Abstract

Genomic ενίσχυση του 19q12 εμφανίζεται σε διάφορους τύπους καρκίνου, συμπεριλαμβανομένου του καρκίνου των ωοθηκών όπου συνδέεται με πρωτοπαθή αποτυχία της θεραπείας. Εμείς εξασθενημένο συστηματικά έκφραση γονιδίων εντός του ελάχιστα ορίζεται 19q12 περιοχή σε κυτταρικές γραμμές ωοθηκών χρησιμοποιώντας μικρής παρεμβαλλόμενα RNA (siRNA) για την ταυτοποίηση ογκογονίδιο (-ων) οδηγού εντός του amplicon. Νοκ ντάουν του

CCNE1

οδήγησε σε G1 /σύλληψη S φάση, μειωμένη βιωσιμότητα των κυττάρων και την απόπτωση μόνο σε κύτταρα ενίσχυση που μεταφέρουν. Παρά το γεγονός ότι

CCNE1

νοκ ντάουν αυξημένη αντίσταση σισπλατίνη σε βραχυπρόθεσμες αναλύσεις, κλωνογόνο επιβίωση ανεστάλη μετά τη θεραπεία. Κέρδος 20q11 ήταν σε μεγάλο βαθμό με 19q12 ενίσχυση και κάλυψαν περιοχή 2,5 Mb συμπεριλαμβανομένων των

TPX2

, ένα κεντρομερική πρωτεΐνης που απαιτείται για την μιτωτική άτρακτο λειτουργία. Έκφραση του

TPX2

είχε υψηλή συσχέτιση με ενίσχυση γονιδίου και με το

CCNE1

έκφραση σε πρωτογενείς όγκους. siRNA αναστολή

TPX2

μειωμένη κυτταρική βιωσιμότητα αλλά αυτό το αποτέλεσμα δεν ήταν αμπλικονίου-εξαρτώμενη. Τα ευρήματα αυτά δείχνουν ότι

CCNE1

είναι ένας βασικός οδηγός στο 19q12 amplicon που απαιτούνται για την επιβίωση και ικανότητας κλωνισμού σε κύτταρα με ενίσχυση τόπο. Συν-ενίσχυση σε 19q12 και 20q11 υποδηλώνει την παρουσία ενός συνεταιρισμού μετάλλαξης του δικτύου. Οι παρατηρήσεις αυτές έχουν επιπτώσεις για την εφαρμογή στοχευμένων θεραπειών σε

CCNE1

εξαρτώμενων καρκίνων των ωοθηκών

Παράθεση:. Etemadmoghadam D, Γιώργος J, Cowin PA, Cullinane C, Kansara M, Αυστραλίας καρκίνου των ωοθηκών Ομάδα Μελέτης , et al. (2010) αμπλικονίου-Dependent

CCNE1

έκφρασης είναι ζωτικής σημασίας για Κλωνογόνος Επιβίωση μετά Cisplatin Θεραπεία και συσχετίζεται με 20q11 Gain στον καρκίνο των ωοθηκών. PLoS ONE 5 (11): e15498. doi: 10.1371 /journal.pone.0015498

Επιμέλεια: Nathalie Wong, Κινεζικό Πανεπιστήμιο του Χονγκ Κονγκ, Κίνα

Ελήφθη: 31 Αυγ 2010? Αποδεκτές: 17, Οκτωβρίου 2010? Δημοσιεύθηκε: 12 Νοεμ 2010

Copyright: © 2010 Etemadmoghadam et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτή η μελέτη χρηματοδοτήθηκε από το Εθνικό Ερευνητικό Συμβούλιο Υγείας και Ιατρικής (NHMRC) σχέδιο επιχορήγησης 628.779 (www.nhmrc.gov.au). Η αυστραλιανή ωοθηκών Μελέτης του Καρκίνου υποστηρίζεται από τη Διοίκηση Ιατρικών Ερευνών και Υλικού Στρατού των ΗΠΑ υπό DAMD17-01-1-0729, το Αντικαρκινικό Συμβούλιο Βικτώριας, Queensland Ταμείου Καρκίνου, το Αντικαρκινικό Συμβούλιο Νέας Νότιας Ουαλίας, το Συμβούλιο Καρκίνου της Νότιας Αυστραλίας, το Ίδρυμα Καρκίνου της Δυτικής Αυστραλίας, τα καρκινικά Συμβούλιο Τασμανία και την NHMRC. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

για προχωρημένους στάδιο ορώδες όγκοι αντιπροσωπεύουν την πλειοψηφία των διηθητικού καρκίνου των ωοθηκών και παρά τη γενικά καλή αρχική ανταπόκριση σε κυτταρομειωτική χειρουργική επέμβαση και με βάση την πλατίνα χημειοθεραπεία, οι περισσότερες γυναίκες αντιμετωπίζουν υψηλό κίνδυνο υποτροπής και η κακή μακροπρόθεσμη επιβίωση [1 ]. παράγοντες με βάση την πλατίνα, όπως η σισπλατίνη και η καρβοπλατίνη, είναι τοξικά για τα διαιρούμενα κύτταρα λόγω του σχηματισμού προϊόντων προσθήκης DNA που οδηγούν σε διπλή διάσπαση της έλικας, ενεργοποιώντας το DNA βλάβη διαμεσολαβούμενη αποπτωτικών σημάτων [2]. Ανταπόκριση στη χημειοθεραπεία, ωστόσο, είναι δύσκολο να προβλεφθούν και δεν υπάρχουν προγνωστικά βιοδεικτών για ορώδες καρκίνους των ωοθηκών σε κλινική χρήση. Έχουμε χαρτογραφήθηκαν στο παρελθόν μια περιοχή 19q12 ενίσχυσης που συνδέεται με ορώδες όγκους των ωοθηκών ανθεκτικές στη θεραπεία εκτελώντας ένα γονιδίωμα-ευρεία έρευνα της αλλαγής του αριθμού αντιγράφων [3]. Αυτά τα ευρήματα ήταν συνεπή με προηγούμενες αναφορές της ενισχύσεως που σχετίζονται με την κακή συνολική επιβίωση [4], [5]. Ομοίως, υποτροπιάζοντα ενίσχυση του 19q12 έχει αναφερθεί σε μία ποικιλία καρκίνων συμπεριλαμβανομένου οισοφαγικού [6], γαστρικό [7], του πνεύμονα [8] και του ενδομητρίου όγκων [9].

Η ενίσχυση 19q12 είναι ένα υψηλού επιπέδου εστιακή ενίσχυση που στοχεύει σε ένα σύμπλεγμα από μόνο διάφορα γονίδια στο χρωμόσωμα 19.

CCNE1

(Κυκλίνη Ε) έχει προηγουμένως προταθεί ως ο στόχος της ενίσχυσης στον καρκίνο [4] ωοθηκών, [10], [11], ωστόσο μια συστηματική ανάλυση των γνωστών γονιδίων εντός της αμπλικόνιο δεν έχει εκτελεστεί. Επιπλέον, ενώ

CCNE1

ενίσχυση πιθανό παρέχει ένα ογκογόνο ερέθισμα μέσω της ενεργοποίησης του κυτταρικού κύκλου, δεν είναι προφανές πώς μπορεί να συμβάλει στην πρωτογενή αντίσταση χημειοθεραπεία. Για παράδειγμα, η υπερέκφραση του

CCNE1 in vitro

καθιστά ωοθηκών καρκινικά κύτταρα πιο ευαίσθητα σε παράγοντες πλατίνας, προφανώς λόγω της αυξημένης πολλαπλασιασμό [12]. Είναι πιθανό ότι η βιολογική συνέπεια της 19q12 ενίσχυσης δεν περιορίζεται σε υπερέκφραση του

CCNE1

, και ότι άλλα γονίδια στην amplicon συμβάλλουν στην ανάπτυξη ή την εξέλιξη του όγκου. Επιπλέον, άλλες συνυπάρχουσες μεταλλάξεων γεγονότα σε άλλα μέρη του γονιδιώματος του καρκίνου μπορεί να συνεργάζεται ή να ενισχύσουν την ογκογόνο δράση του

CCNE1

υπερ-έκφραση.

Πραγματοποιήσαμε μια siRNA νοκ ντάουν οθόνη όλων των σχολιασμένη γονιδίων εντός και αμέσως πλευρίζουν το 19q12 amplicon σε καρκινικές κυτταρικές σειρές των ωοθηκών με ή χωρίς περιφερειακή ενίσχυση. Βρήκαμε

CCNE1

να είναι ο μόνος στόχος γονιδίου εντός του amplicon που μείωσε την κυτταρική βιωσιμότητα στο αμπλικόνιο που περιέχει κυτταρική γραμμή OVCAR-3, μετά siRNA knockdown.

CCNE1

που προκαλείται διακοπή του κυτταρικού κύκλου και της απόπτωσης, ενώ αλλοιώνοντας επίσης κλωνογονική επιβίωση μετά τη θεραπεία με σισπλατίνη, παρά την αύξηση των

in vitro

αντίσταση στο φάρμακο σε μια δοκιμασία βραχυπρόθεσμης κυτταροτοξικότητα νοκ ντάουν. Σε μια ρύθμιση της νόσου, τα αποτελέσματα αυτά δείχνουν ότι η αποτυχία της θεραπείας με

CCNE1

ενισχύονται οι όγκοι μπορεί να σχετίζονται με την ταχεία ανανέωση του πληθυσμού του όγκου μετά από χημειοθεραπεία και η αντίσταση δεν κυτταρική ναρκωτικών συγκεκριμένα. Βρήκαμε επίσης

TPX2

ενίσχυση και υπερέκφραση να συσχετίζεται σημαντικά με

CCNE1

κατάσταση αριθμό αντιγράφων υποδηλώνοντας την παρουσία ενός συνεταιρισμού μετάλλαξης δικτύου μεταξύ αυτών των γονιδίων.

Αποτελέσματα

Focal ενίσχυση του 19q12 είναι κοινά σε διάφορους τύπους όγκων

Σας ζητείται πρώτα να συγκριθεί η ελάχιστη περιοχή των χρωμοσωμικών κέρδος σε 19q12 σε πολλούς τύπους όγκων. Έχουμε λάβει τα δεδομένα από το SNP με βάση μελέτες αριθμό αντιγράφων υψηλής ανάλυσης, συμπεριλαμβανομένων 15 τύπους όγκων [9], [13] για τη σύγκριση με τα ευρήματά μας [3] (Εικόνα 1Α). Ελάχιστη στοχευμένες περιοχές της ενίσχυσης καθορίστηκαν από GISTIC, ένα εργαλείο ανάλυσης που αξιολογεί τη στατιστική σημασία του αντιγράφου γεγονότα αριθμό ανάλογα με τη συχνότητα και το πλάτος [14]. Σημαντική ενίσχυση της 19q12 ήταν παρόν σε ένα τρίτο των τύπων καρκίνου που αναλύθηκαν. Από τους τύπους όγκων με 19q12 ενίσχυση, περίπου 25% των μεμονωμένων δειγμάτων έδειξε κέρδος αριθμού αντιγράφων, με εξαίρεση του ενδομητρίου όγκων όπου παρατηρήθηκε υψηλότερη συχνότητα (-45%) [9]. Minimal όρια amplicon βρέθηκαν να στοχεύετε σε μια περιοχή μικρότερη από 2 Mb σε μέγεθος, με κέντρο περίπου κατά 35,0 Mb στο χρωμόσωμα 19. Και στις δύο σύνολα δεδομένων των ωοθηκών των όγκων αναλύθηκαν [3], [13] η ελάχιστη χαρτογραφηθεί περιοχή του κέρδους ενσωματωθεί η ίδια πέντε γονίδια (

POP4

,

PLEKHF1

,

C19orf12, CCNE1 και C19orf2

), με παρόμοιες επικαλύψεις περιοχές ανιχνεύονται σε ενδομητρίου και του μαστού όγκους. Σε αντίθεση, η ελάχιστη περιοχή χαρτογραφήθηκε σε μη-μικρών όγκων του πνεύμονα ενσωματωθεί μόνο

CCNE1

ενώ μια ευρεία περιοχή χαρτογραφήθηκε σε οισοφάγου όγκους (~9.5 Mb), που εκτείνονται σε 110 σχολιασμένη γονίδια. Αντιγραφή αλλαγή αριθμό του 19q12 locus έδειξε βαθμό ειδικότητας όγκου, από το ότι η ενίσχυση δεν παρατηρήθηκε σε 10 άλλους τύπους όγκων για τους οποίους ουσιαστική υπήρχαν διαθέσιμα στοιχεία, συμπεριλαμβανομένων των μικρών κυττάρων του πνεύμονα, ηπατοκυτταρικό, του παχέος εντέρου και του καρκίνου του προστάτη (δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Σημειώνουμε επίσης ότι η ενίσχυση της 19q12 έχει αναγνωριστεί από cDNA array-CGH ανάλυση των γαστρικών όγκων [15], [16], ωστόσο, αυτός ο τύπος όγκων δεν συμπεριλήφθηκε ως ανάλυσή μας περιορίστηκε σε δεδομένα αριθμό αντιγράφων SNP υψηλής ανάλυσης.

(Α) περιοχές Peak της ενίσχυσης μεταξύ 30-46 Mb στο χρωμόσωμα 19

1non-μικροκυτταρικού καρκίνου [8], [13], [40], [41], [42]?

2ovarian [3],

3 [13]?

4endometrial [9]?

5breast [13], [43], [44]? και

6esophageal όγκων [42]. Συχνότητα εμφάνισης και γονίδια που υπάρχουν εντός των συνόρων κορυφή υποδεικνύεται. (Β) Affymetrix SNP 6.0 χαρτογράφηση αριθμού αντιγράφων μικροσυστοιχιών του χρωμοσώματος 19 σε κυτταρικές γραμμές όγκου ωοθήκης και (C) μεταξύ 34-36 Mb για κυτταρικές γραμμές SK-OV-3 OVCAR-3 και. αριθμός αντιγράφων που παρουσιάζεται είναι ο μέσος όρος κινείται παράθυρο των 20 δεικτών αντιστοιχίζονται με τα ανθρώπινα Μαρτίου 2006 (hg18) συναρμολόγησης γονιδιώματος (πηγή: Sanger Καρκίνος Γονιδιώματος Αρχείο Έργου). (Δ) Η γονιδιακή έκφραση προσδιορίστηκε με qPCR σε OVCAR-3 κύτταρα σε σχέση με SK-OV-3.

Η

Για τον εντοπισμό κυτταρικών σειρών που ήταν αντιπροσωπευτικά των πρωτοπαθών όγκων για λειτουργικές μελέτες αναλύσαμε αντίγραφο SNP υψηλής ανάλυσης αριθμός δεδομένων για 22 με καρκίνο των ωοθηκών κυτταρικές σειρές στο χρωμόσωμα 19q12 (Sanger Cancer Genome Αρχείο Έργου) και εντοπίστηκαν επτά κυτταρικές σειρές (OVCAR-3, OVCAR-4, Kuramochi, RMG-Ι, Caov-4, ΕΦΟ-21, OVCAR-8) ότι είχαν επικαλυπτόμενες ενίσχυσης σε 19q12 (Εικόνα 1Β και το Σχήμα S1). Από τις επτά κυτταρικές σειρές, OVCAR-3 περιείχε μια εστιακή, ενίσχυση υψηλού επιπέδου που καλύτερα ανακεφαλαιώνει τα δεδομένα από πρωτογενείς όγκους των ωοθηκών (Εικόνα 1 C). Ποσοτική-PCR (qPCR) έδειξε ότι οι πέντε γονίδια εντός της περιοχής της ενίσχυσης υψηλού επιπέδου σε OVCAR-3 (

POP4

,

PLEKHF1

,

C19orf12

,

CCNE1 και C19orf2

), αλλά όχι συνοδευτικά γονίδια (

UQCRFS1

και

ZNF536

), ήταν πάνω-εκφράζεται σε σχέση με την κυτταρική γραμμή ελέγχου SK-OV-3 λείπει 19q12 ενίσχυση ( Σχήμα 1 D). Από τα πέντε γονίδια,

PLEKHF1

και

CCNE1

έδειξε την υψηλότερη έκφραση. Η 19q12 amplicon μπορεί συνεπώς να χαρτογραφηθούν σε μια περιοχή που εκτείνεται 34,4 έως 35,4 του χρωμοσώματος 19 και που περιλαμβάνει 5 σχολιασμένα γονίδια, καθένα από τα οποία είναι υπερ-εκφρασμένη σε OVCAR-3.

Cells γραμμές με ενίσχυση στο 19q12 είναι ειδικά ευαίσθητοι να

CCNE1

knockdown

σύντομης παρεμβολής RNA (siRNA) χρησιμοποιήθηκαν για να knockdown την έκφραση των γονιδίων σε επτά και δίπλα στο υψηλού επιπέδου 19q12 amplicon σε OVCAR-3 και SK-OV- 3 συν

GAPDH

και μη σίγηση (NS) έλεγχοι. Μία σχηματική του πειραματικού σχεδιασμού που χρησιμοποιείται για τη συνδυασμένη knockdown στρατηγική siRNA και μετέπειτα πρωτόκολλο θεραπείας φάρμακο παρουσιάζεται στην Εικόνα 2Α. επίπεδα μεταγραφής για όλες τις στοχευμένες γονίδια αποτελεσματικά και ειδικά μειωμένη μέχρι και 96 ώρες μετά την επιμόλυνση siRNA, με την εξαίρεση του

ZNF536

, η οποία πλαισιώνεται την περιοχή ενίσχυσης (Σχήμα 2Β). Με ανακρίνει δεδομένα που λαμβάνονται από μια προηγούμενη μελέτη [17] βρήκαμε

ZNF536

έκφραση να είναι χαμηλή ή απούσα σε πρωτογενείς όγκους των ωοθηκών ορώδες, η οποία μπορεί να εξηγήσει μια μη παρατηρήσιμη μείωση στην έκφραση του γονιδίου (δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Η γονιδιακή έκφραση παρακολουθήθηκε επίσης με την παρουσία της cisplatin, στο πλαίσιο της προετοιμασίας για τη λειτουργική πειράματα.

PLEKHF1

,

CCNE1

,

C19orf2

και

ZNF536

ήταν ελαφρώς πάνω ρυθμισμένα με κατεργασία με σισπλατίνη σε μία ή και στις δύο κυτταρικές σειρές, ωστόσο siRNA νοκ ντάουν ήταν ακόμα αποτελεσματική (Σχήμα 2Β).

(Α) Πειραματικά σχηματικό για συνδυασμένη διαμόλυνση siRNA και φαρμακευτική αγωγή. (Β) qPCR heatmap δείχνει log

αναλογία έκφραση 2 γονιδίων σε μη επιμολυσμένα OVCAR-3 (άνω) και κύτταρα SK-OV-3 (κάτω) για κάθε siRNA (στήλες) σε στόχους γονίδιο (σειρές) με ή χωρίς θεραπεία cisplatin 72 ώρες μετά την επιμόλυνση. βιωσιμότητας (C) κυττάρων ρυθμίζεται σύμφωνα με καμία κύτταρα ελέγχου siRNA μετά από επιμόλυνση με κάθε siRNA. Η στατιστική σημαντικότητα (t-test) υπολογίζεται με σύγκριση με μη-σίγηση (NS) siRNA στην ίδια κυτταρική σειρά χρησιμοποιώντας δεδομένα από τρεις ανεξάρτητους προσδιορισμούς MTS διεξάγεται με φρεάτια εις τριπλούν ανά συνθήκη. Μέσες κανονικοποιημένες απορρόφηση στα 490 nm και SEM χαράσσεται (n = 3), ** ρ-τιμή & lt? 0,01. (Δ) Ποσοστό αποπτωτικών κυττάρων εκτιμήθηκε με χρώση TUNEL σε καμία κύτταρα ελέγχου siRNA ή μετά την επιμόλυνση με NS ή

CCNE1

στοχευμένες siRNA. Τα δεδομένα που παρατίθενται από τρία ανεξάρτητα πειράματα με δύο κοιλότητες που αναλύονται ανά συνθήκη. Μέσο ποσοστό των αποπτωτικών κυττάρων και SEM χαράσσεται (n = 3). *** Τιμή p & lt? 0,0001 (Chi τετράγωνο) υπολογίζεται με σύγκριση του συνολικού αριθμού των κυττάρων μεταξύ OVCAR-3 κύτταρα σε επεξεργασία με ένα

CCNE1

siRNA και οποιεσδήποτε άλλες συνθήκες. έκφραση της πρωτεΐνης (Ε) CCNE1 με κηλίδα western για να επιβεβαιώσετε siRNA μεσολάβηση

CCNE1

νοκ ντάουν σε πειραματικό τελικό σημείο. (F) Cell βιωσιμότητα σε επιπλέον κυτταρικές γραμμές μετά από επιμόλυνση με

CCNE1

ή μη αποσιώπηση siRNAs κανονικοποιημένη για κάθε κυτταρική γραμμή χωρίς siRNA πρόσθεσε. Η στατιστική σημαντικότητα (t-test) υπολογίζεται με σύγκριση με NS siRNA στην ίδια κυτταρική γραμμή. Μέσες κανονικοποιημένες απορρόφηση από MTS δοκιμασία και SEM χαράσσεται (n = 3)? * Τιμή p & lt? 0,05, ** p-value & lt?. 0.01

Η

Από τα γονίδια που εξετάστηκαν, μόνο

CCNE1

νοκ ντάουν έδειξαν μια σημαντική μείωση στην βιωσιμότητα των κυττάρων σε OVCAR- 3 (σε περίπου 60% των κυττάρων ελέγχου NS? ρ & lt? 0,01? Σχήμα 2C).

CCNE1

knockdown είχε καμία επίδραση στην SK-OV-3 κύτταρα. Δεδομένου του ρόλου της στην G1 /S μετάβαση, περιμέναμε ότι η εξάντληση των κυκλίνης Ε1 πρωτείνη θα διεγείρει τη σύλληψη G1 (βλέπε παρακάτω) και να οδηγήσει σε αύξηση των αποπτωτικών κυττάρων. TUNEL χρώση των μη επεξεργασμένων κυττάρων ήταν συγκρίσιμη (SK-OV-3, 0,1%? OVCAR-3, 0,2%) (Εικόνα 2D), ενώ

CCNE1

knockdown οδήγησε σε σημαντική αύξηση στην απόπτωση μόνο σε OVCAR-3 (p & lt? 0,0001). Μείωση σε πρωτεΐνες αφθονία επίσης επικυρωθεί και στις δύο κυτταρικές σειρές μετά γονιδίου νοκ ντάουν (Σχήμα 2Ε).

Έχοντας προσδιορίσει συγκεκριμένες ευαισθησία OVCAR-3 στο

CCNE1

νοκ ντάουν, έχουμε ως στόχο να επικυρώσει αυτό το εύρημα στο ανεξάρτητες κυτταρικές σειρές και να καθορίσει αν η παρατηρούμενη επίδραση ήταν προϊόν ενίσχυσης εξαρτάται. Ως εκ τούτου, διεύρυνε την ανάλυση για να συμπεριλάβει επιπλέον τρεις κυτταρικές σειρές με ενίσχυση στο 19q12 (OVCAR-4, Kuramochi και OVCAR-8) και ένα επιπλέον μη ενισχυμένη γραμμή (IGROV-1). Μια στατιστικά σημαντική συσχέτιση μεταξύ του αριθμού αντιγράφου και έκφραση γονιδίων του

CCNE1

βρέθηκε σε όλες τις γραμμές. Ωστόσο, OVCAR-8 δεν δείχνουν αυξημένο

έκφραση CCNE1

σε σχέση με την ενίσχυση του γονιδίου (Σχήμα S2 Α).

CCNE1

έκφρασης και τα επίπεδα πρωτεΐνης της κυκλίνης Ε1 ήταν αποτελεσματικά μειώνεται σε κάθε γραμμή σε σχέση με βασίσει-line έκφραση με siRNA μεσολάβηση knockdown (Σχήμα S2 Β και C). Όπως παρατηρήθηκε σε OVCAR-3,

CCNE1

νοκ ντάουν μειωμένη ειδικά βιωσιμότητας στις πρόσθετες γραμμές με 19q12 ενίσχυση, και μόνο οριακά στη μη ενισχυμένη γραμμή IGROV-1 (Σχήμα 2F). Έτσι καρκινικά κύτταρα των ωοθηκών με ενίσχυση στο 19q12 είναι ειδικά ευαίσθητα στην εξάντληση της κυκλίνης Ε1, σε σύγκριση με μη ενισχυμένη γραμμές.

CCNE1

νοκ ντάουν μειώνει την οξεία ευαισθησία στο σισπλατίνη

Με δεδομένη την ένωση του 19q12 ενίσχυσης με πρωτοπαθή αποτυχία της θεραπείας [3] και την κακή έκβαση [4], [5], επιδιώξαμε να διερευνήσει την επίδραση του γονιδίου νοκ ντάουν στην ευαισθησία των ναρκωτικών. Παρά το γεγονός ότι η ανάλυσή μας είχε εντοπίσει μια συγκεκριμένη εξάρτηση από το

CCNE1

στο ενισχυμένο γραμμές, πρέπει πρώτα να αξιολογηθούν εκ νέου τα επτά γονίδια amplicon που σχετίζονται για την επίπτωση στην απάντηση χημειοθεραπεία σε OVCAR-3 και SK-OV-3 χρησιμοποιώντας ένα 72- δοκιμασία κυτταροτοξικότητας ώρες. Τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε αγωγή σε ελαφρώς πάνω από ένα προκαθορισμένο IC50 (βλέπε Μέθοδοι S1) και η βιωσιμότητα μετρήθηκαν. Νοκ ντάουν των γονιδίων μέσα στο αμπλικόνιο δεν έχει σημαντικό αντίκτυπο στην σισπλατίνη ευαισθησία της κάθε κυτταρικής σειράς. Απροσδόκητα, σισπλατίνη επαγόμενη κυτταροτοξικότητα σε κύτταρα κατεργασμένα OVCAR-3 εξασθένισε με

CCNE1

αναστολής (Σχήμα 3Α). Πραγματοποιήσαμε μια ανάλυση δόσης-απόκρισης για να χαρακτηρίσει περαιτέρω την επίδραση της θεραπείας με σισπλατίνη μετά

CCNE1

νοκ ντάουν. Μια στατιστικά σημαντική μετατόπιση στην καμπύλη δόσης-απόκρισης παρατηρήθηκε σε OVCAR-3 (ρ & lt? 0,05? Εικόνα 3Β), αλλά όχι SK-OV-3 επιδεικνύοντας περαιτέρω την αντίσταση του OVCAR-3 σε σισπλατίνη κατόπιν

CCNE1

αναστολής. Σε συμφωνία με αυτό το εύρημα, η σισπλατίνη δεν είχε καμία επίδραση στην απόκλιση της βιωσιμότητας των κυττάρων σε

CCNE1

knockdown κυττάρων σε σύγκριση με τους ελέγχους siRNA σε δύο από τα τρία επιπλέον 19q12 ενισχύεται γραμμές (Kuramochi και OVCAR-4) (Σχήμα 3C). Σε αντίθεση, η γονιδιακή knockdown ενίσχυσε την επίδραση της σισπλατίνης επί της βιωσιμότητας των κυττάρων στις δύο κυτταρικές σειρές με χαμηλό βασικό

CCNE1

έκφρασης (OVCAR-8 και η 19q12 μη ενισχυμένη γραμμή ελέγχου IGROV-1).

( Α) Η βιωσιμότητα των κυττάρων μετά από επιμόλυνση με ατομική siRNAs και θεραπεία σισπλατίνης ρυθμίζεται σύμφωνα με τα κύτταρα ελέγχου σισπλατίνη αντιμετωπίζονται χωρίς siRNA. δόση σισπλατίνης 3 μΜ ή 6 μΜ χρησιμοποιήθηκε για OVCAR-3 και τα κύτταρα SK-OV-3, αντίστοιχα. Μέσες κανονικοποιημένες απορρόφηση (490 nm) από τρεις ανεξάρτητους προσδιορισμούς MTS (εις τριπλούν φρεάτια ανά συνθήκη) και SEM χαράσσεται (n = 3). δόσης-απόκρισης (Β) με σισπλατίνη μετά την επιμόλυνση με

CCNE1

ή μη φίμωση siRNA σε OVCAR-3 και SK-OV-3 κυτταρικές σειρές. Βέλος δείχνει θεραπευτική δόση του φαρμάκου που χρησιμοποιείται στην αρχική οθόνη? p-value δείχνει τη σημασία της διαφοράς μεταξύ εντοιχισμένη καμπύλες. Μέσες κανονικοποιημένες απορρόφηση δοκιμασία MTS στα κύτταρα χωρίς θεραπεία σισπλατίνη, SEM και τεσσάρων παραμέτρων τοποθετημένο κλίση λόφου χαράσσεται (η = 3 για κάθε συγκέντρωση φαρμάκου). (Δ) Κυτταρική βιωσιμότητα μετά την επιμόλυνση με

CCNE1

ή NS siRNAs και θεραπεία σισπλατίνη κανονικοποιημένη σε σισπλατίνη επεξεργασμένα κύτταρα ελέγχου χωρίς siRNA για κάθε κυτταρική γραμμή. Η στατιστική σημαντικότητα υπολογίστηκε με σύγκριση με NS siRNA, κύτταρα σισπλατίνη τυγχάνουν της ίδιας κυτταρικής γραμμής. Μέσες κανονικοποιημένες απορρόφηση από MTS δοκιμασία και SEM χαράσσεται (n = 3). Βλέπε Πίνακα S4 για δόσεις θεραπεία με σισπλατίνη.

Η

Για να διερευνηθεί η ανθεκτική σισπλατίνη φαινότυπο που παρατηρείται σε OVCAR-3 κύτταρα με

CCNE1

νοκ ντάουν, χρησιμοποιήσαμε κυτταρομετρία ροής για την ανάλυση της διανομής του κυτταρικού κύκλου μετά από σισπλατίνη θεραπεία. θεραπεία σισπλατίνης OVCAR-3 είχε ως αποτέλεσμα μια παρατεταμένη φάση S (Σχήμα 4Α), ενώ SK-OV-3 κύτταρα που συνελήφθησαν κυρίως στη φάση G2 του κυτταρικού κύκλου (Σχήμα 4Β). Συνεπής με την απαίτηση για κυκλίνης Ε1 στο G1 /S μετάβαση [18],

CCNE1

siRNA knockdown επάγεται G1 σύλληψη στην OVCAR-3, πιο εμφανής στην παρουσία της cisplatin (Σχήμα 4Α). Αντίθετα, η κατανομή του κυτταρικού κύκλου των SK-OV-3 ήταν αμετάβλητη από την αναστολή της

CCNE1

έκφρασης με ή χωρίς σισπλατίνη (Σχήμα 4Β). Αυτές οι παρατηρήσεις ήταν συνεπείς στο

CCNE1

ενισχύεται Kuramochi και OVCAR-4 κύτταρα (Σχήμα S3). Μερική σύλληψη G1 παρατηρήθηκε επίσης σε 19q12 μη ενισχυμένη κύτταρα IGROV-1 μετά από

CCNE1

νοκ ντάουν, όμως μόνο σε ανταπόκριση στη θεραπεία με σισπλατίνη. Όπως παρατηρήθηκε στην δοκιμασία βιωσιμότητας, η

CCNE1

ενισχυμένο αλλά OVCAR-8 κύτταρα χαμηλής εκφράζουν συμπεριφέρθηκε ομοίως για τον έλεγχο γραμμών. Ως εκ τούτου, κατέληξε στο συμπέρασμα ότι η εξάρτηση της OVCAR-3, Kuramochi και OVCAR-4 σε υψηλή

CCNE1

έκφρασης οδήγησε σε διακοπή του κυτταρικού κύκλου μετά γονιδίου νοκ ντάουν, συμπεριλαμβανομένης της παρουσίας της σισπλατίνης, πιθανότατα αντιπροσωπεύουν την προφανή αντίσταση σισπλατίνη παρατηρείται σε ποσοτικούς προσδιορισμούς βραχυπρόθεσμης βιωσιμότητας.

(Α) OVCAR-3 κύτταρα και (Β) SK-OV-3 προφίλ του κυτταρικού κύκλου (αριστερά) και αναλογία των κυττάρων σε G 1, S ή G2 φάση ( δεξιά) για ΡΙ βαμμένα κύτταρα αναλύθηκαν με κυτταρομετρία ροής 72 ώρες μετά την επιμόλυνση με

CCNE1

ή NS siRNA με ή χωρίς θεραπεία cisplatin (3 μΜ ή 6 μΜ για OVCAR-3 και SK-OV-3 κύτταρα αντίστοιχα).

η

για να κατανοήσουμε τη μακροπρόθεσμη επίδραση του

CCNE1

εξάντληση στην επιβίωση των κυττάρων μετά από θεραπεία με σισπλατίνη δοκιμάσαμε την κλωνογενοποιήσεως των γραμμών με και χωρίς ενίσχυση του 19q12 τόπου (βλέπε σχηματικό σχήμα 5Α ).

CCNE1

knockdown ριζικά μειωμένη η κλωνογονική ικανότητα του OVCAR-3, αλλά όχι SK-OV-3 με την απουσία του φαρμάκου (Σχήμα 5Β και 5Γ). Σε αντίθεση με αυξημένη αντοχή στη σισπλατίνη σε προσδιορισμούς βραχυπρόθεσμης κυτταροτοξικότητα,

CCNE1

εξασθένηση μειώνονται κλωνογόνο επιβίωση των κυττάρων OVCAR-3 μετά από θεραπεία cisplatin (Σχήμα 5Β). Εμείς δεν εξερευνήσετε το

in vivo

δράση του

CCNE1

νοκ ντάουν στις γραμμές των ωοθηκών όγκου με 19q12 ενίσχυση, καθώς ήμασταν σε θέση να δημιουργήσουν βιώσιμες γραμμές με σταθερή φακοϊό ενσωμάτωση της μικρής φουρκέτα RNA (shRNA) κατευθύνεται προς

CCNE1

(τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται).

(Α) Πειραματικά χρονική πορεία για την δοκιμασία κλωνογονική επιβίωση μετά την επιμόλυνση siRNA και τη θεραπεία cisplatin. Αντιπροσωπευτικά κρυσταλλικό ιώδες χρώση (Β) SK-OV-3 και (C) OVCAR-3 αποικίες (άνω) και μέσο ποσοστό των διακριτών αποικιών που σχηματίστηκαν (κάτω) σε σύγκριση με τα κύτταρα ελέγχου χωρίς siRNA ή θεραπεία σισπλατίνη 1 ώρα (3 μΜ ή 6 μΜ για OVCAR-3 και SK-OV-3 κύτταρα αντίστοιχα). Οι μπάρες σφάλματος δείχνουν SEM (n = 3), ** p-value & lt?. 0.001

Η

CCNE1

ενίσχυσης είναι προγνωστική της κακής έκβασης σε πρωτογενείς όγκους

CCNE1

αριθμός αντιγράφων μετρήθηκε σε 43 πρωτογενείς όγκους των ωοθηκών από ασθενείς με προχωρημένο στάδιο, ορώδες διεισδυτική νόσο. Επιπλέον, συμπεριλήφθηκαν δεδομένα από 52 όγκους από τα προηγούμενα γονιδιωματική ανάλυση μας από πλατίνα αντοχής στον καρκίνο των ωοθηκών [3] και ελήφθησαν ταιριάζουν δεδομένα γονιδιακής έκφρασης για όλα τα δείγματα [17]. Όλοι οι ασθενείς υποβλήθηκαν σε πρωτογενή χειρουργική επέμβαση που ακολουθείται από βάση την πλατίνα χημειοθεραπεία. Οι κλινικές πληροφορίες που χρησιμοποιούνται για τη συσχέτιση

CCNE1

κατάσταση με την επιβίωση είχε πάνω από δύο χρόνια επιπλέον δεδομένα παρακολούθησης συσσωρευμένες ασθενούς (από τον Ιούνιο του 2010) από προηγούμενες μελέτες μας.

Οι ασθενείς κατανεμήθηκαν με βάση

CCNE1

κατάσταση αριθμό αντιγράφων, όπως εκτιμάται από qPCR (βλέπε Υλικά και Μέθοδοι). Καμία διαφορά δεν παρατηρήθηκε μεταξύ των κλινικών χαρακτηριστικών της κάθε ομάδας, εκτός από την ηλικία, με τους νεότερους ασθενείς υπερεκπροσωπούνται στο

CCNE1

μη ενισχυμένη ομάδα (Πίνακας 1 και Σχήμα 6Α).

CCNE1

γονιδιακής έκφρασης έδειξε μια ισχυρή συσχέτιση με τον αριθμό αντιγράφων (Εικόνα 6Β) και τα δύο συσχετίζονται με ελεύθερη προόδου επιβίωση (PFS) (Σχήμα 6C & amp? D).

CCNE1

αριθμού αντιγράφων, αλλά δεν γονιδιακής έκφρασης, συνδέθηκε επίσης με τη συνολική επιβίωση (OS) (Σχήμα 6Ε & amp? F). Η πιο σημαντική συσχέτιση που παρατηρήθηκε ήταν βαθμό

CCNE1

κέρδος και PFS (Σχήμα 6C), έτσι ώστε όλες οι υποθέσεις με ενίσχυση υψηλού επιπέδου έδειξε προοδευτική ασθένεια μέσα σε περίπου δώδεκα μήνες από τη διάγνωση (μέση PFS 10,7 μήνες? Πίνακα 1 ).

(Α) ασθενής ηλικιακή κατανομή στρωματοποιημένη από

CCNE1

καθεστώς ενίσχυσης. p-value Kruskal-Wallis ανέφερε, μπάρες δείχνουν μέση τιμή και SEM. (Β) Συσχέτιση μεταξύ

CCNE1

αριθμό αντιγράφων από το σήμα qPCR και γονιδιακής έκφρασης με μικροσυστοιχίες. (Γ) Η ανάλυση Kaplan-Meier του

CCNE1

μη ενισχυμένη (n = 68), που αποκτήθηκε (n = 21) και ενισχύθηκαν (n = 6) ασθενείς με καρκίνο των ωοθηκών και (Δ)

CCNE1

χαμηλής (n = 31), μέσης (n = 28) και υψηλό (n = 36) που εκφράζουν δείγματα για επιβίωση χωρίς εξέλιξη και (Ε & amp? F) συνολική επιβίωση. p-τιμές δοκιμασία log-rank αναφερθεί. Διαστρωμάτωση από

CCNE1

αντιγράψετε κατάσταση αριθμό ή έκφραση περιγράφεται στα Υλικά και Μέθοδοι.

Η

Η ενίσχυση του 19q12 συσχετίζεται με την αύξηση στο 20q11

Έχοντας εντοπίσει

CCNE1

ως μια κρίσιμη οδηγός εντός του 19q12 αμπλικόνιο στον καρκίνο των ωοθηκών, εμείς αιτιολογημένη ότι άλλες μεταλλάξεις αλλού στο γονιδίωμα μπορεί να αλληλεπιδράσει με κυκλίνη Ε1 ή να συνδέονται με ανθεκτικότητα στα φάρμακα. Για παράδειγμα, οι μεταλλάξεις που ενισχύουν τη δράση της ή να επιτρέπουν στους όγκους να ανεχθεί

CCNE1

υπερ-έκφραση μπορεί να συνυπάρχουν με 19q12 κέρδος. Πήραμε δύο SNP με βάση τα δεδομένα του αριθμού αντιγράφων και την έκφραση του γονιδίου σε 157 υψηλής ποιότητας ορώδες επιθετικοί όγκοι από τον καρκίνο Γονιδιώματος Atlas Έργου (TCGA) για ανάλυση. Πρώτον, εξετάσαμε γονιδιακή έκφραση των γονιδίων των οποίων τα προϊόντα πρωτεΐνης απαιτούνται για την επεξεργασία των κυκλίνης Ε1 προς δραστικές μορφές χαμηλού μοριακού βάρους (

ELA2

και

CAPN2

) [19], [20] ή του υποβάθμισης (

FBXW7

) [18]. Ωστόσο, καμία στατιστικά σημαντική θετική συσχέτιση μεταξύ της έκφρασης υποψηφίου γονιδίου και

παρατηρήθηκε CCNE1

κατάσταση (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Στη συνέχεια συσχετίστηκαν 19q12 κέρδος με όλα τα άλλα κέρδη και ζημίες κατά 0,1 Mb τμήματα του γονιδιώματος (βλέπε Μέθοδοι S1). Οι τρεις πρώτες συσχετίζονται περιοχές της αλλαγής του αριθμού αντιγράφων ήταν στο 20q11, 1ρ36 και 6q27 (Σχήμα 7Α). Η πιο σημαντική σχετιζόμενη αύξηση εντοπίστηκε σε μία περιοχή 2.5MB στο χρωμόσωμα 20 (Σχήμα 7Β) και έχει επικυρωθεί σε ένα ξεχωριστό αμερόληπτη ανάλυση του γονιδιώματος-ευρεία συσχετίσεις του κέρδους και της απώλειας σε όγκους των ωοθηκών [21].

(Α) οικόπεδο Circos δείχνει περιοχές της αλλαγής του αριθμού αντιγράφων συσχετίστηκε σημαντικά με

ενίσχυση CCNE1

(τιμή p & lt? 1 × 10

-5) (β) σημασία των αριθμό αντιγράφων συσχέτιση με

CCNE1

ενίσχυση όλη χρωμοσώματος 20. όριο σημασία και χρησιμοποιείται για να καθορίσει συσχέτιση όρια κορυφή υποδεικνύεται με διακεκομμένη γραμμή. (C)

TPX2

συσχέτιση έκφρασης με αριθμό τόπου αντιγραφή και

CCNE1

έκφραση (πηγή: TCGA). (D) Συσχέτιση του

CCNE1

και

TPX2

γονιδιακής έκφρασης σε ένα ανεξάρτητο σύνολο δεδομένων (Tothill et al., 2009).

Η

Για να περιορίσετε γονίδιο υποψηφίους εντός των τριών περιοχών που είναι πιθανότερο να αλληλεπιδράσουν με το

CCNE1

, είμαστε δίπλα συσχετίζεται την έκφραση των γονιδίων σε κάθε περιφέρεια με

CCNE1

έκφραση (Πίνακας 2). Έκφραση του

TPX2

ήταν πιο σημαντική συσχέτιση με

CCNE1

έκφρασης, και επίσης συσχετίζεται με τη δική καθεστώς ενίσχυσης του (Σχήμα 7C). Η σχέση μεταξύ του

CCNE1

και

TPX2

γονιδιακής έκφρασης περαιτέρω επικυρωθεί σε ένα δεύτερο ανεξάρτητο σύνολο δεδομένων (Σχήμα 7D). Η ισχυρή συσχέτιση μεταξύ

TPX2

και

CCNE1

ενίσχυση και έκφραση ενδιαφέρουσα, δεδομένου ότι TPX2 είναι μια κεντρομερική πρωτεΐνης που απαιτείται για την μιτωτική άτρακτο λειτουργία κατά την κυτταρική διαίρεση [22].

Η

20q11 ενίσχυση καθιστά τα κύτταρα ανθεκτικά στην TPX2 νοκ ντάουν

για να ελέγξετε αν υπήρχε μια λειτουργική εξάρτηση από το

TPX2

σε κυτταρικές σειρές με ενίσχυση του 20q11 τόπου και κατά πόσο αλληλεπιδρά με το

CCNE1

, αξιολογήσαμε

TPX2

κατάσταση στις γραμμές που χρησιμοποιούνται για πειράματα νοκ ντάουν μας.

TPX2

ενισχύθηκε (Σχήμα 8Α) και υπερ-εκφράζεται (Σχήμα 8Β) και στις τρεις

CCNE1

ενισχύεται και υπερεκφράζουν κυτταρικές σειρές (OVCAR-3, OVCAR-4 και Kuramochi) σε σύγκριση με τη γραμμή ελέγχου, SK-OV-3. Επιπλέον, προσδιορίσαμε περαιτέρω OAW-28 ως έχουσες υψηλού επιπέδου 20q11 ενίσχυση (Σχήμα 8Α, τα δεδομένα από Sanger Cancer Αρχείο πρόγραμμα του γονιδιώματος) και το υψηλότερο επίπεδο της γονιδιακής έκφρασης σε όλες τις κυτταρικές γραμμές δοκιμάστηκαν (Σχήμα 8Β).

(Α) Affymetrix SNP 6.0 χαρτογράφηση αριθμού αντιγράφων μικροσυστοιχιών του χρωμοσώματος 20 σε κυτταρικές γραμμές όγκου ωοθήκης που δείχνει την τοποθεσία του

TPX2

. (Β) Συσχέτιση μεταξύ

TPX2

αντιγράψετε τον αριθμό και την έκφραση του γονιδίου από qPCR σε κυτταρικές σειρές. βιωσιμότητας (C) Cell απεικονίζεται ως κανονικοποιημένη απορρόφηση MTS (490 nm) από τρεις ανεξάρτητους προσδιορισμούς για κύτταρα κατεργασμένα χωρίς siRNA σε πειράματα διπλής knockdown siRNA. Μέσες κανονικοποιημένες απορρόφηση από MTS δοκιμασία και SEM χαράσσεται (n = 3). (Ε) την έκφραση της πρωτεΐνης TPX2 με κηλίδα western για να επιβεβαιώσετε siRNA μεσολάβηση νοκ ντάουν σε πειραματικό τελικό σημείο για κυτταρικές γραμμές και CCNE1 σε OAW-28 κύτταρα.

Η

Σε αντίθεση με τη στενή σχέση μεταξύ του

CCNE1

ενίσχυση και την κυτταρική ευαισθησία στο γονίδιο νοκ ντάουν, μια αντίστροφη σχέση παρατηρήθηκε μεταξύ

TPX2

αντιγράψετε τον αριθμό και τα αποτελέσματα των

TPX2

siRNA (Σχήμα 8C). Για παράδειγμα, SK-OV-3 κύτταρα με χαμηλή έκφραση του γονιδίου (Σχήμα 8Β) και ελάχιστη ανιχνεύσιμη πρωτεΐνη TPX2 (Σχήμα 8D), ήταν ιδιαίτερα ευαίσθητα σε γονίδιο knockdown, ενώ OAW-28 κύτταρα ήταν ουσιαστικά ανθεκτικά. RT-PCR (Σχήμα S4) και στύπωμα Western (Σχήμα 8D) αναλύσεις κατέδειξαν αποτελεσματική knockdown του

TPX2

, ωστόσο πρωτεΐνη ήταν ακόμα ανιχνεύσιμη σε μερικές κυτταρικές σειρές που είχαν αρχικά υψηλά επίπεδα πρωτεΐνης TPX2. Παρατηρήσαμε επίσης ότι η εξουδετέρωση του

CCNE1

οδήγησε σε μειωμένη

TPX2

γονιδιακής έκφρασης σε 19q12 ενισχύεται γραμμές (Σχήμα S4 Α) υποδηλώνουν ότι

TPX2

έκφραση επηρεάζεται κατάντη της κυκλίνης Ε1 .

με δεδομένη την αντιστοιχία μεταξύ της

CCNE1

και

TPX2

ενίσχυσης, εξετάσαμε επίσης αν ταυτόχρονη εξουδετέρωση των δύο γονιδίων θα μειωθεί περαιτέρω βιωσιμότητα σε κυτταρικές σειρές που περιέχουν και τις δύο ενισχύσεις (Σχήμα 8C ). Μετά αφήσαμε για μια ανταγωνιστική επίδραση του συνδυασμού siRNAs (βλέπε Μέθοδοι) κανένας προφανής αλληλεπίδραση παρατηρήθηκε με ταυτόχρονη νοκ ντάουν του

TPX2

και

CCNE1

. Νοκ ντάουν του

CCNE1

είχε ελάχιστη επίδραση στην OAW-28 βιωσιμότητα των κυττάρων, παρά την αποτελεσματική μείωση της πρωτεΐνης σε διπλά πειράματα νοκ ντάουν (Σχήμα 8D). Το εύρημα αυτό είναι σύμφωνο με την αρχική μας αποτελέσματα, όπως OAW-28 κύτταρα δεν έχουν 19q12 ενίσχυση (βλέπε Εικόνα S1 για OAW-28 τον αριθμό αντιγράφων σε αυτό τον τόπο).

Συζήτηση

Εμείς εκτελείται η πρώτη συστηματική siRNA νοκ ντάουν όλων των γονιδίων εντός του ελάχιστα ορίζεται 19q12 αμπλικόνιο στην παρουσίαση του καρκίνου των ωοθηκών που

CCNE1

είναι το κλειδί ογκογόνο στόχο. Δεδομένης γνωστή ρόλοι της κυκλίνης Ε1 στον καρκίνο, συμπεριλαμβανομένης της de-ρύθμιση του κυτταρικού κύκλου και την προώθηση γενωμική αστάθεια, ήταν η πιθανή οδηγός του 19q12 τόπο, ωστόσο άλλα γονίδια δεν είχαν αποκλειστεί. Για παράδειγμα,

C19orf2

, η οποία είναι ακριβώς δίπλα στο

CCNE1

, έχει πρόσφατα σχολιασμένες για την κωδικοποίηση URI, ένα αντισυμβατικό πρωτεΐνη prefoldin. Μελέτες του

C. elegans

URI ομόλογο δείχνουν μια συμμετοχή στην αναδιάταξη της χρωματίνης, την πρόληψη ή /και την επισκευή ενδογενή γενοτοξική βλάβη του DNA και τη διατήρηση της ακεραιότητας του γονιδιώματος [23]. Πιο πρόσφατα, URI έχει ταυτοποιηθεί ως αναστολέας κλειδί 1γ πρωτεΐνης φωσφατάση (PP1γ) και συμμετέχει στη ρύθμιση του μονοπατιού επιβίωσης mTOR /S6K1 βασίζεται σε θρεπτικά συστατικά και την ανάπτυξη διαθεσιμότητα παράγοντα [24]. Παρά αυτές τις ενδιαφέρουσες βιολογικές ενώσεις, βρήκαμε καμία απόδειξη URI ως οδηγός του 19q12 τόπου.

Μείωση της βιωσιμότητας των κυττάρων μετά από

CCNE1

νοκ ντάουν ήταν ειδική σε κυτταρικές σειρές με 19q12 ενίσχυση, με περιορισμένη ή καμία επίδραση σε μη-ενισχυμένο γραμμές, υποδεικνύοντας μια «εθισμό» [25] για να

CCNE1

απορρύθμιση. Τα ευρήματά μας επικυρώνει μια πρόσφατη έκθεση που δείχνει την ενίσχυση ειδικών ευαισθησία στο

CCNE1

εξασθένηση σε OVCAR-3 και IOSE-29 κύτταρα [26]. Μη ενισχυμένη γραμμές φάνηκε να παρακάμψει siRNA μεσολαβεί G1 /S σημείο ελέγχου σύλληψη και την απόπτωση, αντανακλώντας ενδεχομένως

CCNE1

ανεξάρτητους μηχανισμούς κυτταρικού κύκλου de-ρύθμιση και διακριτές ογκογόνων διαδικασιών. Είναι ενδιαφέρον ότι, η αυξημένη έκφραση του CCNE1 έχει πρόσφατα δειχθεί σε ορώδες καρκίνωμα των σαλπίγγων ενδοεπιθηλιακή (STIC), ένα προτεινόμενο πρόδρομο για υψηλής ποιότητας ορώδες καρκίνωμα [27]. Το εύρημα αυτό ενισχύει τη σημασία του

CCNE1

de-ρύθμιση στον καρκίνο των ωοθηκών και δείχνει ότι είναι ένα πρώιμο απαίτηση στην εξέλιξη του όγκου.

19q12 ενίσχυσης συνδέεται στενά με πρωτοπαθή αποτυχία της θεραπείας σε όγκους των ωοθηκών [3 ] και συνεπώς είναι τόσο ένας πιθανός προγνωστικός δείκτης και θεραπευτικός στόχος. Έχοντας εντοπίσει

CCNE1

όπως ο οδηγός του 19q12 ενίσχυσης επιδιώξαμε να καταλάβουμε πώς συμβάλλει στην πρωτοβάθμια αποτυχία της θεραπείας. Σε προσδιορισμούς βραχυπρόθεσμης κυτταροτοξικότητα, υπερ-έκφραση της κυκλίνης Ε1 αυξάνει την ευαισθησία στη σισπλατίνη [12].