Abstract

Πρόσφατες μελέτες δείχνουν ότι η μη φυσιολογική μικροπεριβάλλον των όγκων μπορεί να παίζει ένα κρίσιμο ρόλο στην καρκινογένεση, συμπεριλαμβανομένου του καρκίνου του πνεύμονα. Έχουμε αξιολογηθεί συνολικά ο αριθμός των στρωματικών κυττάρων, ειδικά του ανοσοποιητικού /φλεγμονωδών κυττάρων, καρκίνο του πνεύμονα και αξιολογήθηκαν διείσδυση τους σε καρκίνους του διαφορετικά στάδια, τα είδη και μεταστατικό χαρακτηριστικά δυναμικό. Διεξήχθη Ανοσοϊστοχημική ανάλυση των συστοιχιών ιστού καρκίνου του πνεύμονα που περιέχουν φυσιολογικό και πνεύμονα τμήματα του καρκίνου. Η ανάλυση αυτή συνδυάζεται με κυτο- /ιστομορφολογική αξιολόγηση και τον ποσοτικό προσδιορισμό των κυττάρων για την ταξινόμηση /subclassify όγκους με ακρίβεια και να εκτελέσει μια ανάλυση υψηλής απόδοσης της σύνθεσης στρωματικών κυττάρων σε διάφορους τύπους καρκίνου του πνεύμονα. Στην ανθρώπινη τομές καρκίνου του πνεύμονα παρατηρήσαμε μια σημαντική ανύψωση /διείσδυση του συνολικού-Τ λεμφοκύτταρα (CD3

+), κυτταροτοξικά-Τ-λεμφοκύτταρα (CD8

+), Τ-βοηθητικά κύτταρα (CD4

+), Β κύτταρα (CD20

+), μακροφάγα (CD68

+), μαστοκύτταρα (CD117

+), μονοπύρηνα κύτταρα (CD11c

+), πλασματοκύτταρα, ενεργοποιημένα Τ κύτταρα (MUM1

+), Β κύτταρα, μυελοειδή κύτταρα (PD1

+) και ουδετερόφιλα κοκκιοκύτταρα (μυελοϋπεροξειδάση

+) σε σύγκριση με υγιή δείγματα δότη. Παρατηρήσαμε όλα αυτών των δεικτών ανοσοκυττάρων σε διαφορετικούς τύπους καρκίνων του πνεύμονα συμπεριλαμβανομένου του καρκινώματος πλακωδών κυττάρων, αδενοκαρκίνωμα, καρκίνωμα αδενοχοληδωτό κυττάρων, μικροκυτταρικό καρκίνωμα, θηλώδες αδενοκαρκίνωμα, μεταστατικό αδενοκαρκίνωμα, και καρκίνωμα βρογχιολοκυψελιδικό. Οι αριθμοί όλων των κυττάρων του ανοσοποιητικού συστήματος που σχετίζονται με όγκους (εκτός MUM1

+ κύτταρα) στη φάση III δειγμάτων καρκίνου ήταν σημαντικά μεγαλύτερες από εκείνες σε δείγματα Ι στάδιο. Παρατηρήσαμε σημαντική φάση που εξαρτάται από διείσδυση ανοσοκυττάρων σε ανθρώπινους όγκους του πνεύμονα που υποδηλώνει ότι το μικροπεριβάλλον του όγκου παίζει έναν κρίσιμο ρόλο κατά τη διάρκεια των πνευμόνων καρκινογένεση. Στρατηγικές για την θεραπευτική παρέμβαση με το μικροπεριβάλλον του καρκίνου του πνεύμονα θα πρέπει να εξετάσει την πολυπλοκότητα της σύνθεσης του ανοσοποιητικού κυττάρων του

Παράθεση:. Banat G-Α, Tretyn Α, Pullamsetti SS, Wilhelm J, Weigert Α, Olesch C, et al. (2015) του ανοσοποιητικού και φλεγμονωδών κυττάρων Σύνθεση του Ανθρώπου Καρκίνο του Πνεύμονα στρώμα. PLoS ONE 10 (9): e0139073. doi: 10.1371 /journal.pone.0139073

Επιμέλεια: Gernot Zissel, Universitatsklinikum Freiburg, Γερμανία

Ελήφθη: 3 Φεβ, 2015? Αποδεκτές: 9η Σεπτεμβρίου 2015? Δημοσιεύθηκε: 28 του Σεπτέμβρη, 2015

Copyright: © 2015 Banat et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα: Οι συγγραφείς ως επί το πλείστον χρησιμοποιούνται εμπορικά διαθέσιμα συστοιχίας ιστού καρκίνου του πνεύμονα. LUC1501 περιέχει 150 πυρήνες από την κανονική /καλοήθεις (3 περιπτώσεις) και του καρκίνου (70 περιπτώσεις με τα δεδομένα ταξινόμησης και ΤΝΜ σταδιοποίηση), διπλές πυρήνες ανά περίπτωση αγοράστηκαν από Pantomics, Inc. (Cat δεν LUC 1501?. Richmond, CA, USA). Έξι επιπλέον δείγματα πνεύμονα δότη ιστού ελήφθησαν από τους πνεύμονες που δεν μεταμοσχεύτηκαν. Το πρωτόκολλο της μελέτης για τη δωρεά ιστών εγκρίθηκε από την επιτροπή δεοντολογίας ( «Ethik Kommission π.μ. Fachbereich Humanmedizin der Πανεπιστήμιο Justus Liebig Giessen»). Ο αξιωματικός της επιτροπής τράπεζα ιστών είναι καθηγητής Werner Seeger email: [email protected]. Οι 6 επιπλέον δείγματα ιστού είναι διαθέσιμες κατόπιν αιτήματος εξαιτίας ηθικών περιορισμών

Χρηματοδότηση:. Η εργασία αυτή χρηματοδοτήθηκε από Verein zur Förderung der Krebsforschung στο Gießen eV, και τα LOEWE Πανεπιστήμια του Giessen και Μάρμπουργκ πνεύμονα Center (UGMLC).

Αντικρουόμενα συμφέροντα: Οι συγγραφείς δηλώνουν ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

ο καρκίνος του πνεύμονα είναι μια ιδιαίτερα επιθετική και προκλητική νόσου και είναι η κύρια αιτία θνησιμότητας από καρκίνο σε όλο τον κόσμο. . Παρά τις συνεχιζόμενες θεραπευτικές προσπάθειες, οι ασθενείς με καρκίνο του πνεύμονα έχουν φτωχή πρόγνωση με μέσο ποσοστό επιβίωσης 5 ετών μόνο το 15% [1] [2]. Περίπου το 80-85% όλων των ασθενών με καρκίνο του πνεύμονα αντιμετωπίζονται με μία ή περισσότερες επιλογές μέσα σε ένα πρότυπο σχήμα που περιλαμβάνει χειρουργική επέμβαση, ακτινοθεραπεία, χημειοθεραπεία και με το στάδιο της νόσου για τον καθορισμό των θεραπευτικών επιλογών. Αν και αυτές οι θεραπείες έχουν παραχθεί ελπιδοφόρα αποτελέσματα ως νεο-επικουρική και ανοσοενισχυτικό στρατηγικές για τους ασθενείς σε πρώιμα στάδια και για θεραπεία του τοπικά προχωρημένου και προχωρημένη νόσο, τα αποτελέσματα της θεραπείας για τον καρκίνο του πνεύμονα εξακολουθούν να θεωρούνται απογοητευτική. Αυτό οφείλεται σε καθυστέρηση στη διάγνωση και ανεπαρκή γνώση για την εξέλιξη του όγκου και των συναφών μοριακών μεταβολών της σε μεγάλο βαθμό [3]. Σημαντικές πρόοδοι έχουν γίνει πρόσφατα για τον εντοπισμό των μοριακών καθοριστικών παραγόντων της καρκινογένεσης, όπως γενετικές αλλοιώσεις σε πολλά ογκογονίδια (

Kras

,

cMyc

,

EGFR

,

ALK

, κλπ) και ογκοκατασταλτικών γονιδίων (

p53

,

RASSF1

,

RB

,

FHIT

) [4, 5] .

Εκτός από αυτή τη γενετική πολυπλοκότητα, η κυτταρική πολυπλοκότητα του μικροπεριβάλλον του όγκου αναγνωρίζεται όλο και περισσότερο ως συμβάλλει άμεσα στην έναρξη του καρκίνου, την εξέλιξη και τη μετάσταση [6, 7]. Το μικροπεριβάλλον του όγκου, ανάλογα με τη θέση του όγκου, αποτελείται από στρωματικά κύτταρα, συμπεριλαμβανομένων ινοβλαστών, άνοσο και φλεγμονώδη κύτταρα, λιποκύτταρα, νευρογλοιακά κύτταρα, κύτταρα λείων μυών και κάτοικος και προσλαμβάνονται αγγειακά κύτταρα μαζί με το εξωκυτταρικό πλέγμα, αυξητικούς παράγοντες /κυτοκίνες και άλλες πρωτεΐνες που είναι τοπικά ή /και συστηματικά παράγεται. Αν και καμία από αυτές τις στρωματικά κύτταρα είναι ογκογόνα, μπορεί είτε να διεγείρει ή να αναστέλλει τον πολλαπλασιασμό των καρκινικών κυττάρων /κακοήθεια, ανάλογα με το μικροπεριβάλλον του όγκου και οι διάφορες αλληλεπιδράσεις μπορούν να έχουν με τα καρκινικά κύτταρα [8, 9].

Αν και το ανοσοποιητικό κύτταρα θα πρέπει κατ ‘αρχήν τον εντοπισμό και την εξάλειψη των μετασχηματισμένων κυττάρων, την αλληλεπίδρασή τους με τα καρκινικά κύτταρα μπορεί να οδηγήσει σε αλλαγές στο φαινότυπο τους, που μπορεί πραγματικά να οδηγήσει στη δημιουργία ενός περιβάλλοντος όγκου υποστήριξης σε διάφορες ρυθμίσεις του καρκίνου, συμπεριλαμβανομένου του καρκίνου του πνεύμονα [10-12]. Έτσι, μια ολοκληρωμένη ανάλυση του πληθυσμού /σύνθεση των στρωματικών κυττάρων και την καλύτερη κατανόηση των επιπτώσεών τους στη διαδικασία της καρκινογένεσης μπορεί τελικά να οδηγήσει σε βελτίωση των αντικαρκινικών θεραπειών [13, 14]. Κατά μήκος αυτής της γραμμής, υπάρχει τώρα αυξανόμενες ενδείξεις ότι ορισμένα κύτταρα του ανοσοποιητικού συστήματος διεισδύσουν στο όγκους των ανθρώπινων δειγμάτων από καρκίνο του πνεύμονα [12, 15-19]. Ωστόσο, για το καλύτερο της γνώσης μας, ο εντοπισμός και η ποσοτικοποίηση των διαφόρων πληθυσμών κυττάρων του ανοσοποιητικού και την αντιστοιχία τους με τον τύπο του καρκίνου του πνεύμονα, στάδιο και κομβικά κατάσταση δεν έχει αναφερθεί. Σε αυτή τη μελέτη, χρησιμοποιώντας συστοιχίες ιστών και ανοσοϊστοχημεία, επεκτείναμε αυτήν ουσιαστικά χαρακτηρισμού περιλαμβάνουν διάφορες πληθυσμούς ανοσοκυττάρων, καθώς και διάφορα είδη καρκίνου του πνεύμονα, τα στάδια του καρκίνου, και τα μεγέθη των όγκων καθώς και οι διαφορές σε κομβικά κατάσταση. Οι τεχνικές αυτές συνδυάζονται με κυτο- /ιστομορφολογική αξιολόγηση και τον ποσοτικό προσδιορισμό των κυττάρων, για την ταξινόμηση των /subclassify όγκους με ακρίβεια και υψηλή ανάλυση διακίνηση σύνθεση στρωματικών κυττάρων σε διάφορους τύπους καρκίνου του πνεύμονα.

Υλικά και Μέθοδοι

πνεύμονα Δείγματα

Ο καρκίνος του πνεύμονα σειρά ιστών, LUC1501 περιέχει 150 πυρήνες από την κανονική /καλοήθεις (3 περιπτώσεις) και του καρκίνου (70 περιπτώσεις με τα δεδομένα ταξινόμησης και ΤΝΜ σταδιοποίηση), διπλές πυρήνες ανά περίπτωση αγοράστηκαν από Pantomics, Inc . (Κατ. δεν LUC 1501? Richmond, CA, USA). Όλες οι ιστοί σταθεροποιήθηκαν σε 10% ουδέτερη ρυθμισμένη φορμαλίνη για 24 ώρες και υποβάλλονται σε επεξεργασία χρησιμοποιώντας ταυτόσημες ΤΜΕ. Οι τομές πήρε πάνω Superfrost Plus ή Startfrost κόλλα διαφάνειες. Μπορεί να υπάρχουν & gt? 5% απώλεια πυρήνα ανά διαφάνεια, αλλά το ποσοστό παρακράτησης του πυρήνα θα πρέπει να είναι & gt? 90%. Τα δείγματα όγκου παρουσιάστηκαν εις διπλούν για τον εσωτερικό έλεγχο και να εκτιμήσει την ετερογένεια των όγκων. Επιπλέον, ένας παθολόγος επικυρωμένη τους όγκους στους πυρήνες. Οι όγκοι καλύπτουν μεταξύ 50 και 100% των πυρήνων. Έξι επιπλέον δείγματα πνεύμονα δότη ιστού ελήφθησαν από τους πνεύμονες που δεν είχαν μεταμοσχευθεί [20]. Αυτό πνεύμονα δότη ιστού ήταν μη μεταμοσχευμένο ιστό των πνευμόνων των δοτών μεταμόσχευσης. Το πρωτόκολλο της μελέτης για τη δωρεά ιστών εγκρίθηκε από την επιτροπή δεοντολογίας ( «Ethik Kommission είμαι Fachbereich Humanmedizin der Πανεπιστήμιο Justus Liebig Giessen») του Πανεπιστημιακού Νοσοκομείου Giessen (Giessen, Γερμανία), σύμφωνα με το εθνικό δίκαιο και με το «Good Clinical Practice Διεθνές Συνέδριο /για την εναρμόνιση «κατευθυντήριες γραμμές. Γραπτή συγκατάθεση λήφθηκε από κάθε ασθενή ή τον ασθενή επόμενο του σογιού (Α-Ω 31/93) [20, 21]. Όλα τα δείγματα αναλύθηκαν στο πλαίσιο ενός Hamamatsu NDP σαρωτή διαφανειών (Hamamatsu Nanozoomer 2.0HT) και την πλατφόρμα προβολής του (NDP.Viewer).

αιματοξυλίνη και ηωσίνη χρώσης

πνεύμονα σειρά καρκίνου του ιστού αποπαραφινοποιήθηκαν σε ξυλόλιο ακολουθούμενη από επανυδάτωση σε 100%, 90%, και 70% αιθανόλη και απεσταγμένο νερό. Οι πλάκες στη συνέχεια επωάστηκαν σε φρέσκο ​​αιματοξυλίνη (Merck, Darmstadt, Γερμανία) για 20 λεπτά και πλύθηκαν σε απεσταγμένο νερό, που ακολουθείται από επώαση σε διάλυμα οξινισμένου ηωσίνη (Sigma, Deisenhofen, Germany) για 1 λεπτό και το πλύσιμο. Τέλος, τα πλακίδια αφυδατώνονται σε 90% και 100% αιθανόλη, ξηραίνεται στον αέρα, και να τοποθετηθεί [20].

Ανοσοϊστοχημεία

Ανοσοϊστοχημική χρώση πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας μια Autostainer Plus (Dako, Αμβούργο, Γερμανία ) και τα μονοκλωνικά αντισώματα ποντικού από Dako, Medac (Αμβούργο, Γερμανία), και Thermo Fisher (Dreieich, Γερμανία) σε αραιώσεις που υποδεικνύονται στον πίνακα 1. Ένα πολυκλωνικό αντίσωμα χρησιμοποιήθηκε μόνο για μυελοϋπεροξειδάση χρώσης (ΜΡΟ). Ακολουθήσαμε την ειδική τυποποιημένη πρωτόκολλο που παρέχεται από τον κατασκευαστή. Η παράλειψη του πρωτογενούς αντισώματος χρησίμευσε ως αρνητικός έλεγχος. Εν συντομία, τα πλακίδια υποβλήθηκαν σε προεπεξεργασία με ρυθμιστικό Trilogy (Medac? 1: 100, 16 λεπτά στους 95 ° C), κιτρικό ρυθμιστικό χαμηλού (Thermo Fisher? 1: 100, 26 λεπτά στους 98 ° C), ή προνάση Ε (Merck? 0,1% , 10 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου) ακολουθούμενη από κατεργασία με 3% η

2O

2 για 8 λεπτά. Όλα τα αντισώματα εφαρμόσθηκαν σε έναν όγκο 200 μΐ και επωάστηκαν για 30 λεπτά. Μετά την πλύση (ρυθμιστικό Medac πλύση, 1:20 σε απεσταγμένο ύδωρ), δευτερεύον αντίσωμα (Medac) εφαρμόστηκε σε ένα όγκο 200 μΐ και επωάστηκαν για 20 λεπτά. Μετά το πλύσιμο, το κάθε δείγμα επωάστηκε με πολυμερές (200 μΐ) για 30 λεπτά (σημειώστε ότι το δευτερεύον αντίσωμα και το πολυμερές είναι συστατικά του χρωματική κωδικοποίηση kit BrightVision HRP από Medac). Τα πλακίδια πλύθηκαν δύο φορές και επωάστηκαν σε Bright DAB (Medac) για 10 λεπτά. Τα πλακίδια πλύθηκαν σε απεσταγμένο νερό, με αιματοξυλίνη για 8 λεπτά, και πλένονται πριν coverslipping [20, 22].

Η

Ανάλυση Δεδομένων και Στατιστική

Ο συνολικός αριθμός των κυττάρων και θετικώς χρωματισμένο κύτταρα μετρήθηκαν σε τομές ιστών. Σε συνδυασμό με ανοσοϊστοχημική χρώση, έχουμε στηρίχθηκε επίσης σε κυτο- /ιστομορφολογικά αξιολόγηση των κυττάρων από έναν παθολόγο. Η Η &? Ε τομές TMA αξιολογήθηκαν από παθολόγο για την διαφοροποίηση του τμήματος του όγκου από το τμήμα μη-όγκου Ο συνολικός αριθμός των κυττάρων και όλα τα θετικά χρωματισμένα κύτταρα σε περιοχή του όγκου του πυρήνα μετρήθηκαν. Οι τιμές αντιπροσωπεύουν τον αριθμό των κυττάρων για κάθε δείκτη τύπου κυττάρων ανά 1000 συνολικά κύτταρα μετρήθηκαν. Οι διαφορές σε αυτές τις κανονικοποιημένες μετρήσεις μεταξύ των ομάδων εκτιμήθηκαν με ένα γενικευμένο γραμμικό μοντέλο της οικογένειας οιονεί Poisson με log-σύνδεσμο. Το μοντέλο υποθέτει ότι οι τιμές ανταπόκρισης ακολουθούν μια κατανομή Poisson, όπως αναμένεται για μετρήσεις. Η ανάλυση των υπολειμμάτων έδειξε overdispersion, δηλαδή, δεν υπήρχε γραμμική σχέση μεταξύ της μέσης και διακύμανση, ένα χαρακτηριστικό καθαρά Poisson-κατανεμημένα δεδομένα. Αυτό εξηγείται από την εκτίμηση οιονεί πιθανότητα το μοντέλο Poisson, συμπεριλαμβανομένων επιπλέον παράμετρος κλίμακας [23]. Παρουσίασε στοιχεία είναι οι προβλεπόμενες αντιδράσεις για τις ομάδες (μέσα ή αναμενόμενες τιμές) με διαστήματα εμπιστοσύνης 95% (CI). Ρ-τιμές για την σύγκριση των ομάδων υπολογίζονται επίσης για τα μοντέλα αυτά. Δεδομένα από TNM ταξινομήσεις Τ2 και Τ3 συνενώθηκαν για ανάλυση. Τα δεδομένα αναλύθηκαν με R έκδοση 3.1.0 [24, 25].

Αποτελέσματα

ιστοπαθολογική ανάλυση του πνεύμονα δείγματα όγκων

Για να χαρακτηρίζουν τη μορφολογία των όγκων του πνεύμονα, μικροσυστοιχίες όγκου ανθρώπινου πνεύμονα βάφτηκαν με αιματοξυλίνη και ηωσίνη. Το σχήμα 1 δείχνει αντιπροσωπευτικά δείγματα χρωματισμένο ιστού σύμφωνα με παθολογία τους? υγιείς, πλακώδες καρκίνωμα, αδενοκαρκίνωμα, καρκίνωμα αδενοχοληδωτό, μικροκυτταρικό καρκίνωμα, θηλώδες αδενοκαρκίνωμα, μεταστατικό αδενοκαρκίνωμα, και καρκίνωμα βρογχιολοκυψελιδικό. Όλα τα δείγματα υποβλήθηκαν σε επιπλέον ιστοπαθολογική ανάλυση.

Αντιπροσωπευτικές εικόνες των ανθρώπινων τμημάτων του πνεύμονα χρωματίστηκαν με αιματοξυλίνη και ηωσίνη με βάση την παθολογία τους. (Α) υγιή δότη, (Β) καρκίνωμα πλακωδών κυττάρων, (C) αδενοκαρκίνωμα, (D) αδενοχοληδωτό καρκίνωμα, (Ε) μικροκυτταρικό καρκίνωμα, (F) θηλώδες αδενοκαρκίνωμα, (G) μεταστατικό αδενοκαρκίνωμα, και καρκίνωμα (H) βρογχιολοκυψελιδικό. μπαρ κλίμακα = 250 μm

Η

Ανάλυση του μικροπεριβάλλον του όγκου σε Ανθρώπινο Καρκίνο του Πνεύμονα ιστοί

Τ λεμφοκύτταρα

Η διείσδυση των Τ λεμφοκυττάρων σε ανθρώπινο ιστό πνεύμονα εκτιμήθηκε.. με ανοσοϊστοχημική ανάλυση χρησιμοποιώντας το αντίσωμα CD3. Παρατηρήσαμε μια αύξηση του αριθμού των CD3

+ Τ κύτταρα στον καρκίνο του πνεύμονα [σημαίνουν, 118 κύτταρα /ανά 1000 κύτταρα? 95% CI, 105-133? εδώ μετά αναφέρεται ως 118 (105 … 133)] σε σύγκριση με τους υγιείς πνεύμονες δότη [28 (14 … 57)? Σχήμα 2Α]. Η διείσδυση του CD3

+ Τ λεμφοκύτταρα ήταν ανεξάρτητη του τύπου του καρκίνου (Σχήμα 2Β και 2F), αλλά ο αριθμός των διηθητικών κυττάρων ήταν υψηλότερη σε μεταγενέστερα στάδια του καρκίνου του πνεύμονα [173 (151 … 199) στάδιο III έναντι 61 (33 … 114) σταδίου Ι καρκίνο του πνεύμονα, σχήμα 2C]. Ο αριθμός των CD3

+ Τ κυττάρων σε δείγματα όγκων ήταν ανεξάρτητη του μεγέθους του όγκου [Τ2: 119 (104 … 136] έναντι T3: 88 (52 … 149)] και κομβικών κατάσταση [N0: 123 (106 … 143) vs. N1 + 2:.. 101 (79 … 130), το Σχ 2D και 2Ε] βάσει TNM στάσης

συστοιχία Ανθρώπινα καρκίνο του πνεύμονα ιστός χρωματίστηκε με CD3 αντίσωμα για την ανίχνευση Τ λεμφοκύτταρα (A) Ποσοτικοποίηση των CD3

+ κυττάρων στον καρκίνο του πνεύμονα έναντι δειγμάτων υγιή δότη. (Β-Ε) Ποσοτικοποίηση των CD3

+ κυττάρων με βάση την (Β) παθολογία τους, (Γ) το στάδιο του καρκίνου, (D) το μέγεθος του όγκου, και (Ε ) κομβικό κατάσταση. οι αριθμοί κυττάρων δίνονται ως CD3-θετικά κύτταρα ανά 1000 κύτταρα. (F) Εκπρόσωπος εικόνες της ανθρώπινης τμήματα του πνεύμονα βάφονται με CD3 αντισωμάτων με βάση την παθολογία τους. μπαρ Κλίμακα = 25 μm.

η

για την περαιτέρω αξιολόγηση της κατανομής των υποπληθυσμών των Τ λεμφοκυττάρων, τα τμήματα αναλύθηκαν με ανοσοχρώση για την επικράτηση των Τ βοηθητικών (CD4

+) και τα κυτταροτοξικά (CD8

+) κυττάρων Τ. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 3Α, ο αριθμός των CD4

+ κυττάρων ήταν σημαντικά αυξημένη σε καρκινικό ιστό σε σύγκριση με υγιή ιστό δότη [62 (52 … 72) έναντι 12 (4 … 32)]. Η επικράτηση των Τ βοηθητικών κυττάρων ήταν ανεξάρτητη του τύπου του καρκίνου (Σχήμα 3Β και 3F), ωστόσο ο αριθμός των διηθητικών κυττάρων ήταν υψηλότερη σε στάδιο του καρκίνου III σε σύγκριση με το στάδιο Ι [113 (102 … 125) έναντι 22 (12 … 42), Σχήμα 3C]. Ο αριθμός των CD4

+ Τ λεμφοκυττάρων σε δείγματα όγκων ήταν ανεξάρτητη του μεγέθους του όγκου [Τ2: 62 (52 … 75] εναντίον Τ3: 60 (32 … 114)] και κομβικά κατάσταση [N0: 63 (51 … 77) vs. N1 + 2:. 60 (43 … 83), το Σχ 3D και 3Ε] Παρόμοια αποτελέσματα ελήφθησαν για τη διείσδυση κυτταροτοξικών Τ λεμφοκυττάρων, με μεγαλύτερο αριθμό των CD8

+ κυττάρων σε ιστούς όγκων σε σύγκριση με τους υγιείς μάρτυρες [80 ( 69 … 93) έναντι 17 (7 … 41)] και τα υψηλότερα CD8

+ κυττάρων διείσδυση στο στάδιο ΙΙΙ εναντίον του καρκίνου του σταδίου Ι του πνεύμονα [132 (114 … 154) έναντι 51 (27 … 98), Σχ 4Α και 4C]. δεν υπήρχε συσχέτιση μεταξύ της επικράτησης των κυτταροτοξικών Τ κυττάρων και τον τύπο του καρκίνου, το μέγεθος του όγκου ή κομβικά κατάσταση (Σχήμα 4Β, 4D και 4Ε).

συστοιχία Ανθρώπινα καρκίνο του πνεύμονα ιστός χρωματίστηκε με CD4 αντίσωμα για την ανίχνευση Τ βοηθητικών κυττάρων. (Α) Ποσοτικοποίηση των CD4

+ κυττάρων στον καρκίνο του πνεύμονα έναντι δειγμάτων υγιή δότη. (Β-Ε) Ποσοτικοποίηση των CD4

+ κυττάρων με βάση την (Β) παθολογία τους, (Γ) το στάδιο του καρκίνου οι, (Δ) το μέγεθος του όγκου, και (Ε) κόμβων κατάσταση. οι αριθμοί των κυττάρων δίδεται ως CD4-θετικά κύτταρα ανά 1000 κύτταρα. (F) Αντιπροσωπευτικές εικόνες των ανθρώπινων τμημάτων του πνεύμονα χρωματίστηκαν με CD4 αντίσωμα με βάση την παθολογία τους. μπαρ κλίμακας = 25 μm.

Η

array Ανθρωπίνων καρκίνο του πνεύμονα ιστού βάφτηκε με CD8 αντισωμάτων για την ανίχνευση κυτταροτοξικά Τ λεμφοκύτταρα. (Α) Ποσοτικοποίηση των CD8

+ κυττάρων στον καρκίνο του πνεύμονα εναντίον υγιή δείγματα δότη. (Β-Ε) Ποσοτικοποίηση των CD8

+ κυττάρων με βάση την (Β) παθολογία τους, (Γ) το στάδιο του καρκίνου, (D) το μέγεθος του όγκου, και (Ε) κομβικό κατάσταση. Οι αριθμοί των κυττάρων δίνονται ως CD8-θετικά κύτταρα ανά 1000 κύτταρα. (F) Αντιπροσωπευτικές εικόνες των ανθρώπινων τμημάτων του πνεύμονα χρωματίστηκαν με CD8 αντίσωμα με βάση την παθολογία τους. μπαρ κλίμακας = 25 μm.

Η

Τα μακροφάγα και τα μαστοκύτταρα.

όγκων που σχετίζονται με τα μακροφάγα αξιολογήθηκαν με βάση την έκφραση του CD68. Παρατηρήσαμε μια αύξηση του αριθμού των

+ κύτταρα CD68 στον καρκίνο του πνεύμονα [39 (30 … 49)] σε σύγκριση με υγιείς πνεύμονες δότη [5 (1 … 34)? Σχήμα 5Α]. Ο αριθμός των μακροφάγων που σχετίζονται με όγκους συσχετίζεται επίσης με το στάδιο του καρκίνου [σταδίου III: 75 (62 … 92) εναντίον στάδιο Ι: 9 (2 … 41), το Σχ 5C] και ήταν ανεξάρτητη από τον τύπο του καρκίνου, το μέγεθος του όγκου, και κομβικών κατάσταση (Σχήμα 5Β και 5D-5F).

συστοιχίας ανθρώπινου ιστού καρκίνου του πνεύμονα χρωματίστηκε με CD68 αντίσωμα για την ανίχνευση μακροφάγα. (Α) Ποσοτικοποίηση των CD68

+ κυττάρων στον καρκίνο του πνεύμονα εναντίον υγιή δείγματα δότη. (Β-Ε) Ποσοτικοποίηση των CD68

+ κυττάρων με βάση την (Β) παθολογία τους, (Γ) το στάδιο του καρκίνου, (D) το μέγεθος του όγκου, και (Ε) κομβικό κατάσταση. Οι αριθμοί των κυττάρων δίνονται ως CD68-θετικά κύτταρα ανά 1000 κύτταρα. (F) Αντιπροσωπευτικές εικόνες των ανθρώπινων τμημάτων του πνεύμονα χρωματίστηκαν με CD68 αντίσωμα με βάση την παθολογία τους. Κλίμακα ράβδου = 25 μm.

Η

Στη συνέχεια, αξιολογείται ο αριθμός των μαστοκυττάρων στον ιστό του όγκου με βάση CD117 (cKit) ανοσοανίχνευση. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 6Α, ο αριθμός των μαστοκυττάρων ήταν υψηλότερη στον ιστό του όγκου σε σύγκριση με υγιή ιστό δότη [103 (88 … 122) έναντι 11 (2 … 48)] και ουσιαστικά αυξημένα σε καρκίνο σταδίου ΙΙΙ σε σύγκριση με το στάδιο Ι [183 (157 … 213) έναντι 61 (30 … 124), το Σχ 6C]. Εμείς δεν εντοπίζονται τυχόν διαφορές μεταξύ των δειγμάτων ανάλογα με τον τύπο του καρκίνου, το μέγεθος του όγκου ή κομβικά κατάσταση (Σχήμα 6Β και 6D-6F).

array Ανθρωπίνων καρκίνο του πνεύμονα ιστού βάφονται με CD117 (cKit) αντισωμάτων για την ανίχνευση μαστοκύτταρα . (Α) Ποσοτικοποίηση των CD117

+ κυττάρων στον καρκίνο του πνεύμονα εναντίον υγιή δείγματα δότη. (Β-Ε) Ποσοτικοποίηση των CD117

+ κυττάρων με βάση την (Β) παθολογία τους, (Γ) το στάδιο του καρκίνου, (D) το μέγεθος του όγκου, και (Ε) κομβικό κατάσταση. Οι αριθμοί των κυττάρων δίνονται ως CD117-θετικά κύτταρα ανά 1000 κύτταρα. (F) Αντιπροσωπευτικές εικόνες των ανθρώπινων τμημάτων του πνεύμονα χρωματίστηκαν με CD117 αντίσωμα με βάση την παθολογία τους. μπαρ κλίμακας = 25 μm.

Η

κοκκιοκύτταρα.

Ο αριθμός των διηθητικών ουδετερόφιλων κοκκιοκυττάρων προσδιορίστηκε με βάση την MPO ανοσολογική αντίδραση. Παρόμοια με τα προηγούμενα αποτελέσματα, βρήκαμε αυξημένους αριθμούς ουδετερόφιλων στον καρκινικό ιστό σε σύγκριση με υγιή δότη πνεύμονες [74 (62 … 88) έναντι 8 (2 … 34), το Σχ 7Α] και στα προχωρημένα στάδια του καρκίνου [σταδίου ΙΙΙ : 125 (107 … 145) εναντίον στάδιο Ι: 37 (17 … 78), σχήμα 7C]. Ομοίως, δεν υπήρχε συσχέτιση μεταξύ του αριθμού των ουδετερόφιλων και τον τύπο του καρκίνου, το μέγεθος του όγκου ή κομβικά κατάσταση (Εικ 7Β και 7D-7F).

συστοιχίας ανθρώπινου ιστού καρκίνου του πνεύμονα χρωματίστηκε με ΜΡΟ αντίσωμα για να ανιχνεύσει τα ουδετερόφιλα κοκκιοκύτταρα. (Α) Ποσοτικοποίηση των MPO

+ κυττάρων στον καρκίνο του πνεύμονα εναντίον υγιή δείγματα δότη. (Β-Ε) Ποσοτικοποίηση των ΜΡΟ

+ κυττάρων με βάση την (Β) παθολογία τους, (Γ) το στάδιο του καρκίνου, (D) το μέγεθος του όγκου, και (Ε) κομβικό κατάσταση. Οι αριθμοί των κυττάρων δίνονται ως ΜΡΟ-θετικά κύτταρα ανά 1000 κύτταρα. (F) Αντιπροσωπευτικές εικόνες των ανθρώπινων τμημάτων του πνεύμονα χρωματίστηκαν με ΜΡΟ αντισωμάτων με βάση την παθολογία τους. Κλίμακα ράβδου = 25 μm.

Η

Β κύτταρα και τα δενδριτικά κύτταρα.

Στη συνέχεια, με βάση την έκφραση του CD20 και CD11c, αξιολογήσαμε τον αριθμό των ογκο-διηθητικά κύτταρα Β και του δενδριτικά κύτταρα (μαζί με τα μονοκύτταρα, μακροφάγα, και ουδετερόφιλα) αντιστοίχως. Βρήκαμε μια αύξηση σε CD20

+ Β κύτταρα εντός του ιστού του όγκου σε σύγκριση με τα υγιή δείγματα [39 (30 … 49) έναντι 5 (1 … 34), το Σχ 8Α]. Ο αριθμός των CD20

+ κύτταρα επίσης αυξημένα σε στάδιο III εναντίον δείγματα καρκίνου του σταδίου Ι [75 (62 … 92) έναντι 9 (2 … 41), το Σχ 8C]. Οι αριθμοί των του CD20

+ Β κύτταρα σε ιστό καρκίνου ήταν ανεξάρτητη από τον τύπο του καρκίνου και το μέγεθος του όγκου (Σχ 8Β, 8D και 8F). Ένα σημαντικά μεγαλύτερο αριθμό διηθητικών κυττάρων Β ανιχνεύθηκε σε δείγματα όγκου N0 σε σύγκριση με Ν1 + 2 δείγματα [45 (34 … 59) έναντι 29 (18 … 49] (Εικόνα 8Ε). Ομοίως, ο αριθμός των δενδριτικών κυττάρων ήταν σημαντικά αυξημένη μέσα στον ιστό του όγκου όπως αξιολογήθηκε από CD11c ανοσοχρώση [28 (24 … 32) έναντι 6 (3 … 16), το Σχ 9Α]. Περαιτέρω, ο αριθμός των CD11c

+ κυττάρων στον ιστό του όγκου ήταν ανεξάρτητη του τύπου του καρκίνου ( Σχήμα 9Β και 9F), αν και ο αριθμός των διηθητικών κυττάρων ήταν αυξημένη στα τελευταία στάδια του καρκίνου του πνεύμονα [47 (40 … 56) σταδίου III έναντι 11 (4 … 28) καρκίνο του πνεύμονα σταδίου Ι, Σχήμα 9Γ]. ο αριθμός των CD11c

+ δενδριτικά κύτταρα σε δείγματα όγκων ήταν ανεξάρτητη του μεγέθους του όγκου και των κομβικών κατάσταση (Σχήμα 9δ και 9ε).

array Ανθρωπίνων καρκίνο του πνεύμονα ιστού χρώση με CD20 αντισωμάτων για την ανίχνευση των κυττάρων Β. (Α) Ποσοτικοποίηση CD20

+ κυττάρων στον καρκίνο του πνεύμονα εναντίον υγιή δείγματα δότη. (Β-Ε) Ποσοτικοποίηση των CD20

+ κυττάρων με βάση την (Β) παθολογία τους, (Γ) το στάδιο του καρκίνου, (D) το μέγεθος του όγκου, και ( οι Ε) κομβικά κατάσταση. οι αριθμοί των κυττάρων δίδεται ως CD20-θετικά κύτταρα ανά 1000 κύτταρα. (F) Αντιπροσωπευτικές εικόνες των ανθρώπινων τμημάτων του πνεύμονα χρωματίστηκαν με CD20 αντίσωμα με βάση την παθολογία τους. μπαρ κλίμακας = 25 μm.

Η

array Ανθρωπίνων καρκίνο του πνεύμονα ιστού χρωματίστηκε με αντίσωμα CD11c για την ανίχνευση δενδριτικών κυττάρων. (Α) Ποσοτικοποίηση των CD11c

+ κυττάρων στον καρκίνο του πνεύμονα εναντίον υγιή δείγματα δότη. (Β-Ε) Ποσοτικοποίηση των CD11c

+ κυττάρων με βάση την (Β) παθολογία τους, (Γ) το στάδιο του καρκίνου, (D) το μέγεθος του όγκου, και (Ε) κομβικό κατάσταση. Οι αριθμοί των κυττάρων δίνονται ως CD11c-θετικά κύτταρα ανά 1000 κύτταρα. (F) Αντιπροσωπευτικές εικόνες των ανθρώπινων τμημάτων του πνεύμονα χρωματίστηκαν με αντίσωμα CD11c με βάση την παθολογία τους. μπαρ κλίμακας = 25 μm.

Η

MUM1- και PD1-θετικών κυττάρων.

Εμείς αξιολογήθηκαν τα επίπεδα έκφρασης των δύο επιπλέον ανοσοποιητικού δείκτες. MUM1 ετικέτες πλασματοκύτταρα και ενεργοποιημένα Τ κύτταρα, ενώ οι ετικέτες PD1 ενεργοποιημένα Τ κύτταρα, Β κύτταρα, μυελοειδή κύτταρα και ένα υποσύνολο των θυμοκυττάρων. Τόσο MUM1-θετικών κυττάρων και PD1-θετικών κυττάρων ήταν αυξημένα σε καρκινικό ιστό σε σύγκριση με τους πνεύμονες ελέγχου [

+ κύτταρα MUM1: 65 (52 … 81) έναντι 6 (1 … 50), PD1

+ κύτταρα: 26 (21 … 32) έναντι 9 (3 … 24), σχήματα 10Α και 11Α]. Ο επιπολασμός της MUM1-θετικών κυττάρων ήταν ανεξάρτητη από τον τύπο του καρκίνου, το στάδιο, το μέγεθος του όγκου και κομβικών κατάσταση (Σχήμα 10Β-10Ρ). Ο αριθμός των

+ κύτταρα PD1 συσχετίζεται με το στάδιο του καρκίνου [σταδίου III: 49 (41 … 58) εναντίον στάδιο I: 5 (1 … 22), Σχήμα 11C], αλλά δεν υπήρχε συσχέτιση με τον τύπο του καρκίνου , το μέγεθος του όγκου ή κομβικά κατάσταση (σχήμα 11 Β και 11D-11F).

συστοιχίας ανθρώπινου ιστού καρκίνου του πνεύμονα χρωματίστηκε με MUM1 αντίσωμα για να ανιχνεύσει κύτταρα πλάσματος και ενεργοποιημένα Τ κύτταρα. (Α) Ποσοτικοποίηση των MUM1

+ κυττάρων στον καρκίνο του πνεύμονα εναντίον υγιή δείγματα δότη. (Β-Ε) Ποσοτικοποίηση των MUM1

+ κυττάρων με βάση την (Β) παθολογία τους, (Γ) το στάδιο του καρκίνου, (D) το μέγεθος του όγκου, και (Ε) κομβικό κατάσταση. Οι αριθμοί των κυττάρων δίνονται ως MUM1-θετικά κύτταρα ανά 1000 κύτταρα. (F) Αντιπροσωπευτικές εικόνες των ανθρώπινων τμημάτων του πνεύμονα χρωματίστηκαν με MUM1 αντίσωμα με βάση την παθολογία τους. Κλίμακα ράβδου = 25 μm.

Η

συστοιχία Ανθρώπινα καρκίνο του πνεύμονα ιστός χρωματίστηκε με PD1 αντίσωμα για την ανίχνευση ενεργοποιημένων κυττάρων Τ, τα κύτταρα Β, μυελοειδή κύτταρα, και ένα υποσύνολο των θυμοκυττάρων. (Α) Ποσοτικοποίηση των PD1

+ κυττάρων στον καρκίνο του πνεύμονα εναντίον υγιή δείγματα δότη. (Β-Ε) Ποσοτικοποίηση των PD1

+ κυττάρων με βάση την (Β) παθολογία τους, (Γ) το στάδιο του καρκίνου, (D) το μέγεθος του όγκου, και (Ε) κομβικό κατάσταση. Οι αριθμοί των κυττάρων δίνονται ως PD1-θετικά κύτταρα ανά 1000 κύτταρα. (F) Αντιπροσωπευτικές εικόνες των ανθρώπινων τμημάτων του πνεύμονα χρωματίστηκαν με PD1 αντίσωμα με βάση την παθολογία τους. μπαρ κλίμακας = 25 μm.

Η

Συζήτηση

Σε αυτή τη μελέτη, χρησιμοποιώντας συστοιχίες ιστών και ανοσοϊστοχημεία, έχουμε διεξοδικά αναλύθηκε σύνθεση στρωματικών κυττάρων σε διαφορετικούς ανθρώπινους τύπους καρκίνου του πνεύμονα, το βαθμό και το στάδιο. Σε συνδυασμό με ένα ανοσοϊστοχημική ανάλυση, χρησιμοποιήσαμε επίσης μια κυτο- /ιστομορφολογική εκτίμηση των κυττάρων. Αυτός ο συνδυασμός μας επέτρεψε να ταξινομήσει /subclassify όγκους με ακρίβεια και να εκτελέσει μια ανάλυση υψηλής απόδοσης της σύνθεσης στρωματικών κυττάρων σε τύπους όγκων με διακύμανση μεταξύ των ατόμων. Σημαντικά, παρατηρήσαμε εκτεταμένη ανοσολογική και φλεγμονώδη διήθηση των κυττάρων σε δείγματα ανθρώπινου καρκίνου του πνεύμονα. Εμείς περιεκτικά χαρακτηριστεί και ποσοτικοποιούνται Τ λεμφοκύτταρα (CD3 +), κυτταροτοξικά-Τ-λεμφοκύτταρα (CD8 +), Τ-βοηθητικά κύτταρα (CD4 +), Β κύτταρα (CD20 +), μακροφάγα (CD68 +), ιστιοκύτταρα (CD117 +), μονοπύρηνα κύτταρα (CD11c +), πλασματοκύτταρα και ενεργοποιημένα Τ κύτταρα (MUM1 +), ενεργοποιημένα Τ κύτταρα, Β κύτταρα, και τα μυελοειδή κύτταρα (PD1 +), και ουδετερόφιλα κοκκιοκύτταρα (μυελοϋπεροξειδάσης +) σε διάφορους τύπους καρκίνου του πνεύμονα, τα στάδια του καρκίνου, και κομβικών κατάσταση.

Σε συμφωνία με τις μελέτες του Ruffini

et al

. [16], βρήκαμε μια αύξηση του αριθμού των CD3

+ λεμφοκυττάρων σε ιστούς καρκίνου του πνεύμονα σε σύγκριση με υγιείς πνεύμονες δότη. Ωστόσο, η ανάλυση του τρόπου με τον Τ κυττάρων επηρεάζει την κλινική έκβαση συχνά απέδωσε αντιφατικά αποτελέσματα. Kilic

et al

. [18] ανέφεραν ότι τα υψηλότερα επίπεδα των λεμφοκυττάρων που διηθούν όγκο εντός μεγάλους όγκους πνεύμονα συσχετίζονται με μειωμένο κίνδυνο υποτροπής της νόσου, ενώ Kawai

κ.ά.

. αναφερθεί καμία συσχέτιση μεταξύ του αριθμού των λεμφοκυττάρων που διηθούν όγκο και την επιβίωση των ασθενών [17]. Στη μελέτη μας, εκτός από την γενική ανάλυση των λεμφοκυττάρων που διηθούν όγκο, ανάλυση ειδικών υποσυνόλων Τ-κυττάρων έδειξαν σημαντική αύξηση στην ογκο-διηθητικά Τ βοηθητικά κύτταρα (CD4

+) καθώς επίσης και κυτταροτοξικά Τ κύτταρα (CD8

+) σε σύγκριση με τους υγιείς πνεύμονες του δότη. Τα ογκο-διηθητικά λεμφοκύτταρα πιστεύεται ότι παίζουν ένα σημαντικό ρόλο στην αντικαρκινική ανοσοεπιτήρηση [17]. CD8

+ Τ κύτταρα αναγνωρίζουν και καταστρέφουν τα καρκινικά κύτταρα, ενώ CD4

+ κύτταρα CD8 βοηθήσει

+ Τ κύτταρα στην απόρριψη του όγκου. Ως εκ τούτου, ο αριθμός και εντοπισμός τους στον ιστό του όγκου μπορεί να επηρεάζουν την γένεσιν όγκων [26]. Αν και υψηλή περιεκτικότητα σε αριθμό, CD8

+ Τ κύτταρα που διηθούν όγκους του πνεύμονα μπορεί να είναι δυσλειτουργική οφείλονται σε παράγοντες μικροπεριβάλλοντος όγκου τα οποία μπορεί στη συνέχεια να οδηγήσει σε μείωση του αριθμού των τελεστών CD8

+ Τ κύτταρα [27]. Αυτά μεταβληθεί CD8

+ Τ κύτταρα μπορούν ακόμη και απελευθερώνουν ενώσεις που προάγουν την εξέλιξη του όγκου. Έτσι, μια βαθύτερη κατανόηση και την ανατομή της συμβολής των διαφόρων CD4

+ και CD8

+ Τ υποπληθυσμών κυττάρων (π.χ., Th1, Th2, Th17, TC9, Tc17) είναι απαραίτητη.

Μεταξύ των φαγοκυττάρων και κοκκιοκύτταρα, παρατηρήσαμε ότι μεγαλύτεροι αριθμοί από διηθούντα μακροφάγα, σιτευτικά κύτταρα και ουδετερόφιλα συσχετίζεται θετικά με το στάδιο του όγκου σε ασθενείς με καρκίνο του πνεύμονα του ανθρώπου. Η πυκνότητα των μακροφάγων εντός νησίδων του όγκου και η αναλογία των μακροφάγων που βρίσκονται σε αυτές τις νησίδες με τα στρωματικά μακροφάγα είναι θετικά προγνωστικοί παράγοντες για την επιβίωση των ασθενών [17, 28]. Αντίθετα, άλλες μελέτες έχουν δείξει ότι τόσο Μ1 και Μ2 μακροφάγα ευνοούν την καρκινογένεση [29] και τους αριθμούς τους στο εσωτερικό της καρκίνος μπορεί να είναι αρνητικό προγνωστικούς παράγοντες [30]. Παρατηρήσαμε ότι διήθηση μακροφάγων συσχετίζεται θετικά με το στάδιο του όγκου και κομβικών κατάσταση /μετάστασης σε ανθρώπους ασθενείς με καρκίνο του πνεύμονα που υποδηλώνει μια σημαντική συμβολή αυτών των μακροφάγων που σχετίζονται με όγκους στην πρόοδο του καρκίνου του πνεύμονα και τη μετάσταση. Να επιβεβαιώνουν τη σημασία των μακροφάγων, μελλοντικές μελέτες θα πρέπει να αντιμετωπίσει τις υποτύπων των μακροφάγων παρόντες στο μικροπεριβάλλον του όγκου του πνεύμονα αφού πρόσφατες μελέτες δείχνουν ότι κατά τη διάρκεια της καρκινογένεσης, μακροφάγα μπορεί να πολώσει να Μ1 (αντι-ογκογόνο) και Μ2 (που συμβάλλουν στην καρκινογένεση) υποτύπους και έτσι μπορεί να ασκήσει διαφορετικά αποτελέσματα [31]. Επιπλέον, πρέπει να κατανοήσουμε πώς η αμφίδρομη διαγώνια συζήτηση μεταξύ μακροφάγα και καρκινικά κύτταρα επηρεάζει αυτά τα κύτταρα, καθώς και τεμαχίζοντας των υποκείμενων μοριακών μηχανισμών [32]. Έχουμε υπό την προϋπόθεση πρόσφατα στοιχεία που αποδεικνύουν ότι μακροφάγων και των καρκινικών κυττάρων cross talk μέσω CCR2 και CX3CR1, ένα θεμελιώδη μηχανισμό του καρκίνου του πνεύμονα οδήγηση [12]. Τα ευρήματα αυτά υποδηλώνουν ότι η θεραπευτική στρατηγική του αποκλεισμού CCR2 και CX3CR1 μπορεί να αποδειχθεί ευεργετική για την ανάσχεση της εξέλιξης του καρκίνου του πνεύμονα.

Όσον αφορά τα μαστοκύτταρα, Ουαλίας και οι συνεργάτες του [28] έδειξε ότι η αυξημένη αναλογία των νησιδίων /στρωματικών μαστοκυττάρων είναι μια συμφέρουσα ανεξάρτητο προγνωστικό παράγοντα, ενώ Kawai

et al

. [17] βρήκαν καμία συσχέτιση με την κλινική έκβαση. Εδώ, δείξαμε ότι ο αριθμός μαστοκυττάρων ήταν υψηλότερα σε καρκινικό ιστό σε σύγκριση με υγιείς δότες και ουσιαστικά αυξημένα σε καρκίνο σταδίου ΙΙΙ σε σχέση με το στάδιο Ι

ουδετερόφιλων κοκκιοκυττάρων δίνεται μεγαλύτερη προσοχή ως ένα νέο είδος από όγκο διηθητικά ανοσοποιητικών κυττάρων που παίζει ένα ρόλο στην ανάπτυξη του όγκου. Ωστόσο, λίγα είναι γνωστά για τον ρόλο τους στον καρκίνο του πνεύμονα. Έχει προταθεί ότι η αυξημένη οι αριθμοί ουδετερόφιλων παρατηρήθηκαν στο βρογχοκυψελιδικό έκπλυμα υγρό ασθενών με καρκίνωμα βρογχιολοκυψελιδικό, και χρησιμεύει ως ένα ανεξάρτητο προγνωστικό της κλινικής έκβασης [33]. Εδώ δείχνουμε έναν αυξημένο αριθμό ουδετερόφιλων σε δείγματα καρκίνου του πνεύμονα σε σύγκριση με υγιή πνεύμονα και μια ισχυρή συσχέτιση με προχωρημένα στάδια καρκίνου του πνεύμονα.

Τα δενδριτικά κύτταρα είναι ένας ισχυρός, ετερογενή ομάδα αντιγονοπαρουσιαστικά κύτταρα που είναι σημαντικά για την πρωτογενή ανοσοαποκρίσεις προς καρκίνωμα. Βρήκαμε μια σημαντική αύξηση στην CD11c-θετικών κυττάρων εντός της μάζας του όγκου σε δείγματα καρκίνου του προχωρημένου σταδίου σε σύγκριση με υγιείς δότες. Θεωρούμε ότι η συντριπτική πλειοψηφία αυτών των κυττάρων αντιστοιχούν σε δενδριτικά κύτταρα, αλλά δεν μπορούμε να αποκλείσουμε την πιθανότητα ότι ένα τμήμα μπορεί να είναι μονοκύτταρα, μακροφάγα ή ουδετερόφιλα, οι οποίες εκφράζουν επίσης CD11c [34]. Αν και δεν αξιολογούν την ωριμότητα των δενδριτικών κυττάρων, προηγούμενη εργασία [35] υπαινιχθεί ότι τουλάχιστον μερικά από τα δενδριτικά κύτταρα όγκου-διηθητικά εμφανίσει ένα ανώριμο φαινότυπο στον καρκίνο του πνεύμονα μη-μικρού κυττάρου και ότι αυτό μπορεί να οφείλεται σε διάφορους από όγκο προέρχεται παράγοντες.

Μεταξύ των άλλων κυττάρων που εμφανίζουν αντιγόνο, βρήκαμε έναν αυξημένο αριθμό CD20 θετικών Β κυττάρων σε δείγματα καρκίνου του πνεύμονα σε σύγκριση με υγιή ιστό δότη. Καθώς ο ρόλος των Β κυττάρων στο εξέλιξης του καρκίνου είναι μάλλον αμφισβητήσιμη [16, 19, 36], μπορούμε επιπλέον να εκτιμηθεί ο αριθμός των MUM1-θετικών κυττάρων πλάσματος στον όγκο και υγιές ανθρώπινο ιστό πνεύμονα. Τα κύτταρα πλάσματος προέρχονται από Β κύτταρα κατά την συνάντησή τους με ένα ξένο αντιγόνο και είναι οι μόνοι παραγωγοί των αντισωμάτων [37]. Βρήκαμε αυξημένους αριθμούς κυττάρων του πλάσματος σε καρκινικό ιστό σε σύγκριση με τους πνεύμονες του δότη, ένα αποτέλεσμα που ήταν ανεξάρτητη από το στάδιο του καρκίνου, καθώς και άλλες παραμέτρους που μετρήθηκαν. Ο ρόλος των κυττάρων του πλάσματος σε στερεούς όγκους δεν έχει εντατικά διερευνηθεί, και υπάρχουν έτσι μόνο μερικές αναφορές του ρόλου τους στον καρκίνο του πνεύμονα. Lohr και οι συνεργάτες του έδειξαν ότι η διήθηση των ώριμων κυττάρων πλάσματος στον ιστό των όγκων συσχετίζεται με παρατεταμένη επιβίωση [38]. Μια άλλη μελέτη ανέφερε διείσδυση των κυττάρων του πλάσματος IgG4 θετικών δειγμάτων Ι ακανθοκυτταρικό καρκίνωμα στάδιο που σχετίζεται με ευνοϊκή πρόγνωση [39].

PD1 είναι μέλος της υπερ-οικογένειας ανοσοσφαιρίνης που βρέθηκαν κυρίως σε ανώριμα CD4

-CD8