Αφηρημένο

Ιστορικό

Honokiol, ένα μικρό μοριακού βάρους φυσικό προϊόν, έχει προηγουμένως έχουν αναφερθεί ότι ενεργοποιούν την απόπτωση και αναστέλλουν γαστρική ογκογένεση. Είτε Honokiol αναστέλλει την αγγειογένεση και μετάσταση του καρκίνου του στομάχου κυττάρων παραμένει άγνωστη.

Μεθοδολογία /Κύρια Ευρήματα

Δοκιμάσαμε τις επιδράσεις της Honokiol στην αγγειογενετική δραστηριότητα και περιτοναϊκή διάχυση χρησιμοποιώντας το

in vivo, ex vivo

και

in vitro

συστήματα προσδιορισμού. Οι αποκρίσεις σηματοδότησης σε ανθρώπινο γαστρικό καρκινικά κύτταρα, τα ανθρώπινα ομφάλιου αγγειακά ενδοθηλιακά κύτταρα (HUVECs), και απομονωμένων όγκοι ανιχνεύθηκαν και αναλύθηκαν. Σε ένα ξενομόσχευμα γαστρικού μοντέλο ποντικού όγκου, Honokiol ανέστειλε σημαντικά την περιτοναϊκή διάχυση ανιχνεύεται από PET /CT τεχνική. Honokiol επίσης εξασθένισε αποτελεσματικά την αγγειογένεση ανιχνεύεται με δοκιμασία χοριοαλλαντοϊκής μεμβράνης νεοσσού, δοκιμασία βύσμα matrigel ποντικού, αρουραίου δοκιμασία βλάστησης αορτικού δακτυλίου των ενδοθηλιακών κυττάρων, και δοκιμασία σχηματισμού ενδοθηλιακού σωλήνα. Επιπλέον, Honokiol αποτελεσματικά ενισχυμένη μετατροπέα σήματος και ενεργοποιητής της μεταγραφής (STAT-3) αποφωσφορυλίωση και ανέστειλαν δραστικότητα δέσμευσης STAT-3 DNA σε ανθρώπινο γαστρικό καρκινικά κύτταρα και HUVECs, η οποία συσχετίζεται με την ανοδική ρύθμιση της έκφρασης δραστηριότητας και πρωτεΐνης Src ομολογίας 2 (SH2) που περιέχει τυροσίνη φωσφατάση-1 (SHP-1). αναστολέα καλπαΐνης-ΙΙ και siRNA διαμόλυνση ανέστρεψε σημαντικά την δραστικότητα Honokiol επαγόμενη SHP-1. Η μειωμένη STAT-3 φωσφορυλιώσεως και αυξημένη έκφραση SHP-1 επίσης φαίνεται στο απομονωμένο περιτοναϊκή μεταστατικούς όγκους. Honokiol ήταν επίσης ικανό να αναστέλλει την παραγωγή VEGF, η οποία θα μπορούσε να αντιστραφεί με SHP-1 διαμόλυνση siRNA.

Συμπεράσματα /σημαντικότητα

Honokiol αυξάνει την έκφραση και τη δραστηριότητα των SPH-1 που απενεργοποιεί περαιτέρω μονοπάτι STAT3. Τα ευρήματα αυτά δείχνουν επίσης ότι Honokiol είναι ένα νέο και ισχυρός αναστολέας της αγγειογένεσης και περιτοναϊκή διάχυση των γαστρικών καρκινικών κυττάρων, την παροχή στήριξης για την ενδεχόμενη εφαρμογή της Honokiol στο γαστρικό θεραπεία του καρκίνου

Παράθεση:. Liu SH, Wang KB, Lan KH, Lee WJ, Παν HC, Wu SM, et al. (2012) καλπαΐνη /SHP-1 Αλληλεπίδραση με Honokiol ύγρανσης περιτοναϊκή διάχυση του καρκίνου του στομάχου σε

nu /nu

ποντίκια. PLoS ONE 7 (8): e43711. doi: 10.1371 /journal.pone.0043711

Επιμέλεια: Henrik Einwaechter, Klinikum rechts der Isar der TU München, Γερμανία

Ελήφθη: 17 Ιανουαρίου του 2012? Αποδεκτές: 24 Ιούλη του 2012? Δημοσιεύθηκε: 24, Αύγ, 2012

Copyright: © Liu et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε από ερευνητικές επιχορηγήσεις από Ταϊτσούνγκ Γενικού Νοσοκομείου Βετεράνων, Ταϊβάν (TCVGH-997314C, TCVGH-1007313C) και το Εθνικό Επιστημονικό Συμβούλιο της Ταϊβάν (NSC99-2320-B-005-003-my3). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Η πλειονότητα των ασθενών (-60%) με καρκίνο του στομάχου έχουν διαγνωστεί με τη νόσο όψιμου σταδίου. Γαστρικό καρκίνος είναι η δεύτερη πιο κοινή αιτία της παγκόσμιας θνησιμότητας από καρκίνο στις αναπτυγμένες χώρες και παρουσιάζει μεταστατική νόσο κατά τον χρόνο της διάγνωσης [1]. έχουν τη χειρουργική επέμβαση και ο συνδυασμός χημειοθεραπειών για καρκίνο του στομάχου έχει αποδειχθεί ότι παρέχουν μόνο μέτρια οφέλη επιβίωσης σε προχωρημένες περιπτώσεις, και σχεδόν το 50% των ασθενών που εξακολουθούν να πεθαίνουν μετά από υποτροπή [2], [3]. Μια σημαντική μορφή της επανάληψης είναι περιτοναϊκή διάχυση. ανάπτυξη του καρκίνου και η περιτοναϊκή μετάσταση εξαρτώνται αγγειογένεση, μια διεργασία η οποία περιλαμβάνει αρκετές αγγειογόνοι παράγοντες συμπεριλαμβανομένων αγγειακού ενδοθηλιακού αυξητικού παράγοντα (VEGF), του επιδερμικού αυξητικού παράγοντα (EGF), βασικός αυξητικός παράγοντας ινοβλαστών, προσταγλανδίνη Ε2, ιντερλευκίνη-8, χημειοκίνης (CXC μοτίβο) συνδέτη 1, και η οικογένεια μεταλλοπρωτεϊνάσης μήτρας [4] – [6]. Αρκετές μοριακά σήματα, όπως μετατροπέας σήματος και ενεργοποιητής της μεταγραφής-3 (STAT-3), πυρηνικό παράγοντα-ΕΒ, Akt, που ενεργοποιείται από μιτογόνο κινασών πρωτεΐνης, της κυκλοοξυγενάσης-2, λιποξυγενάση, διεγέρσιμης συνθάσης νιτρικού οξειδίου, παράγοντα νέκρωσης όγκου και άλλων , έχουν επίσης δειχθεί ότι εμπλέκεται στην πρόοδο του όγκου και την αγγειογένεση [7] – [9]. Ωστόσο, οι κυτταρικοί και μοριακοί μηχανισμοί της ανάπτυξης, της προόδου και της μετάστασης του καρκίνου του στομάχου παραμένουν ακόμη να διευκρινιστούν.

Ο Janus-ενεργοποιημένη κινάση (Jak) /μονοπατιού σηματοδότησης STAT παίζει σημαντικό ρόλο στη ρύθμιση της κυτταρική ανάπτυξη, αγγειογένεση, τη διαφοροποίηση, τη μετανάστευση, και η μετάσταση [10]. Συστατική ενεργοποίηση των οδών STAT, ιδιαίτερα STAT-3, συνδέεται με μία ευρεία ποικιλία ανθρώπινων κακοηθειών. Επίμονη STAT-3 φωσφορυλιώσεως έχει παρατηρηθεί σε διάφορους ανθρώπινους καρκίνους, όπως συμπαγείς όγκοι του στομάχου, του παχέος εντέρου, του ήπατος, του προστάτη, του μαστού, του πνεύμονα, και κεφαλής και λαιμού, καθώς και κακοήθειες του αίματος [8], [10]. Προηγούμενη μελέτη έχει δείξει ότι η φωσφορυλίωση του STAT-3 και η έκφραση πρωτεΐνης VEGF είναι αυξημένα σε ανθρώπινο γαστρικό καρκινικό ιστό, το οποίο με τη σειρά του να ανυψώσει την αγγειογόνο φαινότυπο και συμβάλλουν στην γαστρική ανάπτυξη και εξέλιξη [11] του καρκίνου. Από την άλλη πλευρά, ορισμένες φωσφατάσες γνωστό ότι είναι καταστολείς των όγκων και μπορεί να παίζει ένα σημαντικό ρόλο στην αναστολή ή έλεγχο της ανάπτυξης του καρκίνου [12] – [15]. φωσφατάσες πρωτεΐνης τυροσίνης (ΡΤΡ), συμπεριλαμβανομένων των SH2 που περιέχει την περιοχή φωσφατάσης τυροσίνης (SHP) -1 και SHP-2, είναι σε θέση να ρυθμίζουν αρνητικά σηματοδότηση STAT από την αποφωσφορυλίωση τυροσίνης πολλών συστατικών στα συναφή μονοπάτια σηματοδότησης [13] – [15] . Η συνεχής ενεργοποίηση του STAT-3 στους όγκους θα μπορούσε να διευκολυνθεί τουλάχιστον εν μέρει από απώλεια της λειτουργίας αυτών των φωσφατασών. Η καλπαΐνη II έχει δειχθεί ότι παίζει ένα ρόλο στην ενδοπλασματικό δίκτυο (ER) στρες-ρυθμιζόμενη ογκογένεση, η οποία εμπλέκεται στο μηχανισμό της Honokiol-ανέστειλε την γαστρική ογκογένεση [16]. Επιπλέον, η προηγούμενη μελέτη έδειξε επίσης ότι SHP-1 είναι ένας ενδογενής υπόστρωμα για καλπαΐνη εξής Α23187 επαγόμενη ενεργοποίηση των αιμοπεταλίων [17]. Ως εκ τούτου, μια καλπαΐνης /SHP-1-ρυθμιζόμενη STAT-3 και μονοπάτι VEGF μπορεί να εμπλέκονται στην αγγειογένεση, την ανάπτυξη, και περιτοναϊκή διάχυση του γαστρικού καρκίνου κυττάρων.

Honokiol, ένα μικρό-μοριακού βάρους φυσικό προϊόν, είναι μια σημαντική δραστική biphenolic ένωση του

Magnolia officinalis

, το οποίο είναι γνωστό για τη βελτίωση μικροβιακή μόλυνση, φλεγμονή και γαστρεντερικών διαταραχών σε παραδοσιακά ασιατικά φάρμακα συστήματα [18]. προηγούμενη μελέτη μας έδειξε ότι Honokiol αναστέλλει γαστρική ογκογένεση με ενεργοποίηση του 15-λιποξυγενάσης-1 και την επακόλουθη αναστολή της περοξυσώματος εξαρτώμενη COX-2 σήματα υποδοχέα-Α και που ενεργοποιείται από πολλαπλασιαστή [19]. Honokiol έχει δειχθεί ότι επάγει ER στρες και ενεργοποιούν καλπαΐνη II-μεσολάβηση γλυκόζη-ρυθμιζόμενη πρωτεΐνη-94 διάσπαση και την απόπτωση σε ανθρώπινα γαστρικά καρκινικά κύτταρα [16]. Έχει αποδειχθεί ότι η έκφραση του VEGF θα μπορούσε να αποκρίνεται σε θρεπτικό συνθήκες στέρησης, τα οποία προκαλούν στρες ER [20], [21]. Επιπλέον, το ER στρες ενεργοποιητής τουνικαμυκίνη έχει βρεθεί ότι εμποδίζουν σημαντικά την ανάπτυξη μικροαγγείωση, υποδηλώνοντας ότι αυτό το ER στρες επαγωγέας μπορεί να έχει ένα δυνητικό ρόλο στη θεραπεία των όγκων του μαστού [21]. Τα αποτελέσματα της Honokiol στο ER στρες συσχετίζεται αγγειογένεση και γαστρικό μετάσταση όγκου είναι ακόμα ασαφής. Εδώ, υποθέσαμε ότι Honokiol αναστέλλει την αγγειογένεση και την περιτοναϊκή διάχυση των γαστρικών καρκινικών κυττάρων μέσω ενός καλπάίνης /SHP-1-ρυθμιζόμενη STAT-3 και VEGF μονοπάτι. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι Honokiol αξιοσημείωτα ανέστειλε την αγγειογένεση και περιτοναϊκή διάχυση του γαστρικού καρκινικών κυττάρων μέσω ενός καλπαΐνης /SHP-1 αλληλεπίδραση ενεργοποιημένης STAT-3 αποφωσφορυλίωση και VEGF ρύθμιση προς τα κάτω της οδού.

Αποτελέσματα

Honokiol Αποκλεισμένοι περιτοναϊκή μετάσταση του καρκίνου του στομάχου

in vivo

η

ο καρκίνος είναι συχνά χαρακτηρίζεται από την αυξημένη πρόσληψη του [

18F] -φθορο-2-δεοξυ-D-γλυκόζης (FDG), και [

18F] -FDG /ΡΕΤ μπορεί να χρησιμεύσει ως ένα υποκατάστατο μέτρο της θεραπευτικής αποτελεσματικότητας. αξιολογήθηκε η λειτουργική δυνατότητα απεικόνιση μικρών ζώων, χρησιμοποιώντας ένα κλινικό PET /CT scanner με FDG. Τέσσερις ομάδες ποντικών για περιτοναϊκή μετάσταση πειράματα ερευνήθηκαν. Μια δήλωση /εικόνα της κατάστασης μετάσταση δείχθηκε στο Σχήμα 1. Χρησιμοποιήσαμε [

18F] -FDG-PET /CT για την ανίχνευση μεταστάσεων σε περιτοναϊκή ποντίκια που εμβολιάστηκαν με ανθρώπινο γαστρικό καρκινικά κύτταρα (ΜΚΝ45 ή SCM-1) με ή χωρίς Honokiol θεραπεία. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 2, η μέγιστη προεξοχή ένταση δημιουργήθηκε από τυπικός εκπρόσωπος ποντίκια. Η περιτοναϊκή μετάσταση σημαδεύτηκε στα ποντίκια ελέγχου (αριστερό πάνελ), και ήταν ουσιαστικά αντιστραφεί με την κατεργασία Honokiol (δεξί πάνελ). Αυτές οι εικόνες έδειξαν σαφώς ότι η μη επεμβατική [

18F] -FDG προσλήψεις στην περιτοναϊκή μεταστατικούς όγκους των ποντικών ελέγχου ήταν πολύ υψηλότερες από εκείνες στα ποντίκια Honokiol-θεραπεία. Η ποσοτικοποίηση της έντασης παρουσιάζεται στο σχήμα 3Α. Ενδοπεριτοναϊκή ένεση Honokiol (5 mg /kg, δύο φορές /εβδομάδα) μείωσε σημαντικά τις εκτιμώμενες μετρήσεις ραδιενέργειας και ειδικές τιμές πρόσληψης (SUV) που καθορίζεται από FDG-PET /CT σε ποντίκια που εμβολιάστηκαν με γαστρικό καρκίνο κύτταρα (Σχ. 3). Επιπλέον, πολλοί μεταστατικά οζίδια βρέθηκαν στην περιτοναϊκή κοιλότητα (μεσεντερίου) των ποντικών ελέγχου που εμβολιάστηκαν με ΜΚΝ45 και SCM-1 (Σχ. 2) κύτταρα. Σε αντίθεση, η περιτοναϊκή οζίδια όγκων παρατηρήθηκαν σποραδικά σε ποντίκια που έλαβαν θεραπεία με Honokiol. Ποσοτικοποίηση των κονδύλων ανά πεδίο φαίνεται στο Σχήμα 3Β.

(Α) Τέσσερις ομάδες ποντικών διερευνήθηκαν και απαριθμούνται. (Β) Οι μεταστατικές συνθήκες σε καρκινικές κυτταρικές εμβολιασμό με PET /CT επιτήρησης και περαιτέρω στη συνέχεια για τη θεραπεία Honokiol. Τα ανθρώπινα γαστρικά καρκινικά κύτταρα (4-5 × 10

6 κύτταρα) ΜΚΝ45 (α) και SCM-1 (β) εμβολιάστηκαν σε ποντικούς κατά την ημέρα 7.

Η

[

18F ] -FDG-PET υπηρέτησε ως ένα υποκατάστατο μέτρο της θεραπευτικής αποτελεσματικότητας. Οι όγκοι σε γυμνά ποντίκια καθορίστηκαν για 7 ημέρες μετά την ενδοπεριτοναϊκή ενοφθαλμισμό του γαστρικού καρκινικά κύτταρα (ΜΚΝ45, Α? SCM-1, Β). Οι ποντικοί στη συνέχεια εγχύθηκαν ενδοπεριτοναϊκά με Honokiol (5 mg /kg /δύο φορές την εβδομάδα). Είκοσι οκτώ ημέρες μετά τη θεραπεία Honokiol, ελήφθησαν FDG-PET /CT εικόνες των ποντικών, και στη συνέχεια οι ποντικοί θυσιάστηκαν για μακροσκοπική εξέταση της κατανομής των διαδίδονται μετάστασης. Αντιπροσωπευτικά FDG-PET /CT εικόνες των ζώων που εμβολιάστηκαν με ΜΚΝ45 (Α-a) ή SCM-1 (Β-a) γαστρικά καρκινικά κύτταρα με ή χωρίς Honokiol θεραπεία (HK) απεικονίζεται. HK (5 mg /kg) χορηγήθηκε με ενδοπεριτοναϊκή ένεση. Η μέγιστη προβολή έντασης των τυπικός εκπρόσωπος άτριχων ποντικών (αριστερά, ο έλεγχος του όγκου? Σωστά, η θεραπεία HK) εμφανίζεται. Επιπλέον, πολλοί μεταστατικά οζίδια βρέθηκαν στο μεσεντέριο των ποντικών ελέγχου που εμβολιάστηκαν με ΜΚΝ45 (Α-Β) ή κύτταρα SCM-1 (Β-Β). Σε αντίθεση, η περιτοναϊκή μετάσταση παρατηρήθηκε σποραδικά σε ποντίκια Honokiol φάρμακο.

Η

ποντίκια εμβολιάστηκαν με ανθρώπινα γαστρικά καρκινικά κύτταρα (ΜΚΝ45 και SCM-1). [

18F] -FDG-PET /CT απεικόνιση έγινε και αναλύθηκαν. (Α) ποσοτικούς προσδιορισμούς των εκτιμώμενων ραδιενέργειας (Bq /ml, α) και ειδικές τιμές πρόσληψης (SUV, β) υπολογίστηκαν. SUV χρησιμοποιείται ως δείκτης για να καθοριστεί αν ένα hotspot είναι σημαντική. (Β) Photomacrographs του μεταστατικού περιτοναϊκή οζίδια εμφανίζονται. Όλα τα δεδομένα παρουσιάζονται ως μέση τιμή ± SEM (n = 6-8). * P & lt? 0,05 σε σύγκριση με τον έλεγχο

Η

Honokiol Σαθεροποιημένο αγγειογένεση

in vivo

,

ex vivo

, και

in vitro

τα ενδοθηλιακά κύτταρα είναι κρίσιμα για την αγγειογενετική διαδικασία, η οποία είναι απαραίτητη για την ανάπτυξη του όγκου και τη μετάσταση. Στη συνέχεια ερευνήσαμε την αγγειογενετική δράση του Honokiol χρησιμοποιώντας τον προσδιορισμό χοριοαλλαντοϊκής μεμβράνης νεοσσού (

CAM

δοκιμασία), δοκιμασία βύσμα matrigel, αορτικού δακτυλίου δοκιμασία βλάστησης, και ο σχηματισμός ενδοθηλιακού σωλήνα. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 4Α, Honokiol ανέστειλε αποτελεσματικά το νεο-αγγειακό σχηματισμό στο CAM

δοκιμασία χωρίς καμία ορατή επίδραση στα προϋπάρχοντα αιμοφόρα αγγεία. Ποσοτική ανάλυση αποκάλυψε ότι Honokiol προκάλεσε 2.5-φορές μείωση του αριθμού των νεοσχηματισμένα αιμοφόρα αγγεία σε σύγκριση με εκείνη του μέσου ελέγχου.

(Α) δοκιμασία μεμβράνης χοριοαλλαντοΐκής (

CAM

δοκιμασία) ήταν εκτελείται. Το νεοαγγειακό σχηματισμό παγιδευμένο σε κολλαγόνο τύπου Ι πηκτώματα με ή χωρίς Honokiol (HK, 20 μΜ) εξετάσθηκε θεραπεία. Μετά από 24-ώρες επώασης, η περιοχή γύρω από το φορτωμένο δίσκο φωτογραφήθηκε. (Β) Matrigel (0,6 ml) εμφυτεύονται υποδόρια σε γυμνούς ποντικούς με ή χωρίς Honokiol (10 μg /ml) ή VEGF (100 ng /ml). Η ένεση matrigel σχηματίζεται γρήγορα ένα ενιαίο βύσμα στερεό τζελ. Μετά από 21 ημέρες, τα ποντίκια θυσιάστηκαν και τα βύσματα Matrigel αποκόπηκαν. Αντιπροσωπευτικά βύσματα Matrigel (α) και IHC για χρώση CD31 των τμημάτων αυτών από βύσματα Matrigel (β) απεικονίζεται. Ποσοτικοποιήσεις του αριθμό σκαφών (γ) και ενδοθηλιακά κύτταρα (δ) στα τμήματα βύσμα matrigel (μετρήσεις /πεδίο) υπολογίστηκαν. Οι αριθμοί σε κάθε περίπτωση είναι ο μέσος όρος από πέντε διαφορετικές διαφάνειες και πέντε περιοχές ανά slide. Όλα τα δεδομένα παρουσιάζονται ως μέση τιμή ± SEM (η = 8-10). * Ρ & lt? 0,05, σε σύγκριση με τον έλεγχο

Η

Στην δοκιμασία βύσμα matrigel, matrigel περιέχουν VEGF (100 ng /ml γέλης), με ή χωρίς Honokiol (10 μg /ml) υποδορίως εμφυτευμένων σε γυμνά ποντίκια. . Μετά από 21 ημέρες από την εμφύτευση, τα διαμορφωμένα βύσματα Matrigel αποκόπηκαν και φωτογραφήθηκαν. Βύσματα μόνο με VEGF ήταν αισθητά πανσέτα, αγγειακές και κόκκινο χρώμα. Βύσματα περιέχουν VEGF και Honokiol ήταν ωχρός, υποδεικνύοντας καθόλου ή λιγότερο σχηματισμού αιμοφόρων αγγείων (Σχ. 4Β-α). Εξετάσαμε επίσης την πυκνότητα των αγγείων και η μορφολογία σκαφών στα τμήματα βύσμα από την H & amp? Ε χρώση και ανοσοϊστοχημική χρώση με ένα αντίσωμα έναντι CD31, έναν δείκτη ενδοθηλιακών κυττάρων. Η αγγείωση στην ομάδα Honokiol + VEGF ήταν σημαντικά μειωμένη σε σύγκριση με την ομάδα της μονοθεραπείας VEGF (Σχ. 4Β-b). Ποσοτικοποίηση της αγγειοποίησης μετρώντας τα πλοία και παρουσίασε ενδοθηλιακών κυττάρων αποκάλυψε ότι η αγγειακή πυκνότητα στην ομάδα Honokiol αγωγή μειώθηκε σημαντικά (Σχ. 4Β-c και 4Β-d).

Στη συνέχεια, τα ενδοθηλιακά κύτταρα επάχθηκαν να φυτρώνουν από τα απομονωμένα δακτυλίους αορτής αρουραίου παρουσία του matrigel και ECGM (μέσο ανάπτυξης ενδοθηλιακού κυττάρου) που περιέχουν αγγειογόνο κυτοκίνες, όπως ο VEGF και ο βασικός αυξητικός παράγοντας των ινοβλαστών. Εκτεταμένες έκφυση των ενδοθηλιακών κυττάρων από μοσχεύματα δακτύλιο αορτής αρουραίου παρατηρήθηκε στην ομάδα ελέγχου (εικ. 5Α). θεραπεία Honokiol οδήγησε σε σημαντική (~five-πλάσια) μείωση των ενδοθηλιακών έκφυσης και βλάστησης από αορτικών δακτυλίων (Σχ. 5Α και 5C). Επιπλέον, η μορφολογική διαφοροποίηση του σχηματισμού ενδοθηλιακού σωλήνα ερευνήθηκε χρησιμοποιώντας μια δισδιάστατη μέθοδος matrigel. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 5Β, σπορά του HUVECs σε matrigel οδήγησε στο σχηματισμό δομής αγγειακή μορφής σωλήνα. Honokiol ανέστειλε αποτελεσματικά το σχηματισμό ενδοθηλιακού σωλήνα μέσω της μείωσης του σωλήνα-όπως δομή σε μήκος και πλάτος (Εικ. 5Β και 5D).

(Α) Honokiol ανέστειλε ενδοθηλιακών κυττάρων βλάστησης σε μία δοκιμασία αορτικού δακτυλίου. Οι αορτές συλλέχθηκαν από 6 εβδομάδων αρουραίοι Sprague-Dawley και κομμένα σε φέτες 1-mm, τα οποία στη συνέχεια τοποθετήθηκαν σε πλάκες 12-φρεατίων που περιέχουν matrigel. Οι δακτύλιοι φωτογραφήθηκαν και αναλύθηκαν. Η ενδοθηλιακή κυτταρική βλάστηση ήταν άφθονο στον έλεγχο αορτικούς δακτυλίους (αριστερά πάνελ), αλλά όχι στους δακτυλίους που έλαβαν θεραπεία με Honokiol (HK? Μεσαίο πάνελ, 40 μΜ? Δεξιά πάνελ, 60 μΜ). (Β) Honokiol κατέστειλε τον σχηματισμό ενδοθηλιακού σωλήνα. HUVECs σπάρθηκαν σε πλάκες 96 φρεατίων επικαλυμμένες με Matrigel. Τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με Honokiol (40 και 60 μΜ) για 12-18 ώρες. Οι εικόνες σχηματισμό σωλήνα συνελήφθησαν σε ανεστραμμένη φωτομικροσκόπιο, και σχηματισμούς σωλήνα βαθμολογήθηκαν. (C) Ο βαθμός μικροαγγείων βλάστησης από αορτικών δακτυλίων βαθμολογήθηκε από 0 (λιγότερο θετικό) έως 4 (πιο θετικό). (Δ) Ποσοτικοποίηση του σχηματισμού σωλήνα HUVEC δείχνεται. Όλα τα δεδομένα παρουσιάζονται ως μέση τιμή ± SEM (η = 8-10). * P & lt? 0,05 σε σύγκριση με τον έλεγχο

Η

Honokiol καταργηθεί STAT-3 Σηματοδοσίας σε ανθρώπινα κύτταρα γαστρικός καρκίνος, HUVECs, και όγκοι

Προηγούμενες μελέτες έχουν δείξει μια ισχυρή συσχέτιση μεταξύ ενεργοποιηθεί STAT. -3 και αγγειογόνο φαινότυπο [11]. Εμείς διευκρινιστεί περαιτέρω η επίδραση της Honokiol επί της φωσφορυλίωσης του STAT-3 σε ανθρώπινο γαστρικό καρκινικά κύτταρα (ΜΚΝ45 και AGS) και HUVECs. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 6, Honokiol μείωσε την τυροσίνη (Tyr705) φωσφορυλίωση του STAT-3 σε έναν χρονο-εξαρτώμενο τρόπο με περίπου διπλάσια μείωση σε 1-2 ώρες σε AGS κύτταρα (Σχ. 6Α) και ένα 3 έως 10- fold μείωση σε 0,5-24 h σε ΜΚΝ45 κύτταρα (Εικ. 6Β). Παραδόξως, Honokiol επαγόμενη STAT-3 αποφωσφορυλίωση Tyr705, αλλά όχι Ser727, κατάλοιπα σε αυτά τα ανθρώπινα γαστρικά καρκινικά κύτταρα. Ωστόσο, Honokiol ανέστειλε ταυτόχρονα και Tyr705 και φωσφορυλίωση Ser727 της STAT-3 σε HUVECs (Σχ. 6C). Ποσοτική ανάλυση των ζωνών πρωτεΐνης στο στύπωμα Western χρησιμοποιώντας Image-Pro Plus λογισμικό παρουσιάζεται στην Εικόνα 7. Τα αποτελέσματα της ανάλυσης με ομοεστιακό μικροσκόπιο έδειξε επίσης ότι Honokiol κατάργησε την τυροσίνη (Tyr705) φωσφορυλίωση του STAT-3 σε AGS κύτταρα και HUVECs (Σχ . 8Α).

AGS (Α) και ΜΚΝ45 (Β) ηρεμίας ανθρώπινου γαστρικού καρκινικά κύτταρα και HUVECs (C) υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με και χωρίς Honokiol (HK, 5-40 μΜ) για τους υποδεικνυόμενους χρόνους. Λύματα ολόκληρων κυττάρων παρασκευάστηκαν και αναλύθηκαν με κηλίδωση Western για την ανίχνευση του φωσφορυλιωμένου STAT-3 (pSTAT-3, Tyr705). Οι blottings ανιχνεύθηκαν και πάλι με αντι-STAT 3-αντισωμάτων για εξομάλυνση. Τα αποτελέσματα είναι αντιπροσωπευτικά τουλάχιστον πέντε ανεξάρτητα πειράματα.

Η

AGS (Α) και ΜΚΝ45 (Β) ηρεμίας ανθρώπινου γαστρικού καρκινικά κύτταρα και HUVECs (C) υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με και χωρίς Honokiol (HK, 5- 40 μΜ) για τους υποδεικνυόμενους χρόνους. Λύματα ολόκληρων κυττάρων παρασκευάστηκαν και αναλύθηκαν με κηλίδωση Western για την ανίχνευση του φωσφορυλιωμένου STAT-3 (pSTAT-3, Tyr705). Οι blottings ανιχνεύθηκαν και πάλι με αντι-STAT 3-αντισωμάτων για εξομάλυνση. Όλα τα δεδομένα παρουσιάζονται ως μέση τιμή ± SEM από πέντε ανεξάρτητα πειράματα. * P & lt? 0,05 σε σύγκριση με τον έλεγχο

Η

(Α) Η π-STAT-3 (Tyr705) εκφράσεις στα γαστρικά καρκινικά κύτταρα (AGS) και HUVECs αντιμετωπίζονται με Honokiol (Χονγκ Κονγκ, 10 και 20 μΜ. ) για 1 ώρα ανιχνεύθηκαν με ένα ομοεστιακό μικροσκόπιο. (Β) Οι όγκοι σε γυμνά ποντίκια καθορίστηκαν για 7 ημέρες μετά την ενδοπεριτοναϊκή ενοφθαλμισμό των κυττάρων ΜΚΝ45. Οι ποντικοί στη συνέχεια εγχύθηκαν ενδοπεριτοναϊκά με Honokiol (5 mg /kg /δύο φορές την εβδομάδα) για 28 ημέρες. Η ρ-STAT-3 (Tyr705) εκφράσεις σε μεταστατικούς όγκους που απομονώνονται από ποντίκια με ή χωρίς θεραπεία HK απεικονίζονται. Οι εκφράσεις p-STAT-3 (Tyr705) πρωτεΐνη, χρωματισμένο σκούρο καφέ, ανιχνεύθηκαν με ανοσοϊστοχημεία. Όλα τα δεδομένα παρουσιάζονται ως μέση τιμή ± SEM από πέντε ανεξάρτητα πειράματα. * Ρ & lt? 0,05, σε σύγκριση με τον έλεγχο

Η

Εξετάσαμε περαιτέρω την STAT-3 φωσφορυλιώσεως σε περιτοναϊκή μεταστατικούς όγκους που απομονώθηκαν από άτριχα ποντίκια που εμβολιάστηκαν με ΜΚΝ45 κύτταρα με ή χωρίς Honokiol (5 mg /kg) της θεραπείας.. Ανοσοϊστοχημική ανάλυση έδειξε ότι ρ-STAT-3 υπερέκφραση και συσσώρευση στην περιοχή του όγκου, συμπεριλαμβανομένων πυρήνες και κυτταρόπλασμα, ήταν σημαντικά αναστρέφεται από Honokiol θεραπεία (Εικ. 8Β). Στην ανάλυση Western blotting, Honokiol μειώθηκε σημαντικά τη συσσώρευση p-STAT3 σε όγκους σε σύγκριση με τον έλεγχο οχήματος (Σχ. 9Α). Η έκφραση του ιδιοσυστατική STAT3 δεν επηρεάστηκε. Επιπλέον, η δραστηριότητα δέσμευσης του DNA της STAT-3 επιβεβαιώθηκε περαιτέρω με τη χρήση του EMSA. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 9Β, Honokiol ανέστειλε σημαντικά την αυξημένη δραστικότητα σύνδεσης DNA του STAT-3 σε ανθρώπινο γαστρικό καρκινικά κύτταρα. Honokiol επίσης ανέστειλε την VEGF-αυξημένη STAT-3 δραστικότητα δέσμευσης σε HUVECs (Σχ. 9Β) του DNA.

(Α) κηλίδωση Western για την ανίχνευση του ρ-STAT-3 (Tyr705) πρωτεϊνών σε μεταστατικούς όγκους που απομονώθηκαν από ποντίκια με ή χωρίς Honokiol (HK) θεραπεία δείχνεται. (Β) EMSA διεξήχθη για την ανίχνευση της STAT-3 δραστικότητα σε AGS, SCM-1 (αριστερό πάνελ) και HUVECs (δεξί πάνελ) δέσμευσης DNA με ή χωρίς θεραπεία Honokiol. Τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με Honokiol για διάφορες χρονικές πορείες όπως υποδεικνύεται. VEGF (20 ng /ml) ενίσχυσε την δραστικότητα δέσμευσης STAT-3 DNA σε HUVECs, και αυτή η ενίσχυση αντιστράφηκε με Honokiol (10 μΜ). Όλα τα δεδομένα παρουσιάζονται ως μέση τιμή ± SEM από πέντε ανεξάρτητα πειράματα. * Ρ & lt?. 0,05, σε σύγκριση με τον έλεγχο

Η

Honokiol Induced SHP-1-ρυθμιζόμενη STAT-3 αποφωσφορυλίωση στο γαστρικό καρκινικά κύτταρα, ενδοθηλιακά κύτταρα, και οι όγκοι

SHP-1 είναι ένα μη-διαμεμβρανικές ΡΤΡ [12]. Στη συνέχεια εξετάσαμε εάν Honokiol μπορεί να ρυθμίζει την έκφραση και τη δραστηριότητα των SHP-1. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 10Α, Honokiol ενίσχυσε την πρωτεΐνη έκφραση του SHP-1, αλλά όχι SHP-2, σε κύτταρα HUVECs και AGS σε έναν χρόνο-εξαρτώμενο τρόπο. Φαρμακολογικές αναστολέα ΡΤΡ και SHP-1 siRNA διαμόλυνση κατήργησε αποτελεσματικά την Honokiol επαγόμενη STAT-3 αποφωσφορυλίωση σε κύτταρα HUVECs και AGS (Σχ. 10Β-α). Παρόμοια αποτελέσματα σε SCM-1 κύτταρα και SV-40 αθανατοποιημένη μικροαγγειακά ενδοθηλιακά κύτταρα ποντικού (SVECs) υποβλήθηκε σε επεξεργασία με Honokiol φαίνεται στο Σχήμα 10Β-b. Είμαστε δίπλα εξέτασε κατά πόσον ενδογενή SHP-1 διαμορφώνεται από Honokiol. Honokiol ήταν μπορεί να αναφέρεται στην δραστικότητα SHP-1 σε καρκίνο του στομάχου κύτταρα, HUVECs και SVECs σε ένα χρονοεξαρτώμενο τρόπο (Εικ. 11Α). Honokiol ενισχυμένη επίσης την έκφραση πρωτεΐνης SHP-1 σε περιτοναϊκή μεταστατικούς όγκους που απομονώθηκε από ΜΚΝ45-εμβολιασθέντες ποντικούς όπως αποκαλύπτεται από ανοσοϊστοχημική ανάλυση (Σχ. 11Β). Ερευνήσαμε περαιτέρω την αλληλεπίδραση μεταξύ SHP-1 και STAT-3 χρησιμοποιώντας τις μεθόδους της συν-ανοσοκαταβύθιση και στύπωση Western. Όπως φαίνεται στην Εικόνα 11C, SHP-1 ειδικά σχετίζεται με STAT-3 σε AGS κύτταρα και HUVECs παρουσία Honokiol σε σύγκριση με έλεγχο IgG.

Τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με Honokiol (10 και 20 μΜ) για διάφορα μαθήματα χρόνο όπως υποδεικνύεται. (Α) Τα επίπεδα SHP-1 και πρωτεΐνη SHP-2 ανιχνεύθηκαν με ανάλυση κηλίδας Western σε κύτταρα με ή χωρίς επεξεργασία Honokiol. (Β) Η φωσφορυλίωση της STAT-3 σε γαστρικά καρκινικά κύτταρα (AGS και SCM-1) και ενδοθηλιακά κύτταρα (HUVECs και SVECs) με ή χωρίς Honokiol (10 μΜ σε HUVECs, SVECs, και SCM-1? 20 μΜ σε AGS) θεραπεία για 24 ώρες με την παρουσία ή απουσία ενός αναστολέα φωσφατάσης (αναστολέας PTP II, 20 μΜ) ή SHP-1 siRNA διαμόλυνση ανιχνεύθηκε. Στο Α, τα δεδομένα παρουσιάζονται ως μέση ± SEM από πέντε ανεξάρτητα πειράματα. * P & lt? 0,05 σε σύγκριση με τον έλεγχο. Στο Β, τα αποτελέσματα που παρουσιάζονται είναι αντιπροσωπευτικά τουλάχιστον τέσσερα ανεξάρτητα πειράματα.

Η

Τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε θεραπεία με Honokiol (HK) για διάφορα μαθήματα χρόνο όπως υποδεικνύεται. (Α) Τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με Honokiol (HUVECs, 20 μΜ? SVECs, 20 μΜ? AGS, 20 μΜ? SCM-1, 40 μΜ) στους υποδεικνυόμενους χρόνους, και στη συνέχεια μετρήθηκαν οι δραστηριότητες SHP-1. Τα δεδομένα παρουσιάζονται ως μέσος όρος ± SEM (n = 7). * P & lt? 0,05 σε σύγκριση με τον έλεγχο. (Β) Ανοσοϊστοχημεία για SHP-1 έκφραση σε μεταστατικούς όγκους που απομονώνονται από ποντίκια με ή χωρίς θεραπεία HK δείχνεται. Οι τομές χρωματίστηκαν με αντίσωμα αντι-SHP-1. (Γ) Αλληλεπίδραση STAT-3 και SHP-1 ανιχνεύθηκε σε AGS κύτταρα ή HUVECs. Ανοσοκαταβυθισμένες πρωτεΐνες συλλέχθηκαν και υποβλήθηκαν σε SDS-PAGE και ανοσοκηλίδωση με αντι-STAT-3 ή-SHP-1 αντι αντισώματα. Σε Α και Β, τα δεδομένα παρουσιάζονται ως μέση τιμή ± SEM (n = 5). * P & lt? 0,05 σε σύγκριση με τον έλεγχο. Στην C, τα αποτελέσματα που παρουσιάζονται είναι αντιπροσωπευτικά τουλάχιστον τέσσερα ανεξάρτητα πειράματα.

Η

Honokiol Altered ER Μορφολογία, προκάλεσε καλπαΐνη-ΙΙ-ρυθμιζόμενη SHP-1-επαγόμενη STAT-3 αποφωσφορυλίωση, και μειωμένη VEGF Generation

Προηγούμενες μελέτες έχουν δείξει ότι ER στρες παίζει έναν σημαντικό ρόλο στην αγγειογένεση [20], [21]. Στη συνέχεια εξετάσαμε την επίδραση της Honokiol επί ER μικροδομή με ηλεκτρονικό μικροσκόπιο μετάδοσης. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 12Α, ER διαστολή και τον κατακερματισμό εκτέθηκαν σε Honokiol επεξεργασμένο SCM 1-γαστρικό καρκίνο κύτταρα και HUVECs

(Α) κύτταρα υποβάλλονται σε επεξεργασία με Honokiol (HUVECs, 10 μΜ?. SCM-1, 40 μΜ) για 18 ώρες. Τα κύτταρα συλλέχθηκαν και οπτικοποιήθηκαν με ηλεκτρονική μικροσκοπία όπως περιγράφεται στο «Υλικά και Μέθοδοι». Τα βέλη δείχνουν διαστολή ER. Αρχική μεγέθυνση: 9800x. (Β) Τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με ή χωρίς Honokiol (HUVECs, 20 μΜ? AGS, 20 μΜ) παρουσία ή απουσία ανασυνδυασμένης πρωτεΐνης καλπαΐνης II (re-καλπαΐνης) ή καλπαΐνη II διαμόλυνση siRNA, και στη συνέχεια, τα κύτταρα αναλύθηκαν για SHP -1 δραστηριότητα. (C) Τα κύτταρα διαμολύνθηκαν με άγριου τύπου STAT-3 (wt) και μεταλλαγμένων STAT-3 (mut) πλασμίδια ή SHP-1 siRNA, και στη συνέχεια προσδιορίστηκε η παραγωγή VEGF. (Δ) Αλληλεπίδραση καλπαΐνης και SHP-1 ανιχνεύθηκε σε AGS κύτταρα. Ανοσοκαταβυθισμένες πρωτεΐνες συλλέχθηκαν και υποβλήθηκαν σε SDS-PAGE και ανοσοκηλίδωση με αντι-καλπαΐνης-ΙΙ ή-SHP-1 αντι αντισώματα. Σε Α και D, τα αποτελέσματα που παρουσιάζονται είναι αντιπροσωπευτικά τουλάχιστον 4 ανεξάρτητα πειράματα. Στην Β και C, τα δεδομένα παρουσιάζονται ως μέση τιμή ± SEM (n≥4). * P & lt? 0,05 σε σύγκριση με τον έλεγχο. # P & lt?. 0.05 σε σύγκριση με μόνη Honokiol

Η

Θέλαμε επίσης να καθοριστεί εάν η ενεργοποίηση καλπαΐνη II είναι απαραίτητη για τη δραστηριότητα SHP-1 σε κύτταρα Honokiol-θεραπεία. Φαρμακολογικές αναστολέας καλπάίνης και καλπαΐνη II siRNA επιμόλυνσης μειώνεται αποτελεσματικά δραστηριότητα Honokiol-ενισχυμένη SHP-1 στα AGS κύτταρα και HUVECs (Σχ. 12Β). Κύτταρα κατεργασμένα με ανασυνδυασμένη καλπαΐνη-ΙΙ, ως θετικός έλεγχος, έδειξε μια αύξηση 4 έως 5 φορές σε δραστικότητα SHP-1 (Σχ. 12Β). VEGF είναι γνωστό ότι περιέχει την θέση πρόσδεσης υποκινητή STAT-3. Είμαστε δίπλα εξέτασε κατά πόσον Honokiol μπορούν να ρυθμίσουν την έκφραση του VEGF. Honokiol μείωσε σημαντικά την παραγωγή VEGF σε AGS κύτταρα και HUVECs, και το αποτέλεσμα αυτό αναστρέφεται από SHP-1 siRNA διαμόλυνση (Σχ. 12C). Επιπλέον, η επιμόλυνση του μεταλλαγμένου-STAT-3 πλασμίδιο σε κύτταρα επίσης ανέστειλε την παραγωγή VEGF. Ο συνδυασμός της Honokiol με μεταλλαγμένο-STAT-3 πλασμίδιο διαμόλυνση σε κύτταρα μειώνεται συνεργικά την παραγωγή VEGF σε σύγκριση είτε με θεραπεία μόνο (Σχ. 12C). Για να επιβεβαιωθεί περαιτέρω η αλληλεπίδραση μεταξύ καλπαΐνη-ΙΙ και SHP-1, συν-ανοσοκαταβύθιση και κηλίδωση Western διεξήχθησαν σε γαστρικό καρκινικά κύτταρα. Όπως φαίνεται στην Εικόνα 12D, καλπαΐνη-ΙΙ ήταν ειδικά σχετίζεται με SHP-1 σε AGS κύτταρα παρουσία του Honokiol (20 μΜ) σε σύγκριση με έλεγχο IgG. Ομοίως, ο /SHP-1 αλληλεπίδραση Honokiol που προκαλείται καλπάίνης βρέθηκε επίσης σε HUVECs (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται).

Συζήτηση

Honokiol είναι ένα σημαντικό συστατικό της

Magnolia officinalis

, το οποίο είναι ένα μεταβατικό φάρμακο στην Ασία [18]. Honokiol διαθέτει αντι-οξειδωτική και αντι-φλεγμονώδεις επιδράσεις

in vitro

και

in vivo

[22] – [25]. Honokiol έχει δειχθεί ότι εμφανίζουν ισχυρή αντι-πολλαπλασιαστική δραστικότητα έναντι ενδοθηλιακών κυττάρων

in vitro

και αντινεοπλασματική αποτελέσματα έναντι αγγειοσάρκωμα σε γυμνούς ποντικούς [26]. Στην παρούσα μελέτη, δείξαμε για πρώτη φορά ότι Honokiol είναι ένας ισχυρός αναστολέας της αγγειογένεσης και περιτοναϊκή μετάσταση του καρκίνου του στομάχου. Η έρευνά μας έχει επικεντρωθεί στις συνέπειες και πιθανούς μηχανισμούς Honokiol σε περιτοναϊκή μετάσταση και την αγγειογένεση χρησιμοποιώντας PET /CT,

CAM

δοκιμασία, δοκιμασία βύσμα matrigel, αορτικού δακτυλίου ενδοθηλιακών κυττάρων βλάστησης δοκιμασία, δοκιμασία σχηματισμού ενδοθηλιακού σωλήνα, και

in vitro

πειράματα κυττάρων. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι Honokiol μπορεί να καταστείλει την αγγειογένεση και περιτοναϊκή διάχυση μέσω μιας καλπαΐνη-ΙΙ-ενεργοποιημένη SHP-1 ενεργοποίηση καταρράκτη σηματοδότησης. Η ενεργοποίηση της φωσφατάσης SHP-1 με Honokiol οδήγησε περαιτέρω στη κάτω ρύθμιση STAT-3 παραγωγή την ενεργοποίηση και VEGF, με αποτέλεσμα την αναστολή της αγγειογένεσης και περιτοναϊκή μετάσταση. Ωστόσο, η αναστολή της αγγειογένεσης και η αναστολή του μεταστατικού δυναμικού των καρκινικών κυττάρων με Honokiol μπορεί να είναι οι διαφορετικές πτυχές, ο ένας να είναι ένα αποτέλεσμα της Honokiol στην αγγειογένεση άμεσα και ένα άλλο αποτέλεσμα της Honokiol σε καρκινικά κύτταρα.

Κατά τη διάρκεια των τελευταίων χρόνια, μια σειρά από μελέτες έχουν δείξει ότι συστατική ενεργοποίηση της οικογένειας STAT, ειδικά STAT-3, συνδέεται με τον κυτταρικό πολλαπλασιασμό, αγγειογένεση και μετάσταση [10], [11], [27] – [30]. Αυξημένη ενεργοποίηση του STAT-3 έκφρασης έχει βρεθεί σε διάφορα καρκινικά κύτταρα προερχόμενα και τα δείγματα από ανθρώπινους ιστούς καρκίνου. Η απορρύθμιση ενεργοποίηση STAT-3 έχει προταθεί ότι παίζει σημαντικό ρόλο στην υπερέκφραση του VEGF και την αυξημένη αγγειογονική φαινοτύπων σε γαστρικό καρκίνο, το οποίο μπορεί να συμβάλει στην γαστρική ανάπτυξη και εξέλιξη [11] του καρκίνου. Στην παρούσα μελέτη, διαπιστώσαμε ότι Honokiol μπορεί να εμποδίσει αποτελεσματικά την φωσφορυλίωση STAT-3 σε HUVECs (τόσο sites Tyr705 και Serine727), ανθρώπινα γαστρικά καρκινικά κύτταρα (Tyr705 εγκαταστάσεις), και περιτοναϊκή μεταστατικούς όγκους (Tyr705 θέση). Καθώς το ογκογόνο ενεργοποίηση των κινασών τυροσίνης είναι ένα κοινό χαρακτηριστικό σε καρκίνους, εστιάσαμε στο ρόλο της φωσφορυλίωσης Tyr705 της STAT-3.

SHP-1 διαθέτει ένα δυναμικό λειτουργία καταστολής όγκου και είναι ένας αρνητικός ρυθμιστής της JAK /STAT μονοπάτι σηματοδότησης [15]. Έχει επίσης δειχθεί ότι SHP-1 φωσφατάση μπορεί να συνδεθεί με το φωσφορυλιωμένο Y1173 τομέα, η οποία οδηγεί σε αποφωσφορυλίωση EGFR [31]. Y429 στην κυτταροπλασματική περιοχή του υποδοχέα ερυθροποιητίνης έχει προταθεί ότι είναι η θέση σύνδεσης για φωσφατάσης τυροσίνης πρωτεΐνης SH-PTP1, το οποίο μπορεί να παίζει ένα σημαντικό ρόλο στον τερματισμό πολλαπλασιαστικά σήματα [32]. SHP-1 έχει επίσης αποδειχθεί ότι είναι ένας ανταγωνιστής του παράγοντα ανάπτυξης σηματοδότησης σε επιθηλιακά και αιμοποιητικά κύτταρα [15]. SHP-1 ήταν ιδιαίτερα επισημανθεί ως πιθανή φυσιολογική ανταγωνιστή του VEGFR σηματοδότησης [33]. Σε ενδοθηλιακά κύτταρα, SHP-1 συνδέεται φυσικώς με VEGFR2 και απαιτείται επίσης τόσο για ΤΝΡα με τη μεσολάβηση και ιστο-αναστολέα των μεταλλοπρωτεϊνασών (ΤΙΜΡ) μεσολάβηση αναστολή της αγγειογένεσης [31]. Έτσι, SHP-1 ενεργοποίηση μπορεί να έχει σημαντικές συνέπειες για τη ρύθμιση του πολλαπλασιασμού και της αγγειογένεσης. Σε αυτή τη μελέτη, βρήκαμε ότι Honokiol ενισχυμένη ειδικά την έκφραση του SHP-1, αλλά όχι SHP-2, σε γαστρικό καρκινικά κύτταρα, ενδοθηλιακά κύτταρα, και περιτοναϊκή μεταστατικών όγκων. Αυτά τα ευρήματα υποδηλώνουν ότι Honokiol μπορεί να αναστέλλει την αγγειογένεση των ενδοθηλιακών κυττάρων και τη μετάσταση των καρκινικών κυττάρων, η οποία μπορεί να είναι μέσω ενός SHP-1-επαγόμενη STAT-3 κάτω ρύθμιση οδό.

Προηγούμενες μελέτες έχουν προτείνει ένα σημαντικό ρόλο για ER στρες σε ο μοριακός μηχανισμός της αγγειογένεσης και της ανάπτυξης των καρκινικών κυττάρων [16], [20], [21]. Koyama και συνεργάτες πρότειναν επίσης ότι ER στρες που προκαλείται από διαταραχή του ασβεστίου μπορεί να εμπλέκεται στην επαγωγή της συσσώρευσης αμυλοειδούς β και έκφραση αγγειογόνο παράγοντα στο επιθήλιο του αμφιβληστροειδούς χρωστική [34]. Μια πρόσφατη μελέτη έχει δείξει ότι ER στρες-ρυθμιζόμενη σηματοδότηση IRE-1α κατέχει μια βασική λειτουργία στην ανάπτυξη του πλακούντα και εμβρυϊκών βιωσιμότητα, τονίζοντας τη σχέση του ER στρες, και της αγγειογένεσης στον πλακούντα κατά τη διάρκεια της εγκυμοσύνης [35]. Kim και οι συνεργάτες του έχουν δείξει ότι τόσο SHP-1 και SHP-2 είναι ενδογενή υποστρώματα για την καλπαΐνη, η οποία εμπλέκεται στο πλαίσιο της

Entamoeba histolytica

επαγόμενη θάνατος κυττάρου-ξενιστή [36]. Αξίζει να σημειωθεί ότι, καλπαΐνες γίνει ενεργό όταν το ενδοκυτταρικό ασβέστιο ([Ca

2 +] i) η συγκέντρωση είναι αυξημένη?