Αφηρημένο

Ιστορικό

Οι κυτοκίνες και χημειοκινών στον όγκο κίνησης μικροπεριβάλλον μεταστατική ανάπτυξη και τα επίπεδα ορού τους θα μπορούσε να αντικατοπτρίζει τη συνεχιζόμενη φλεγμονώδης αντίδραση στο σημείο του όγκου. Τα νέα εξαιρετικά ευαίσθητη εργαλεία που απαιτούνται για τον εντοπισμό ασθενών με καρκίνο του παχέος εντέρου σε υψηλό κίνδυνο υποτροπής που θα πρέπει να παρακολουθούνται πιο στενά κατά τη διάρκεια μετεγχειρητική παρακολούθηση. Εδώ μελετάμε αν κυκλοφορεί φλεγμονώδεις δείκτες θα μπορούσαν να χρησιμοποιηθούν για την πρόβλεψη υποτροπής σε ασθενείς με CRC.

Μέθοδοι

Τα κυκλοφορούντα επίπεδα των φλεγμονωδών κυτοκινών IL-1, IL-6, IL-10, ΤΝΡαλφα, CCL2, CXCL8, VEGF και η οξεία πρωτεΐνη φάση πεντραξίνη-3 μετρήθηκαν με ELISA σε προεγχειρητική δείγματα ορού προοπτικά συλλέγονται από μια ομάδα των εξήντα εννέα ασθενείς που υποβάλλονται σε χειρουργική εκτομή για το στάδιο 0-IV CRC και συνδέονται με μετεγχειρητική υποτροπή της νόσου.

Αποτελέσματα

Cox πολυπαραγοντική ανάλυση έδειξε ότι το συνδυασμένο υψηλά επίπεδα (≥ROC κόψει αξία) των CXCL8, VEGF και Pentraxin3 συσχετίστηκαν με αυξημένο κίνδυνο υποτροπής της νόσου [HR: 14.28? 95% CI: (3,13 έως 65,1)], ανεξάρτητα από TNM στάσης. Η ανάλυση Kaplan-Meier έδειξε ότι CXCL8, VEGF και τα επίπεδα Pentraxin3 συσχετίστηκε σημαντικά με τον χειρότερο επιβίωση (P & lt? 0.001).

Συμπεράσματα

Κυκλοφορούν φλεγμονωδών μεσολαβητών προβλέψει αποτελεσματικά μετεγχειρητική υποτροπή μετά από χειρουργική επέμβαση CRC. Ως εκ τούτου, αυτή η μελέτη δείχνουν ότι η επικύρωσή τους σε κλινικές δοκιμές μεγάλης κλίμακας μπορεί να βοηθήσει στην προσαρμογή CRC μετεγχειρητική διαχείριση

Παράθεση:. Di Caro G, Carvello Μ, Pesce S, M Erreni, Marchesi F, Todoric J , et al. (2016) Κυκλοφορούν φλεγμονωδών μεσολαβητών ως πιθανοί προγνωστικοί δείκτες των Ανθρωπίνων Καρκίνος του παχέος εντέρου. PLoS ONE 11 (2): e0148186. doi: 10.1371 /journal.pone.0148186

Επιμέλεια: Ken-ichi Mukaisho, Shiga Πανεπιστήμιο της Ιατρικής επιστήμης, ΙΑΠΩΝΙΑ

Ελήφθη: 21 Σεπτεμβρίου του 2015? Αποδεκτές: 14 Ιανουαρίου του 2016? Δημοσιεύθηκε: 9 Φεβρουαρίου 2016

Copyright: © 2016 Di Caro et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα:. Όλη η δεδομένα είναι μέσα στο χαρτί και υποστήριξη αρχείο πληροφοριών της

Χρηματοδότηση:. το έργο υποστηρίχθηκε από 16230 Associazione Italiana per la Ricerca sul cancro να GDC. Ο χρηματοδότης δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Καρκίνος του παχέος εντέρου (CRC) είναι η κύρια αιτία θανάτου από καρκίνο στις αναπτυγμένες χώρες [1]. Παρά τις προόδους στις διαγνωστικές εξετάσεις και χειρουργικές επεμβάσεις που συνήθως έχουν θεραπευτική πρόθεση, περίπου οι μισοί από τους ασθενείς που υποβάλλονται σε χειρουργική επέμβαση για CRC με θεραπευτική πρόθεση θα βιώσουν metachronous μετάσταση και την επακόλουθη θάνατο [2]. Μέχρι σήμερα παθολογικές Σύστημα Όγκων Κομβικές Μετάσταση (TNM) στάσης παραμένει το σημείο αναφοράς για την πρόβλεψη των ασθενών CRC που θα βιώσουν την εξέλιξη της νόσου, παρά τον πυρήνα του αρχικού συστήματος Dukes [3] είναι ουσιαστικά αμετάβλητη. Στην πραγματικότητα, ιστοπαθολογικές στάσης στερείται ακρίβειας και ένα σημαντικό ποσοστό των ασθενών που διατρέχουν μεγαλύτερο κίνδυνο για υποτροπή της νόσου δεν έχουν ακόμη εντοπιστεί με αυτήν τη μεθοδολογία [2] [4]. Μυθιστόρημα προγνωστικούς βιοδείκτες της CRC θα επιτρέπουν την ταυτοποίηση της υποομάδας των ασθενών με υψηλό κίνδυνο υποτροπής του όγκου που πρέπει να εξεταστούν για συχνή παρακολούθηση, διαγνωστικών ελέγχων και θεραπευτική παρέμβαση.

Έχει επίσης αποδειχθεί ότι φλεγμονώδη κύτταρα στο μικροπεριβάλλον του όγκου απελευθερώνουν φλεγμονώδεις μεσολαβητές που με τη σειρά τους ενεργοποιούν τα τοπικά δίκτυα του ανοσοποιητικού για την προώθηση της ανάπτυξης και της ανάπτυξης των κακοηθών κυττάρων, αυξάνοντας τον πολλαπλασιασμό και την επιβίωση τους, καθώς και την αγγειογένεση [5] [6] [7-9]. Εκτός αυτού, φλεγμονώδεις μεσολαβητές, δηλ χημειοκινών μαζί με αγγειογόνους παράγοντες είναι ένα έναυσμα για την ανάπτυξη της επεμβατικής ικανότητες καθώς αυξάνουν τα καρκινικά κύτταρα κινητικότητα και μετανάστευση που τελικά οδηγεί σε μεταστατικό περιστατικό [8]. Η διασύνδεση μεταξύ φλεγμονή και αγγειογένεση εξηγείται από την ικανότητα του VEGF και χημειοκίνης όπως CCL2 και CXCL8 να προσλάβει λευκοκύτταρα στη θέση του όγκου που με τη σειρά τους παράγουν VEGF και φλεγμονωδών μεσολαβητών και έτσι ενισχύουν ογκογόνο σήμα μέσω ενός αυτοκρινούς και παρακρινή βρόχο [8]. Οι χημειοκίνες και κυτοκίνες εκτενώς παράγονται στο μικροπεριβάλλον του όγκου, ανεξάρτητα από τις αρχικές ωθήσεις [8] και μεσολαβητές όπως IL-1b, TNFa και IL-6 προωθείται άμεσα την εξέλιξη του όγκου σε πειραματικά μοντέλα καρκίνου του παχέος εντέρου [8, 10].

Οι φλεγμονώδεις μεσολαβητές ανιχνεύεται στον ορό των ασθενών θα μπορούσαν να αντανακλούν τη συνεχιζόμενη φλεγμονώδης αντίδραση στην θέση του όγκου. Σταθερά, πληθυσμιακές μελέτες έδειξαν ότι τα άτομα με υψηλά κυκλοφορούντα επίπεδα φλεγμονωδών μεσολαβητών διατρέχουν μεγαλύτερο κίνδυνο για την ανάπτυξη CRC [11] [12, 13]. Έτσι, τα επίπεδα αυτών των δεικτών ορού έχουν τη δυνατότητα να γίνει ένα παράδειγμα ως μη επεμβατικές διαγνωστικές εξετάσεις για την ανίχνευση του CRC ασθενών [14]. Ωστόσο, λίγες μελέτες για το θέμα αυτό αξιολογείται η ικανότητα των κυκλοφορούντων φλεγμονωδών μεσολαβητών για τον εντοπισμό των ασθενών που θα αναπτύξουν μετεγχειρητική υποτροπές και metachronous μετάσταση σε σχέση με την τρέχουσα κλινική προγνωστικά εργαλεία για CRC [15-17]. Ως εκ τούτου, είναι καλά σχεδιασμένες προοπτικές μελέτες που απαιτούνται για τη δημιουργία καλύτερη κλινική σημασία τους.

Σε αυτή τη μελέτη, προοπτικά δείγματα προεγχειρητική πλάσμα των ασθενών CRC υποβάλλονται σε χειρουργική θεραπεία στο Ίδρυμα μας και αξιολόγησε κατά πόσο τα επίπεδα των κυτταροκινών και χημειοκινών εκπροσωπούνται από την IL-1, IL-6, IL-10, ΤΝΡαλφα, CCL2, CXCL8, VEGF και η πρωτεΐνη οξείας φάσης πεντραξίνη-3 μπορεί να σχετίζεται με μετεγχειρητική υποτροπή της νόσου σε μια μελέτη παρακολούθησης 5 ετών.

Υλικό και Μέθοδοι

εγγραφής και σχεδιαστική μελέτη ασθενούς

69 ασθενείς που είχαν διαγνωστεί με ορθοκολικό όγκο, και διαδοχικά υποβλήθηκαν σε ριζική χειρουργική επέμβαση σε Humanitas Έρευνας νοσοκομείο με θεραπευτική πρόθεση από τον Απρίλιο 2008 έως τον Αύγουστο του 2009 περιλαμβάνονται σε αυτη τη ΜΕΛΕΤΗ. Μετά ασθενούς έδωσε εν επιγνώσει συναίνεση με την έρευνα, ένα δείγμα αίματος από κάθε ασθενή αποσύρθηκε κατά τη στιγμή της εισαγωγής στο νοσοκομείο και πριν από τη χειρουργική επέμβαση που πρέπει να υποβάλλονται σε επεξεργασία για το διαχωρισμό του πλάσματος. Οι ερευνητές οι οποίοι δεν γνώριζαν τα αποτελέσματα των επιπέδων του ανοσοποιητικού παραμέτρων συγκεντρώσει μια κλινική βάση δεδομένων με τη συλλογή δημογραφικών στοιχείων των ασθενών, κλινικά και ιστοπαθολογικά δεδομένα που καταγράφηκαν στον server Intranet του θεσμικού του. Όγκου κλινικές και ιστοπαθολογικές στάσης κατά τη διάγνωση προσδιορίστηκε σε όλους τους ασθενείς με το συνδυασμό ιστοπαθολογικά ευρήματα με χειρουργική αρχεία και περιεγχειρητική απεικόνισης. Όγκου στάσης κατηγοριοποιήθηκε σύμφωνα με την αμερικανική μεικτής επιτροπής σχετικά με τις κατευθυντήριες γραμμές του καρκίνου AJCC. Όλα τα δημογραφικά στοιχεία, κλινικά και ιστοπαθολογικά μεταβλητές του ασθενούς ελέγχθηκαν για συνδιακύμανσης με επίπεδα ανοσολογικών μεσολαβητών (Πίνακας 1). Αυτές οι μεταβλητές, μαζί με το ποσό της IL-1, IL-6, IL-10, ΤΝΡαλφα, CCL2, CXCL8, VEGF και της οξείας πρωτεΐνης φάση πεντραξίνη-3, δοκιμάστηκαν ως προγνωστικοί δείκτες της έκβασης του ασθενούς, για να εκτιμήσει την πιθανότητα όγκου υποτροπές σε σχέση με την έκταση των επιπέδων στο αίμα των ανοσολογικών μεσολαβητών. Ορίσαμε την έκβαση των ασθενών CRC ως μεταβλητή συμπεριλαμβανομένης οποιασδήποτε εκδήλωσης (n = 9) των τοπικών υποτροπές όγκου (η = 1) ή οποιωνδήποτε metachronous μεταστάσεις μακρινό-όργανο (n = 8), η οποία ονομάζεται ασθένεια ελεύθερη επιβίωση (DFS). Η επιβίωση των ασθενών υπολογίστηκε ως ασθένεια συγκεκριμένες επιβίωση (DSS) και αφορούσαν κάθε θάνατο που σχετίζονται μόνο με τη νόσο CRC (n = 5). Για την ανίχνευση ή να αποκλείσει οποιαδήποτε μετεγχειρητική υποτροπές όγκων, οι ασθενείς που υποβλήθηκαν σε θωρακο-κοιλιακή υπολογιστική τομογραφία-κοιλιακό υπερηχογράφημα και ακτινογραφία θώρακα που έγιναν σύμφωνα με κοινά πρωτόκολλα για την επιτήρηση. Η περίοδος παρατήρησης άρχισαν αμέσως μετά την χειρουργική επέμβαση και η ανίχνευση της υποτροπής του όγκου ή σχετίζονται με το θάνατο του όγκου υπολογίστηκε από τη διάγνωση μέχρι να λογοκρίνεται δεδομένων. Η μέση διάρκεια παρακολούθησης του ομάδα που μελετήθηκε ήταν 56,33 μήνες (SD = 15,74 μήνες). Εάν το γεγονός του θανάτου ήταν άσχετη με τη νόσο του CRC, ο χρόνος για να δοθεί συνέχεια σταμάτησε κατά τη στιγμή του θανάτου του ασθενούς η οποία δεν θεωρήθηκε μια εκδήλωση του αποτελέσματος. παρακολούθηση των δεδομένων μετεγχειρητική επιτήρησης όγκων δεν ήταν διαθέσιμη σε 6 από τους 69 ασθενείς (8,7%) συμμετείχαν στη μελέτη και είχαν ως εκ τούτου, εξαιρούνται από την ανάλυση αποτελεσμάτων σύμφωνα με τις προηγούμενες κατευθυντήριες γραμμές [18]. Επιτροπή Ηθικής και Δεοντολογίας της Humanitas Clinical and Research Center ενέκρινε τη μελέτη, και ο αναφερόμενος ιατρός που λαμβάνεται γραπτή συγκατάθεση από τον κάθε ασθενή πριν από την επέμβαση.

Η

Αναλύσεις

Τα δείγματα πλάσματος φυγοκεντρήθηκαν στα 3000 rpm για 10 λεπτά και στη συνέχεια διατηρήθηκε στους -80 ° C μέχρι την αξιολόγηση ELISA. επίπεδα IL-1 στο πλάσμα, IL-6, IL-10, ΤΝΡαλφα, CCL2, CXCL8, VEGF προσδιορίστηκαν με εμπορικώς διαθέσιμη σάντουιτς ενζυμο-συνδεδεμένη ανοσορροφητική δοκιμασία (ELISA) κιτ σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. ΡΤΧ3 στο πλάσμα προσδιορίστηκε με ένα «στο σπίτι» sandwich ELISA με βάση το μονοκλωνικό αντίσωμα MNB4 (αντίσωμα σύλληψης) και κουνελιού αντι-ορού (αντίσωμα ανίχνευσης) όπως περιγράφηκε προηγουμένως [19]. Το όριο ανίχνευσης είναι 100 pg /ml και η μεταβλητότητα μεταξύ ανιχνεύσεων είναι 8% -10%. Κανονικές τιμές της ΡΤΧ3 είναι & lt? 2 ng /mL. Τα επίπεδα του ανοσοποιητικού μεσολαβητών στα δείγματα πλάσματος ασθενών προσδιορίστηκαν συσχετίζοντας το καθένα εις διπλούν αξία με μια πρότυπη καμπύλη με βάση ένα 2-φορές σειριακή αραίωση ανασυνδυασμένης IL-1, IL-6, IL-10, ΤΝΡαλφα, CCL2, CXCL8, VEGF και ΡΤΧ3 με γνωστή συγκέντρωση.

η στατιστική ανάλυση

η στατιστική ανάλυση πραγματοποιήθηκε με τη χρήση Epi Info (έκδοση 3.4.3), StatsDirect Στατιστική λογισμικού (έκδοση 2.5) και το λογισμικό GraphPad Prism (Έκδοση 4.1). Η συσχέτιση μεταξύ του ανοσοποιητικού αξιών μεσολαβητής και βασικής γραμμής δημογραφικά στοιχεία του ασθενούς, την κλινική και ιστοπαθολογική χαρακτηριστικά και χαρακτηριστικά όγκου εκτιμήθηκαν με ανάλυση γραμμικής παλινδρόμησης. Για να προσδιοριστεί καλύτερα η συσχέτιση της κάθε ανοσοποιητικού μεσολαβητή και την πρόγνωση του ασθενούς, έγινε ένα δέκτη λειτουργική καμπύλη (ROC) ανάλυση. Η τιμή αποκοπής ROC κάθε συνεχή κατανομή ορίστηκε για την πρόβλεψη της εμφάνισης υποτροπών ασθενούς. Ένα μοντέλο αναλογικών κινδύνων Cox αναπτύχθηκε για να εκτιμηθεί το ROC αποκοπεί αξία της IL-1, IL-6, IL-10, ΤΝΡαλφα, CCL2, CXCL8, VEGF και ΡΤΧ3 και άλλα δημογραφικά, κλινικά και ιστοπαθολογικά χαρακτηριστικά, στην πρόβλεψη της εμφάνισης DFS. Για την εκτίμηση για συγχυτικούς παράγοντες, Cox πολυπαραγοντική ανάλυση πραγματοποιήθηκε με την εισαγωγή όλων των μεταβλητών με μια τιμή Ρ μικρότερη από 0,20 σε μονοπαραγοντική ανάλυση. Με μια καθυστερημένη προσέγγιση σταδιακής εξάλειψης, μη σημαντικές μεταβλητές και μη σημαντικές αλληλεπιδράσεις τους, αφαιρέθηκαν από το μοντέλο. Kaplan-Meyer καμπύλες του DSS χαράχθηκαν, ενώ η δοκιμασία log-rank χρησιμοποιήθηκε για τη σύγκριση των καμπυλών της κάθε υπο-ομάδα ασθενών CRC. Για κάθε δοκιμή μόνο δύο όψεων Ρ τιμές χαμηλότερες από 0,05 θεωρήθηκαν στατιστικά σημαντικές.

Αποτελέσματα

Δημογραφικά και ιστοπαθολογικά χαρακτηριστικά των ασθενών CRC που περιλαμβάνονται σε αυτή τη μελέτη και συσχέτιση τους με την ποσοτική εκτίμηση της προεγχειρητικής οι τιμές των ανοσολογικών μεσολαβητών πλάσματος φαίνονται στον πίνακα 1. η ανάλυση των υποομάδων έδειξε ότι μεταξύ όλων των ανοσολογικών μεσολαβητών μόνο IL-1β και αξιών VEGF αυξήθηκε ελαφρά σε προχωρημένο ΤΝΜ σταδιοποίηση (Ρ = 0,06 και Ρ = 0,04, αντίστοιχα) (Πίνακας 1). Είναι ενδιαφέρον ότι, μόνο το IL-1β και TNFa τιμές αυξήθηκαν μεταξύ των ασθενών με επίπεδα στο αίμα υψηλά CEA (≥5ng /ml) σε αποκοπής γενικά χρησιμοποιούνται για αυτό το βιοδείκτη, ενώ άλλες ανοσοποιητικές μεσολαβητές δεν συσχετίστηκαν με τα επίπεδα CEA (Πίνακας 1). Στη συνέχεια, ελέγξαμε τις γραμμικές συντελεστές συσχετισμού μεταξύ συνεχείς τιμές των δεικτών φλεγμονής πλάσματος όπως φαίνεται στον Πίνακα 2. Η ανάλυση γραμμικής παλινδρόμησης έδειξε ότι η IL-1β συσχετίζονται σε μεγάλο βαθμό με TNF-α (r = 0,94, Ρ & lt? 0.001) ανεξάρτητα από άλλες ανοσολογικών μεσολαβητών (Πίνακας 2). Επιπλέον, οι τιμές CXCL8 ανεξάρτητα γραμμική σχέση με εκείνες της IL-6, CCL2 και VEGF (r = 0,34, Ρ = 0,006? R = 0,31 Ρ = 0,01? R = 0,36 Ρ = 0,003, αντίστοιχα), ενώ η IL-10 τιμές γραμμικά συσχετίζονται μόνο με εκείνα του VEGF (r = 0,39, Ρ & lt? 0.001) ανεξάρτητα από τις άλλες ανοσοποιητικού δείκτες (Πίνακας 1). Είναι ενδιαφέρον ότι οι οξείες επίπεδα ΡΤΧ3 πρωτεΐνη φάση δεν συσχετίστηκε με οποιαδήποτε από τις ανοσοποιητικού δείκτες που μελετήθηκαν (Πίνακας 1), γεγονός που υποδηλώνει ότι η ΡΤΧ3 δύνανται να ακολουθούν διαφορετικές πορείες ενεργοποίησης σε ασθενείς CRC σε σύγκριση με άλλα ανοσολογικών μεσολαβητών.

Η

Στη συνέχεια, μελετήθηκε η σύνδεση μεταξύ της βάσης αναφοράς (προεγχειρητική) επίπεδα ανοσολογικών μεσολαβητών πλάσματος και τον κίνδυνο να αναπτύξουν μετεγχειρητικών υποτροπές CRC. Συνεχείς κατανομές των επιπέδων στο πλάσμα του ασθενούς των κυκλοφορούντων φλεγμονωδών μεσολαβητών σύμφωνα με την μετεγχειρητική υποτροπή της νόσου CRC φαίνεται στην Εικόνα 1. Βρήκαμε ότι οι ασθενείς οι οποίοι δεν υποτροπίασαν (n = 54) είχαν σημαντικά χαμηλότερες συγκεντρώσεις της IL-1 (Ρ = 0,008) στο πλάσμα, IL-6 (Ρ = 0.01), IL-10 (Ρ = 0.04), CXCL8 (P≤0.001), VEGF (P≤0.001) και ΤΝΡαλφα (Ρ = 0.02) σε σύγκριση με εκείνους που εμφάνισαν υποτροπή της νόσου CRC (n = 9) (Σχήμα 1). Αντίθετα, οι τιμές CCL2 δεν αλλάζουν ανάλογα με την πρόγνωση των ασθενών CRC και την πρωτεΐνη οξείας φάσης πεντραξίνη-3 είχε μόνο μια τάση για την αύξηση (Ρ = 0,11) μεταξύ των ασθενών που εμφάνισαν μετεγχειρητική υποτροπή της νόσου (Εικόνα 1).

Η ποσότητα της IL-1 (α), IL-6 (Β), IL-10 (C), TNF-a (D), IL-8 (F), VEGF (G) αυξήθηκαν σημαντικά σε ασθενείς οι οποίοι έμπειρους υποτροπή της νόσου, ενώ η πρωτεΐνη οξείας φάσης πεντραξίνη-3 (η) έδειξαν μια τάση να συνδέσει με χειρότερη πρόγνωση. επίπεδα CCL2 (Ε) δεν συνδέθηκαν με υποτροπή της νόσου.

Η

Σύμφωνα με προηγούμενες μελέτες [20], για να αποκτήσετε μια επαναλήψιμη και αξιόπιστη μέθοδο για τη συγκριτική αξιολόγηση των προγνωστικών τιμές των βιοδεικτών, υπολογίσαμε τις καμπύλες ROC για κάθε ανοσοποιητικό δείκτες για τους ασθενείς οι οποίοι είχαν CRC καλή πρόγνωση (n = 54) έναντι εκείνων που εμφάνισαν υποτροπή της νόσου (n = 9) σε συνέχεια (S1 Εικ). ROC μοντέλο οικόπεδο ανάλυση αποκάλυψε φλεγμονωδών μεσολαβητών με καλύτερη ευαισθησία από ειδικότητα όπως IL-1β (0.88 και 0.68), IL-6 (0.88 και 0.59), IL-10 (1 και 0,40), TNF-a (1 και 0,05), CCL2 (0,77 και 0,5), CXCL8 (1 και 0,64) και VEGF: (1 και 0,66) στο βέλτιστο αποκοπές που προσδιορίζονται από το πρότυπο (S1 Σχήμα), ενώ ΡΤΧ-3 είχε υψηλότερη ειδικότητα ότι η ευαισθησία (0,55 και 0,90) (S1 Σύκο). Για την καλύτερη κατανόηση της προγνωστική σημασία των ανοσολογικών μεσολαβητών, σχεδιάσαμε ένα Cox μονομεταβλητό προγνωστικό μοντέλο (Πίνακας 2) με βάση τις τιμές κατωφλίου που προσδιορίζονται από την καμπύλη ROC για κάθε δείκτη φλεγμονής. Σε αυτό το μοντέλο, οι ασθενείς CRC οποίοι είχαν υψηλότερα επίπεδα στο πλάσμα (αξία ≥ROC) της IL-1 (Ρ = 0.01), CXCL8 (Ρ & lt? 0.001), IL-10 (Ρ = 0,01), η ΡΤΧ3 (Ρ = 0,002), IL -6 (Ρ = 0,06), και VEGF (Ρ & lt? 0.001) που σχετίζεται με χειρότερη πρόγνωση (Πίνακας 3), ενώ υψηλότερα επίπεδα CCL2 (Ρ = 0,31) και TNF-α (Ρ = 0,89) (Πίνακας 3) δεν το έκανε. Περαιτέρω, ελέγξαμε για την ανεξαρτησία αυτών των βιοδεικτών. Για να αποφευχθεί η υπερπροσαρμογής του μοντέλου COX [21, 22], λόγω της σχετικά χαμηλής ποσότητας γεγονότων (n = 9) σε ομάδα μας, κάθε φλεγμονώδους μεσολαβητή χωριστά εγγράφεται σε πολυμεταβλητό μοντέλο συμπεριλαμβανομένης στάδιο TNM ή ένα άλλο φλεγμονώδους μεσολαβητή (όχι δεδομένα απεικονίζεται). Σε αυτά τα μοντέλα, βρήκαμε ότι μεταξύ όλων των φλεγμονωδών μεσολαβητών που ήταν σημαντικές σε μονοπαραγοντική ανάλυση μόνο CXCL8, CCL2 και VEGF τιμές ανεξάρτητα και σημαντική συσχέτιση με την πρόγνωση (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Αναλυτικότερα, τα υψηλά επίπεδα CXCL8, VEGF και ΡΤΧ-3 (τιμή ≥ROC) προσδιορίζονται υποομάδες ασθενών CRC [44,4% (28/63)? 42,8% (27/63)? 15,8% (10/63), αντίστοιχα] που ανιχνεύονται αποτελεσματικά τις υποτροπές της νόσου [47,3% (9/19)? 50,0% (9/18)? 50,0% (5/5)]. Έτσι, σύμφωνα με τα αποτελέσματα αυτά συνδυάσαμε τα επίπεδα CXCL8, VEGF και ΡΤΧ-3 (τιμή ≥ROC των συνδυασμένων δεικτών) (Πίνακας 4) και για την προσαρμογή ως προς συγχυτικούς παράγοντες και να δοκιμάσει προγνωστική ανεξαρτησία του, πραγματοποιήσαμε μια πολυπαραγοντική ανάλυση Cox, με σχέση με τα δημογραφικά, κλινικά και ιστοπαθολογικά χαρακτηριστικά (Πίνακας 4). Cox πολυπαραγοντική ανάλυση έδειξε ότι τα υψηλότερα επίπεδα των συνδυασμένων (τιμές ≥ROC) CXCL8, VEGF και ΡΤΧ-3 συνδέεται με χειρότερη πρόγνωση [HR: 14.28, 95% CI (3,13 – 65,1), P & lt? 0.001] ανεξάρτητα από TNM στάσης και άλλες μεταβλητές περιλαμβάνονται σε αυτό το μοντέλο (Πίνακας 4). Συνδυασμένη υψηλής αποκοπής του CXCL8, VEGF και ΡΤΧ-3 τιμές ήταν παρούσα μόνο σε 11% (7/63) των ασθενών CRC, αλλά αυτή η υποομάδα προσδιορίζονται αποτελεσματικά 71,4% (5/7) υποτροπιάζουσας περιπτώσεις. Αντιστρόφως, ένα χαμηλής αποκοπής των συνδυασμένων φλεγμονωδών αξίες της CXCL8, VEGF και ΡΤΧ-3 εντόπισε 38% (24/63) των ασθενών με CRC 0% (0/24) υποτροπιάζουσας περιπτώσεις. Συνολικά, η προγνωστική αξία για την ανίχνευση των υποτροπών της νόσου του συνδυασμένου σκορ CXCL8, VEGF και ΡΤΧ-3 ήταν καλύτερη σε σύγκριση με κάθε μία από ξεχωριστές τιμές τους (όλα τα p ≤ 0,05).

Η

Εικ 2 δείχνει τις καμπύλες DSS όλων των ασθενών που διερευνώνται υπότιτλος ομαδοποιούνται ανάλογα με τις τιμές πλάσματος του CXCL8, VEGF, ΡΤΧ-3 (τιμές ≥ROC) και το ανοσοποιητικό βαθμολογίας. Βρήκαμε μια σύνδεση με χειρότερη επιβίωση μεταξύ CRC τους ασθενείς με τιμές του CXCL8 (P = 0,008), VEGF (P = 0,001), ΡΤΧ-3 (P = 0.005), πάνω από το όριο ROC (τιμές ≥ROC). Το ανοσοποιητικό σκορ αντιπροσωπεύεται από συνδυασμένες τιμές ROC του CXCL8, VEGF και ΡΤΧ-3 (χαμηλή, μεσαία, υψηλή αποκοπής) είχαν τη δυνατότητα να προβλέψουν σημαντικά χειρότερη επιβίωση (P & lt? 0.001). Με την καλύτερη απόδοση σε σύγκριση με μόνο το ανοσοποιητικό μεσολαβητές

Οι τιμές κατωφλίου ROC του IL-8, ΡΤΧ3 και VEGF υπολογίστηκαν σε όλη την κοόρτη (6,79 pg /ml, 31.97pg /ml, 6.29pg /ml, αντίστοιχα) και χρησιμοποιήθηκαν ως αποκοπής για την επιλογή υψηλής και χαμηλής IL-8, ΡΤΧ-3 και VEGF σε ασθενείς με καρκίνο του παχέος. Χαμηλό ανοσοποιητικό βαθμολογία ορίστηκε από συνδυασμένες τιμές lowIL-8-lowVEGF-lowPTX3. Υψηλή ανοσοποιητικό βαθμολογία ορίστηκε από συνδυασμένες τιμές highIL-8-highVEGF-highPTX3. Ενδιάμεση βαθμολογία ορίστηκε από οποιαδήποτε άλλη τιμή. Τιμές πάνω από το cutoff ROC συσχετίστηκαν με την επιβίωση χειρότερα ασθενούς για CXCL8 (Ρ = 0,008), η ΡΤΧ3 (Ρ = 0,001), VEGF (Ρ = 0,005) και του ανοσοποιητικού βαθμολογίας (Ρ & lt? 0.001)., Σε σύγκριση με εκείνα κάτω ROC αποκοπής

Συζήτηση

σε αυτή τη μελέτη, δείξαμε ότι φλεγμονωδών μεσολαβητών στο αίμα των ασθενών με CRC συλλέγονται πριν από την χειρουργική εκτομή μπορεί να είναι υποψήφιος βιοδείκτες για την πρόβλεψη μετεγχειρητική εξέλιξη της CRC. Χαρακτηρίζοντας μια σειρά διαφορετικών κυτοκινών είχαμε τη δυνατότητα να συγκρίνουν προγνωστική σημασία τους. Δείξαμε ότι CXCL-8, ο VEGF και η μακρά πεντραξίνη 3 ήταν τα καλύτερα πρόβλεψης της πρόγνωσης στη μελέτη μας CRC. Επιπλέον, ένα σκορ κυτοκίνη που βασίζεται στο συνδυασμό των επιπέδων αυτών των ανοσολογικών μεσολαβητών ήταν ανεξάρτητη από τη συμβατική σταδιοποίηση ΤΝΜ για τον εντοπισμό μετεγχειρητική υποτροπές της νόσου.

Η παρούσα μελέτη ακολούθησε τις κατευθυντήριες γραμμές ΠΑΡΑΤΗΡΗΣΗ για την αξιολόγηση των προγνωστικών δείκτες όγκου [23]. Ωστόσο, αναγνωρίζουμε κάποιες αδυναμίες με το σχεδιασμό της μελέτης. Πρώτον, προσδιορίζονται ποσοτικά επίπεδα φλεγμονωδών μεσολαβητών πριν από την εγχείρηση, αλλά όχι κατά τη διάρκεια παρακολούθησης. Ωστόσο, προηγούμενες μελέτες έδειξαν ότι τα επίπεδα ενός κοινού και απροσδιόριστα συστηματική φλεγμονώδη δείκτη CRP όπως δεν άλλαξε σε άτομα κατά μήκος των ετών [24, 25]. Επιπλέον, έχουμε ποσοτικά επίπεδα κατά την έναρξη των φλεγμονωδών μεσολαβητών η ημέρα πριν από την επέμβαση και για το λόγο αυτό το είδος της χειρουργικής θεραπείας δεν αποτελεί σύγχυση μεταβλητή, καθώς δεν μπορούν να επηρεάσουν φλεγμονώδης επίπεδα μεσολαβητής στη μελέτη μας. Δεύτερον, δεν είχαμε εξετάσει συμφωνημένα έλεγχο υγιή δότη αίματος αφού αυτό ήταν πέρα ​​από το στόχο της παρούσας μελέτης. Τρίτον, αναγνωρίζουμε το περιορισμένο ποσό των ασθενών CRC που περιλαμβάνονται στη μελέτη μας, θα μπορούσε να δημιουργήσει overfitting προγνωστικών μοντέλων. Ωστόσο, ο αριθμός των γεγονότων που απαιτούνται για τη δοκιμή ανεξαρτησία των βιοδεικτών συζητείται ακόμα [22] και εξαρτάται από την έκταση της προγνωστικής αποτελέσματος. Ο αριθμός του περιορισμένου ασθενούς ομάδα μας βασίζονται σε υποψήφιους σχεδιασμό του και το σύντομο χρονικό διάστημα της εγγραφής ασθενούς, τα οποία μειώνουν τις προκαταλήψεις επιλογή και μεθοδολογικές ανακολουθίες που συνήθως συνδέονται με μεγάλη αναδρομική ομάδες [26]. Επιπλέον, θα χρησιμοποιηθούν τα μοντέλα της καμπύλης ROC για να παράγουν επαναλήψιμα δεδομένα με τη μέτρηση της ειδικότητας και ευαισθησίας που είναι χρήσιμα για τη συγκριτική αξιολόγηση η διαγνωστική ικανότητα των βιοδεικτών σε όλες τις μελέτες [14].

Για τις γνώσεις μας, αυτή είναι η πρώτη μελέτη που την αντιμετώπιση της μετεγχειρητικής προγνωστική σημασία της πεντραξίνης 3 CRC. ΡΤΧ3 είναι μια ανοσολογική μεσολαβητής που ανήκει στην εξαιρετικά διατηρημένη οικογένεια του πεντραξίνες, καθώς και αντιδρώσα πρωτεΐνη C (CRP) [27]. Έχει σημαντικό ρόλο στην ομοιοστατική διαδικασίες όπως αναδιαμόρφωση των ιστών, η αγγειογένεση και φλεγμονώδεις αντιδράσεις ([28], [27], [29] και έχει συνδεθεί με την φλεγμονή σχετίζεται με τον καρκίνο [30]. Σε προηγούμενες κλινικές μελέτες, ΡΤΧ3 ήταν βρέθηκε να είναι αυξημένη σε άλλους όγκους όπως λιποσαρκώματα [31], γλοίωμα [32], του πνεύμονα [20] και του καρκίνου του προστάτη [33] σε σύγκριση με αντιστοιχισμένο υγιείς μάρτυρες [20, 33] ή της καλοήθους υπερπλασίας του [33]. Ωστόσο, καμία από αυτές τις μελέτες που συνδέονται επίπεδα ΡΤΧ3 με μετεγχειρητικών υποτροπές όγκου. Επιπλέον, σειρά μας κυτοκινών ήταν χρήσιμο να διερευνηθεί εάν ανοσολογικών μεσολαβητών συσχετίζονται μεταξύ τους στο πλάσμα των ασθενών ανθρώπινης CRC. η απουσία συνδιασποράς μεταξύ πεντραξίνης-3 και άλλων φλεγμονωδών μεσολαβητών εξηγούν ανεξάρτητες επιπτώσεις της στην πρόγνωση, και περαιτέρω δείχνει ότι η συνδυασμένη φλεγμονώδης σκορ θα μπορούσε να αυξήσει την απόδοση ανίχνευσης μετεγχειρητικών υποτροπών. Παρά την ισχυρή συσχέτιση μεταξύ του ΤΝΡ-α και IL-1β, οι μεσολαβητές που σχετίζεται με την πρόγνωση του ασθενούς και σε μικρότερο βαθμό από ό, τι τα επίπεδα ΡΤΧ3, η οποία υποδεικνύει ότι αυτές οι κυτοκίνες μπορεί να έχουν χαμηλότερο επίπεδο συμμετοχής στην μεταστατική υποτροπή της CRC σε σύγκριση με ΡΤΧ3. Σε άλλες μελέτες, η ΡΤΧ3 δείχθηκε ότι είναι άκρως προκαλείται από LPS /TLRs [34, 35], η οποία μπορεί επίσης να επάγει την έκφραση του CXCL8. Στο πλαίσιο αυτό, είναι σημαντικό να αναγνωρίσουμε ότι τα υψηλότερα επίπεδα ΡΤΧ3 και CXCL8 αίματος σε ασθενείς με υποτροπή της νόσου σε αυτή τη μελέτη αντιπροσωπεύουν μια απλή φαινομενολογική απόδειξη της φλεγμονώδους αντίδρασης στη θέση του όγκου. Είτε υποστηρίζουν αυτά τα μεσολαβητές η τοπική μεταστατική διαδικασία και η στόχευση τους θα επηρεάσει CRC ανάπτυξη ήταν πέρα ​​από το σκοπό αυτής της μελέτης. Ως εκ τούτου, τα στοιχεία μας δείχνουν την προς τα πάνω ρύθμιση της ΡΤΧ3 ορού σε μεταστατικούς ασθενείς CRCs δεν έρχονται σε αντίθεση με τις προηγούμενες μηχανιστική αναφορές [36] και πράγματι παρέχουν περαιτέρω αποδείξεις ότι αυτό μεσολαβητής με κάποιο τρόπο εμπλέκεται στην ογκογόνο αντίδραση.

Μαζί με τον VEGF, η οποία αναστολέας χρησιμοποιείται σήμερα ως αντιαγγειογενετικές παράγοντας για τη θεραπεία του σταδίου IV CRC, CXCL8 είναι επίσης ένας ισχυρός υποκινητής αγγειογένεσης που μπορούν να προωθήσουν την αγγείωση στην θέση του όγκου, τον πολλαπλασιασμό και τη μετάσταση των καρκινικών κυττάρων και να μεσολαβήσει στρατολόγηση των λευκοκυττάρων που διηθούν όγκο [37- 39]. Επιπλέον, τα στοιχεία μας επιβεβαιώνουν προηγούμενα ευρήματα σχετικά με τις προγνωστικές ικανότητες των κυκλοφορούντων επιπέδων του VEGF [40, 41] και CXCL8 [42] σε ασθενείς CRC αποδεικνύοντας ότι αυτό το είδος της μεθοδολογίας είναι ιδιαίτερα αναπαραγώγιμη.

Τα στοιχεία μας δείχνουν ότι η εισαγωγή των κυκλοφορούντων φλεγμονωδών μεσολαβητών για την ανίχνευση των μετεγχειρητικών εξέλιξη CRC θα προσδιορίσει αποτελεσματικά τα άτομα που διατρέχουν υψηλό κίνδυνο υποτροπής, ανεξάρτητα από τα συμβατικά προγνωστικούς παράγοντες κινδύνου. ασθενείς CRC που προσδιορίζονται από τα υψηλά επίπεδα των επιπέδων στο πλάσμα φλεγμονώδης μεσολαβητής θα πρέπει να παρακολουθείται πιο στενά στην παρακολούθηση ανεξάρτητα από το καθεστώς ΤΝΜ τους, η οποία θα παρέχει ένα πρόσθετο εργαλείο στη διαδικασία λήψης αποφάσεων για τη μετεγχειρητική εξέταση. Για να ολοκληρώσω, ΡΤΧ3 και CXCL8 ποσοτικοποίηση του πλάσματος θα μπορούσε να συνδυαστεί με τα επίπεδα του VEGF για να πάρει την καλύτερη απόδοση των μετεγχειρητικών ανίχνευση υποτροπής από τα δείγματα αίματος. Τα ευρήματα αυτά, παρέχει τη λογική για το σχεδιασμό κλινικών μελετών μεγάλης κλίμακας, προκειμένου να επιβεβαιώσει την προγνωστική ικανότητα αυτών των φλεγμονωδών μεσολαβητών.

Υποστήριξη Πληροφορίες

S1 Εικ. Οι καμπύλες ROC ανάλυση-πλοκή συγκρίνοντας ασθενείς σύμφωνα με την μετεγχειρητική υποτροπή τους στο βέλτιστο αποκοπές που προσδιορίζονται από το πρότυπο ROC για όλες τις διαλυτές ανοσολογικών μεσολαβητών που μελετήθηκαν.

καμπύλες ROC οικόπεδο στο βέλτιστο αποκοπές για κάθε ανοσοποιητικού μεσολαβητή υπολογίστηκαν και εξετάστηκαν για την ικανότητά τους να ανιχνεύουν μετεγχειρητική υποτροπές όγκου ανάλογα με την ευαισθησία και την ειδικότητα τους. Ευαισθησία και Ειδικότητα: IL-1 (0,88 και 0,68)? IL-6 (0,88 και 0,59)? IL-10 (1 και 0,40)? TNF-a (1 και 0,05)? CCL2 (0,77 και 0,5)? CXCL8 (1 και 0,64)? VEGF: (1 και 0,66)? ΡΤΧ-3: (0,55 και 0,90). ROC τιμές cut-off: IL-1 (0,81 pg /ml), IL-6 (5,86 pg /ml), IL-10 (4,14 pg /ml), TNFa (49,72 pg /ml ), CCL2 (38,03 pg /ml), CXCL8 (7,01 pg /ml), VEGF (39,03 pg /ml), η ΡΤΧ3 (13,68 pg /ml)

doi:. 10.1371 /περιοδικό .pone.0148186.s001

(PDF)

Ευχαριστίες

Giuseppe Di Caro υποστηρίζεται από iCare υποτροφία από Associazione Italiana per la Ricerca sul cancro (AIRC).

συγγραφείς δηλώνουν δεν υπάρχει σύγκρουση συμφερόντων.