Αφηρημένο

Τα ποικίλα γονίδια NER και το κάπνισμα είναι δύο σημαντικοί παράγοντες κινδύνου καρκίνου της ουροδόχου κύστης, αλλά ο μηχανισμός της πρωτεΐνης NER και το κάπνισμα στην εξέλιξη του καρκίνου, ωστόσο, παραμένει ασαφής. Στην έκθεση αυτή, συγκρίναμε τις εκφράσεις των γονιδίων NER σε 79 ιστούς καρκίνου της ουροδόχου κύστης, με ή χωρίς υποτροπή με πραγματικού χρόνου PCR και στη συνέχεια ανέλυσε τα ποικίλα γονίδια NER από ανοσοχημείας σε δείγματα καρκινικού ιστού 219 της ουροδόχου κύστης. Με βάση τα κλινικά δεδομένα, αναλύσαμε την κλινική αξία του μεταβάλλεται γονιδίων NER και το κάπνισμα σε 219 καρκίνους της ουροδόχου κύστης με τη μέθοδο Kaplan-Meier και αναλογικών κινδύνων κατά Cox παλινδρόμησης. Βρήκαμε τις εκφράσεις του γονιδίου NER XPF και XPC ήταν σημαντικά χαμηλότερα σε ιστούς του καρκίνου της ουροδόχου κύστης με μια υποτροπή σε σύγκριση με εκείνους χωρίς υποτροπή σε επίπεδο mRNA. Επίσης, οι ασθενείς με την XPF και XPC ελάττωμα είχε μια στατιστικά σημαντική χαμηλότερη διάμεση ελεύθερη υποτροπής χρόνο επιβίωσης από εκείνους που δεν το XPF και XPC ελάττωμα, και το κάπνισμα μπορεί να κάνει αυτή η διαφορά πιο αξιοσημείωτη. Τα αποτελέσματά μας δείχνουν ότι XPF και η έκφραση XPC μπορεί να είναι ένας πιθανός προγνωστικός παράγοντας για τον καρκίνο της ουροδόχου κύστης, και το κάπνισμα μπορεί όχι μόνο να επηρεάσει την υποτροπή του καρκίνου της ουροδόχου κύστης ως μόνο παράγοντα, αλλά επίσης να επιδεινώσει τα αποτελέσματα της XPF ελαττώματος και XPC ελάττωμα.

Παράθεση: Qiu J, Wang Χ, Meng Χ, Zheng Υ, Li G, Ma J, et al. (2014) Τα εξασθενημένα NER Εκφράσεις των XPF και XPC συνδέονται με το κάπνισμα εμπλέκονται στην υποτροπή του καρκίνου της ουροδόχου κύστης. PLoS ONE 9 (12): e115224. doi: 10.1371 /journal.pone.0115224

Επιμέλεια: Xinbin Chen, του Πανεπιστημίου της Καλιφόρνιας στο Davis, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 23 Απριλίου του 2014? Αποδεκτές: 20 Νοέμβρη 2014? Δημοσιεύθηκε: 23 του Δεκ, 2014

Copyright: © 2014 Qiu et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα:. Η συγγραφείς επιβεβαιώνουν ότι όλα τα δεδομένα που διέπουν τα ευρήματα είναι πλήρως διαθέσιμα χωρίς περιορισμούς. Όλα τα σχετικά δεδομένα είναι εντός του χαρτιού

Χρηματοδότηση:. Η μελέτη αυτή υποστηρίχθηκε από το National Science & amp? Πρόγραμμα τεχνολογίας πυλώνα της Κίνας (Αρ 2011A322). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

οι όγκοι της ουροδόχου κύστης είναι η δεύτερη πιο συχνές μορφές καρκίνου στον ουρολογικές τομέα. καρκίνος της ουροδόχου κύστης είναι η τέταρτη πιο κοινή μορφή καρκίνου στους άνδρες και η ένατη πιο κοινή στις γυναίκες [1]. Από τους ασθενείς, περίπου το 50% θα εμφανίσουν υποτροπή εντός 2 ετών μετά την αρχική διάγνωση, και 16-25% θα πρέπει να επαναληφθεί μετά από ενδοσκοπική εκτομή [2]. Ως εκ τούτου, η συχνή επανεμφάνιση του καρκίνου της ουροδόχου κύστης είναι ένα σημαντικό ιατρικό πρόβλημα.

Το κάπνισμα, ως κυρίαρχος παράγοντας κινδύνου για καρκίνο της ουροδόχου κύστης, είναι υπεύθυνη για περίπου το ήμισυ των περιπτώσεων στους άνδρες και το ένα τρίτο των γυναικών [3], [4]. Ως καρκινογόνες σχετίζονται με το κάπνισμα αποτελούν συχνά ογκώδη προϊόντα προσθήκης DNA, βάση βλάβες, διαλείμματα μονή έλικα και διπλής σπασίματα [5]. Επιπλέον, λόγω της φύσης της κύστης ως ένα σημαντικό άκυρα όργανο, ουροφόρων κύτταρα εκτίθενται συνεχώς σε πολλούς προκαλούν βλάβη στο DNA αντιδραστήρια που περιέχονται στα ούρα. Έτσι, την επιδιόρθωση του DNA παίζει ένα σημαντικό ρόλο στην πρόληψη δηλητηριωδών βλάβη του DNA που προκαλείται από επιδράσεις όπως συσσώρευση μετάλλαξη και εμφάνιση όγκου [6].

Υπάρχουν διάφορες οδούς επιδιόρθωσης του DNA που υπάρχουν σε ανθρώπινα κύτταρα και το κάθε μονοπάτι αφαιρεί αποτελεσματικά ειδικότερα τύποι βλάβης του DNA [7]. Με βάση το είδος της βλάβης του DNA, οι οδοί επιδιόρθωσης του DNA μπορούν να ταξινομηθούν σε νουκλεοτίδιο επιδιόρθωση εκτομής (NER), επιδιόρθωση εκτομής βάσης, επιδιόρθωσης αταίριαστων βάσεων, και ανασυνδυαστικής επισκευή [8], [9]. Η οδός NER είναι η κύρια οδός επιδιόρθωσης του DNA για την επισκευή ζημιών ογκώδη DNA που παράγεται από τους περισσότερους περιβαλλοντικούς παράγοντες για τη διατήρηση της γενετικής ακεραιότητας και εμποδίζουν την ανάπτυξη πολλών νόσου [10], [11].

NER αποτελείται από περίπου 30 πρωτεΐνες ότι η αφαίρεση έλικα που στρεβλώνουν βλαβών μέσω τέσσερα στάδια: (α) την αναγνώριση του DNA? (Β) το άνοιγμα ενός φούσκα γύρω από τη βλάβη? (Γ) την τομή του DNA ανάντη και κατάντη της βλάβης από ενδονουκλεάσες? και (δ) DNA επανασύνθεση και απολίνωση [12], [13]. XPA προς G (ξηροδερμία ομάδες pigmentosum A-G), ERCC1 (εκτομή επισκευή cross συμπληρώσεως Group1), RPA1, RPA2 (πρωτεΐνη αντιγραφής Α1, πρωτεΐνη αντιγραφής Α2) είναι τα κύρια πρωτεΐνες σε αυτή την οδό και υπάρχουν δύο βραχίονες αναγνώριση βλάβη του NER οδός: παγκόσμια επισκευής γονιδιώματος (GGR) και επισκευή μεταγραφή σε συνδυασμό (TCR). GGR περικλείει τα τμήματα μη κωδικοποιητική του γονιδιώματος, σιωπηλή γονιδίων και την μη μεταγράφεται στάση των ενεργών γονιδίων. TCR εξασφαλίζει ότι η μεταγραφεί κλώνο ενεργά γονίδια επισκευάζεται με μεγαλύτερη προτεραιότητα από το υπόλοιπο του γονιδιώματος με τη χρήση της RNA πολυμεράσης II ως αισθητήρας βλάβης. Μόλις η ζημιά αναγνωρίζεται μέσω ενός από αυτές τις διαδικασίες, το υπόλοιπο της διαδικασίας επισκευής ακολουθεί μια συγκλίνουσα οδό [14], [15].

Σε αυτή τη μελέτη, διερευνήσαμε την έκφραση του mRNA της 9ης γονιδίων (XPB να XPG, ERCC1, RPA1, RPA2) που συμμετέχουν στην οδό NER σε ιστούς καρκίνου της ουροδόχου κύστης με /χωρίς υποτροπή, σε σύγκριση με φυσιολογικό ιστό καρκίνο της ουροδόχου κύστης. Οι ασθενείς χωρίς υποτροπή σε 2 χρόνια περιελήφθησαν στην ομάδα μη υποτροπή και τους ασθενείς με υποτροπή σε 2 χρόνια χρησίμευσε ως ομάδα υποτροπή. δείγματα όγκου τους εκτομή στην πρώτη πράξη μελετήθηκαν. Στη συνέχεια, οι παραπάνω γονίδια με σημαντικά διαφορετική έκφραση του mRNA αναλύθηκαν με μία μέθοδο ανοσοϊστοχημεία (σε 219 ασθενείς με καρκίνο της ουροδόχου κύστης) και η συσχέτιση μεταξύ αυτών των γονιδίων και επανάληψης του καρκίνου της ουροδόχου κύστης προσδιορίστηκε.

Λαμβάνοντας υπόψη το κάπνισμα είναι ένας κυρίαρχος παράγοντας κινδύνου για καρκίνο της ουροδόχου κύστης, αναλύσαμε την κλινική αξία των ποικίλων γονιδίων NER και το κάπνισμα σε 219 καρκίνους της ουροδόχου κύστης με βάση τα κλινικά δεδομένα με τη μέθοδο Kaplan-Meier και αναλογικών κινδύνων κατά Cox παλινδρόμησης.

Υλικά και Μέθοδοι

2.1 ηθική Δήλωση

Όλο το ερευνητικό πρωτόκολλο εγκρίθηκε από το διοικητικό συμβούλιο δεοντολογίας της Bethune Διεθνούς Ειρήνης νοσοκομείο και Xinqiao νοσοκομείο στην Τρίτη Στρατιωτικό Ιατρικό Πανεπιστήμιο και όλοι οι συμμετέχοντες παρείχαν ενυπόγραφη ενημερωμένη συγκατάθεση.

. άτομα

2.2 μελέτη

Η μελέτη σχεδιάστηκε με δύο ανεξάρτητα σύνολα

Η πρώτη ομάδα περιελάμβανε 79 ασθενείς που υποβλήθηκαν σε διουρηθρική ή μερική κυστεκτομή (μέση ηλικία 62,4 ± 12 χρόνια? 52 άνδρες και 27 γυναίκες) στην υπηρεσία μας από το 2007 έως το 2011. Κανένας από τους 79 ασθενείς που είχαν λάβει αντικαρκινικά φάρμακα πριν από την πρώτη κυστεκτομή. Μεταξύ αυτών των 79 ασθενών, 37 από αυτούς δεν έχουν μια υποτροπή σε τουλάχιστον 24 μήνες μετά την πρώτη κυστεκτομή και ήταν ακόμα ζωντανός σήμερα, 29 από αυτούς είχαν λάβει ένα δεύτερο κυστεκτομή και 13 από αυτούς είχαν πεθάνει (5 περιπτώσεις έλαβε μια δεύτερη κυστεκτομή και 8 περιπτώσεις δεν το έκανε). Τα δείγματα του όγκου όλων των χειρουργικούς ασθενείς συλλέχθηκαν και διατηρήθηκαν σωστά. Οι ασθενείς χωρίς υποτροπή σε 2 χρόνια περιελήφθησαν στην ομάδα μη υποτροπή και τους ασθενείς με υποτροπή σε 2 χρόνια χρησίμευσε ως ομάδα υποτροπή. δείγματα όγκου τους εκτομή στην πρώτη πράξη μελετήθηκαν. Τα δείγματα καταψύχθηκαν το συντομότερο δυνατό μετά την εκτομή.

Το δεύτερο σετ περιλαμβάνονται 219 ασθενείς οι οποίοι δεν ήταν το ίδιο με τα 79 ασθενείς παραπάνω. Οι παραφίνη-ενσωματωμένες ιστούς του καρκίνου της ουροδόχου κύστης θηλώδη ουροθηλιακά συλλέχθηκαν από ασθενείς που υποβλήθηκαν σε διουρηθρική εκτομή του όγκου της κύστης στην υπηρεσία μας από το 2002 έως το 2007. αυτούς τους ιστούς, σύμφωνα με τη νέα ταξινόμηση του ΠΟΥ, ανατέθηκαν παθολογικά σε θηλώδη ουροθηλιακά νεοπλάσματα χαμηλού κακοήθους (PUNLMP? 58 περιπτώσεις), χαμηλής ποιότητας θηλώδες καρκίνωμα ουροφόρων (93 περιπτώσεις) και θηλώδες καρκίνωμα υψηλής ποιότητας (68 περιπτώσεις). Οι ασθενείς χωρίς υποτροπή μέσα σε 36 μήνες περιελήφθησαν στην ομάδα μη υποτροπής και οι ασθενείς με υποτροπή μέσα σε 36 μήνες χρησίμευσαν ως τα επίπεδα έκφρασης υποτροπή ομάδα συγκεκριμένων γονιδίων NER σε ιστούς καρκίνου της ουροδόχου κύστης από αυτούς τους ασθενείς αναλύθηκαν με τη μέθοδο ανοσοϊστοχημεία.

2,3 RNA και σύνθεση cDNA

θραύσματα όγκου ομογενοποιήθηκαν σε ρυθμιστικό λύσης RNA σε πάγο με Ultra-turrax και RNA καθαρίστηκε χρησιμοποιώντας το SV Total RNA Purification Kit. Retro-μεταγραφή προς cDNA έγινε χρησιμοποιώντας την υψηλή χωρητικότητα cDNA Archive Kit, σύμφωνα με τις υποδείξεις του κατασκευαστή.

2.4 Real-time PCR

Σχετική έκφραση γονιδίου μετρήθηκε εις τριπλούν και κανονικοποιήθηκαν ως προς

β-ακτίνης

(ΔCt) χρησιμοποιώντας προσδιορισμούς γονιδιακής έκφρασης TaqMan και του συστήματος 7500 πραγματικού χρόνου PCR για τις ακόλουθες μεταγραφές γονιδίων: XPB (Hs0554450_ml), XPC (Hs01104206_m1), XPD (Hs00361161), XPE (Hs00172018_ml), XPF (Hs00193342), XPG (Hs00164482), ERCC1 (Hs01012161), RPA1 (Hs00161419_m1), RPA2 (Hs00358315_m1). Για να εξασφαλιστεί thatâ-ακτίνης ίδια δεν αλλάζουν μεταξύ διαφορετικών δειγμάτων, η αναλογία ΟΦΑ-ακτίνης σε ένα δεύτερο γονίδιο αναφοράς GAPDH [16], μετρήθηκε.

2.5 Ανοσοϊστοχημεία

τμήματα ιστών από 5 μm αποπαραφινοποιήθηκαν, επανυδατώθηκαν σε διαβαθμισμένες αλκοόλες, και υποβάλλονται σε επεξεργασία με τη μέθοδο της ανοσοϋπεροξειδάσης στρεπταβιδίνης. Εν συντομία, οι τομές υποβλήθηκαν σε ανάκτηση αντιγόνου με μικροκύματα θεραπεία φούρνο για 10 λεπτά σε 0,01 mol /L κιτρικού ρυθμιστικού διαλύματος (ρΗ 6,0). Τα πλακίδια στη συνέχεια επωάστηκαν σε 10% φυσιολογικό ορό για 30 λεπτά, ακολουθούμενη από μια ολονύκτια επώαση στους 4 ° C με την κατάλληλα αραιωμένο πρωτογενές αντίσωμα. Οι ποντικοί αντι-ανθρώπινο μονοκλωνικό αντίσωμα (XPC, XPF) χρησιμοποιήθηκε σε αραίωση 1:100. Μετά πρωτογενές αντίσωμα, τα δείγματα επωάστηκαν με βιοτινυλιωμένη αντι-ποντικών ή ανοσοσφαιρίνες αντι-κουνελιού για 15 λεπτά στους 37 ° C, που ακολουθείται από στρεπταβιδίνη συμπλέγματα υπεροξειδάσης για 15 λεπτά στους 37 ° C. 3,3′-διαμινοβενζιδίνη χρησιμοποιήθηκε ως χρωμογόνο και αιματοξυλίνη χρησιμοποιήθηκε ως ένα πυρηνικό αντιχρώση.

Η ανοσοϊστοχημική αξιολόγηση πραγματοποιήθηκε από τουλάχιστον δύο ανεξάρτητους παρατηρητές που σημείωσε το εκτιμώμενο ποσοστό των κυττάρων του όγκου που δείχνει πυρηνική χρώση, ανεξάρτητα από το σήμα δύναμη. Τα αποτελέσματα βαθμολογήθηκαν σε ουροθηλιακό καρκίνωμα αλλοιώσεις με αξιολόγηση του ποσοστού των κυττάρων όγκου που εμφανίζει χαρακτηριστικές πυρηνική χρώση. Μια αποκοπής ορίζεται αυθαίρετα 10% λήφθηκε για να ταξινομήσει τα δεδομένα TCC σε κατηγορηματική ομάδες (θετικά έναντι αρνητικών).

2.6 Στατιστική ανάλυση

Η στατιστική ανάλυση έγινε με SPSS 13.0. Σχετική έκφραση του γονιδίου υπολογίστηκε χρησιμοποιώντας 2

-ΔCT, και μη ζευγαρωμένο t τεστ δύο-ουρά χρησιμοποιήθηκαν για να προσδιορίσουν σημαντικές μετατροπές εκφράσεις σε επαναλαμβανόμενες καρκινικούς ιστούς σε σύγκριση με μη-επαναλαμβανόμενες καρκινικό ιστό. Ένας πίνακας έκτακτης ανάγκης δημιουργήθηκε με την chi-τετράγωνο ή Fisher exact test πιθανότητας για τα δεδομένα ανοσοϊστοχημεία. Επανεμφάνιση πιθανότητας υπολογίστηκε με τη μέθοδο Kaplan-Meier με στατιστικές διαφορές αξιολογούνται από την δοκιμασία log rank. Ο σχετικός κίνδυνος υποτροπής από καρκίνο της ουροδόχου κύστης εκτιμήθηκε από ένα πολυπαραγοντικό μοντέλο αναλογικών κινδύνων Cox. Για όλες τις στατιστικές δοκιμασίες, σ & lt? 0,05 θεωρήθηκε σημαντική

Αποτελέσματα

3.1 γονίδια NER και η επανεμφάνιση του καρκίνου της ουροδόχου κύστης

Για να διευκρινιστεί η συσχέτιση μεταξύ μηχανισμό NER και του καρκίνου της ουροδόχου κύστης. υποτροπή, τα επίπεδα έκφρασης των γονιδίων NER συμπεριλαμβανομένων XPB να XPG, ERCC1, RPA1 και RPA2 σε καρκινικούς ιστούς από 79 ασθενείς με καρκίνο της ουροδόχου κύστης προσδιορίστηκαν με PCR πραγματικού χρόνου. Σε αυτούς τους 79 ασθενείς, 37 ασθενείς είχαν καμία υποτροπή σε 24 μήνες και αυτά που περιλαμβάνονται στην ομάδα μη υποτροπή? 29 ασθενείς είχαν μια υποτροπή σε 24 μήνες και συμπεριλήφθηκαν στην ομάδα υποτροπή? και οι άλλοι 13 ασθενείς πέθαναν και συμπεριλήφθηκαν στην ομάδα του θανάτου. Τα ευρήματα της μελέτης έδειξαν τα επίπεδα έκφρασης του XPC και XPF ήταν σημαντικά μειωμένες στην ομάδα ομάδα υποτροπής και θανάτου σε σύγκριση με την ομάδα μη-υποτροπή (Σχ. 1 και Πίνακας 1). Ωστόσο, XPB, XPD, XPE, XPG, ERCC1, RPA1 και RPA2 δεν άλλαξε σημαντικά. Σε σύγκριση με την ομάδα επανάληψης, τα επίπεδα έκφρασης των XPC και XPF ήταν πολύ χαμηλότερη στην ομάδα του θανάτου? Ωστόσο, δεν είχε καμία στατιστική σημασία

γονίδια NER μεταγραφή εντοπίστηκαν με πραγματικού χρόνου ποσοτική RT-PCR σε καρκίνους της ουροδόχου κύστης από τρεις υποομάδες:. Μη επανεμφάνιση του Ομίλου, οι ασθενείς οι οποίοι δεν είχαν υποτροπή σε 2 χρόνια ? Επανεμφάνιση του Ομίλου, οι ασθενείς οι οποίοι είχαν υποτροπή μέσα σε 2 χρόνια? Νεκρά Ομάδα, οι ασθενείς οι οποίοι ήταν νεκρός μετά από τη χειρουργική επέμβαση εντός δύο ετών. Η πολλαπλή μεταβολή ομαλοποιήθηκε έναντι GAPDH και στη συνέχεια όλα τα γονίδια σε σχέση με τις εκφράσεις του XPC στον Όμιλο Υποτροπή (+ σήμα). *, P & lt? 0,01 σε σύγκριση με the.Non-υποτροπή Ομάδα

Η

3.2 Τα επίπεδα έκφρασης των XPF και XPC και η παθολογία του καρκίνου της ουροδόχου κύστης

Για να διερευνηθεί η σχέση. μεταξύ XPF, XPC και την ανάπτυξη του καρκίνου της ουροδόχου κύστης, η σύνδεση μεταξύ των επιπέδων έκφρασης των XPF και XPC και την παθολογία του καρκίνου της ουροδόχου κύστης αναλύθηκε. Διαπιστώθηκε ότι οι αναλογίες του XPF (-) και XPC (-) ήταν 54,4% και 50,0% στην υψηλής ποιότητας ιστό θηλώδους καρκίνου, 39,7% και 37,9% σε PUNLMP καρκινικούς ιστούς και 49,5% και 45,2% σε χαμηλής ποιότητας θηλώδους καρκίνου ιστούς (Πίνακας 2 και Σχ. 2). Τα αποτελέσματα της στατιστικής ανάλυσης των δεδομένων ανοσοϊστοχημείας πρότεινε ότι οι αναλογίες του XPF (-) και XPC (-) ήταν σημαντικά υψηλότερα σε υψηλής ποιότητας θηλώδες καρκινικούς ιστούς σε σύγκριση με PUNLMP καρκινικούς ιστούς (Ρ & lt? 0,05). Στατιστική διαφορά παρατηρήθηκε μεταξύ του PUNLMP και όγκους χαμηλής ποιότητας (P & gt? 0,05). Επιπλέον, οι αναλογίες των XPF και XPC με ταυτόχρονα μειωμένη έκφραση ήταν σημαντικά υψηλότερα σε υψηλής ποιότητας καρκινικούς ιστούς θηλώδους ό, τι στην PUNLMP καρκινικούς ιστούς (Ρ & lt? 0,05).

(α) Οι εκφράσεις του XPF και XPA σε κανονική κύστη ιστός. (Β) η έκφραση Θετική XPF και θετική έκφραση XPC. (Γ) έκφραση Θετική XPF και αρνητική έκφραση XPC. (Δ) Η αρνητική έκφραση XPF και θετική έκφραση XPC. (Ε) Αρνητικές έκφραση XPF και αρνητική έκφραση XPC.

Η

3.3 Έκφραση των γονιδίων NER και το κάπνισμα

Η σύνδεση μεταξύ των επιπέδων έκφρασης των γονιδίων NER και το κάπνισμα στα 79 της ουροδόχου κύστης ασθενείς με καρκίνο αναλύθηκε. Η κατάσταση του καπνίσματος ήταν χωρισμένη σε 4 επίπεδα: δεν είχαν καπνίσει ποτέ, & lt? 20 πακέτα-έτη, 20-50 πακέτα-έτη και & gt? 50 πακέτα-έτη. Τα ευρήματα της μελέτης έδειξαν ότι, αν και δεν υπήρχε στατιστική σημαντικότητα μεταξύ των 4 ομάδων κάπνισμα, υπήρχε ακόμη μια σαφής τάση. Τα επίπεδα έκφρασης των XPF και XPC ήταν ελαφρώς χαμηλότερη στους ιστούς του όγκου των βαρέων καπνιστών σε σχέση με εκείνους των ασθενών ήπια καπνίσματος (Εικ. 3).

Οι εκφράσεις των XPF και XPC στο 79 ο καρκίνος της ουροδόχου κύστης, της 4ης καπνίσματος υποομάδες. Το χοντρό συνεχής γραμμή αντιπροσωπεύει τη μέση τιμή CT και οι ράβδοι σφάλματος αντιπροσωπεύουν το τυπικό σφάλμα.

Η

Για να διερευνηθεί περαιτέρω η σχέση μεταξύ της έκφρασης των γονιδίων NER και το κάπνισμα, τα επίπεδα έκφρασης των XPF και XPC σε 219 ασθενείς με καρκίνο της ουροδόχου κύστης και των καταστάσεων του καπνίσματος τους αναλύθηκαν. Βρήκαμε καμία διαφορά στις αναλογίες των XPF (-) και XPC (-) μεταξύ των & lt? Ομάδας 20 πακέτα-έτη, 20-50 πακέτα-έτη ομάδα και δεν είχαν καπνίσει ποτέ ομάδα. Είναι ενδιαφέρον, οι αναλογίες των XPF (-) και XPC (-) στο & gt?. 50 πακέτα-έτη ομάδα ήταν υψηλότερες από εκείνες στο δεν είχαν καπνίσει ποτέ ομάδα και & lt? 20 ομάδα πακέτα-έτη (Πίνακας 2 και Πίνακας 3)

3.4 έκφραση των XPF και καρκίνου της ουροδόχου κύστης XPC επανεμφάνιση

Για να διερευνηθεί περαιτέρω η σχέση μεταξύ των μειωμένων επιπέδων έκφρασης των XPF και XPC και την ανάπτυξη του καρκίνου της ουροδόχου κύστης, η σύνδεση μεταξύ των επιπέδων έκφρασης των XPF και XPC με υποτροπή του καρκίνου της ουροδόχου κύστης αναλύθηκε. Σύκο. 4 δείχνει τις καμπύλες Kaplan-Meier από τα δύο γονίδια και το κάπνισμα με τις ρυθμισμένες τιμές P. Βρήκαμε ότι οι ασθενείς με χαμηλό επίπεδο των XPF και XPC είχαν υψηλότερο ποσοστό υποτροπής από ό, τι τα άτομα με υψηλό επίπεδο των XPF και XPC (Σχήμα 4α και 4β P & lt?. 0,05), επιπλέον, αυτή η διαφορά ήταν περισσότερο εμφανής στην ομάδα XPF (- ) XPC (-). (Εικ 4γ). Μεταξύ των κλινικοπαθολογικοί μεταβλητές, το βαθμό του όγκου και το στάδιο προέκυψαν ως σημαντική προγνωστικούς παράγοντες σε μονοπαραγοντική ανάλυση (Πίνακας 3). Η πολυπαραγοντική ανάλυση Cox εκτελέστηκε, συμπεριλαμβανομένων όλων των μεταβλητών σημαντική συσχέτιση με την επιβίωση στην μονοπαραγοντική και ανέφερε ότι το στάδιο της νόσου ήταν ο μόνος ανεξάρτητος παράγοντας πρόβλεψης έκβαση των ασθενών (Πίνακας 4).

Kaplan-Meier καμπύλες χρησιμοποιώντας δοκιμές κατάταξης καταγραφής για την υποτροπή του καρκίνου της ουροδόχου κύστης σε ασθενείς. (Α) Η υποτροπή του καρκίνου της ουροδόχου κύστης σε ασθενείς με XPF (-) και XPF (+)? (Β) Η υποτροπή του καρκίνου της ουροδόχου κύστης σε ασθενείς με XPC (-) και XPC (+)? (Γ) Η υποτροπή του καρκίνου της ουροδόχου κύστης σε ασθενείς με XPF (-) σε συνδυασμό με XPC (-) και XPF (+) σε συνδυασμό με XPC (+), ταυτόχρονη? (Δ) Η υποτροπή του καρκίνου της ουροδόχου κύστης σε ασθενείς με δεν είχαν καπνίσει ποτέ και καπνιστό ποτέ.

Cum, σωρευτικά

.

Η

3.5 Η κατάσταση του καπνίσματος και του καρκίνου της ουροδόχου κύστης επανεμφάνιση

Θα είχε επιβεβαιωθεί ότι το κάπνισμα συνδέεται με τον καρκίνο της ουροδόχου κύστης [30] , και βρήκαμε ότι το κάπνισμα συσχετίστηκε επίσης με την υποτροπή του καρκίνου της ουροδόχου κύστης. Σύκο. 4δ δείχνει τις καμπύλες Kaplan-Meier του καθεστώτος του καπνίσματος με τις ρυθμισμένες τιμές P, οι ασθενείς οι οποίοι είχαν ιστορικό καπνίσματος είχαν υψηλότερο ποσοστό υποτροπής από τους ασθενείς που δεν έχουν το ιστορικό καπνίσματος. Επιπλέον, βρήκαμε ότι η κατάσταση καπνίσματος δεν ήταν ένα ξεχωριστό παράγοντα για τον καρκίνο της ουροδόχου κύστης, μπορεί να λειτουργήσει με XPF και γονίδια XPC ταυτόχρονα, ιδιαίτερα σε ασθενείς με χαμηλό επίπεδο XPF (Εικ. 5 Α και C) και XPC (Σχ. 5 β και δ). Επιπλέον, η ποσότητα του καπνίσματος του ασθενούς είχε σχέση με την επανεμφάνιση του καρκίνου της ουροδόχου κύστης, ιδιαίτερα στην ομάδα των XPF (Εικ. 5) (-) και XPC (-). (Εικ. 5 ε και στ)

Kaplan-Meier καμπύλες χρησιμοποιώντας δοκιμές κατάταξης καταγραφής για την υποτροπή του καρκίνου της ουροδόχου κύστης σε ασθενείς. (Α) Η υποτροπή του καρκίνου της ουροδόχου κύστης σε XPF (-) ομάδα με διαφορετικό καθεστώς του καπνίσματος (δεν είχαν καπνίσει ποτέ, & lt? 20 πακέτα-έτη, 20-50 πακέτα-έτη και & gt? 50 πακέτα-έτη)? (Β) Η υποτροπή του καρκίνου της ουροδόχου κύστης σε XPC (-) ομάδα με διαφορετικό καθεστώς του καπνίσματος? (Γ) Η υποτροπή του καρκίνου της ουροδόχου κύστης σε XPF ομάδα (+) με διαφορετικό καθεστώς του καπνίσματος? (Δ) Η υποτροπή του καρκίνου της ουροδόχου κύστης σε XPC ομάδα (+) με διαφορετικό καθεστώς του καπνίσματος? (Ε) Η υποτροπή του καρκίνου της ουροδόχου κύστης σε ασθενείς XPF (-) με δεν είχαν καπνίσει ποτέ και XPF (-) με καπνιστό πάνω από 50 πακέτα-χρόνια? (Στ) Η υποτροπή του καρκίνου της ουροδόχου κύστης σε ασθενείς XPC (-) με καπνίσει ποτέ και XPC (-) με καπνιστό πάνω από 50 πακέτα-χρόνια? (ζ) Η υποτροπή του καρκίνου της ουροδόχου κύστης σε ασθενείς XPF (+) με δεν είχαν καπνίσει ποτέ και XPF (+) με καπνιστό πάνω από 50 πακέτα-χρόνια? (Η) Η υποτροπή του καρκίνου της ουροδόχου κύστης σε ασθενείς XPC (+) με δεν είχαν καπνίσει ποτέ και XPC (+) με καπνιστό πάνω από 50 πακέτα-έτη.

Η

Συζήτηση

καρκίνο της ουροδόχου κύστης υποτροπή είναι ένα κλινικά κοινό πρόβλημα. Σε αυτή τη μελέτη, διερευνήσαμε τη σχέση μεταξύ υποτροπή του καρκίνου της ουροδόχου κύστης και των γονιδίων NER. Τα αποτελέσματα της μελέτης πρότεινε ότι δύο γονίδια NER, XPF και XPC, συμμετείχαν στην υποτροπή του καρκίνου της ουροδόχου κύστης. Επιπλέον, βρήκαμε επίσης ότι ως εξωτερικός παράγοντας, το κάπνισμα δεν συμμετείχε μόνο στην υποτροπή του καρκίνου της ουροδόχου κύστης ανεξάρτητα, αλλά και σε συνδυασμό με τα γονίδια NER να παίξει ένα ρόλο κακοήθη.

XPF, επίσης γνωστή ως η επισκευή εκτομή ομάδα crosscomplementing 4 (ERCC4), είναι κρίσιμο ρόλο στην οδό NER [17]. XPF Χασάν σημαντικό ρόλο στην επιδιόρθωση ανασυνδυασμό, επισκευή ασυμφωνία και μεταγωγή ενδεχομένως ανοσοσφαιρίνης τάξης [18], [19]. XPF περιέχει την καταλυτική περιοχή της νουκλεάσης και ERCC1 απαιτείται για τη δέσμευση και σταθεροποίηση των XPF DNA. Το συγκρότημα ERCC1-XPF θα μπορούσε να αφαιρέσει 3 ‘single-standed πτερύγια από άκρα DNA και διασπά 5’ πλευρά της φούσκας στην NER να αποκοπεί προς βλάβης [20]. Βρήκαμε XPF ήταν σημαντικά μικρότερη σε ιστούς όγκων σε ασθενείς με υποτροπή καρκίνου της ουροδόχου κύστης και των αποτελεσμάτων από τη σύγκριση παθολογία έδειξε ότι η πιθανότητα υποτροπής εντός 3 ετών ήταν υψηλότερος για τους ασθενείς με καρκίνο της ουροδόχου κύστης με XPF (-) από ότι για τα άτομα με XPF (+). Ανέφερε σαφώς ότι XPF συμμετείχε στην υποτροπή του καρκίνου της ουροδόχου κύστης, η οποία ήταν σύμφωνη με τα αποτελέσματα από το Ζ Zhang et al [21]. Παρατήρησαν ότι ο πολυμορφισμός του χώρου XPF-357 ήταν συσχετίζεται στενά με την έκφραση του XPF και επηρεάζεται περαιτέρω την υποτροπή του καρκίνου της ουροδόχου κύστης. Ωστόσο, δεν είχε διερευνήσει τα διαφορετικά επίπεδα έκφρασης των XPF σε ιστούς όγκων σε ασθενείς με υποτροπή και μη υποτροπή του καρκίνου της ουροδόχου κύστης και επίσης δεν είχε αποκομίσει ένα σαφές συμπέρασμα. Εμείς δεν διερευνήθηκαν τα διαφορετικά επίπεδα έκφρασης των XPF σε ιστούς όγκων σε ασθενείς με υποτροπή και μη υποτροπιάζοντα καρκίνο της ουροδόχου κύστης, αλλά επίσης μελέτησαν τη σύνδεση μεταξύ του ποσοστού των XPF (-) και της ουροδόχου κύστης παθολογικής ταξινόμησης. Βρήκαμε το ποσοστό των XPF (-) ήταν σημαντικά υψηλότερη σε υψηλής ποιότητας καρκινικούς ιστούς θηλώδους ό, τι στην PUNLMP καρκινικούς ιστούς και χαμηλής ποιότητας θηλώδους καρκινικούς ιστούς, γεγονός που υποδηλώνει XPF παίζεται όχι μόνο ένα σημαντικό ρόλο στην υποτροπή του καρκίνου της ουροδόχου κύστης, αλλά και ένα προστατευτικό ρόλο στην η ανάπτυξη του καρκίνου της ουροδόχου κύστης. Η μειωμένη XPF συμμετείχε στην ανάπτυξη του καρκίνου της ουροδόχου κύστης.

XPC είναι μια πρωτεΐνη αναγνώριση βλάβης του DNA που παίζει σημαντικό ρόλο στη διαδικασία NER. Η πρωτεΐνη XPC δεσμεύεται σφικτά με ένα HR23B πρωτεΐνη για να σχηματίσει ένα σταθερό σύμπλοκο XPC-HR23B. Οι μελέτες δείχνουν ότι το σύμπλοκο XPC-HR23B είναι το πρώτο συστατικό πρωτεΐνη που αναγνωρίζει και συνδέεται με το κατεστραμμένο sites [22]. Η πρωτεΐνη XPC μπορούσε επίσης να διαδραματίσει σημαντικό ρόλο σε άλλες DNA βλάβη που προκαλείται από κυτταρικές αποκρίσεις, συμπεριλαμβανομένης της ρύθμισης του σημείου ελέγχου του κυτταρικού κύκλου και της απόπτωσης [23] – [25]. έχουν ελαττώματα XPC έχουν βρεθεί σε πολλούς τύπους καρκίνου, συμπεριλαμβανομένου του πνεύμονα και του δέρματος του καρκίνου [26], [27]. XPC διαγονιδιακές μελέτες knock-out ποντικούς αποκαλύπτουν την υψηλή συχνότητα εμφάνισης προδιάθεση για πολλούς τύπους καρκίνου [28]. Αν και αρκετές μελέτες έχουν αποδείξει τη στενή σχέση μεταξύ XPC και την ανάπτυξη του καρκίνου της ουροδόχου κύστης, δεν υπάρχει ακόμη καμία απόδειξη ότι XPC εμπλέκεται στην υποτροπή του καρκίνου της ουροδόχου κύστης.

Βρήκαμε XPC εξασθένισε εκφράζεται σε υποτροπιάζοντα καρκίνο της ουροδόχου κύστης από μη υποτροπή του καρκίνου της ουροδόχου κύστης. Προτείνει ότι η μειωμένη XPC μπορεί να εμπλέκεται στην υποτροπή του καρκίνου της ουροδόχου κύστης. Για να επιβεβαιωθεί αυτή η υπόθεση, αναλύσαμε τη σύνδεση μεταξύ των επιπέδων έκφρασης των XPC σε ιστούς όγκων από 219 ασθενείς με καρκίνο της ουροδόχου κύστης και την πρόγνωσή τους και βρέθηκαν XPC (-) ασθενείς είχαν σημαντικά υψηλότερο ποσοστό υποτροπής. Επιπλέον, το ποσοστό των XPC (-) συσχετίστηκε με την παθολογική διαβάθμιση του καρκίνου της ουροδόχου κύστης. Αυτό είναι σύμφωνο με τα αποτελέσματα από Chen et al:. XPC ήττα ήταν στενά συνδεδεμένη με και εμπλέκονται στην ανάπτυξη του καρκίνου της ουροδόχου κύστης [29]

Αν και η χαμηλή έκφραση των XPF και XPC συμμετείχε στην υποτροπή της ουροδόχου κύστης ο καρκίνος, η ολοκληρωμένη ανάλυση έδειξε ότι δεν υπήρχε συνεργική επίδραση ενίσχυση μεταξύ της μειωμένης έκφρασης των XPF και XPC. Η ανάλυση υπόθεση που ελέγχεται έδειξε ότι το ποσοστό υποτροπής των ασθενών με ταυτόχρονα μειωμένη έκφραση των XPF και XPC δεν ήταν σημαντικά υψηλότερη από εκείνη των ασθενών με μόνο μειωμένη έκφραση του XPF ή XPC. Αυτό υποδηλώνει ότι XPF και XPC και οι δύο σχετίζονται με την υποτροπή του καρκίνου της ουροδόχου κύστης και να συμμετέχουν σε διάφορες οδούς της κυτταρικής απόκρισης. Ωστόσο, όπως για την αντικατάσταση του καρκίνου της ουροδόχου κύστης, XPF και XPC παίζουν ρόλους τους στην ίδια μηχανισμό, ο μηχανισμός NER, αλλά όχι σε διαφορετικούς μηχανισμούς.

Πολλές μελέτες έχουν δείξει ότι το κάπνισμα παίζει κακοήθη ρόλο στην ανάπτυξη του καρκίνου της ουροδόχου κύστης [30] – [32]. Η μελέτη μας επιβεβαιώνεται αυτό το συμπέρασμα. Με προσεκτική ανάλυση της κατάστασης του καπνίσματος, την έκφραση των γονιδίων NER και την υποτροπή του καρκίνου της ουροδόχου κύστης, έχουμε προέρχεται το συμπέρασμα ότι το κάπνισμα δεν ασχολείται μόνο με την υποτροπή του καρκίνου της ουροδόχου κύστης ανεξάρτητα, αλλά συνδυάζει επίσης με γονίδια NER όπως XPF και XPC να παίξει ένας κακοήθης ρόλο ταυτόχρονα, η οποία επιδεινώθηκε περαιτέρω τα κακοήθη αποτελέσματα του καρκίνου της ουροδόχου κύστης. Προηγούμενες μελέτες πρότειναν ότι το κάπνισμα μπορεί να επηρεάσει την υποτροπή του καρκίνου της ουροδόχου κύστης μέσω του μηχανισμού NER. Ωστόσο, η μελέτη μας έδειξε το κάπνισμα δεν επηρεάζεται μόνο τον προστατευτικό ρόλο του μηχανισμού NER στον καρκίνο της ουροδόχου κύστης, αλλά επίσης πιθανώς επηρεάζονται άλλα προστατευτικά μηχανισμοί κατά τη διάρκεια της ανάπτυξης του καρκίνου της ουροδόχου κύστης.

Παρά μελέτη μας δείχνει ότι XPF, XPC και το κάπνισμα ήταν στενά συνδεδεμένη με την υποτροπή του καρκίνου της ουροδόχου κύστης, ο λόγος για τη χαμηλή έκφραση XPF και XPC ήταν ακόμα ασαφής. Εκτός από τον πολυμορφισμό του XPF και XPC υποκινητές μπορεί να επηρεάσουν την έκφραση των γονιδίων αυτών, πιθανώς υπάρχουν κάποιες άγνωστων μηχανισμών που επηρεάζουν την μεταγραφή και μετάφραση των XPF και XPC γονίδια, ακόμα και επηρεάζουν αποικοδόμηση και πρωτεΐνη αποτελεσματικότητα τους σε πρωτεΐνες, κ.λπ. Για να φωτιστούν διεξοδικά η βιολογικός μηχανισμός υποτροπής του καρκίνου της ουροδόχου κύστης, τα πεδία αυτά χρήζουν περαιτέρω διερεύνησης. Ωστόσο, το γεγονός ότι XPF και XPC εμπλέκονται στην υποτροπή του καρκίνου της ουροδόχου κύστης φέρνει μια νέα αξιόπιστη ένδειξη για περαιτέρω μελέτες σχετικά με το μηχανισμό της υποτροπής του καρκίνου της ουροδόχου κύστης.

Ευχαριστίες

Οι συγγραφείς θα ήθελαν να ευχαριστώ Xinhong Zhao και ο Δρ Junlei Zhang (Τμήμα Μικροβιολογίας) για την άριστη τεχνική βοήθεια τους και την κριτική ανάγνωση και πολύτιμα σχόλια για το χειρόγραφο.