Αφηρημένο

Οι κλινικές παρατηρήσεις και μοντέλα ποντικών έχουν δείξει ότι η φλεγμονή μπορεί να είναι προ-ογκογόνο. Από χημειοκινών είναι κρίσιμης σημασίας στη διακίνηση των λευκοκυττάρων, υποθέσαμε ότι οι χημειοκίνες παίζουν ουσιαστικό ρόλο στην ανάπτυξη καρκίνων που σχετίζονται με φλεγμονή. Διαλογή για 37 χημειοκινών σε κυτταρικές σειρές καρκίνου του προστάτη και ξενομοσχεύματα αποκάλυψε CXCL16, τον συνδετήρα για τον υποδοχέα CXCR6, ως το πιο εκφράζεται με συνέπεια χημειοκίνης. Ανοσοϊστοχημεία και /ή ανοσοφθορισμό και συνεστιακή απεικόνιση 121 δείγματα ανθρώπινου προστάτη έδειξαν ότι CXCL16 και CXCR6 συν-εκφράζονται, τόσο σε κύτταρα καρκίνου προστάτη και των παρακείμενων Τ κύτταρα. επίπεδα έκφρασης CXCL16 και CXCR6 σε καρκινικά κύτταρα συσχετίζεται με κακή προγνωστικά χαρακτηριστικά όπως υψηλής στάδιο και υψηλής ποιότητας, και η έκφραση συσχετίζεται επίσης με μετα-φλεγμονώδεις αλλαγές στο στρώμα του καρκίνου, όπως αποκαλύπτεται από την απώλεια του α-ακτίνη των λείων μυών. Επιπλέον, CXCL16 ενίσχυσε την ανάπτυξη των καρκινικών CXCR6 εκφράζουν και πρωτογενή κύτταρα Τ CD4. Μελετήσαμε την έκφραση του CXCL16 σε επιπλέον 461 δείγματα που καλύπτουν 12 τύπους όγκων, και βρήκαν ότι CXCL16 εκφράστηκε σε πολλαπλούς ανθρώπινους καρκίνους που σχετίζονται με φλεγμονή. Η μελέτη μας είναι η πρώτη για να περιγράψει την έκφραση του CXCL16 /CXCR6 στις δύο καρκινικών κυττάρων και των παρακείμενων κυττάρων Τ στον άνθρωπο, και να καταδείξει συσχετισμούς μεταξύ CXCL16 και CXCR6 εναντίον φτωχών τόσο προγνωστικά χαρακτηριστικά και αντιδραστικές αλλαγές στο στόμιο του καρκίνου. Λαμβανόμενα μαζί, τα δεδομένα μας υποδηλώνουν ότι CXCL16 και CXCR6 μπορεί να σηματοδοτήσει καρκίνων που προκύπτουν σε περιβάλλον φλεγμονής και μεσολαβούν προ-ογκογόνο επιδράσεις της φλεγμονής μέσω της άμεσης επιδράσεις στην ανάπτυξη των καρκινικών κυττάρων και επάγοντας τη μετανάστευση και τον πολλαπλασιασμό του που σχετίζονται με όγκους τα λευκοκύτταρα.

Παράθεση: Darash-Yahana Μ, Gillespie JW, Hewitt SM, Chen Υ-YK, Maeda S, Stein Ι, et al. (2009) Η χημειοκινών CXCL16 και του υποδοχέα του, CXCR6, ως δείκτες και υποστηρικτές του που σχετίζεται με φλεγμονή καρκίνοι. PLoS ONE 4 (8): e6695. doi: 10.1371 /journal.pone.0006695

Επιμέλεια: Derya Unutmaz, New York University School of Medicine, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 6, Απριλίου 2009? Αποδεκτές: 21, Ιουλ 2009? Δημοσιεύθηκε: 19 Αύγ 2009

Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της δήλωσης Creative Commons Public Domain που ορίζει ότι, μόλις τοποθετηθεί στο δημόσιο τομέα, το έργο αυτό μπορεί να αναπαραχθεί ελεύθερα, διανεμηθεί, μεταδοθεί, τροποποιηθεί, χτισμένο πάνω, ή ειδάλλως να χρησιμοποιηθεί από οποιονδήποτε για οποιονδήποτε νόμιμο σκοπό

Χρηματοδότηση:. η έρευνα αυτή χρηματοδοτήθηκε εν μέρει από το εσωτερικό ερευνητικό πρόγραμμα του Εθνικού Ινστιτούτου Υγείας, Εθνικό Ινστιτούτο Αλλεργιών και Λοιμωδών Νοσημάτων και το Εθνικό Ινστιτούτο Καρκίνου. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Πρόσφατα μοντέλα ποντικών έχουν κάνει μια λειτουργική σύνδεση μεταξύ του καρκίνου και φλεγμονής [1] – [3], παρέχοντας στοιχεία για την δραστηριότητα του όγκου προώθηση των λευκοκυττάρων, όπως είχε αρχικά προταθεί από τον Rudolf Virchow [4], [5]. καρκίνος του Ανθρώπου του προστάτη έχει υποτεθεί ότι προκύπτει από προκαρκινικών διαδικασίες που συνδέονται με φλεγμονή, όπως πολλαπλασιαστική φλεγμονώδεις ατροφία (ΡΙΑ) [6], τα οποία βρίσκονται δίπλα σε καρκίνο του προστάτη που προτείνονται να οδηγήσει σε προστατική ενδοεπιθηλιακή νεοπλασία (ΡΙΝ) ή του καρκίνου [βλάβες ,,,0],7]

Ανάμεσα στους παράγοντες σημαντικοί για τη φλεγμονή είναι χημειοκινών -. χημειοτακτικής κυτοκίνες, οι οποίες μεσολαβούν πρόσληψης λευκοκυττάρων [8]. έχουν διαφορετικούς ρόλους έχουν αναφερθεί για χημειοκινών στη βιολογία του όγκου, συμπεριλαμβανομένων των άμεσων επιπτώσεων σε καρκινικά κύτταρα, όπως σε μετασχηματισμό, την επιβίωση και τον πολλαπλασιασμό, και έμμεσες επιδράσεις, όπως στην αγγειογένεση και στην πρόσληψη λευκοκυττάρων σε θέσεις όγκου [9] – [11] . Λόγω της πρόσφατης ενδείξεις για πιθανή προ-ογκογόνο δράση των λευκοκυττάρων, υποθέσαμε ότι φλεγμονώδεις χημειοκίνες, είτε παράγεται από τα κύτταρα του όγκου ή με όγκους που συνδέονται λευκοκύτταρα, ίσως, σε αντίθεση με το πρότυπο άποψη, συνεισφέρουν στην κακοήθη εξέλιξη με την ενίσχυση της πρόσληψης λευκοκυττάρων .

στις μελέτες που περιγράφονται παρακάτω, μία οθόνη για την έκφραση των χημειοκινών 37 σε κυτταρικές σειρές καρκίνου του προστάτη και ξενομοσχεύματα αποκάλυψε υψηλού επιπέδου έκφραση του CXCL16, μια ασυνήθιστη χημειοκίνης που υπάρχει και στις δύο διαμεμβρανικές και διαλυτές μορφές [12], [13], και ότι μπορεί επίσης να λειτουργεί ως υποδοχέας σαρωτής για οξειδωμένη λιποπρωτεϊνη και βακτήρια [14]. έκφραση CXCL16 έχει συσχετιστεί με έναν αριθμό ανθρώπινων φλεγμονωδών ασθενειών, συμπεριλαμβανομένης της ρευματοειδούς αρθρίτιδας [15], [16], διάμεσες πνευμονοπάθειες [17], [18], η αρτηριοσκλήρωση [19] – [23], στεφανιαία νόσο [24], [25] και του ήπατος ζημίας [26] – [30]. Ο υποδοχέας CXCL16, CXCR6, έχει αναφερθεί ότι εκφράζεται σε κύτταρα Th1 [31], σε λεμφοκύτταρα που διηθούν όγκο [32], και σε μια ποικιλία λευκοκυττάρων σε φλεγμονώδεις θέσεις ιστού [33], [34], και μπορεί να χρησιμεύσει ως ένα συν-υποδοχέα για τον ιό HIV-1 [32], [35].

η μελέτη μας δείχνει την άμεση ρόλους για CXCL16-CXCR6 για τον καρκίνο του προστάτη, αποδεικνύοντας συν-εντοπισμό των CXCL16 και CXCR6 σε καρκινικά κύτταρα, βρίσκοντας σημαντικές θετικές συσχετίσεις μεταξύ της έκφρασης των CXCL16 και CXCR6 εναντίον του σταδίου και του βαθμού του καρκίνου του προστάτη, και δείχνουν ότι CXCL16 μπορεί να τονώσει την ανάπτυξη των καρκινικών κυτταρικών σειρών προστάτη επιμολυνθεί για να εκφράσουν CXCR6.

Οι μελέτες μας για τη σχέση μεταξύ CXCL16 /CXCR6, φλεγμονή, και του καρκίνου δείχνουν ότι CXCL16 είναι ρυθμισμένα προς τα πάνω σε προ-νεοπλασματικές αλλοιώσεις που συνδέονται με φλεγμονή, ότι η έκφραση του CXCL16 και CXCR6 μπορεί να προκληθεί σε επιθήλιο προστάτη από φλεγμονώδεις κυτοκίνες, και ότι CXCL16 /CXCR6 είναι υψηλότερη στις κύτταρα καρκίνου του προστάτη που περιβάλλεται από αντιδραστική, δηλαδή μετα-φλεγμονώδη στρώμα. Μπορούμε επίσης έδειξε ότι τα Τ κύτταρα που γειτνιάζουν με τα καρκινικά κύτταρα εκφράζουν CXCL16 /CXCR6, ότι CXCL16 παράγεται κατά προτίμηση με CD4

+ CXCR6

+ Τ κύτταρα, και ότι μπορεί να ενισχύσει CXCL16 τον πολλαπλασιασμό των Τ κυττάρων. Τέλος δείχνουμε CXCL16 σε πολλαπλούς ανθρώπινους καρκίνους που σχετίζονται με φλεγμονή. Μαζί τα δεδομένα μας δείχνουν ότι CXCL16 και CXCR6 μπορεί να συμβάλει στην πρόοδο του όγκου άμεσα μέσω επιδράσεις στην ανάπτυξη των καρκινικών κυττάρων, και έμμεσα, μέσω της ενίσχυσης της πρόσληψης λευκοκυττάρων και τον πολλαπλασιασμό και τις αλληλεπιδράσεις μεταξύ λευκοκυττάρων και προ-κακοήθη /κακοήθη κύτταρα.

Αποτελέσματα

τα κακοήθη κύτταρα του προστάτη εκφράζουν CXCL16 και CXCR6

προκειμένου να διερευνηθούν οι ρόλοι των χημειοκινών στον καρκίνο του προστάτη, εμείς διαλογή κυτταρικών σειρών καρκίνου του προστάτη και ξενομοσχεύματα για έκφραση των mRNAs για 37 χημειοκινών, και βρήκαν ότι το mRNA για CXCL16 ήταν η εκφρασμένη πιο σταθερά (Σχήμα 1Α, Β). επιφανειακή έκφραση των κυττάρων του CXCL16 βρέθηκε σε PC3, DU145 και 22Rv1 κυττάρων του προστάτη γραμμές (σχήμα 1Γ). Ανοσοϊστοχημική ανάλυση των ιστών του προστάτη έδειξαν χαμηλή ή καθόλου χρώση για CXCL16 και χαμηλή χρώση για τον υποδοχέα της, CXCR6 σε κανονικό ανθρώπινο επιθήλιο του προστάτη, αλλά εξέχουσα έκφραση στον καρκίνο (Σχήμα 1 D). Επιπλέον, ένας συσχετισμός μεταξύ των επιπέδων έκφρασης του CXCL16 και CXCR6 βρέθηκε με την ανάλυση μιας σειράς σαράντα περιπτώσεις καρκίνου του προστάτη, και CXCL16 και CXCR6 μπορεί να αποδειχθεί ότι είναι συν-εκφράζεται σε μεμονωμένες καρκινικών κυττάρων με μικροσκοπία ανοσοφθορισμού συνεστιακή (Σχήμα 1 Ε) .

(Α) Η έκφραση του mRNA για 37 χημειοκινών μελετήθηκε με RT-PCR σε ξενομοσχεύματα (CWR22, WISH PC14) και κυτταρικές σειρές όγκων του προστάτη (PC3, DU145, LNCaP). Οι συστηματικές και μη συστηματικές ονόματα για χημειοκινών απεικονίζεται. Αμπλικόνια αναλύθηκαν με ηλεκτροφόρηση πηκτής αγαρόζης και οπτική επιθεώρηση μετά από χρώση με βρωμιούχο αιθίδιο. Ακολουθίες των εκκινητών είναι διαθέσιμα κατόπιν αιτήματος. Τα επίπεδα έκφρασης αξιολογήθηκαν ως εξής: καθόλου έκφραση (-), χαμηλή έκφραση (- +), μέτρια έκφραση (+), και υψηλή έκφραση (++). Ανάλογα με την χημειοκίνη, η ανάλυση έγινε από μία έως τέσσερις φορές. έκφρασης (Β) mRNA χημειοκινών σε καρκινικές κυτταρικές σειρές προστάτη. Η έκφραση των mRNAs για 14 χημειοκίνες μελετήθηκε με πραγματικού χρόνου RT-PCR σε κυτταρικές γραμμές όγκου τέσσερα προστάτη (PC3, DU145, LNCaP, 22Rv1). Η αξία των 2

-ΔCT υπολογίστηκε και στη συνέχεια κανονικοποιούνται με τον υψηλότερο αριθμό για μια δεδομένη κυτταρική γραμμή, η οποία δόθηκε την αξία των 100, όπου ΔCt = CT (χημειοκίνη) -CT (GAPDH). Οι αριθμοί είναι μέσοι όροι δύο προσδιορισμών από ένα αντιπροσωπευτικό πείραμα από δυο που εκτελούνται. (Γ) Ανάλυση κυτταρομετρίας ροής της επιφανειακής έκφρασης του CXCL16 επί καρκινικών κυτταρικών γραμμών προστάτη. PC3, 22Rv1 και DU145 κύτταρα επωάστηκαν χωρίς πρωτογενές αντίσωμα (μαύρο σκίαση), με κατσίκα αντι-ανθρώπινο CCL4 ως επιπρόσθετος έλεγχος (ανοιχτό γκρι γραμμή), ή με γίδινο αντι-ανθρώπινο CXCL16 (σκούρο γκρι γραμμή) και στη συνέχεια βάφτηκαν με αντι-κουνελιού -goat IgG-FITC. Τα δεδομένα είναι από ένα αντιπροσωπευτικό πείραμα από τρία που εκτελούνται. (D) Η χρώση για CXCL16 και CXCR6 σε δείγματα προστατεκτομή χρησιμοποιώντας DAB (καστανό) για την ανίχνευση παρουσιάζεται για: κανονικό προστάτη και του καρκίνου του προστάτη. Πάνελ είναι αντιπροσωπευτική της πάνω από 80 καρκίνους του προστάτη περιπτώσεις που εξετάστηκαν. Κάθε πίνακας περιλαμβάνει έναν ενισχυτή H &? Ε λεκές στα αριστερά. (Ε) Πίνακες που περιέχουν ιστό του καρκίνου του προστάτη από τους 40 ασθενείς υπέστησαν βαφή για CXCL16 και CXCR6. (Ι) Τα δείγματα αναλύθηκαν όπως περιγράφεται στο Υλικά και Μέθοδοι, ομαδοποιούνται σύμφωνα με βαθμολογίες για CXCL16 επί του Χ-άξονα (n = δειγμάτων σε κάθε ομάδα CXCL16), και η μέση βαθμολογία για έκφραση CXCR6 υπολογίστηκαν. Οι ράβδοι σφάλματος δείχνουν SEM. Cross-μπάρες δείχνουν οι συγκρίσεις που είναι σημαντικές. *, P & lt? 0,05 και **, p & lt? 0,01. (II) ανοσοφθορισμού και συνεστιακή απεικόνιση ενός τμήματος που δείχνει τα καρκινικά κύτταρα του προστάτη εμφανίζει αντι-CXCL16 (488 τυραμιδίου) ως πράσινο, αντι-CXCR6 (594 τυραμιδίου) όπως το κόκκινο, και πυρηνική χρώση με Hoechst 33258, όπως το μπλε. Διπλή χρώση σε κίτρινο δείχνει συν-εντοπισμό. Πάνελ είναι αντιπροσωπευτικά άνω των 15 περιπτώσεις καρκίνου του προστάτη. Τα αυθεντικά μεγεθύνσεις σημειωθεί σε αυτά και σε όλες τις επόμενες μικροφωτογραφίες.

Η

Έκφραση των CXCL16 και CXCR6 συσχετίζεται με το στάδιο του καρκίνου και του βαθμού

Το στάδιο (Ι-IV) και του βαθμού (σκορ Gleason) του καρκίνου του προστάτη προσδιορίζονται κατά τη διάγνωση, και αναφέρθηκαν από τον προμηθευτή για τις περιπτώσεις που χρησιμοποιούνται στις συστοιχίες. Ανώτερο στάδιο αντιστοιχεί στο μεγαλύτερο ανατομική επέκταση του καρκίνου, και το σκορ Gleason περιγράφει ιστολογικά χαρακτηριστικά που συσχετίζονται με την κλινική έκβαση. Gleason σκορ 2-4 είναι χαμηλής ποιότητας, βαθμολογίες 5-7 είναι μέτριας ποιότητας, και τα σκορ 8-10 είναι υψηλής ποιότητας καρκίνο του προστάτη. Ανάλυση της συστοιχίας 40-θήκη για επίπεδα χρώση για CXCL16 και CXCR6 αποκάλυψε ότι η έκφραση τους από τα καρκινικά κύτταρα συσχετίζεται τόσο με υψηλής στάδιο και ο καρκίνος του προστάτη υψηλής ποιότητας (Σχήμα 2Α).

(Α) Arrays που περιέχουν ιστό του καρκίνου του προστάτη από τους 40 ασθενείς υπέστησαν βαφή για CXCL16 και CXCR6. Τα δείγματα βαθμολογήθηκαν για έκφραση CXCL16 και CXCR6 όπως περιγράφεται στο Υλικά και Μέθοδοι. Τα δείγματα ομαδοποιούνται ανάλογα με το στάδιο ή σκορ Gleason (Χ-άξονες), όπως καθορίζεται από τον προμηθευτή, και η μέση βαθμολογία για CXCL16 και έκφραση CXCR6 υπολογίστηκαν. Ο αριθμός των δειγμάτων (n) σε κάθε στάδιο ή σκορ Gleason ομάδα εμφανίζεται. Οι ράβδοι σφάλματος δείχνουν SEM. Cross-μπάρες δείχνουν οι συγκρίσεις που είναι σημαντικές. *, P & lt? 0,05 και ***, σ & lt? 0.001. (Β) PC3 κύτταρα επιμολύνθηκαν με το πλασμίδιο CXCR6-YFP, καλλιεργούνται για 48 ώρες χωρίς χημειοκίνης (έλεγχος, Ctrl) ή με 0,05-5 μg /ml CXCL16 και οι αριθμοί των CXCR6-YFP

+ (R6YFP

+ ) έναντι CXCR6YFP

– (R6YFP

-) κύτταρα μετρήθηκαν όπως περιγράφεται στο Υλικά και Μέθοδοι. Οι τιμές ομαλοποιήθηκαν με τον έλεγχο, μη επεξεργασμένο δείγμα για να δώσει την διαφορά φορές σε κυτταρικό αριθμό. Μπαρ δείχνουν μέσα ± SEM σε συνδυασμό από τρία πειράματα. **, P & lt? 0,01 και ***, σ & lt? 0.001 έναντι τιμών ελέγχου. (Γ) Μετά την επιμόλυνση με το πλασμίδιο CXCR6-YFP, PC3 κύτταρα καλλιεργήθηκαν όπως στο (Β), με ή χωρίς 5 μg /ml CXCL16. Αριστερό πλαίσιο, πύλης εμφανίζεται για το διαχωρισμό μη επεξεργασμένα και CXCL16-επεξεργασμένα κύτταρα σε «χαμηλό» (L) ή «υψηλή» (H) για CXCR6-YFP. Τα ποσοστά των κυττάρων στα υψηλά πύλες απεικονίζεται. Ένα αντιπροσωπευτικό πείραμα δείχνεται από τα τρία που εκτελούνται. Δεξιό πίνακα, CXCR6-YFP

+ χαμηλή (CXCR6 + χαμηλή) και CXCR6-YFP

+ υψηλή (CXCR6 + υψηλή) κύτταρα από CXCL16-θεραπεία και καλλιέργειες ελέγχου μετρήθηκαν μετά από 48 ώρες όπως στο (Β). Τα δεδομένα συνδυάστηκαν από τρία πειράματα. *, P & lt? 0,05 και ***, σ & lt? 0.001 έναντι μη επεξεργασμένα κύτταρα. (D) Ομοεστιακή απεικόνιση εμφανίζει αντι-CXCL16 ή αντι-CXCR6 (488 τυραμιδίου) ως πράσινο, αντι-Κί67 (594 τυραμιδίου) όπως το κόκκινο, και πυρηνική χρώση με Hoechst 33258, όπως το μπλε. Πάνελ είναι αντιπροσωπευτική της πάνω από 15 περιπτώσεις.

Η

Ένας ρόλος για CXCL16 /CXCR6 στον πολλαπλασιασμό των καρκινικών κυττάρων του προστάτη

Η συν-έκφραση των CXCL16 και CXCR6 σε κύτταρα καρκίνου του προστάτη, και την αντιστοιχία τους με το στάδιο του καρκίνου και του βαθμού, πρότεινε ότι ο συνδετήρας και ο υποδοχέας θα μπορούσε να ενισχύσει τον πολλαπλασιασμό μέσω ενός αυτοκρινούς οδού. Για να διερευνηθεί αυτή η πιθανότητα, επιμολύναμε PC3 κύτταρα με ένα πλασμίδιο CXCR6-YFP που κωδικοποιεί ένα Ο-τερματικό πρωτεΐνης σύντηξης CXCR6 με μια ενισχυμένη κιτρινοπράσινο πρωτεΐνη φθορισμού (YFP) και επωάζονται με τα κύτταρα CXCL16. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 2Β, ο αριθμός των CXCR6-YFP

+ κυττάρων αυξήθηκε, έναντι του ελέγχου CXCR6-YFP

– κύτταρα, ως συνάρτηση της συγκέντρωσης του CXCL16. Αναλύσαμε επίσης τη σχέση μεταξύ του επιπέδου έκφρασης CXCR6-YFP και την απάντηση σε CXCL16. Βρήκαμε ότι ενώ τα κύτταρα που εκφράζουν τα υψηλότερα επίπεδα CXCR6-YFP ήταν εκείνοι πιο δεκτικά σε CXCL16, CXCL16 αύξησε τον πολλαπλασιασμό ακόμα και αυτών των κυττάρων που ήταν CXCR6-YFP

χαμηλή (Σχήμα 2C). Συνεπής με αυτά τα in vitro δεδομένα, τα καρκινικά κύτταρα που εκφράζουν Ki67, ένα κυτταρικό δείκτη για πολλαπλασιασμό, εξέφρασε επίσης τόσο CXCL16 και CXCR6 (Σχήμα 2D).

Η έκφραση του CXCL16 /CXCR6 σχετίζεται με φλεγμονή

Ανοσοϊστοχημική ανάλυση πολλαπλών δειγμάτων από ρίζα προστατεκτομές έδειξε εξέχοντα έκφραση του CXCL16 και CXCR6 σε χρόνια προστατίτιδα και σε ατροφία με τα συνδεδεμένα χρόνια προστατίτιδα (ΡΙΑ), καθώς και σε προστατική ενδοεπιθηλιακή νεοπλασία (ΡΙΝ) και τον καρκίνο, υποδηλώνοντας ότι η έκφραση του CXCL16 και CXCR6 επί επιθηλιακά κύτταρα του προστάτη που σχετίζονται με φλεγμονή, επιπλέον, σε κάθε ένωση με κακοήθεια per se (Σχήμα 3Α). Ερευνήσαμε τη σχέση αυτή in vitro με κατεργασία καλλιέργειες επιθηλιακών (PrEC) και στρωματικά κύτταρα (pRSC) από το φυσιολογικό προστάτη με φλεγμονώδεις κυτοκίνες. TNF-α και IFN-γ, ιδιαίτερα σε συνδυασμό, που προκαλείται CXCL16 mRNA και έκκριση CXCL16 με PrEC (αλλά όχι στρωματικά κύτταρα) (Σχήμα 3Β, C) – και οδήγησε σε δραματική αυξητική ρύθμιση σε PrEC του mRNA για CXCR6 (Σχήμα 3D .)

(Α) η χρώση για CXCL16 και CXCR6 σε δείγματα προστατεκτομή με χρήση DAB (καστανό) για την ανίχνευση παρουσιάζεται για: χρόνια προστατίτιδα, PIA και το PIN. Πάνελ είναι αντιπροσωπευτική της πάνω από 80 περιπτώσεις καρκίνου του προστάτη που εξετάστηκαν. Κάθε πίνακας περιλαμβάνει έναν ενισχυτή H &? Ε λεκές στα αριστερά. (Β) CXCL16 εκκρίνεται από πρωτογενή φυσιολογικά επιθηλιακά κύτταρα (PrEC) και στρωματικά κύτταρα (pRSC), και το DU145 και κυτταρικές σειρές PC3 μετρήθηκε 48 ώρες μετά την χωρίς αγωγή (έλεγχος), ή αγωγή με 5 ng /ml ΙΡΝ-γ και 0,5 μg /ml ΤΝΡ-α μόνο και σε συνδυασμό. Μπαρ δείχνουν μέσα ± SEM από φρεάτια εις διπλούν, ενός αντιπροσωπευτικού πειράματος από τα τρία που εκτελούνται για κάθε ένα από τους τρεις δότες (D1-D3). *, P & lt? 0,05 και **, p & lt? 0,01 έναντι μη επεξεργασμένα κύτταρα. (C) έκφραση CXCL16 mRNA σε PrEC από τρεις δότες και δύο κυτταρικές γραμμές όγκου του προστάτη (DU145 και PC3) υποβλήθηκε σε επεξεργασία με 5 ng /ml ΙΡΝ-γ και 0,5 μg /ml ΤΝΡ-α μόνης και σε συνδυασμό αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας πραγματικού χρόνου RT -PCR. Οι τιμές ομαλοποιήθηκαν με τη ρύθμιση του δείγματος ελέγχου με χαμηλότερη έκφραση ίσο προς 1. Κάθε ράβδος αντιπροσωπεύει το μέσο όρο ± SEM που λαμβάνεται από φρεάτια εις διπλούν, από ένα αντιπροσωπευτικό πείραμα από τρία που εκτελούνται. **, P & lt? 0,01 έναντι μη επεξεργασμένα κύτταρα. (D) έκφραση mRNA σε CXCR6 PrEC από τρεις δότες που έλαβαν θεραπεία με 5 ng /ml ΙΡΝ-γ και 0,5 μg /ml ΤΝΡ-α μόνης και σε συνδυασμό αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας πραγματικού χρόνου RT-PCR. Οι τιμές ομαλοποιήθηκαν με τον καθορισμό του δείγματος με χαμηλότερη έκφραση ίσο προς 1. **, ρ & lt? 0,01 έναντι μη επεξεργασμένα κύτταρα. (Ε) Κάθε σειρά περιέχει σειριακές τομές από τις ίδιες περιοχές των δειγμάτων προστατεκτομή χρωματίζονται χρησιμοποιώντας DAB (καστανό) για αSMA, CXCL16, και CXCR6 συμπεριλαμβανομένου ενός Η &? Ε λεκές στα αριστερά. Πάνελ είναι αντιπροσωπευτικά των πάνω από 120 δείγματα του προστάτη. (F) Χωριστές πλάκες των συστοιχιών που περιέχουν ιστό προστάτη από 40 ασθενείς υπέστησαν βαφή για αSMA, CXCL16 και CXCR6 και βαθμολογήθηκαν όπως περιγράφεται στα Υλικά και Μέθοδοι για αSMA σε στρώμα και CXCL16 και CXCR6 σε καρκινικά κύτταρα. Τα δείγματα ομαδοποιούνται σύμφωνα με βαθμολογίες για CXCL16 ή CXCR6 (n = δείγματα σε κάθε ομάδα), και μέσες βαθμολογίες υπολογίστηκαν για αSMA σε στρώμα. Τα δεδομένα εμφανίζονται και αναλύονται όπως στο Σχ. 1E.I. *, P & lt?. 0.05

Η

Εκτός από τη σύνδεση των CXCL16 /CXCR6 με φλεγμονώδεις διηθήσεις στον προστάτη, η αρχική μας εντύπωση από την ανάλυση πάνω από 80 περιπτώσεις καρκίνου του προστάτη ήταν η έκφραση της CXCL16 ήταν υψηλότερα στην καρκινικά κύτταρα που περιβάλλεται από αντιδραστικά στρώμα. Stroma περιγράφεται ως «αντιδραστικά» αν εμφανίζει αυξήσεις μυοϊνοβλάστες, ινοβλαστών για την εξομάλυνση ποσοστό μυών και τοπική πυκνότητα αγγειακή [36]. Αυτό συμβαίνει ακόλουθα φλεγμονή, και εντοπίζει καρκίνους, τώρα είναι σχετικά φτωχή σε φλεγμονώδη κύτταρα, τα οποία έχουν προκύψει σε μια φλεγμονώδη μικρο-περιβάλλον. Εμείς επιβεβαίωσε την αρχική μας εντύπωση από χρώση διαδοχικών τομών για CXCL16, CXCR6 και άλφα ομαλή ακτίνη μυών (α-SMA), ένα δείκτη για λεία μυϊκά κύτταρα, τα οποία χάνονται από το αντιδραστικό στρώμα. Βρήκαμε σύνδεσης μεταξύ απώλεια των λείων μυϊκών κυττάρων και υψηλή έκφραση του CXCL16 και CXCR6 (Σχήμα 3Ε), η οποία επιβεβαιώθηκε με σκορ δείγματα στη συστοιχία 40-θήκη για α-SMA, CXCL16, και CXCR6 (Σχήμα 3F). Τα δεδομένα αυτά υποστήριξε τη συσχέτιση μεταξύ της έκφρασης των CXCL16 και CXCR6 και τα αποδεικτικά στοιχεία της προηγούμενης φλεγμονής στον όγκο μικρο-περιβάλλον. Μαζί, τα δεδομένα στο Σχήμα 3 υποδεικνύουν μια ισχυρή συσχέτιση μεταξύ της έκφρασης του CXCL16 /CXCR6 και φλεγμονή σε όλα τα στάδια στην εξέλιξη του καρκίνου του προστάτη.

Ένας ρόλος για CXCL16 /CXCR6 στις αλληλεπιδράσεις μεταξύ των καρκινικών κυττάρων και των Τ κυττάρων

Οι πιθανές άμεσες επιδράσεις της CXCL16 /CXCR6 σε κύτταρα καρκίνου του προστάτη παρά ταύτα, επειδή CXCR6 περιγράφεται καλύτερα ως ένα Τ κυτταρικό υποδοχέα χημειοκινών, ερευνήσαμε δραστηριότητες για CXCL16 /CXCR6 στις σχετίζεται με καρκίνο του προστάτη Τ κύτταρα που θα μπορούσαν να συμβάλλουν έμμεσα στην ο σχηματισμός και η ανάπτυξη του καρκίνου. χρώση ανοσοφθορισμού αποκάλυψαν ότι και οι δύο CXCL16 και CXCR6 εκφράζονται επί CD3

+ κύτταρα που γειτνιάζουν με τα καρκινικά κύτταρα (Σχήμα 4Α). Ενδιαφέρον, βρήκαμε ότι ορισμένοι CD3

+ κύτταρα επίσης χρωματίστηκαν για Κί67 (Σχήμα 4Β), καταδεικνύοντας τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων Τ στη θέση του όγκου. Επιπλέον, διπλή χρώση για CXCR6 και Ki67 αποκάλυψε φλεγμονώδη κύτταρα που ήταν θετικά για τα δύο (Σχήμα 4C).

(Α, Β) Ομοεστιακή απεικόνιση δείχνει αντι-CXCL16 (Α, αριστερό πάνελ) ή αντι-CXCR6 (Α , δεξί πάνελ) ή αντι-Κί67 (Β) ως πράσινο (488 τυραμιδίου), αντι-CD3 (594 τυραμιδίου) ως κόκκινο, και πυρηνική χρώση με Hoechst 33258 ως μπλε. Διπλή χρώση σε κίτρινο δείχνει συν-εντοπισμό. Στο (Α), τα βέλη δείχνουν προς τα καρκινικά κύτταρα και Τ κύτταρα. Πάνελ είναι αντιπροσωπευτικά της πάνω από 15 περιπτώσεις για κάθε διπλό λεκέ. (Γ) Η χρώση για Κί67 και CXCR6 σε μια περιοχή της προστατίτιδας χρησιμοποιώντας DAB (καστανό, δύο αριστερά πάνελ) ή ανοσοφθορισμού (δεξί πάνελ) για ανίχνευση. Συνεστιακή απεικόνιση δείχνει αντι-CXCR6 το πράσινο (488 τυραμιδίου) και αντι-Κί67 το κόκκινο (594 τυραμιδίου), και πυρηνική χρώση με Hoechst 33258, όπως το μπλε. Πάνελ είναι αντιπροσωπευτική της πάνω από 15 περιπτώσεις.

Η

Εμείς εξέτασε αν CXCL16 και CXCR6 θα μπορούσε να λειτουργήσει σε ένα αυτοκρινή τρόπο για να ενισχύσει τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων Τ ανάλογη με συνέπειες για τα καρκινικά κύτταρα. Για να καθοριστεί εάν ή όχι CXCL16 θα μπορούσε να παραχθεί από CXCR6

+ κύτταρα, τα οποία βρίσκονται μόνο στο υποσύνολο τελεστή /μνήμη, ταξινομήσαμε πληθυσμούς του περιφερειακού αίματος CD4

+ Τ κύτταρα με βάση την έκφραση της μνήμης και αφελείς δείκτες και CXCR6. Μετά την ενεργοποίηση

ex vivo

, βρήκαμε ότι το mRNA για CXCL16 προκλήθηκε προτίμηση εντός του τελεστή /υποσύνολο μνήμης και, εντός του εν λόγω υποσυνόλου, στα κύτταρα που εκφράζουν CXCR6 (Σχήμα 5Α). Στη συνέχεια εξετάσαμε τις πιθανές δραστηριότητες των CXCR6 επί Τ κύτταρα με επιμόλυνση της κυτταρικής σειράς Jurkat Ε6.1 Τ με DNA που κωδικοποιεί CXCR6-YFP ή GFP. CXCR6-YFP

+, αλλά όχι CXCR6-YFP

– κύτταρα, μετανάστευσε στην CXCL16 σε G

i /o-πρωτεΐνη τρόπο εξαρτώμενο (Σχήμα 5Β), και έδειξε μια προοδευτική αύξηση του αριθμού των κυττάρων με την αύξηση της δόσεις των CXCL16, αλλά όχι σε μια χημειοκίνη ελέγχου (Σχήμα 5C). CXCL16 δεν είχε καμία επίδραση στα κύτταρα επιμολυσμένα για να εκφράσουν GFP σαν πρόσθετος έλεγχος (δεδομένα δεν παρουσιάζονται). CXCL16 /CXCR6 ενισχυμένο πολλαπλασιασμό per se, αφού είδαμε καμία επίδραση επί του κυτταρικού θανάτου (Σχήμα 5D) και βρέθηκε μία αύξηση ειδικά μέσα στον πληθυσμό των κυττάρων που είχαν διαιρούμενα (Σχήμα 5Ε).

(Α) CD4

+ Τ κύτταρα ταξινομήθηκαν σε αφελείς (CD45RO-), συνολικού ενεργού /μνήμης (CD45RO +), CD45RO

+ CXCR6

– (CXCR6-) και Οϋ45ΚΟ

+ CXCR6

+ (CXCR6 +) υποσύνολα και διεγέρθηκαν με ΡΜΑ και ιονομυκίνη για 4 ώρες πριν τη μέτρηση των επιπέδων του mRNA CXCL16 με πραγματικού χρόνου RT-PCR. Οι τιμές ομαλοποιήθηκαν με τον καθορισμό του δείγματος με χαμηλότερη έκφραση ίσο προς 1. Τα δεδομένα είναι μέσα από διπλά δείγματα από ένα αντιπροσωπευτικό πείραμα από τα τρία που εκτελούνται. (Β) Jurkat Ε6.1 Τ κύτταρα επιμολυσμένα με το πλασμίδιο CXCR6-YFP αναλύθηκαν για μετανάστευση προς CXCL16. Μερικά δείγματα προ-επωάστηκαν για δύο ώρες με 400 ng /ml τοξίνης κοκίτη όπως υποδεικνύεται. Αριθμοί του YFP + και YFP- μεταναστεύουν κύτταρα αναλύθηκαν με κυτταρομετρία ροής. Κάθε ράβδος αντιπροσωπεύει το μέσο όρο ± SEM που λαμβάνεται από φρεάτια εις τριπλούν, από ένα αντιπροσωπευτικό πείραμα από τρία που εκτελούνται. *** P & lt? 0.001 έναντι της αντίστοιχης τιμής του μάρτυρα. (Γ) Μετά την επιμόλυνση με το πλασμίδιο CXCR6-YFP, Jurkat Ε6.1 Τ κύτταρα καλλιεργήθηκαν για 48 ώρες χωρίς χημειοκίνης (έλεγχος, Ctrl) ή με 1 μg /ml CXCL8 ως πρόσθετο ελέγχου, ή με 0,05-5 μg /ml CXCL16 πριν από την καταμέτρηση του αριθμού των CXCR6-YFP

+ εναντίον CXCR6-YFP

– κύτταρα. Μπαρ δείχνουν μέσα ± SEM σε συνδυασμό από τρία διαφορετικά πειράματα. *, P & lt? 0,05 και ***, σ & lt? 0.001. (D) Τα επιμολυσμένα κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία όπως στο (C) και χρωματίστηκαν με Annexin V και ιωδιούχο προπίδιο (ΡΙ), πριν την καταμέτρηση του αριθμού των CXCR6-YFP

+ κύτταρα εντός των υποομάδων όπως σημειώνεται. Μπαρ δείχνουν μέσα ± SEM σε συνδυασμό από τρία πειράματα. **, P & lt? 0,01 και ***, σ & lt? 0.001 έναντι μη επεξεργασμένα κύτταρα ελέγχου. (Ε) Μετά από επιμολύνσεις με CXCR6-YFP πλασμίδιο, Jurkat Ε6.1 Τ κύτταρα φορτώθηκαν με 2 μΜ χρωστική Άπω Red ΟϋΑΟ και καλλιεργούνται χωρίς χημειοκίνης (έλεγχος, Ctrl) ή με 0,05-5 μg /ml CXCL16 ή 1 μg /ml CXCL8 . Οι αριθμοί των CXCR6YFP

+ εναντίον CXCR6YFP

+ ΟϋΑΟ

– (πολλαπλασιάστηκαν) και CXCR6YFP

+ ΟϋΑΟ

+ (μη-πολλαπλασιαστεί) κύτταρα προσδιορίστηκαν μετά από 48 ώρες με χρήση σφαιριδίων καταμέτρηση και κυτταρομετρία ροής . Μπαρ δείχνουν μέσα ± SEM από τριπλότυπα φρεάτια, από ένα αντιπροσωπευτικό πείραμα από τρία που εκτελούνται. *** P & lt? 0.001 και *, p & lt? 0,05 έναντι μη επεξεργασμένα κύτταρα ελέγχου

Η

Επιπλέον, όταν εξετάσαμε την επίδραση της πλάκας-δεσμεύεται CXCL16 επί του πολλαπλασιασμού των CD3-ενεργοποιημένων πρωτοβάθμια CD4 Τ. κύτταρα, βρήκαμε μια σημαντική διεγερτική επίδραση επί του πολλαπλασιασμού που ανεστάλη με κατεργασία με τοξίνη κοκκύτη ή αντισώματα έναντι CXCR6 ή CXCL16 (Σχήμα 6Α). Είναι αξιοσημείωτο, δεδομένου ότι CXCL16 συντίθεται ως διαμεμβρανική χημειοκίνη, ότι αν και πλάκα δεσμευμένη CXCL16 ήταν διεγερτική, διαλυτό CXCL16 δεν είχε καμία επίδραση (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται).

(Α) CD4

+ Τ κύτταρα καθαρισμένη από εκπλυθέντα λεμφοκύτταρα από υγιείς δότες διεγέρθηκαν επί 3 ημέρες με δεσμευμένο στην πλάκα αντι-CD3 (ΟΚΤ3, 10 μg /ml) με ή χωρίς 5 μg /ml πλάκα δεσμευμένο CXCL16 (BL16). Θεραπείες του αντι-CD3-ενεργοποιημένα κύτταρα με ΡΤΧ, αντι-CXCR6 (AR6) και αντι-CXCL16 (aL16) χωρίς BL16 έγιναν ως έλεγχοι. Mouse IgG (mIgG) και αρουραίου IgG (Rigg) χρησιμοποιήθηκαν ως μάρτυρες για αντι-CXCR6 αντίσωμα και αντι-CXCL16 αντίσωμα, αντίστοιχα. Μπαρ δείχνουν μέσα ± SEM από ένα αντιπροσωπευτικό πείραμα από τα πέντε, χρησιμοποιώντας πέντε δότες. Αντι-CXCL16 χρησιμοποιήθηκε σε ένα σύνολο τεσσάρων, και αντι-CXCR6 σε δύο πειράματα. ns, δεν είναι σημαντική και ***, σ & lt? 0.001. (Β) CXCR6 και CXCL16 mRNAs μετρήθηκαν με πραγματικού χρόνου RT-PCR σε CD3-ενεργοποιημένα και μη-ενεργοποιημένα CD4

+ Τ κυττάρων μετά από 3 ημέρες. Οι τιμές ομαλοποιήθηκαν με τη ρύθμιση της μη ενεργοποιημένο δείγμα με χαμηλότερη έκφραση ίσο προς 1. Bars δείξει μέσα ± SEM σε συνδυασμό από φρεάτια εις διπλούν από επτά διαφορετικούς δότες. **, P & lt? 0,01 και ***, σ & lt? 0.001 έναντι μη ενεργοποιημένα κύτταρα. (C) αντι-CD3-ενεργοποιημένα ή μη ενεργοποιημένα CD4

+ Τ κύτταρα αναλύθηκαν για τη μετανάστευση σε CXCL16, εκφράζονται ως ποσοστά των κυττάρων εισόδου μεταναστεύουν. Κάθε ράβδος αντιπροσωπεύει το μέσο όρο ± SEM που λαμβάνεται από φρεάτια εις τριπλούν από ένα σύνολο τριών πειραμάτων που έγιναν. *** P & lt? 0.001 σε σταυρό μπαρ ενδείκνυνται για συγκρίσεις μεταξύ των ενεργοποιημένων κυττάρων – 0 έναντι 50 ng /ml CXCL16 και 50 ng /ml έναντι 500 ng /ml CXCL16

Η

Παρά το. δεδομένα για τις επιδράσεις της CXCL16 επί ενεργοποιημένων CD4

+ Τ κύτταρα, δεν θα μπορούσαμε να ανιχνεύσει χρώση για CXCR6 χρησιμοποιώντας κυτταρομετρία ροής σε ένα μεγάλο ή αυξημένο ποσοστό αυτών των κυττάρων μετά την ενεργοποίηση. Ωστόσο, για την υποστήριξη των λειτουργικών CXCR6 σε αυτά τα κύτταρα, βρήκαμε μια σημαντική αύξηση στην έκφραση του mRNA του CXCR6 και (σε ​​μικρότερο βαθμό) του CXCL16 σε κύτταρα CD3-ενεργοποιημένα (Σχήμα 6Β), και μια αύξηση στην μετανάστευση των CD3-ενεργοποιημένα κύτταρα να CXCL16 (Σχήμα 6C). Η απάντηση της δόσης στο σχήμα 6C έχει το σχήμα καμπάνας μοτίβο τυπικά για χημειοταξία.

CXCL16 ή /και CXCR6 είναι σε γενικές γραμμές εκφράζονται σε καρκίνους που σχετίζονται με φλεγμονές

Για να διερευνηθεί η δυνατότητα μιας πιο γενική συσχέτιση μεταξύ CXCL16 και του καρκίνου που σχετίζεται με φλεγμονή, μελετήσαμε την έκφραση του CXCL16 σε 582 περιπτώσεις καρκίνου που καλύπτουν 12 τύπους όγκων (Σχήμα 7). Βρήκαμε μια προκατάληψη για υψηλή έκφραση CXCL16 σε καρκίνους που σχετίζονται με φλεγμονή:. Ωοθηκών, του μαστού, του προστάτη, του παχέος εντέρου και καρκίνων του ήπατος

(Α) * Η ένταση της χρώσης CXCL16 βαθμολογήθηκε όπως περιγράφεται στο Υλικά και Μέθοδοι. Το% των περιπτώσεων η χρώση υψηλού παρουσιάζεται για κάθε τύπο καρκίνου. ** RCC, καρκίνωμα νεφρικών κυττάρων? GBM, πολύμορφο γλοιοβλάστωμα. (Β) έκφραση CXCL16 σε συστοιχίες πολλαπλών ανθρώπινων καρκίνων με ανοσοϊστοχημεία χρησιμοποιώντας AEC (κόκκινο) ή DAB (καστανό) για ανίχνευση. Πάνελ είναι αντιπροσωπευτικά του αριθμού των δειγμάτων των διαφόρων μορφών καρκίνου, όπως αναφέρεται στο (Α).

Η

Συζήτηση

Ο καρκίνος προκύπτει από γενετικές μεταλλάξεις και επιγενετικών γεγονότα στα πολλαπλασιαζόμενα κύτταρα και τις αλλαγές στην μικροπεριβάλλον του όγκου που περιλαμβάνει τα τριχοειδή αγγεία, τα κύτταρα των λείων μυών, ινοβλάστες και φλεγμονώδη κύτταρα [4]. Το 1863, ο Γερμανός γιατρός Rudolf Virchow σημειωθεί λευκοκυττάρων σε νεοπλασματικών ιστών και υπέθεσε ότι ο καρκίνος αρχίζει στα σημεία της χρόνιας φλεγμονής [37]. Παρ ‘όλα αυτά, οι ανοσολόγοι καρκίνο έχουν δει γενικά λευκοκύτταρα ως παράγοντες με το δυναμικό για τον περιορισμό ή την εξάλειψη των καρκίνων [38]. Ομοίως, στους ρόλους τους ως μεσολαβητές της πρόσληψης λευκοκυττάρων, χημειοκινών έχουν μελετηθεί ως διεγέρτες της ανοσίας κατά του καρκίνου και φλεγμονής [11], [39], [40].

Οι χρόνιες φλεγμονώδεις παθήσεις έχουν, ωστόσο, ήταν φαίνεται να προδιαθέτουν σε πολλαπλούς τύπους καρκίνου και υποτροπιάζουσες ή χρόνια φλεγμονή έχει ενοχοποιηθεί σε μια ποικιλία ανθρώπινων καρκίνων [5]. Πρόσφατα μοντέλα ποντικού έχουν κάνει μια λειτουργική σύνδεση μεταξύ του καρκίνου και της φλεγμονής, που δείχνουν ότι η διαγραφή των ανοσοκυττάρων ή ανοσορυθμιστική γονίδια μειώνουν την πρόοδο του καρκίνου [1] – [3]. Μαζί, αυτά τα δεδομένα εγείρουν την πιθανότητα ενός πρόσθετου ρόλου για προ-φλεγμονωδών χημειοκινών στον καρκίνο, δηλαδή ως υποκινητές όγκων.

Ερευνήσαμε καρκίνου του προστάτη, η οποία περιγράφεται ως προκύπτουν στο πλαίσιο της φλεγμονής. προκαταρκτική οθόνη μας για την έκφραση των χημειοκινών πρότειναν έναν ρόλο για CXCL16, και βρήκαμε ότι και οι δύο CXCL16 και CXCR6 συν-εκφράζεται σε καρκινικά κύτταρα, ότι τα επίπεδα έκφρασης τους συσχετίζονται μεταξύ τους, και ότι αυτά τα επίπεδα συσχετίζονται επίσης με υψηλής στάδιο και υψηλή -grade καρκίνο του προστάτη. Επιπλέον, CXCL16 ενισχυμένο πολλαπλασιασμό του καρκίνου του προστάτη κυτταρικών γραμμών που εκφράζουν CXCR6. Τα δεδομένα μας υποδηλώνουν πιθανές άμεσες επιπτώσεις της CXCL16 /CXCR6 στην ανάπτυξη των καρκινικών κυττάρων και, συνεπώς, για την ανάπτυξη των όγκων.

Σε μια δεύτερη πτυχή της μελέτης μας, μελετήσαμε το δυναμικό ρόλο για CXCL16 /CXCR6 στο πλαίσιο της αξιωματική συμβολή της φλεγμονή σε προ-κακοήθη και κακοήθη ασθένεια προστάτη. Βρήκαμε υψηλή έκφραση για CXCL16 σε χρόνια προστατίτιδα, προ-νεοπλασματικές αλλοιώσεις, και πρωτογενή καρκίνο του προστάτη που περιβάλλεται από αντιδραστική, δηλαδή μετα-φλεγμονώδη στρώμα. Επιπλέον, TNF-α και ΙΡΝ-γ που προκαλείται από την έκφραση του CXCL16 και CXCR6 επί επιθηλιακά κύτταρα πρωτογενή προστάτη. Επιπλέον, βρήκαμε σημαντικές συσχετίσεις μεταξύ της παρουσίας αντιδραστικών στρώματος και υψηλού επιπέδου έκφραση των CXCL16 και CXCR6 σε καρκινικά κύτταρα. Αυτά τα αποτελέσματα έδειξαν ότι πάνω ρύθμιση του CXCL16 /CXCR6 στο επιθήλιο του προστάτη συνδέεται στενά τόσο με την τρέχουσα και τις προηγούμενες φλεγμονή στο στρώμα του προστάτη.

Σε ένα τρίτο μέρος της μελέτης μας, μελετήσαμε το δυναμικό ρόλους για CXCL16 και CXCR6 για που σχετίζονται με όγκους λεμφοκύτταρα. Βρήκαμε ότι CXCL16 και CXCR6 εκφράζονται στα Τ κύτταρα γειτονικά κύτταρα καρκίνου του προστάτη. Έχουμε αποδείξει ότι CXCL16 μπορεί να επαχθεί κατά προτίμηση σε CXCR6

+ CD4

+ πρωτογενή Τ-λεμφοκύτταρα, και ότι Jurkat Τ κύτταρα επιμολυσμένα για να εκφράζουν CXCR6 καθώς και ενεργοποιηθεί, πρωταρχικός CD4

+ Τ κύτταρα πολλαπλασιάστηκαν παρουσία CXCL16. Τα δεδομένα αυτά υποδεικνύουν τη δυνατότητα τόσο για αυτοκρινή και παρακρινή επιδράσεις του CXCL16 επί διηθητικά Τ κύτταρα, καθώς και σε προ-κακοήθη και /ή κακοήθη κύτταρα του προστάτη.

Τέλος, για να διερευνήσει μια πιο γενική συσχέτιση μεταξύ CXCL16 και φλεγμονοσυσχετιζόμενων συναφών καρκίνων, μελετήσαμε την έκφραση αυτής της χημειοκίνης σε δείγματα από πολλαπλούς τύπους ανθρώπινων καρκίνων. Βρήκαμε υψηλά επίπεδα έκφρασης του CXCL16 σε καρκίνους των ωοθηκών, του μαστού, του προστάτη, του παχέος εντέρου και του ήπατος. – Όλων των καρκίνων περιγράφονται ως προκύπτουν στο πλαίσιο της φλεγμονής

CXCL16 έχει περιγραφεί προηγουμένως για τα ανθρώπινα γλοιώματα, του παχέος εντέρου και του μαστού καρκίνο, και CXCR6 αναφέρθηκε στο ρινοφαρυγγικό καρκίνους και μελάνωμα [41] – [46]. Αρκετές επιπλέον χαρτιά έχουν πρόσφατα εμφανίστηκε διερεύνηση CXCL16 ή /και CXCR6 στον καρκίνο [45] – [50]. Αρκετές από αυτές τις εκθέσεις επικεντρώθηκε στην CXCR6 στον καρκίνο του προστάτη, και όπως η δική μας έδειξε υψηλή έκφραση του CXCR6 σε κύτταρα καρκίνου του προστάτη [47] – [49]. Ένα χαρτί, επίσης, όπως η δική μας, έδειξαν μια θετική συσχέτιση μεταξύ των επιπέδων CXCR6 και Gleason σκορ, ανέφερε η έκφραση CXCL16 σε καρκίνους του προστάτη, και έδειξαν αυξημένη έκκριση CXCL16 από κυττάρων του προστάτη γραμμές μετά τη θεραπεία με TNF-α [47]. Ένα δεύτερο χαρτί έδειξε επιδράσεις στην εισβολή των γραμμών του προστάτη σε διαλυτές CXCL16 [48]. Ένα τρίτο χαρτί καταδείξει τις επιπτώσεις του CXCR6 επί της ανάπτυξης του καρκίνου του προστάτη κυτταρικών γραμμών σε ποντικούς [49]. Συνολικά, τα ευρήματά μας υποδηλώνουν pro-ογκογόνο ρόλους για CXCL16 και CXCR6 στον καρκίνο του προστάτη είναι σύμφωνες με αυτές τις δημοσιευμένες εκθέσεις.