Αφηρημένο

microRNA-210 (miR-210), ο πλοίαρχος hypoxamir, παίζει πλειοτροπική ρόλους σε ορισμένες μορφές καρκίνου? Ωστόσο, ο ρόλος του στην ανάπτυξη του ανθρώπινου ορθοκολικού καρκίνου παραμένει ασαφής. Εδώ, αναφέρουμε ότι miR-210 είναι συχνά ρυθμίζεται προς τα πάνω σε ορθοκολικό καρκινικούς ιστούς, με υψηλή έκφραση miR-210 συσχετίζοντας σημαντικά με μεγάλο μέγεθος του όγκου, μετάσταση λεμφαδένα, προχωρημένο κλινικό στάδιο και φτωχή πρόγνωση. Λειτουργικά, miR-210 υπερέκφραση προωθεί την μετανάστευση και την εισβολή του ορθοκολικού καρκίνου κύτταρα. Επιπλέον, miR-210 μπορεί να διεγείρεται από υποξία και μεσολαβεί στην προκαλούμενη από υποξία μετάσταση καρκίνου του παχέος εντέρου κυττάρων. Επιπλέον, η πρωτεΐνη της μεμβράνης κενοτόπιο 1 (VMP1) ταυτοποιείται ως η άμεση και λειτουργική στόχος του miR-210. Έτσι, miR-210 είναι ένα χρήσιμο βιοδείκτη για υποξικά καρκινικά κύτταρα και προγνωστικός παράγοντας που διαδραματίζει ουσιαστικό ρόλο στη παχέος μετάσταση του καρκίνου

Παράθεση:. Qu Α, Du L, Yang Υ, Liu Η, Li J, Wang L, et al. (2014) υποξία MiR-210 είναι ένας ανεξάρτητος προγνωστικός παράγοντας και συμβάλλει στην μετάσταση στον καρκίνο του παχέος εντέρου. PLoS ONE 9 (3): e90952. doi: 10.1371 /journal.pone.0090952

Συντάκτης: Fabio Martelli, IRCCS-Policlinico San Donato, Ιταλία

Ελήφθη: 19 Σεπτέμβρη 2013? Αποδεκτές: 6 Φλεβάρη 2014? Δημοσιεύθηκε: 14 Μαρτίου 2014

Copyright: © 2014 Qu et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτή η μελέτη υποστηρίχθηκε από το Εθνικό Ίδρυμα Φυσικών Επιστημών της Κίνας (Νο 81.271.916? 81.301.506)? Επαρχία Shandong Ίδρυμα Φυσικών Επιστημών της Κίνας (Αρ ZR2010H004)? Ταμείο Έρευνας για τον Διδακτορικό Πρόγραμμα της Ανώτατης Εκπαίδευσης της Κίνας (Αρ 20120131110055) και Εθνικό Key Κλινική Ιατρικές Ειδικότητες θεμέλια. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Καρκίνος του παχέος εντέρου (CRC) παραμένει η τρίτη πιο συχνή κακοήθεια σε όλο τον κόσμο και ευθύνεται για την πέμπτη συχνότερη αιτία θανάτου από καρκίνο σχετίζονται με την Κίνα [1]. Παρά το γεγονός ότι οι πρόσφατες βελτιώσεις στις διαγνωστικές τεχνικές και την κλινική διαχείριση αύξησαν την έγκαιρη ανίχνευση της CRC και μείωσε το ποσοστό θνησιμότητας, περίπου 25% των ασθενών CRC παρόν με νόσο σταδίου IV [1]. Επιπλέον, οι ασθενείς με προχωρημένη νόσο συχνά αναπτύσσουν υποτροπιάζουσα νόσο μετά από εκτεταμένη ρίζα εκτομές, κατά συνέπεια δείχνει εξαιρετικά φτωχή ποσοστά επιβίωσης λόγω μετάστασης [2], και η μετεγχειρητική ποσοστό επιβίωσης 5-ετών πέφτει από 90% έως 10% ή ακόμη και λιγότερο μετά έχει συμβεί μετάσταση . Ένας αυξανόμενος αριθμός μελετών έχουν αποδείξει ότι αμφότερα καρκινικά κύτταρα και μικρο-περιβαλλοντικοί παράγοντες ενορχηστρώνουν τα κρίσιμα γεγονότα που οδηγούν σε μετάσταση [3], τονίζοντας έτσι την ανάγκη για την περαιτέρω κατανόηση μικροπεριβάλλον του όγκου και μοριακών μηχανισμών που εμπλέκονται στη μετάσταση του όγκου.

η υποξία, ή χαμηλή τάση οξυγόνου, είναι ένα κοινό χαρακτηριστικό των στερεών μικροπεριβάλλον του όγκου. Υποξική όγκοι τείνουν να είναι πιο επιθετική, πιο πιθανό να κάνουν μετάσταση, πιο ανθεκτικά σε συμβατικές θεραπείες, και σχετίζονται με πτωχή πρόγνωση [4] – [6]. Το γονίδιο που κωδικοποιεί HIF1 (υποξία παράγοντα-1), η οποία αποτελείται από τις υπομονάδες HIF1α και HIF1β, είναι ίσως η πιο μελετημένη γονίδιο που παίζει ουσιαστικό ρόλο στην απόκριση στην υποξία [7]. HIF1α είναι σταθερή υπό συνθήκες υποξίας, με την έκφραση του μειώνεται με ταχύ ρυθμό υπό νορμοξικές συνθήκες, ενώ HIF1β εκφράζεται ιδιοσυστατικά υπό αμφότερες τις συνθήκες [8]. Αποδεικτικά στοιχεία συσσωρεύει σχετικά με τη σημασία της έκφρασης HIF1α σε διάφορους στερεούς όγκους [9] – [11], και αυξημένη έκφραση HIF1α έχει αναφερθεί πρόσφατα να συμβάλει στην παχέος μετάστασης του καρκίνου [12], [13]

Τα microRNAs. (miRNAs, Mirs) αποτελούν μία νέα κατηγορία ενδογενών, μικρά, μη κωδικοποιητικού RNA ολιγονουκλεοτίδια που ρυθμίζουν την γονιδιακή έκφραση με στόχευση 3 ‘μη μεταφραζόμενη περιοχή (3’-UTR) του αντίστοιχου mRNA [14], [15]. Δυσλειτουργία του miRNAs είναι μια καλά γνωστή διαδικασία κλειδί στην παθογένεση πολλών καρκίνων και μπορεί να συμβεί σε οποιοδήποτε σημείο, από την έναρξη έως τη μετάσταση. Υπάρχει μια λειτουργική σχέση μεταξύ υποξία και microRNA απορρύθμισης στον καρκίνο. Για παράδειγμα, Chen H ανέφερε ότι miR-103/107 αυξήθηκε παρουσία υποξίας και θα μπορούσε να συμβάλει στην υποξία διεγείρεται μετάσταση σε CRC [16]. Πολλά microRNAs, όπως miR-21, 93, 103, 107, 192, 195, 210, και 213, μπορεί να προκληθεί και σημαντικά πάνω ρυθμισμένα με HIF1α σε καρκινικά κύτταρα κάτω από συνθήκες υποξίας [17], [18]. Μεταξύ των miRNAs που προκαλείται από HIF1α, miRNA-210 είναι το πιο σημαντικό και σταθερά πάνω ρυθμισμένα miRNA κατά τη διάρκεια της υποξικής απόκριση σε διαφορετικούς τύπους κυττάρων όγκου και φυσιολογικών κυττάρων [19], [20]. Πρόσφατα, Ying et al. έδειξε ότι η υποξία που προκαλείται από miR-210 θα μπορούσε να ενισχύσει τη μετανάστευση και την εισβολή του ηπατοκυτταρικού καρκινώματος (HCC) [21], και Redova και οι συνεργάτες του διαπίστωσαν ότι η προς τα κάτω ρύθμιση των miR-210 ανέστειλε τη μεταναστευτική και επεμβατικές δυνατότητες της νεφροκυτταρικό καρκίνωμα (RCC) [ ,,,0],22], Rothe ανέφεραν παρόμοια αποτελέσματα στον καρκίνο του μαστού [23]. Οι περισσότερες μελέτες έχουν δείξει ότι miR-210 μπορεί να δράσει ως ένα ογκογόνο miRNA και σχετίζεται με κακή πρόγνωση σε ορισμένους καρκίνους ανθρώπινα επιθηλιακά [21], [24] – [26]. Ωστόσο, μερικές μελέτες έχουν δείξει ότι η έκφραση miR-210 χάνεται κατά τη διάρκεια της ογκογένεσης και ότι ο miRNA ασκεί μια επίδραση καταστολής όγκων σε επιθηλιακό καρκίνωμα πλακωδών κυττάρων ανθρώπινου ωοθηκικού και του οισοφάγου [27], [28]. Αυτά τα δεδομένα υποδεικνύουν ότι miR-210 μπορεί να παίζουν κρίσιμους ρόλους κατά τη διάρκεια της ογκογένεσης και ο καρκίνος της εξέλιξης και μπορεί να ασκήσει διάφορα αποτελέσματα επί διαφορετικών καρκίνων. Αν και έχει αναφερθεί ότι η miR-210 εκφράζεται και σε μεγάλο βαθμό πάνω ρυθμισμένα σε απόκριση προς υποξία σε κυτταρικές γραμμές CRC (ΗΟΤ-116 και ΗΤ-29), η λειτουργία του miR-210 σε ορθοκολικό καρκίνο δεν έχει διασαφηνιστεί μέχρι σήμερα, και ο ρόλος της στην παχέος εξέλιξη του καρκίνου παραμένει ασαφής.

στην παρούσα μελέτη, εστιάσαμε στην miR-210, η υποξία που προκαλείται από miRNA, και εξετάστηκε η έκφραση της σε ανθρώπινους ιστούς CRC, αναλύεται ο συσχετισμός της με κλινικοπαθολογοανατομικές χαρακτηριστικά και πρόγνωση, και στη συνέχεια αποκάλυψε το ρόλο του miR-210 στην υποξία που προκαλείται από μετάσταση κατά τη διάρκεια του παχέος εξέλιξη του καρκίνου.

Υλικά και Μέθοδοι

ασθενείς και δείγματα ιστών

δείγματα ιστών, συμπεριλαμβανομένων ιστούς όγκων και των παρακείμενων μη-καρκινικούς ιστούς, ελήφθησαν από 193 ασθενείς CRC κατά το χρόνο της χειρουργικής επέμβασης στο Τμήμα Γενικής Χειρουργικής, Qilu Νοσοκομείο του Πανεπιστημίου της Shandong, Τζινάν, Κίνα, από τον Ιούνιο του 2003 έως τον Φεβρουάριο του 2008. Κανένας από τους ασθενείς δεν είχε ποτέ λάβει χημειοθεραπεία, ακτινοθεραπεία, ή χειρουργική επέμβαση. Όλες οι ιστοί τοποθετήθηκαν αμέσως σε υγρό άζωτο και καταψύχθηκαν στους -80 ° C μέχρι την εκχύλιση του RNA. Η μελέτη αυτή εγκρίθηκε από την Επιτροπή Δεοντολογίας της Qilu Νοσοκομείο, Πανεπιστήμιο Shandong, και γραπτή συγκατάθεση λήφθηκε από κάθε ασθενή.

Τα κλινικοπαθολογοανατομικές δεδομένων, συμπεριλαμβανομένου του φύλου, της ηλικίας, τη θέση του όγκου, το στάδιο του όγκου, το μέγεθος του όγκου, των τοπικών εισβολή, η ιστολογική διαφοροποίηση και μετάσταση λεμφαδένα συλλέχθηκαν αναδρομικά. Η διάρκεια της παρακολούθησης υπολογίζεται από την ημερομηνία της επέμβασης στο θάνατο ή την τελευταία παρακολούθηση, και ολοκληρώσαμε την παρακολούθηση, τον Απρίλιο του 2012. Οι ασθενείς αποκλείστηκαν από την ανάλυση των κλινικοπαθολογοανατομικών χαρακτηριστικά και την πρόγνωση αν είχαν ελλιπή ιατρικά αρχεία ή ανεπαρκής παρακολούθηση.

καλλιέργειας κυττάρων

CRC κυτταρικές σειρές (ΗΤ-29, SW480 και SW620) και ΗΕΚ (ανθρώπινα εμβρυϊκά νεφρικά) 293Τ κυτταρική γραμμή αγοράστηκαν από τη Συλλογή Τύπος Πολιτισμού η κινεζική Ακαδημία Επιστημών (Σαγκάη, Κίνα), και η HCT116 κυτταρική σειρά αγοράστηκε από τη Σαγκάη Ινστιτούτο Βιοχημείας και κυτταρικής Βιολογίας (Κίνα). Όλες οι κυτταρικές γραμμές καλλιεργήθηκαν σε Dulbecco τροποποιημένο μέσο Eagle (DMEM? Υαλώδη, Logan, UT) που περιέχει 10% ορό εμβρύου μόσχου (FBS? Gibco, Carlsbad, CA) στους 37 ° C σε ένα 5% CO

2 θερμοκοιτίδα. Για την επαγωγή υποξία, τα κύτταρα εκτέθηκαν σε μια σταθερή ροή του μίγματος αερίου χαμηλής οξυγόνου (1% O

2, 5% CO

2, και 94% Ν

2) σε υγροποιημένο θάλαμο επώασης (MiniGalaxy, RSBiotech, Irvine, Scotland).

απομόνωση RNA, σύνθεση cDNA, και ποσοτική αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης σε πραγματικό χρόνο (qRT-PCR)

Το συνολικό RNA εξήχθη χρησιμοποιώντας το αντιδραστήριο ΤΚΙζοΙ (Invitrogen , Carlsbad, CA) σύμφωνα με το πρωτόκολλο του κατασκευαστή. Όλα τα χειρισμούς του RNA διεξήχθησαν υπό συνθήκες RNase-free. Η συγκέντρωση του RNA μετρήθηκε χρησιμοποιώντας BioPhotometer συν (Eppendorf, Hamburg, Germany) στα 260 nm, και το απομονωμένο RNA φυλάχθηκε στους -80 ° C μέχρι τη χρήση. Για την ανάλυση της έκφρασης HIF1α και VMP1mRNA, ολικό RNA (1 μ§) μεταγράφηκε αντίστροφα σε cDNA χρησιμοποιώντας το SuperScript kit (Toyobo, Osaka, Japan), και qRT-PCR αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν με τη χρήση SYBR Green (Toyobo, Osaka, Japan) και μια PRISM 7500 System ΑΒΙ Sequence Detection (Applied Biosystems, Foster City, CA). Οι αλλαγές φορές σε HIF1α και την έκφραση VMP1 mRNA προσδιορίσθηκαν ποσοτικά με τη χρήση του

-ΔΔCT σχετική μέθοδο 2 ποσοτικοποίηση με β-ακτίνη ως έλεγχο καθαριότητας. Οι εκκινητές για β-ακτίνη (εμπρόσθιος εναρκτήρας: 5′-TGGAGTCCTGTGGCATCCACGAAA-3 ‘, αντίστροφος εκκινητής: 5′-TGTAACGCAACTAAGTCATAGTCCG-3′), HIF-1α (εμπρόσθιος εναρκτήρας: 5’-ATCGCGGGGACCGATT-3 ‘, αντίστροφος εκκινητής: 5’ -CGACGTTCAGAACTTATCTTTTTCTT-3 ‘) και VMP1 (προωθητικός εκκινητής: 5′-GAGATGCTGGAACATGCAGA-3′, αντίστροφος εκκινητής: 5’-TTGCTCCACTATGTGCTTGC-3 ‘) αγοράστηκαν από BioSune, Shanghai, Κίνα. Για την έκφραση miRNA, cDNA συντέθηκε χρησιμοποιώντας γονίδιο-ειδικούς εκκινητές (Ribobio, Guangzhou, Κίνα) και το κιτ M-MLV RT (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) σε μια 20-μΙ όγκου αντιδράσεως. Τα αντιδραστήρια της αντίδρασης RT περιείχε 1 μg εκμαγείο RNA, 1 μΙ 10 mM dNTP mix, 2 μΐ 0.1 Μ DTT, 4 μΐ 5 χ πρώτου κλώνου ρυθμιστικό, και 1 μL 40 αναστολέα U /μl RNase. Ο όγκος ρυθμίστηκε με RNA-free H

2O. Η αντίδραση αντίστροφης μεταγραφής διεξήχθη εις τριπλούν για να απομακρυνθούν οποιαδήποτε ακραίες τιμές. έκφραση miRNA εκτιμήθηκε χρησιμοποιώντας qRT-PCR και ΑΒΙ PRISM 7500 Sequence Detection System (Applied Biosystems, Foster City, CA). Τα φορές οι αλλαγές στην έκφραση των miRNAs προσδιορίστηκαν χρησιμοποιώντας το

-ΔΔCT μέθοδο 2? η έκφραση κανονικοποιήθηκε στο μικρό επίπεδο έκφρασης U6 πυρηνικό RNA (U6). Επιπλέον, η σχετική έκφραση των miRNA, HIF1α και VMP1 σε ΗΤ-29 κύτταρα αποκόπτονται ως βαθμονόμησης σε κάθε επιχείρηση και ορίστηκε στην τιμή του 1.

Η επιμόλυνση με miRNA /πλασμίδιο

CRC κύτταρα απλώθηκαν σε πυκνότητα 5 χ 10

4 κύτταρα /φρεάτιο σε πλάκες 24 φρεατίων ή σε 1,5 × 10

5 κύτταρα /φρεάτιο σε τρυβλία 6 φρεατίων και καλλιεργήθηκαν περίπου 24 ώρες πριν από την επιμόλυνση. Αφού τα κύτταρα έφθασαν 50% συρροή, παροδική επιμόλυνση των miRNA μιμείται /αναστολέα (RiboBio, Guangzhou, Κίνα) ή /και πλασμιδίου διεξήχθησαν χρησιμοποιώντας Lipofectamine 2000 (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) ακολουθώντας τις οδηγίες του κατασκευαστή. Για κάθε πείραμα, οι αποτελεσματικότητες επιμόλυνσης εκτιμήθηκαν με qRT-PCR στις 24 ώρες μετά την επιμόλυνση.

Μετανάστευση και εισβολή δοκιμασίες in vitro

Transwell θαλάμους (διάμετρος 6.5 mm, το μέγεθος πόρου 8 μm ) (Corning, ΝΥ, USA) επικαλύφθηκαν με ή χωρίς Matrigel (BD Biosciences, Franklin Lakes, NJ, USA) χρησιμοποιήθηκαν για την εκτέλεση των δοκιμασιών μετανάστευσης και εισβολή. Σε 24 ώρες μετά την επιμόλυνση, το ΗΤ-29 (5 × 10

4 κύτταρα) ή SW480 (1 × 10

5 κύτταρα) κύτταρα επαναιωρηματοποιήθηκαν σε μέσο που περιέχει 1% FBS και τοποθετήθηκαν στον άνω θάλαμο του κάθε ένθετο. Ένα δείγμα του μέσου που περιέχει 10% FBS (500 μΐ) προστέθηκε στους κάτω θαλάμους. Μετά από επώαση για 24 ώρες στους 37 ° C, τα κύτταρα προσκολλώνται στην κατώτερη μεμβράνη βάφτηκαν με 0.1% κρυσταλλικό ιώδες, απεικονίζεται (200 Χ), και μετρήθηκαν χρησιμοποιώντας ένα ανεστραμμένο μικροσκόπιο IX81 (Olympus, Tokyo, Japan).

λουσιφεράσης

δοκιμασία

δοκιμασία ανταποκριτή λουσιφεράσης πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας τα διανύσματα pmiR-REPORTTM (RiboBio, Guangzhou, Κίνα) που περιέχει άγριου τύπου (WT) -VMP1 3′-UTR αλληλουχίες ή μεταλλαγμένο (MUT) -VMP1 3 «-UTR ακολουθίες. κύτταρα ΗΕΚ293Τ συνδιαμολύνθηκαν παροδικά με miR-210 μιμείται /miR-αρνητικό έλεγχο και WT-VMP1 3′-UTR διάνυσμα /MUT VMP1 3′-UTR. Οι δραστικότητες της λουσιφεράσης μετρήθηκε χρησιμοποιώντας την Dual-Luciferase κιτ δοκιμασίας (Promega, Madison, WI) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή 48 ώρες μετά την επιμόλυνση.

κηλίδος Western

Η συνολική πρωτεΐνη των καλλιεργημένων κυττάρων εκχυλίζεται με RIPA ρυθμιστικό διάλυμα που περιέχει PMSF. BCA κιτ δοκιμασίας πρωτεΐνης (Beyotime, Haimen, Κίνα) χρησιμοποιήθηκε για να προσδιοριστεί η συγκέντρωση. Πρωτεΐνες διαχωρίστηκε μέσω SDS-PAGE και μεταφέρθηκαν σε μεμβράνες PVDF. Μετά τον αποκλεισμό, η μεμβράνη επωάστηκε με αντι-VMP1 πολύκλωνο αντίσωμα ποντικού (Abcam, Southampton, UK) ή αντι-β-ακτίνης ποντικού μονοκλωνικό αντίσωμα (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA, USA), που ακολουθείται από επώαση με συζευγμένο με HRP δευτερογενή αντισώματα (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA, USA). Σήματα προσδιορίστηκαν με ένα κιτ ανίχνευσης χημειοφωταύγειας (Amersham Pharmacia Biotech, Piscataway, NJ).

Η στατιστική ανάλυση

Το SPSS (Στατιστικού Πακέτου για τις Κοινωνικές Επιστήμες) πακέτο λογισμικού, έκδοση 18.0 (Chicago, IL, USA), χρησιμοποιήθηκε για την ανάλυση όλων των δεδομένων. Εμείς χρησιμοποιήθηκε για πρώτη φορά το τεστ Kolmogorov-Smirnov για τον προσδιορισμό της κατανομής των δεδομένων σε κάθε ομάδα. Τα δεδομένα παρουσιάζονται ως μέσος όρος ± τυπική απόκλιση (SD) ή διάμεσες τιμές (διατεταρτημοριακό εύρος), όταν οι τιμές είχαν φυσιολογικά ή αφύσικα διανεμηθεί, αντίστοιχα. Στατιστικές διαφορές μεταξύ των ομάδων εξετάστηκαν χρησιμοποιώντας το Mann-Whitney

U

-test,

t-test

, ή ένα τεστ Kruskal-Wallis μαθητή, ανάλογα με την περίπτωση. Η συσχέτιση μεταξύ του miR-210 και HIF1α (ή VMP1) προσδιορίστηκε από την ανάλυση συσχέτισης του Pearson. Η μέθοδος Kaplan-Meier χρησιμοποιήθηκε για να εκτιμηθεί η επιβίωση, και οι διαφορές μεταξύ των επιβίωση υποομάδες εξετάστηκαν χρησιμοποιώντας τη δοκιμασία log-rank. Ένα μοντέλο παλινδρόμησης Cox (Αναλογικό μοντέλο κινδύνου) εφαρμόστηκε για την μονοπαραγοντική ανάλυση και πολυπαραγοντική ανάλυση των προγνωστικών παραγόντων. Οι διαφορές θεωρήθηκαν στατιστικά σημαντικές μόνο όταν

P

& lt?. 0.05

Αποτελέσματα

MiR-210 είναι συχνά up-ρυθμίζεται παχέος ιστούς καρκίνου και εμπλέκονται στην ανάπτυξη CRC

Τα επίπεδα έκφρασης του miR-210 σε 193 ζεύγη ανθρώπινων ιστών CRC και αντίστοιχα μη καρκινικούς ιστούς εξετάστηκαν χρησιμοποιώντας qRT-PCR. Προκειμένου να διασφαλιστεί ότι το γονίδιο αναφοράς U6 δεν αλλάζει μεταξύ ιστών όγκου και αντίστοιχα μη καρκινικούς ιστούς, υπολογίσαμε τις μέσες τιμές Ct ως 2

-ct. Το επίπεδο των U6 δεν έδειξαν σημαντικές διαφορές μεταξύ των όγκων και των αντίστοιχων μη καρκινικά δείγματα (2

-CtTumor /2

-CtNon-καρκινικές = 0,93?

P

= 0,34) (Σχήμα S1 ). Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι miR-210 έκφραση στους ιστούς CRC ήταν σημαντικά πάνω ρυθμισμένα σε σύγκριση με εκείνη στα γειτονικά φυσιολογικούς ιστούς (

P

& lt? 0.001, Σχήμα 1Α.). Επιπλέον, το 58% (111 από 193) των δειγμάτων που εμφανίζονται περισσότερο από 2-φορές προς τα πάνω ρύθμιση του miR-210 σε σύγκριση με τα δείγματα μη καρκινικό ιστό, υποδηλώνοντας ότι η υπερέκφραση του miR-210 είναι ένα κοινό συμβάν σε CRC. Σε ένα ελεγχόμενο πείραμα, βρήκαμε επίσης miR-21, μια άλλη υπερεκφρασμένο miR εις το CRC [29], ήταν σημαντικά επάνω ρυθμισμένη σε ιστούς CRC σε σύγκριση με παρακείμενες μη καρκινικούς ιστούς (

P

& lt? 0.001, Εικόνα S2 ), επιβεβαιώνοντας την σκοπιμότητα και την αξιοπιστία της μεθόδου μας. Επιπλέον, η έκφραση σε ιστούς HIF1α CRC ήταν ρυθμισμένα (

P

& lt? 0,001? Σχήμα 1D) και συσχετίζεται θετικά με miR-210 έκφραση σε ιστούς CRC (r = 0.402,

P

& lt ? 0,01? Εικ. 1 Ε)

(Α) MiR-210 έκφραση ελέγχθηκε με τη χρήση qRT-PCR σε 193 ζεύγη ανθρώπινων ιστών CRC (CRC) και των παρακείμενων μη ογκογόνους ιστούς (ΝΤ), και η έκφρασή του. κανονικοποιήθηκε με το επίπεδο της U6 μικρού πυρηνικού RNA (U6) έκφραση σε κάθε δείγμα. (Β) Διπλώστε αλλαγές στην έκφραση miR-210 σε κάθε συνδεδεμένο δείγμα. Τα δεδομένα παρουσιάζονται ως ένα ημερολόγιο

αλλαγή 2 φορές (καρκίνος /κανονική), η οποία ορίζεται ως & gt? 1 (υπερέκφραση) και & lt? -1 (υποέκφραση)? οι υπόλοιπες φορές αλλαγές ορίστηκαν ως αμετάβλητη. (Γ) Η υπερέκφραση του miR-210 βρέθηκε σε 58% (111 από 193) των ιστών CRC σε σύγκριση με τις παρακείμενες μη ογκογόνους ιστούς. έκφραση (D) HIF1α mRNA ανιχνεύθηκε σε ιστούς CRC (CRC) και των παρακείμενων μη ογκογόνους ιστούς (ΝΤ), και η έκφραση αυτού ομαλοποιήθηκε με το επίπεδο της έκφρασης β-ακτίνης σε κάθε δείγμα. (Ε) Η συσχέτιση μεταξύ της έκφρασης του miR-210 και τα επίπεδα HIF1α mRNA σε ιστούς CRC αναλύθηκε χρησιμοποιώντας την ανάλυση συσχέτισης του Pearson. (F) Kaplan-Meier καμπύλες συνολική επιβίωση, ανάλογα με το επίπεδο της έκφρασης miR-210. Οι ασθενείς με υψηλή έκφραση του miR-210 είχαν σημαντικά φτωχότερη συνολικό ποσοστό επιβίωσης 5 ετών από εκείνους με χαμηλή έκφραση του miR-210 (

P

& lt? 0.001). Η διάμεση miR-210 επίπεδο έκφρασης στα δείγματα όγκων επιλέχθηκε ως σημείο αποκοπής.

Η

Είμαστε συνοψίζονται περαιτέρω τη σύνδεση των 210 miR-επίπεδα έκφρασης με διάφορες κλινικοπαθολογοανατομικές χαρακτηριστικά στους ιστούς CRC και διαπίστωσε ότι έκφραση του miR-210 συσχετίστηκε σημαντικά με μεγάλο μέγεθος του όγκου (

P

= 0,014), την τοπική εισβολή (

P

= 0,047), θετική περιφερειακή μετάσταση στους λεμφαδένες (

P

= 0.001), και το στάδιο ΤΝΜ (

P

= 0,005). Ωστόσο, δεν υπήρξαν σημαντικές συσχετίσεις μεταξύ miR-210 έκφρασης και το φύλο του ασθενούς, την ηλικία, τη θέση του όγκου, ή βαθμό ιστολογία (όλα

P

& gt? 0,05). Τα αναλυτικά αποτελέσματα των στατιστικών ελέγχων ανάμεσα στην έκφραση του miR-210 και τα κλινικοπαθολογοανατομικές χαρακτηριστικά που αναφέρονται στον πίνακα 1.

Η

MiR-210 είναι ένας ανεξάρτητος προγνωστικός δείκτης για τη συνολική επιβίωση των ασθενών με CRC

Ένα σύνολο των 50 ασθενών που πέθαναν κατά τη διάρκεια της περιόδου παρακολούθησης, καθώς και το σωρευτικό συνολικό ποσοστό επιβίωσης 5-ετών ήταν 56,9%. Χρησιμοποιώντας τη διάμεση τιμή των επιπέδων έκφρασης του miR-210 ως αποκοπής, χωρίσαμε τους 116 ασθενείς CRC σε δύο ομάδες: υψηλή miR-210 ομάδα έκφρασης και μια ομάδα χαμηλής έκφρασης του miR-210. Στη συνέχεια χρησιμοποιήσαμε την ανάλυση καμπύλη επιβίωσης Kaplan-Meier για την αξιολόγηση της προγνωστικής αξίας του miR-210 σε καρκίνο του παχέος εντέρου. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι οι ασθενείς με υψηλή έκφραση miR-210 είχαν σημαντικά χειρότερη πρόγνωση από εκείνους με χαμηλή έκφραση miR-210 (

P

& lt? 0,001, σχ 1F.). Για να αξιολογηθεί κατά πόσον η έκφραση του miR-210 ήταν ένα ανεξάρτητο δείκτη της συνολικής επιβίωσης των ασθενών CRC, θα εφαρμοστεί για πρώτη φορά ένα μονομεταβλητό μοντέλο αναλογικού κινδύνου του Cox παλινδρόμησης για την εκτίμηση της ατομική αναλογία κινδύνου για όλες τις κλινικοπαθολογοανατομικές παραμέτρους. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι η συνολική επιβίωση ήταν σημαντικά σχετίζονται με το επίπεδο έκφρασης του miR-210 (RR = 2.621? 95% CI, 1,457 έως 4,712?

P

= 0.001) και άλλες τέσσερις παραμέτρους (μέγεθος του όγκου, την τοπική εισβολή, περιφερειακή μετάσταση στους λεμφαδένες, και το στάδιο TNM? όλα

P

& lt? 0,05). Στην πολυπαραγοντική ανάλυση, η Cox μοντέλο αναλογικού κινδύνου με τη συμμετοχή των πέντε σημαντικές προγνωστικούς παράγοντες που προσδιορίζονται έκφραση του miR-210 ως ανεξάρτητος προγνωστικός παράγοντας για ασθενείς με CRC (

P

= 0,008). Οι στατιστικές τιμές της έκφρασης miR-210 και των άλλων κλινικοπαθολογικών παραμέτρων που προέρχονται από το μοντέλο παλινδρόμησης αναλογικών κινδύνων Cox αναφέρονται στον Πίνακα 2.

Η

MiR-210 εκφράζεται σε κυτταρικές σειρές CRC και διεγείρεται από υποξία σε CRC κύτταρα

Εξετάσαμε το επίπεδο έκφρασης του miR-210 σε ένα πάνελ κυτταρικών γραμμών CRC, συμπεριλαμβανομένων HCT-116, ΗΤ-29, SW620 και SW480. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι το επίπεδο του miR-210 ήταν υψηλότερη σε ΗΤ-29 κυττάρων σε σύγκριση με τις άλλες τρεις κυτταρικές γραμμές, και το επίπεδο της ήταν χαμηλότερη στην SW480 κύτταρα (Σχ. 2Α). Με βάση αυτό το μοτίβο έκφρασης, εμείς επιλέξαμε ως εκ τούτου ΗΤ-29 και SW480 για τις ακόλουθες μελέτες. Όπως παρουσιάζεται στην Εικόνα 2D και 2Ε, βρήκαμε ότι τα επίπεδα miR-210 αυξήθηκαν σε απόκριση σε υποξία σε αυτά τα κύτταρα. Επιπλέον, η έκφραση του miR-210 αυξήθηκε σημαντικά με την παρατεταμένη έκθεση σε υποξία, υποδεικνύοντας ότι miR-210 ήταν πράγματι επάγεται από υποξία σε κυτταρικές σειρές CRC.

(Α) MiR-210 έκφρασης σε κυτταρικές γραμμές CRC. (B, C) έκφραση HIF1α mRNA σε ΗΤ-29 (Β) και SW480 (C) κυττάρων υπό συνθήκες υποξίας. (D, E) MiR-210 έκφραση σε ΗΤ-29 (D) και SW480 (Ε) κυττάρων υπό συνθήκες υποξίας. Τα δεδομένα παρουσιάζονται ως ο μέσος όρος τριών μετρήσεων, και οι ράβδοι σφάλματος αντιπροσωπεύουν την SD του μέσου όρου. *

P

& lt?. 0.05

Η

MiR-210 προάγει τη μετανάστευση CRC κυττάρων και εισβολή και προκαλεί την υποξία που προκαλείται από τη μετανάστευση και την εισβολή των κυττάρων CRC

Για να μετρήσετε οι βιολογικές ιδιότητες του miR-210 σε κύτταρα CRC, έχουμε παροδικά διαμορφωμένο το επίπεδο έκφρασης miR-210 με επιμόλυνση με miR-210 μιμείται ή αναστολέα. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 3, η αποτελεσματικότητα της επιμόλυνσης ήταν πολύ υψηλή στις κυτταρικές γραμμές ΗΤ-29 και SW480. Transwell πειράματα με ή χωρίς Matrigel διεξήχθησαν για να δοκιμαστεί η επίδραση του miR-210 για τη μετανάστευση CRC κυττάρων και εισβολή, και βρήκαμε ότι η ρύθμιση προς τα πάνω του miR-210 από τα miR-210 μιμείται ενίσχυσε την μετανάστευση και την εισβολή ικανότητα των κυττάρων CRC (Εικ . 4Α, 4C). Σύμφωνα με τα αποτελέσματα αυτά, η επιμόλυνση με τον αναστολέα miR-210 οδήγησε σε σημαντική μείωση της μετανάστευσης και της εισβολής ικανότητα των κυττάρων CRC σε σύγκριση με τα κύτταρα που επιμολύνθηκαν με το miR αρνητικό μάρτυρα (Σχ. 4Β, 4D). Στο σύνολό τους, οι παρατηρήσεις μας δείχνουν ότι miR-210 θα μπορούσε να προωθήσει την μετανάστευση και την εισβολή ικανότητα των κυττάρων CRC.

(, Γ Α) MiR-210 έκφραση σε ΗΤ-29 (Α) και SW480 κύτταρα (C) σημαντικά αυξημένη μετά από επιμόλυνση με τα miR-210 μιμείται. έκφρασης (Β, D) MiR-210 σε ΗΤ-29 (Α) και τα κύτταρα SW480 (C) μειώθηκε σημαντικά μετά την επιμόλυνση με τον αναστολέα miR-210. Τα δεδομένα παρουσιάζονται ως ο μέσος όρος τριών μετρήσεων, και οι ράβδοι σφάλματος αντιπροσωπεύουν την SD του μέσου όρου. *

P

& lt?. 0.05 σε σύγκριση με το αντίστοιχο αρνητικό μάρτυρα

Η

(Α, Β) δοκιμασίες Transwell μετανάστευση των ΗΤ-29 και SW480 κύτταρα διεξήχθησαν μετά την επιμόλυνση με τον ΜΙΚ 210 μιμείται (Α) ή αναστολέα (Β). (C, D) Transwell δοκιμασίες εισβολή των ΗΤ-29 και SW480 κύτταρα διεξήχθησαν μετά από επιμόλυνση με τα miR-210 μιμείται (C) ή αναστολέα (Δ). Σε όλες τις ομάδες, τα αποτελέσματα είναι αντιπροσωπευτικά τουλάχιστον τριών ανεξάρτητων πειραμάτων. NC, αρνητικός έλεγχος.

Η

Επειδή αποδείξαμε miR-210 θα μπορούσε να αυξήσει το δυναμικό της μετανάστευσης και της εισβολής των κυττάρων CRC, υποθέσαμε ότι το miR-210 θα μπορούσε επίσης να μεσολαβούν την υποξία που προκαλείται από τη μετανάστευση και την εισβολή των κυττάρων CRC . Για να επιβεβαιωθεί αυτή η υπόθεση, πραγματοποιήσαμε προσδιορισμούς Transwell να εξετάσει το ενδεχόμενο της μετανάστευσης και της εισβολής των κυττάρων CRC υπό συνθήκες υποξίας και διαπίστωσε ότι η μετανάστευση και εισβολή ικανότητα αυτών των κυττάρων CRC ήταν σημαντικά αυξημένη σε σύγκριση με τα κύτταρα κάτω από νορμοξικές συνθήκες. Επιπλέον, η επιμόλυνση με τον αναστολέα miR-210 μείωσε δραματικά τη μετανάστευση και την εισβολή ικανότητα των υποξικών κυττάρων CRC, ενώ επιμόλυνση με ΜΙΚ-210 μιμείται ενίσχυσε περαιτέρω την μετανάστευση και την εισβολή ικανότητα των κυττάρων CRC (Εικ. 5). Τα παραπάνω αποτελέσματα καταδεικνύουν ότι miR-210 παίζει σημαντικό ρόλο στην προκαλούμενη από υποξία μετανάστευση και εισβολή των κυττάρων CRC.

(Α, Β) μετανάστευση Transwell και εισβολή δοκιμασίες ΗΤ-29 και SW480 κύτταρα διεξήχθησαν μετά επιμόλυνση με ΜΙΚ-210 μιμείται ή τον αρνητικό έλεγχο (NC) υπό ορθοξικές ή υποξικές συνθήκες. (C, D) Transwell μετανάστευση και δοκιμασίες εισβολή των ΗΤ-29 και SW480 κύτταρα διεξήχθησαν μετά την επιμόλυνση με τον αναστολέα miR-210 ή τον αρνητικό έλεγχο υπό ορθοξικές ή υποξικές συνθήκες. Σε όλους τους πίνακες, τα αποτελέσματα είναι αντιπροσωπευτικά τουλάχιστον τριών ανεξάρτητων πειραμάτων.

Η

VMP1 είναι ένας άμεσος στόχος του miR-210

TargetScan προσδιορίζει ότι 3′-UTR της VMP1 περιέχει προέβλεψε θέση δέσμευσης για miR-210 (Σχ. 6Α). δοκιμασία δραστικότητας λουσιφεράσης έδειξαν ότι miR-210 ανέστειλε σημαντικά την δραστικότητα λουσιφεράσης των WT 3′-UTR αλλά όχι το Mut 3′-UTR του VMP1 σε κύτταρα ΗΕΚ293Τ (Εικ. 6Β). Επιπλέον, η υπερέκφραση του miR-210 ανέστειλε σημαντικά VMP1 mRNA και τα επίπεδα πρωτεΐνης σε ΗΤ-29 και SW480 κύτταρα (Σχ. 6C, 6D) και στο επίπεδο VMP1 ήταν αντιστρόφως ανάλογη με miR-210 έκφραση σε πρωτογενείς ιστούς CRC (r = -0.318,

P

& lt? 0,01? Σχ. 6Ε). Αυτά τα δεδομένα υποδεικνύουν σθεναρά ότι το miR-210 ρυθμίζει αρνητικά την έκφραση VMP1 με απευθείας στόχευση αλληλουχιών του 3′-UTR.

(Α) Οι υποθετικές miR-210 ακολουθίες δεσμευτικός ως προς όλα VMP1 3′-UTR. δοκιμασία (Β) δραστηριότητα λουσιφεράσης εκτελέστηκε για τα κύτταρα ΗΕΚ293Τ συνεπιμολύνθηκαν με φορείς pmiR-REPORT ™ περιέχουν WT-VMP1 3′-UTR ή MUT-VMP1 3′-UTR αλληλουχίες και miR-210 μιμείται. Τα δεδομένα παρουσιάζονται ως κανονικοποιημένη μεταβολή φορές σε δραστικότητα λουσιφεράσης. (C, D) VMP1 mRNA και πρωτεΐνης προσδιορίστηκαν σε ΗΤ-29 κύτταρα και τα κύτταρα SW480 επιμολυσμένα με miR-210 μιμείται ή miR-αρνητικό έλεγχο με qRT-PCR και στυπώματος Western, αντιστοίχως. (Ε) αντίστροφη συσχέτιση μεταξύ της έκφρασης του miR-210 και τα επίπεδα VMP1 mRNA σε ιστούς CRC αναλύθηκε χρησιμοποιώντας την ανάλυση συσχέτισης του Pearson.

Η

Η υπερέκφραση του VMP1 αναστρέφει μερικώς την μετανάστευση και την εισβολή των κυττάρων CRC που προκαλείται από το miR-210

Για να προσδιορίσετε αν VMP1 εμπλέκεται στην miR-210 που προκαλείται από τη μετάσταση των κυττάρων CRC, πραγματοποιήσαμε αναλύσεις διάσωσης. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 7, miR-210 μιμείται θα μπορούσε να αυξήσει την μεταστατική ικανότητα των κυττάρων του CRC και μειωμένη μεταστατικό δυναμικό παρατηρήθηκε σε VMP1 υπερεκφράζουν κυττάρων σε σύγκριση με τα κύτταρα ελέγχου. Επιπλέον, η ταυτόχρονη υπερέκφραση του miR-210 και VMP1 θα μπορούσε να καταργήσει μερικώς miR-210 που προκαλείται από μεταστατικό δυναμικό των κυττάρων CRC. Αυτά τα αποτελέσματα καταδεικνύουν ότι miR-210 μπορεί να προάγει τη μετανάστευση των κυττάρων και CRC εισβολή με τη στόχευση VMP1.

(Α, Β) Transwell μετανάστευση και εισβολή δοκιμασίες διεξήχθησαν σε VMP1 υπερεκφράζουν κύτταρα ΗΤ-29 συνεπιμολύνθηκαν με miR-210 μιμείται ή αρνητικό μάρτυρα. μετανάστευση και εισβολή δοκιμασίες (C, D) Transwell διεξήχθησαν σε VMP1 υπερεκφράζουν SW480 κύτταρα συνεπιμολύνθηκαν με miR-210 μιμείται ή αρνητικό μάρτυρα. Σε όλους τους πίνακες, τα αποτελέσματα είναι αντιπροσωπευτικά τουλάχιστον τριών ανεξάρτητων πειραμάτων.

Η

Συζήτηση

Η υποξία είναι ένα διαδεδομένο χαρακτηριστικό των περισσότερων στερεών όγκων, και η ισχυρή υποξία που προκαλείται από miRNA, miR-210 θεωρείται σήμερα ως ο «κύριος miRNA» της απόκρισης υποξίας [15]. Κατά συνέπεια, είναι σημαντικό να διερευνηθεί το δυναμικό τους ρόλους του miR-210 σε στερεά της προόδου των όγκων, καθώς αυτό miRNA έχει αποδειχθεί ότι διαδραματίζουν βασικό ρόλο στην ανάπτυξη του καρκίνου υπό συνθήκες υποξίας [21], [30]. Τα αποτελέσματά μας παρέχουν την πρώτη απόδειξη ότι το miR-210 υπερεκφράζεται σε ιστούς CRC και λειτουργεί ως βασικός παράγοντας για την εξέλιξη της CRC.

Η απορυθμισμένη έκφραση του miR-210 έχει αναντίρρητα αποδειχθεί σε διάφορες ανθρώπινες κακοήθειες. Cai et al. έδειξαν ότι η έκφραση miR-210 ήταν σημαντικά υψηλότερη σε παιδιατρικούς ασθενείς με οστεοσάρκωμα και συσχετίστηκε σημαντικά με την επιθετική κλινικοπαθολογικά χαρακτηριστικά και κακή πρόγνωση [31]. Ωστόσο, Tsuchiya [32] ανέφεραν ότι miR-210 έκφραση ήταν σημαντικά προς τα κάτω σε ασθενείς με ανεπαρκώς διαφοροποιημένο οισοφαγικό καρκίνωμα πλακωδών κυττάρων. Σε αντίθεση, Greither et al. [33] ανέφεραν ότι δεν υπήρχαν στατιστικά σημαντικές συσχετίσεις μεταξύ της έκφρασης του miR-210 και κάθε επιθετική κλινικοπαθολογοανατομικές χαρακτηριστικά σε σάρκωμα μαλακών ιστών. Αυτά τα αντικρουόμενα ευρήματα μπορεί να εξηγηθεί από τους διάφορους ρόλους που miR-210 μπορεί να παίξει στην παθογένεση διαφόρων καρκίνων. Εδώ, ανιχνεύσαμε μία αξιοσημείωτη αύξηση της έκφρασης miR-210 σε ιστούς CRC, και miR-210 υπερέκφραση συσχετίστηκε σημαντικά με την επιθετική κλινικοπαθολογοανατομικές χαρακτηριστικά, όπως ένα μεγάλο μέγεθος του όγκου, θετική περιφερειακή μετάσταση στους λεμφαδένες, τοπική εισβολή όγκου, και μια προηγμένη κλινική στάδιο. Βρήκαμε επίσης ότι το επίπεδο miR-210 συσχετίστηκε θετικά με την έκφραση HIF1α που σχετίζονται με μετάσταση και δυσμενή πρόγνωση του CRC [12], [13]. Τα ευρήματα έδειξαν ότι το miR-210 μπορεί να παίξει σημαντικό ρόλο στην ανάπτυξη της προοδευτικής φαινότυπο της CRC.

Όσον αφορά την επιβίωση, μονοπαραγοντική και πολυπαραγοντική αναλύσεις για να διερευνήσει την πιθανή προγνωστική αξία του miR-210 στο CRC . Τα αποτελέσματα της μονοπαραγοντική ανάλυση έδειξε ότι οι ασθενείς με υψηλότερα επίπεδα miR-210 είχε μια χειρότερη πρόγνωση από εκείνους με χαμηλότερο επίπεδο miR-210. Επιπλέον, τα αποτελέσματα της πολυμεταβλητής ανάλυση του μοντέλου παλινδρόμησης αναλογικών κινδύνων Cox έδειξε ότι miR-210 ήταν ένα ανεξάρτητο προγνωστικό παράγοντα για τη συνολική επιβίωση των ασθενών μετά από χειρουργική επέμβαση. Τα αποτελέσματα αυτά είναι σε συμφωνία με τις μελέτες που αναφέρονται από Camps et al. στον καρκίνο του μαστού [34] και Gee et al. στο κεφάλι και το λαιμό του καρκίνου [35]. Μαζί με τα αποτελέσματά μας, τα ευρήματα αυτά δείχνουν ότι το miR-210 θα μπορούσε να είναι μια πολλά υποσχόμενη προγνωστικός δείκτης για τον εντοπισμό ασθενών με κακή πρόγνωση.

Η λειτουργική διερεύνηση των miR-210 έδειξε ότι το miR-210 παίζει βασικό ρόλο σε πολλές κυτταρικές διεργασίες που εμπλέκονται σε φυσιολογικές και κακοήθεις συνθήκες. MiR-210 μπορεί να εμπλέκεται σε ερυθροποίηση και μπορεί επίσης να προωθήσει αδιπογένεσης [36], [37]. Καθώς η πιο σταθερά και δυναμικά πάνω ρυθμισμένα miRNA υπό συνθήκες υποξίας, miR-210 ρυθμίζει πολλές πτυχές των οδών υποξία, όπως είναι η αγγειογενετική απόκριση των ενδοθηλιακών κυττάρων στην υποξία [38]. Συνεπής αποτελέσματα έδειξαν ότι η επάνω ρυθμισμένη έκφραση του miR-210 εμπλέκεται στην υποξία /VEGF οδού στον καρκίνο του μαστού [34] σηματοδότησης. Σε επιθηλιακό καρκίνο των ωοθηκών, ωστόσο, miR-210 είναι συχνά διαγραφεί και μπορεί να αναστέλλει την πρόοδο του κυτταρικού κύκλου [27].

Στην παρούσα μελέτη, βρέθηκε ότι η υπερέκφραση του miR-210 προωθείται σημαντικά την μετανάστευση και την εισβολή του κύτταρα CRC. Τα στοιχεία μας υποδηλώνουν ότι το miR-210 δρα ως ένα ογκογόνο miRNA στον ανθρώπινο καρκίνο του παχέος εντέρου για την προώθηση της μετάστασης, η οποία είναι συνεπής με τα ευρήματα προηγούμενων μελετών [21] – [23]. Επιβεβαιώσαμε επίσης προηγούμενα ευρήματα που έδειξαν ότι miR-210 ήταν ρυθμισμένη σε κύτταρα CRC σε απόκριση σε υποξία και ότι miR-210 προκλήθηκε σε έναν χρόνο-εξαρτώμενο τρόπο. Αυτά τα αποτελέσματα υποδεικνύουν ότι miR-210 είναι επίσης ένας δείκτης υποξική σε ασθενείς CRC, όπως είναι σε άλλες μορφές καρκίνου, όπως ο καρκίνος κεφαλής και τραχήλου [35]. Επιπλέον, βρήκαμε ότι miR-210 με τη μεσολάβηση της υποξίας που επάγεται μετανάστευση και εισβολή των κυττάρων CRC. Έτσι, εκτός από την ρόλους της στην προσαρμογή των κυττάρων όγκου στο στρες χαμηλού οξυγόνου και ως δείκτη για υποξυγόνωση όγκου, προτείνουμε ότι τα αυξημένα επίπεδα του miR-210 μπορεί να έχουν βιολογικές λειτουργίες που σχετίζονται με την κακοήθεια και μετάσταση των όγκων, δυνητικά εξηγώντας γιατί miR-210 σχετίζεται με κακή πρόγνωση σε ασθενείς με καρκίνο. Περαιτέρω έρευνα αποκάλυψε ότι VMP1 ήταν η λειτουργική κατάντη στόχος του miR-210 στο CRC. VMP1 είναι μία διαμεμβρανική πρωτεΐνη εντοπισμένη σε ενδοκυτταρικά κενοτόπια που αρχικά περιγράφηκε ως μια πρωτεΐνη που σχετίζεται με την οξεία παγκρεατίτιδα [39]. Σε νεφρό μεταστάσεις καρκίνου και μεταστατικές κυτταρικές γραμμές καρκίνου του μαστού, VMP1 μειώνεται [40]. Και στο HCC, VMP1 αναγνωρίζεται ως κατάντη στόχου της miR-210 και η μειωμένη VMP1 συσχετίζεται με μετάσταση όγκου [21].