C1) μεγέθυνση της μετάβασης του εγγύς προς το άπω περιοχή, όπως αναφέρεται στο C. Χρώση για το (D) Ppp1r1b και (Ε) Tacstd2. ανάπτυξη υπερπλασίας δεν συμβεί στο εγγύς προστάτη του

PSA-Cre? ΙοχΡ

ποντίκια PTEN-ΙοχΡ /(4-5μ). Το εγγύς αυλού επιθηλιακά κύτταρα του υπερπλαστικού προστάτου ήταν αρνητικά για pAkt (F, μεγέθυνση της μετάβασης εγγύς /άπω προστάτη σε F1), αν και αυτά τα κύτταρα υπερεκφράζεται (G, G1) Clu, (H) Ppp1r1b και (Ι) Tacstd2.

Ερευνήσαμε σε

PSA-Cre? ΡΤΕΝ-ΙοχΡ /ΙοχΡ

ποντίκια (4-5μ) είτε υπερπλασίας εστίες αναπτύχθηκε από επιθηλιακά κύτταρα αυλού στο πλησίον του προστάτη. Διαμήκεις τομές του προστάτη έδειξε ότι, αν και το απομακρυσμένο προστάτη ήταν εντελώς υπερπλαστικό, το επιθήλιο στο εγγύς προστάτη ήταν ανεπηρέαστη (Σχήμα 6F-6θ). Ανοσοϊστοχημεία έδειξε ότι, σε αντίθεση με το περιφερικό του προστάτη, pAkt δεν υπερεκφράστηκε στην εγγύς προστάτη (Σχήμα 6F), υποδεικνύοντας ότι

ΡΤΕΝ

δεν απενεργοποιείται σε αυτή την περιοχή του προστάτη.

Περαιτέρω , προσδιορίσαμε το προφίλ δείκτη των επιθηλιακών κυττάρων σε ουρήθρας επιθήλιο δίπλα στο εγγύς προστάτη. Στην επιφανειακά διαφοροποιημένα στρώμα του ουροθηλίου, τα κύτταρα ομπρέλα, παρατηρήθηκε υψηλή έκφραση Ck8. Η υψηλότερη έκφραση του ρ63, Clu, Tacstd2, και Sca-1 βρέθηκε στα ενδιάμεσα /βασικών επιθηλιακών κυτταρικών στιβάδων (Σχήμα S5). Τα δεδομένα ουρήθρα επεκτείνει τα δεδομένα έκφρασης του προστάτη που δείχνει ότι Clu, Tacstd2 και Sca-1 δείχνουν υψηλή έκφραση σε λιγότερο διαφοροποιημένες επιθήλιο.

Συζήτηση

Στη μελέτη αυτή ορίσαμε τα πρώτα στάδια της ανάπτυξης υπερπλασίας σε η

PSA-Cre? PTEN-ΙοχΡ /ΙοχΡ

μοντέλο καρκίνου του προστάτη ποντικού. εξετάστηκαν διαδοχικά σημαντικές πτυχές της πρώιμης ανάπτυξης υπερπλασίας και τη φυσιολογική ανάπτυξη του προστάτη. Δείξαμε ότι: (i) Συσσωρευμένα υπερπλαστικών pAkt

+ κύτταρα σε προστάτες του

PSA-Cre? ΡΤΕΝ-ΙοχΡ /ΙοχΡ

ποντίκια έχουν μια επιθηλίου του αυλού φαινότυπο κυττάρου με έκφραση των γνωστών και νέων ταυτοποιημένοι δείκτες επιθηλιακής προγονικά κύτταρα. (Ii) Η παλαιότερη και μόνο pAkt

+ (PTEN

-) υπερπλαστικών κυττάρων στους προστάτες των νέων στοχευμένων

PTEN

knockout ποντικών είναι αποκλειστικά παρούσα στο αυλού στρώμα επιθηλιακών κυττάρων. (Iii) σε χαμηλή συχνότητα, σε κανονικό προστάτη, παρόμοια κύτταρα, αλλά χωρίς pAkt υπερέκφραση, μπορούσαν να αναγνωριστούν. (Iv) Τα στοιχεία μας δείχνουν περαιτέρω ότι

PTEN

αδρανοποίηση αναστέλλει τη διαφοροποίηση του επιθηλίου του αυλού προγονικών κυττάρων σε ώριμα κύτταρα. (V) Παρατηρήσαμε ότι η επιθηλίου του αυλού κυτταρικό στρώμα του εγγύς προστάτη αποτελείται από κύτταρα που εκφράζουν τα ίδια ως δείκτες σπάνια προγονικά κύτταρα σε περισσότερες απομακρυσμένες περιοχές του προστάτη. Ωστόσο, υπερπλασίας εστίες δεν ανέπτυξαν από το εγγύς προστάτη.