Αφηρημένο

αφροαμερικάνων ασθενείς με καρκίνο του παχέος εντέρου εμφανίζουν μεγαλύτερη θνησιμότητα από την καυκάσια ομολόγους τους. Βιολογία θα μπορούσε να διαδραματίσει ένα μερικό ρόλο, και προγενέστερες μελέτες δείχνουν υψηλότερη επικράτηση της αστάθειας του μικροδορυφορικού DNA (MSI) μεταξύ των καρκίνων από τις αφρικανικές Αμερικανοί, αν και οι ασθενείς με καρκίνους MSI έχουν βελτιώσει την επιβίωση πάνω από ασθενείς με μη-MSI καρκίνους, σε αντίθεση με το αποτέλεσμα που παρατηρείται για τις αφρικανικές αμερικανικές ασθενείς. CD8

+ διείσδυση Τ κυττάρων του καρκίνου του παχέος εντέρου είναι postively συσχετίζεται με όγκους MSI, και σχετίζεται επίσης με βελτιωμένη έκβαση. Εδώ, χρησιμοποιήσαμε ένα 503-άτομο, με βάση τον πληθυσμό ομάδα καρκίνου του παχέος εντέρου περιλαμβάνει 45% Αφροαμερικανοί να καθορίσει, σύμφωνα με τύφλωσε συνθήκες από όλες τις επιδημιολογικά δεδομένα, η επικράτηση της MSI και συνδέονται CD8

+ διείσδυση Τ κυττάρων εντός των καρκίνων. Μεταξύ του Καυκάσου καρκίνους, το 14% ήταν MSI, ενώ αφροαμερικάνων καρκίνων απέδειξαν 7% MSI (

P

= 0,009). Κλινικά, MSI καρκίνους μεταξύ των αγώνων ήταν παρόμοια? μεταξύ των μικροδορυφόρων σταθερή καρκίνους, αφροαμερικάνων ασθενείς ήταν νεότεροι, θηλυκό, και με εγγύς καρκίνους. CD8

+ Τ κύτταρα ήταν υψηλότερες σε καρκίνους MSI (88,0 vs 30,4 /HPF,

P

& lt? 0,0001), αλλά δεν ήταν διαφορετική μεταξύ των φυλών. Αξιοποιώντας αυτή την πληθυσμιακή ομάδα, αφροαμερικάνων καρκίνους δείχνουν το ήμισυ του επιπολασμού MSI των Καυκάσιων, χωρίς μεταβολή του CD8

διείσδυση + Τ κυττάρων που μπορούν να συμβάλουν στην υψηλότερη θνησιμότητα τους από καρκίνο του παχέος εντέρου

Παράθεση:. Carethers JM, Murali Β, Yang Β, Doctolero RT, Tajima Α, Basa R, et al. (2014) Επίδραση του Αγώνας στις αστάθεια μικροδορυφόρου και CD8

+ κυτταρική διήθηση Τ στον Καρκίνο του παχέος εντέρου. PLoS ONE 9 (6): e100461. doi: 10.1371 /journal.pone.0100461

Επιμέλεια: Hassan χείλος, Πανεπιστήμιο Howard, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 20 Φεβ 2014? Αποδεκτές: 23, Μάη, 2014? Δημοσιεύθηκε: 23 Ιούνη του 2014

Copyright: © 2014 Carethers et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτή η μελέτη χρηματοδοτήθηκε εν μέρει από τις εταιρικές σχέσεις του National Cancer Institute Ολοκληρωμένη τον περιορισμό του καρκίνου Υγεία ανισότητες (CPRCHD) χορηγεί U54CA132384 και U54CA132379, και με επιχορηγήσεις R01 DK067287, U01 CA162147, και Ρ30 DK034987. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Η θνησιμότητα από καρκίνο του παχέος εντέρου είναι υψηλότερη σε αφρικανικούς Αμερικανούς από Καυκάσιους σε κάθε στάδιο της νόσου [1], [2]. Ενώ η διαφορά θνησιμότητας θα μπορούσε εν μέρει να σχετίζονται με την κλινική φροντίδα ή συννοσηρότητα, θα μπορούσε επίσης να έχει συνεισφορές από τις διαφορές μέσα από το καρκίνο [3]. Προηγούμενες μελέτες είχαν ανεπαρκή αριθμό των Αφροαμερικανών να εξετάσει επαρκώς τις φυλετικές διαφορές από τα χαρακτηριστικά του όγκου που θα μπορούσαν να επηρεάσουν τη θνησιμότητα [4], [5].

μικροδορυφορικού αστάθεια (MSI) είναι μια γενετική βιοδείκτη της hypermutable καρκίνων του παχέος εντέρου, με γνώμονα με απενεργοποίηση του συστήματος επιδιόρθωσης αταίριαστων βάσεων του DNA (MMR) [6], [7]. Η παρουσία του απεικονίζει ένα καλύτερο αποτέλεσμα για τους ασθενείς σε σύγκριση με τους ασθενείς του ίδιου ανέβασε τον καρκίνο του παχέος εντέρου χωρίς MSI [3]. Αυτό μπορεί να οφείλεται εν μέρει σε νεοπλασματικά αντιγόνα που δημιουργούνται με μεταλλακτική μετατοπίσεις πλαισίου εντός περιοχές κωδικοποίησης συγκεκριμένων γονιδίων ως συνέπεια της αδρανοποίησης του DNA MMR στο κύτταρο επιθηλιακό καρκίνο του παχέος εντέρου, προσελκύοντας ειδικών κυττάρων του ανοσοποιητικού συστήματος που μπορεί να βοηθήσει να περιέχει τον όγκο και τον περιορισμό μετάσταση [7], [8]. Ειδικότερα, οι MSI καρκίνοι του παχέος εντέρου συνδέονται με αυξημένη ενδοεπιθηλιακή CD8

+ Τ κυττάρων όταν συγκρίνονται με μικροδορυφορική σταθερές (MSS) καρκίνους [8] – [10], και πολλούς καρκίνους MSI επιδείξουν «του Crohn που μοιάζει με» λεμφοειδών «κοκκίωμα» ιστολογικά αντίδραση εντός του επιθηλιακού συστατικού του αδενοκαρκινώματος [7] – [9]. καρκίνοι MSI περιλαμβάνουν 15-20% όλων των καρκίνων του παχέος εντέρου, έχουν διπλοειδή κύτταρα και σχετίζονται αντίστροφα σε αλληλόμορφες απώλειες. καρκίνοι MSI είναι πιο πιθανό να έχουν βλεννώδες χαρακτηριστικά και την κακή διαφοροποίηση σε ιστολογία και ~ 70% βρίσκονται πλησίον της σπληνικής καμπής εντός του παχέος εντέρου. καρκίνοι MSI μπορεί να εξελιχθεί πιο γρήγορα από ό, τι οι καρκίνοι MSS [7], [11], και μπορεί να οδηγήσει άμισχα οδοντωτά αδενώματα σε καρκίνους [12], [13]. Επιπλέον, οι ασθενείς με στάδιο ΙΙ /ΙΙΙ καρκίνους MSI δεν βελτιώνει την επιβίωση τους με 5-φθοριοουρακίλη χημειοθεραπεία με βάση [14], [15].

παχέος εντέρου από τις αφρικανικές Αμερικανοί μοιράζονται κάποια κλινικά και επιδημιολογικά χαρακτηριστικά με καρκίνους MSI , αλλά όχι άλλα. Για παράδειγμα, οι Αφροαμερικανοί έχουν περισσότερες τάση για καρκίνους εγγύς παχέος εντέρου και πολύποδες και εξέλιξης του όγκου μπορεί να είναι πιο ταχύς με βάση την νεότερη ηλικία για τη διάγνωση του καρκίνου [1], [2], [16]. Μερικές εκθέσεις δείχνουν πιο βλεννώδες χαρακτηριστικά anectdotally στην αφρικανική αμερικανική καρκίνων του παχέος εντέρου [1]. Αυτά τα χαρακτηριστικά θα πρότεινα η επικράτηση της MSI θα είναι σχετικά υψηλότερο στην αφρικανική αμερικανική καρκίνων του παχέος εντέρου. Αντίθετα, οι Αφροαμερικανοί τείνουν να παρουσιάζουν προχωρημένο στάδιο της νόσου, και να έχουν κακή επιβίωση 5 ετών, σε αντίθεση με εκείνη των ασθενών με καρκίνους MSI [1]. Αυτά τα χαρακτηριστικά θα πρότεινα MSI θα είναι σχετικά χαμηλότερο στην αφρικανική αμερικανική καρκίνων του παχέος εντέρου. Αξιολόγηση των αφροαμερικάνων καρκίνων του παχέος εντέρου για MSI έχει αραιή με μόνο δύο ομάδες έχουν δημοσιευμένα στοιχεία, το ένα δείχνει μια συχνότητα MSI του 23% (7 από 31 δείγματα) και το άλλο με 48% (10 από 21 δείγματα) ανάμεσα στους Αφροαμερικανούς καρκίνους [ ,,,0],4], [5], προτείνοντας ένα υψηλότερο από το μέσο όρο συχνότητας. Και οι δύο ομάδες που χρησιμοποιούνται είναι αποθηκευμένα δείγματα με συνδεδεμένο φυλετικών δεδομένων? ούτε είναι μελέτες μέσα από ένα πληθυσμό. Στην παρούσα μελέτη, χρησιμοποιήσαμε έναν πληθυσμό που βασίζεται ομάδα καρκίνου του παχέος εντέρου για να προσδιοριστεί με μεγαλύτερη ακρίβεια τη συχνότητα της MSI στην αφρικανική αμερικανική καρκίνων του παχέος εντέρου. Τα στοιχεία μας δείχνουν ότι υπάρχει το ήμισυ η συχνότητα της MSI ανάμεσα στους Αφροαμερικανούς των καρκίνων του παχέος εντέρου σε σύγκριση με τους Καυκάσιους καρκίνων του παχέος εντέρου, γεγονός που υποδηλώνει ότι όταν μια αφρικανική αμερικανική έχει διαγνωστεί με καρκίνο του παχέος εντέρου, το όφελος από τη βελτιωμένη επιβίωση που σχετίζονται με καρκίνους MSI είναι πιο περιορισμένη σε αυτόν τον πληθυσμό.

Υλικά και Μέθοδοι

ασθενείς και δείγματα

τα δεδομένα που συλλέγονται στο πλαίσιο του παχέος εντέρου Βόρεια Καρολίνα μελέτης του Καρκίνου (NCCCS), ένα, μελέτη ασθενών-μαρτύρων με βάση τον πληθυσμό που διεξάγονται σε 33 συνεχόμενα νομούς της κεντρικής και ανατολικής Βόρειας Καρολίνας, συμπεριλαμβανομένων τόσο των αγροτικών και αστικών περιοχών [17]. επιλέχθηκαν οι νομοί να παρέχει επαρκή εκπροσώπηση από τις αφρικανικές αμερικανικές και οι κάτοικοι της υπαίθρου, και να αποφευχθεί η παραπομπή ή επιλογή μοτίβα που θα εμπόδιζε την περίπτωση διαπίστωσης ή /και τη συμμόρφωση. Το Διοικητικό Συμβούλιο Institutional Review του Πανεπιστημίου της Βόρειας Καρολίνας Σχολή Ιατρικής ενέκρινε το αρχικό πρωτόκολλο της μελέτης.

Θήκες εντοπίστηκαν μεταξύ 1ης Οκτωβρίου, 1996 και 1 Σεπτεμβρίου, 2000, χρησιμοποιώντας ένα σύστημα ταχείας διαπίστωση υλοποιείται σε συνεργασία με την Βόρεια Καρολίνα κεντρικό Αρχείο Καρκίνου. Επιλέξιμες περιπτώσεις ήταν μεταξύ των ηλικιών 40 και 80 yr, είχαν παθολογικά επιβεβαίωσε διηθητικό αδενοκαρκίνωμα του παχέος εντέρου, και διέμενε στην περιοχή 33-νομών. Όλοι οι αμερικανικές ασθενείς επιλέξιμες Αφρικής κλήθηκαν να συμμετάσχουν. Ένα τυχαίο δείγμα του Καυκάσου ασθενείς της ίδιας ηλικίας (± 5 έτη) και το φύλο συντάχθηκε για να παρέχει έναν ίσο αριθμό των αφροαμερικάνων και του Καυκάσου περιπτώσεις. Έλεγχοι ηλικίας μικρότερης των 65 ετών από την ίδια περιοχή 33 νομών επιλέχθηκαν από το Τμήμα Μηχανοκινήτων Οχημάτων βάση δεδομένων του μητρώου, και ελέγχει 65 ετών και άνω επιλέχθηκαν από τη βάση δεδομένων Υγεία Χρηματοδότηση Διοίκηση.

935 πιθανές περιπτώσεις καρκίνου του παχέος εντέρου εντοπίστηκαν (464 Αφρικανικός Αμερικανός, 471 Καυκάσου), οι γιατροί αρνήθηκαν την πρόσβαση για 31 Αφροαμερικανοί και 35 Caucuasians, η επαφή ήταν ελλιπής για 29 Αφροαμερικανοί και 29 Καυκάσιους, και 81 Αφροαμερικανοί και 45 Καυκάσιους αρνήθηκαν να συμμετάσχουν. Το συνολικό ποσοστό συνεργασίας (συνέντευξη /συνεντεύξεις + αρνήθηκε) ήταν 84%: 79% για Αφροαμερικανοί, 89% για τους Καυκάσιους. Ένα επιπλέον 33 ασθενείς αποκλείστηκαν επειδή η ποιότητα της συνέντευξης κρίθηκε ανεπαρκής. Κατά συνέπεια, υπήρξαν 643 περιπτώσεις: 294 Αφροαμερικανοί και 349 Καυκάσιους. Το συνολικό ποσοστό συνεργασία για τους ελέγχους ήταν 62%: 59% για Αφροαμερικανοί και 65% για τους Καυκάσιους? 1048 έλεγχοι, 437 αφροαμερικάνων και 611 του Καυκάσου συμμετέχοντες.

Θήκες και τους ελέγχους επελέγησαν χρησιμοποιώντας τυχαία πρόσληψη για να επιτευχθεί μια ηλικία, τη φυλή, και αναλογία φύλου βελτιστοποιημένη για στατιστικούς απόδοση. African American περιπτώσεις πολλαπλασιασμένο για να δώσουν ένα Καυκάσου 1:01: αφροαμερικάνων αναλογία, και τους ελέγχους ελήφθησαν δείγματα για να ταιριάζει με τη διανομή από τη φυλή, την ηλικία και το φύλο των περιπτώσεων

Δείγματα ιστών συλλέχθηκαν κατά το χρόνο της. χειρουργική επέμβαση και σταθεροποιήθηκαν σε φορμαλίνη. Αρχείο σταθεροποιημένα με φορμαλίνη, εγκλεισμένα σε παραφίνη (FFPE) ιστός που προβλέπονται για την απομόνωση του DNA και ανοσοϊστοχημεία (IHC) στις μελέτες που περιγράφονται εδώ. Υπήρχαν 503 σύνολο περιπτώσεων με τα διαθέσιμα ιστού για ανάλυση για την παρούσα μελέτη. Το Πανεπιστήμιο της Καλιφόρνια στο Σαν Ντιέγκο, Πολιτειακό Πανεπιστήμιο του Σαν Ντιέγκο και το Πανεπιστήμιο του Michigan ανθρώπινα υποκείμενα επιτροπές ενέκριναν την έρευνα που χρησιμοποιούν αυτά τα υπάρχοντα παθολογικά δείγματα.

DNA Εξόρυξη και μικροδορυφορικών Ανάλυση

Το DNA που εξάγεται από σταθεροποιημένα με φορμαλίνη, εγκλεισμένους σε παραφίνη ιστούς ορθοκολικού όγκου του κάθε ασθενούς και περιβάλλοντα φυσιολογικό ιστό [14]. Κάθε περιοχή μικροτομή εντοπίστηκε από τον παθολογοανατόμο σε αιματοξυλίνη αναφοράς και εοσίνη χρωματισμένο διαφάνεια. Μη προετοιμασμένο φέτες ιστό δίπλα στην πλάκα αναφοράς μικροτομή ανάλογα με τους τομείς που προσδιορίζονται στη διαφάνεια αναφοράς χρησιμοποιώντας ένα χειρουργικό νυστέρι. Η ανατομή δείγμα αποπαραφινοποιήθηκαν σε ένα σωλήνα μικροφυγοκέντρου με ξυλόλιο, και το DNA καθαρίστηκε με αιθανόλη και GeneReleaser (BioVentures, Murfeesboro, ΤΝ) σύμφωνα με τις συστάσεις του κατασκευαστή. Στη συνέχεια, τα δείγματα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με 200 μg /ml πρωτεϊνάσης Κ (Sigma, St. Louis, ΜΟ) και επωάστηκαν στους 55 ° C για 5 ώρες. Η πρωτεϊνάση Κ καταστράφηκε με θέρμανση του δείγματος στους 95 ° C για 15 λεπτά, και τα δείγματα αμέσως παγωμένο και αποθηκεύονται για ανάλυση αλυσιδωτής αντίδρασης πολυμεράσης (PCR).

Για τον προσδιορισμό της MSI, χρησιμοποιήσαμε την NCI- συνιστώμενη πίνακα 5 δείκτες μικροδορυφόρων (BAT25, BAT26, D5S346, D2S123, και D17S250) για την ταξινόμηση του όγκου όπως MSI-High (που σχετίζεται με την απενεργοποίηση του DNA MMR), και MSI-Χαμηλή ή μικροδορυφορικού σταθερό (MSS) που δεν συνδέονται με DNA MMR αδρανοποίηση. MSI-High ορίστηκε ως 2 ή περισσότερους δείκτες που αποδεικνύουν τα νέα αλληλόμορφα σε σύγκριση με μη καρκινικό ιστό, MSI-L ως 1 δείκτη με μια νέα αλληλόμορφο, και MSS καθώς δεν δείκτη με νέα αλληλόμορφα. Λόγω των παρόμοιων χαρακτηριστικών του MSI-Low και MSS όγκους [7], οι δύο αυτές ομάδες είχαν συμπεριληφθεί μαζί σε ομάδα μας. Ενός εκκινητή από κάθε ζεύγος μικροδορυφόρων δείκτη ήταν ραδιο-επισημασμένου με

32Ρ ή σημασμένο με φθορισμό. Η PCR πραγματοποιήθηκε με μικροτομή μήτρα DNA σε μια αντίδραση που περιέχει 0.125 pmoles από το καθένα από τα σημασμένο στο άκρο και «κρύο» εκκινητών, 0,25 U Taq DNA πολυμεράσης, 40 μΜ διαλύματος αποθέματος dNTP, και η τελική συγκέντρωση 1,5 έως 2,0 μΜ μαγνήσιο. Τα προϊόντα της PCR μετουσιώθηκαν σε 95% φορμαμίδιο, και σε ηλεκτροφόρηση σε πήκτωμα πολυακρυλαμιδίου 6% που περιείχε 7.5 Μ ουρία. Τα πήγματα ακολούθως ξηραίνονται και εκτίθενται από αυτοραδιογραφία σε φιλμ ακτίνων Χ ή σε ένα phosphorimager (Molecular Dynamics, Sunnyvale CA). Εναλλακτικά, οι αντιδράσεις PCR χρησιμοποιώντας φθορισμό σημασμένο εναύσματα αποσταλεί άμεσα για προσδιορισμό της αλληλουχίας του DNA.

Γενετικές αναλύσεις τυφλώθηκαν και διεξάγονται χωριστά και ανεξάρτητα από τα επιδημιολογικά δεδομένα που συλλέγονται στο πλαίσιο της μελέτης.

Ανοσοϊστοχημεία και CD8

+ T αριθμό των κυττάρων

για να εκτελέσετε ανοσοϊστοχημεία για CD8

+ Τ κύτταρα, φορμόλη σταθερό, έχει εμπεδωθεί με παραφίνη δείγματα πρώτη αποπαραφινοποιήθηκαν σε ξυλόλιο και επανυδατώθηκαν. Η ενδογενής δραστικότητα υπεροξείδιο μπλοκαρίστηκε με 3% υπεροξείδιο υδρογόνου για 20 λεπτά. Το αντιγόνο ανάκτηση πραγματοποιήθηκε σε φούρνο μικροκυμάτων για 10 λεπτά σε 10 mM κιτρικό (ρΗ = 6,0) και 0,05% Tween 20. Μετά την ψύξη, μη-ειδική δέσμευση παρεμποδίστηκε με 1% BSA σε PBS, και αντι-ανθρώπινο αντίσωμα CD8 μονοκλωνικό ποντικού πρωτεΐνη (DakoCytomation, Clone C8 /144B, Carpinteria, CA) προστέθηκε επί μία νύκτα στους 4 ° C. Τα κύτταρα οπτικοποιήθηκαν με τη χρήση του κιτ DakoCytomation LSAB2 System-HRP, ακολουθώντας τις οδηγίες του κατασκευαστή. Τα πλακίδια με αιματοξυλίνη Mayer, η ξεπλύθηκε με υδροξείδιο του αμμωνίου, ξηράνθηκε και καλύφθηκαν. Τα δείγματα στη συνέχεια αναλύθηκαν με μικροσκοπία φωτός.

Για μετρήσεις των κυττάρων, κάθε διαφάνεια αξιολογήθηκε σε χαμηλή ισχύ (50Χ) για τις περιοχές που είχαν την υψηλότερη συγκέντρωση των βαμμένων κυττάρων. Τρία υψηλής ισχύος πεδίων (HPF = 100Χ) φωτογραφήθηκαν και ενδοεπιθηλιακή CD8

+ Τ κυττάρων μετρήθηκαν ανεξάρτητα σε κάθε HPF από δύο παρατηρητές. Αν μετρήσεις έδειξαν αποκλίσεις & gt? 10%, οι δύο παρατηρητές αξιολόγησαν την φωτογραφία μαζί και στη συνέχεια εκ νέου καταμέτρηση ανεξάρτητα. Τα αποτελέσματα από τις δύο παρατηρητές είχαν κατά μέσο όρο

Στατιστική Ανάλυση

Οι αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας SAS (έκδοση 9.1? SAS Institute, Inc., Cary, NC). Και βασίζεται σε 2 όψεων

P τιμές

. Οι στατιστικές αναλύσεις των περιγραφικών τιμές ήταν ως εξής: για τις συνεχείς μεταβλητές, το T-test? για την κατηγορηματική και παθολογικές τιμές, ακριβής δοκιμή Fisher. Υπολογίσαμε προσαρμοσμένοι λόγοι πιθανοτήτων (OR) και 95% διαστήματα εμπιστοσύνης (95% CI) χρησιμοποιώντας άνευ όρων μοντέλα λογιστικής παλινδρόμησης (με τη χρήση της μονάδας Proc Logistic της SAS). Οι ακόλουθες συμμεταβλητές θεωρήθηκαν για να συμπεριληφθούν στα πολυπαραγοντικά μοντέλα για σύνδεση με καρκίνους MSI: ηλικία (συνεχής), φύλο (άνδρες, γυναίκες), το στάδιο του καρκίνου (ταξινομημένα κατά το χρόνο της χειρουργικής επέμβασης), τη φυλή (African American, του Καυκάσου), βλεννώδες όγκου ( ναι, όχι), διαφοροποίηση του όγκου, φλεγμονώδης διήθηση, και τη θέση του καρκίνου στο κόλον (δεξιάς ορίζεται ως εγγύς προς το σπληνική καμπή). Σημαντική αλληλεπίδραση παρατηρήθηκε μεταξύ φυλή και την περιοχή του όγκου, και δεν υπήρχε ασθενής αλληλεπίδραση συσχέτιση μεταξύ της κατάστασης MSI και την ηλικία. Μοντέλα κατασκευασμένα δείχνουν δύο αυτές αλληλεπιδράσεις

Τα στοιχεία που λαμβάνονται σε CD8

+ μετρήσεις κυττάρων Τ /HPF στο σύνολο των δειγμάτων που αναλύθηκαν δεν ακολουθούν μια κανονική, κατανομή Gauss.? Ως εκ τούτου, απαιτείτο μη παραμετρική στατιστική δοκιμές για να αξιολογηθεί η σημασία οποιασδήποτε διαφοράς μεταξύ δύο ομάδων σε κάθε μια από τις αναλύσεις. Το Mann-Whitney

U

δοκιμή διεξήχθη για να προσδιοριστεί κατά πόσον δύο ανεξάρτητα σύνολα δείγμα είχε κατανομές δεδομένα που διέφεραν σημαντικά. Στατιστικές αναλύσεις για CD8

+ μετρήσεις των Τ κυττάρων πραγματοποιήθηκαν με τη χρήση

IBM SPSS Statistics

, έκδοση 21.0.0.0 (IBM Corporation, 2012)

P

τιμές & lt.? 0,05 θεωρήθηκαν στατιστικά σημαντικές.

Αποτελέσματα

Σας χρησιμοποιηθεί ένα 503-άτομο, αλήθεια πληθυσμιακής ομάδας καρκίνου του παχέος εντέρου με προοπτική συλλογή στοιχείων από 33 χώρες στη Βόρεια Καρολίνα που σχεδιάστηκε για να oversample Αφρικής Αμερικανοί στην ομάδα (η Βόρεια Καρολίνα Colon Cancer Study, NCCCS) [17]. Είναι σημαντικό να σημειωθεί ότι οι αναλύσεις MSI τυφλώθηκαν και διεξάγονται χωριστά και ανεξάρτητα από τα επιδημιολογικά δεδομένα που συλλέγονται στο πλαίσιο της μελέτης. Μεταξύ των 503 καρκίνους του παχέος εντέρου, 227 (45%) προέρχονταν από Αφροαμερικανών, και 276 (55%) προέρχονταν από Καυκάσιους. Συνολικά, 54 (11%) των καρκίνων απέδειξαν MSI. Ωστόσο, η επικράτηση της MSI στα καρκίνους διέφερε μεταξύ των αφρικανικών Αμερικανών και Καυκάσιων. Υπήρχαν 39/276 (14%) Καυκάσιους με MSI καρκίνους, σε σύγκριση με 15/227 (7%) Αφροαμερικανοί με καρκίνους MSI (Πίνακας 1 και Σχήμα S1). Σε σύγκριση με καρκίνους MSS, καρκίνοι MSI συνδέθηκαν με Καυκάσιοι ασθενείς (

P

= 0,009), ένα βλεννώδες ιστολογία (

P

= 0,0004), κακή διαφοροποίηση (

P

= 0,03), ένα «του Crohn που μοιάζει με» λεμφοειδών και intraepitheilial λεμφοκυτταρική αντίδραση (

P

= 0.0001), και θέση στο εγγύς κόλον (

P

& lt? 0,0001) (Πίνακας 1). Δεν υπήρχε διαφορά στην ηλικία, το φύλο, ή το στάδιο του καρκίνου μεταξύ των ασθενών στις ομάδες MSI και MSS. Εκτός από την φυλετική διαφορά, τα ευρήματα που σχετίζονται με όγκους MSI ήταν προηγουμένως γνωστή και χρησιμεύουν για την επικύρωση των δεδομένων μας. Πραγματοποιήσαμε σταδιακή υποχώρηση αξιολόγηση όλων των κλινικοπαθολογοανατομικές ενώσεις, και τη φυλή, φλεγμονώδης διήθηση, και το site του όγκου παρέμεινε στο τελικό μοντέλο. Υπήρξε σημαντική αλληλεπίδραση μεταξύ της φυλής και θέση του όγκου. Οι ασθενείς με καρκίνους MSI έχουν αναλογία πιθανοτήτων (OR) του 3.21 για την παρουσία του Crohn, όπως ιστολογία, και είναι λιγότερο πιθανό να είναι Αφροαμερικανοί (είτε με εγγύς καρκίνους, OR = 0.26, ή άπω καρκίνους, OR = 0.16) ή Καυκάσιους με άπω καρκίνους (OR = 0,12) (Πίνακας 2). Προσθέτοντας την ηλικία, η οποία ασθενώς σχετίζονται με MSI, αλλά δεν αγωνιστεί, δεν μετέβαλε σημαντικά αυτές τις πιθανότητες αναλογίες στο μοντέλο σταδιακής παλινδρόμησης.

Η

Θα αξιολογηθεί κατά πόσο υπήρχαν οποιεσδήποτε διαφορές μεταξύ των φυλών στο MSI ή MSS ομάδες του καρκίνου. Εμείς δεν βρήκε καμία διαφορά μεταξύ των αφροαμερικάνων και Καυκάσιους ασθενείς με καρκίνους MSI, αν και υπήρχε μια τάση για την αφρικανική αμερικανική καρκίνους να είναι από τους νεότερους και γυναίκες ασθενείς (Πίνακας 1). Μεταξύ των καρκίνων MSS, αφροαμερικάνων ασθενείς ήταν σημαντικά νεότεροι (62,6 vs 64,8 χρόνια,

P

= 0.02), πιο πιθανό γυναίκες (56% έναντι 43%,

P

= 0,008), και πιο πιθανό να έχουν ένα εγγύς όγκου κόλου (54% έναντι 44%,

P

= 0,04) (Πίνακας 1). Τα δεδομένα μας όσον αφορά τους καρκίνους αφροαμερικάνων MSS είναι συνεπής με τις αφρικανικές αμερικανικές γυναίκες που έχουν πιο προηγμένη αδενωματώδεις πολύποδες [18], και SEER και American Cancer Society στοιχεία που δείχνουν σταθερά μικρότερη ηλικία και υψηλότερη επικράτηση της εγγύς καρκίνων του παχέος εντέρου μεταξύ των αμερικανικών ασθενείς Αφρικανικής σε σύγκριση με τους Καυκάσιους ασθενείς [1 ], [2].

Δεν ήταν σε θέση να προσδιορίσει τον αριθμό των ενδοεπιθηλιακής CD8

+ Τ κύτταρα εντός 475 καρκίνους να διακρίνουν καμία διαφορά μεταξύ των φυλών, καθώς οι μεγαλύτεροι αριθμοί έχουν συσχετιστεί με καρκίνους MSI [9] και βελτιωμένη επιβίωση [3], [19]. καρκίνους MSI είχε υψηλότερη μέση CD8

+ μετράει Τ κυττάρων σε σύγκριση με καρκίνους MSS (88,0 έναντι 30,4 /HPF,

P

& lt? 0.0001) (Σχήμα 1), και αυτή η διαφορά ήταν παρόντες μεταξύ MSI και MSS καρκίνους από την αμερικανική ασθενείς της Αφρικής (76.8 vs 32.2 /HPF,

P

= 0.0057) και από Καυκάσιοι ασθενείς (95,5 έναντι 29,5 /HPF,

P

& lt? 0.0001) (Σχήμα 2) . Μεταξύ των καρκίνων MSI, δεν υπήρχε καμία διαφορά στη μέση CD8

+ Τ διείσδυση ενδοεπιθηλιακή κυττάρων μεταξύ των αφρικανικών Αμερικανών και Καυκάσιων? Ομοίως, δεν υπήρχε διαφορά μεταξύ των φυλών μεταξύ καρκίνων MSS (Σχήμα 1). Τα δεδομένα μας είναι συνεπής με μια ένωση μεταξύ CD8

+ Τ κυτταρική διήθηση ενδοεπιθηλιακή και καρκίνους MSI. Ενώ παρατηρήθηκε καμία διαφορά για τη συνολική μέση CD8

+ Τ κυττάρων μετρήσεις μεταξύ των φυλών (Σχήμα 2), η μέση CD8

+ αριθμός των Τ κυττάρων ήταν σταθερά χαμηλότερα σε αφρικανικής καταγωγής σε σύγκριση με τους Καυκάσιους (εκτός από τους καρκίνους MSS), με ελάχιστη ή καμία εκπροσώπηση στο ανώτερο τεταρτημόριο των CD8

+ μετράει Τ κυττάρων (Σχήμα 2Α και Σχήμα 1BC). Έτσι, καρκίνοι με πολύ υψηλή διείσδυση του CD8

+ Τ κύτταρα ήταν πιο συχνά και σε μερικές συγκρίσεις σχεδόν αποκλειστικά από Καυκάσιων ασθενών.

(Α) Ανοσοϊστοχημεία των CD8

+ Τ κύτταρα εντός κακοήθεις αδένες epitheilial ενός καρκίνου του παχέος εντέρου. Σημειώστε την παρουσία της ενδοεπιθηλιακής CD8

+ Τ κύτταρα (

ένθετο

). (Β) CD8

+ μετράει Τ κυττάρων μεταξύ MSI και MSS καρκίνους. (C) CD8

+ μετρήσεις των κυττάρων Τ του MSI καρκίνων μεταξύ των φυλών. (D) CD8

+ μετράει Τ κυττάρων των MSS καρκίνων μεταξύ των φυλών. Σημειώστε ότι δεν υπάρχει διαφορά μεταξύ των αφρικανικών Αμερικανών και Καυκάσιων σύγκριση MSI ή MSS καρκίνους. Ο αριθμός πάνω από κάθε κηλίδα dot είναι μέσα? η οριζόντια ράβδος αντιπροσωπεύει το μέσο αριθμό μεταξύ των καρκίνων. απαριθμήσεις

Η

(Α) CD8

+ Τ κυττάρου μεταξύ των αγώνων, ανεξάρτητα από αστάθεια μικροδορυφόρου. (Β) CD8

+ μετράει Τ κυττάρων μεταξύ MSI και MSS καρκίνους από Αφροαμερικανούς. (C) CD8

μετράει + Τ κυττάρων μεταξύ MSI και MSS καρκίνους από Καυκάσιους. Ο αριθμός πάνω από κάθε κηλίδα dot είναι μέσα? η οριζόντια γραμμή αντιπροσωπεύει το μέσο αριθμό μεταξύ των καρκίνων.

Η

Συζήτηση

Αυτή η βασισμένη στον πληθυσμό μελέτη καταδεικνύει το νέο εύρημα ότι οι καρκίνοι του παχέος εντέρου από την αμερικανική ασθενείς της Αφρικής έχουν το ήμισυ τη συχνότητα της MSI σύγκριση με τους Καυκάσιους, χωρίς εμφανή μεταβολή στην έκταση της ενδοεπιθηλιακής CD8

διείσδυση + Τ κυττάρων. Αυτό το εύρημα έρχεται σε αντίθεση με δύο άλλες μελέτες [4], [5], η οποία δεν ήταν βασισμένη στον πληθυσμό και οι οποίες χρησιμοποιούνται στο αποθηκευμένα δείγματα με συνδεδεμένο φυλετικές δεδομένα, και πιστεύουμε ότι αυτή η διαφορά σχεδιασμός της μελέτης είναι ο λόγος για τα αντιφατικά αποτελέσματα μεταξύ μελετών. Όπως MSI είναι ένας καλός προγνωστικός δείκτης σε σύγκριση με την αντίστοιχη σταδίων ασθενείς με όγκους MSS [3], η μικρότερη συχνότητα της MSI ανάμεσα στους Αφροαμερικανούς των καρκίνων του παχέος εντέρου υποδηλώνει ότι αυτό μπορεί εν μέρει να συμβάλει προς την κατεύθυνση της υψηλότερης mortlity από καρκίνο του παχέος εντέρου παρατηρήθηκε σε αυτήν την φυλετική ομάδα [1], [2], [20].

Η σχεδόν παντελής έλλειψη πολύ υψηλής CD8

+ Τ κυττάρων μετράει ανάμεσα στους Αφροαμερικανούς των καρκίνων θα μπορούσε να υποδηλώνει μια αλλαγή στη λειτουργία του ανοσοποιητικού συστήματος, και αυτό θα πρέπει να είναι διερευνηθούν περαιτέρω. Ωστόσο, δεν εντόπισε κανένα διαφορές κατά τη σύγκριση της μέσης CD8

+ Τ αριθμό των κυττάρων διείσδυση μεταξύ των φυλών για καρκίνους MSI ή καρκίνους MSS, γεγονός που υποδηλώνει ότι η φυλή

per se

δεν είναι ένας καθοριστικός παράγοντας της CD8

+ T κυτταρική διήθηση. Τα δεδομένα μας επιβεβαιώνουν την ισχυρή συσχέτιση μεταξύ CD8

+ διείσδυση Τ κυττάρων και την κατάσταση MSI ενός καρκίνου του παχέος εντέρου, σύμφωνα με την αντίληψη ότι νεοαντιγόνων οδηγείται από ανεπάρκεια DNA MMR και επακόλουθη μετάλλαξη μετατόπισης πλαισίου των γονιδίων στόχων είναι λειτουργική [8], καθώς και ως CD8

+ Τ κύτταρα που συνδέονται με βελτιωμένη επιβίωση από καρκίνο του παχέος εντέρου [19]. Η ισχυρή σύνδεση μεταξύ της κατάστασης MSI και CD8

+ διείσδυση Τ κυττάρων θα μπορούσε να υποδηλώνει ότι τα CD8 + Τ κύτταρα είναι ο λόγος για την παρατηρούμενη βελτίωση της έκβασης για όγκους MSI. Για παράδειγμα, οι ασθενείς με MSI καρκίνων του παχέος εντέρου δεν επωφελούνται από 5-FU χημειοθεραπείας σε αρκετές μελέτες, και θεραπεία με 5-FU μπορούσε ακόμη και να μειωθεί η επιβίωση στους ασθενείς αυτούς [14], [15]. Μπορεί να είναι ότι τα κύτταρα αδενοκαρκινώματος με ελαττωματική λειτουργία MMR DNA είναι ανθεκτικά στην 5-FU, αλλά ότι η CD8

+ Τ κύτταρα είναι ευαίσθητα σε 5-FU, με 5-FU θεραπεία σκοτώνει το ευεργετικό αποτέλεσμα της CD8

+ κυτταρική διήθηση Τ [13]. Η απουσία της πολύ υψηλής CD8

+ Τ-κύτταρα ανάμεσα στους Αφροαμερικανούς των καρκίνων θα μπορούσε να προσομοιώσει ένα παρόμοιο αποτέλεσμα με τη θεωρία για τη θεραπεία 5-FU σε ασθενείς με καρκίνους MSI.

Μια άλλη βιοδείκτη του ελαττωματικού DNA MMR σε σποραδικές παχέος εντέρου είναι αυξημένα μικροδορυφορικών μετατροπές σε επιλεγμένα επαναλήψεις τετρανουκλεοτιδική, ή EMAST, βρέθηκε σε έως και 60% των καρκίνων του παχέος εντέρου και προκαλείται από σωματικά αδρανοποίηση hMSH3 [21], [22]. EMAST σχετίζεται με μετάσταση και φτωχή πρόγνωση [23], [24] και φαίνεται να είναι δύο φορές πιο συχνή μεταξύ των καρκίνων του ορθού από αφρικανικής καταγωγής σε σύγκριση με τους Καυκάσιους [24]. Έτσι, η συνεισφορά του EMAST, μια φτωχή μάντης για ασθενείς με καρκίνο του παχέος εντέρου, σε συνδυασμό με μειωμένη επικράτηση της MSI, ένα καλό μάντης, μαζί συνθέτουν δύο βιολογικές διεργασίες που εμπλέκονται με φλεγμονή και βλάβες του DNA MMR που μπορεί να επιδεινώσει το αποτέλεσμα των αμερικανικών ασθενείς Αφρικανικής με καρκίνο του παχέος εντέρου.

Τα δεδομένα μας καταδεικνύουν επίσης την κυρίαρχη εγγύς φύση του καρκίνου του παχέος εντέρου σε αφρικανικούς Αμερικανούς που δεν οφείλεται σε MSI. Ή δεδομένων είναι σύμφωνη με προηγούμενη SEER και δεδομένων American Cancer Society [1], αλλά τονίζουν το δικαίωμα όψης φύση των καρκίνων απουσία όγκων MSI. Γιατί υπάρχουν περισσότερα εγγύς καρκίνων του παχέος εντέρου σε ασθενείς American αφρικανική δεν είναι γνωστή. Ωστόσο, αυτό έχει συνέπειες για την προσέγγιση σε προσυμπτωματικό έλεγχο του καρκίνου του παχέος εντέρου σε αυτόν τον πληθυσμό.

Εν κατακλείδι, θα βρούμε το μισό του επιπολασμού της MSI μεταξύ των αμερικανικών ασθενείς της Αφρικής με καρκίνο του παχέος εντέρου σε σύγκριση με τους ασθενείς Causcasian χωρίς αλλαγή στο CD8

+ διήθηση Τ κυττάρων. Το εύρημα αυτό μπορεί να συμβάλει προς την κατεύθυνση υψηλότερη θνησιμότητα Αφροαμερικανοί »από τον καρκίνο του παχέος εντέρου.

Υποστήριξη Πληροφορίες

Εικόνα S1.

Διανομή MSI και MSS όγκων μεταξύ των αφρικανικών ασθενείς Αμερικής και του Καυκάσου στο NCCCS

doi:. 10.1371 /journal.pone.0100461.s001

(TIFF)

Ευχαριστίες

Οι συγγραφείς ευχαριστήσω Vianca Villegas, Reyna Melendez, Angelique Hill, και Τυχεροί Ene για βοήθεια σχετικά με ανοσοχρώση και απαρίθμηση των αριθμών των κυττάρων.